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Justice (1972) ha clasificado los mtodos para determinar el contenido de humedad de las
semillas en los dos tipos siguientes: (a) mtodos bsicos, en los que la humedad se
extrae de las semillas mediante calor y se mide mediante la prdida de peso del material
original o mediante el peso o volumen de la humedad condensada, y (b) mtodos
prcticos, indicados para el trabajo rpido de rutina y normalizados con respecto a uno o
ms de los mtodos bsicos. Es probable que no se pueda extraer toda la humedad de
las semillas sin extraer al mismo tiempo pequeas cantidades de otros componentes
voltiles o sin producir en el material unos cambios qumicos que supondran cambios de
peso. Al aplicar cualquier mtodo, por consiguiente, es preciso ajustarse fielmente al
procedimiento prescrito, a fin de que sean comparables los resultados de todos los
ensayos realizados con ese mtodo.
Hasta hace poco tiempo la ISTA prescriba tres posibles procedimientos: (1) secado en
estufa durante 17 horas a 103C; (2) secado en estufa durante un perodo de entre 1 y 4
horas a 130C, y (3) destilacin con tolueno. El mtodo (2) es aplicable nicamente a
determinadas semillas agrcolas, y el mtodo (3), que antes se utilizaba
con Abies, Cedrus, Fagus, Picea, Pinus, y Tsuga, se ha eliminado en la actualidad al
haberse dejado de utilizar en la prctica (ISTA 1981c). De esta manera slo queda como
mtodo aplicable a los rboles forestales el mtodo (1), el llamado mtodo de secado en
estufa a temperatura baja y constante.
El ensayo debe realizarse sobre dos muestras de unos 5 g cada una obtenidas de la
muestra de trabajo que incluye impurezas, no sobre semillas puras. Las semillas grandes
deben triturarse, romperse o cortarse en pequeos fragmentos para facilitar el secado, y
una buena norma prctica es romper las semillas que por trmino medio tengan ms de
10 mm de dimetro o longitud (Bonner 1981). Se pesan las muestras y despus se
introducen, colocadas en recipientes metlicos y bien espaciadas para facilitar la
circulacin del aire, en una estufa que se mantiene a una temperatura de 103C 2C
durante 17 1 horas. Al trmino de ese perodo se colocan las semillas en una
desecadora para que se enfren durante 3045 minutos, y despus se vuelven a pesar. La
humedad relativa del laboratorio en el que se efecta el pesaje final debe ser inferior al 70
por ciento, para evitar que se produzca una rpida reabsorcin de humedad. La diferencia
en CH de las dos muestras no debe superar un determinado porcentaje de tolerancia. Si
supera ese nivel, se debe someter a ensayo a otro par de muestras; si no lo hace, el
resultado final es la media de las dos muestras. La ISTA prescriba antes para todas las
especies una tolerancia del 0,2 por ciento, pero, como sealaron Gordon (1979) y Bonner
(1981), no se puede aplicar a todas las especies un mismo valor de tolerancia. En el
Congreso de la ISTA de 1983, celebrado en Ottawa, se convino en establecer de la
manera siguiente las tolerancias aprobadas para los ensayos de humedad en semillas
arbreas:
Porcentaje de
Estado de la muestra
tolerancia
Semillas pequeas, humedad <12 por ciento, por
0,3
ejemplo Picea, Alnus
Semillas grandes, humedad <12 por ciento, por
0,4
ejemplo Carya
Semillas pequeas, humedad >12 por ciento 0,5
Semillas grandes, humedad de 12 a 25 por ciento 0,8
Semillas grandes, humedad >25 por ciento, por
2,5
ejemplo Quercus
Para los laboratorios de semillas arbreas situados en zonas tropicales que desean
ajustarse a las Reglas de la ISTA, esta relajacin de las tolerancias supondr una ayuda
considerable.
El clculo del contenido de humedad debe hacerse sobre la base del peso en hmedo o
en fresco (vanse las pginas 184186), es decir:
Aunque la utilizacin del peso en hmedo como punto de partida es el procedimiento que
prescribe la ISTA y se est convirtiendo cada vez ms en la forma normal de expresar el
contenido de humedad, an no es universal. Para evitar dudas, el mtodo que se ha
utilizado para calcular el contenido de humedad debe indicarse explcitamente en
cualquier certificado o comunicacin de resultados.
Como explicaron Gordon y Rowe (1982), siempre que se mida el peso en fresco inicial de
un lote de semilla y se calcule el contenido de humedad inicial (peso en hmedo) secando
una muestra en estufa, todo nuevo CH al que se llegue como resultado del secado (o
humedecido) puede calcularse directamente a partir del nuevo peso del lote de semilla; no
es necesario volver a secar en estufa las muestras con el nuevo CHG. El peso deseado
del lote que se quiere conseguir mediante el secado (o humedecido) puede calcularse
multiplicando su peso inicial por el porcentaje inicial de materia seca y dividindolo
despus por el porcentaje deseado de materia seca.
Los humidmetros elctricos estn indicados para las semillas pequeas, pero no pueden
utilizarse con semillas grandes como las de Juglans o Quercus; tampoco resulta fcil
medir con ellos las semillas aladas, como las deFraxinus (Bonner 1978). Las semillas
grandes o aladas pueden secarse rpidamente en una estufa de microondas. Siempre
que la estufa se caliente previamente, el secado puede efectuarse en cinco minutos y el
pesado en otros seis minutos inmediatamente despus si se dispone de una balanza
electrnica o tras 3045 minutos de enfriado en una desecadora si la operacin se realiza
en una balanza ordinaria (Bonner y Turner 1980). Cabe esperar que los resultados estn
dentro de un intervalo del 7 por ciento, con una probabilidad del 0,05 en el caso de las
semillas grandes con CH alto, como las de Quercus, y dentro de un 2 por ciento en las
de Fraxinus y Carya, frente a los resultados ms precisos que ofrecen los mtodos
tradicionales, que son ms lentos.
Otros ensayos
En caso necesario, pueden hacerse otros ensayos cualitativos u observaciones, respecto
de los cuales no son necesarias prescripciones pormenorizadas. En muchos casos
pueden combinarse con el ensayo de pureza. Son entre otros los siguientes:
Determinacin de la autenticidad
Existen varios mtodos para determinar si las semillas son de la especie que se afirma.
Son los siguientes:
Pureza
Peso de la semilla
O bien
a) Se determina el peso de la semilla en 8 100 semillas tomadas del componente de
semilla pura del ensayo de pureza.
Como este valor es considerablemente inferior al mximo de 4,0 que prescribe la ISTA, se
estima que la muestra es homognea y no es preciso tomar nuevas muestras.
O bien
Germinacin
Porcentaje de
82%
germinacin =
Porcentaje de
82 + 4 = 86%
viabilidad =
Semilla pura
por g por kg
N de semillas viables
o
26,6 86 : 100 = 22,9 22 900
N de semillas germinables
o
26,6 82 : 100 = 21,8 21 800
Semilla impura
por g por kg
N de semillas viables
o
22,9 91 : 100 = 20,8 20 800
N de semillas germinables
o
21,8 91 : 100 = 19,8 19 800
En el caso de las especies en las que por el pequesimo tamao de sus semillas no se
puede realizar el ensayo de pureza, el nmero de semillas germinadas por unidad de
peso de semilla impura se determina mediante ensayo directo. En este tipo de semilla no
se pueden obtener las cifras de nmero de semillas puras por unidad de peso. Aunque
por lo general se expresan como semillas viables por gramo, hay que sealar que en
estas semillas de pequeo tamao tampoco se puede realizar el ensayo de corte, por lo
que, estrictamente, las cifras se refieren a semillas germinables. Vase el ejemplo
siguiente:
El anlisis de la pauta de germinacin sugiere que si se rechazaran todas las semillas que
germinan despus del punto mximo de germinacin se rechazara una proporcin
excesiva (60 por ciento) de las potencialmente germinables, mientras que si se aceptaran
todas las semillas germinables se prolongara indebidamente el perodo de ensayo y
probablemente se incluiran algunos grmenes de muy escaso vigor. En la prctica, con
una pauta de germinacin como la de este ejemplo estara indicado establecer que el
perodo de energa se prolonga hasta que la germinacin diaria desciende a menos del 25
por ciento del valor mximo. De esta manera,
Porcentaje del total de semillas germinables que germina dentro del perodo de energa =
84 por ciento.
Con este sistema de medicin, el porcentaje del total de semillas germinables que
germinan dentro del perodo de energa es igual a
Valor de germinacin. En el Cuadro 9.6 y partiendo de los datos del Cuadro 9.5, se
calcula el valor de germinacin conforme a los mtodos de Czabator (1962) y Djavanshir y
Pourbeik (1976).
Cuadro 9.5
Cuadro 9.6
Velocidad de
germinacin
Das diaria (o
desde Porcentaje de Porcentaje de germinacin VGD/N
la germinacin germinacin media) No. de (Col. 5
siembra diario acumulado (Col. 3 Col. 1) VGD recuentos Col. 6)
1 2 3 4 5 6 7
8 7,25 7,25 0,91 0,91 1 0,91
9 7,75 15,00 1,67 2,58 2 1,29
10 11,00 26,00 2,60 5,18 3 1,73
11 9,00 35,00 3,18 8,36 4 2,09
12 5,75 40,75 3.40 11,76 5 2,35
13 4,50 45,25 3,48 15,24 6 2,54
14 3,25 48,50 3,46 18,70 7 2,67
15 2,50 51,00 3,40 22,10 8 2,76
16 3,00 54,00 3,38 25,48 9 2,83
17 1,25 55,25 3,25 28,73 10 2,87
18 2,00 57,25 3,18 31,91 11 2,90
19 0,75 58,00 3,05 34,96 12 2,91
20 1,25 59,25 2,96 37,92 13 2,92
21 0,50 59,75 2,85 40,77 14 2,91
22 1,25 61,00 2,77 43,54 15 2,90
23 1,00 62,00 2,70 46,24 16 2,89
24 0,75 62,75 2,61 48,85 17 2,87
25 0,75 63,50 2,54 51,39 18 2,86
26 0,00 63,50 2,44 53,83 19 2,83
27 0,00 63,50 2,35 56,18 20 2,81
28 0,50 64,00 2,29 58,47 21 2,78
La diferencia entre las dos muestras (0,12 por ciento) es inferior al 0,3 por ciento que
prescribe la ISTA, de manera que no es preciso tomar una nueva muestra.
Entre los factores que debe tener en cuenta el viverista al trasladar los resultados del
ensayo de semillas a la produccin en el vivero figuran los siguientes:
Acacia albida 76 60 70 60
Cedrela odorata 100 3 85 18
Prosopis chilensis 100 15 79 38 2 min. en H2SO4 conc.
Acacia raddiana 100 3 30 4 60 min. en H2SO4 conc.
La variacin entre viveros puede estar relacionada con una serie de factores climticos,
edafolgicos o culturales diferentes. Por ejemplo, Roney y Brown (1978) comprobaron
que la germinacin de Pinus ponderosa mejoraba en un 38 por ciento cuando las semillas
se cubran con una capa de tierra arenosa de 1,5 cm en vez del grosor habitual de 0,4 cm.
La frecuencia del riego tiene tambin un efecto notable sobre la germinacin (Costales y
Veracion 1978).
Todos estos factores se combinan para hacer que el nmero de plantas plantables que se
producen por unidad de peso de semilla sea muy inferior al nmero de semillas
germinadas que arrojan los ensayos. El viverista debe incrementar en una proporcin
equivalente la cantidad de semilla que siembra. Para expresar la combinacin de estos
factores suele hablarse de porcentaje de plantas o porcentaje de rboles. Este
concepto se define en Ford Robertson (1971) como el porcentaje, en nmero, de semillas
de una determinada muestra que se convierten en plntulas al trmino de un perodo
determinado, generalmente al trmino de la primera temporada de crecimiento. Bonner
(1974) especifica que se trata de plntulas plantables, idea que es fcil de entender,
pues aade a la mera supervivencia los importantes conceptos de utilidad y vigor. A
efectos prcticos es preferible ampliar la definicin de manera que abarque todo el
perodo de vivero, es decir, el procentaje, en nmero, de semillas que se convierten en
plantas plantables (trasplantes o plntulas) al trmino de un perodo determinado,
generalmente al trmino del perodo de vivero en el momento de la plantacin en el
campo. Esto es mucho ms apropiado para las condiciones tropicales, donde muchas
especies se arrancan en la primera semana una vez germinadas y pasan despus de 6 a
12 meses en semilleros de trasplante.
Wormald (1975) ha notificado que un estudio de una serie de pases que cultivan Pinus
patula en grandes cantidades indic un porcentaje de plantas de alrededor del 33 por
ciento, frente a un promedio del 80 por ciento en los ensayos de germinacin, lo que
supone un factor de recuperacin de aproximadamente el 45 por ciento. Segn este autor,
de estas cifras parece desprenderse que ms o menos de cada tres semillas que se
siembran se obtiene una sola planta utilizable. Este dato coincide bastante bien con los de
la Comisin Britnica de Silvicultura, que en los ltimos 15 aos ha mejorado su
recuperacin de plntulas de una de cada diez a una de cada cuatro (Gordon y Tee
1973). Esto confirma la afirmacin de Goor y Barney (1976) en el sentido de que en
realidad, en la prctica de vivero y de siembra directa, esta cantidad (la cantidad de
semilla que se necesita sobre la base de los ensayos de germinacin) debera duplicarse
o triplicarse para compensar las prdidas de plntulas que se producen en los primeros
aos. El factor de recuperacin en vivero debe basarse en la experiencia personal, pero
no puede ser nunca muy preciso debido a las caprichosas variaciones de las condiciones
climatolgicas, los lotes de semilla, etc. Por esta razn, existe un lmite a la precisin que
se debe exigir a los ensayos rutinarios (como opuestos a los ensayos de investigacin) en
el laboratorio.
Utilizando el ejemplo que figura en las pginas 340341, el porcentaje de plantas puede
calcularse de la manera siguiente:
Vivero 2
Nuevo, en un lugar
difcil y sin
experiencia en la
especie 0,33 82 27 19 800 6 500
Partiendo de la hiptesis de que ambos viveros tuvieran que cultivar 500 000 plantas, el
vivero l necesitara:
Mientras que el vivero 2 necesitara
Tamao de un semillero = 10 1 m = 10 m2
Densidad final de plntulas deseada = 2 400/m2
Nmero de semillas/kg de semilla pura = 26 600
Porcentaje de pureza = 91% o 0,91
Porcentaje de germinacin = 82% o 0,82
Tasa de recuperacin en semillero esperada = 0,65
(Plntulas que sobreviven hasta el trasplante como
proporcin de las semillas germinadas en funcin del
ensayo)
entonces se necesitar la tasa de siembra siguiente
Por ejemplo, para obtener 1,5 millones de plantas del mencionado lote de semilla:
Estos 116 kg de peso real de semilla equivalen a 100 kg efectivos o 100 kg de semilla de
referencia. Solamente cuando FKE = 1,0 son idnticos al peso real de la semilla y su peso
efectivo.
Repeticin de ensayos
El ensayo principal de un lote de semilla se efecta despus de su procesamiento o antes
de almacenarlo o enviarlo directamente a los viveros. Cuando un lote de semilla
permanece almacenado durante un tiempo, es esencial repetir el ensayo de germinacin
o viabilidad antes de utilizarlo, para comprobar que no se ha deteriorado en ese perodo.
Muchos centros de semillas repiten los ensayos anualmente, separando previamente, en
un pequeo recipiente, una muestra representativa del conjunto del lote, y de esta manera
evitan tener que abrir repetidamente los recipientes donde est el grueso de la semilla. No
es preciso repetir el ensayo para determinar el porcentaje de pureza, y el de contenido de
humedad debe repetirse nicamente cuando existen motivos para pensar que en los
recipientes cerrados se han producido filtraciones.
Se han sugerido medidas especiales para el ensayo repetido de semillas agrcolas que
estn almacenadas durante mucho tiempo con fines de conservacin de recursos
genticos (Ellis y otros 1980). Estos autores sugieren que, habida cuenta del gran valor
del germiniplasma almacenado y de la necesidad de evitar perder innecesariamente
partes de l en la realizacin de los ensayos, puede ahorrarse ms material mediante un
sistema de toma de muestras sucesivas que con el mtodo oficial de la ISTA, consistente
en rplicas de 4 100. El objetivo es detectar la prdida de viabilidad en las primeras
fases del envejecimiento, es decir, en cuanto desciende a un nivel inferior al 8090 por
ciento de la tasa inicial, e iniciar el rejuvenecimiento plantando la semilla para que
produzca una nueva generacin. Este mtodo estara igualmente indicado para la
conservacin de recursos genticos forestales, aunque, debido a que en los rboles el
ciclo generacional es mucho ms largo, la conservacin como plantas en crecimiento,
frente a la conservacin en forma de semilla, ser ms importante que en los cultivos
agrcolas.