PRACTICA N 2.

EFECTO DE LA TEMPERATURA Y EL PH EN EL CRECIMIENTO

DE MICROORGANISMOS

1. Introduccin

Los microorganismos tienen un rango ptimo, as como un mnimo y

un mximo de temperatura para crecer. Por lo tanto, la temperatura
ambiental determina no solamente la tasa de proliferacin sino
tambin los gneros de microorganismos que prosperarn y el grado
de actividad microbiana que se registrar.
El cambio de solo unos cuantos grados en la temperatura favorecer el
crecimiento de organismos completamente diferentes y resultar en
un tipo distinto de descomposicin alimentaria y/o enfermedad de
origen alimentario. Es debido a estas caractersticas que se emplea el
tratamiento trmico como un mtodo para controlar la actividad
microbiana.

Los efectos del pH adverso afectan por lo menos dos aspectos de la

clula microbiana: el funcionamiento de sus enzimas y el transporte de
nutrimentos hacia la clula. La membrana citoplsmica de los
microorganismos es relativamente impermeable a los iones H+ y OH;
su concentracin en el citoplasma permanece razonablemente
constante a pesar de amplias variaciones que pueden ocurrir en el pH
del medio circundante.
Cuando los microorganismos se ven en un ambiente por debajo o por
arriba del nivel de neutralidad, su habilidad para proliferar depende de
su habilidad para cambiar el pH ambiental a un rango ms apropiado
para ello, pues compuestos clave como DNA o ATP requieren de un
medio neutro.
2. Objetivos

a. Objetivo General

- Determinar el efecto de la temperatura y el pH en tres tipos de

microorganismos.
b. Objetivos Especficos
- Determinar el efecto de la temperatura en Bacilus sp. y E. Coli.
- Determinar el efecto del pH en Pseudomonas aureus y E. Coli.

3. Materiales y procedimientos
a. Materiales
a.1. Material Biolgico
- Cultivo puro de E. Coli
- Cultivo puro de Bacillus sp
- Cultivo puro de Pseudomonas aureus
a.2. Material No Biolgico
- Tubo N 06 del Nefelmetro de Mc. Farland
- Tubo con 10 ml SSF estril
- Ocho tubos de ensayo 13x10
- Un asa bacteriolgica
- Una pipeta de 1ml estril
- Una pipeta de 10 ml estril
- Cinta de pH
- Caldo nutritivo estril
- Mechero
- Gradilla
 -Bao mara
b. Procedimientos
- Limpiar el rea de trabajo con alcohol yodado y encender el
mechero para esterilizar el rea.
b.1. Estandarizacin del inculo
- Del cultivo puro bacteriano, colocar en un tubo con 10 ml de
solucin salina fisiolgica estril cierto nmero de asadas (haciendo
uso del mechero para esterilizar el ingreso del tubo y del cultivo
bacteriano), segn sea necesario para alcanzar la turbidez del tubo
N 06 del nefelmetro de Mc. Farland: 1.8 x109 UFC/mL.
b.2. Evaluacin del efecto del pH
- En cada uno de los tres tubos de ensayo que contienen 9 ml de
caldo nutritivo a pH de 4.5, 7 y 9 respectivamente. Luego
agregamos 1 ml del inculo estandarizado con el tubo N 06 del
nefelmetro de Mc.Farland.
- Incubar a 37 C por 48 horas.
- Evaluar el crecimiento del microorganismo por la presencia (+)
o ausencia (-) de turbidez en cada tubo.
b.3. Evaluacin del efecto de la temperatura
- De los 50 ml de caldo nutritivo estril, vertimos 9 ml en 3
distintos tubos de ensayo.
- Agregar 1 ml del inculo estandarizado a cada tubo de ensayo
hasta obtener 10 ml en cada tubo de ensayo.
- Colocar en bao maria los tubos de ensayo a 37, 60 y 100 C
durante 10 minutos respectivamente e incubamos.
4. Resultados
Tabla 1. Distribucin de microorganismos por
mesas

MICROORGANISMOS
MESA
Para efecto de la T Para efecto del pH
MESA N 1 E. Coli E. Coli
MESA N 2 Bacillus sp. P. aureginosa
MESA N 3 E. Coli E. Coli
MESA N 4 Bacillus sp. P. aureginosa

Tabla 2. Resultados de los efectos de la T y

el pH de las distintas mesas

TEMPERATURAS pH
MESA
22 35 60 100 4.5 7 9
MESA 01 ++ +++ + - +++ -
MESA 02 +++ + - - +++ +
MESA 03 ++ +++ + - +++ -
MESA 04 +++ + - - +++ +

5. Comentario crtico

- Para conseguir la turbidez necesaria para estandarizar el inculo

bacteriano se utiliz la totalidad del cultivo puro bacteriano.
- El Bacillus sp. existe en el suelo y es capaz de formar esporas para
protegerse. Resiste hasta 70-80 C.
- La escala de turbidez de Mc. Farland se us como referencia para
suspensiones bacteriolgicas para saber que el nmero de bacterias
por mililitro, o ms bien en UFC. De esta manera se estandariza el
inculo que servir para evaluar el pH y la temperatura.
- Es necesario esterilizar el rea para poder evitar contaminacin de
la muestra ya que se trabaja con microorganismos.
- Las temperaturas entre 22 y 60 C mostraron un efecto muy
positivo en el crecimiento de los microorganismos mientras que
temperaturas superiores mostraron poco efecto o efecto negativo.
6. Conclusiones

- La temperatura ptima de crecimiento para el bacillus sp. y de E.

Coli es de 35 C. Las temperaturas menores mostraron menor
efecto positivo al crecimiento mientras que las temperaturas
superiores a 100 C indicaron un efecto negativo en el crecimiento
de los microorganismos.
- El pH neutro (pH = 7) es ptimo parar el crecimiento de la
Pseudomona aureus y la E. Coli. El pH acido (pH = 4.5) muestra un
efecto negativo para todos los microorganismos. El pH bsico (pH =
9) mostr efectos positivos en la Pseudomonas aureginosa y
negativos en la E. Coli.

7. Referencia bibliogrfica

- KONEMAN, Elmer W. et al. Diagnstico Microbiolgico. Buenos

Aires: Mdica Panamericana, 1983. 533 p.

Anexo
Flujograma