INVESTIGACIN Y DETECCIN DE SALMONELLA SP

I. OBJETIVO :
Aprender los procedimientos microbiolgicos para la prctica de salmonella en
el huevo
Interpretar los resultados
II. INTRODUCCIN
Salmonella spp. es un bacilo Gram-negativo anaerobio facultativo perteneciente a la
familia Enterobacteriaceae. Aunque los miembros de este gnero son capaces de moverse
por medio de flagelos pertricos, existen variantes no mviles, S. enterica serovar
Pullorum y S. enterica serovar Gallinarum, as como cepas no mviles debido a la
presencia de flagelos disfuncionales. Las especies de Salmonella son quimioorgantrofas,
con habilidad para metabolizar nutrientes por las vas fermentativa y respiratoria. Las
bacterias crecen ptimamente a 37C y pueden catabolizar la D-glucosa y otros
carbohidratos con produccin de cido y gas. Estos microorganismos son oxidasa
negativos y catalasa negativos, crecen en citrato como nica fuente de carbono,
generalmente producen cido sulfhdrico, descarboxilan la lisina y ornitina, y no
hidrolizan la urea. La mayora de estas caractersticas se utilizan para la identificacin
bioqumica de cepas aisladas de Salmonella.
De acuerdo con la definicin contempornea, una cepa de Salmonella tpica produce
cido y gas a partir de la glucosa en el agar hierro tres azcares, pero no es capaz de
utilizar lactosa y sacarosa en ste medio, o en medios slidos selectivos tales como verde
brillante, xilosa lisina desoxicolato y/o entrico de Hekten. Las especies tpicas de
Salmonella producen en agar hierro lisina, una rpida reaccin alcalina por la
descarboxilacin de la lisina y generan cadaverina. La variabilidad gentica observada en
este microorganismo ha originado mutaciones, e intercambio intra e intergenrico de
plsmidos lo cual ha reducido los biotipos tpicos de Salmonella. En muestras clnicas y
de alimentos se han encontrado biotipos lac+ y/o sac+; biotipos que no descarboxilan la
lisina, que incluso hidrolizan la urea, que producen indol y que crecen rpidamente en
KCN.
Las infecciones por Salmonella en humanos pueden originar varias condiciones clnicas,
incluyendo fiebre entrica (tifoidea), enterocolitis e infecciones sistmicas por
microorganismos no tifoides. La fiebre entrica es una infeccin grave asociada con las
cepas tifoidea y paratifoidea, las cuales estn particularmente bien adaptadas para invadir
y sobrevivir en los tejidos del husped. Las manifestaciones clnicas de la fiebre entrica
aparecen despus de un periodo de incubacin de 7 a 28 das y pueden incluir diarrea,
fiebre prolongada con variaciones en la misma, dolor abdominal, dolor de cabeza, y
debilitamiento. El diagnstico de la enfermedad radica en la deteccin del agente
infectivo en etapas tempranas en la sangre o en heces al inicio de la sintomatologa clnica.
El tratamiento incluye el uso de cloramfenicol, ampicilina, o trimetroprim con
sulfametoxasol para eliminar la infeccin sistmica. En pases subdesarrollados como el
nuestro, el uso indiscriminado de estos antibiticos ha originado la existencia de cepas
resistentes que causan altas tasas de mortalidad cuando se presenta un brote de este tipo.
Para diferentes tipos de alimentos, existen distintos protocolos para el aislamiento de
Salmonella, todos ellos son esencialmente similares en principio y emplean las etapas de
preenriquecimiento, enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivos
selectivos y diferenciales, identificacin bioqumica y confirmacin serolgica de los
microorganismos.
FUNDAMENTO
La presente tcnica para la deteccin de Salmonella en alimentos, describe un esquema
general que consiste de 5 pasos bsicos:
Preenriquecimiento, es el paso en donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo
no selectivo, que permite restaurar las clulas de Salmonella daadas, logrando de esta
manera una condicin fisiolgica estable.
Enriquecimiento selectivo, se logra a partir de un medio de cultivo que conjunte dos
condiciones, por un lado debe incrementar las poblaciones de Salmonella y por otro
inhibir otros microorganismos presentes en la muestra.
Seleccin en medios slidos, este punto se deriva directamente del anterior y se utilizan
medios selectivos, que restringen el crecimiento de otros gneros diferentes a Salmonella
y que permitan el reconocimiento visual caracterstico de colonias sospechosas.
Identificacin bioqumica, este paso permite la identificacin genrica de los cultivos
de Salmonella y la eliminacin de cultivos sospechosos falsos.
Serotipificacin, es una tcnica inmunolgica (antgeno-anticuerpo) que permite la
identificacin especfica de un microorganismo.
III. MATERIALES
3.1 Materiales
Muestra: huevo
90 ml de S.S.P. en Erlenmeyer
S.S.P. en tubos de ensayo (9ml)
Caldo CASO en frasco
Agar Bacillus cereus
Agar bismuto sulfito (BS)
Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD)
Agar Entrico Hectoen (HE)
Medio Rappaport Vassiliadis (RV)
Caldo Tetrationato (TT)
Pruebas bioqumica TSI , LIA .
IV. PROCEDIMIENTO
4.1 Pre-enriquecimiento
Pesar 25 g de la muestra, homogenizar con 225 ml de caldo CASO e incubar a 37 C por
24 horas.
Composicin de CALDO CASO:
Peptona de casena 17g
Peptona de soya 3g
Nacl 5g
 Glucosa 2.5 g
Di potasio de hidrogeno fosfato 2.5 g
4.2 Enriquecimiento
Tomar 0.1 ml de caldo CASO e inocular en un tubo que contiene caldo Rappaport-
vassiliadis (RV) , tomar 1 ml de caldo CASO e inocular en un tubo que contiene caldo
Tetrationato (TT) . Incubar RV Y TT en funcin a la caga microbiana.
4.3 Seleccin
De los medios de cultivo de enriquecimiento positivos sembrar en placas Petri
conteniendo los medios de cultivo selectivos solidificados estriles, por el mtodo de
siembra en estras agotamiento de superficie.
Los medios de cultivo selectivos son Agar Bismuto Sulfito (BS), Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato (XLD) y el Agar Enterico Hektoen (HE).
Una vez sembrado se incuba a 37 c por 24 horas, al cabo de los cuales se aslan las
colonias que presentan las siguientes caractersticas.
Medio de cultivo Color inicial del medio Color y apariencia de las
colonias
Bs Amarillo verdoso opaco Marrn , gris , negro ; el
medio aledao es marrn,
cambiando a negro con el
tiempo de incubacin
produciendo el efecto
halo
He Azul brillante traslucido Colonias verdes azuladas ,
azul c/s centro negro o
totalmente negras.
Xld Rojo brillante traslucido Colonias rosadas , con
centro negro o totalmente
negras.

4.4 Pruebas bioqumicas

Las colonias sospechosas sembrar por picadura profunda y estra superficial en el agar
politrpico inclinado llamado TSI y LIA. Se incuba a 37 c por 24 horas.
Las salmonellas son glucosa positiva, H2S positivos, lactosa, y sacarosa negativo;
comprobando estos resultados en el TSI .en el medio LIA descarboxilacin de lisina, as
como generalmente producen H2S pero existen variantes atpicas con reacciones
positivas a lactosa o no descarboxilacin de lisina.
Figura 1 Sembrar en la placa

V. RESULTADOS
Figura 2 Ausencia de Salmonella Figura 3 Presencia de salmonella

(Nuestra placa)

Nuestra placa es la figura 2 en la cual se observa que la placa est hecha con el agar BS
(Agar bismuto sulfito) lo que nos indicara que las colonias deben de diferenciarse con los
colores mayormente oscuros. (Martnez, 2015) Dice que al ser sembrada salmonella se
puede diferenciar en tres tipos de agares que son BS (Agar bismuto sulfito), XLD (Agar
xilosa lisina desoxicolado y HE (Agar entrico Hektoen). Ya que las colonias se van a
diferenciar mayormente en colores oscuros para cualquier tipo de agar que se utiliza, y en
el anlisis desarrollado no hay presencia de salmonella, por lo tanto en la figura 2 no se
encuentran salmonella con la identificacin de colores oscuros , a comparacin de la
figura 3 en la cual si hay presencia de salmonella.
VI. CONCLUSIONES
Se aprendi el procedimiento para la deteccin de salmonella
No se encontr salmonella en la muestra , esto quiero decir que el huevo viene
de una buena supervisin para la entrada al mercado.
Bibliografa
Martnez, A. M. (2015). Identificacin de Salmonella Enteritidis en huevo paraconsumo en la
ciudad de Mxico. Sistema de Informacin CientficaRed de Revistas Cientficas de
Amrica Latina y el Caribe, Espaa y Portugal, 11.

Andrews W.H., Flowers R.S., Silliker J., & Bailey S. (2001) Salmonella. In: Compendium of
Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.)
APHA. Washington: 357-380.