Maribel Leal Castillo

Universidad de Colima
Postgrado Interinstitucional de Ciencias Agrcolas y Forestales
BIORREMEDIACION DE UN SUELO AGRCOLA CONTAMINADO

CON ACEITE RESIDUAL AUTOMOTRIZ
Tesis que para obtener el grado de
DOCTOR EN CIENCIAS
Presenta
MARIBEL LEAL CASTILLO
Asesor y coasesor
Dr. Juan Manuel Snchez Yez
Dr. Jos Luis Hernndez Mendoza
Colima, Col. Agosto del 2003

NDICE
PGINA
NDICE DE CUADROS 1
NDICE DE FIGURAS 3
RESUMEN 5
ABSTRACT 6
I. INTRODUCCIN 7
II. ANTECEDENTES 9
1.- Biorremediacin. 9
2.- Metabolismo. 11
3.- Degradacin de xenobiticos. 12
4.- Fitorremediacin. 15
HIPTESIS 18
OBJETIVO GENERAL 18
OBJETIVO ESPECFICO 18
META 18
III. MATERIALES Y METODOS 19
1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido. 19
1.1.- Anlisis microbiano preliminar. 19
1.2.- Captacin de CO2 en lcali bajo diferentes tratamientos. 19
1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de Fsforo y Potasio. 19
1.2.1a.- Con agitacin. 20

1.2.1b.- Sin agitacin. 20
1.2.1c.- Con H2O2. 20
1.3.- Concentracin de grasas y aceites. 20
1.4.- Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados. 20
1.5.- Anlisis estadstico. 20
2.- Efecto de la solucin mineral 3, H2O2 y un microcosmos cerrado 22

en la biorremediacin de un suelo agrcola contaminado con ARA
2.1.- Propiedades fisicoqumicas del suelo 22
2.2.- Captacin de CO2 en lcali. 23
2.3.- Determinacin de grasas y aceites 23
2.4.- Anlisis estadstico 23
3.- Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de 23

aire en la biorremediacin de un suelo agrcola contaminado
con ARA.
3.2.- Determinacin de grasas y aceites. 25
3.3.- Anlisis estadstico. 25
3.4.- Fitorremediacin 26
IV. RESULTADOS 27
1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido 27
1.1.- Anlisis microbiano preliminar 27
1.2.- Captacin de CO2 en lcali 28
1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de fsforo y potasio 28
1.2.2.- Comparacin del efecto de dos soluciones minerales y la 35

oxigenacin sobre la produccin de CO2 por la microflora
activa en ARI, ARA y SI.
2
1.2.3.- Efecto de dos soluciones minerales y la oxigenacin sobre la 37
biodegradacin de grasas y aceites.
1.3.- Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados 40
2.- Efecto de la SM3, H2O2 y un microcosmos cerrado en la 43

biorremediacin de un suelo agrcola contaminado con ARA.
2.1.- Propiedades fisicoqumicas del suelo. 43
3.- Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de aire 47

en la biorremediacin de un suelo agrcola contaminado con
ARA.
3.3.- Fitorremediacin. 50
52
V. DISCUSIN
58
VI. CONCLUSIONES
59
VII. LITERATURA CITADA
71
ANEXO I
112
ANEXO II
118
ANEXO III
3
NDICE DE CUADROS
CUADRO TTULO PGINA
1.- Composicin qumica de las soluciones minerales empleadas para 20

estimular la microflora en los aceites residuales
2.- Combinacin de factores para determinar su efecto sobre la 25

biodegradacin de ARA en un suelo agrcola.
3.- Caractersticas coloniales y microscpicas de microorganismos 27

en muestras de aceite.
4.- ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de ARA y ARI 29

con la SM1 y SM2.
5.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los valores ...30

valores de CO2 generado por la microflora de dos aceites en dos SM.
6.- ANAVA de la produccin de CO2 en ARA, ARI y SI, estimulada por la 31

solucin mineral 1 con y sin agitacin.
7.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los valores 32

de CO2 generado por la microflora de tres aceites con la solucin
mineral 1 con y sin agitacin.
8.- ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de los aceites 33

estimuladas por la SM1 ca y cp.
9.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los 34

valores de CO2 generado por la microflora de los aceites en la SM1.
10.- ANAVA del efecto de dos soluciones minerales y condiciones 35

de oxigenacin sobre la produccin de CO2 por la microflora del ARI.
11.- ANAVA del efecto de dos soluciones minerales y condiciones................36

...........de oxigenacin sobre la produccin de CO2 por la microflora del ARA.
12.- ANAVA del efecto de la SM1 y condiciones de oxigenacin sobre 37

la produccin de CO2 por la microflora acompaante en el SI.
13.- ANAVA de la biodegradacin de ARI en ppm causada por la 38

microflora activa con diferente SM y oxigenacin, durante 5 semanas.
14.- . ANAVA de la biodegradacin de ARA en ppm por la microflora 39

activa con diferente SM y oxigenacin en 5 semanas.
1
15.- ANAVA de la biodegradacin de ARA en el SI, con diferente 40
oxigenacin en la SM1, durante 5 semanas.
16.- Componentes qumico de los aceites antes de la bioestimulacin 41

con la solucin mineral 1 y H2O2.
17.- Componentes qumicos de los aceites despus de la bioestimulacin 42

con la solucin mineral 1 y H2O2.
18.- Propiedades fisicoqumicas del suelo muestreado. 43
19.- ANAVA de la produccin de CO2 generada por la microflora de un 44

suelo agrcola contaminado con ARA bajo diferentes tratamientos.
20.- ANAVA de los valores totales de biodegradacin de ARA inducidos 45

por la SM3 y el H2O2 sobre la microflora de un suelo agrcola.
21.- Anlisis bifactorial del efecto del flujo de aire sobre la biodegradacin 51
de ARA en un suelo agrcola con diferentes factores fisicoqumicos.
2
NDICE DE FIGURAS
FIGURA TTULO PGINA

1.- Degradacin de Xenobiticos. Reacciones de la Fase I. 13
2.- Degradacin de Xenobiticos. Reacciones de la Fase II. 13
3.- Respirmetro tipo Bartha. 21
4.- Modelo de microcosmos para determinar la biodegradacin del aceite....22

residual automotriz en un suelo agrcola
5.- Modelo de microcosmos con flujo de aire, para determinar la 23

biodegradacin del aceite residual automotriz en un suelo agrcola.
6.- Produccin de CO2 por la biodegradacin de aceite residual en 28

solucin mineral, con dos concentraciones de Fsforo y Potasio.
7.- Produccin de CO2 por la microflora acompaante de ARI y ARA con 29

dos concentraciones de Fsforo y Potasio.
8.- Efecto de la SM1 con y sin agitacin sobre la produccin de CO2 31

por la flora microbiana en aceites.
9.- Efecto de la solucin mineral 1 y la agitacin sobre la 32

produccin de CO2, por la microflora acompaante de ARA, ARI y SI
con la solucin mineral 1.
10.- Efecto de dos formas de introduccin de oxgeno y la solucin 33

mineral 1 en la produccin de CO2 por la microflora de los aceites.
11.- Efecto de la solucin mineral 1 y dos fuentes de oxigenacin en la 34

biodegradacin de ARI, ARA y SI.
12.- Efecto de dos SM y formas de oxigenacin en la biodegradacin de 35

de ARI por su microflora acompaante.
13.- Efecto de dos soluciones minerales y formas de oxigenacin en la 36

biodegradacin de ARA por su microflora acompaante.
14.- Efecto de la SM1 y diferentes formas de oxigenacin en la 37

biodegradacin de ARA en SI por su microflora activa.
3
15.- Efecto de dos SM y condiciones de oxigenacin sobre la 38
biodegradacin de ARI en 5 semanas.
16.- Efecto de dos SM y formas de oxigenacin sobre la biodegradacin 39

de ARA en 5 semanas.
17.- Efecto de la SM1 y condiciones de oxigenacin sobre la 40

Biodegradacin de ARA por la microflora activa en el SI por cinco
semanas.
18.- Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biorremediacin de un suelo agrcola 44

contaminado con ARA.
19.- Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biorremediacin de un suelo 45

agrcola contaminado con ARA.
20.- Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biodegradacin de ARA por la 46

microflora de un suelo agrcola.
21.- Efecto de diversos factores y un flujo de aire sobre la microflora de un 47

suelo agrcola contaminado con ARA.
22.- Efecto de diversos factores y un flujo de aire en la biorremediacin 48

de un suelo agrcola contaminado con ARA.
23.- Efecto de diferentes factores sobre la mxima biorremediacin de 49

un suelo agrcola contaminado con aceite residual automotriz.
4
RESUMEN
El agua de riego agrcola frecuentemente contiene aceite residual, automotriz

(ARA) o industrial (ARI) que contaminan y reducen la fertilidad de los suelos. Se
evalu el efecto de la oxigenacin y dos soluciones minerales (SM1 y SM2) en la
microflora inicial de ARA, ARI y un suelo impactado (SI) con ARA, en lquido.
Adems, se evaluaron con un diseo completamente al azar, diferentes factores
en un suelo agrcola contaminado con ARA, el cual se trat con: solucin mineral
3 (SM3), perxido de hidrgeno (H2O2), filtrado de Phanerochaete chrysosporium
(fPch), flujo de aire y Lolium multiflorum. Como indicadores de la biodegradacin
se determinaron produccin de CO2 y grasas totales.
En liquido la SM1 con H2O2 favoreci la biodegradacin de aceites. La
combinacin de SM3, fPch y L. multiflorum mostr la mxima biorremediacin en
suelo. La integracin oportuna de los diferentes factores estimul la
biodegradacin de aceites y la biorremediacin del suelo contaminado con ARA.
Palabras clave: microflora, biodegradacin, biorremediacin, contaminacin
5
ABSTRACT
Agricultural irrigation water, frequently contain, automotive waste oil (AWO), or

industrial waste oil (IWO); that pollute and reduce soil fertility. In this research was
evaluated the oxygenation effect and two minerals formulations (MS1 and MS2),
over initial microflora of AWO, IWO and an impacted soil (IS) with AWO, in liquid
medium. Also, was evaluated with a completely randomized design, different
factors in a contaminated agricultural soil with AWO, which was treated with
mineral solution 3 (MS3), hydrogen peroxide (H2O2), Phanerochaete chrysosporum
filtrate (fPch) with air flow and Lolium multiflorum. As biodegradation indicators,
was utilized CO2 production and total oils monitoring.
In liquid medium, MS1 with H2O2 favored oils biodegradation. The MS3 fPch and L.
multiflorum combination, shows maximum soil bioremediation. Opportune different
factors integration stimulates oils biodegradation and AWO contaminated soil
bioremediation.
Key words: microflora, biodegradation, bioremediation, contamination.
6
I. INTRODUCCIN
La contaminacin ambiental forma parte de la vida moderna, una de las causas

principales es el uso de combustibles derivados del petrleo, durante el proceso de
extraccin, manejo y disposicin, adems al oxidarse liberan al ambiente productos
txicos para casi todas las formas de vida. En el pasado esto no fue complicado,
progreso era sinnimo de bienestar social, las industrias no tenan mayor problema
para deshacerse de sus residuos puesto que eran vertidos en los cauces de los ros
o dejados a la intemperie. Sin embargo cuando la velocidad de generacin de
residuos super la velocidad de integracin al ambiente, surgi la contaminacin;
que se ha agudizado gradualmente en las ciudades industrializadas donde se
observa en todas sus modalidades: en el aire, el agua y el suelo. El progreso es hoy
un sinnimo de dao ecolgico. Afortunadamente se han establecido normas en
cuanto a la disposicin de residuos y se han clasificado en base a su peligrosidad
(LGEEPA, 2001; NOM-052-ECOL-93, 1993).
Los aceites residuales se consideran desechos peligrosos y provienen

principalmente de dos fuentes: las industrias, que son llevados a confinamiento y los
talleres que realizan cambios de aceite automotriz, que comnmente son vertidos en
el drenaje municipal (LGEEPA, 2001).
Otro problema de las ciudades industrializadas es la falta de agua, por esta razn es
usada solo para las necesidades bsicas de la poblacin, tambin es comn que los
suelos agrcolas sean regados con aguas residuales, que contienen desechos
orgnicos y productos generados por la industria, as como aceite residual automotriz
(ARA) procedente de talleres. Segn un clculo estimativo, un taller de servicio de
lavado y engrasado en promedio recibe 15 automviles diarios, as le corresponden 4
litros con un total de 60 litros diarios de desecho. Multiplicado por el nmero de
talleres, la cantidad es muy elevada. La importancia de eliminar el ARA radica en que
7
un litro de ste contamina 250 mil litros de agua, o forma una pelcula sobre una
extensin de cuatro mil metros cuadrados. Adems los lubricantes y aceites en los
cuerpos acuosos o el drenaje sanitario impiden la potabilizacin y la eficiencia del
tratamiento de las aguas domsticas. Segn informes de la Subsecretara de
Ecologa del estado de Nuevo Len, entre las descargas qumicas a las aguas
residuales en 1994 se arrojaban 16,174 toneladas diarias de grasa y aceite, desde
ese tiempo ya excedan los lmites oficiales permitidos.
Un ejemplo es el ro Pesquera utilizado como vertedero clandestino de las aguas

residuales de la zona metropolitana de Monterrey, aunque se conducen a una planta
de tratamiento, para llegar a la presa Marte R. Gmez donde se emplean para riego
de suelos agrcolas en el noreste de Nuevo Len y Tamaulipas. Sin embargo no
todas las ciudades industriales tienen la capacidad econmica para tratar sus aguas
residuales antes de ser utilizadas para riego, as que el ARA se acumula y disminuye
el suelo agrcola productivo.
8
II. ANTECEDENTES
1. Biorremediacin
Es un proceso que consiste en la aplicacin de tratamientos biolgicos para la
limpieza de reas contaminadas con qumicos peligrosos, se requiere el control y
manipulacin de procesos microbianos. Esta es una posible solucin a los problemas
antes mencionados, se puede lograr mediante la bioestimulacin de
microorganismos nativos del suelo, donde existen bacterias, hongos y actinomicetos
los cuales por adaptacin, induccin y cometabolismo desarrollan una capacidad
potencial para degradar y/o mineralizar compuestos recalcitrantes en aguas
residuales industriales, desechos de refineras, combustibles, o derrames en tanques
de almacenaje, aplicable tambin a desechos qumicos orgnicos,
organohalogenados y metales pesados. La biorremediacin baja los costos en
comparacin con otras tecnologas (Konopka et al., 1999; Leahy y Colwell, 1990;
Roane et al., 2001).
Al estudiar la degradacin de hidrocarburos en un ambiente natural, se comprob

que ciertos microorganismos obtienen sus nutrientes y energa a travs de materiales
hidrocarbonados simples y complejos. Las bacterias ms comunes del suelo estn
entre ellos. Mediante muestreos y anlisis se observ que son los organismos
oxidativos los ms activos en tierra agrcola y lodos, se demostr que las tcnicas
agronmicas como el cultivo, riego y la fertilizacin elevaron drsticamente el
porcentaje de degradacin. En el caso de aguas subterrneas se encontr que los
acuferos que estaban en conexin con la superficie se limpiaron ms rpido que las
aguas profundas, donde la difusin del oxgeno estaba limitado. Cuando el agua
contaminada fue bombeada a la superficie y aireada se obtuvieron mejores
resultados. Mediante la introduccin de oxigeno y nutrientes, estos acuferos fueron
remediados con tratamiento in situ (Leahy y Colwell, 1990).
9
En trabajos ms recientes se observ que el grado de biotransformacin y la
persistencia del contaminante se control con la aplicacin de oxgeno en aguas
subterrneas contaminadas con hidrocarburos. Se afirma que este es el factor ms
limitante para los procesos de biorremediacin en estas reas (Thomas y Ward,
1989). Se ha calculado que se necesitan 3 lb de oxgeno/lb de petrleo degradado
(Fogel et al., 1988). Goldsmith y Balderson (1989) estimaron un requerimiento
estequiomtrico de 8.6 moles de oxgeno/mol de diesel degradado. De acuerdo con
Bajpai y Zappi (1994) se necesitan de 0.5-1 g de oxigeno/g de hidrocarburo
degradado, afirman que la concentracin de oxgeno que acelera la oxidacin del
hidrocarburo, en relacin de peso es de 4:1. Huling y colaboradores (1990) estimaron
una proporcin en peso de 5:1 de oxgeno para la gasolina, este calculo fue basado
en pruebas de laboratorio efectuadas en columna. En base a estas referencias se
establece que la efectiva introduccin de oxgeno en zonas con alta actividad
biolgica es de gran importancia en el diseo y mantenimiento de un efectivo sistema
de biotratamiento in situ.
Las opciones para la aplicacin potencial de oxgeno incluyen; la perforacin
profunda con introduccin de aire, aeracin/inyeccin sobre el suelo, o inyeccin de
H2O2 directamente en el acufero (Wilson y Brown, 1989; Zappi et al., 1997). Otra
manera de proveer oxgeno al subsuelo es mediante la introduccin de H2O2 que
tpicamente se disocia en mol de oxgeno disuelto/mol de H2O2 : H2O2 + H2O ---
0.5 O2 + 2H2O (Hulling et al., 1990). El oxgeno molecular puede ser suplido usando
H2O2 o asperjando oxgeno puro, tiene una solubilidad de 40-50 mg/l, representa un
incremento de al menos 4 veces el oxgeno disponible en un medio acufero saturado
(Morgan y Watkinson, 1992). El H2O2 como una fuente de oxgeno para el
biotratamiento in situ, tiene las siguientes ventajas: es razonablemente barato, no
persistente, es un lquido estable sin problemas de almacenaje e introduccin en los
acuferos, generalmente es favorable al ambiente (Britton, 1985; Zappi et al., 2000).
Los suelos ricos en materia orgnica pueden incrementar significantemente los
costos de biorremediacin, ya que el H2O2 reacciona con sta constituyendo graves
prdidas econmicas (Aggaewal et al., 1991; Barcelona y Holm, 1991).
10
Existen numerosos reportes que sealan la necesidad de la microflora nativa de
disponer de nitrgeno, fsforo, potasio y de los metales que sirven como cofactores
para catalizar las diferentes reacciones metablicas en concentracin suficiente para
la sntesis de enzimas (API, 1983; Margesin y Schinner, 2001; Walker y Colwell,
1974). Adams y sus colaboradores (1999) recomiendan una relacin de 100-10-1
para N-P-K en la mineralizacin de combustible, lubricantes y petrleo crudo.
Margesin y Schinner (2001) probaron una relacin de 15-15-15 en N-P-K y
obtuvieron una reduccin del 70% en la concentracin de diesel en suelo.
2. Metabolismo
Las bacterias poseen una amplia variedad de sistemas de respiracin. Esos pueden
ser caracterizados por la naturaleza de las sustancias que se utilizan como agentes
reductores y de los oxidantes. En la respiracin aerbica, el aceptor de electrones es
el oxgeno molecular. La respiracin anaerbica de las bacterias requiere de
sustratos orgnicos, en la mayora de los casos, muy similar. Los sustratos son
oxidados a CO2, con la remocin sucesiva de pares de H+ y electrones (Horvath,
1972).
La biodegradacin de hidrocarburos alifticos se lleva a cabo mediante un proceso

aerbico. El oxgeno es el factor limitante en la mayora de los casos en que se tratan
suelos contaminados y aguas subterrneas. La primera etapa en la degradacin de
los hidrocarburos es la incorporacin del oxgeno por las enzimas oxigenasas.
Existen dos grupos de oxigenasas: monooxigenasas y dioxigenasas (Holm et
al.,1992).
La manera comn en la degradacin de alcanos, es la oxidacin en el grupo metilo

terminal, donde el alcano es oxidado a alcohol y luego a su correspondiente cido
graso. El hidrocarburo se oxida a un cido, con la formacin de un grupo carboxil, y
la oxidacin sucesiva, remueve dos unidades de carbn, sta es universal para la
mayora de los sistemas vivientes y la secuencia termina con la beta oxidacin.
11
En esta ruta, el grupo metileno , es oxidado a un grupo cetonico, seguido por la
remocin de un fragmento de doble carbn del compuesto. Adems de la oxidacin
terminal, la degradacin subterminal ocurre ocasionalmente (Johnson et al., 1990;
Van den Wijngaard et al., 1993).
La degradacin de alquenos, es ms variada, ya que el ataque microbiano ocurre en

el grupo metilo o en el doble enlace. Los hidrocarburos insaturados de cadena lineal,
son generalmente mas difciles de degradar que los saturados. El metabolismo
resulta en la formacin de compuestos intermediarios, tales como alcoholes
insaturados, cidos grasos, alcoholes primarios o secundarios, metil cetonas, 1,2-
epxidos, y 1,2-dioles (Ramanand et al.,1995).
Los hidrocarburos con cadena ramificada, son menos susceptibles a la degradacin.

Este hecho es recalcado por la resistencia al rompimiento biolgico de los ABS
(alquil-bencen-sulfonatos). Los compuestos de cadenas ramificadas: en un carbn
cuaternario y los compuestos -alquil-ramificados, se consideraban recalcitrantes y
acumulables en la biosfera. No obstante existen pocos organismos capaces de
utilizar esos compuestos alquil-ramificados que pueden utilizarlos como fuente de
carbn y de energa (Nelson et al., 1986).
3. Degradacin de xenobiticos
Los procesos por los cuales los organismos metabolizan especies xenobiticas, son
reacciones enzimticas catalizadas en dos fases:
Fase I. Las especies xenobiticas en la clula tienden a llevar a cabo reacciones que
hacen al compuesto ms soluble y reactivo al agua, por la incorporacin de grupos
funcionales, tales como el -OH. La mayora de las reacciones de la Fase I, son
producto de las oxidasas microsomticas, catalizadas por el sistema enzimtico
citocromo P-450, asociado con el retculo endoplsmico de la clula, esto ocurre con
mayor frecuencia en los vertebrados, en las clulas vegetales y en levaduras.
12
O
Producto. ms soluble en
Sustancia xenobitica, Epxido C --- C
agua y con mayor reactividad
lipoltica, poco soluble en
agua, sin metabolizar Hidrxido -OH
Sulfhidril -SH
H
Sistema enzimtico Hidroxilamina - N -- OH
Citocromo P-450
Figura 1. Degradacin de xenobiticos. Reacciones de la Fase I

(Gonzlez, 1998; Millburn, 1995)
Fase II. Los grupos funcionales polares incorporados a los compuestos xenobiticos
en las reacciones de la Fase I, proveen sitios de reaccin para esta fase.
O

Agente
Compuesto Carboxil --C-OH
conjugante
xenobitico + endgeno
comnmente Hidroxil OH
los productos
de reaccin de Halgeno
la Fase I
-F,Cl,Br,I
C Producto de conjugacin
Epxido O
C Polaridad alta
H Solubilidad mayor en el
Amino agua
N
Ms fcilmente
H eliminado
Grupos funcionales que reaccionan

con un agente de conjugacin
Figura 2. Degradacin de xenobiticos. Reacciones de la Fase II

(Gonzlez, 1998; Millburn, 1995)
13
La Fase II consta de reacciones de conjugacin, donde las enzimas incorporan
agentes de conjugacin a los xenobiticos, productos de la reaccin de la Fase I,
stos son a menudo menos txicos que los compuestos originales. Los principales
agentes de conjugacin y las enzimas que catalizan las reacciones de la Fase II, son
el cido glucornico (UDP enzima glucoroniltransferasa) y el glutatin (enzima
glutationtransferasa). Los productos de conjugacin ms abundantes, son los
glucornicos (Gonzlez, 1998; Millburn, 1995).
Desde el descubrimiento del citocromo P-450 en mamferos en 1964 se ha enfocado

el inters en este importante grupo de enzimas que contienen el grupo hemo. Se
conocen al menos dos tipos de Citocromo P-450, ambos contienen protoporfirina IX,
han sido encontrados en levaduras y filamentos de hongos. El citocromo P-450 tiene
enzimas que generalmente funcionan como componentes de monooxigenasas, las
cuales participan en la oxidacin en una variedad de compuestos alifticos y
aromticos. El paso inicial en la activacin de estos compuestos hacia la
carcinognesis es desactivado por una flavoprotena enzimtica (NADPH)-citocromo
P-450 reductasa) y una hemoproteina enzimtica asociada con un fosfolipido. El P-
450 14DM est relacionado con la sntesis de esteroles, el P-450 est relacionado
con el metabolismo de hidrocarburos, acidos grasos y compuestos xenobiticos.
(Atlas y Cerniglia, 1995; Guengerich, 1993).
Recientemente se prob que los hongos tienen la capacidad de romper cadenas

largas y complejas de hidrocarburos ms eficientemente que las bacterias, al iniciar la
oxidacin de los bifenilos policlorados (BPC). Por cometabolismo muchos
microorganismos del ambiente oxidan hidrocarburos alifticos que no utilizan como
fuente de carbono, por ejemplo Phanerochaete chrysosporium, este hongo oxida
algunos tipos de compuestos organoclorados incluyendo DDT, BPCs, y clorodioxinas.
El sistema enzimtico que participa en la oxidacin de estos compuestos es el mismo
que el hongo emplea para degradar la lignina en condiciones naturales y consiste en
un sistema multienzimtico productor de lignina-peroxidasas y peroxidasas
14
manganeso-dependiente, as como un mecanismo generador de H2O2 (Michael,
1999; Yadav et al., 1995). Se ha reportado tambin la participacin de las enzimas del
citocromo P450, que constituyen una super familia de haem-thiolato monooxigenasas,
algunas de las cuales catalizan la hidroxilacin de contaminantes orgnicos, que
facilitan su biodegradacin y/o metabolismo (Masaphy et al., 1996; Mehmood et al.,
1997; Topal et al., 1996).
Es comn la presencia de metales pesados en reas contaminadas con

hidrocarburos, esto puede hacer ms difcil el proceso de biorremediacin, no
obstante se reporta la existencia de microorganismos tolerantes a metales pesados,
con la capacidad de captar Pb+ en las protenas y en los polisacridos de su pared
celular (Kjaergaard et al., 2000; Richards et al., 2002). Se cree que esto depende de
la sntesis de enzimas y fitoquelatinas (Phitochelatins): pptidos ricos en cistena
que se unen a metales pesados, estos pptidos se sintetizan en plantas y levaduras
(Sauge-Merle et al., 2003). Se comprob la capacidad de cepas especficas y de la
microflora del suelo para fijar cadmio tanto en la membrana como intracelularmente y
con capacidad para oxidar 500-g ml-1 de cido 2-4 diclorofenoxiactico (Roane et
al., 2001). Los microorganismos de suelo pueden quelar plomo y oxidar gluosa
marcada con C14 (Konopka et al., 1999).
4. Fitorremediacin
Otra manera de combatir la contaminacin por hidrocarburo en suelos es la
fitorremediacin, esta depende de las relaciones sinrgicas naturales entre el
sistema radicular de plantas y los microorganismos del suelo. No requiere de
tcnicas de ingeniera ni de excavaciones, solo la intervencin humana para
establecer una relacin radicular adecuada planta-microorganismo en el sitio, o la
aplicacin de tcnicas agronmicas fertilizantes para inducir la mineralizacin natural
del hidrocarburo. Las rutas metablicas ms importantes que puede seguir un
hidrocarburo en la planta son: quedar contenidos en la zona de la raz durante la
absorcin de agua, las races de la planta pueden conducir el hidrocarburo hacia la
superficie, puede ser biodegradado o acumulado dentro la planta, los hidrocarburos
15
voltiles pueden ser transferidos al aire mediante la evapotranspiracin, los
exudados radiculares estimulan la actividad oxidante de las comunidades
microbianas y oxidan hidrocarburos (Cunningham et al., 1996; Ferrera-Cerrato, 1997;
Siciliano y Germida, 1998; Siciliano et al., 2003; Yoshitomi y Shann, 2001).
En 12 especies de pasto de regiones clidas, 4 de las cuales aceleran la oxidacin

de hidrocarburos poliaromticos de bajo peso molecular, solo una especie disminuy
la concentracin de compuestos de alto peso molecular (Qiu et al., 1997).
En un suelo sembrado con el pasto ryegrass se redujo notablemente la mezcla de

hidrocarburos, de n-alcanos (C10, C14, a C18, C22, C24), como el pristano, el
hexadecano, el fenantreno, el antraceno, el fluorantraceno, y el pireno. La
concentracin inicial de hidrocarburos extractables fue de 4.33 g/kg de suelo,
despus de 22 disminuy a 0.120 g/kg de suelo (97% de reduccin) en un suelo
cultivado y 0.790 g/kg en el suelo no cultivado (82% de reduccin)(Gunther et al.,
1996).
Se conocen tres mecanismos principales por los que las plantas y los
microorganismos remedian suelos y agua contaminados con petrleo, estos
mecanismos incluyen su oxidacin y acumulacin, as como la transferencia del
hidrocarburo del suelo a la atmsfera (Cunningham et al., 1996; Siciliano y Germida,
1998; Sims y Overcash, 1983).
Las plantas proveen a las poblaciones microbianas de la rizsfera de exudados

radiculares, de carbn, energa, nutrientes, enzimas y en ocasiones de oxgeno. Los
que contienen azucares, alcoholes y cidos representan del 10 al 20% de la
fotosntesis anual de la planta. Debido a la accin de los exudados, las poblaciones
microbianas son de 5 a 100 veces mayores en la rizsfera que en suelo sin plantas.
Los tipos y cantidad de exudados radiculares dependen de la especie vegetal y de su
estado de desarrollo, del tipo de suelo, concentracin de nutrientes esenciales, pH,
disponibilidad de agua, temperatura, concentracin de oxgeno, dixido de carbono
16
atmosfrico e intensidad de luz (; Cunningham et al., 1996; Schnoor et al., 1995;
Vance, 1996).
Las interacciones especficas de los microorganismos con las races vegetales

ocurren cuando la planta exuda un compuesto en respuesta a un hidrocarburos
contaminante. Las interacciones no-especficas se presentan cuando los exudados
de la planta son qumicamente similares al hidrocarburos, esto incrementa la
densidad y la actividad de los microorganismos y en consecuencia la mineralizacin
del contaminante. Los hidrocarrburos sirven a los microorganismos como fuente de
carbono y energa. El metabolismo microbiano de oxidacin de hidrocarburos se
debe bsicamente a la respiracin aerbica, aunque existen variantes como la
respiracin anaerbica, el cometabolismo, la fermentacin, la deshalogenacin
reductiva y el uso de compuestos inorgnicos como donadores de electrones
(Siciliano y Germida, 1998). Adems se ha detectado que dentro de la raz
incrementa el nmero de bacterias con capacidad para degradar determinados
contaminantes cuando estos se encuentran en la rizsfera de la planta (Siciliano et
al., 2001).
La industria del ramo automotriz libera aceite y otros hidrocarburos en agua residual
de las ciudades mientras que la carencia de agua para riego obliga a la utilizacin del
tipo residual para la produccin de cultivos agrcolas.
A pesar de estos antecedentes sobre la oxidacin de hidrocarburos en el ambiente,

la literatura no reporta la biodegradacin de ARA. En base a esta revisin y a que en
Mxico no existen estrategias precisas para la recuperacin de suelos agrcolas
contaminados con ARA, se plante la integracin de los aspectos ms importantes
que han sido probados de manera independiente en trabajos previos.
17
HIPTESIS
La capacidad natural de los microorganismos nativos del suelo para oxidar ARA se
puede emplear en la biorremediacin de suelos agrcolas contaminados con estos
hidrocarburos, mediante bioestimulacin con diferentes factores.
OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto de diferentes factores sobre la microflora (inicial del aceite y nativa
de suelo) para la induccin de la biorremediacin in vitro en un suelo agrcola
contaminado con aceite residual.
OBJETIVOS ESPECFICOS
1. Evaluar el efecto de soluciones minerales y la oxigenacin sobre la
biodegradacin de aceites en medio lquido.

2. Valorar la integracin de diferentes factores o estrategias para la
META
Desarrollar metodologas y / o estrategias para la biorremediacin de un suelo

agrcola contaminado con ARA.
18
III. MATERIALES Y METODOS
1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido.

Se realizaron muestreos de aceite residual en los siguientes lugares :
1).- Una industria de Monterrey, N. L. Se colect aceite residual industrial (ARI)
2).-Suelo impactado con aceite automotriz (SI), del estacionamiento de la industria.
3).-En un lavadero de automviles, se obtuvo aceite residual automotriz (ARA).
Las muestras se colectaron en frascos de 250 ml estriles con tapn esmerilado, se
transportaron y almacenaron en refrigeracin.
1.1.- Anlisis microbiano preliminar.
Las muestras se colocaron en matraces de 250 ml con 48 ml de la solucin mineral 1
(SM1, cuadro 1) + 2 ml de aceite (industrial o automotriz) o 2 g de SI, se probaron las
3 muestras por separado. Se incubaron de 28 a 30C sin agitacin. Despus de 9
das se sembraron en agar nutritivo, agar EMB, agar papa glucosa y agar mineral y
aceite, ste se prepar con la SM1 y ARA o ARI como nica fuente de carbono, con
la finalidad de comprobar si la microflora acompaante de los aceites y la flora nativa
del SI son capaces de utilizarlos como nica fuente de carbono, una vez que los
micronutrientes y cofactores enzimticos fueron suplidos por la SM1. Se incubaron a
30C durante 48 h. Los aislados se mantuvieron en agar mineral y aceite, se hicieron
observaciones microscpicas con tincin de Gram y para bacterias cido alcohol
resistente (Walker y Colwell, 1974).
1.2.- Captacin de CO2 en lcali bajo diferentes tratamientos.
Se determin la actividad metablica de la microflora inicial de cada aceite ARI, SI y
ARA mediante captacin de CO2 en lcali, en matraces tipo Bartha (Fig. 3), de 250
ml con 45 ml de SM, 5 ml de aceite residual como nica fuente de carbono e inculo,
en el reservorio del matraz se colocaron 5 ml de NaOH 0.1N y se titul cada 48 h con
HCl 0.1N, y se evaluaron las siguientes variantes:
1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de fsforo y potasio
Se probaron dos formulaciones de SM (Cuadro 1) con ARA y ARI, se seleccion la
mejor para comparar las siguientes condiciones de oxigenacin:
19
1.2.1a.- Sin agitacin (sa).
1.2.1b.- Con agitacin (ca).
1.2.1c.- Con H2O2 a 50 ppm. este se agreg cada semana (cp).
Cada una de las condiciones para ARA, ARI y SI, con 5 repeticiones y un control
estril para verificar que el CO2 fue generado por la microflora presente en los
aceites. Se incubaron de 28 a 30C durante 5 semanas (Leal et al., 1996; Lorraine,
1973).
Cuadro 1. Composicin qumica de las soluciones minerales empleadas para

estimular la microflora en los aceites residuales.
REACTIVO g/l mol/l g/l mol/l REACTIVO g/l mol/l
No.1 (SM1) No.2 (SM2) No.3 (SM3)*
K2HPO4 10.0 P = 0.1062 5.0 P = 0.0581 Na2HPO4 4.303 P = 0.03866
KH2PO4 8.0 4.0 KH2PO4 1.179 K = 8.66 x 10-3
MgSO4 6.0 6.0 MgSO4.7H2O 0.225
NH4(NO3)2 15.0 15.0 NH4Cl 1.9
CaCO3 1.0 1.0 CaCl2 0.275
KCl 2.0 K = 0.0268 4.0 K = 0.0537 NH4MoO4 0.250
ZnSO4 0.5 0.5 FeCl3 .6H2O 0.250
CuSO4 0.5 0.5
FeSO4 0.2 0.2
SM = solucin mineral *(Cookson, 1995)
1.3.- Concentracin de grasas y aceites.

Al finalizar el perodo de incubacin se determin la concentracin de grasas y
aceites por el mtodo de Soxhlet (NMX-AA-005-SCFI-2000, 2000).
1.4.- Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados.

Se determinaron antes y despus de la bioestimulacin con la SM1 cp mediante
cromatografa de gases (referencia en pag. 35 y 36).
1.5.- Anlisis estadstico.

Los matraces se distribuyeron bajo un diseo completamente al azar. Los resultados
se sometieron a un anlisis de varianza para establecer las diferencias entre las
condiciones probadas, prueba de Tukey, correlacin y regresin (Walpole y Myers,
1992).
20
Filtro de aire
fibra Aguja para
de vidrio Algodn inyectar NaOH
NaOH Tapn de hule
Fibra de vidrio
Algodn
Filtro de aire
Reservorio de NaOH
Muestra de Aceite con
la solucin mineral y nutrientes
Figura 3. Respirmetro tipo Bartha.
21
2.- Efecto de la solucin mineral 3 (SM3), H2O2 y un microcosmos cerrado en la
2.1.- Propiedades fisicoqumicas del suelo.
Se colectaron muestras de un suelo agrcola sin previa exposicin al contaminante
ARA, en Cadereyta Jimnez N. L. Se determinaron sus caractersticas
fisicoqumicas, contenido de materia orgnica, nitrgeno y fsforo total (NMX-AA-
008-SCFI 2000, 2000; NMX-AA-026-SCFI-2001, 2001; NMX-AA-072-SCFI-2001,
2001).
El suelo se crib con un tamiz de 200 mallas, se mezcl con 20,000 ppm de ARA y
se agregaron 30 ml/kg de tween 80 al 0.2% .
Se utilizaron microcosmos de vidrio rectangulares de 45 x 25 x 25 cm de altura como
el que se ilustra en la Fig. 4.
Figura 4. Modelo de microcosmos para determinar la biodegradacin del aceite

residual automotriz en un suelo agrcola.
En cada microcosmos se colocaron 2 kg de suelo, se probaron cuatro condiciones:

1.- Suelo sin ARA (control relativo).
2.- Suelo con ARA y 50 ml de H2O2 a 50 ppm.
3.- Suelo con ARA.
4.-Suelo con ARA estril (control absoluto).
A los cuatro tratamientos se les agreg 15 ml/kg de SM3 (Cuadro 1) y agua destilada
para completar un volumen de 100 ml/kg de suelo (Kanaly et al., 1997).
22
2.2.- Captacin de CO2 en lcali.
Se determin la actividad metablica de la microflora del suelo, en cada unidad de
prueba se introdujo un vaso de precipitado con 40 ml de NaOH al 0.1N, los
recipientes se abrieron cada 48 h para titular con HCl 0.1N y humedecer con agua
destilada, cada dos semanas se agreg SM, H2O2 a 50 ppm y se mezcl el suelo en
cada unidad de prueba. Se incubaron por ocho semanas entre 30 y 35C (Kanaly et
al.,1997; Leal et al., 1996; Lorraine, 1973).
2.3.- Determinacin de grasas y aceites.

Cada dos semanas se determin la cantidad de grasas y aceites totales mediante el
mtodo de Soxhlet (NMX-AA-005-SCFI-2000, 2000).
2.4.- Anlisis estadstico.

Se emple el diseo experimental y pruebas mencionadas en la seccin anterior.
3.- Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de aire en la

En esta serie de pruebas se emple suelo obtenido de la misma fuente. Se coloc en

porciones de 3 kg en microcosmos rectangulares de vidrio de 45 x 25 x 25 cm de
altura, como el que se ilustra en la Fig. 5.
Orificio para la introduccin de nutrientes y agua

Entrada de aire Salida de aire
suelo
Figura 5. Modelo de microcosmos con flujo de aire, para determinar la
biodegradacin del aceite residual automotriz en un suelo agrcola.
23
El ARA se mezcl a 25,000 ppm con el suelo agrcola para verificar la estrategia a
una concentracin crtica del contaminante. Como agente tensoactivo se emple
tween 80 al 0.2%, 30 ml/kg (Rojas et al., 1997).
En esta etapa se probaron diferentes factores para lograr una biorremediacin
integral, tanto de hidrocarburos aromticos como alifticos que pueden estar
presentes en el aceite residual automotriz. Para inducir el desarrollo de la flora
microbiana inicial del aceite y la microflora nativa del suelo se aplic la SM3 (Cuadro
1) se agregaron 75 ml a cada tratamiento excepto al control relativo, se probaron las
combinaciones que se describen en el cuadro 2. Al suelo del tratamiento 3 se le
agregaron 75 ml de H2O2 a 50 ppm, el suelo del tratamiento 4 se enriqueci con 75
ml de un filtrado de Phanerochaete chrisosporium (fPch), el filtrado se obtuvo
despus de sembrar la cepa en un medio mineral con paja de zacate como nica
fuente de carbono, con la finalidad de inducir la produccin de enzimas ligninasas,
peroxidasas etc. responsables de la degradacin de compuestos aromticos. El
hongo se incub a 30C/12 das en agitacin a 250 rpm. El cultivo fngico se filtr
con membrana milipore 0.2 y el filtrado libre de clulas se agreg al suelo del
tratamiento 4. (La cepa de P. chrysosporium fue proporcionada por el Laboratorio de
Ecologa, Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera del CINVESTAV-IPN).
El suelo del tratamiento 6 se esteriliz y enriqueci con la SM3 y el tween 80,

tambin estriles. A todos los tratamientos se les agreg agua destilada para
mantener al 60% la humedad (Cookson, 1995; Rojas et al., 1997; Spencer et al.,
1996).
24
CUADRO 2. Combinacin de factores para determinar su efecto sobre la
biodegradacin de ARA en un suelo agrcola.
TRATAMIENTOS
Blanco C. Relativo C. absoluto
FACTORES 1 2 3 4 5 6
Solucin mineral 3 + + + + - +
Condicin del suelo NE NE NE NE NE E
f Pch* - - - + - -
Agua - - - - + -
ARA** - + + + + +
H2O2 (50 ppm) - - + - - -
(+) = Se agreg (-)= no se agreg. NE = no esterilizado, E=esterilizado, *fPch = filtrado de Phanerochaete
chrysosporium. ** ARA = aceite residual automotriz. C = control
3.1.- Captacin de CO2 en lcali

Se midi la actividad metablica de la microflora activa:
A cada microcosmos se le adapt una entrada y salida de aire que se burbuje en
un matraz con NaOH al 0.1N. El CO2 capturado se titul cada 48 h con HCl 0.1 N
(Leal-Castillo et al., 1994). Los microcosmos se distribuyeron bajo un diseo
completamente al azar con cinco repeticiones y se incubaron a 30C por doce
semanas con flujo de aire y ocho semanas sin ste. Cada dos semanas se
enriquecieron con SM, H2O2, fPch, y agua destilada, segn el tratamiento (Cookson,
1995; Kanaly et al., 1997; Rojas et al., 1996).
3.2. Determinacin de grasas y aceites.

Se efectu la cuantificacin de las grasas y aceites totales al finalizar el perodo de
prueba, por el mtodo de Soxhlet (NMX-AA-005-SCFI-2000, 2000).
3.3. Anlisis estadstico.

Se realiz un anlisis de varianza, prueba de Tukey y un anlisis bifactorial de las
cantidades de ARA biodegradado por el efecto del flujo de aire sobre la actividad
microbiana del suelo agrcola en los microcosmos (Walpole y Myers, 1992).
25
3.4. Fitorremediacin
Para complementar la estrategia de biorremediacin en los microcosmos con flujo de
aire y reducir al mximo la concentracin del ARA, se aplic fitorremediacin con el
pasto L. multiforum en el suelo parcialmente biorremediado. En vasos de unicel de
14 oz, con 90 g, se colocaron 5 plntulas por vaso del pasto de 8 das de
germinadas. Las que se mantuvieron en el invernadero por 16 semanas entre 28 y
30C.
a) Se determin la concentracin de grasas y aceites totales en el suelo rizosferico
del pasto (Aprill y Sims, 1990; Cunningham et al., 1996; Kanaly et al., 1997).
26
IV. RESULTADOS
1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido.

1.1.- Anlisis microbiano preliminar.
De las muestras de aceite inoculadas en agar aceite se obtuvieron 24 aislados de
hongos bacterias y levaduras.
Para demostrar la amplia capacidad metablica potencial de los microorganismos
presentes en los diferentes aceites, se sembraron en tres medios de cultivo, como se
muestra en el Cuadro 3, donde se resumen las caractersticas coloniales y
microscpicas de los microorganismos aislados a partir de ARI, ARA y SI.
Dominaron levaduras, actinomicetos, hongos y cocobacilos Gram negativo (-),
probablemente enterobacterias.
Cuadro 3. Caractersticas coloniales y microscpicas de microorganismos

en muestras de aceite.
ACEITE RESIDUAL INDUSTRIAL
MEDIO DE CULTIVO MORFOLOGA COLONIAL MORFOLOGA
MICROSCPICA
Agar nutritivo Colonias hmedas
cremosas Cocobacilos Gram( - )
Agar EMB Colonias hmedas
moradas Cocobacilos Gram( - )
Agar papa glucosa Colonias secas polvosas, Levaduras, hifas,
mezcladas con micelio micelio septado con
blanco esporas esfricas
ACEITE RESIDUAL AUTOMOTRIZ
Agar nutritivo - -
Agar EMB Colonias puntiformes Bacilos delgados Gram
( - ) y actinomicetos
Agar papa glucosa - -
SUELO IMPACTADO CON ARA
Agar nutritivo Colonias polvosas Estructuras
ramificadas,
Agar EMB Micelio algodonoso levaduras,
actinomicetos y
Agar papa glucosa grisceo hongos
27
1.2.- Captacin de CO2 en lcali.
1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de fsforo y potasio, SM1 y SM2. En la Fig. 6
se muestra la produccin de CO2 derivada de la biodegradacin de aceite residual,
en 4 unidades de prueba y 2 controles; 3 con la SM1 y 3 con la SM2. Con la SM1 se
registr la mayor produccin de CO2 durante 5 semanas, por la microflora presente
en el ARI, que fue de 7.9 ppm, mientras que el ARA produjo un valor mximo de 5.2
ppm. Con la SM2 el ARI registr una disminucin en la produccin de CO2 con un
mximo de 2.5 ppm, con ARA se detect un patrn semejante al descrito con SM1,
los controles registraron valores no mayores a 0.3 ppm en ambas SM.
Concentracin
9
1 = g/l [ P-18, K-2 ].
8 2 = g/l [ P-9, K-4 ].
ARI 1 ARI = Aceite
7 Residual Industrial.
6 Aceite Residual
ARA 1 Automotriz.
ppm
5 Ctrl.= Control.
ARA 2
4
3
ARI 2
2
Ctrl. 1
1 Ctrl.2
0
1 2 3 4 5
Semanas
Figura 6. Produccin de CO2 por la biodegradacin de aceite residual en medio

mineral, con dos concentraciones de Fsforo y Potasio.
En el Cuadro 4 se presenta el anlisis de varianza de la produccin de CO2 por ARA

y ARI en la SM1 y SM2, se estableci diferencia significativa entre los tratamientos
probados.
28
Cuadro 4. ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de ARA y ARI con
la SM1 y SM2.
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 5 228.131714 45.626343 768.3515 0.000
ERROR 24 1.425171 0.059382
TOTAL 29 229.556885
SM1= Solucin Mineral 1 SM2= Solucin mineral 2
La Fig. 7 muestra la comparacin de medias segn Tukey con 3 valores de medias

diferentes; la flora microbiana activa en ARI fue estimulada por la SM1, con el
mayor valor (A = 7.9), en comparacin con C (2.3) correspondiente a ARI con la
SM2, la microflora de ARA no mostr diferencia significativa al desarrollarse en las
SM1 y SM2 (B = 4.5). Mientras que los valores de CO2 detectados en los controles
fueron semejantes entre s pero diferentes al resto de los tratamientos.
SM1 = Solucin
9 mineral 1 [P-18 g/l K-2
A g/l] SM2 = Solucin
8 mineral 2
[ P-9 g/l K-4 g/l]
7 ARI = Aceite Residual
Industrial. ARA =
6 Aceite Residual
B B Automotriz.
5 Ctrl.= Control
ppm
(Tukey 0.01)
4
C
3
2
D D
1
0
SM1 ARI SM1ARA SM2 ARA SM2 ARI SM1Ctrl SM2 Ctrl
Figura 7. Produccin de CO2 por la microflora acompaante de ARI y ARA con

dos concentraciones de Fsforo y Potasio.
29
Cuadro 5. Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los
valores de CO2 generado por la microflora de dos aceites en dos SM
Origen Solucin mineral 1 Solucin mineral 2
2 2
Aceite Residual Industrial. 0.9982 0.8525
Aceite Residual Automotriz. 0.9363 0.8605
Control. 0.3077 0.5294
El Cuadro 5 presenta los coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de

cada tratamiento probado, los valores sealan que existe correlacin significativa
entre los puntos obtenidos en cada una de las variantes probadas: ARI, ARA y el
Ctrl. con las SM1 y SM2. En base a estos resultados, se seleccion la SM1 para
probar el efecto de la agitacin sobre la produccin de CO2.
El anlisis de regresin se calcula en base a la ecuacin de regresin y = a x + b, en
este caso la variable dependiente fue la produccin de CO2 en funcin de un
parmetro independiente con incremento fijo que fue el tiempo, si 2=0.05 entonces
y no depende nicamente de x sino de otras variables. Cuando todos los puntos
de la regresin coinciden se incrementa y en funcin de x, si es exacta el
coeficiente de determinacin es = 1 muy cercano a este valor y significa que y
depende principalmente de x.
En la Fig. 8 se ilustra el efecto de la agitacin sobre la produccin de CO2 por la flora

microbiana activa en: ARA y ARI empleadas en el experimento anterior, en este
ensayo se incluy un suelo impactado (SI) con ARA. La figura seala que los
mximos valores de CO2 se alcanzaron en los tratamientos incubados con agitacin,
donde la flora microbiana activa en el SI gener 15.3, con el ARI; 14.9, 13 ppm de
CO2 con el ARA, mientras que los tratamientos incubados sin agitacin presentaron
valores menores. En contraste con los controles con y sin agitacin donde se
registraron cantidades mnimas de 0.35 ppm de CO2.
30
18 ARI = Aceite
residual industrial.
16 SI = Suelo
SI ca impactado.
14 ARA = Aceite
residual automotriz.
12 ca = con agitacin.
ARI ca sa= sin agitacin.
ARA ca SM1= Solucin
10
ppm
mineral 1
ctrl. control
8
SI sa
6 ARI sa
4
ARA sa
2
Ctrl. sa Ctrl.ca
0
1 2 3 4 5
Semanas
Figura 8. Efecto de la SM1 con y sin agitacin sobre la produccin de CO2 por
la flora microbiana en aceites.
El anlisis de varianza del Cuadro 6 seala que existe diferencia significativa en la

respuesta de las poblaciones incubadas con y sin agitacin en la SM1.
Cuadro 6. ANAVA de la produccin de CO2 en ARA, ARI y SI, estimulada por la

solucin mineral 1 con y sin agitacin.
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTO 7 1257.224609 179.603516 1317.7896 0.000
ERROR 32 4.361328 0.136292
TOTAL 39 1261.585938
La Fig. 9 muestra la comparacin de medias segn Tukey donde las poblaciones

microbianas activas en el ARI y SI con agitacin, generaron la mxima cantidad de
CO2; media A. La respuesta fue diferente en el ARA con y sin agitacin: medias B y
D respectivamente. El ARI y SI sin agitacin presentaron valores similares; media C.
En los controles se observaron los valores mnimos.
31
SI= suelo
18
impactado ARI=
aceite residual
16 A A industrial ARA=
aceite residual
14 B automotriz. Ctrl.=
control.
12 ca= con agitacin
sa = sin agitacin
10 (Tukey 0.01)
ppm
8 C C
6 D
4
2
E E
0
SIca ARIca ARAca ARIsa SIsa ARAsa Ctrlsa Ctrlca
Figura 9. Efecto de la solucin mineral 1 y la agitacin sobre la produccin de

CO2, por la microflora acompaante de ARA, ARI y SI con la solucin mineral 1.

cada tratamiento, los valores sealan una correlacin significativa entre los puntos
obtenidos en cada una de las muestras probadas: ARI, ARA, SI y el Ctrl. en la SM1
con y sin agitacin.

valores de CO2 generado por la microflora de tres aceites con la solucin
mineral 1 con y sin agitacin.
Origen Sin agitacin Con agitacin
Aceite residual industrial 0.8525 0.9889
Aceite residual automotriz 0.8605 0.9931
Suelo impactado 0.8915 0.9903
Control 0.2262 0.2720
32
25 ARI-CP
ARA-CP
SI-CP
20
Ctrl-CP
ARI-CA
15 ARA-CA
ppm
SI-CA
10 Ctrl-CA
SI = suelo
impactado.
5 ARI = aceite
residual
Industrial.
ARA = aceite
0 residual
1 2 3 4 5 Automotriz.
ca =con agitacin.
Semanas cp = con H2O2
Figura 10. Efecto de dos formas de introduccin de oxgeno y la solucin

mineral 1 en la produccin de CO2 por la microflora de los aceites.
En la Fig.10 se compara el efecto de la SM1 con dos fuentes de oxgeno;con

agitacin (ca) y aplicacin de H2O2 a 50 ppm (cp) en la produccin de CO2 por la flora
microbiana presente en ARA, ARI y SI. Los mayores valores se registraron en la
SM1cp: la flora microbiana presente en el SI con un mximo de 19.2, ARI 17.62, y
ARA 16.16. Las muestras incubadas en la SM1ca mostraron valores menores.
El anlisis de varianza del Cuadro 8 seala diferencia significativa entre los

tratamientos probados.
Cuadro 8. ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de los aceites

estimuladas por la SM1 ca y cp
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTO 7 1947.005859 278.143707 2123.2878 0.000
ERROR 32 4.191895 0.130997
TOTAL 39 1951.197754
SM1 solucin mineral 1. ca= con agitacin. cp = con H2O2
33
La Fig. 11 muestra la comparacin de medias segn Tukey, donde los valores se
agrupan en 6 categoras, con nivel de significancia 0.01. La microflora de los aceites
estimulados por la SM1cp registraron los mayores valores:
A SIcp, B ARIcp, C ARAcp. Las medias D y E correspondieron a SI, ARI y ARA
incubadas en la SM1ca. La media F se asign a ambos controles que presentaron
los menores valores.
20
A SI = suelo
impactado.
18 B ARI = aceite
residual industrial.
16
C C D ARA = aceite
residual
14 E automotriz.
Ca = con
agitacin.
ppm de CO2
12
cp = con H2O2 50
ppm.
10
(Tukey 0.01)
8
2
F F
0
S Icp ARIcp ARAcp S Ica ARIca ARAca Ctrlcp Ctrlca
Figura 11. Efecto de la solucin mineral 1 y dos fuentes de oxigenacin en la

biodegradacin de ARI, ARA y SI.

cada tratamiento probado, los valores sealan que existe correlacin significativa
entre los puntos obtenidos en cada una de las muestras probadas: ARI, ARA, SI, y el
ctrl. en la SM1 y SM2.

valores de CO2 generado por la microflora de los aceites en la SM1.
Tipo de aceite Con agitacin Con H2O2
Aceite Residual Industrial 0.9889 0.9982
Aceite Residual Automotriz 0.9931 0.9963
Suelo Impactado 0.9903 0.9974
Control 0.2720 0.3077
SM1 = solucin mineral 1
34
1.2.2.- Comparacin del efecto de dos soluciones minerales y la oxigenacin
sobre la produccin de CO2 por la microflora activa en ARI, ARA y SI.
El Cuadro 10 muestra diferencia significativa en el anlisis de varianza de la

produccin de CO2 generada por la microflora presente en ARI, con dos SM y
fuentes de oxigenacin. La composicin qumica de las SM y oxigenacin ejercieron
diferente efecto en la microflora inicial de ARI.
Cuadro 10. ANAVA del efecto de dos soluciones minerales y condiciones de

oxigenacin sobre la produccin de CO2 por la microflora del ARI. ___
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 1118.294434 279.573608 1957.8278 0.000
ERROR 20 2.855957 0.142798
TOTAL 24 1121.150391
ARI = Aceite residual Industrial
La comparacin de medias segn Tukey establece diferencia en el efecto de cada

SM y fuente de oxigenacin. Se establecieron cinco grupos, la mayor cantidad de
CO2 se indujo con la SM1 y H2O2 a 5 ppm como fuente de oxgeno (Fig. 12).
20 SM = Solucin
18
A mineral.
sa = sin agitacin. ca
16 B = con agitacin. cp =
con H2O2 a 50ppm.
14 ARI = Aceite residual
ppm de CO2
industrial. Ctrl. =
12 Control. (Tukey
0.01).
10 C
8
6
4 D
2 E
0
SM1cp SM1ca SM1sa SM2sa Ctrl.
Figura 12. Efecto de dos SM y formas de oxigenacin en la biodegradacin de

ARI por su microflora acompaante.
35
El Cuadro 11 muestra el anlisis de varianza con diferencia significativa en el efecto
de las fuentes de oxigenacin sobre la produccin de CO2 generada por la microflora
del ARA con la SM1.
CUADRO 11. ANAVA del efecto de dos SM y fuente de oxgeno sobre la

produccin de CO2 por la flora microbiana acompaante en el ARA. ___
FVL GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 836.533691 209.133423 2639.3792 0.000
ERROR 20 1.584717 0.079236
TOTAL 24 838.118408
SM= solucin mineral. ARA= Aceite residual automotriz
La prueba de medias segn Tukey no seala diferencia en la respuesta de la

poblacin activa en el ARA con la SM1sa y SM2sa, pero diferenca entre SM1cp y
ca. La mxima estimulacin en la produccin de CO2 por la flora microbiana del ARA
se registr con la SM1cp (Fig. 13).
ARA = Aceite
18 residual automotriz.
A SM = Solucin
16 mineral.
14 B sa = sin agitacin.
ca = con agitacin.
ppm de CO2
12 cp = con H2O2 a
50ppm.
10 Ctrl = Control
(Tukey 0.01).
8
6 C C
4
2 D
0
Figura 13. Efecto de dos soluciones minerales y formas de oxigenacin en la

biodegradacin de ARA por su microflora acompaante.
El Cuadro 12 muestra el anlisis de varianza con diferencia significativa en el efecto

de dos SM y la fuente de oxgeno sobre la produccin de CO2 por la poblacin
acompaante del SI.
36
Cuadro 12. ANAVA del efecto de la SM1 y condiciones de oxigenacin sobre la
produccin de CO2 por la microflora acompaante en el SI. ___
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 3 1048.031494 349.343842 3203.3857 0.000
ERROR 16 1.744873 0.109055
TOTAL 19 1049.776367
SM1= solucin mineral 1. SI = Suelo impactado
La comparacin de medias segn Tukey estableci cuatro grupos de valores

diferentes, donde la SM1cp favoreci los mayores valores de CO2. Fig. III.1.2.2c.
25 SI = Suelo
impactado.
20
A SM = Solucin
mineral.
ppm de CO2
B sa = sin agitacin.
ca = con
15 agitacin.
cp = con H2O2 a
50ppm
10 C (Tukey 0.01).
5
D
0
SM1cp SM1ca SM1sa Ctrl.
Figura 14. Efecto de la SM1 y diferentes formas de oxigenacin en la

biodegradacin de ARA en SI por su microflora activa.
1.2.3. Efecto de dos soluciones minerales y la oxigenacin sobre la

biodegradacin de grasas y aceites.
El anlisis de varianza de la biodegradacin en ppm del ARI con dos SM y

condiciones de oxigenacin, present diferencia significativa sobre la biodegradacin
generada por la poblacin activa del ARI (Cuadro 13).
37
Cuadro 13. ANAVA de la biodegradacin de ARI en ppm causada por la
microflora activa con diferente SM y oxigenacin, durante 5 semanas_________
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 2531146.000000 632786.50 28600.5195 0.000
ERROR 20 442.500000 22.125000
TOTAL 24 2531588.500000
SM= solucin mineral. ARI = Aceite residual industrial
La comparacin de medias segn Tukey seala que la respuesta de la poblacin

microbiana activa en ARI fue diferente en cada SM y condiciones de oxigenacin
probadas. La SM1cp estimul la mxima mineralizacin (Fig. 15).
1000 ARI = Aceite

residual industrial
900
A SM = Solucin
mineral.
sa = sin agitacin.
800
ca = con
agitacin.
700 B cp = con H2O2 a
50 ppm.
600 (Tukey 0.01)
ppm
500
C
400
300
200 D
100
0 E
Figura 15. Efecto de dos SM y condiciones de oxigenacin sobre la

biodegradacin de ARI en 5 semanas.
El cuadro 14 muestra el anlisis de varianza con diferencia significativa entre los

valores de biodegradacin con diferentes fuentes de oxgeno y SM generada por la
microflora acompaante en ARA.
38
Cuadro 14. ANAVA de la biodegradacin de ARA en ppm por la microflora
activa con diferente SM y oxigenacin en 5 semanas _______________
FV GL SC CM F P>F
TRAT 4 1372873.250000 343218.312500 88859.1094 0.000
ERROR 20 77.250000 3.862500
TOTAL 24 1372950.500000
ARA = aceite residual automotriz. SM = solucin mineral
La prueba de Tukey muestra el efecto sobre la mineralizacin de ARA, que fue

diferente en cada SM y condiciones de oxigenacin, se encontraron 5 valores de
medias, el mayor correspondi a la SM1cp (Fig. 16).
700 ARA= Aceite

A residual
600 automotriz. SM
= Solucin
B mineral.
500 sa = sin
agitacin.
400 ca = con
ppm
agitacin.
cp = con H2O2
300 C a 50 ppm
(Tukey 0.01).
200 D
100
E
0
Figura 16. Efecto de dos SM y formas de oxigenacin sobre la biodegradacin

de ARA en 5 semanas.
El anlisis de varianza de los resultados de la biodegradacin del ARA en el SI,

expresado en ppm, con diferentes fuentes de oxigenacin y la SM1 mostr diferencia
significativa en la respuesta de la poblacin microbiana activa (Cuadro 15).
39
Cuadro 15. ANAVA de la biodegradacin de ARA en el SI, con diferente
oxigenacin en la SM1, durante 5 semanas. ___
FV GL SC CM F P>F
TRAT 3 1372303.2500 457434.406250 142115.5469 0.000
ERROR 16 51.500000 3.218750
TOTAL 19 1372354.750000
SI = Suelo impactado SM1= Solucin mineral 1
La prueba de Tukey seala que existen cuatro grupos diferentes de valores (Figura
15) la SM1cp gener los mayores valores de biodegradacin de aceite.
800 ARA = Aceite residual

A automotriz.
700 SI = suelo impactado.
B SM = Solucin mineral.
600 sa = sin agitacin.
ca = con agitacin.
500 cp = con H2O2 50ppm.
ppm
C (Tukey 0.01).
400
300
200
D
100
0
SM1cp SM1ca SM1sa Ctrl.
Figura 17. Efecto de la SM1 y condiciones de oxigenacin sobre la

biodegradacin de ARA por la microflora activa en el SI por cinco semanas.
1.3. Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados.

Antes de iniciar el proceso de bioestimulacin de la microflora inicial, se analizaron
los tres aceites. En el Cuadro 16 se muestran los diferentes componentes de ARI,
ARA y SI expresados en mg/l, as como las tcnicas empleadas para cada
determinacin, en dicho cuadro destacan los valores de plomo con 153.7 mg/l y de
zinc que registr 1157.5 mg/l, ambos en el ARA. Despus del proceso de
bioestimulacin con la SM1cp, se analizaron los aceites tratados. En el Cuadro 17 se
presentan los resultados obtenidos, los valores para el plomo y el zinc en el ARA
disminuyeron notablemente, con < 2.0 y < 7.58 mg/l respectivamente.
40
2. Efecto la SM3, H2O2 y un microcosmos cerrado en la biorremediacin de un
suelo agrcola contaminado con ARA.
2.1. Propiedades fisicoqumicas.

Las propiedades fisicoqumicas del suelo empleado en esta prueba se expresan en
el Cuadro 18.
Cuadro 18. Propiedades fisicoqumicas del suelo muestreado

Parmetro Concentracin Interpretacin
Saturacin 40.5 %
pH 7.2 Alcalino
Conductividad elctrica 0.24 Mmhos/cm
Calcio 2.25 Meq/l
Magnesio 2.25 Meq/l
Carbonatos 0.00 Meq/l Libre de sales
Bicarbonatos 2.50 Meq/l
Cloruros 1.00 Meq/l
Sulfatos 1.00 Meq/l
Nitrgeno total 28.59 mg/l
Fsforo total 0.09 mg/l
Textura
Arena 68 %
Limo 22 % Franco arenoso
Arcilla 10 %
Materia orgnica 1.50 % Suelo pobre
2.2. Captacin de CO2 en lcali.

La Fig. 18 muestra el efecto de estimulacin de la SM3 sobre la produccin de CO2
generada por la microflora activa del suelo agrcola contaminado con ARA, durante 8
semanas, con una dinmica de liberacin de CO2 en funcin del tipo de
bioestimulacin aplicada en el tratamiento, la mxima produccin de CO2 se registr
en el suelo enriquecido con SM y H2O2 a 50 ppm con un mximo de 77.6 ppm, al
agregar solo SM la concentracin de CO2 fue de 58 ppm. En el suelo sin ARA con
SM la cantidad fue de 47 ppm. Los resultados en los tres tratamientos fueron
diferentes en comparacin con el control, donde no se indujo la produccin de CO2.
43
90
SM3 = Solucin
mineral 3.
80 ARA = Aceite
SM3 + H2O2 residual
70 automotriz.
H2O2 a 50 ppm.
60 Ctrl.= ARA + SM
ppm de CO2
SM3 estril.
50
40
Sin ARA+SM3
30
20
10
Ctrl.
0
1 2 3 4 5 6 7 8
Semanas
Figura 18. Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biorremediacin de un suelo agrcola

El anlisis de varianza del establece diferencia significativa en la produccin de CO2

por la flora microbiana del suelo con los diferentes tratamientos (Cuadro 19)
Cuadro 19. ANAVA de la produccin de CO2 generada por la microflora de un

suelo agrcola contaminado con ARA bajo diferentes tratamientos.
FV GL SC CM F P>F
TRAT 3 25026.281250 8342.093750 11061.0674 0.000
ERROR 28 21.117188 0.754185
TOTAL 31 25047.398438
ARA = Aceite residual automotriz
Los coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de acuerdo con los

tratamientos, fueron los siguientes: para el control (SM + ARA estril), 0.2450; SM,
0.9853; SM3 + ARA, 0.9774; SM3 + ARA + H2O2 a 50 ppm, 0.9885, estos valores
sugieren una correlacin significativa entre los puntos obtenidos en cada tratamiento.
La prueba de medias seala diferencia en la respuesta a los tratamientos probados,
la SM3 + H2O2 estimularon la mxima produccin de CO2 (Fig. 19).
44
90 SM3 = Solucin
mineral 3.
80 A ARA = Aceite
residual
70 automotriz.
B H2O2 a 50 ppm.
ppm de CO2
60 Ctrl.= ARA + SM3

estril.
50 C (Tukey 0.01).
40
30
20
10 D
0
SM3+H2O2 SM
SM3 SM sin
SM3 sin ARA
ARA Ctrl.
Figura 19. Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biorremediacin de un suelo agrcola


El anlisis de varianza de los valores totales de la biodegradacin del ARA por la
microflora del suelo agrcola estimulada con la SM3 y el H2O2 durante 8 semanas,
mostr diferencia significativa entre los tratamientos probados (cuadro 20).
Cuadro 20. ANAVA de los valores totales de biodegradacin de ARA inducidos

por la SM3 y el H2O2 sobre la microflora de un suelo agrcola.
FV GL SC CM F P>F
TRAT 2 21307350.00 10653675.00 36526.88 0.000
ERROR 12 3500.00 291.6666
TOTAL 14 21310850.00
ARA = Aceite residual automotriz
45
En la prueba de Tukey se encontraron 3 grupos de valores donde la SM3 + H2O2
indujo la mxima biodegradacin de ARA con 2884 ppm (Fig. 20).
A ARA = Aceite
3000 residual
automotriz.
SM3 = Solucin
2500 mineral 3.
H2O2 a 50 ppm.
2000 Ctrl.= Control
estril con ARA y
ppm
SM.
1500 (Tukey 0.01).
1000 B
500
C
0
SM+H2O2
SM3 + H2O2 SM3
SM Ctrl.
Figura 20. Efecto de la SM3 y el H2O2 en la biodegradacin de ARA por la

microflora de un suelo agrcola
46
3. Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de aire en la
3.1. Captacin de CO2 en lcali

En la Fig. 21 se ilustra el efecto de la SM3, H2O2 y fPch sobre la produccin de CO2
con flujo de aire, por la microflora nativa de un suelo agrcola contaminado con ARA.
Se prob un control relativo sin ARA, enriquecido con la SM3, que estimul la
mineralizacin de la materia orgnica al detectarse aumento en la produccin de
CO2, y alcanz un mximo de 44 ppm de CO2. En el suelo contaminado con ARA y
adicionado con la SM3, se increment la concentracin de CO2 con respecto al
tiempo que lleg a 77.1 ppm. Cuando al suelo agrcola contaminado con ARA y
enriquecido con la SM3 se agreg H2O2 como fuente adicional de oxgeno, la
produccin de CO2 por la microflora nativa fue de 94.3 ppm.
120 SM3 = solucin

mineral 3.
fPch = filtrado de
100 Phanerochaete
SM3+fPch chrysosporium. ARA
= aceite residual
80 automotriz
SM3
ppm de CO2
H2O2 a 50 ppm
60 SM3+H2O2
Sin ARA+SM3
40
agua
20
SM3 estril
0
2
1 24 6
3 84 10
5 12
6
Semanas
Semanas
Figura 21. Efecto de diversos factores y un flujo de aire sobre la microflora de

un suelo agrcola contaminado con ARA.
47
El suelo agrcola tratado con el ARA y enriquecido con la SM3 y el fPch, gener la
mayor produccin de CO2 con 105.3 ppm.
En el suelo contaminado con ARA y regado solo con agua la produccin de CO2 fue
de 19.4 ppm.
Finalmente, en el tratamiento 6 se muestra el suelo contaminado con ARA y

enriquecido con la SM3 en condiciones de esterilidad, en este caso la adicin de la
SM3 no tuvo efecto sobre la produccin de CO2.
80 T4
T3 D SM = solucin
70 C mineral 3.
fPch = filtrado de
60 T2 T4 Phanerochaete
B chrysosporium. ARA
= Aceite residual
ppm de CO2
50
T1 automotriz.
A T2 H2O2 a 50 ppm.
40 (Tukey 0.01).
30
T5
20 E
T6
10 F
0
SM sin
1 ARA SM
2 SM+H2O2
3 SM+fPch
4 agua
5 SM 6estril
Tratamientos probados
Figura 22. Efecto de diversos factores y un flujo de aire en la biorremediacin

de un suelo agrcola contaminado con ARA.
La Fig. 22 muestra la comparacin de medias segn Tukey y los valores promedio,

de la produccin de CO2 por la microflora nativa de un suelo agrcola contaminado
con ARA, bajo diferentes factores representados en 6 tratamientos. Cada uno ejerci
un efecto diferente entre s sobre la flora microbiana nativa del suelo, la mxima
produccin de CO2 se alcanz en el suelo contaminado con ARA y tratado con SM3
+ fPch.
48
En la Fig. 23 se compar el efecto de diferentes factores y el flujo de aire sobre la
mxima biorremediacin de un suelo agrcola contaminado con ARA, en diferentes
perodos de tiempo. En las primeras 5 columnas se muestra el efecto del flujo de aire
continuo por 12 semanas (En el tratamiento 1 no se le agreg ARA, por lo tanto no
aparece en la figura).
En el tratamiento 2, suelo contaminado con ARA y enriquecido con SM3, se

degradaron 3900 ppm, en comparacin con las 1290 ppm cuando no se aplic el
flujo de aire.
T2 SM3
20000
T4
T3 SM3+H2O2
18000 T3
T4 SM3+fPch
ppm de ARA biodegradado
16000
T5 agua
14000
T4 T6 SM3
12000
T2 estril
10000
SM3 = solucin
T3
8000 mineral 3.
H2O2 a 50 ppm.
6000 fPch = filtrado de
T3 T2 T3 T4 T5 Phanerochaete
4000 T2 chrysosporium.
T4 T5
Pasto = Lolium
2000 T5 T2 T6
T5 T6 multiforum.
0 T6 T6
12 con aire 8 sin aire 16 con pasto 36 TOTAL
Tiempo en semanas
Semanas
Figura 23 Efecto de diferentes factores sobre la mxima biorremediacin de un

suelo agrcola contaminado con aceite residual automotriz.
El tratamiento 3 con H2O2 y la SM3 gener un incremento en la cantidad de ARA

degradado, alcanzando 8200 ppm con flujo de aire y 4810 sin su aplicacin.
49
En el suelo contaminado con ARA, enriquecido con la SM3 y el fPch (trat. 4) se
produjo un impacto positivo sobre la biodegradacin del ARA; con flujo de aire fue de
12080 ppm, comparado con la biodegradacin obtenida sin l, de 1810 ppm.
En el tratamiento 5, se muestra el suelo contaminado con ARA y adicionado con

agua, con aireacin se detectaron 1310 ppm de ARA biodegradado y 830 sin aire.
En el suelo del tratamiento 6 enriquecido con la SM3 en condiciones de esterilidad,

se comprueba que el la biodegradacin del ARA fue exclusivamente dependiente de
la actividad microbiana heterotrfica de los organismos activos, la cual, al eliminarse,
hizo imposible la biorremediacin del suelo.
Esto se demuestra con los valores de biodegradacin de 25 ppm con flujo de aire y
de solo 20 ppm en su ausencia. Si se comparan todos los tratamientos, en base a las
ppm de ARA degradado los mejores son el 4, 3 y 2. Siendo el tratamiento 4 ms
efectivo que el 3 y el 2.
3.3. Fitorremediacin.
Despus de mantener los suelos con y sin flujo de aire, del impacto de cada uno de
los factores que se agregaron en cada tratamiento y con la finalidad de reducir al
mximo la concentracin de ARA; en este suelo se colocaron plntulas del pasto L.
multiforum. Los resultados se muestran en la Fig. 23 donde se puede apreciar la
similitud entre las cantidades de ARA degradado en el suelo de los tratamientos 2, 3
y 4; con los valores: 4697, 5027 y 5075 ppm, respectivamente.
La Fig. 23 tambin ilustra el total de biodegradacin de ARA por accin de la

microflora activa en el suelo agrcola, donde los mayores valores fueron de 18965
ppm para el tratamiento 4, 18037 ppm para el tratamiento 3 y de 10157 ppm para el
2, en un tiempo total de 36 semanas.
50
En el Cuadro 21 se presentan los resultados del anlisis bifactorial del efecto de la
SM3, H2O2, fPch con y sin flujo de aire sobre la biorremediacin del suelo agrcola
contaminado con ARA y las diferencias altamente significativas entre las estrategias
empleadas () para estimular la actividad biodegradadora de la microflora con y sin
flujo de aire.
Adems, se sealan las diferencias significativas () entre los tratamientos utilizados,
en el caso del tratamiento 3 (c); con H2O2 + SM3 y 4 (d); suelo tratado con la SM3 +
fPch. Esto sugiere que la combinacin de factores en los tratamientos 3 y 4,
estimularon la biorremediacin del suelo agrcola contaminado con ARA.
CUADRO 21. Anlisis bifactorial del efecto del flujo de aire sobre la
biodegradacin de ARA en un suelo agrcola con diferentes factores
fisicoqumicos.
Condicin F P Tratamiento X E E
2 3 4 5
Con aire 1470.95 0.0000 SM3 SM3+H2O2 SM3+fPch H2O
12 semanas 23.32 34.18 44.06 6.4
0.666 0.188 0.0748 0.471
b c d e
Sin aire 110.849 0.0000 6.198 17.629 15.556 3.1964
8 semanas 0.151 1.067 0.7388 0.2693
b c d e

Datos procesados de la biodegradacin de ARA con y sin flujo de aire. SM3 = solucin mineral
3. H2O2 a 5 ppm. fPch = filtrado de Phanerochaete chrysosporium. H2O =suelo con agua.
51
V. DISCUSIN
Los microorganismos observados en el agar aceite se desarrollaron muy lentamente,

esto sugiere dependencia entre las diversas poblaciones microbianas para degradar
compuestos orgnicos complejos, ya que en su forma natural conviven en
asociacin, donde los productos metablicos de unas especies pueden ser
aprovechados por otras, creando una interdependencia nutricional en los consorcios
microbianos (Kanaly et al., 2000).
Los microorganismos desarrollados en el agar aceite fueron morfolgicamente

similares a los encontrados en los medios selectivos, entre los aislados a partir de
ARI, ARA y SI, se detectaron levaduras, hongos y actinomicetos, nativos de suelo,
pero en este caso sobrevivieron a pesar de los aceites residuales. En estudios
realizados en Brasil se aislaron de diesel (Bento y Gaylarde, 2001), tambin se
encontraron cocobacilos Gram negativos, enterobacterias provenientes de la
actividad humana, este grupo se detect en investigaciones en agua salada y
sedimento como en la Baha Chesapeake, EUA donde se report la oxidacin de
petrleo (Austin et al., 1977). En un derrame experimental de petrleo en la costa de
Delaware, EUA, se observ un evidente incremento de bacterias Gram negativas al
enriquecer el rea con una solucin mineral que equilibr el desbalance nutricional
en ese sitio (Macnaughton et al., 1999). El desarrollo de estas poblaciones en
medios selectivos sugiere que tienen una amplia capacidad metablica y tolerancia a
los agentes antimicrobianos, propiedad esencial de los microorganismos oxidantes
de hidrocarburos.
La literatura seala que las coliformes son capaces de oxidar hidrocarburos, y que
existe correlacin entre esta propiedad bioqumica y la tolerancia a diversos agentes
antimicrobianos; se utilizaron medios selectivos para determinar el tipo de
52
microorganismos en el ARA, ARI y SI, mtodo de investigacin recomendada para
este propsito (Austin et al., 1977; Macnaughton et al., 1999; Martnez, 1997).
La produccin de CO2 en medio lquido fue afectada por diferentes factores; en

primer lugar el origen del aceite residual, que influy en la carga microbiana inicial.
En el caso del ARI; que al momento de su colecta circulaba por la planta industrial
mezclado con agua, con exposicin a la materia orgnica desechada por los
trabajadores de la empresa, lo que probablemente aument la diversidad de su flora
microbiana inicial y la concentracin de oxgeno. Comparado con las condiciones en
que se encontraba el ARA, en un depsito esttico, sin agua, carente de materia
orgnica, anxico, sin posibilidades de aumentar su carga microbiana inicial. Bento y
Gaylarde (2001) reportaron la importancia del agua para iniciar el desarrollo
microbiano en tanques con diesel. El SI empleado como fuente de inculo
permaneci almacenado el tiempo suficiente para inducir la proliferacin de
microorganismos oxidantes de ARA. Swannell y col. (1996) enfatizaron la capacidad
de los microorganismos para oxidar componentes del petrleo despus de perodos
cortos de exposicin.
Otro factor clave en este proceso fue la relacin de nutrientes en la SM de prueba;

los resultados muestran una evidente diferencia en la produccin de CO2 y en la
biodegradacin de las fuentes de carbono del aceite residual, al probar dos
concentraciones de P-K para SM1 y SM2 con ARI, ARA y SI. La concentracin de
nutrientes en la SM1 estimul la mxima biodegradacin de las fuentes de carbono
del aceite residual, este resultado no coincide con las recomendaciones de Adams y
colaboradores (1999) que sugieren una relacin 100-10-1 de la frmula N-P-K para
inducir la biodegradacin de combustibles, lubricantes y petrleo crudo. Mientras que
Margesin y Schinner (2001) probaron una relacin de 15-15-15 en N-P-K y
obtuvieron una reduccin del 70% en la concentracin de diesel en suelo. Lo anterior
sugiere que la relacin adecuada de nutrientes depender del tipo de contaminante
que se pretende eliminar y de un anlisis preliminar para garantizar la eficiencia del
proceso. Margesin y Schinner (2001) sealan que una concentracin y relacin
53
equilibrada de nutrientes inorgnicos esenciales, induce la actividad biodegradadora
de la diversidad microbiana presente.
En el suelo contaminado con ARA e irrigado solo con agua, la falta de N y P limitaron
la actividad microbiana nativa para la biodegradacin del ARA a 19.4 ppm. En un
suelo contaminado con diesel se logr un 90% de biodegradacin en 45 das al
agregar P y N mineral (Gallego et al., 2001). En el suelo contaminado con ARA y
enriquecido con la SM3 en condiciones de esterilidad, fue evidente que la
biodegradacin del ARA depende de la microflora activa del suelo, el enriquecimiento
con la SM3 no tuvo efecto sobre la produccin de CO2, pues se elimin la flora nativa
del suelo, lo que sugiere que en efecto la mineralizacin de ARA depende de los
microorganismos activos en el suelo. Durante un proceso de biorremediacin, se
demostr el aumento de la poblacin microbiana de un suelo al tratarlo con [14C]
Benzo [a] pireno y petrleo crudo (Kanali et al., 1997).
Otro factor determinante para la biodegradacin de hidrocarburos fue la fuente de

oxgeno donde el H2O2 fue una de las mejores alternativas recomendada tanto en
suelo, como para acuferos (Backer et al.,1994; Wilson y Brown, 1989; Zappi et al.,
1997). El efecto observado se atribuyo a que el H2O2 incrementa el oxgeno
disponible en un ambiente acufero saturado, puesto que el H2O2 se disocia en mol
de oxgeno disuelto/mol de H2O2 : H2O2 + H2O --- 0.5 O2 + 2H2O (Hulling et al.,
1990; Morgan y Watkinson, 1992). En esta investigacin la aplicacin de H2O2 a 50
ppm indujo un efecto positivo, ya que como una fuente de oxgeno para el
biotratamiento in situ tiene las siguientes ventajas: es barato, no persistente,
estable, sin problemas de almacenaje, de fcil aplicacin y no contamina (Britton,
1985).
La baja concentracin de materia orgnica en el suelo agrcola favoreci la

biodegradacin, de acuerdo con los reportes existentes, los suelos ricos en materia
orgnica requieren mayores volmenes de H2O2 que al reaccionar con sta, reduce
54
su concentracin e incrementa el costo de la biorremediacin (Aggaewal et al., 1991;
Barcelona y Holm, 1991; Zappi et al., 2000).
El tratamiento con SM1cp, en el ARA utilizado en esta investigacin, redujo

notablemente las cantidades de Pb y Zn. Este fenmeno se ha observado en otros
estudios donde se reporta la existencia de microorganismos tolerantes a metales
pesados, con la capacidad de captar Pb+ en las protenas y en los polisacridos de
su pared celular (Kjaergaard et al., 2000; Richards et al., 2002). Se cree que esto
depende de la sntesis de enzimas y fitoquelatinas (Phitochelatins): pptidos ricos
en cistena que se unen a metales pesados, estos pptidos se sintetizan en plantas y
levaduras (Sauge-Merle et al., 2003). Esto pudo deberse a que las levaduras
existentes en el ARA se activaron al contacto con la SM1cp para captar los metales
pesados. Los microorganismos activos, adems de su tolerancia al Pb y Zn
demostraron capacidad para biodegradar ARA y la produccin de CO2 derivada de la
misma, esto sugiere una doble bioestimulacin de la flora microbiana. Se reporta la
capacidad de cultivos especficos y de la microflora del suelo para fijar cadmio tanto
en la membrana como intracelularmente y con capacidad para oxidar 500-g ml-1 de
cido 2-4 diclorofenoxiactico (Roane et al., 2001). Se prob la capacidad de los
microorganismos de suelo para captar plomo y oxidar glucosa marcada con C14
(Konopka et al, 1999).
Entre los factores evaluados en esta investigacin, la aplicacin del fPch fue clave en
suelo contaminado con ARA, este hongo est reconocido por su capacidad de
hidrolizar cloroaromticos contaminantes del ambiente. Esta capacidad bioqumica
se atribuye a un sistema multienzimtico productor de lignina-peroxidasas,
peroxidasas manganeso-dependiente, y un mecanismo generador de H2O2 (Michael,
1999; Reddy, 1993; Yadav et al., 1995). A pesar de que el ARA empleado como
contaminante contena cantidades bajas de aromticos, la aplicacin del fPch
estimul la produccin de CO2 y la cantidad de ARA biodegradado. En el suelo
contaminado con ARA, enriquecido con la SM3 y el fPch se indujo un efecto positivo
sobre la biodegradacin del ARA; con flujo de aire fue de 12080 ppm, posiblemente
55
la actividad enzimtica del fPch se estimul por el flujo de aire, en comparacin con
la biodegradacin observada sin aire, que fue de 1810 ppm. Es probable que las
enzimas sintetizadas por el sistema multienzimtico y el mecanismo productor de
H2O2 estimularon la liberacin de O2 para inducir la biodegradacin del ARA. Esto
pudo deberse tambin a la participacin de las enzimas del citocromo P450, que
constituyen una super familia de haem-thiolato monooxigenasas, algunas de las
cuales catalizan la hidroxilacin de contaminantes orgnicos, (Masaphy et al.,1996;
Mehmood et al., 1997; Topal et al., 1996).
El suelo sembrado con del pasto L. multiflorum, despus de la aplicacin de los

diferentes factores mostr similitud en las cantidades de ARA biodegradado en los
tratamientos 2, 3 y 4; con los valores: 4697, 5027 y 5075 ppm, respectivamente
durante 16 semanas de incubacin. Los tres tratamientos coinciden en que pueden
contener los remanentes de la SM que se agreg en las etapas previas del
experimento. En trabajos anteriores se estableci la importancia del equilibrio mineral
para estimular la fitorremediacin (Linn y Mendelssohn, 1998). Otro factor crtico en
este trabajo fue que se emple un suelo no esterilizado, donde la flora microbiana
nativa y activa de la rizsfera fue la responsable de llevar a cabo el proceso de
fitorremediacin del suelo contaminado con el ARA. Esto ha sido ampliamente
estudiado en suelos contaminados con hidrocarburos poliaromticos (Siciliano et al.,
2003).
En el suelo de los tratamientos 5 y 6 se muestran valores inferiores en la

biodegradacin del ARA, el primero se humedeci solo con agua en la etapa previa
del experimento y mostr 2625 ppm de ARA biodegradado, es posible que los
remanentes de la SM hayan sido suficientes para estimular la actividad de la
microflora capaz de degradar ARA en la rizsfera. El suelo del tratamiento 6 se
mantuvo en esterilidad durante la investigacin, esto prueba que la flora microbiana
activa del suelo es indispensable para la biodegradacin (Cunningham et al., 1996;
Ferrera-Cerrato, 1997; Linn y Mendelssohn, 1998; Siciliano y Germida, 1998).
56
Falta mucho por hacer e investigar en cuanto a la degradacin de aceites residuales,
como perspectivas de continuacin podemos citar las siguientes:
1.- Probar si se eliminan los metales pesados en suelo al igual que en medio lquido.
a) Cmo se lleva a cabo el proceso de eliminacin o transformacin.
b) Quienes son los microorganismos responsables de dicho proceso.
2.- Qu enzimas estn presentes y activas en el jugo enzimtico y cuales actan en
la biodegradacin del aceite.
3.- Que parte de la mezcla de constituyentes del aceite es eliminada por la microflora
de la rizsfera de la planta.
4.- Qu tipo de plantas adems del pasto pueden utilizarse para fitorremediar
suelos contaminados con ARA.
57
VI. CONCLUSIONES
El ambiente natural tiene la capacidad de amortiguar el efecto contaminante de

ARA para mantener el equilibrio mediante la microflora nativa del suelo.
Los consorcios microbianos del suelo pueden ser inducidos para utilizar ARA
como fuente de carbono y biodegradarlo.
En este estudio se demostr que tanto la microflora inicial de los aceites

residuales como la flora nativa del suelo agrcola, fueron estimuladas para su
biodegradacin, as como en la biorremediacin de un suelo agrcola
contaminado con ARA y que dicha capacidad fue potenciada con la aplicacin
oportuna de las diferentes combinaciones de factores que facilitaron este
proceso.
Este es uno de los primeros trabajos realizados en Mxico en relacin con la

biorremediacin de un suelo agrcola contaminado con ARA, lo cual abre
grandes expectativas para actuar y remediar procesos contaminantes causados
por estos productos.
58
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33: 1767-1776.
Zappi, M.; D. Gunnison; J. Pennington; M. Cullinane; C. Teeter; J. Brannon

and T. Myers. (1997). Technical approach for in situ biotreatment research:
bench scale experiments; WES Report No.IRRP-93-3; USAE Waterways
Experiment Station: Vicksburg, MS.
Zappi, M.; K. White and H. Hwang. (2002). The fate of hydrogen peroxide as
an oxygen source for bioremediation activities within saturated aquifer
systems. Journal of the Air & Waste Management Association, 50: 1818-1830.
70
ANEXO I
ANLISIS ESTADSTICO DE LA PRODUCCIN DE CO2 EXPRESADA EN PPM
EN LOS DIFERENTES TRATAMIENTOS
Efecto de la solucin mineral No.1 sin agitacin (SM1sa), en diferentes aceites
Aceite residual industrial (ARI)

1 2 3 4 5 suma media
4.6 4.7 4.5 4.8 4.9 23.5 4.7
4.9 5.7 6.1 4.5 6.3 27.5 5.5
5.9 6.8 5 6.7 6.6 31 6.2
6.8 7.1 7.5 6.7 6.9 35 7
7.7 7.5 7.6 8.2 8.5 39.5 7.9
Aceite residual automotriz (ARA)
3.4 2.9 3.5 2.8 3.4 16 3.2
3.9 3.5 4 3.7 3.9 19 3.8
4.5 4.9 5 4.8 4.3 23.5 4.7
4.9 5.1 5.0 4.8 5.2 25 5
5.4 4.9 4.9 5.5 5.3 26 5.2
Suelo Impactado (SI)
4.64 4.8 4.7 4.6 4.66 23 4.68
5.3 5.6 5.8 5.9 6 28.6 5.72
6 6.6 6.3 6.2 6.5 31.6 6.32
7.1 7.2 6.9 7.5 7.4 36.1 7.22
7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 38.5 7.7
Control absoluto
0.314 0.3 0.36 0.29 0.26 1.524 0.3048
0.32 0.34 0.36 0.36 0.38 1.76 0.352
0.29 0.32 0.33 0.28 0.34 1.56 0.312
0.33 0.35 0.29 0.35 0.33 1.65 0.33
0.36 0.37 0.34 0.35 0.34 1.76 0.352
ANLISIS DE VARIANZA
FV GL SC CM F P>F
Tratamientos 3 185.060608 61.686871 850.3809 0.000
Error 16 1.160645 0.072540
Total 19 186.221252
C V = 5.09%
71
Tabla de Medias
Tratamiento rep Media Nivel de significancia 0.01 = 0.99
1 5 7.900 A Tukey = 0.6251
2 5 5.200 B Nivel de significancia 0.05 = 0.95
3 5 0.352 C Tukey = 0.8100
4 5 7.700 A
valores de tablas (0.05), (0.01)= 4.05, 5.19
Los tratamientos 1 y 4 son semejantes

DMS = 0.4976
Tratamientos
1 = ARI
2 = ARA
3 = Ctrl
4 = SI
REGRESIN ARI
TABLA DE DATOS
Y X1
4.700 1.000
5.500 2.000
6.200 3.000
7.000 4.000
7.900 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55
MATRIZ INVERSA DE X'X

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
31.300000
101.800000
VECTOR DE COEFICIENTES DE REGRESION (B)

3.890000
0.790000
72
ANALISIS DE VARIANZA
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 6.241000 6.241000 1702.0909 0.000
ERROR 3 0.011000 0.003667
TOTAL 4 6.252000
ARI COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.9982
MATRIZ DE VARIANZAS Y COVARIANZAS DE B

0.004033 -0.001100
-0.001100 0.000367
VALORES DE t CALCULADA Y NIVELES DE SIGNIFICANCIA

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 61.251615 0.000050
B1 41.256404 0.000080
INTERVALOS DE CONFIANZA PARA LOS COEFICIENTES DE

REGRESIN AL 95% DE CONFIANZA
Coeficiente B L.I. L.S.
B0 3.890000 3.691345 4.088655
B1 0.790000 0.730103 0.849897

B0 3.890000 3.519047 4.260953

B1 0.790000 0.678153 0.901847
73
T A B L A D E D A T O S ARA
---------------------
Y X1
---------------------
3.200 1.000
3.800 2.000
4.700 3.000
5.000 4.000
5.200 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
21.900000
70.900000

2.820000
0.520000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 2.704000 2.704000 44.0870 0.006
ERROR 3 0.184000 0.061333
TOTAL 4 2.888000
ARA COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.9363

0.067467 -0.018400
-0.018400 0.006133

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 10.856866 0.001360
B1 6.639801 0.005830
74
B0 2.820000 2.007522 3.632478
B1 0.520000 0.275029 0.764971

B0 2.820000 1.302838 4.337162
B1 0.520000 0.062559 0.977441
SI
TABLA DE DATOS
Y X 1____
4.680 1.000
5.720 2.000
6.320 3.000
7.220 4.000
7.700 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
SI
MATRIZ X' Y
31.640000 102.460000

4.066000
0.754000
75
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 5.685160 5.685160 217.2119 0.001

ERROR 3 0.078520 0.026173
TOTAL 4 5.763680
SI COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.9864

0.028791 -0.007852
-0.007852 0.002617

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 23.963018 0.000210
B1 14.738111 0.000610

B0 4.066000 3.535247 4.596753
B1 0.754000 0.593972 0.914028

B0 4.066000 3.074910 5.057090
B1 0.754000 0.455175 1.052825
Ctrl.
TABLA DE DATOS
Y X1
---------------------
0.300 1.000
0.350 2.000
0.310 3.000
0.330 4.000
0.350 5.000
76
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
1.640000
5.000000

0.304000
0.008000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.000640 0.000640 1.3333 0.333
ERROR 3 0.001440 0.000480
TOTAL 4 0.002080
Ctrl. COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.3077

0.000528 -0.000144
-0.000144 0.000048

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 13.229902 0.000800
B1 1.154701 0.332600

B0 0.304000 0.232124 0.375876
B1 0.008000 -0.013671 0.029671
77
B0 0.304000 0.169784 0.438216
B1 0.008000 -0.032468 0.048468
Efecto de la solucin mineral No.2 sin agitacin (SM2sa), sobre la flora

microbiana presente en diferentes tipos de aceites
ARI
1.6 1.5 1.4 1.8 1.2 7.5 1.5
1.8 1.95 1.77 2.3 2.5 10.32 2.064
2.18 2.3 2.4 2.1 2.3 11.28 2.256
2.4 2.1 2.32 2.3 2.28 11.4 2.28
2.3 2.6 2.7 2.4 2.5 12.5 2.5
ARA
2.89 3.25 3.38 3.2 2.99 15.71 3.142
3.9 4.4 4.4 4.3 4.2 21.2 4.24
3.9 5.0 4.8 4.2 4.7 22.6 4.52
4.9 4.5 5.0 5.0 4.6 24 4.8
4.8 5.2 4.7 5.3 5.0 25 5.0
CTRL
0.29 0.28 0.33 0.32 0.34 1.56 0.312
0.28 0.29 0.32 0.34 0.33 1.56 0.312
0.27 0.30 0.33 0.35 0.32 1.57 0.314
0.3 0.27 0.28 0.34 0.29 1.48 0.296
0.31 0.26 0.29 0.35 0.30 1.51 0.302
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 2 55.254028 27.627014 910.0980 0.000
ERROR 12 0.364273 0.030356
TOTAL 14 55.618301
C.V. = 6.70 %
TABLA DE MEDIAS
TRATA. REP. MEDIA
1 5 2.500000 ARI
2 5 5.000000 ARA
3 5 0.302000 CTRL
78
RESULTADOS DE LA COMPARACION DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
2 5.0000 A
1 2.5000 B
3 0.3020 C
NIVEL DE SIGNIFICANCIA = 0.05

VALORES DE DMS
dms( 2 1 ) = 0.2401
dms( 2 3 ) = 0.2401
dms( 1 2 ) = 0.2401
dms( 1 3 ) = 0.2401
dms( 3 2 ) = 0.2401
dms( 3 1 ) = 0.2401

VALORES DE DMS
dms( 2 1 ) = 0.3366
dms( 2 3 ) = 0.3366
dms( 1 2 ) = 0.3366
dms( 1 3 ) = 0.3366
dms( 3 2 ) = 0.3366
dms( 3 1 ) = 0.3366
NIVEL DE SIGNIFICANCIA = 0.05 0.01
TUKEY = 0.2938 0.3927

VALORES DE TABLAS (0.05), (0.01) = 3.77, 5.04
REGRESIN ARI
TABLA DE DATOS
Y X1
1.500 1.000
2.064 2.000
2.256 3.000
2.280 4.000
2.500 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55
79
1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
10.600000
34.016000

1.455200
0.221600
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.491066 0.491066 17.3386 0.023
ERROR 3 0.084966 0.028322
TOTAL 4 0.576032
0.031154 -0.008497
-0.008497 0.002832
VALORES DE t CALCULADA Y NIVELES DE SIGNIFICANCIA OBSERVADOS

Coeficiente tc p
B0 8.244482 0.003030
B1 4.163962 0.023380
INTERVALOS DE CONFIANZA PARA LOS COEFICIENTES DE REGRESION

AL 95% DE CONFIANZA

B0 1.455200 0.903089 2.007311
B1 0.221600 0.055132 0.388068

AL 99% DE CONFIANZA
80
B0 1.455200 0.424229 2.486171
B1 0.221600 -0.089250 0.532450
ARA
TABLA DE DATOS
Y X1
3.142 1.000
4.240 2.000
4.520 3.000
4.800 4.000
5.000 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55
1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
21.702000
69.382000

3.057600
0.427600
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 1.828418 1.828418 18.5072 0.021
ERROR 3 0.296386 0.098795
TOTAL 4 2.124803
81
0.108675 -0.029639
-0.029639 0.009880

Coeficiente tc p
B0 9.275053 0.002140
B1 4.301994 0.021300

AL 95% DE CONFIANZA
B0 3.057600 2.026428 4.088772
B1 0.427600 0.116690 0.738510

AL 99% DE CONFIANZA
B0 3.057600 1.132065 4.983135
B1 0.427600 -0.152971 1.008171
Ctrl.
TABLA DE DATOS
Y X1
0.312 1.000
0.312 2.000
0.314 3.000
0.296 4.000
0.302 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
82
MATRIZ X'Y
1.536000
4.572000

0.318000
-0.003600
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.000130 0.000130 3.3750 0.163
ERROR 3 0.000115 0.000038
TOTAL 4 0.000245
COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.5294

0.000042 -0.000012
-0.000012 0.000004

Coeficiente tc p
B0 48.928868 0.000070
B1 -1.837117 0.163110

AL 95% DE CONFIANZA
B0 0.318000 0.297670 0.338330
B1 -0.003600 -0.009730 0.002530

AL 99% DE CONFIANZA
B0 0.318000 0.280038 0.355962
B1 -0.003600 -0.015046 0.007846
83
Efecto de la solucin mineral No.1 con agitacin (SM1ca), en diferentes aceites
ARI
1 2 3 4 5 Suma media
8.12 7.93 8.3 7.4 7.23 38.98 7.796
10 11.3 10.4 8.99 9.8 50.49 10.098
11.5 11.5 12.5 12 10 57.5 11.5
12.5 13.4 12.88 12.9 13 64.68 12.936
14.2 15.7 15.5 14.6 14.5 74.5 14.9
ARA
5.9 6.8 6.3 6.82 6.8 32.62 7.84
7.6 7.8 7.5 8.1 8.2 39 7.84
9.5 8.4 9.9 9.8 9.1 46.7 9.34
10.6 11.7 11.6 11.8 11.8 57.5 11.5
13.3 13.5 12.9 13 12.5 65.2 13.04
SI
5.9 6.6 6.8 5.9 6.5 31.7 6.34
9.2 8.7 8.6 8.9 9.2 44.6 8.92
10.6 10.7 9.9 10.8 10.6 52.6 10.52
13.2 14 13.5 13.8 14 68.5 13.7
14.9 15.6 15.9 14.8 15.4 17.6 15.32
Ctrl.
0.314 0.3 0.36 0.29 0.26 1.524 0.3048
0.32 0.34 0.36 0.36 0.38 1.76 0.352
0.29 0.32 0.33 0.28 0.34 1.56 0.312
0.33 0.35 0.29 0.35 0.33 1.65 0.33
0.36 0.37 0.34 0.35 0.34 1.76 0.352
Anlisis de Varianza
FV GL SC CM F P>F
Tratamientos 3 756.8813 252.2937 1261.1033 0.000
Error 16 3.2009 0.2000
Total 19 760.0822
C.V. = 4.10%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 15.3200 A
1 14.9000 A
2 13.0400 B
4 0.3520 C
84
TUKEY = 1.0380 0.8100
REGRESIN ARI
TABLA DE DATOS
ppm de CO2 Y X 1 semanas
7.790 1.000
10.090 2.000
11.500 3.000
12.930 4.000
14.400 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55
1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
56.710000
186.190000

6.524000
1.606000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 25.792360 25.792360 266.8911 0.000
ERROR 3 0.289920 0.096640
TOTAL 4 26.082280

0.106304 -0.028992
-0.028992 0.009664
85
OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 20.009634 0.000300
B1 16.336803 0.000470

REGRESION AL 95% DE CONFIANZA
B0 6.524000 5.504138 7.543862
B1 1.606000 1.298500 1.913500

B0 6.524000 4.619583 8.428417
B1 1.606000 1.031797 2.180203
ARA
TABLA DE DATOS
Y X1
6.520 1.000
7.840 2.000
9.340 3.000
11.500 4.000
13.040 5.000
-----------------------------------------------
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
48.240000
161.420000
86
4.638000
1.670000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 27.889000 27.889000 429.7668 0.000
ERROR 3 0.194680 0.064893
TOTAL 4 28.083680

0.071383 -0.019468
-0.019468 0.006489

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 17.359386 0.000410
B1 20.730818 0.000280

B0 4.638000 3.802276 5.473724

B1 1.670000 1.418020 1.921980

B0 4.638000 3.077429 6.198571
B1 1.670000 1.199470 2.140530
87
SI T A B L A D E D A T O S
Y X1
6.340 1.000
8.920 2.000
10.520 3.000
13.700 4.000
15.320 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
54.800000
187.140000

4.138000
2.274000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 51.710760 51.710760 306.5613 0.000
ERROR 3 0.506040 0.168680
TOTAL 4 52.216800
SI COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.9903

0.185548 -0.050604
-0.050604 0.016868

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 9.606437 0.001930
B1 17.508892 0.000400
88
REGRESION AL 95% DE CONFIANZA
B0 4.138000 2.790605 5.485395
B1 2.274000 1.867745 2.680255

B0 4.138000 1.621973 6.654027
B1 2.274000 1.515389 3.032611
Ctrl. T A B L A D E D A T O S
Y X1
0.305 1.000
0.352 2.000
0.312 3.000
0.330 4.000
0.352 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
1.650800
5.024800

0.308440
0.007240
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.000524 0.000524 1.1210 0.369
ERROR 3 0.001403 0.000468
TOTAL 4 0.001927
89
Ctrl. COEFICIENTE DE DETERMINACION = 0.2720

0.000514 -0.000140
-0.000140 0.000047

Coeficiente tc p
B0 13.600254 0.000740
B1 1.058793 0.368730

AL 95% DE CONFIANZA
B0 0.308440 0.237500 0.379380

B1 0.007240 -0.014149 0.028629

AL 99% DE CONFIANZA
B0 0.308440 0.175972 0.440908

B1 0.007240 -0.032701 0.047181
Efecto de la solucin mineral No.1 con H2O2 (SM1cp), en diferentes tipos de

aceite
ARI
1 2 3 4 5 SUMA MEDIA
10.38 10.5 10.4 10.6 10.06 51.94 10.388
12.9 12.8 12.3 12.57 12.35 62.92 12.584
13.4 13.9 13.5 13.7 13.6 68.1 13.62
15.89 15.76 16 15.55 15.5 78.7 15.74
17.65 17.8 17.9 17.25 17.5 88.1 17.62
ARA
9.8 10.4 9.5 9.8 10.2 49.7 9.94
10.7 10.5 10.2 10.6 10.5 52.5 10.5
12 11.8 12.2 11.9 11.8 59.7 11.94
13.7 14.5 13.8 14.4 14 70.4 14.08
15.9 16.3 16.2 15.8 16.6 80.8 16.16
90
SI
9.9 10.6 10.6 10.7 10.5 52.3 10.46
12.99 12.5 13.4 12.8 12.9 64.59 12.918
14.99 15.5 15.6 15.2 15.3 76.5 15.3
16.4 16.8 16.7 16.5 16.7 83.1 16.62
19.5 18.9 19.3 19.0 19.5 96.2 19.24
Ctrl.
0.29 0.32 0.32 0.34 0.28 1.54 0.308
0.199 0.2 0.25 0.21 0.26 1.119 0.2238
0.35 0.29 0.36 0.29 0.4 1.69 0.3338
0.25 0.3 0.39 0.27 0.5 1.71 0.342
0.48 0.56 0.51 0.5 0.49 2.54 0.508
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 3 1128.669189 376.223053 6072.9443 0.000

ERROR 16 0.991211 0.061951
TOTAL 19 1129.660400
C.V. = 1.86%
TABLA DE MEDIAS
TRATA. REP. MEDIA
1 5 17.619999
2 5 16.160000
3 5 19.240000
4 5 0.508000
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 19.2400 A
1 17.6200 B
2 16.1600 C
4 0.5080 D

TUKEY = 0.4508 0.5777
91
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 19.2400 A
1 17.6200 B
2 16.1600 C
4 0.5080 D
REGRESIN ARI
TABLA DE DATOS
Y X1
10.388 1.000
12.584 2.000
13.620 3.000
15.740 4.000
17.620 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
69.952000
227.476000

8.704400
1.762000
________________A N A L I S I S D E V A R I A N Z A______________
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 31.046440 31.046440 331.3397 0.000
ERROR 3 0.281099 0.093700
TOTAL 4 31.327539
COEFICIENTE DE DETERMINACIN ARI = 0.9910

0.103070 -0.028110
-0.028110 0.009370
92
_____________________OBSERVADOS_______________________
Coeficiente tc p
B0 27.112734 0.000160
B1 18.202738 0.000370

-
B0 8.704400 7.700172 9.708628
B1 1.762000 1.459214 2.064786

B0 8.704400 6.829178 10.579622
B1 1.762000 1.196599 2.327401
ARA
TABLA DE DATOS
Y X1
9.940 1.000
10.500 2.000
11.940 3.000
14.080 4.000
16.160 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
62.620000
203.880000
93
7.718000 1.602000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 25.664040 25.664040 70.4875 0.003
ERROR 3 1.092280 0.364093
TOTAL 4 26.756320
COEFICIENTE DE DETERMINACION ARA= 0.9592

0.400503 -0.109228
-0.109228 0.036409

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 12.195569 0.000990
B1 8.395685 0.002870

Coeficiente B L.I. L.S.___ _
B0 7.718000 5.738436 9.697564
B1 1.602000 1.005139 2.198861
--------------------------------------------------------------------------------------------------

B0 7.718000 4.021507 11.414493
B1 1.602000 0.487465 2.716535
SI
TABLA DE DATOS
Y X1
10.460 1.000
12.910 2.000
15.300 3.000
16.620 4.000
19.240 5.000
94
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
74.530000
244.860000

8.525000
2.127000
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 45.241290 45.241290 351.4069 0.000
ERROR 3 0.386230 0.128743
TOTAL 4 45.627520____________________________
COEFICIENTE DE DETERMINACION SI= 0.9915

0.141618 -0.038623
-0.038623 0.012874

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 22.653519 0.000230
B1 18.745849 0.000340

B0 8.525000 7.347867 9.702133
B1 2.127000 1.772081 2.481919

B0 8.525000 6.326908 10.723092
95
B1 2.127000 1.464250 2.789750
Ctrl.
TABLA DE DATOS
Y X1
0.308 1.000
0.224 2.000
0.338 3.000
0.342 4.000
0.508 5.000
MATRIZ X'X
5 15
15 55

1.100000 -0.300000
-0.300000 0.100000
MATRIZ X'Y
1.719800
5.677600

0.188500
0.051820
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.026853 0.026853 5.0900 0.109
ERROR 3 0.015827 0.005276
TOTAL 4 0.042680__________________________
COEFICIENTE DE DETERMINACION Ctrl.= 0.6292

0.005803 -0.001583
-0.001583 0.000528

OBSERVADOS
Coeficiente tc p
B0 2.474444 0.088770
B1 2.256109 0.108600
96
REGRESIN AL 95% DE CONFIANZA_____________________________
B0 0.188500 -0.049787 0.426787
B1 0.051820 -0.020026 0.123666

____Coeficiente B L.I. L.S.__________
B0 0.188500 -0.256460 0.633460
B1 0.051820 -0.082340 0.185980
Efecto de diferentes soluciones minerales y condiciones de oxigenacin en

la produccin de CO2 por la flora microbiana presente en al ARI (Aceite
Residual Industrial).
SM1sa
4.6 4.7 4.5 4.8 4.9 23.5 4.7
4.9 5.7 6.1 4.5 6.3 27.5 5.5
5.9 6.8 5 6.7 6.6 31 6.2
6.8 7.1 7.5 6.7 6.9 35 7
7.7 7.5 7.6 8.2 8.5 39.5 7.9
SM2 sa
1.6 1.5 1.4 1.8 1.2 7.5 1.5
1.8 1.95 1.77 2.3 2.5 10.32 2.064
2.18 2.3 2.4 2.1 2.3 11.28 2.256
2.4 2.1 2.32 2.3 2.28 11.4 2.28
2.3 2.6 2.7 2.4 2.5 12.5 2.5
SM1ca
1 2 3 4 5 Suma media
8.12 7.93 8.3 7.4 7.23 38.98 7.796
10 11.3 10.4 8.99 9.8 50.49 10.098
11.5 11.5 12.5 12 10 57.5 11.5
12.5 13.4 12.88 12.9 13 64.68 12.936
14.2 15.7 15.5 14.6 14.5 74.5 14.9
SM1 cp
10.38 10.5 10.4 10.6 10.06 51.94 10.388
12.9 12.8 12.3 12.57 12.35 62.92 12.584
13.4 13.9 13.5 13.7 13.6 68.1 13.62
15.89 15.76 16 15.55 15.5 78.7 15.74
17.65 17.8 17.9 17.25 17.5 88.1 17.62
97
Ctrl.
0.29 0.32 0.32 0.34 0.28 1.54 0.308
0.199 0.2 0.25 0.21 0.26 1.119 0.2238
0.35 0.29 0.36 0.29 0.4 1.69 0.3338
0.25 0.3 0.39 0.27 0.5 1.71 0.342
0.48 0.56 0.51 0.5 0.49 2.54 0.508
A N A L I S I S D E V A R I A N Z A____________________________________
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 1118.294434 279.573608 1957.8278 0.000
ERROR 20 2.855957 0.142798
TOTAL 24 1121.150391
C.V. = 4.35%
TABLA DE MEDIAS
TRATA. REP. MEDIA
1 5 7.900000
2 5 2.500000
3 5 14.900000
4 5 17.590000
5 5 0.508000______
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
4 17.5200 A
3 14.9000 B
1 7.9000 C
2 2.5000 D
5 0.5080 E________________________
NIVEL DE SIGNIFICANCIA = 0.05 =0.01

TUKEY = 0.7149 =0.8940
REGRESIN
SM1sa
Efecto de diferentes medios de cultivo y condiciones de oxigenacin en la
produccin de CO2 por la flora microbiana presente en al ARA
98
SM1sa
3.4 2.9 3.5 2.8 3.4 16 3.2
3.9 3.5 4 3.7 3.9 19 3.8
4.5 4.9 5 4.8 4.3 23.5 4.7
4.9 5.1 5.0 4.8 5.2 25 5
5.4 4.9 4.9 5.5 5.3 26 5.2
SM2sa
2.89 3.25 3.38 3.2 2.99 15.71 3.142

3.9 4.4 4.4 4.3 4.2 21.2 4.24
3.9 5.0 4.8 4.2 4.7 22.6 4.52
4.9 4.5 5.0 5.0 4.6 24 4.8
4.8 5.2 4.7 5.3 5.0 25 5.0
SM1ca
5.9 6.8 6.3 6.82 6.8 32.62 7.84
7.6 7.8 7.5 8.1 8.2 39 7.84
9.5 8.4 9.9 9.8 9.1 46.7 9.34
10.6 11.7 11.6 11.8 11.8 57.5 11.5
13.3 13.5 12.9 13 12.5 65.2 13.04
SM1cp
9.8 10.4 9.5 9.8 10.2 49.7 9.94
10.7 10.5 10.2 10.6 10.5 52.5 10.5
12 11.8 12.2 11.9 11.8 59.7 11.94
13.7 14.5 13.8 14.4 14 70.4 14.08
15.9 16.3 16.2 15.8 16.6 80.8 16.16
Ctrl.
0.29 0.32 0.32 0.34 0.28 1.54 0.308
0.199 0.2 0.25 0.21 0.26 1.119 0.2238
0.35 0.29 0.36 0.29 0.4 1.69 0.3338
0.25 0.3 0.39 0.27 0.5 1.71 0.342
0.48 0.56 0.51 0.5 0.49 2.54 0.508
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 836.533691 209.133423 2639.3792 0.000
ERROR 20 1.584717 0.079236
TOTAL 24 838.118408
C.V. = 3.54 %
99
TABLA DE MEDIAS
TRATA. REP. MEDIA
1 5 5.200000
2 5 5.000000
3 5 13.039999
4 5 16.160000
5 5 0.352000

TRATAMIENTO MEDIA
4 16.1600 A
3 13.0400 B
1 5.2000 C
2 5.0000 C
5 0.3520 D

TRATAMIENTO MEDIA
4 16.1600 A
3 13.0400 B
1 5.2000 C
2 5.0000 C
5 0.3520 D

TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
4 16.1600 A
3 13.0400 B
1 5.2000 C
2 5.0000 C
5 0.3520 D

TUKEY = 0.5325 = 0.6659
Efecto de diferentes medios de cultivo y condiciones de oxigenacin en la

produccin de CO2 por la flora microbiana presente en al SI (Suelo Impactado).
100
SM1sa
4.64 4.8 4.7 4.6 4.66 23 4.68
5.3 5.6 5.8 5.9 6 28.6 5.72
6 6.6 6.3 6.2 6.5 31.6 6.32
7.1 7.2 6.9 7.5 7.4 36.1 7.22
7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 38.5 7.7
SM1ca
5.9 6.6 6.8 5.9 6.5 31.7 6.34
9.2 8.7 8.6 8.9 9.2 44.6 8.92
10.6 10.7 9.9 10.8 10.6 52.6 10.52
13.2 14 13.5 13.8 14 68.5 13.7
14.9 15.6 15.9 14.8 15.4 17.6 15.32
SM1cp
9.9 10.6 10.6 10.7 10.5 52.3 10.46
12.99 12.5 13.4 12.8 12.9 64.59 12.918
14.99 15.5 15.6 15.2 15.3 76.5 15.3
16.4 16.8 16.7 16.5 16.7 83.1 16.62
19.5 18.9 19.3 19.0 19.5 96.2 19.24
Ctrl.
0.314 0.3 0.36 0.29 0.26 1.524 0.3048
0.32 0.34 0.36 0.36 0.38 1.76 0.352
0.29 0.32 0.33 0.28 0.34 1.56 0.312
0.33 0.35 0.29 0.35 0.33 1.65 0.33
0.36 0.37 0.34 0.35 0.34 1.76 0.352
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 3 1048.031494 349.343842 3203.3857 0.000
ERROR 16 1.744873 0.109055
TOTAL 19 1049.776367
C.V. = 3.11%
TABLA DE MEDIAS
TRATA. REP. MEDIA
1 5 07.700000
2 5 15.240000
3 5 19.240000
4 5 0.352000
101
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 19.2400 A
2 15.3200 B
1 07.7000 C
4 0.3520 D

TUKEY = 0.5981 =0.7665
Degradacin en ppm de diferentes aceites residuales en dos soluciones

minerales y diferentes condiciones de oxigenacin en 5 semanas
VARIABLE = degradaARA_____________________________________________
TRATA.
1 140.0000 146.0000 139.0000 138.0000 135.0000 SM2
2 288.0000 287.0000 288.0000 289.0000 287.0000 SM1sa
3 528.0000 528.0000 526.0000 527.0000 526.0000 SM1ca
4 630.0000 631.0000 629.0000 632.0000 630.0000 SM1cp
5 0.8700 0.8800 0.8900 0.8700 0.8900 CTRL
FV GL SC CM F P>F
TRAT 4 1372873.250000 343218.312500 88859.1094 0.000
ERROR 20 77.250000 3.862500
TOTAL 24 1372950.500000
C.V. = 0.62%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
4 630.4000 A
3 527.0000 B
2 287.8000 C
1 139.6000 D
5 0.8800 E

TUKEY = 3.7178 =4.6495
102
Degradacin en ppm de diferentes aceites residuales en 2 soluciones
minerales y condiciones de oxigenacin, por la flora microbiana presente en
al ARI en 5 semanas
TABLA DE DATOS
VARIABLE = degAI Aceite Industrial_____________________________________
TRATA.
1 200.0000 195.0000 197.0000 195.0000 198.0000
2 400.0000 396.0000 397.0000 398.0000 399.0000
3 663.0000 669.0000 670.0000 671.0000 688.0000
4 880.0000 885.0000 889.0000 890.0000 887.0000
5 0.9000 0.8800 0.8900 0.8700 0.880000
__________________A N A L I S I S D E V A R I A N Z A__________________
FV GL SC CM F P>F
TRATAMIENTOS 4 2531146.000000 632786.5000 28600.5195 0.000
ERROR 20 442.500000 22.1250
TOTAL 24 2531588.500000
C.V. = 1.09%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
4 886.2000 A
3 668.2000 B
2 398.0000 C
1 197.0000 D
5 0.8840 E
NIVEL DE SIGNIFICANCIA = 0.05 = 0.01

TUKEY = 4.8322 =6.0431
TABLA DE DATOS
Degradacin en ppm de diferentes aceites residuales en dos soluciones minerales
y condiciones de aireacin en 5 semanas
VARIABLE = degradaSI suelo impactado________________________________

TRATA.
1 348.0000 346.0000 345.0000 347.0000 349.0000 SM1sa
2 576.0000 575.0000 579.0000 576.0000 578.0000 SM1ca
3 680.0000 687.0000 686.0000 685.0000 686.0000 SM1cp
4 0.8600 0.8500 0.8800 0.8700 0.8900 CTRL
103
FV GL SC CM F P>F
TRAT 3 1372303.250000 457434.406250 142115.5469 0.000
ERROR 16 51.500000 3.218750
TOTAL 19 1372354.750000
C.V. = 0.45%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 684.7900 A
2 576.7999 B
1 347.0000 C
4 0.8700 D

TUKEY = 3.2894 =4.1699
Produccin de CO2 generada por un suelo agrcola contaminado con aceite

residual, tratado con la SM3 y H2O2 a 50 ppm, durante 8 semanas
TABLA DE DATOS: VARIABLE = CO2 SUELO________________________

TRATA.___________________________________________________________
1 46.0000 44.0000 43.7000 44.9000 45.0000 46.0000
47.0000 46.0000
2 57.0000 58.9000 59.5000 58.6000 58.0000 58.2000
58.0000 58.6000
3 77.0000 76.8000 77.9000 78.6000 79.0000 75.8000
78.4000 77.6000
4 1.8000 1.9000 1.5000 1.4000 1.2000 1.3000
1.5000 1.9000_______________________________________________
FV GL SC CM F P>F__ _
TRATAMIENTOS 3 25026.281250 8342.093750 11061.0674 0.000
ERROR 28 21.117188 0.754185
TOTAL 31 25047.398438________________________________
C.V. = 1.90%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 77.6300 A
2 58.3500 B
1 45.3200 C
4 1.5600 D
104
TUKEY = 1.1851
VALORES DE TABLAS (0.05), (0.01)= 3.86, 4.84
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
3 77.6300 A
2 58.3500 B
1 45.3200 C
4 1.5600 D

TUKEY = 1.4850
VALORES DE TABLAS (0.05), (0.01)= 3.86, 4.84
REGRESIN
X sm sm+ARA sm+ARA+H2O2 Ctrl
1 20.4 25.23 25.32 1.47
2 23.03 30.06 35.16 1.53
3 25.03 33.52 40.13 1.63
4 30.01 35.11 48.06 1.52
5 35 40.75 55.08 1.56
6 40 47.16 68.03 1.56
7 43.15 52.22 70.93 1.57
8 45.32 58.28 77.61 1.58
sm
TABLA DE DATOS
Y X1
20.400 1.000
23.030 2.000
25.030 3.000
30.010 4.000
35.000 5.000
40.000 6.000
43.150 7.000
45.320 8.000
MATRIZ X'X
8 36
36 204
105
0.607143 -0.107143
-0.107143 0.023810
MATRIZ X'Y
261.940000
1341.200000

15.335000
3.868333
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 628.488117 628.488117 400.8116 0.000
ERROR 6 9.408233 1.568039
TOTAL 7 637.896350______________________________
COEFICIENTE DE DETERMINACION SM = 0.9853

0.952024 -0.168004
-0.168004 0.037334

Coeficiente tc p
B0 15.716648 0.000080
B1 20.020279 0.000050

AL 95% DE CONFIANZA
B0 15.335000 12.947421 17.722579
B1 3.868333 3.395522 4.341145

AL 99% DE CONFIANZA
B0 15.335000 11.718017 18.951983
B1 3.868333 3.152064 4.584603
106
SM+ARA
TABLA DE DATOS
Y X1
25.300 1.000
30.600 2.000
33.520 3.000
35.110 4.000
40.750 5.000
47.160 6.000
52.220 7.000
58.280 8.000
MATRIZ X'X
8 36
36 204

0.607143 -0.107143
-0.107143 0.023810
MATRIZ X'Y
321.350000
1640.860000

19.298929
4.637738
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 903.361815 903.361815 259.7251 0.000
ERROR 6 20.868873 3.478145
TOTAL 7 924.230687___________________________________
COEFICIENTE DE DETERMINACION SM +ARA = 0.9774
107
2.111731 -0.372658
-0.372658 0.082813

Coeficiente tc p
B0 13.280483 0.000110
B1 16.115990 0.000070

AL 95% DE CONFIANZA
B0 19.298929 15.742998 22.854859
B1 4.637738 3.933559 5.341917

AL 99% DE CONFIANZA
B0 19.298929 13.911992 24.685866
B1 4.637738 3.570966 5.704511
SM+ARA+H2O2
TABLA DE DATOS
Y X1
25.320 1.000
35.160 2.000
40.130 3.000
48.060 4.000
55.080 5.000
68.030 6.000
70.930 7.000
77.610 8.000
MATRIZ X'X
8 36
36 204

0.607143 -0.107143
-0.107143 0.023810
MATRIZ X'Y
420.320000
2209.240000
108
18.490000
7.566667
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 2404.686667 2404.686667 566.4009 0.000
ERROR 6 25.473333 4.245556
TOTAL 7 2430.160000
COEFICIENTE DE DETERMINACION SM+ARA+H2O2= 0.9895

2.577659 -0.454881
-0.454881 0.101085

Coeficiente tc p
B0 11.516598 0.000160
B1 23.799179 0.000040

AL 95% DE CONFIANZA
B0 18.490000 14.561320 22.418680
B1 7.566667 6.788672 8.344661

AL 99% DE CONFIANZA
B0 18.490000 12.538379 24.441621
B1 7.566667 6.388070 8.745263
SM+ARA+estril
TABLA DE DATOS
Y X1
1.470 1.000
1.530 2.000
1.630 3.000
1.520 4.000
1.560 5.000
1.560 6.000
1.570 7.000
1.580 8.000
109
MATRIZ X'X
8 36
36 204

0.607143 -0.107143
-0.107143 0.023810
MATRIZ X'Y
12.420000
56.290000

1.509643
0.009524
FV GL SC CM F P>F
REGRESION 1 0.003810 0.003810 1.9469 0.211
ERROR 6 0.011740 0.001957
TOTAL 7 0.015550____________________________
COEFICIENTE DE DETERMINACIN SM+ARA ESTRIL= 0.2450

0.001188 -0.000210
-0.000210 0.000047

Coeficiente tc p
B0 43.798732 0.000020
B1 1.395302 0.211180

AL 95% DE CONFIANZA
B0 1.509643 1.425300 1.593985
B1 0.009524 -0.007179 0.026226

AL 99% DE CONFIANZA
B0 1.509643 1.381871 1.637415
B1 0.009524 -0.015779 0.034826
110
Biodegradacin de ARA en un suelo agrcola, bajo diferentes factores
fisicoqumicos, expresada en ppm, durante 8 semanas.
TABLA DE DATOS
VARIABLE = degsuelo_____________________________________
TRATA._________________________________________________
1 800.0000 821.0000 816.0000 818.0000 815.0000
2 2800.0000 2873.0000 2856.0000 2863.0000 2852.0000
3 18.0000 17.7000 19.0000 19.6000 18.0000
A N A L I S I S D E V A R I A N Z A____________________________
FV GL SC CM F P>F_
TRATAMIENTOS 2 21307350.0 10653675.00 36526.8867 0.000
ERROR 12 3500.0 291.666656
TOTAL 14 21310850.000 ______
C.V. = 1.39%
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
2 2848.0000 A
1 814.0000 B
3 18.4200 C
TUKEY = 28.7938
TABLA DE MEDIAS
TRATAMIENTO MEDIA
2 2848.0000 A
1 814.0000 B
3 18.4200 C
Nivel de Significancia = 0.01. Valores de tablas (0.05), (0.01) =3.77, 5.04

TUKEY = 38.4936
111
No 6 = SUELO CON ARA + SM TODO ESTRIL
REPETICIONES MEDIAS TOTALES

5.1 5.5 5.3 5.7 5.8 5.48 5.55
5.2 5.5 5.5 5.7 5.8 5.54 5.7
5.3 5.6 5.6 5.7 5.7 5.58 5.8
5.3 5.6 5.7 5.6 5.6 5.56 5.84
5.4 5.7 5.6 5.6 5.6 5.58 5.93
5.4 5.5 5.6 5.6 5.7 5.56 5.95
MONITOREO DURANTE 2 SEMANAS 5.55 34.77 TOTAL
5.5 5.6 5.7 5.6 5.7 5.62
5.6 5.6 5.7 5.7 5.7 5.66
5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.7
5.6 5.7 5.8 5.9 5.9 5.78
5.5 5.6 5.7 5.8 5.8 5.68
5.6 5.7 5.8 5.9 6 5.8
4semanas 5.706667
5.7 5.8 5.9 5.9 6 5.86
5.7 5.8 5.9 5.9 6 5.86
5.8 5.8 5.9 6 6 5.9
5.8 5.7 5.8 5.9 6 5.84
5.6 5.6 5.6 5.6 5.6 5.6
5.7 5.8 5.7 5.8 5.8 5.76
6 semanas 5.803333
5.6 5.7 5.8 5.9 6 5.8
6 5.9 5.9 6 6 5.96
5.9 5.8 5.7 5.9 5.8 5.82
6.1 5.4 5.6 5.7 5.8 5.72
5.9 5.8 5.7 5.8 5.9 5.82
5.9 5.9 5.9 5.9 6 5.92
8 semanas 5.84
6 6 6 6 5.9 5.98
5.8 5.9 5.9 6 5.8 5.88
6.1 6 5.9 5.8 6 5.96
5.7 5.8 5.9 6 6.1 5.9
6 6 5.9 6.1 6 6
5.8 5.9 6 5.9 5.9 5.9
10 semanas 5.936667
5.9 5.7 5.9 6 6 5.9
6 6 6 6.1 6.1 6.04
6.2 6.2 5.9 5.8 5.7 5.96
5.9 5.8 5.7 6.2 6.1 5.94
5.8 6.1 5.8 5.9 6 5.92
5.7 6.2 5.9 5.8 6.2 5.96
12 semanas 5.953333
117
PRODUCCIN DE CO2 GENERADA POR LA MICROFLORA DE UN SUELO AGRCOLA
CONTAMINADO CON ARA Y TRATADO CON SM3 Y H2O2 A 50 PPM
Anlisis de regresin
a X b Y SM3 a X b Y SM3+ARA
3.8 1 15.3 19.1 19.1 4.63 1 19.29 23.92 23.92
3.8 2 15.3 22.9 22.9 4.63 2 19.29 28.55 29.55
3.8 3 15.3 26.7 26.7 4.63 3 19.29 33.18 33.18
3.8 4 15.3 30.5 30.5 4.63 4 19.29 37.81 37.81
3.8 5 15.3 34.3 34.3 4.63 5 19.29 42.44 42.44
3.8 6 15.3 38.1 38.1 4.63 6 19.29 47.07 47.07
3.8 7 15.3 41.9 41.9 4.63 7 19.29 51.7 51.7
3.8 8 15.3 45.7 45.7 4.63 8 19.29 56.33 56.33
a X b Y SM3+ARA+H2O2 a X b Y Ctrl
7.56 1 18.49 26.05 26.05 0 1 1.5 1.5 1.5
7.56 2 18.49 33.61 33.61 0 2 1.5 1.5 1.5
7.56 3 18.49 41.17 41.17 0 3 1.5 1.5 1.5
7.56 4 18.49 48.73 48.73 0 4 1.5 1.5 1.5
7.56 5 18.49 56.29 56.29 0 5 1.5 1.5 1.5
7.56 6 18.49 63.85 63.85 0 6 1.5 1.5 1.5
7.56 7 18.49 71.41 71.41 0 7 1.5 1.5 1.5
7.56 8 18.49 78.97 78.97 0 8 1.5 1.5 1.5
X S S+A S+A+P Ctrl Coeficientes de determinacin

1 19.1 23.92 26.05 1.5 S = 0.9853
2 22.9 29.55 33.61 1.5 S +A= 0.9774
3 26.7 33.18 41.17 1.5 S+A+P= 0.9895
4 30.5 37.81 48.73 1.5 S+A ESTRIL= 0.2450
5 34.3 42.44 56.29 1.5
6 38.1 47.07 63.85 1.5
7 41.9 51.7 71.41 1.5
8 45.7 56.33 78.97 1.5
Lineas de regresin de la produccin de CO2 generada por la microflora de un

suelo agrcola contaminado con ARA y tratado con solucin mineral y perxido
90
80
70
60
S
ppm
50
40 S+A
30 S+A+P
20
Ctrl
10
0
0 2 4 6 8 10
Semanas
S=Solucin mineral 3. A= ARA.aceite residual automotrz. P= H2O2 50ppm

Ctrl.=S+A todo estril
125

Maribel Leal Castillo

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Universidad de Colima

Postgrado Interinstitucional de Ciencias Agrcolas y Forestales

BIORREMEDIACION DE UN SUELO AGRCOLA CONTAMINADO

Tesis que para obtener el grado de

MARIBEL LEAL CASTILLO

Colima, Col. Agosto del 2003

3.- Degradacin de xenobiticos. 12

III. MATERIALES Y METODOS 19

1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido. 19

1.1.- Anlisis microbiano preliminar. 19

1.2.- Captacin de CO2 en lcali bajo diferentes tratamientos. 19

1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de Fsforo y Potasio. 19

1.2.1a.- Con agitacin. 20

1.2.1c.- Con H2O2. 20

1.3.- Concentracin de grasas y aceites. 20

1.4.- Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados. 20

1.5.- Anlisis estadstico. 20

2.- Efecto de la solucin mineral 3, H2O2 y un microcosmos cerrado 22

2.2.- Captacin de CO2 en lcali. 23

2.3.- Determinacin de grasas y aceites 23

2.4.- Anlisis estadstico 23

3.- Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de 23

3.2.- Determinacin de grasas y aceites. 25

3.3.- Anlisis estadstico. 25

1.- Biodegradacin de aceite residual en medio lquido 27

1.1.- Anlisis microbiano preliminar 27

1.2.- Captacin de CO2 en lcali 28

1.2.1.- Efecto de dos concentraciones de fsforo y potasio 28

1.2.2.- Comparacin del efecto de dos soluciones minerales y la 35

1.3.- Medicin de voltiles orgnicos y metales pesados 40

2.- Efecto de la SM3, H2O2 y un microcosmos cerrado en la 43

2.1.- Propiedades fisicoqumicas del suelo. 43

2.2.- Captacin de CO2 en lcali. 43

2.3.- Determinacin de grasas y aceites. 45

3.- Efecto de diferentes factores y un microcosmos con flujo de aire 47

3.1.- Captacin de CO2 en lcali. 47

3.2.- Determinacin de grasas y aceites. 49

1.- Composicin qumica de las soluciones minerales empleadas para 20

2.- Combinacin de factores para determinar su efecto sobre la 25

3.- Caractersticas coloniales y microscpicas de microorganismos 27

4.- ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de ARA y ARI 29

5.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los valores ...30

6.- ANAVA de la produccin de CO2 en ARA, ARI y SI, estimulada por la 31

7.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los valores 32

8.- ANAVA de la produccin de CO2 por la microflora de los aceites 33

9.- Coeficientes de determinacin del anlisis de regresin de los 34

10.- ANAVA del efecto de dos soluciones minerales y condiciones 35

11.- ANAVA del efecto de dos soluciones minerales y condiciones................36

12.- ANAVA del efecto de la SM1 y condiciones de oxigenacin sobre 37

13.- ANAVA de la biodegradacin de ARI en ppm causada por la 38

14.- . ANAVA de la biodegradacin de ARA en ppm por la microflora 39

16.- Componentes qumico de los aceites antes de la bioestimulacin 41

17.- Componentes qumicos de los aceites despus de la bioestimulacin 42

18.- Propiedades fisicoqumicas del suelo muestreado. 43

19.- ANAVA de la produccin de CO2 generada por la microflora de un 44

20.- ANAVA de los valores totales de biodegradacin de ARA inducidos 45

FIGURA TTULO PGINA

2.- Degradacin de Xenobiticos. Reacciones de la Fase II. 13

3.- Respirmetro tipo Bartha. 21

4.- Modelo de microcosmos para determinar la biodegradacin del aceite....22

5.- Modelo de microcosmos con flujo de aire, para determinar la 23

6.- Produccin de CO2 por la biodegradacin de aceite residual en 28

7.- Produccin de CO2 por la microflora acompaante de ARI y ARA con 29

8.- Efecto de la SM1 con y sin agitacin sobre la produccin de CO2 31