UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Informe de Prctica de Laboratorio Microbiologa Ambiental

Microbiologa Ambiental
Practica de Laboratorio

Presentado por

Clara Omar Snchez Castilla

Cdigo: 1124493459

Ella Hernndez
Cdigo: 39461984

Andrs Daza
Cdigo: 1065638850

Grupo colaborativo
358010_2

Tutor
Francy Tatiana Pea

Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD

Valledupar, Cesar
2017
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Informe de Prctica de Laboratorio Microbiologa Ambiental

Practica N 1. Bioseguridad en el laboratorio.

La seguridad biolgica o bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de las tcnicas y de los

equipos necesarios para prevenir la exposicin del personal, del rea de laboratorio y del medio ambiente
a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos, las cuales se describen a continuacin:
Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente
cerrada.
Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesin prctica.
Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas, antes de salir del
laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son
contaminantes.
Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando fsicamente cmodo.
Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las reas de
laboratorio.
Evitar llevar accesorios que podran ser fuente de contaminacin (por ejemplo joyas).
Recoger el cabello largo.
No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse cosmticos
ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del laboratorio.
Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades
indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor.
Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos personales, exceptuando
aquellos equipos y materiales necesarios para la realizacin del trabajo prctico.
Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar ste desatendido.
Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y de manera
ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte cualquier dao de los
mismos al profesor.
Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal fin, por
ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de desecho, etc.
No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las etiquetas de los
mismos y estar seguro de cmo emplearlo.
No devolver sustancias a sus envases originales. .
Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo experimentos
no autorizados.
Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material contaminado,
heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como menor.
Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la inoculacin
accidental y la generacin de aerosoles durante su manipulacin y desecho.
Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.
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Prctica N 2. Reconocimiento del laboratorio y materiales de Microbiologa.

Material Descripcin Ilustracin

Cajas de Petri Recipientes redondos que se usan para contener los
medios de cultivo donde posteriormente se realiza la
siembra.

Asas redondas Se usan para inocular muestras o bacterias puras en

los medios de cultivo.

Tubos de ensayo Estos utensilios sirven para hacer experimentos o

ensayos los hay en varias medidas y pueden ser de
vidrio o de plstico.

Mechero Es un instrumento utilizado en los laboratorios

cientficos para calentar o esterilizar muestras o
reactivos qumicos.

Incubadora Se Usa para mantener a una temperatura constante los

cultivos microbiolgicos, y asegurar el crecimiento de
los microorganismos.

Pipetas Se usan para tomar pequeos volmenes de

sustancias.
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Microscopio Es un instrumento que nos permite observar entes

demasiado pequeos para ser vistos a simple vista.

Laminas y laminillas Se usan para depositar en ellos las muestras a

observar al microscopio y para cubrir las muestras
que estn sobre el portaobjetos.

Equipo de filtracin por Es un aparato que consiste de un disco incrustado

membrana (equipo millipore de (portafiltros) sostenido por soporte de goma o caucho
plstico) y que se ajusta a una base donde puede fijarse un
embudo graduado o una rampa mltiple de filtracin.

Cuenta colonia Instrumento utilizado para contar colonias de

bacterias o de otros microorganismos que crecen
en una placa de agar

Prctica N 3. Mtodos de siembra

Procedimiento (parte A):

1. Desinfectamos el rea de trabajo, prendimos el mechero y preparamos el material de trabajo.
2. Aislamos la bacteria en una agar nutritivo en caja Petri, con ayuda de un asa redonda, utilizando el
mtodo de estra por agotamiento.
3. Incubamos a 37 por 24 horas para bacterias.
4. Terminado la siembra, marcamos las cajas en el borde de la base de la caja y envolvimos en papel
vinipel.
5. Desinfectamos el rea de trabajo, apagamos el mechero y entregamos el material.

Procedimiento (Parte B: recuentos de ufc y diluciones)

La tcnica utilizada hace referencia a los recuentos de microorganismos utilizando diluciones
seriadas en base 10, donde se dispersa la poblacin de microorganismos permitiendo conocer el nmero
aproximado en una muestra.

1. Pesamos10 gramos de una muestra de agua residual, y la mezclamos con los 90 ml de agua
peptonada.
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2. Realizamos diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-6. Esta tcnica es simplemente una serie de
diluciones simples que amplifican el factor de dilucin rpidamente, comenzando con una
pequea cantidad inicial de muestra. La fuente del material para diluir en cada paso viene del
material diluido en el tubo anterior. En una dilucin seriada el factor de dilucin total en cualquier
punto es el producto del factor de dilucin individual en cada uno de los tubos.
3. Tomamos las 6 cajas de Petri con agar y marcamos cada una con dilucin 10 -2 10-4 10-6
4. Sembramos las diluciones 10-2 10-4 10-6 tomando 0,1 ml de cada dilucin por superficie, con
ayuda del rastrillo homogenizamos la microgota sobre la superficie del agar sin romperlo.
5. Incubar por 24 horas a 37C y realizar el recuento.
6. Realizamos los clculos y sacamos el promedio aplicando su respectiva formula.

Recuento
Nc (Numero de colonias) x fd (Factor de dilucin) x 10 (Factor de correccin) = UFC (unidades
formadoras de colonia).

Muestra N 1. (10-2)
(116)(100)(10) = 116.000 UFC/ml muestra

Muestra N 2. (10-4)
(248)(10.000)(10) = 24.800.000 UFC/ml muestra

Muestra N 3. (10-6)
(638)(1.000.000)(10) = 638.0000.000 UFC/ml muestra

Practica N 4. Tcnicas de tincin

Procedimiento (Parte A Tincin de Gram para bacterias)

Para poder observar al microscopio los distintos tipos de microorganismos existen distintos tipos
de coloraciones o tinciones que tienen afinidad con ciertas partes de la clula y permite diferenciarlas y
observar algunos rganos de las clulas. Para el caso de bacterias la tcnica ms usada es la tincin de
Gram, donde se permite clasificar las bacterias en Grampositivas (violetas) y Gramnegativas (Fucsias).

1. Tomamos una colonia de bacterias que los estudiantes y realizamos un frotis en una lmina
portaobjetos, colocando una gota de agua y con ayuda del asa redonda homogenizamos para
expandir el frotis en la lmina.
2. Secamos al aire libre la muestra y fijamos al calor la muestra en el mechero (se coloca 3 veces
rpidamente sobre el fuego la lmina)
3. Una vez la muestra estuvo fijada colocamos varias gotas de cristal violeta, dejando por un minuto
y luego lavamos en el grifo para quitar el exceso de colorante.
4. Colocamos unas gotas de Lugol, y dejamos por un minuto, lavamos.
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5. Colocamos una gota de alcohol acetona, dejamos por 15 segundos, lavamos.

6. Colocamos unas gotas de Fucsina de Gram, dejamos por un minuto, lavamos y dejamos secar la
muestra.
7. Una vez seca la muestra agregamos una gota de aceite de inmersin y observamos en el
microscpio en el objetivo de 100x.
8. Observamos las morfologa:
Por sus caractersticas logramos identificar la bacteria como cocos Gram (+), perteneciente al gnero
Staphylococcus los cuales se agrupan en pares o racimos de uva, no mviles y no esporgenos,
aerobios y facultativamente anaerobios. Su pared celular contiene dos principales componentes:
peptidoglicano y cidos teicoicos, su crecimiento es rpido y abundante bajo condiciones aerbicas, su
temperatura ptimas es de 35 a 40C.

Procedimiento (Tincin de Azul de Lactofenol para hongos)

Para ver la morfologa de los hongos filamentosos se utiliza la tincin de azul de lactofenol, la
cual permite contrastar y ver las diferentes partes de un hongo (hifa, conidios, septos, etc.)
1. con las agujas de diseccin tomamos un trozo del hongo de un pan (tomamos micelio, parte
algodonosa)
2. En una lmina portaobjetos colocamos una gota de azul de lactofenol.
3. Con ayuda de la aguja de diseccin, desglosamos la gota sobre las hifas, cubrimos con una lmina
portaobjetos.
4. Observamos en el microscpio en el objetivo de 40x.
5. Observamos las estructuras:
En este hongo de pan, logramos identificar las hifas, la cual es la unidad vegetativa en la
estructura de los hongos, de forma filamentosa y de tipo tubular con paredes celulares, pudiendo presentar
tabiques (hifas septadas) o no (hifas aseptadas) y que contienen en su interior citoplasma que viene a ser
una sustancia similar a la clara de huevo junto con pequeas estructuras con morfologas y funciones
determinadas denominadas organoides.
En nuestro caso identificamos hifas aseptadas.

Prctica N 5. Algunas tcnicas aplicadas en microbiologa ambiental.

La microbiologa enfocada en la parte ambiental ha permitido diagnosticar e implementar nuevas

alternativas para el desarrollo agrcola, en el mbito de la ingeniera ambiental y la industria.
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Indicadores de contaminacin de aguas potables

Los indicadores de contaminacin son utilizados para medir el grado de contaminacin o
afectacin de cuerpos de agua. En Colombia para el caso de aguas potables la normatividad exige un valor
de 0 unidades formadoras de colonia en 100 ml de agua muestreada para el caso de Coliformes totales
como indicador.

Procedimiento
1. Tomar 110 ml de agua del inodoro, la cual se inoculo con una asada de cultivo de E. coli,
agitamos muy bien.
2. Colocamos la muestra en la parte superior de la campana de filtracin permitiendo el paso del
agua de un lado al otro.
3. Con unas pinzas estriles retiramos la membrana y colocaos sobre el agar nutritivo.
4. Incubamos por 24 horas a 37C y observar el nmero de colonias con las caractersticas tpicas de
E. coli y Coliformes totales.
Los Coliformes son microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o
anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas. La mayora de los
Coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual
son expulsados especialmente en las heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razn, su presencia
constante en la materia fecal, los Coliformes son el grupo ms ampliamente utilizado en la microbiologa
como indicador de prcticas higinicas inadecuadas y contaminacin de los cuerpos de agua.
La enzima caracterstica de los Coliformes, -D-Galactosidasa se fija en el sustrato Salmon-
GAL y es la causa del color rojo de los Coliformes.
La enzima caracterstica de los E.coli, -D-Glucuronidasa se fija en el sustrato X-Glucuronida y
es la responsable de que las colonias positivas E.coli presenten un azul oscuro o violeta.
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Conclusiones

Esta prctica nos ense a diferenciar tipos de bacterias gracias a su coloracin y por sus formas de
agrupamiento, aprendimos a conocer su reaccin ante los productos qumicos, y conociendo sus
propiedades ya que se puede diferenciar los tipos de bacterias a los de los hongos.
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Referencias

Garces, A. (2008). Normas de Seguridad en el Laboratorio de Microbiologia. Recuperado de,

http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf
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Anexo