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Curso Turma

Disciplina Biologia Molecular Data


Professor Tarcsio Andr Amorim de Carvalho
Alunos

BIOLOGIA MOLECULAR

1. Qual das sequncias abaixo so stios provveis de 4. Se a sequncia de pares de bases ao longo de uma
reconhecimento por enzimas de restrio? molcula de DNA ocorre de modo estritamente
a) AGTC c) ACCT aleatrio, qual a frequncia esperada de uma
TCAG TGGA sequncia de reconhecimento de uma enzima de
restrio especfica com o tamanho de:
b) ATCG d) TGCA a) 4 pb?
TAGC ACGT b) 6 pb?

2. Uma enzima six cutter reconhece seqncias de


hexanucleotdeos (6) no DNA. Que parte da sequncia
abaixo pode ser um stio para uma enzima de restrio
desse tipo?
5' ...TGGCTTAGGCCTCAAAGGTTTGCGAA... 3' 5. A Reao em Cadeia da Polimerase (PCR, do ingls
3' ...ACCGAATCCGGAGTTTCCAAACGCTT... 5' Polymerase Chain Reaction) uma metodologia
voltada para a amplificao de sequncias que
3. Voc est trabalhando como parte de uma equipe revolucionou a biologia molecular e teve sua
de pesquisa que estuda a estrutura e funo de um importncia reconhecida com a entrega do premio
determinado gene. Seu trabalho clonar o gene. Est Nobel de Qumica, em 1993, para o seu idealizador, o
disponvel um mapa de restrio para a regio do bioqumico Kary Mullis. Para que a PCR ocorra de
cromossomo na qual est situado o gene. Sua primeira fundamental importncia a utilizao de pequenos
tarefa preparar uma biblioteca de DNA genmico fragmentos de nucleotdeos, denominados de
contendo clones que levem todo o gene. Descreva oligonucleotdeos iniciadores (do ingls, primers), que
como voc prepararia tal biblioteca no plasmdeo vetor so estendidos pela ao da enzima DNA polimerase
pUC118, indicando que enzimas de restrio, meio e para a sntese de uma novo fragmento. Considere a
clulas voc usaria necessidade de amplificao da sequncia de 120 pares
de base (pb) abaixo demonstrada.
Sequncia Alvo negrito/sublinhado
5CTGGCCTCAATCTCACAGTCTGCCTGCATCCGCGTACTCTGCCCT
AGCCCTAAGCTTCCAGGACAGGCTGCATCAGAAGAGG CATTCCGCGTGCAGGACTATGACGTAGCAGCAGGTGACCTTTACG
TCTGTTCCAAGGGCCTTTGCGTCAGGTGGGCTCAGGA GAGGATAAGA GCAATGCGCT TATTACAGTG3
TTCCAGGGTGGCTGGACCCCAGGCCCCAGCTCTGCAG Marque a opo que apresenta, respectivamente, os
CAGGGAGGACGTGGCTGGGCTCGTGAAGCATGTGG iniciadores senso e antissenso.
GGGTGAGCCCAGGGGCCCCAAGGCAGGGCACCTGGC
CTTCAGCCTGCCTCAGCCCTGCCTGTCTCCCAGATCAC a) 5-GACTGTGAGATTGAGGCCAG-3 senso
TGTCCTTCTGCCATGGTGGATGCGAATTCGCCTCCTGC 5-CACTGTAATAAGCGCATTGC-3 antissenso
CCCTGCTGGCGCTGCTGGC b) 5-CTGGCCTCAATCTCACAGTC-3 senso
5-GCAATGCGCTTATTACAGTG-3 antissenso
Enzima Stio de restrio
HindIII 5 AAGCTT 3 c) 5-GACTGTGAGATTGAGGCCAG-3 senso
SalI 5 GTCGAC 3 5-GTGACATTATTCGCGTAACG-3 antissenso
XbaI 5 TCTAGA 3 d) 5-CTGGCCTCAATCTCACAGTC-3 senso
PstI 5 CTGCAG 3 5-CACTGTAATAAGCGCATTGC-3 antissenso
EcoRI 5 GAATTC 3
e) 5-GACCGGAGTTAGAGTGTCAG-3 senso
5-GCAATGCGCTTATTACAGTG-3 antissenso
6. A tcnica de biologia molecular conhecida como 9. A anlise de DNA por eletroforese uma das
RFLP (do ingls, Restriction Fragment Length tcnicas fundamentais nos laboratrios de pesquisa e
Polymorphism) utilizada para a deteco de variaes de diagnstico. Qual das seguintes afirmaes est
de sequncias de DNA, reconhecidas por enzimas de CORRETA quando se executa e se interpreta um
restrio, capazes de clivar sequncias especficas do resultado de eletroforese de DNA?
DNA (stios de restrio), com posterior visualizao em a) O princpio da eletroforese baseado no fato de a
gel de eletroforese dos fragmentos obtidos aps molcula de DNA possuir carga positiva em valores
digesto. Considere a sequncia de 120 pb apresentada de pH neutro ou alcalino e, consequentemente,
na questo anterior como sendo o alelo selvagem de fragmentos de DNA migram no sentido do polo
um gene X de um organismo diploide, sendo outro negativo (anodo).
alelo deste gene X possuidor de uma transio de G>A b) O tamanho dos fragmentos de DNA o principal
na posio 32 do produto de PCR. Marque a opo que fator que influencia a migrao em gel de agarose:
apresenta os tamanhos dos fragmentos obtidos aps pequenos fragmentos de DNA migram mais
digesto pela enzima BstUI (stio de restrio 5- lentamente no gel de agarose.
CGCG-3) do produto de PCR da sequncia de 120 pb. c) O DNA pode ser visualizado usando um
a) 88pb 68pb 32pb. transiluminador de luz ultravioleta aps colorao
a) 120pb 68pb 52pb 20pb. com brometo de etdio.
b) 120pb 68pb 20pb. d) O genoma humano total pode ser cortado por uma
c) 88pb 68pb 32pb 20pb. especfica endonuclease de restrio, gerando cinco
d) 68pb 52pb 32pb 20 pb. bandas diferentemente separveis.
e) Antes da aplicao, as amostras de DNA devero ser
7. Se a menor temperatura de um ciclo de PCR for misturadas a um tampo e desnaturadas para corrida
reduzida de 56C para 45C, o que provavelmente no gel de agarose.
ocorrer? Por que?
a) A reao no se processar devido ao esgotamento 10. Sobre a Reao em Cadeia da Polimerase,
dos primers atravs de hibridizaes mltiplas no responda aos itens abaixo:
especficas. a) O que um cientista deveria saber antes de
b) A banda observada no gel ter menor peso molecular desenvolver um teste de diagnstico baseado na PCR
porque a Taq polimerase trabalhar mais para um determinado gene?
lentamente.
c) Outras bandas podero aparecer no gel como
resultado de hibridizaes dos primers com novos
stios, com baixa estringncia.
d) A banda formada ter maior peso molecular devido
reao anmala da Taq polimerase, que incorpora
resduos de adenina a baixa temperatura.
e) No sero formadas bandas porque com a queda da
temperatura abaixo de 50 C o DNA se renatura por b) Como um cientista pode se assegurar de que os
inteiro e impede a nova hibridizao de primers. iniciadores que ele desenvolveu vo hibridar apenas
com o segmento de DNA que ele deseja amplificar?
8. O ciclo trmico bsico da PCR inicia-se a uma certa
temperatura, prossegue para outra e finalmente vai
para uma terceira, quando ento recomea, por pelo
menos 25 vezes. Quais estas temperaturas (na ordem
descrita acima) e o que ocorre nelas?
a) 56C pareamento dos primers; 96C extenso de
fita pela Taq; 72C desnaturao da fita dupla.
b) 96C - desnaturao da fita dupla; 56C pareamento c) Voc poderia amplificar um DNA utilizando apenas
dos primers; 72C extenso de fita pela Taq um iniciador? Explique
c) 96C - desnaturao da fita dupla; 72C pareamento
dos primers; 56C extenso de fita pela Taq
d) 72C pareamento dos primers; 56C extenso de
fita pela Taq; 96C - desnaturao da fita dupla.
e) 96C - desnaturao da fita dupla; 72C extenso de
fita pela Taq;56C pareamento dos primers.

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