CURSO QUIMICA DE PRODUCTOS NATURALES

CAPITULO I: CONCEPTOS BASICOS

Los productos naturales se han dividido con cierta arbitrariedad en 02

grupos: metabolitos primarios y metabolitos secundarios:

METABOLITOS PRIMARIOS

Producto del metabolismo general

Ampliamente distribuidos en plantas y microorganismos
(aminocidos de protenas comunes, monosacridos, nucletidos,
cidos carboxlicos, lipidos, vitaminas.)

METABOLITOS SECUNDARIOS

Producto del metabolismo especial.

Biosintetizados a partir de los metabolismos primarios.
Distribucin restringida a ciertas plantas y microorganismos (a veces
es caracterstico de un gnero dado de una especie).Ejemplo:
Flavonoides, Cumarinas, Saponinas, Terpenoides, Taninos,
Alcaloides, etc.)
Son compuestos qumicos de estructura relativamente compleja.

Los metabolitos secundarios es propio de una especie y se le conoce

tambin como Producto qumico o Compuesto del qumico, hasta hoy
se considera que los metabolitos secundarios no tienen una funcin
definida en la especie, o un significado bioqumico, no se ha descubierto
an una funcin metablica en la cual ellos intervienen, no tienen una
utilidad aparente para la especie, que lo sintetiza, es decir no participan en
su crecimiento y reproduccin, por esos son considerados como artculos
de lujo para la planta.

Los metabolitos primarios, son comunes a todos los seres vivos y

participan en la actividad celular y se encuentran en todos los organismos
vivos; por lo tanto son metablicamente esenciales, en algunos casos los
metabolitos primarios sirven como precursores de los metabolitos
secundarios.
A estos metabolitos se les conoce como productos bioqumicos es decir
compuestos del bioqumico.
Es necesario indicar en este punto que hasta la actualidad por ejemplo; que
compuestos como el escualeno un triterpeno no comn obtenido del aceite
del hgado de tiburn considerado como metabolito secundario, y conocido
como uno de los productos universalmente distribuido, es un participante
fundamental en el metabolismo de los seres vivos, es decir que
probablemente que muchos de los compuestos orgnicos que hoy en da se
califican de metabolitos secundarios lleguen a ser reconocidos como
actores principales de importantes funciones biolgicas.

COOH
N
N COOH
L- prolina (amijnoacido de proteinas)
metabolito primario
L- pipeclico
metabolitos secundarios
solo se encuentra en ciertas plantas

BIOSINTESIS

Todos los compuestos orgnicos, estn constituidos por carbono e

hidrogeno a menudo contienen oxigeno y nitrgeno y menos
frecuentemente, azufre, fsforo, y halgenos.
La formacin de los productos naturales comienza con la fotosntesis que
tienen lugar en plantas superiores, algas y algunas bacterias. Es un proceso
endotrmico que requiere de la luz solar.
Aquellos organismos incapaces de absorber la luz obtienen su energa de la
degradacin de carbohidratos de modo que la fuente principal de obtencin
de carbono es la inversa en la indicada en el esquema general. Los
metabolitos secundarios se forman por distintas vas, y como siguiendo su
ruta biogentica una misma clase de compuestos, por ejemplo los
alcaloides pueden tener varios orgenes.
 Esquema general de biosntesis

CO2 + H2O ACIDOS NUCLEICOS

pirimidas
fotosntesis H3PO4 purinas

Hexosas CARBOHIDRATOS POLISACARIDOS

glicsidos Ac.piruvico (C 3) Ac.ctrico

Pentosas

Aminoacidos
alifticos

PORFIRINAS

Ac. actico Ac. shikmicos (C 6-C)

CH 3CO 2H
HO

x3 HO
condensacin (C 2)n CO2H

HO
Ac. mevalnico Ac. prefnicos (C 6-C 3-C)
OH
CO 2H
HO
HO HO O CH2 CH2 CO2H

TERPENOS (C5n) Fenilalina (C6-C3)

AC. GRASOS POLICETIDOS
SATURADOS (COMP. FENOLICOS)
Mono- (c 10)
Ac. cinmico
Sesqui- (C15) Aminocidos
Di- (C 20) aromticos
AC. GRASOS
Sester- (C25)
INSATURADOS AROMATICOS
Tri- (C 30)
Tetra- (C 40)
(Carotenoides) ALCALOIDES
POLIACETILENOS LIGNANOS
ESTEROIDES + +
Azcares
PROSTAGLANDINAS LIGNINAS +
+ PROTEINAS
SAPONINAS FLAVONOIDES
Los productos naturales comprenden el estudio de: Plantas medicinales,
colorantes, aceites esenciales, pesticidas ( biocidas naturales), floculantes
etc, estos se pueden encontrar en plantas, microorganismos acuticos y
terrestres, hongos, bacterias, animales, y plantas acuticas.

Las plantas medicinales tiene una importancia de hace siglos, ya que

fueron los nicos medicamentos con que contaron los seres humanos para
el tratamiento de sus enfermedades. En la actualidad a pesar del desarrollo
de la qumica farmacutica sinttica y de la fermentacin microbiana las
plantas siguen teniendo una posicin destacada, el 52% de los productos
naturales estn implicados en el desarrollo de nuevos frmacos.
Otro aspecto importante es el cultivo in vitro de tejidos o clulas
vegetales, lo que ha permitido en ocasiones obtener un compuesto activo
difcil de conseguir en las cantidades necesarias directamente.
De las casi 400,000 especies vegetales del planeta se han investigado
fitoqumicamente un pequeo porcentaje y la cantidad sometida a
investigacin biolgica farmacolgica es incluso ms pequea.

FARMACOS OBTENIDOS DE PLANTAS (Chadwick, D.J. and Marsh (Editores), Ethnobotany

and the Search for New Drugs discovery., 1994)

Frmaco Uso mdico Especie Vegetal

Ajmalina Arritmia cardiaca Rauwolfia spp.
Aspirina Analgsico, antiinflamatorio Filipendula ulmaria
Atropina Dilatador de Pupila Atropa belladonna
Benzoina Desinfectante oral Styrax tonkinensis
Cafena Estimulante Camellia sinensis
Alcanfor Dolor reumtico Cinnamomum camphora
Cascara Purgativo Rhamnus purshiana
Cocana Anestsico oftalmolgico Erythoxylum coca
Codena Analgsico, antitusivo Papaver somniferum
Colchicina Antigotosa colchicium autumnale
Demecolcina Leucemia, linfoma Colchicium autumnale
Deserpidina Antihipertensivo Rauwolfia canescens
Dicumarol Antitrombtico Melilotus officinalis
Digoxina Fibrilacin atrial Digitalis purpurea
Digitoxina Fibrilacin atrial Digitalis purpurea
Emetina Disentera amebtica Psychotria ipecacuanha
Efedrina Broncodilatador Ephedra sinica
Eugenol Dolor dental Syzygium aromaticum
Gallotanino Supositorios hemorroidales Hamamelis virginia
Hiosciamina Anticolinrgica Hyoscyamus niger
Ipecacuana Emtica Psychotria ipecacuanha
Ipratropium Broncodilatador Hyosciamus niger
Morfina Analgsico Papaver somniferum
Norcapina Antitusivo Papaver somniferum
Papaina Atenuador mucoso Carica papaya
Papaverina Antiespasmdico Papaver somniferum
Fisostigmina Glaucoma Physostigma venenosum
Picrotoxina Antdoto barbitrico Anamirta cocculus
Pilocarpina Glaucoma Pilocarpus jaborandi
Podofilotoxina Condiloma Podophylum peltatum
Proscilaridina Mal funcionamiento cardaco Drimia martima
Protoveratrina Antihipertensivo Veratrum album
Pseudoefedrina Rinitis Ephedra sinica
Psoraleno Vitiligo Psoralea corylifolia
Quinina Profilaxis de la malaria Cinchona pubescens
Quinidina Arritmia cardiaca Cinchona pubescens
Rescinnamina Antihipertensivo Rauwolfia serpentia
Reserpina Antihipertensivo Rauwolfia serpentia
Senosido A,B Laxante Cassia angustifolia
Escopolamina Enfermedad locomotora Datura stramonium
Estigmasterol Precursor esteroidal Physostigma venenosum
Estrofantina Fallo cardiaco congestivo Strophanthus gratus
Tubocurarina Relajante muscular Chondrodendron tomentosum
Teniposido Neoplasma de vescula Podophylum peltatum
Tetrahidrocannabinol Antimimtico Cannabis sativa
Teofillina Diurtico, antiasmtico Camellia sinensis
Toxiferina Relajante quirrgico Strychnos guianensis
Vinblastina Enfermedad de Hodgkins Catharanthus roseus
Vincristina Leucemia peditrica Catharanthus rose

Los alcaloides constituyen un grupo de productos naturales muy

importantes, en la qumica, la industria y la medicina. Las familias de
plantas ms importantes que contienen alcaloides son:
Amarillidaceae, Annonaceae, Apocinaceae, Asteraceae, Berberidaceae,
Boraginaceae, Buxaceae, Celastraceae, Fabaceae, Lauraceae, Liliaceae,
Loganiaceae, Menispermaceae, Papaveraceae, Piperaceae, Poaceae,
Ranunculaceae, Rubiaceae, Rutaceae y Solanaceae. (CORDELL, G. A.
ET.AL. 2001). En esta ltima categora, se utilizan como potenciador
analgsico y anestsico local (cocana I), anticolinrgicos (atropina II y
hyosciamina III), antihipertensivos (reserpina IV, rescinamina V,
deserpidina VI), antimalricos (quinina VII), antitumorales (vinblastina
VIII, vincristina IX), antitusivo (codena X), depresor cardaco (quinidina
XII), estimulante central (cafena XIII), diurticos (teobromina XIV y
teofillina XV), emtico (emetina XVI), analgsicos narcticos (codena X y
morfina XI), supresor de gota (colchicina XVII), colinrgicos oftlmicos
(pilocarpina XVIII y fisostigmina XIX) y tranquilizantes (reserpina IV y
deserpidina VI).
 COOCH 3
O O CH 2OH O CH 2 OH

N CH 3 OC N CH 3 OC C H O N CH 3 OC C H

I II III

OCH3
O

IV, R = CH 3, R` = O - C OCH3
H
N OCH3
RO N OCH 3
H H O H

V, R = CH 3 , R` = O - C - CH = C OCH 3

H OCH 3
OCH3
H 3COOC R` O

OCH 3 VI, R = H, R` = O - C OCH 3

OCH 3

H
R

R`
R N
H O
H 3CO NH
H
HO
N
VII, R = OH, R` = H X, R = OCH3
XII, R = H, R` = OH XI, R = OH

OH
N

N
H
N
H CH 3
O H
OCH 3
H 3CO N O
H OH CH 3
R
VIII, R = CH3 O
H 3CO O
IX, R = CHO

O R`
R N
H 3CO N
NHCOCH 3 CH 3
O N N
H 3CO N
OCH 3 CH 3 O O N
XIII R = R` = CH 3 XVI
O
XIV, R = H, R` = CH 3
XVII OCH 3 XV, R = CH3, R` = H

H3CO

N O
H 3CO CH3
H H 3CHNCO

H
N N
H H
OCH 3 CH3 CH3
HN

OCH 3 XIX
XVIII

PAUTAS PARA EL ESTUDIO FITOQUMICO

DE LA PLANTA AL PRINCIPIO ACTIVO

Para poder encontrar nuevos frmacos en plantas es necesario llevar a

cabo un cribado para detectar la presencia de compuestos novedosos e
investigar su actividad biolgica.
 Sntesis

Dilucidacin de la estructura
Extraccin Separacin

Plantas medicinales Extracto(s) Fraccin Compuesto(s) puro(s) Toxicologa

Bioensayos Bioensayos Modificacin de la estructura

Bioensayo

El camino que conduce desde la planta intacta hasta sus constituyentes

puros, es largo, implica trabajo que bien podra tardar semanas o aos, e
incluye los siguientes pasos:
Identificacin correcta de la planta con la ayuda de especialistas
(botnicos).
Recoleccin y secado del material vegetal; se deben tomar
precauciones para evitar formacin de artefactos.
Preparacin de extractos con diferentes disolventes; anlisis de estos
extractos por diferentes mtodos cromatogrficos.
Fraccionamiento de los extractos por diferentes tcnicas
preparatorias (cromatografa de columna, cromatografa de
particin, etc).
Control de pureza de los productos aislados.
Dilucidacin de estructuras de los constituyentes por combinacin
de diversas tcnicas espectroscpicas (UV/VIS, espectrofotometra
IR, resonancia magntica nuclear de 1H y 13C, espectrometra de
masas, difraccin de rayos X) y tcnicas qumicas (hidrlisis,
formacin de derivados, reacciones de degradacin etc).
Sntesis o semisntesis del producto natural.
Modificacin de la estructura, con miras a establecer las relaciones
entre la estructura y la actividad.
Pruebas farmacolgicas y toxicolgicas.

CRITERIOS PARA LA SELECCIN DE PLANTAS

Cuando se comienza una investigacin fitoqumica de plantas medicinales

con el propsito de aislar e identificarlas sustancias activas, debe haber una
seleccin correcta del material vegetal. Si se tiene en cuenta el nmero de
plantas que no han sido estudiadas an desde un punto vista fitoqumico o
farmacolgico, esta seleccin resulta difcil. Los factores que se deben
considerar son los siguientes:
Criterio quimiotaxonmico
Informacin proveniente de la medicina tradicional.
Observaciones de campo.
Recoleccin aleatoria.

Quimiotaxonoma: Es la ciencia que clasifica a las plantas en funcin a la

composicin qumica . La composicin qumica a menudo son especficos
de una familia, gnero, especie. Si un producto natural tiene propiedades
teraputicas interesantes, puede ser posible encontrar sustancias anlogas
en las especies del mismo gnero, la misma familia. Por ej: La familia de
las Gentianacea, que consta aproximadamente de 1100 especies se
caracterizan por la presencia en las races y en las hojas de principios
amargos que estimulan la digestin y de Xantonas con propiedades
antidepresivas.

Informacin proveniente de la medicina tradicional

La seleccin de plantas con base en los datos de la medicina tradicional
(etnofarmacologa) puede llevar tambin al descubrimiento de nuevas
molculas promisorias. Las plantas de las regiones tropicales y sub
tropicales son abundantes y han sido poco estudiadas por lo tanto
representan un reservorio de molculas nuevas con actividades
teraputicas potenciales, por lo tanto la informacin de los mdicos
tradicionales es muy importante para este tipo de investigacin

Observaciones de campo
Durante las expediciones de recoleccin son muy importantes las
observaciones de campo, una especie que crezca en una ambiente hostl,
en el cual existe peligro de ataques de mosquitos, insectos, hongos
bacterias virus intentar protegerse con la sntesis de constituyentes
insecticidas, fungicidas, antibacterianos virucidas.
Las races a menudo sintetizan sustancias antimicticas porque el suelo es
rico en hongos patgenos. Un ejemplo es: Azadirachta indica (
Melaceae) Es originario de la India y de Birmania, que slo vive en
regiones tropicales y subtropicales. En Camboya se lo conoce tambin
como sadao o sdao, y en Vietnam su u. En Nicaragua se lo conoce
como nim . Los extractos de nim actan como insecticidas y repelentes,
especialmente contra ciertos insectos como las termitas o comejenes y los
dainos nemtodos. Mezclada con urea para abonar el suelo, da buenos
resultados y acta como biocida. No solamente la planta sirve como
abono orgnico. Las hojas verdes constituyen un fertilizante excelente y
barato.
 Recoleccin aleatoria

La recoleccin aleatoria tambin es indispensable dado el potencial de las

plantas que no han sido investigadas an y la batalla necesaria para
derrotar enfermedades. Por lo tanto se deben tomar muchos caminos
diferentes para llegar al descubrimiento de agentes teraputicos
novedosos, en especial con enfermedades como el SIDA esclerosis
mltiple, enfermedad de Parkinson, Alzeihmer y ciertos tipos de cncer.

b) Inters dirigido a un tipo de compuesto qumico

Por ejemplo se quiere estudiar especies que sintetizan Quinonas, se

ubica la especie, se realiza la revisin bibliogrfica, se realiza las
pruebas de laboratorio (screening fitoqumico) de las diferentes
partes de la planta y tambin es necesario tener en cuenta las edades.
Se procede a la extraccin, fraccionamiento, purificacin y pruebas
de actividad biolgica.

c) Inters por un determinado tipo de actividad biolgica.

Se realiza la revisin bibliogrfica para identificar la familia, gnero

y especie que tengan esta actividad, se preparan los extractos, se
realizan los ensayos de actividad biolgica al extracto activo, se
realiza el fraccionamiento cromatogrfico bioguiado con la finalidad
de aislar e identificar los compuestos y comprobar su actividad.

Para el cribado de actividades biolgicas los extractos vegetales y de

otros organismos es de vital importancia contar con bioensayos
apropiados Estos bioensayos pueden involucrar diferentes formulas
- Organismos inferiores
Microorganismos , insectos crustceos, moluscos
- Sistemas subcelulares aislados
Enzimas, receptores
- Cultivos celulares
De origen humano o animal
- rganos aislados de vertebrados
- Animales enteros

La recoleccin del material a estudiar debe hacerse por un

botnico y una muestra debe ser depositada codificada en los
Herbarium
MARCHA FITOQUIMICA PRELIMINAR (SCREENING
FITOQUMICO)

EXTRACTO HEXNICO

Determinacin cualitativa de Flavonoides

Disolver el residuo desgrasado obtenido de la filtracin de la
maceracin para obtener el extracto hexnico 2 g. en 10 mL. de etanol
y filtrar. Colocar de 1-2 mL. del filtrado en tres tubos de ensayo. El
tubo N 1 sirve de control.

Ensayo de cianidina
- Al tubo N 2 aadir 0.5 mL de HCl concentrado y una tirita de
magnesio. Observar la formacin de color (de verde a rojo) al cabo
de 10 minutos.
- De haber cambio de color con respecto al tubo de control, enfriar y
diluir con volmenes iguales de agua y aada 1 mL. de alcohol
amlico, agite y espere que se separe.
- El desarrollo de tonalidades rojizas en la capa del alcohol amlico es
indicativo de flavonoides.

Ensayo de leucoantocinina
- Al tubo N 3 aadir 0.5 mL de HCl concentrado y calentar en bao
de mara por 5 minutos
- El desarrollo de un color rojo-violeta es indicativo de la presencia de
leucoantocianinas.
- En caso de no aparecer inmediatamente el color, deje reposar a
temperatura ambiente por una hora antes de anotarlo como negativo.
La formacin de color se da en forma lenta.

Ensayo para alcaloides

A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 4 mL. de cido
clorhdrico al 1 % se filtra en cuatro tubos de ensayo donde al tubo N
1 se adiciona de 2 a 3 gotas del reactivo de Dragendorff. La presencia
de turbidez, floculacin o precipitado rojo ladrillo es indicativa de
alcaloides. Al tubo N2 reactivo de Wagner. La presencia de turbidez,
floculacin o precipitado es indicativa de alcaloides. Al tubo N 3
reactivo de Mayer. La presencia de turbidez, floculacin o precipitado
crema es indicativa de alcaloides. El tubo N 4, nos sirve de control.
Ensayo para triterpenos y esteroides
A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 4 mL. de
cloroformo, filtrar y dividir en tres tubo. El tubo N 1 es el control.
Al tubo N 2 se realiza la Reaccin de Liebermann-Burchard. A un 1
mL. de muestra se aade igual volumen de anhdrido actico. Por la
pared del tubo de ensayo se dejan caer de 3-4 gotas de cido sulfrico
concentrado.
La aparicin de una coloracin verde-azul indica la presencia de
estructuras esteroidales y una coloracin rojo-pardo indica la
presencia de estructuras triterpnicas.
Al tubo N 3 aadir 3-4 gotas de cido sulfrico concentrado
dejndolo caer por las paredes del tubo hasta el fondo. La formacin
de un anillo de color rojo en la interfase es indicativa de esteroles
insaturados.

Ensayo para derivados Antracnicos (Quinonas)

A una fraccin del extracto hexnico, se disuelve en 3 mL. de
cloroformo. Posteriormente se filtra y se distribuye en 3 tubos de
ensayo, el tubo N 1 para control, al tubo N 2 se agita con 1 mL de
hidrxido de sodio al 5 % en agua. Coloracin rosa- rojo en la fase
acuosa, indica presencia de quinonas .
En el tubo N 3, adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio
al 0.5 % en metanol. Coloracin roja indica presencia de
antraquinonas libres.

Ensayo para Lactonas y Cumarinas (Baljet)

A una fraccin de extracto hexnico, se disuelve en 2 mL. de etanol se
distribuye en dos tubos de ensayo un tubo para control, al otro tubo se
le aade una mezcla recin preparada de de 1 mL de cido pcrico al 1
% en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.
Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de
agrupamientos lactnicos (cumarinas).

Ensayo para Lpidos y/o aceites esenciales (Sudn III)

A una fraccin del extracto hexnico 2 mL se evapora hasta sequedad
en presencia de la disolucin de Sudan III.
La aparicin de gotas oleosas de color rojo oscuro, indica la presencia
de lpidos y/o aceites esenciales.

Ensayo para Carotenos (Carr-Price)

A una fraccin del extracto, hexnico 1 mL. se le adiciona igual
volumen del reactivo de Carr-Price.
La aparicin de una coloracin verde azulada indica la presencia de
carotenos.

EXTRACTO DICLOROMETANO Y METANOLICO

Ensayo para Alcaloides

Pesamos 400 mg. de extracto seco se le adiciona 15 ml de cido
clorhdrico al 10 % se calienta hasta disolver y filtramos. De esta
forma se obtiene un residuo y una disolucin cida (lavados cidos).
Se mide 1 mL de los lavados cidos en cuatro (4) tubos de ensayo un
tubo es para muestra patrn y adicionamos unas gotas de los reactivos
de reconocimiento de Dragendroff (la presencia de turbidez,
floculacin o precipitado rojo- naranja), de Mayer (precipitado
crema), de Wagner (precipitado marrn).Pruebas directas para
alcaloides.
Al lavado cido sobrante lo colocamos en un pera de separacin y
extraemos con cloroformo, donde se obtiene dos fases: clorofrmica y
acuosa. La fase clorofrmica lo pasamos a un baln y lo llevamos a
sequedad en un rotavapor , hacemos una CCF, la presencia de
manchas de color naranja indica la presencia de alcaloides .

Ensayo para Triterpenos y Esteroides (Reaccin de Liebermann

Burchard)

A una fraccin de extracto disolver en cloroformo (CHCL3),

adicionamos 1 ml. de anhdrido actico y 3 a 4 gotas de cido
sulfrico concentrado. Observamos la aparicin de una coloracin
rojo-pardo nos indica la presencia de estructuras Triterpnicas
La aparicin de una coloracin azul-verde indica la presencia de
estructuras Esteroidales.
El residuo seco obtenido a partir de la fraccin para realizar el ensayo
de alcaloides se redisuelve en 4 mL. de cloroformo, de estos se toma 1
mL en un tubo N 1 y se le aade el mismo volumen de anhdrido
actico. Por la pared del tubo se deja caer de 3-4 gotas de cido
sulfrico concentrado.
Al tubo N 2 aadir 3-4 gotas de cido sulfrico concentrado
dejndolo caer por las paredes del tubo hasta el fondo. La formacin
de un anillo de color rojo en la interfase es indicativa de esteroles
insaturados. El tubo N 3 es de control y no se agrega reactivo.
Ensayo para Quinonas (Borntrager)

Tomar un tubo de ensayo con la muestra ya disuelta en. Cloroformo

(CHCl3), se adiciona 1 mL. de (NaOH) hidrxido de sodio al 5 %,
agitamos y dejamos en reposo, se forman dos fases la clorofrmica y
alcalina . Una coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la
presencia de quinonas.
De la disolucin clorofrmica obtenida a partir de la fraccin para el
ensayo de triterpenos y esteroides. Tubo N2 se utiliza 1 mL. la cual
se le adiciona la misma cantidad de hidrxido de sodio al 5 % Una
coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina indica la presencia de
quinonas.
En el tubo N 3 adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio al
0.5 % en metanol. Coloracin roja indica presencia de antraquinonas
libres.

Ensayo para Flavonoides (Mtodo de Shinoda)

Colocar en un tubo de ensayo con la muestra ya diluida en etanol,

adicionar un trocito de cinta de magnesio y 5 a 6 gotas de HCl
concentrado. Observndose la reaccin del Mg con el HCl donde se
realiza un cambio de color en la parte superior del lquido de nuestra
dando:
Resultados Positivos:
Amarillo-rojo = Flavonas, chalconas, auronas
Rojo-magenta = Flavanonoles
Rojo, magenta, violeta,azul = Antociancidos
Amarillo claros, incoloros = Flavonoles, Flavonas y Isoflavonas.
Los lavados cidos, obtenidos a partir de los ensayos para alcaloides,
se ajustan a pH 9.
Se realiza una extraccin con cloroformo. De esta forma se obtienen
dos fases, acuosa y clorofrmica. A la fase acuosa lo colocamos en
un tubo de ensayo para realizar el ensayo de Flavonoides donde
adicionamos una trocito de cinta de magnesio metlico y 5 gotas de
HCl concentrado dejar reaccionar y luego aadir 1 mL. de alcohol
amlico y agitamos.
Si el alcohol amlico se colorea intensamente de amarillo, naranja,
rojo o carmelita, el ensayo indica presencia de flavonoides.

Ensayo para Glicsidos Cardiotnicos

A 5 mL del extracto en evaluacin se adicionar 5 mL de acetato de
plomo al 10 % y 2 mL y de agua destila.
Calentar la mezcla a bao Mara durante 10 min.
Filtrar. Agitar el filtrado con 10 mL. de cloroformo en tres tubos de
ensayo.
Al tubo N 1 se agrega el reactivo de Baljet. (Coloracin roja, naranja-
rojiza o violeta son cardenlidos)
Al tubo N 2 realizar la reaccin de Keller-Kiliani (cido actico
glacial, 1 gota de cloruro frrico al 5 % en metanol y cido sulfrico
concentrado) Coloraciones intensas.
Al tubo N 3 se realiza la reaccin de Salkowaki (ncleo esferoidal).
Coloracin amarilla-rojo sangre.

Ensayos para Lactonas y Cumarinas (Baljet)

A una fraccin de extracto se disuelve en 2 mL. de etanol se
distribuye en dos tubos de ensayo un tubo para control, al otro tubo se
le aade una mezcla recin preparada de de 1 mL. de cido pcrico al
1 % en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.
Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de
agrupamientos lactnico (cumarinas).

Tomar dos tubos de ensayo de la muestra ya disuelta en etanol.

Para el ensayo de Cumarinas voltiles; En un papel filtro sembrar
unas gotitas de KOH , envolver en el tubo donde est la muestra
amarrarlo y llevar a bao Mara por 5 minutos y sacar el papel filtro,
llevar al UV el anillo de color amarillo verdoso fluorescente nos
indica positivo (+)
Para el ensayo de Cumarinas fijas, se siembra en un papel filtro dos
punto de muestra y a uno de los puntos agregamos una gotita de KOH
y se lleva al UV, si uno de los puntos presenta fluorescencia amarillo
verdoso el resultado es positivo (+).

Ensayo para Fenoles y Taninos

A una fraccin del extracto ya disuelto en etanol se toma 1 mL,
adicionamos de 3 a 5 gotas de cloruro ferrico (FeCl3), lentamente,
fijndonos la variacin y aparicin de un color o precipitado verde.
Rojo, azul o negro indica la presencia de Fenoles y/o Taninos. La
coloracin azul indica posible presencia de Taninos hidrolizables, y
coloracin verde de taninos condensados. Si el color o precipitado es
Prpura o rojo-pardo indican presencia de Fenoles.

Ensayo para Saponinas.

A una fraccin del extracto diluida en etanol se le adiciona 4 mL de
agua y se agita la mezcla fuertemente durante 2 minutos, dejar reposar
5 minutos.
Si aparece una espuma jabonosa de ms de 2 mm de altura en la
superficie del lquido y persiste esto indica la presencia de
saponinas.

Ensayo para aminocidos y aminas (Ninhidrina)

A una fraccin el extracto diluido en etanol se le adiciona 1 mL de
disolucin de ninhidrina al 5 % en etanol. Se calienta en bao de agua
de 5 10 minutos.
La aparicin de una coloracin azul violcea indica la presencia de
aminas.

MATERIAL FRESCO

Determinacin de glicsidos cianognicos (glicocianos)

Es la nica prueba que se realiza, sin someter a extraccin con
solvente el material utilizando material fresco, debido a la
inestabilidad de estos compuestos, para esto se hace lo siguiente:
Una cierta cantidad (aproximadamente 10 g.) de material fresco se
extrae con cido diluido (H 2SO4, HCl) en un matraz con tapa
esmerilada, del cual se cuelga una tira de papel picrato previamente
preparada, todo el conjunto se coloca a la estufa a 60 C,
observndose la coloracin del papel a 30, 60, 120, minutos, un
cambio de amarillo (inicial), a pardo es prueba positiva (Matos 1988)
Preparacin del papel de picrato. Se mezclan volmenes iguales de
solucin de carbonato de sodio al 10% con solucin de cido pcrico
al 10%, en la mezcla se sumerge tiras de papel filtro, se deja secar al
aire y quedan listos para usarse.
 EXTRACTOS
ENSAYO O PRUEBA
Hx CH2Cl2 MeOH
D
Alcaloides W
M
Triterpenos y
Esteroides
Quinonas
Flavonoides
Glicsidos
Cardiotnicos
Lactosas y Cumarinas
Fenoles y Taninos
Saponinas
Aminocidos y Aminas
Lpidos y/o Aceites
Esenciales
Carotenos

Leyenda:
Ensayo positivo (+), contenido: (+) Poco; (++) Medio; (+++) Abundante
Ensayo negativo (-)
No s realiza el ensayo para este tipo de extracto (No).
 CAPITULO II: METODOLOGA DEL ANALISIS
FITOQUIMICO

El anlisis fitoqumico comprende 04 etapas bien definidas.

a) Recoleccin y clasificacin botnica de la especie en estudio
b) Extraccin, separacin, purificacin de los constituyentes
qumicos
c) Determinacin estructural
d) Ensayos biolgicos y farmacolgicos
A) Recoleccin de la especie en estudio.
Debe hacerlo un botnico, las plantas herbceas son generalmente
utilizadas en su totalidad.
Plantas leosas, se seleccionan las partes a estudiar (hojas,
corteza, raz, frutos, flores, semillas, madera.
Una muestra o excicata debe depositarse codificado en un
HERBARIUM
B. EXTRACCIN
PREPARACION DEL MATERIAL VEGETAL
Antes de la extraccin se debe secar y pulverizar el material
vegetal, teniendo cuidado de que durante el proceso de molido no
se caliente el material vegetal. Evite secar el material con luz
solar directa, pues algunos compuestos podran degradarse,
tambin es importante eliminar lquenes u otros parsitos cuando
se trabaja con cortezas. En el caso de races un lavado con agua
remover todas las trazas de tierra.
Depende del objetivo del estudio.
Si se pretende estudiar compuestos sensibles al calor la
extraccin debe hacerse a temperatura ambiente.
Si el estudio va dirigido a comprobar la actividad biolgica la
extraccin es preferible hacerlo en agua con solucin
isotnica (0,9% NaCl), o preparar un extracto
hidroalcohlico etanol/H2O (70:30), evitando cualquier
incremento de temperatura.

Los mtodos de extraccin ms usuales son:

1. Extraccin en fro o caliente
2. Extraccin continua (Soxhlet) a temperatura de ebullicin del
solvente que se utiliza para la extraccin
 3. Destilacin por arrastre de vapor, utilizado principalmente
para la extraccin de aceites esenciales.
Los solventes para las extracciones pueden ser soluciones
diluidas de cidos de bases, cuando se quiere aprovechar la
acidez o basicidad de las molculas como por ejemplo, en el
caso de los alcaloides.
Frecuente se utiliza solventes orgnicos de bajo punto de
ebullicin y de baja reactividad (alcohol, metanol, acetato de
etilo, cloroformo, diclorometano)
Preferentemente se desgrasa el material vegetal con Hexano a
ter de petrleo.
Utilizar alcohol o metanol es importante para extraer todos los
metabolitos secundarios de la especie en estudio, pero se
obtiene un crudo muy complejo y su fraccionamiento por
consiguiente es un problema.
Se recomienda lo siguiente para la extraccin Hexano ter
de petrleo-Acetato de etilo-Etanol Metanol-Etanol/H2O

Los extractos son evaporados a presin reducida en rotavapor liofilizados

si se trata de extractos acuosos.
TECNICAS DE SEPARACION Y PURIFICACION DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

Una vez que se tiene preparados los extractos se inicia el fraccionamiento

cromatogrfico con la finalidad de aislar y purificar los compuestos
presentes en el extracto vegetal .esto se consigue utilizando diferentes
tcnicas cromatogrficas. A las fracciones obtenidas de la primera
separacin que todava son mezclas de numerosas sustancias se someten a
diferentes pruebas biolgicas, con la finalidad de determinar la actividad
biolgica. Las fracciones activas se someten a diversos procedimientos
cromatogrficos hasta obtener el compuesto puro. Este es a menudo un
procedimiento largo e incluso puede llevar a la prdida de la actividad
biolgica despus de numerosos pasos cromatogrficos por modificacin
del principio activo en el adsorbente

CROMATOGRAFIA

El principio bsico de la cromatografa consiste en una distribucin

desigual entre dos fases: estacionaria y mvil de un determinado
compuesto. Esto permite separar una mezcla de sus componentes de
acuerdo a sus diferentes distribuciones en un sistema de dos fases dadas.
La fase mvil puede ser gas o lquido Cromatografa en fase gaseosa

La fase estacionaria (lquido slido) Cromatografa en fase lquida

TECNICAS CROMATOGRAFICAS PARA LA SEPARACION DE
COMPUESTOS

A. CROMATOGRAFIA DE ADSORCION
Consiste en pasar la muestra sobre un adsorbente slido (fase
estacionaria) y un eluyente lquido (fase mvil) para el caso de
cromatografa lquida; o un adsorbente slido y un eluyente gaseoso
para el caso de cromatografa de gases.

ADSORBENTES

Deben tener alta capacidad de adsorcin, ser insolubles en el

eluyente, e inertes a las sustancias a ser separadas por cromatografa
La estructura porosa y la granulacin dependern si se usa columna
gravitacional o HPLC.
Los adsorbentes ms usados son:
Almina (xido de aluminio) se utiliza para compuestos poco
polares, tiene mayor poder de adsorcin, permite a veces
separar ismeros, la proporcin que se utiliza es (1:20), es
muy utilizada para la separacin de alcaloides.
Silica gel (xido de silicio) se utiliza para separar la mayora
de compuestos; se emplea generalmente en proporcin (1:40)
.Peso de la muestra a peso de slice
Silicato de magnesio (Florisil) tiene una Adsorbancia
intermedia, se utiliza para separar lpidos, glicsidos, azcares.
Poliamida, se utiliza para separar compuestos que pueden
formar puentes de hidrgeno tales como aminocidos,
polihidroxicompuestos (compuestos con muchos grupos OH).

B. CROMATOGRAFIA DE PARTICION

La fase estacionaria y la fase mvil son lquidos inmiscibles.

En general se emplea un sistema de dos fases, una rica en solvente
orgnico con que se eluye el cromatograma y la otra rica en agua que
constituye la fase estacionaria anclada al soporte. El conjunto fase
mvil-fase estacionaria puede estar integrado por ms de dos
componentes.
Un ejemplo tpico: butanol-cido actico-agua ( 4:1:5) para separar
alcaloides.
 Los prototipos de cromatografa de particin lo constituye la:
cromatografa de papel y la cromatografa gas-lquido que son empleados
como mtodos analticos.

CROMATOGRAFA DE PAPEL

En la cromatografa de papel la muestra a separar es adsorbida sobre el

punto de aplicaciones del soporte: papel, el cual retiene el agua (fase
estacionaria), pero se puede saturar con otra fase estacionaria, por ejemplo
dejndole equilibrar con esta en una cmara cerrada, cmara
cromatogrfica, antes de permitir el flujo del eluyente (fase mvil).
Cuando la muestra se disuelve mejor en solventes no polares el papel se
impregna con este solvente y el cromatograma se desarrolla en la fase
acuosa. Esta tcnica se conoce como cromatografa en fase reversa. En este
caso los primeros a fluir son compuestos ms polares. Esto se puede aplicar
a cualquier tcnica cromatografica de papel.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA (CCF)

Es una variante de la CC o en papel. La fase fija o estacionaria esta

formada por una capa delgada uniforme de adsorbente (cromatografa de
adsorcin) y que sirve como soporte de la fase mvil (cromatografa de
particin), tiene la ventaja y la rapidez del desarrollo, y la versatilidad de
las operaciones que se pueden hacer sobre el sustrato: se abrevia TLC. La
CCF se puede preparar en los laboratorios comprarse en las casas
comerciales llamados cromatofolios de 20cmx 20 cm, que se cortan de
acuerdo a las necesidades, en este caso el soporte puede ser de aluminio,
plstico y el adsorbente de 1mm de espesor muy uniforme. Una de las
variantes de la cromatografa de capa fina es la cromatografa preparativa
donde el soporte es de vidrio de 1 mm. de espesor.

Para la preparacin de las placas, se utiliza el mtodo de inmersin en una

suspensin del adsorbente en agua en CHCl3/ MeOH, es recomendable
utilizar un esparciador para asegurar una capa uniforme del espesor
deseado que va desde 0,25 hasta 1 mm.
Las placas se colocan sobre una bandeja fija, despus de lavadas y secadas,
se esparcen con una suspensin del adsorbente en agua destilada. Las
placas comerciales tienen aditivos (generalmente yeso) para aumentar la
fuerza de adicin al vidrio, indicadores de UV fluoresina de sodio que
fluorese cuando se expone a la luz de 254nm y el cido sulfnico de
hidroxipireno que fluorese a 366nm.

Hay una gran variedad de adsorbentes: Silicagel, alumina (neutra, bsica,

cida), celulosa, celita, poliamida. El adsorbente ms comn es la silicagel
con granulaciones de 20 a 1000 A , para compuestos no polares.
GROMATOGRAFIA DE COLUMNA (CC)

Es la ms usada en la separacin de productos naturales con tal finalidad se

emplean adsorbentes ya mencionados en la cromatografa de capa fina: gel
de slice, almina celulosa, florisil, poliamida, sephadex, , intercambiadores
de iones, y resinas de intercambio inico.
Actualmente se utilizan otros adsorbentes que permiten trabajar en fase
inversa para la separacin de compuestos polares.
PREPARACION DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS

COLUMNA SECA.- Se elige la columna cromatografica, dependiendo de

la cantidad de muestra a cromatografiar, luego se llena la columna con una
lluvia uniforme del adsorbente previamente seleccionado, tiene el
inconveniente que el inchamiento del absorbente con el eluyente puede
causar obstrucciones y disminuir la velocidad de flujo de solvente,
generalmente la altura del relleno es de 12 cm, pero tambin depende del
dimetro de la columna y la muestra a cromatografiar. La muestra se coloca
pre-adsorbida en una pequea cantidad de solvente.
Es necesario tener en cuenta que la muestra no puede permanecer mucho
tiempo en la columna en contacto con el adsorbente y el solvente, ya que se
puede descomponer, o la difusin de las bandas donde concentran los
compuestos inicialmente, con la prdida consecuente de la resolucin.
Este sistema puede modificarse, cuando se empaqueta el adsorbente muy
apretado y el flujo del eluyente es forzado a pasar por la columna con la
ayuda de presin en el eluyente y vaco a la salida de la columna.
COLUMNA HUMEDA.- Tiene 02 variantes: a).-Se coloca el solvente
previamente seleccionado y luego se deja caer lentamente el adsorbente, se
golpea para ayudar la compactacin sea uniforme. B).- La segunda se
prepara una suspensin uniforme del adsorbente de la fase mvil y se deja
caer sobre una capa de la fase mvil contenida en el tubo de vidrio. Esta
tiene la ventaja de una composicin ms uniforme y el inchamiento del
adsorbente ocurre antes de poner en la columna y evita las obstrucciones.
La muestra se introduce en solucin concentrada, preferentemente disuelta
en el mismo solvente sobre la superficie del adsorbente, tambin la muestra
se puede colocar pre-adsorbida con el mismo solvente que se compact la
columna.
La elusin se comienza con el solvente menos polar y su polaridad se
incrementa dependiendo de los resultados de la separacin.

CROMATOGRAFIA PREPARATIVA (CP)

Se utiliza cuando se tienen mezcla de sustancias que son difciles de

separar por (CC).
El soporte o absorbente va adherido a una lmina de vidrio, el espesor del
soporte es ms menos de 1mm de espesor (30 g) de absorbente para una
placa de 20x20 cm.
La muestra se siembra a 1,5 cm de uno de los extremos de la placa y en
toda la placa, previamente se elige el absorbente adecuado, es decir donde
se observa mayor separacin de los compuestos se introduce en cmaras o
celdas cromatogrficas y se procede a su elusin, en algunos casos
dependiendo de la separacin de los compuestos se pueden eluir varias
veces, hasta lograr una buena separacin.
Se retira los compuestos de la placa y se extrae con solvente apropiado del
adsorbente.
CROMATOGRAFIA GASEOSA (CG.)
Posee como fase mvil un gas inerte que generalmente es nitrgeno, la fase
estacionaria puede ser un lquido (cromatografa gas-lquido) un slido
(cromatografa gas- slido)
As mismo puede usarse combinando con tcnicas espectroscpicas como
espectrometra de masa (CG-EM) en tal caso se necesita para adoptar las
condiciones del cromatgrafo gaseoso a los de vaco del espectrmetro de
masa, y eliminar el gas portador que en (CG-EM) es el Helio.
Esta tcnica es analtica y es necesario contar con los patrones para poder
comparar las sustancias que se estn analizando.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION O PERFORMANCE

(HPLC)

Equipo de tecnologa de punta, donde la fase mvil y la fase estacionaria

son lquidos, se utiliza para separar mezclas que no se pueden separar por
las tcnicas anteriormente indicadas, sobre todo cuando se trata de
compuestos polares, en este caso los eluyentes que se utilizan son de grado
HPLC, inclusive se puede utilizar agua, acetonitrilo que son solventes muy
polares.
Estos equipos pueden estar acoplados a detectores como : IR, UV, EM y
RMN.
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

Un intercambiador de iones es un material insoluble en H2O que tiene

grupos funcionales capaces de intercambiar iones de carga similar de la
solucin circundante. Hay materiales sintticos y naturales orgnicos o
inorgnicos, entre estos se encuentran las zeolitas, xidos, fosfatos de
metales del grupo IV. Entre los orgnicos naturales tenemos algodn,
papel, que son sulfonados o fosfatados.
Las resinas generalmente tienen una matriz de derivados de poli estireno,
celulosa, agarosa, y se les puede clasificar de acuerdo a los grupos inicos.
Las resinas generalmente tienen una matriz de derivados de poli estireno,
celulosa, agarosa, y se les puede clasificar de acuerdo a los grupos inicos.
1. Resinas aninicas ( intercambian cationes)
a) R-SO3- fuertemente cida Dowex 50
b) R-OPO3= fuertemente cida Doulite C-63
c) R-CH2-CO2- fuertemente cida Amberlite CG-50
2. Resinas cationicas ( Intercambian aniones)
a) R-CH2NMe3+ fuertemente bsica Dowex 1-A6
b) R-NHMe2+ fuertemente bsica Doulite A-30
c) R-C2H4NH3 fuertemente bsica Amberlite 45
Las resinas se empacan en columnas generalmente, para lo cual es
necesario acondicionarles primero, pues comercialmente se vende secas, se
deben dejar en reposo con agua (el intercambio inico tiene lugar en el H2O
por lo tanto se realiza en medio acuoso. Esto provoca un aumento de las
resinas. El sobrenadante se decanta y el proceso se repite varias veces.
Las resinas hinchadas se ponen en contacto con la solucin del contra in
que ser desplazado de la muestra, se lava hasta la neutralidad para
asegurar que toda la resina ha intercambiado el contrain y se equilibra con
la mezcla de solvente donde se disuelve la muestra. Posteriormente se lava
la columna con la mezcla del solvente hasta asegurar que no salgan iones
de la columna y se eluyan los compuestos de la muestra introducida con
una base o un cido segn sea el caso.
El orden de elusin depender de la naturaleza inica, los ms dbiles sern
desplazados primero. Los ms fuertes son adsorbidos aumentando la
concentracin de los iones en el eluyente.

ELUCIDACION (DETERMINACIN DE LA ESTUCTURA

QUIMICA) DE COMPUESTOS ORGANICOS

La elucidacin determinacin de la estructura qumica de compuestos

orgnicos, puede constituir una meta en s o ser una etapa clave para
trabajos posteriores.
Los mtodos espectroscpicos especialmente RMN; IR, UV-
espectromtricos de masa de alta y baja resolucin, son de uso cotidiano
para este tipo de trabajo.

ESPECTROSCOPIA DE IR: Las que se observan en los espectros de IR

van de 4000 a 200cm-1 y estn relacionados con los cambios y estados
vibracionales y rotacionales que presentan las molculas. La posicin e
intensidad de las bandas corresponden a un grupo funcional que se
encuentran distribuidas en varias zonas ms menos constantes del
espectro. El anlisis del espectro ofrece informacin sobre grupos
funcionales presentes en la molcula tales como la presencia de: Grupos
OH, NH, CO, CHO COOOH, as como el carcter aliftico y aromtico del
compuesto.
La regin comprendida entre 1300 y 900 cm-1, representan las huellas
dactilares de las molculas, pues las bandas de esa regin corresponden a
las vibraciones y rotaciones del esqueleto carbonado y por lo tanto son muy
sensibles a los diferentes arreglos moleculares, an para sustancias muy
similares, por eso se debe considerar cuidadosamente esta zona al
establecer la identidad de dos muestras por comparacin de sus IR

43. 8 20. 9
3 14

15 32. 8
N
48. 8 5
101. 8 39. 7
21 20
6 34. 5
19
99. 3 35. 9 7

H3C O 9 134. 2
O 17 26. 4
18
57. 9 65. 5
56. 2 152. 7 10 8 69. 2 16
2
24. 9
11 13
137. 8 122. 6

H3C O 12
N H
141. 8
60. 6
OH 171. 6
22
23
24

CH3
O 28. 1
9. 8

Fig. . Espectro de IR de Aspidoalbina.

ULTRA VIOLETA (UV/VIS).-Se correlaciona con las transiciones

electrnicas, es decir la transicin de un electrn desde un estado
fundamental a un estado excitado. La absorcin de la energa requerida
para esta transicin se registra en la regin UV (190nm-380nm) y en la
regin visible (380nm-70nm).- las seales del UV son muy anchos a
diferencia de las seales del RMN e IR debido a los mltiples cambios de
estados vibracionales y rotacionales que acompaan a las transiciones
electrnicas. Para que se observe una absorcin mxima debe existir en la
molcula un cromforo generalmente conjugado, por un sistema de
instauraciones mltiples, tal como dienos, enona, aromtico etc.

ESPECTROMETRIA DE MASAS (EM). Un compuesto orgnico que se

expone a una corriente de electrones de alta energa (frecuencia de 70 ev)
se degrada en fragmentos de las cuales las especies con cargas positivas se
registra en el espectro de masa; segn la unidad de masa por el nmero de
cargos positivas (m/e donde e=1). Un aparato de EM de alta resolucin
registra la unidad de masa del in molecular (la masa que pierde un solo
in sin degradarse), con hasta 04 mas cifras decimales el cual permite
establecer la formula molecular correspondiente.
La fragmentacin es una caracterstica de los diferentes compuestos y esto
es aprovechado para la ubicacin de ciertos grupos funcionales en entornos
particulares de la molcula.
 6 5

21
N
9 19
8 20 18
10 7

11
CH3
13 2
12 3
15
H3C O N 14 16

H O 22
O CH
23
3

Fig. . Espectro de masa de 11-metoxytubotiwina

RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR (RMN).- Mtodo basado en

la absorcin de la energa, por el cambio del espin molecular de tomos
sometidos a un campo magntico externo. El anlisis del espectro de RMN
ofrece evidencias especficas sobre las caractersticas de los ncleos que
forman una dada molcula, y los ms frecuentes analizados son 1H, 13C,
15
N, 19F y 31P. Siendo los dos primeros utilizados en anlisis de rutina.
Los desplazamientos qumicos de las seales de RMN de 1H (0-20ppm) y
de 13C (0-220ppm) dan informacin a cerca de la naturaleza de hidrgenos
(alifticos, aromticos, olefnicos, geminales y heteroatomos) y de 13C.

Por la integracin de las seales y la magnitud de la contaste de

acoplamiento, multiplicidad de la seal que se observa en el espectro de 1H
se deduce el # de hidrgenos y el modo de distribucin en la molcula.
Mientras que el nmero de seales presentes en el espectro de carbn,
indica el nmero de carbn presentes en la estructura, la multiplicidad
muestra el # de tomos de Hidrgeno unidos al C responsable de la seal.
Las tcnicas de dos y tres dimensiones ofrecen informacin mucho ms
directa y presentan ventajas enormes cuando se trata de esqueletos nuevos.
 170.404
168.770

168
9.0
8.795
159.778

160
8.5

152
24
8.0

H3C
144.772

144
O
7.5

136
11
10
7.250
7.022

9
128.856

12
24

128
7.005

7.0

13
H3C

120.044

120
O

N
H
6.5
6.401

2
6.387

6
11
10

112
O 22
14
21
9

12

6.0
8

13

105.574

20

104
15

23
5.5
N
H

19
97.338

16

O CH3

96
7

95.952
2
6

18

ppm
5
5.0

CH3
O 22
14
21

88
N
20

ppm
15

23

77.310
4.5

80
76.996
19

76.674
16

O CH3

72
18

3.863
4.0
5

3.775
CH3
3
N

3.763
65.278 3.754

64
3.5

3.114
3.099
55.455 3.072

56
54.183 3.053
53.553 2.881
3.0

51.143 2.867
2.859

Fig. . Espectro de 1C de 11-metoxytubotiwina

48
2.846
45.170 2.820
Fig. . Espectro de 1H de 11-metoxytubotiwina

43.556 2.518
2.5

40.898 2.507

40
2.029
2.007
1.850
2.0

1.843

32
30.532 1.830
1.818
28.102
1.810
1.805
1.5

24
23.703 1.792
1.243
0.858
0.843

16
0.828
1.0

0.824
11.503 0.810
0.795

8
0.710
0.5

0.696
0.680
CAPITULO V: METODOS FISICOS Y ESPECTROSCPICOS PARA LA
ELUCIDACIN DECOMPUESTOS RGNICOS

ESPECTROSCOPIA DE ULTRA VIOLETA (UV)