SAKAI (1989)

Explica un proceso de ndole biotecnolgica para preparar la pectina , consiste en someter el

tejido vegetal que contiene las sustancias pecticas a la accin de microorganismos del genero
Bacillus, cuya actividad permite la liberacin y recuperacin de las pectinas. Asi se obtiene
fcilmente una pectina de alto peso molecular y con buen rendimiento

Produccin de pectina.

La pectina, como se mencion anteriormente, es una sustancia muy

utilizada en la fabricacin de alimentos, cosmticos y medicina; por lo que es

considerada una sustancia industrialmente importante y es de gran inters

producirla a escala industrial [4].

Sakai y Okushima [14] han intentado producir pectina utilizando cscara

de mandarina (Citrus unshiu) como material crudo y desarrollando un mtodo

microbiolgico a travs del cual la pectina pueda ser extrada enzimticamente

de la cscara de los ctricos sin la necesidad de macerar el tejido vegetal. En el

mtodo microbiolgico desarrollado para la produccin de pectina se utiliza

la protopectinasa (PPasa) de Geotrichum klebahnii (G. Klebahnii). El mtodo

consiste en crecer aerbicamente G. klebahnii en un cultivo batch y luego de 24

hs se le adiciona al mismo una suspensin de cscara de mandarina y se agita a

30 C por 15 a 20 hs. Este tipo de procesos puede utilizarse como una alternativa

a los mtodos qumicos tradicionales de extraccin: extraccin cida (pH 2) en

caliente (80-100C) [8].

En los ltimos aos, la ingeniera gentica ha provocado una revolucin,

en las industrias relacionadas con procesos microbiolgicos, debido a la

posibilidad de clonar y expresar en forma heterloga los genes de estas enzimas

consiguiendo cantidades y purezas imposibles de alcanzar por mtodos

convencionales. Esto ha permitido armar mezclas de enzimas ptimas para

cada uno de los procesos en los que se vea involucrado su uso [8]

Utilizando Microorganismos del genero Bacillus

En este procedimiento se somete el material vegetal a la accin de microorganismos del genero

Bacillus, los cuales liberan las pectinas que luego son recuperadas. El principal problema es que
suceden reacciones en paralelo: la liberacin de pectinas y al mismo tiempo el deterioro de la
pectina obtenida.

Las condiciones de cultivo para los microorganismos debe ser el ptimo para maximizar la
cantidad de enzima determinada. Condiciones usuales son: 20-37 C. por 10-50 horas. El cultivo
debe ser agitado, de pie o aireacin. Despus de esto se filtrar los residuos. Este filtrado debe ser
mezclado 3 veces el volumen de agua- solvente orgnico miscible como etanol para precipitar la
pectina.

Luego los inconvenientes de este procedimiento es que se debe trabajar con microorganismos
(tener mucho cuidado con las condiciones de cultivo). Adems se debe tener cuidado con la
reaccin en paralelo que sucede.

WEB: http://www.patentstorm.us/patents/4835262/fulltext.html

CITA: Sakai. T, (1989). Process for preparing pectin. U.S. Patent 4,835,262.

DESCRIPCIN DETALLADA DE LA INVENCIN

Los microorganismos utilizados en la presente invencin pertenecen al gnero Bacillus. Sus

ejemplos son los siguientes: Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus
circulans, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacilluslicheniformis, Bacillus pumilus, Bacillus
macerans y cepas similares a estas cepas y sus mutantes.

El trmino "cepas similares a estas cepas" mencionados anteriormente significa que poseen una
actividad liberadora de pectina, pero sustancialmente ninguna actividad de descomposicin de la
pectina y tienen armas bacteriolgicas propiedades similares a las de estas cepas. El trmino
"mismos mutantes" incluyen a cualquiera de los mutantes de las cepas especficamente
ejemplifica y cepas similares correspondientes que son inducidas artificialmente por medios
qumicos o fsicos o espontneamente son inducidas. Medios artificiales que pueden utilizarse
para themutation son las conocidas en el arte.

Adems, microorganismos pertenecientes al gnero Bacillus, que producen una enzima liberadora
pectina pero sustancialmente no descomposicin pectina, estn incluidos en la presente invencin
en la medida en que la que producen dicha enzima, incluso si fueran nuevas cepas.

Como preferibles microorganismos utilizados en la invencin presente, se mencionan los

siguientes todos los microorganismos depositados con el Instituto para la fermentacin, Osaka,
(figuras bajo IFO denotan el nmero de depsito):

(1) Bacillus subtilis IFO 3108, 3134, 3336, 3513, 12112, 12113, 12210, 13719, 13721, 14117and
14140

(2) Bacillus amyloliquefaciens IFO 14141

(3) Bacillus cereus IFO 3002 y 3132

(4) Bacillus circulans IFO 13632

(5) Bacillus coagulans IFO 12583

(6) Bacillus firmus IFO 3330

(7) Bacillus licheniformis IFO 14206

(8) Bacillus pumilus IFO 12087

(9) Bacillus macerans IFO 3490

Entre estos microorganismo, Bacillus subtilis IFO 12113and Bacillus subtilis IFO 13719 son
especialmente favorables.

Para el aislamiento de pectina de un tejido de la planta segn el mtodo de la invencin presente,

el microorganismo ms arriba puede ser inoculado directamente en un tejido de la planta a tratar
y cultivadas bajo acuerdo de condiciones estticas, agitacin o agitacin con mtodos
convencionales, o un caldo de cultivo que se obtiene por cultivar el microorganismo anterior o
procesar su material puede llevarse en contacto con el tejido de la planta.

Medios de comunicacin para ser utilizadas para el cultivo del microorganismo, es decir, el cultivo
de semillas, no son particularmente limitadas y pueden ser cualquier medio que contiene los
diversos nutrientes normalmente utilizados en el cultivo convencional de microorganismos de
thegenus Bacillus. Los medios de comunicacin habituales pueden contener adecuadamente
peptona, hidrolizado de casena, Extracto de levadura y glucosa y, si las circunstancias requieren,
sales inorgnicas como fosfatos, sales de magnesio, sales de potasio, etc.. Ciertos tipos de tejidos
vegetales pueden alsobe usado como el medio de cultivo de semillas, sin la adicin de los
nutrientes, pero despus de la esterilizacin por calor. La cubierta de piel o segmento de ctricos
es un medio especialmente ventajoso.

Las condiciones de cultivo para los microorganismos en el medio mencionado, se determinan

correctamente para maximizar la cantidad producida de la enzima prevista, condiciones habituales
estar 20 -37 C. 10-50 horas. La cultivationmay realizarse bajo agitacin, permanente o agitacin
aireacin, o en estado slido. Por tal cultivo, se cultiva el micelio y enzimas se producen fuera del
micelio. El caldo de cultivo se puede utilizar como tales o como un material procesado, como
aconcentrate o una solucin de enzima purificada. El concentrado se puede obtener sometiendo
el caldo de cultivo, que es, si es necesario, filtrado, a un tratamiento en condiciones suaves, por
ejemplo, evaporacin a baja temperatura y baja presin orconcentration mediante una membrana
de ultrafiltracin. La enzima purificada puede obtenerse el caldo, filtrar el caldo, concentrando el
filtrado y someter el concentrado a las precipitaciones fraccionales repetidas por el sulfato de
ofammmonium adems, o filtrar el caldo y someter el filtrado a CM Sephadex cromatografa de
columna y Sephadex G-75 gel filtracin.
El mecanismo implicado en el mtodo de la invencin presente es considerado como uno en el
que una enzima producida desde los microorganismos mencionados penetra en un tejido vegetal,
acta sobre las sustancias pcticas, especialmente agua-insolubleprotopectin, a pectina soluble en
agua de forma y libera la pectina soluble en agua del tejido de la planta.

Pectina liberada de los tejidos vegetales por el mtodo de la invencin presente puede ser aislada
con arreglo a los mtodos convencionales. Por ejemplo, la solucin, tratada como se mencion
anteriormente, es filtrada para eliminar residuos, y la ismixed de filtrado con tres veces su
volumen de un solvente orgnico miscible en agua, por ejemplo, etanol, para precipitar a la
pectina. La pectina es recogida, lavada con un disolvente similar al anterior de disolvente orgnico,
por ejemplo, etanol y secada para dar pectina de alta pureza. Pectina obtenida tiene un peso
molecular ms de aprox. 110.000, independientemente del tipo de microorganismo utilizado para
el aislamiento, y es diferente a la obtenida por los mtodos qumicos convencionales en que tiene
una estrecha weightdistribution molecular y es muy similar a la pectina natural. Adems, la
pectina es conveniente para el uso como alimentos o medicinas, ya que no contiene sustancias
qumicas contaminantes. Las propiedades de pectinas obtenidas varan ms o menos, segn
thekind de materias primas utilizadas.

Aunque la presente invencin se refiere a un mtodo de obtencin de pectina de alta pureza en

una manera simple y un alto rendimiento de los tejidos vegetales, mediante la utilizacin de
microorganismos del gnero Bacillus, como se describi anteriormente, tal mtodo caracterstico
de la invencin de thepresent puede ser utilizado tambin para la extraccin de pectina de los
tejidos vegetales o para la produccin de un extracto de una planta que contienen pectina.

Adems, los tejidos de la planta utilizados en el tratamiento de la invencin presente

preferentemente son los disponibles a un precio bajo y con tan alto un contenido de pectina como
sea posible, aunque no son particularmente limitados al mismo. Algunos ejemplos son citrusfruits,
como Citrus unshiu, Citrus natsu-diadai, limn, toronja, naranja navel, naranja o similar.
Cualquiera de la cscara y la cubierta del segmento de estos ctricos pueden utilizarse como
materia prima. Es decir, tambin es posible utilizar el residueresulting de la presin de ctricos para
la obtencin de zumo de fruta. Esos residuos es barato como de oficio, y el uso del mismo tambin
sirve para la utilizacin de material de desecho. Adems de los antes mencionados, la cscara de la
fruta-bearingvegetables, como pulpa de remolacha, sanda, melones, etc. y el tallo de verduras
tales como zanahorias, bardana, rbano, etc. es preferible como materia prima.

Segn la invencin presente, la enzima que se encuentra en el microorganismo que permite actuar
sobre un tejido de la planta que contienen pectina como su constituyente, en la cultura caldo de
dichos microorganismos, o en el material procesado de tal culturebroth, no descomponer la
pectina sustancialmente, siendo diferentes de las enzimas pectinliberating conocidos que se
descomponen de pectina, y en consecuencia es posible, permitiendo que la enzima actuar sobre el
tejido de la planta al mximo, para liberar el mximo de enel de pectina y obtener pectinas con un
alto peso molecular en un alto rendimiento.