'Ao de la Consolidacin del Mar de Grau'

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA INDUSTRIAL

ESCUELA DE AGROINDUSTRIAS

TITULO:

OBTENCION DE PROPANOL A TRAVES DE FERMENTACION

CURSO:

BIOQUIMICA

CICLO:

lll

DOCENTE:

MCROBLGO TORRES DAZ CESAR

ALUMNOS:

VIERA TINEO JHON ANTONY

ZAPATA LUDEA JUNIOR STEVEN

SULLANA - 2016
Obtencin de propanol
DEDICATORIA

Primeramente a dios por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud,
ser el manantial de vida y darme lo necesario para seguir adelante da a da para lograr
mis objetivos, adems de su infinita bondad y amor.

A mi madre por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores, por la
motivacin constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero ms que nada,
por su amor. A mi padre por los ejemplos de perseverancia y constancia que lo
caracterizan y que me ha infundado siempre, por el valor mostrado para salir adelante y
por su amor. A mi hermana por ser el ejemplo de una hermana mayor y de la cual aprend
aciertos y de momentos difciles y a todos aquellos que ayudaron directa o indirectamente
a realizar este documento
AGRADECIMIENTO

Queremos agradecer a todos nuestros maestros ya que ellos me ensearon valorar

los estudios y a superarme cada da, tambin agradecemos a nuestros padres porque
ellos estuvieron en los das ms difciles de nuestra vida como estudiantes. Y
agradecemos a Dios por darnos la salud que tenemos.
Agradecemos tambin a esta prestigiosa universidad la cual abre sus puertas a
jvenes como nosotros, preparndonos para un futuro competitivo y formndonos
como profesionales con sentido de seriedad, responsabilidad y rigor acadmico.
OBJETIVOS
 NDICE
Portada
Dedicatoria
Agradecimiento
Objetivos alcanzados
ndice
Introduccin
Marco terico
Captulo 1
Historia
Obtencin del isopropanol
 INTRODUCCIN
Con el aumento del consumo de combustibles fsiles, la cuestin de satisfacer
la demanda global de energa es de gran importancia en un futuro prximo.
Como una solucin efectiva, la produccin de alcoholes superiores procedentes
de fuentes renovables de microorganismos se ha propuesto para abordar tanto
la crisis de la energa y las preocupaciones ambientales. Alcoholes superiores
contener ms de dos tomos de carbono y tienen mejores propiedades
fisicoqumicas que el etanol como sustitutos de combustible.

La utilizacin excesiva del petrleo juega un papel importante en la liberacin del

dixido de carbono del gas casa verde contribuye al calentamiento global.
Fuentes de energa renovables proporcionan una amplia plataforma de recursos
para hacer frente al problema del aumento de la demanda de energa. La
fabricacin de biocombustibles, tales como alcoholes de cadena ms altos a
partir de fuentes renovables proporciona una fuente de energa alternativa que
posee la ventaja de tener propiedades deseables de combustible y facilidad de
transporte sin complicaciones.

La sntesis de varios alcoholes de cadena ms altos se ha logrado mediante la

construccin de vas de biosntesis en Escherichia. coli y otros microorganismos.
Aqu, se describe el diseo de una nueva va para la sntesis de 1-propanol y su
validacin en E. coli. En la industria petroqumica, 1-propanol se produce a partir
de eteno por una reaccin con monxido de carbono y de hidrgeno para dar
propionaldehdo, que se hidrogena a continuacin. El 1-propanol tambin se
produce como un subproducto cuando las patatas o granos se fermentan durante
la fabricacin comercial de etanol.
 HISTORIA
1-propanol fue descubierto en 1853 por Gustave Charles Bonaventure Chancel
destilacin fraccionada del alcohol fusel..

En 1916 Carleton Ellis descubri un mtodo para fabricar alcohol de la nafta del petrleo,
el objetivo era producir alcohol isopropilico para la oxidacin de acetona, que se utilizaba
para producir cordita. Destilacin Antiguas destilaciones de alcoholes; y el
descubrimiento de estos como sustancias; dieron lugar a el descubrimiento de nuevos
alcoholes que ya se haban obtenido antes. En la hidratacin indirecta el propileno
reacciona con cido sulfrico para formar una clase de esteres de sulfato, luego por
hidrlisis de estos se obtiene agua, alcohol isopropilico y otros productos que son
separados por destilacin. Hidratacin Indirecta Hidratacin Directa Se combinan el
propano y el agua. Para que se produzca una reaccin, debe estar presente un
catalizador cido slido cuando se mezclen ambas sustancias. En el siglo XX la fbrica
OIL Standar de New Jersey (Exxon), realizo la primera produccin a escala industrial
del alcohol isopropilico empleando el proceso Ellis o hidratacin indirecta.
A lo largo del tiempo se han implementado nuevas tecnologas para reducir costos de
produccin. Existen procesos que han logrado la obtencin de alcohol isopropilico pero
necesitan que el propileno este altamente puro por tal razn, una de las soluciones es
el la hidratacin indirecta debido que para su proceso utiliza propileno producto de las
refineras. Los pases ms destacados debido a la produccin anual, son pases con
gran potencial en produccin y distribucin en el mundo, el grado de pureza de alcohol
isopropilico fabricada es del casi del 96%.
EL PROPANOL

Es un alcohol primario con frmula C3H8O. Este lquido incoloro es tambin

conocido como propan-1-ol, alcohol 1-proplico, alcohol n-propilo, n-propanol, o
simplemente propanol. Es un ismero de isopropanol (2-propanol, alcohol
isoproplico). Se forma naturalmente en pequeas cantidades durante muchos
procesos de fermentacin y se utiliza como un disolvente en la industria
farmacutica principalmente para resinas y steres de celulosa. El propanol se
obtiene de diversas maneras. Se forma como producto secundario en la sntesis
de metanol. Actualmente se prepara en gran cantidad por oxidacin parcial de
mezclas propano-butano. Al mismo tiempo se forman otros productos, como
aldehidos, metanol, isopropanol, butanoles y otros, de los cuales se separa por
destilacin.

DESARROLLO DE LA FERMENTACIN

Se conocen dos propanoles: El alcohol n-proplico y el

alcohol i-proplico

El alcohol isopropilico ha alcanzado una gran importancia, porque a partir de l

se obtiene la acetona elegantemente y muy barata. Se le prepara a partir del
propileno = por adicin de agua de forma enteramente anloga a
como se hace con el etileno para obtener el etanol. Se hace pasar el propileno
por una torre de riego (a la temperatura ordinaria), por cuya parte superior se
deja caer cido sulfrico del 96%, que reacciona con el propileno formndose el
ster isoproplico:
Se diluye inmediatamente con agua la mezcla de cido sulfrico-ster y se
calienta, con lo cual se saponifica el ster. As, el alcohol se destila, mientras que
el cido sulfrico regenerado en la torre se recoge, se purifica, concentra y hace
retornar al ciclo.

Si este isopropanol se calienta, sobre determinados contactos, a unos 400C,

se forma acetona con separacin de agua, reaccin de esta que se emplea
tambin en gran escala tcnica. Tambien se prepara esteres del alcohol
isopropilico con acidos organicos, que como valiosos disolventes se encuentran
en el comercio.

El alcohol propilico normal se obtiene de diversas maneras. Se forma como

producto secundario en la sntesis del metanol. Actualmente se le prepara
tcnicamente en gran cantidad por oxidacin parcial de mezclas propano-
butano. Al mismo tiempo se forman otros productos, como aldehdos, metanol,
i-propanol, butanoles y otros, de los cuales se prepara por destilacin. El n-
propanol sirve como disolvente, ya por si mismo ya en forma de steres
 NOMBRE ELABORACIN USOS
2-propanol Por hidratacin de Disolvente para aceites,
(isopropanol) propeno obtenido de gomas, alcaloides y
gases craqueados. resinas. Elaboracin de
Tambin acetona, jabn y
subproducto de soluciones antispticas.
determinados
procesos de
fermentacin.
1-propanol Por oxidacin de Disolvente para lacas,
(n-propanol) mezclas de propano resinas, revestimientos
y butano. y ceras. Tambin para
la fabricacin de lquido
de frenos, cido
propinico y
plastificadores.

2-PROPANOL /ALCOHOL ISOPROPILICO

Alcohol isoproplico, tambin llamado 2-propanol, propan-2-ol, es un alcohol

incoloro, inflamable, con un olor intenso y muy miscible con el agua. Su
frmulaqumica semidesarrollada es H3C-HCOH-CH3 y es el ejemplo ms
sencillo de alcohol secundario, donde el carbono del grupo alcohol est unido a
otros dos carbonos. Es un ismero del propanol

OBTENCIN DEL ISOPROPANOL

El propileno purificado llega al absorbedor (1) en el que se introduce por su parte

superior cido sulfrico del 96%. El ster que sale por su parte inferior se mezcla
con agua y despus de pasar por el mezclador (2), llega a la columna de
saponificacin (3). El isopropanol formado se evapora y se lava en caliente en la
torre de lavado (4) con leja de sosa para liberarle del cido sulfrico que arrastra.
El alcohol bruto se recoge en el deposito (5) y despus se conduce a la columna
(6) en la cual sale por la cabeza el ter isoproplico que tambin se ha formado,
el cual se separa por destilacin en la columna (7) la colas de la columna (6) se
llevan a la columna de concentracin (8), por cuya cabeza destila el alcohol, que
aun contiene agua, y se redestila, para purificarlo, en la columna (9). EL agua se
decanta en el separador (10) y como an contiene propanol, se le hace retornar
a la columna (8), mientras que el alcohol que sobrenada (que asu vez contiene
agua) es devuelto a la columna de purificacin.
SNTESIS

Su obtencin se realiza fundamentalmente por medio de una reaccin de

hidratacin con propileno. Tambin se produce, aunque con menor importancia,
por hidrogenacin de la acetona.
Existen dos vas principales para el proceso de hidratacin del propileno:
hidratacin indirecta por medio de cido sulfrico e hidratacin directa.
USOS
Muy utilizado en la limpieza de lentes de objetivos fotogrficos y todo tipo de
pticas. Sirve para limpiar contactos de aparatos electrnicos, ya que no deja
marcas y es de rpida evaporacin. Tambin se usa en la limpieza de cabezas
magnticas enaparatos de vdeo y audio. [cita requerida]
Tambin un uso muy comn es en la limpieza de redes de fibra ptica, cuando
se realiza la integracin, en su defecto la instalacin o empalme, as como en el
mantenimiento.

Otros nombres :

2-Propanol
Alcohol isoproplico
Isopropanol
Dimetil carbinol
Alcohol proplico secundario

Propiedades fsicas
Estado de agregacin Lquido
Apariencia IncoloroDensidad 786,3 kg/m3; 0.7863 g/cm3
Masa molar 60.09 g/mol
Punto de fusin 185 K (-88 C)
Punto de ebullicin 355 K (82 C)
Temperatura crtica 508 K (235 C)
Presin crtica 47 atm
Viscosidad2,86 cP a 288 K (15 C)
2,08 cP a 298 K (25 C)
1,77 cP a 303 K (30 C)
ndice de refraccin 1,3756 (20 C)
Propiedades qumicas
Momento dipolar 1,66 D
Termoqumica

DESHIDRATASA MEDIADA

PRODUCCIN 1-PROPANOL EN ESCHERICHIA COLI

METABLICAMENTE
Resultados

Hemos diseado una nueva va metablica 1-propanol mediante la ampliacin

de la conocida ruta de 1,2-propanodiol con dos ms etapas enzimticas
catalizadas por una deshidratasa 1,2-propanodiol y un alcohol deshidrogenasa.
Con el fin de disear la va en E. coli, se evaluaron las actividades de ocho
sintasas metilglioxal diferentes que desempean papeles cruciales en la
derivacin del flujo de carbono a partir de la gluclisis hacia la biosntesis de 1-
propanol, as como dos deshidrogenasas de alcohol secundario de diferentes
orgenes que reducen tanto metilglioxal y hidroxiacetona. Es evidente de los
resultados de que las enzimas ms activas son la sintasa de metilglioxal a partir
de Bacillus subtilis y la deshidrogenasa de alcohol secundario de Klebsiella
pneumoniae, codificada por MGSA y budC respectivamente. Con la expresin
de estos dos genes y la E. coli ydjG que codifican la reductasa de metilglioxal,
hemos logrado la produccin de 1,2-propanodiol a 0,8 g / L en experimentos en
matraces agitados. a continuacin, se caracteriz la eficiencia cataltica de tres
diferentes deshidratasas diol de 1,2-propanodiol e identificamos el ptimo como
el 1,2-propanodiol deshidratasa de Klebsiella oxytoca, codificada por el opern
ppdABC. Co-expresin de esta enzima con lo anterior va de 1,2-propanodiol en
E. coli de tipo salvaje dio como resultado la produccin de 1-propanol a un ttulo
de 0,25 g / L.
Antecedentes

El uso general de 1-propanol es en la fabricacin de medicamentos y cosmticos

como lociones jabones y esmaltes de uas. Tambin encuentra aplicaciones en
la fabricacin de tinta flexogrfica de impresin y textiles. Recientemente, el uso
de 1-propanol como un potencial sustituto de combustible al petrleo ha
promovido el inters en su produccin a travs de enfoques biolgicos. En 2008,
Atsumi et al. y Shen et al. reportado la produccin de 1-propanol a partir de
glucosa por ingeniera metablica de E. coli. Su trabajo se bas en la va
cetocido en E. coli con 2-cetobutirato como un intermedio clave. El 2-
cetobutirato se convirti en 1-propanol por la accin de una descarboxilasa del
cido ceto y un alcohol deshidrogenasa, tipo salvaje de E. coli que portaba esta
va fue capaz de producir alrededor de 0,15 g / l de 1-propanol. Con la eliminacin
de los genes metA, tdh, ilvB, ilvL y adhE que codifican las enzimas o-
succinyltransferase, treonina deshidrogenasa, acetohidroxi cido sintasa y
alcohol deshidrogenasa, respectivamente, la produccin de 1-propanol
alcanzado fue de 1 g / L.

La informaron de niveles ms altos de produccin de 1-propanol en E. coli

usando Cima que codifica una sintasa de citramalate Methanoccus jannaschii.
Establecieron una ruta directa para la conversin de piruvato en 2-cetobutirato.
Con la utilizacin de la va de citramalate y la incorporacin de una estrategia
evolutiva basado en el crecimiento fueron capaces de superar la inhibicin por
retroalimentacin por isoleucina. El uso de tipo salvaje Cima alcanzaron 0,3 g /
L de la produccin de 1-propanol. Con el desarrollo de variantes de Cima, la
produccin de 1-propanol fue de 9 veces mayor en comparacin con el tipo
salvaje Cima. Hemos desarrollado un nuevo enfoque para la biosntesis de 1-
propanol mediante la ampliacin de la conocida ruta de 1,2-propanodiol. Como
el esquema de la va se muestra en la Figura 1, el compuesto intermedio de
fosfato de dihidroxiacetona gluclisis se convierte en metilglioxal por la accin de
la sintasa de metilglioxal enzima. El metilglioxal generada se reduce an ms a
cualquiera de hidroxiacetona o lactaldehyde a travs de dos rutas diferentes. La
formacin de hidroxiacetona es catalizada por la enzima reductasa de
metilglioxal que es un alcohol deshidrogenasa primaria, mientras que una
deshidrogenasa de alcohol secundario tal como glicerol deshidrogenasa reduce
metilglioxal en lactaldehyde. Tanto hidroxiacetona y lactaldehyde pueden
reducirse an ms al 1,2-propanodiol por cualquiera de una deshidrogenasa de
alcohol secundario o un alcohol deshidrogenasa primaria. La deshidratacin de
1,2propanediol en 1-propanal se puede lograr mediante una diol deshidratasa.
La conversin de 1-propanal a 1-propanol tambin es catalizada por una
deshidrogenasa de alcohol primario. La va que conduce a la sntesis de 1,2-
propanodiol se ha introducido en ambos E. coli y Saccharomyces cerevisiae. Por
sobre-expresin de ti. coli genes MGSA y GLDA y que dependen de la expresin
nativa de otras enzimas, Altaras et al. logrado la produccin de 0,7 g / L de 1,2-
propanodiol en E. coli ; 1,08 g / L de produccin de 1,2-propanodiol en E. coli fue
reportado por BerriosRivera et al. utlizing por Clostridium acetobutylicum MGSA
y E. coli GLDA en un defeciente cepa en la produccin de lactato y el uso de una
concentracin de glucosa inicial de 101,68 mM La expresin estudio participaron
de la va ms completa mediante la adicin de gen fuco (1,2-propanodiol
oxidorreductasa) responsable de la conversin de lactaldehyde al 1,2-
propanodiol y la supresin de la va de la competencia para el lactato que implica
el gen LDHA. Agitar fermentacin en matraz con la cepa ldhA- llevar a la va
condujo a la produccin de 1,2-propanodiol a un ttulo de 1,27 g / L, mientras que
la fermentacin de alimentacin por lotes dio un resultado de 4,5 g / L de 1,2-
propanodiol. la produccin de 1,2-propanodiol en S. cerevisiae se logr mediante
Joon-Young et al. Su estrategia se basa en la idea de canalizar el flujo de
carbono hacia la dihidroxiacetona fosfato, con la supresin de la isomerasa
triosphoshate en S. cerevisiae mediante recombinacin homloga triple. Con la
introduccin de 1,2-propanodiol vas consistentes en la E. coli genes MGSA y
GLDA, la ingeniera de S. cerevisiae produce 1,11 g / L de 1,2-propanodiol en
comparacin con 0,89 g / L producido a partir de la cepa que carece del gen TPII.
En este estudio, se construy la va de 1,2-propanodiol en el tipo salvaje E. coli
cepa BW25113 expresando los genes, MGSA de B. subtilis, budC de K.
pneumoniae y E. coli nativa ydjG, lo que dio lugar a la produccin de 1,2-
propanodiol a un ttulo de 0,8 g / L en matraces de agitacin. Hemos logrado an
ms la conversin de 1,2propanediol de 1-propanol a travs de dos etapas
enzimticas sucesivas mediante la expresin del opern ppdABC de K. oxytoca
y el uso de la actividad natural de E. coli alcohol deshidrogenasas. Esto
estableci una nueva va para la produccin de 1-propanol por la ingeniera de
la ruta glucoltica en E. coli.

Resultados y Discusin

Ramas de la va metilglioxal sintasa Ensayo de 1,2-propanodiol a partir de la

gluclisis y compite por el fosfato de dihidroxiacetona intermedia, con la va
glucoltica. La primera enzima de la va 1,2propanediol, metilglioxal sintasa que
cataliza la conversin irreversible de dihidroxiacetona-fosfato para metilglioxal
tiene suma importancia en la canalizacin del flujo de carbono hacia la
biosntesis de 1,2-propanodiol [10,11]. sintasa de metilglioxal altamente activo es
por lo tanto deseable. Hemos examinado la actividad de la sintasa de metilglioxal
de ocho fuentes diferentes. Que amplifica los genes MGSA de los
microorganismos: C. acetobutylicum (ATCC # 824), B. subtilis 168, C. difficile
R20291, E. coli MG1655, T. thermophilus HB27, K. pneumoniae MGH78578, P.
fluorescens Pf-5, y R. eutropha H16 respectivamente. Estos genes se clonaron
y se expresaron en E. coli de tipo salvaje BW25113 utilizando ocho plsmidos
pRJ1-pRJ8. Cada gen estaba bajo el control del promotor inducible por IPTG
pLlacO1. Uso de dihidroxiacetona-fosfato como sustrato, que con xito
detectado la expresin funcional de todos los genes MGSA in vitro, en los que
las actividades especficas variaban de 0,0052 U / mg a 0,1242 U / mg.

(Tabla 1). Se identificaron sintasa metilglioxal ms adecuado como el MGSA de

B. subtilis que demuestra la proporcin ms alta de actividad especfica / Km
(0,1186) y que tiene una actividad especfica de 0,0561 U / mg. Sin la sobre-
expresin del gen MGSA, tambin se detect la expresin nativa de E. coli
MGSA, que dio una actividad especfica de solamente 0,0008 U / mg, mucho
ms bajo que el de cualquier sobreexpresin.

Metilglioxal reductasa Ensayo

Hemos examinado la actividad de la reductasa de E. coli metilglioxal codificada

por el gen ydjG utilizando plsmido pRJ10. Como parte de la familia aldo-ceto
reductasa, el producto de ydjG realiza una actividad cataltica de reduccin sobre
metilglioxal usando NADH para generar hidroxiacetona. Se determin tanto la
actividad especfica y la afinidad de sustrato de E. coli reductasa metilglioxal en
metilglioxal. Cuando el gen se sobreexpresa por pRJ10, se determin la actividad
especfica a ser 1,62 0.012 U / mg. La enzima tambin mostr suficiente
especificidad de sustrato con un valor de Km de 3,31 0,02 mM.
Alcohol secundario Deshidrogenasa Ensayo

La sntesis de 1,2-propanodiol a partir de metilglioxal se produce a travs de dos

vas diferentes. Por la va que conduce a travs de lactaldehyde 1, la formacin
de 2-propanodiol se evaluaron las actividades del alcohol deshidrogenasas
dependientes secundarias dos NADH: E. coli deshidrogenasa de glicerol (GLDA)
y K. pneumoniae deshidrogenasa diol (budC) en metilglioxal. Tambin hemos
probado las propiedades catalticas de estos dos deshidrogenasas de alcohol
secundario en hidroxiacetona para la terminacin de la otra va. Los genes GLDA
y budC se clonaron y expresaron en E. coli utilizando el plsmido pRJ9 y
pYY109. La actividad especfica y el valor de Km de glicerol deshidrogenasa y
deshidrogenasa diol se determinaron para el metilglioxal sustratos y
hidroxiacetona. Ambas enzimas mostraron actividad de deshidrogenacin que
conduce a la conversin de metilglioxal a lactaldehyde y hidroxiacetona a 1, -
2propanediol. Tabla 2 proporciona los resultados de este ensayo. El diol
deshidrogenasa y glicerol deshidrogenasa reduce tanto metilglioxal y
hidroxiacetona. Cuando se utiliz metilglioxal como el sustrato, el diol
deshidrogenasa demostr una actividad especfica de 3.718 U / mg con un valor
de Km de 0,78 mM; mientras que el glicerol deshidrogenasa mostr tanto ms
baja actividad especfica (2.456 U / mg) y la afinidad por el sustrato (Km = 68,24
mM). Se observaron resultados similares cuando hidroxiacetona se ensay
como sustrato, el diol deshidrogenasa reduce de manera ms eficiente
hidroxiacetona en 1,2-propanodiol (actividad especfica = 4,97 U / mg; Km = 1,83
mM) en comparacin con la glicerol deshidrogenasa (actividad especfica =
0.912 U / mg; Km = 10,47 mM)

Propanodiol deshidratasa en vivo Ensayo

Las deshidratasas diol que probamos inclua una propanodiol deshidratasa

(PPD), originario de K. oxytoca, una deshidratasa de glicerol (GLD) de K.
pneumoniae, y una glicerol deshidratasa (GLD) de C. butyricum. El PPD de K.
oxytoca y el GLD de K. pneumoniae son iso-funcional enzimas que catalizan la
conversin de la coenzima B12-depedent de 1,2-propanodiol o glicerol al
correspondiente aldehdo. Estas enzimas se han utilizado para desarrollar un
proceso biolgico para producir 1,3-propanodiol a partir de glicerol [21]. Cada
una de estas enzimas se compone de tres subunidades codificadas por tres
genes estructurales (ppdABC o gldABC). A pesar de que el sitio cataltico est
alojada por la subunidad A, la presencia de subunidades B y C son obligatorios
para la actividad enzimtica. Con el fin de evaluar su eficacia cataltica hacia 1,2-
propanodiol, los tres subunidades se co-expresan en E. coli para reconstituir las
enzimas utilizando los plsmidos pYY93 y pYY134. El GLD de C. butyricum es
un B12-diol deshidratasa independiente coenzima compuesto por dos
subunidades codificadas por dhaB12, que slo demuestra actividad en
condiciones anaerobias estrictas. Para evaluar su eficacia cataltica, se
construy el plsmido pYY167 para co-expresar estas dos unidades. La
formacin de 1-propanol a partir de 1,2-propanodiol implica dos pasos
enzimticos. Para la primera etapa se evalu la actividad de la deshidratacin de
tres diferentes deshidratasas de diol para la generacin de 1-propanal. Para la
segunda etapa que se bas en la actividad de la alcohol deshidrogenasa nativa
de E. coli para convertir el 1-propanal generada a 1-propanol. Se dise un
experimento y llev a cabo como se describi para realizar el ensayo enzimtico
in vivo de deshidratasa propanodiol y tambin para evaluar la actividad nativa de
E. coli para la etapa final. Se realizaron estudios de bioconversin de clulas
enteras utilizando tipo salvaje E. coli BW25113 cepa que lleva pYY93, pYY134,
y pYY167 respectivamente en matraces de agitacin por la alimentacin de 5 g
/ L (65,7 mM) de 1,2-propanodiol como sustrato. Las muestras se recogieron
despus de 24 horas y se analizaron por HPLC-RID. Los resultados se presentan
en la figura 2. La eficiencia cataltica de K. oxytoca PPD fue la ms alta entre
todos, produciendo 65,6 mM 1-propanol por valor de conversin de casi el 100%.
Este resultado tambin indica que la expresin nativa de alcohol
deshidrogenasas en E. coli es suficiente para convertir 1-propanal a 1-propanol
por completo. La sobreexpresin de las alcohol deshidrogenasas no ser
necesario para la produccin de 1-propanol en E. coli. El K. pneumoniae y C.
butyricum GLD GLD solamente demostraron sobre el 60,9% y el 30,9% de la
eficiencia cataltica de K. oxytoca PPD, produciendo 39.99 20.35 mM y 1 mM-
propanol, respectivamente.
Produccin de 1,2-propanodiol y 1-propanol en E. coli

Con el fin de introducir la va 1-propanol en tipo salvaje BW25113 cepa de E.

coli, se construyeron dos plsmidos. El primer plsmido pRJ11 lleva los genes
que codifican las enzimas ms activas para la biosntesis de 1,2-propanodiol.
Especficamente, MGSA de B. subtilis, ydjG de E. coli, y budC de K. pneumoniae
se organiza como un opern sinttico bajo el control del promotor inducible por
IPTG pLlacO1 en un plsmido de alto nmero de copias. El segundo plsmido
pYY93 slo contiene los genes estructurales ppdABC codificadas por K. oxytoca
PPD. Para los pasos enzimticos de lactaldehyde a 1,2-propanodiol y 1-propanal
a 1-propanol, que completamente basamos en la expresin natural de alcohol
deshidrogenasas en E. coli, tal como se indica a ser suficiente. Tambin se
evalu medios M9 en comparacin con los medios de comunicacin de bajo
fosfato para la produccin de 1,2-propnaediol (datos no incluidos). Los
resultados de un experimento inicial muestran un aumento significativo en la
produccin usando los medios de comunicacin bajo en fosfatos. El uso de
medios M9 resultaron en slo alrededor de 0,1 g / L de la generacin de 1,2-
propanodiol despus de 48 horas de fermentacin anaerbica en comparacin
con aproximadamente 0,8 g / L de bajo fosfato medios. Por lo tanto, se utiliz los
medios de comunicacin bajo en fosfatos para todos los estudios de
fermentacin. Las condiciones de cultivo fueron las mismas como se describe en
"Materiales y Mtodos". En primer lugar, transform el plsmido en pRJ11 tipo
salvaje BW25113 cepa de E. coli para alcanzar una produccin de 1,2-
propanodiol. Se ha informado de que la sintasa de metilglioxal enzima es inhibida
por el ion fosfato. La inhibicin de la sintasa de metilglioxal resultara en el flujo
de carbono que se desva a la gliceraldehdo-3-fosfato en lugar de metilglioxal
por la accin de conversin de triosa fosfato isomerasa. Por lo tanto un medio
bajo en fosfatos era empleado para evitar este problema. Los experimentos de
fermentacin se llevaron a cabo en 20 ml de cultivos como se describe en la
seccin "Materiales y Mtodos". Las muestras de fermentacin se recogieron
despus de 24 horas y 48 horas y se analizaron por HPLC-RID. Como los
resultados mostrados en la Tabla 3, despus de 24 horas 0,66 g / L de 1,2-
propanodiol se produjo. La produccin alcanz 0,80 g / L despus de 48 horas.
El lactato fue detectado como el subproducto dominante y se acumul en ms
de 7 g / L. Tambin llevamos a cabo los experimentos en condiciones aerbicas.
Sin embargo, slo una pequea cantidad (<0,01 g / L) de 1,2-propanodiol fue
producido y el crecimiento de las clulas era mucho mejor que en condiciones
anaerbicas, lo que indica que la gluclisis es muy activo en condiciones
aerbicas y arrastra a la casi totalidad del flujo de carbono hacia piruvato para el
crecimiento celular y otras actividades celulares. Con el establecimiento con
xito de las vas para 1, la produccin de 2-propanodiol usando pRJ11, la
hiptesis de que la co-expresin de pRJ11 con pYY93 dara lugar a la produccin
de 1-propanol. Para probar esto, de tipo salvaje de E. coli se transform con
BW25113 tanto pRJ11 y pYY93 para la produccin de 1-propanol por
electroporacin. La condicin de fermentacin fue similar a la utilizada para la
produccin de 1,2-propanodiol con la adicin de 10 mM de coenzima B-12 a la
cultura junto con IPTG (0,1 mM) despus de 6 horas. Despus de 24 horas, la
cepa doble transformada produjo 0,11 g / L 1-propanol con 0,44 g / L 1,
2propanediol restante no convertido (Tabla 3). Despus de 48 horas, 1-propanol
se produjo a 0,25 g / L con 0,46 g / L de 1,2-propanodiol restante no convertido.
El principal subproducto era de nuevo lactato a ms de 7 g / L.

Conclusiones

Se han establecido con xito una nueva va para la produccin de 1-propanol al

desviar la va glucoltica nativa en E. coli. La adicin de la coenzima B-12
deshidratasa propanodiol depende de K. oxytoca result en la conversin de 1,2-
propanodiol a 1-propanal que a continuacin se deshidrogena por E. coli
actividad nativa de 1propanol. Desde el ensayo de la sintasa de metilglioxal se
determin que el MGSA de B. subtilis fue el ms activo. Dado que la acumulacin
de metilglioxal en grandes cantidades es txico para la clula [24], es importante
que el metilglioxal generado se convierte inmediatamente a otro metabolito por
las enzimas aguas abajo en la va.

ara hacer frente a este problema que exhibi la actividad de la reductasa de

metilglioxal y dos deshidrogenasas de alcohol secundario. Para evaluar 1, la
formacin de 2-propanodiol, la sintasa de metilglioxal Fromb (MGSA). subtilis y
deshidratasa propanodiol (budC) fromK. pneumoniae se expresaron dando lugar
a la conversin de dihidroxiacetona fosfato a 1,2propanediol a travs de la
formacin de metilglioxal y lactaldehyde. Para fortalecer nuestra va construido
la introduccin de E. coli reductasa metilglioxal (ydjG), una ruta metablica dual
para la produccin de 1, se estableci 2-propanodiol por primera vez. Esto dio
lugar a la canalizacin del flujo de carbono a partir de metilglioxal a
hidroxiacetona y 1,2-propanodiol. Fermentacin con E. coli transformada con
BW25113 pRJ11 que lleva los tres genes mencionados anteriormente
produjeron 0,8 g / L de 1,2-propanodiol despus de 48 horas de fermentacin
anaerobia. Tambin se evalu el uso de un vector de nmero de copia medio
(pRJ12) durante 1, la produccin de 2-propanodiol (datos no proporcionados).
Esto se hizo usando los mismos genes utilizados para la construccin de alto
nmero de copias del plsmido pRJ11 pero en la columna vertebral de una copia
medio nmero vector pCS27. Sin embargo, la produccin de 1, se encontr que
2-propanodiol a partir de un vector de nmero de copia medio (pRJ12) a ser
significativamente menor que la produccin de alto nmero de copias del vector
de nmero (pRJ11). Por lo tanto el vector de nmero de copias medio no fue
seleccionado para la produccin de 1, 2-propanodiol y 1-propanol. El resultado
del ensayo de la enzima in vivo (Figura 2) muestra casi 100% de conversin del
1, 2-propanodiol a 1-propanol que indica que la conversin de 1,2-propanodiol a
1-propanal era muy eficiente y que la expresin natural de alcohol
deshidrogenasas en E. coli es suficiente en la conversin de 1-propanal a 1-
propanol. Sin embargo, no fue el caso de la cepa que lleva los plsmidos pRJ11
y pYY93 que mostraron mucho menor conversin de 1,2propanediol a 1-
propanol como de aproximadamente 0,46 g / L de 1,2-propanodiol se dej sin
convertir. Especulamos que la razn de esto podra ser la cuestin expresin de
ppdABC. La expresin ptima de estos tres subunidades se puede lograr con
xito en condiciones aerbicas como lo hicimos en el ensayo in vivo [19]. Sin
embargo, en condiciones anaerbicas que se requiere para la produccin de 1,2-
propanodiol, la expresin de la protena puede ser afectada negativamente
debido a la baja energa celular y nutriente. Tal problema podra resolverse en
un ambiente ms controlado, como en un fermentador a escala de banco por el
delicado ajuste del nivel de oxgeno durante el curso de la fermentacin. La
acumulacin de 7 g / L de lactato indica que el flujo de carbono hacia piruvato es
todava fuerte en condiciones anaerbicas. La rama principal de la gluclisis
desempea el papel ms importante. Tericamente, una molcula de fructosa-
1,6-bisfosfato se divide en una molcula de gliceraldehdo-3-fosfato y una
molcula de dihidroxiacetona fosfato [25]. Sin embargo, la presencia de la triosa
fosfato isomerasa parece canalizar el flujo de carbono a la rama principal hacia
la biosntesis de piruvato [25]. Adems, la va de las pentosas fosfato es tambin
muy activo en condiciones de fosfato bajos [26]. Esta va no genera
dihidroxiacetona fosfato como producto intermedio, sino que va directamente a
piruvato. El piruvato generado recibe la accin de la lactato deshidrogenasa
(LDHA) resulta en la produccin de lactato [27]. Otra ruta de menor importancia
de la formacin de lactato es a travs de la va glyoxalase donde metilglioxal se
convierte en lactato por la expresin nativa de gloA [28]. En general, el trabajo
presentado aqu representa la produccin de 1-propanol en un tipo salvaje cepa
de E. coli y forma una base para una mejora adicional en la produccin. El efecto
de las vas de la competencia es importante y la supresin de la misma no ha
sido explorado en este estudio. Especulamos que el knock-out de genes que
codifican para la lactato deshidrogenasa (LDHA), glyoxalaseI (gloA) y otras vas
rivales (TPIA y ZWF) la produccin de 1-propanol puede mejorarse an ms, que
llevar a cabo en un futuro prximo .

Materiales y mtodos

Productos qumicos y Reactivos hidroxiacetona fue comprado a Acros Organics

(Nueva Jersey, EE.UU.); metilglioxal y 1,2-propanodiol se adquirieron de Sigma
Aldrich (St. Louis, Mo); 1-propanol se obtuvo de Fisher Scientific (Atlanta, GA).
DNA KOD polimerasa se obtuvo de EMD Chemicals Inc., NJ. Todas las enzimas
de restriccin se compraron de New England Biolabs (Beverly, MA). La ligasa de
ADN rpido se obtuvo de Roche Applied Science (Indianapolis, IN). Todas las
enzimas se utilizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Propanodiol deshidratasa in vivo Ensayo

El ensayo se llev a cabo para evaluar las actividades de tres deshidratasas diol
de 1,2-propanodiol. Tres cepas de E. coli generados por la transformacin de la
E. coli de tipo salvaje con BW25113 pYY93, pYY134, y pYY167 respectivamente
se utilizaron para este propsito. Preinculo de un cultivo de una noche se aadi
a 10 ml de M9 medios de comunicacin (1: 100 V / V) y se cultivaron a 37 C.
IPTG se aadi a los cultivos a una concentracin final de 0,1 mM y 1,2-
propanodiol se aadi a los cultivos como el sustrato a una concentracin final
de 5 g / L (65,7 mM) despus de 4 horas. Los cultivos celulares que llevan
pYY167 se cultiv en condiciones anaerobias; mientras que los cultivos de
clulas que lleva pYY93 o pYY134 se cultivaron micro-aerbicamente.
Coenzima-B12 (Cobamamide) tambin se aadi a los cultivos de clulas que
tienen pYY93 y pYY134 a una concentracin final de 10 mM despus de 4 horas.
Las muestras se recogieron despus de 24 horas y se analizaron para la
generacin de 1-propanol usando HPLC-RID como se describe anteriormente.
Las actividades enzimticas se reflejaron por la formacin de 1-propanol.

INFORMACIN TCNICA Y COMERCIAL DEL PROPANOL, 1-

PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

GENERALIDADES DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-

PROPLICO)

Descripcin del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Lquido incoloro claro de olor penetrante parecido al del alcohol etlico.

USOS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

Se utiliza en la manufactura de anticongelantes, productos cosmticos como:

lociones y productos refrescantes, como solvente para: lacas, gomas, hules,
aceites esenciales, resinas naturales y sintticas, creosota, etc; se utiliza
tambin como limpiador de aparatos electrnicos y en la sntesis de glicerina,
acetato de isopropilo y acetona, lquido para frenos y como antisptico.

PROPIEDADES DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

Reacciona con oxidantes fuertes como: percloratos y nitratos, es altamente

inflamable, soluble en agua y forma mezclas explosivas con el aire.

OBTENCIN DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

Por oxidacin de hidrocarburos del gas natural o a partir del aceite de fusel.
IDENTIFICADORES QUMICOS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL
N-PROPLICO)

Nmero CAS Nmero registrado CAS del Propanol, 1-propanol (alcohol N-

proplico)

71-23-8

SINONIMIAS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

1-Propanol,
Propanol,
N-propanol,
1-Hidroxipropano.

COMPUESTOS RELACIONADOS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL

(ALCOHOL N-PROPLICO)

Acetona,
Propanal,
Acetato de isopropilo,
Glicerina,
cido proplico,
Etanol,
Propan-2-ol

PELIGROSIDAD DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-PROPLICO)

Nmero RTECS Registro de Efectos Txicos de Sustancias Qumicas del
Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

UH8225000

Ingestion del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Sntomas en caso de ingestin: dolor garganta, vrtigo, somnolencia y nusea.

Inhalacin del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Sntomas en caso de inhalacin: tos, dolor de garganta, nauseas, vmitos,

vrtigo y dolor de cabeza.

Piel del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Sntomas en caso de contacto con piel: enrojecimiento.

Ojos del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Sntomas en caso de contacto con ojos: enrojecimiento, visin borrosa y dolor.

RECOMENDACIONES DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-

PROPLICO)

Primeros Auxilios del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

1) Inhalacin: respirar aire fresco, reposo, de ser necesario respiracin artificial

y atencin mdica inmediata.
2) Ingestin: No provocar vmito y si la persona esta conciente dar a beber
agua, llamar a un mdico de manera inmediata.
3) Contacto con piel: quitar la ropa contaminada y lavar con abundante agua,
pedir asistencia mdica en caso de irritacin.
4) Contacto con los ojos: lave con cuidado (de tener lentes de contacto,
quitarlos), no poner ninguna sustancia sin indicacin del mdico, pedir asistencia
mdica.

En caso de fuego del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

A menos que el flujo puede ser cortado intente apagar el fuego; use: espuma
resistente al alcohol, polvos qumicos, dixido de carbono. Las corrientes slidas
de agua pueden ser ineficaces.
EN CASO DE FUEGO DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-
PROPLICO)

ROPA PROTECTORA DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-

PROPLICO)

Utilice lentes de seguridad, guantes, proteccin respiratoria y bata.

PROPIEDADES FSICAS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-

PROPLICO)

Frmula semidesarrollada del propanol, 1-propanol (alcohol n-proplico)

CH3CH2CH2OH.

Punto de inflamabilidad: El punto de inflamabilidad de una sustancia

generalmente de un combustible es la temperatura ms baja en la que puede
formarse una mezcla inflamable en contacto con el aire. del Propanol, 1-propanol
(alcohol N-proplico)

77.0 F.

Densidad del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

0.803 g/cm 3 a 68.0 F .

Masa molecular UMA Unidad de Masa Atmica, Dalton del Propanol, 1-propanol
(alcohol N-proplico)

60.1 g/mol.

Punto de fusin Temperatura del momento en el cual una sustancia pasa del
estado slido al estado lquido. del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

-195.2 F.

Punto de ebullicin Temperatura que debe alcanzar una substancia para pasar
del estado lquido al estado gaseoso. del Propanol, 1-propanol (alcohol N-
proplico)

207.0 F a 760.0 mm Hg .
PROPIEDADES QUMICAS DEL PROPANOL, 1-PROPANOL (ALCOHOL N-
PROPLICO)

Solubilidad en agua Medida de la capacidad de una determinada sustancia para

disolverse en agua. del Propanol, 1-propanol (alcohol N-proplico)

Propiedades fsicas de los alcoholes proplicos: