Universidade de So Paulo - Instituto de Qumica

Exame de Ingresso no Programa de Ps-Graduao em Bioqumica

Primeiro semestre de 2011

Nome: _________________________________________________________

Coloque seu nome em TODAS as pginas.

A correta interpretao das questes faz parte da avaliao, portanto, perguntas no sero respondidas
durante a prova pelas professoras.
No responda mais de uma questo por folha, pois as pginas sero separadas para a correo.
Responda utilizando as prprias folhas das questes, utilizando o verso se necessrio.
No sero fornecidas folhas adicionais.
Esta folha e a ltima podem ser utilizadas como rascunho e entregues juntamente com as questes.
Use caneta.
Responda s questes considerando mecanismos moleculares sempre que possvel. Seja claro e especfico.
Esquemas, desenhos e tabelas podero ser usados nas respostas, mas lembre-se de indicar o que est sendo
representado (esquemas e desenhos podem ser feitos lpis).
O exame tem quatro horas de durao.

O resultado deve sair at 11/02/2011 na Secretaria de Ps-Graduao do IQ.

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1. O glucagon um hormnio peptdico de 29 aminocidos, cuja sequncia mostrada a seguir:

NH3+-His- Ser- Gln- Gly - Thr -Phe -Thr - Ser - Asp - Tyr - Ser - Lys -Tyr - Leu - Asp -
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Ser - Arg - Arg - Ala -Gln - Asp - Phe - Val - Gln - Trp - Leu - Met - Asn - Thr-COO
16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29

Estudos mostram que nos diabticos do tipo I, a falta de insulina acompanhada de hipersecreo de
glucagon. Os diabticos so tratados atualmente com insulina exgena, mas alguns pesquisadores
sugeriram que o tratamento deveria incluir uma estratgia para reduo do efeito do glucagon, atravs da
administrao de antagonistas do glucagon. Para esta finalidade foram sintetizados vrios anlogos do
glucagon (Tabela abaixo) e estes foram testados quanto a suas capacidades de se ligarem aos receptores e
de iniciarem a transmisso do sinal.

Anlogo do Glucagon Afinidade de Ligao (%) % Atividade

Glucagon 100 100
desAsp 9 45 8
Asp9 Lys 54 0
Lys12 Ala 17 60
Lys12 Glu 1 80
Arg17 Ala 38 29
Arg17 Glu 21 95
Arg18 Ala 13 94
Arg18 Glu 6 100
desHis1 63 44
desHis1-desAsp9 7 0
desHis1-Lis9 70 0
O prefixo des indica que o aminocido especfico foi eliminado. As setas indicam substituio do
aminocido. A afinidade de ligao refere-se capacidade do anlogo ligar-se a receptores de membrana
heptica. A atividade representa a capacidade de estimular a produo de AMP cclico (cAMP).

1a. Por que a hipersecreo do glucagon agravaria o quadro de diabetes? Esquematize o mecanismo de
ao do glucagon no hepatcito.
1b. Calcule o ponto isoeltrico (pI) aproximado do glucagon.
1c. Que concluso voc tiraria em relao s modificaes dos aminocidos nas posies 12, 17 e 18?
1d. Dos anlogos testados qual o melhor antagonista do glucagon? Justifique.
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2. Voc quer purificar as protenas de uma mistura utilizando uma combinao de cromatografia de filtrao
em gel (tambm conhecida como cromatografia de excluso por tamanho) e uma cromatografia de troca
inica. Descreva o protocolo que voc utilizaria para separar essas protenas, descrevendo o pH do
tampo a ser utilizado e a ordem de eluio das protenas.
As protenas na mistura tm as seguintes caractersticas:
Protena A: pI= 4,2; massa molar 40 kDa
Protena B: pI= 4,4; massa molar 70 kDa
Protena C: pI= 8,0; massa molar 42 kDa.
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3. Uma enzima michaeliana, cuja conformao espacial estvel entre pH 3 e pH 9, somente ativa quando
um determinado resduo de histidina de sua estrutura encontra-se protonado. Faa, no mesmo grfico, as
curvas aproximadas da velocidade inicial da reao (v0) que esta enzima catalisa em funo da
concentrao de seu substrato nos trs casos seguintes:
3a. reao em pH 3
3b. reao em pH 6
3c. reao em pH 3, em presena de concentrao de inibidor no competitivo (I) tal que 25% das
enzimas encontram-se na forma de complexo enzima-inibidor (EI).
Use valores arbitrrios em ordenadas e abcissas e especifique as unidades utilizadas para medir a
velocidade e a concentrao.
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4. Os crocodilos podem permanecer mais de uma hora submersos, apesar de terem uma concentrao de
mioglobina cerca de 100 vezes menor do que a de mamferos que mergulham, como as baleias. A
hemoglobina de crocodilos apresenta vrias diferenas na estrutura primria quando comparada
humana. O grfico abaixo foi obtido com experimentos in vitro usando hemoglobina de crocodilos
(crculos) e do homem (quadrados) em duas situaes: na ausncia (smbolos vazios) e presena
(smbolos cheios) de CO2.

4a. Proponha uma hiptese para explicar a resistncia dos crocodilos falta de oxigenao.

Experimentos semelhantes aos do item 4a foram feitos usando uma hemoglobina hbrida [cadeias de
crocodilos + cadeias humanas] (crculos) e uma hemoglobina hbrida modificada [cadeias de
crocodilos + cadeias humanas portando vrias substituies de aminocidos] (quadrados) em duas
situaes: na ausncia (smbolos vazios) e presena (smbolos cheios) de CO2.

4b. O que pode ser deduzido, comparativamente, sobre as estruturas das cadeias e das
hemoglobinas humana e de crocodilo?
4c. Faa uma hiptese para explicar o comportamento da hemoglobina hbrida modificada.
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5. Muitos animais dependem das reservas de gordura para produo de energia durante perodos de
hibernao, migrao e outras situaes que envolvem mudanas radicais no metabolismo. Uma das
mudanas mais importantes no metabolismo de gorduras a que ocorre no urso-cinzento. Esses animais
permanecem num contnuo estado de dormncia por perodos de at sete meses.
Diferentes de outros animais, eles mantm a temperatura corporal entre 32 e 35 oC, muito prxima da
temperatura normal (no hibernativa). Mesmo gastando 6.000 kcal por dia, os ursos no comem, bebem,
urinam ou defecam por meses.
Estudos experimentais demonstram que, durante a hibernao, os ursos sobrevivem exclusivamente da
gordura estocada. Por exemplo, a ureia produzida pela degradao de protenas reabsorvida nos rins
para que o nitrognio possa ser reutilizado na sntese de aminocidos. Responda, justificando seu
raciocnio, como o urso durante a hibernao, utilizando as reservas de gordura pode:

5a. obter energia para manter a temperatura corprea, sintetizar protenas e outros metablitos.
5b. manter a glicemia.
5c. Considerando-se que o urso perde gua durante a hibernao (por exemplo, ao expirar o ar quente e
mido que sai de seus pulmes), explique como possvel, com o metabolismo da gordura, repor
parte da gua perdida.
5d. Por que, nessas situaes, grandes animais utilizam gordura e no carboidratos (como o glicognio)
para armazenar energia?
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6. A estabilidade da massa corprea e do aspecto geral de um indivduo esconde as grandes flutuaes

dirias do metabolismo. Por exemplo, a ingesto de alimentos submete o organismo a situaes opostas,
de abundncia e escassez de nutrientes. O ajuste do metabolismo s diferentes condies metablicas se
d por processos que so conhecidos com regulao metablica. Diversas estratgias foram
desenvolvidas pelos organismos para modular e controlar as diferentes vias metablicas. D pelo menos
trs exemplos de mecanismos utilizados pelos organismos para regularem suas vias metablicas.
Explique, detalhadamente, como cada um desses mecanismos atua aumentado ou diminuindo a
velocidade de vias especficas.
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7. Em 2009, o prmio Nobel de medicina foi entregue a Elizabeth Blackburn, Carol Grider e Jack Szostack
pela descoberta da enzima telomerase. Essa enzima uma transcriptase reversa que estende as pontas de
cromossomos lineares (telmeros) utilizando um RNA como molde. Considerando o papel dos
fragmentos de Okazaki na replicao da fita descontnua, discuta a importncia da telomerase para a
replicao das pontas dos cromossomos.
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8. Em 2010 um grupo de pesquisadores liderados por Craig Venter publicou na revista Science a criao do
primeiro organismo sinttico (uma bactria do gnero micoplasma), em que a nica fonte de informao
gentica era um DNA sinttico, que foi inserido dentro de uma clula recipiente depletada de DNA.
Discuta como os pesquisadores puderam chegar a esse feito. Que tipos de genes seriam necessrias para a
montagem de uma clula bacteriana vivel?
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Massa Ocorrncia em pK 1 pK 2 pK R
Aminocido Formula Estrutural (Da) Protenas (%) -COOH -NH 3 Cadeia Lateral