INTEGRANTES: Pedro Gonzales Len

Carlos Romero Aquino

Geraldo Vidal Huerta
Yahir Benavente

CURSO: Microbiologa
TEMA: Mtodos de siembra de microorganismos para
anlisis de alimentos.
PROFESORA: Blga. Ms C. Alicia Decheco Egsquiza
GRUPO: 4- VIERNES
AO:

2015
1. OBJETIVOS
Conocer la clasificacin, preparacin, esterilizacin y distribucin
de los medios de cultivo
Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta
preparacin de medios de cultivo en la prctica microbiolgica.
Conocer las diferencias mtodos de siembra con el fin de obtener
colonias bacterianas bien aisladas.

2. MARCO TEORICO

A. Inoculacin de un tubo con caldo:

B. Inclinar el tubo e inocular en el sitio indicado.
C. Volver el tubo a la posicin vertical la inoculacin de un pico de agar
se realiza mediante un alambre recto.
D. Atravesar con el alambre el agar en profundidad, hasta 2 o3 mm del
fondo del tubo.
E. Retirar el alambre y estriar la superficie del agar con un movimiento.

En la diferencia qumica de los microorganismos, las pruebas del

desarrollan preferiblemente en tubos. Los tubos con tapa rosca son los
ms utilizados. En las siembras en tubos debern seguir normas
rigurosas que garanticen el xito de aislamiento, tales como:
Sostener, con la mano izquierda y en posicin inclinada, el tubo que se
va a cultivar, con el fin de evitar que los grmenes contaminantes no
caigan en la boca del tubo, sino sobre las paredes externas del mismo.
Quitar la tapa del tubo lo ms cerca posible a la llama, y sostener el
tapn en la mano derecha entre el anular y el dedo del corazn. En la
posible, las tapas en ningn momento deben sobre las mesas u otras
superficies por el peligro de contaminacin.
 Existen cuatro tipos de siempre en tubo:
1. SIEMBRA POR ESTRIAS: Se realeza en tubo con agar inclinado en
medio slido, sobre la superficie del bisel, deslizando suavemente el
asa, y se siembra agotando superficie desde el fondo hasta la parte
superior.
2. SIEMBRA POR PICADURA: se utiliza asa recta en punta, se toma la
colonia con un ligero toque y se cultiva por picadura perpendicularmente
sobre el medio solido o semislido, generalmente no inclinado. El asa se
introduce hasta el tercio inferior del fondo del tubo, sin tocar el fondo.
3. SIEMBRA MIXTA: se realiza fundamentalmente en la diferenciacin
bioqumica se la bacterias, al utilizar siembra en medios como agar triple
azcar (TSI) y agar citrato Simmons (CS).
4. SIEMBRA EN MEDIO LQUIDO: la siembra en esto medios se realiza
mediante la utilizacin del asa o pipeta. Cuando se utiliza el asa la
cantidad que hay que tomar puede ser el material contenido en una o
dos asadas, y cuando se utiliza la pipeta, esta estar totalmente estril y
la cantidad para sembrar sea de 2 3 gotas 1 ml.

3. MATERIALES
En laboratorio, los materiales que utilizamos fueron:

- Tubos de ensayo

- Botella

- Gradilla

- Pomo

- Probetas

- Cuchillo y tenedor

- Pabilo

- Asa de siembra

- Papel film

- Mechero

- Jarra elctrica

- Incubadora

- Empanada de carne

4. PROCEDIMIENTO
Cultivos de microorganismos en caldo:

- Esterilizar los materiales: cuchillo, tenedor, pomo.

- Esterilizar agua en la botella, utilizando la jarra elctrica. Dejar enfriar

para luego utilizar el agua en la muestra.

Preparar la muestra:

Utilizar el cuchillo para extraer 10 gr. del relleno de la empanada y mezclarla

con 20-25 ml de agua estril en el pomo previamente esterilizado.
Usar el tenedor para formar una especie de papilla con el relleno y el agua,
arrimar esta mezcla a un lado del pomo, separndola del lquido. Reservar.

Sembrado:
1- Psicrfilos (Refrigeracin)
2- Mesfilos (Medio ambiente)
3- Mesfilos (35C)
4- Termodrico (Tibio) Entibiar el tubo 5 minutos.
5- Termfilos (Caliente) Calentar el tubo por 5 minutos.

Ordenar y enumerar los 5 tubos de ensayo en la gradilla.

Esterilizar el asa de siembra al rojo vivo, utilizando el mechero.
Con el asa de siembra sacar una poco de la muestra del pomo y
sumergirla en el primer tubo de ensayo y agitar de arriba- abajo y de
forma circular con la finalidad de diluir la muestra en el caldo. Realizar
dicha operacin 7 veces en cada tubo de ensayo y reservarlos en donde
deben ser almacenados segn la lista presentada anteriormente.

Flujograma

1. Rotular los tubos

2. Encender el mechero

3. Flamear asa

4. Tomar un inoculo de cepa

5. Introducirla en el caldo
 6. Flamear la boca del tubo

7. Flamear el asa

8. Incubar

Para sembrar termodrico el tubo debe estar tibio y para sembrar el

termfilo tiene que estar caliente, por lo que se debe calentar el tubo de
ensayo por 5 minutos antes de realizar la siembra y se debe sembrar
cerca del mechero para mantener la temperatura adecuada.
Al finalizar la siembra, etiquetaremos los tubos con la informacin
correspondiente y los reservaremos segn la lista, los psicrfilos en el
fro, mesfilos en el medio ambiente y el otro a 35 C, los termodricos y
termfilos en la incubadora.

5. RESULTADOS

Lectura de Cultivos

Zona superficial Zona intermedia Zona Basal

Psicrfilo - Presenta - Turbidez - Moderado
anillo (Micro Abundante (Anaerobio
aerofilo) - Heterogneo estricto)
grumosa
- Aerobio
Facultativo
Mesfilo - Presenta - Poca Turbidez - Moderado
(M.A) anillo (Micro - Heterogneo (Anaerobio
aerofilo) granular estricto)
- Presenta - Aerobio -
velo anaerobio
(Aerobio facultativo
estricto)
Mesfilo(35 - Presenta - Poca Turbidez - Moderado
C) anillo (Micro - Heterogneo (Anaerobio
aerofilo) granular estricto)
- Aerobio -
anaerobio
facultativo
Termodrico - Presenta - Poca Turbidez - Moderado
anillo (Micro - Heterogneo (Anaerobio
aerofilo) granular estricto)
- Presenta - Aerobio -
velo anaerobio
(Aerobio facultativo
estricto)

Termfilo - Presenta - Moderada - Moderado

velo Turbidez (Anaerobio
(Aerobio - Heterogneo estricto)
estricto) granular
- Aerobio -
anaerobio
facultativo
- En la muestra de la empanada de carne predomino la flora microbiana
psicrfilo (Tubo de ensayo nmero 1).
- Los alimentos analizados por los grupos en la clase de laboratorio
fueron: Triple de pollo, empanada de carne y pan con jamn. De todas
estas muestras la ms contaminada fue el triple de pollo.

6. CONCLUSIONES
 - Predomino el microorganismo psicrfilo y esto se debe a la mala
manipulacin y almacenamiento del producto terminado en nuestro caso
la empanada de carne.

- Aprendimos los pasos del mtodo de siembra de microorganismos. El

sembrado en tubos de ensayo es una tcnica sencilla que consiste en
obtener una suspensin de la mezcla de microorganismos y hacer
diluciones seriadas en un medio de cultivo estril, que ser analizado
posteriormente.

- Se observ que de acuerdo al tipo de bacteria que se requiera sembrar,

ser el tipo de medio de cultivo, esto, ya que cada bacteria requiere
cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus colonias.

7. RECOMENDACIONES

- No retirar los materiales como el cuchillo, tenedor y pomo del agua

caliente, si no los usaran automticamente.
- Utilizar el pabilo y amarrar la boca de la botella para facilitar el
esterilizado del agua en la jarra elctrica.
- El agua estril debe estar fra para poder ser utilizada con la muestra, ya
que si est caliente eliminar los microorganismos.
- Se debe mantener tapado el pomo que contiene la muestra, al igual que
los tubos de ensayo con los caldos, solo se destaparn en el momento
del sembrado.
- Se debe trabajar, como siempre, en condiciones estriles, flameando la
boca de los tubos antes y despus de introducir el asa de siembra, en
las proximidades del mechero.
- Se debe esterilizar los tubos por 25 minutos en la jarra elctrica antes de
lavarlos. As se eliminarn los microorganismos y podremos reutilizar los
tubos de ensayo.

8. BIBLIOGRAFIA
El libro: Manual prctico de microbiologa general
Autor: Mara Jos botero Ospina, M.Sc , Daniel Ricardo zapata, PH.D , Jairo castao
zapata, PH.D.
 https://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de-
Microorganismos.
http://www.usc.es/export/sites/default/gl/centros/bioloxia/descargas/Memoria_Txcn
icas_Bxsicas.pdf.
Madigan, M.T, Martinko, J.M. Brock, Biologa de los Microorganismos. 12a.Ed.
Pearson. Madrid. Espaa. 2009.

9. CUESTIONARIO
1. Explique los tipos y aplicacin de los mtodos de siembra?

R=

MTODOS DE SIEMBRA

El mtodo de siembra a emplear depender de los objetivos que se pretendan

alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxgeno, los
mtodos de siembra ms empleados son los siguientes:

1. Siembra por estras.

2. Siembra por puncin.
3. Siembra volumtrica.
4. Siembra masiva.

Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrn, deben ser

calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo, antes y despus de
realizar la siembra, con el objetivo de destruir a los microorganismos
contaminantes de la superficie del instrumento.

Con independencia del tipo de medio y el mtodo de siembra a emplear sta

debe realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor
emanado reduce el nmero de microorganismos presentes en sus
inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor del proceder
asptico.

Siembra por estras

Este mtodo de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo

slidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en
forma de cua.(Slam)
Instrumentos de siembra a emplear.

Para la siembra por estra se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas

ocasiones, como explicaremos ms adelante, se utilizan ambos instrumentos
en la misma siembra.

Aplicacin de los mtodos de siembra

Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrn.

1. Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lpiz

para escribir.
2. Introduzca el asa de alambre de platino o nicrn directamente en la zona
de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo.
Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para
lograr el mismo efecto.
3. Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el
objetivo de que el asa se enfre.
4. Con el asa estril y fra tome el volumen o fragmento de la muestra que
ser sembrado y trasldelo de inmediato para el medio del cultivo
seleccionado.
5. Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de
cua en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:

a. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porcin
inferior.
b. Con el dedo meique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el
tapn de algodn o la tapa de rosca y retngala(no colocar el tapn o la
tapa sobre la mesa de trabajo)
c. Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasndola una o dos
veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por
incineracin, los microorganismos contaminantes que se encuentran en
esa zona, por la parte externa del tubo. Esta accin calrica, provoca
adems una conveccin del movimiento del oxgeno presente en el
interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual
favorece que decrezca el riesgo de contaminacin.
d. Introduzca el asa con el volumen o fraccin de la muestra en el tubo,
hasta el fondo de la cua. A partir de este momento, la siembra puede
realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de
microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de
cultivo:
Fig. 119: Siembra microbiolgica en medios de cultivos distribuidos en tubos de
ensayo: 1) y 2) Retirar el tapn del tubo; 3) Flamear la boca del tubo; 4)
Introducir el instrumento de siembra con la muestra y realizar la siembra; 5)
Retirar el instrumento y flamear nuevamente la boca del tubo; 6) Taponar el
tubo.

Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de

la cua, trazando una lnea longitudinal.
Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia
arriba, imprimindole un movimiento de zigzag.
Motiando toda la superficie de la cua con hisopo.
Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero
adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeo
corte longitudinal.
Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el
tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Fig. 120: Siembra en medios slidos en cuas (tubos de ensayo): a) Trazando

una lnea perpendicular desde el fondo hacia arriba; b) Deslizando el
instrumento con el inculo de abajo hacia arriba en forma de zigzag; c)
Roturando el medio

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado

en placa de Petry, proceda de la siguiente manera:

a. Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de

Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo
pulgar abra parcialmente la placa.

Fig. 121: Apertura manual de la placa de Petra con medio de cultivo.

b. Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en

forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un
tercio de toda la superficie.
c. Cierre la placa y grela varios cm, en contra de las manecillas del reloj,
procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.
 d. Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de
manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean
removidas para el segundo.
e. Repita esta operacin una o dos veces ms.

Fig. 122: Mtodo de siembra por estras en medios de cultivo slidos

distribuidos En placas de Petra

f. Finalmente cierre la placa y colquela sobre la mesa de trabajo boca

abajo.
g. Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada
antes de dejarla en el puesto de trabajo.

Cuando la muestra es tomada con hisopo.

1. Si la siembra se va a producir en una cua de agar, se procede en forma

similar que la siembra con asa en este tipo de medio de cultivo.
2. Si la siembra se fuera a producir en medios slidos en placas, el primer
segmento se hace con el mismo hisopo con que se tom la muestra y
los restantes se realizan con asa estril, para lograr una diseminacin
por agotamiento, que posibilite el desarrollo aislado en los ltimos
segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la
diseminacin cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer
segmento en zig zig con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la
plaza una letra "Z" y a continuacin con el asa estril se procede a
deslizarse con un movimiento ondulatorio sobre la "Z".

Fig. 123: Siembra por diseminacin cruzada: a) Trazar con el hisopo que
contiene el inculo una "Z" en la superficie del medio; b) Completar la siembra
con un asa de platino estril, imprimiendo movimientos ondulatorios sobre la
"Z"

Siembra por puncin

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear ser la aguja de platino y

el medio de cultivo slido, generalmente, en tubo de ensayo. Las
manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares
que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este mtodo, es que la
aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.
 Fig. 124: Siembra por puncin

Siembra volumtrica

Este mtodo de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo

volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo slidos o lquidos.
Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de
Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece
de escala de graduacin, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la
sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla
respectivamente el volumen que ser sembrado.

Siembra masiva

Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la esptula de

Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la esptula
por toda la superficie del medio de cultivo slido imprimiendo un movimiento en
espiral. La siembra masiva tambin se puede realizar con un hisopo grueso
embebido de un cultivo lquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.

Fig. 125: Siembra masiva con esptula de Drigalski

2. Qu consideraciones se deben tomar al realizar los mtodos de

siembra utilizados en el laboratorio?

R=

Aplicar la tcnica adecuada para preparar el rea de trabajo y evitar
contaminaciones.
Organizar el material para su fcil manejo e identificacin.
Manipular adecuadamente los cultivos puros.
Seleccionar y aplicar las tcnicas de siembra adecuadas para
alcanzar propsitos especficos.
Identificar y describir correctamente las caractersticas culturales y
microscpicas de algunas bacterias.
Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscpico y
microscpico de bacterias.
3. Cmo deben sembrarse microorganismos anaerobios?
R= Medios de cultivo para microorganismos anaerbicos
 Son aquellas que para crecer en la superficie de un medio de cultivo
necesitan una atmsfera sin oxgeno, ya que este elemento es txico para
ellas.
Caractersticas Generales
No crecen en presencia de O2 y mueren por O2 o por sus radicales
txicos
Carecen del sistema del citocromo oxidasa, superoxidodismutasa y
catalasa para metabolizar el O2.
Requieren un potencial redox bajo.
Estn diseminadas ampliamente en la naturaleza.
Flora normal de mucosas, piel, boca, vas areas superiores y tracto
genitourinario femenino e intestino.

Identificacin de crecimiento

Para conseguir una recuperacin ptima de bacterias anaerbicas es

fundamental elegir correctamente los medios de cultivo.

Se utiliza medios selectivos, no selectivos y de enriquecimiento. Los medios de

cultivo para anaerbicos tienen una alta proporcin de peptonas e hidratos de
carbono ya que su metabolismo es ms exigente que el de bacterias
facultativas y requieren adems factores de crecimiento con la hemina y
vitamina k.

Para medios solidos los requerimientos pueden cubrirse agregando extracto de

levadura, sangre, suero o liquido actico para medios lquidos.

Los medios empleados con mayor frecuencia son:

Agar Sangre: Est compuesto de extracto de carne, extracto de levadura,

peptonas, glucosa, NaCl, sangre al 5% (sta favorece el crecimiento de
microorganismos patgenos para el hombre), y antibiticos como colistin, cido
nalidxico y baitricina.

Tioglicolato: Medio semislido compuesto de Cistina (aminocido azufrado

que acta con funcin reductora) tioglicolato, agar y resazurina que se colorea
de rosa en presencia de oxgeno. Este medio sirve para conocer si los
microorganismos son aerbicos estrictos, anaerbicos estrictos, microaerofilos
o anaerobios facultativos.

MEDIOS DE CULTIVO PARA ACTINOMYCES

El trmino Actinomyces incluye el sufijo myces, refirindose a hongos y

estructuras fngicas. Menciona porque los actinomyces a pesar de ser
bacterias reciben una denominacin fngica-.Algunas de las caractersticas de
las cepas de los Actinomyces semejan tanto a bacterias como a hongos y con
frecuencia se les ha considerado como transicionales entre los dos grupos de
organismos. Sin embargo, la mayora de las caractersticas ms fundamentales
de los Actinomyces indican son bacterias: Son anaerbicas o microaeroflicas
en comparacin con los hongos patgenos que son aerobios. La motilidad de
los actinomicetos se debe a la presencia de simples flagelos semejantes a los
de la bacteria. Los actinomyces forman filamentos ramificados edimetro de
estos filamentos es semejante las clulas de los bacilos y no son tan anchas
como las de los hongos.

CLASIFICACIN DE ACTIMONYCESS

Se considera que todas las especies patgenas estn asociadas a exantemas

A. naeslundii, A. odontolyticus y A. viscosus .Su papel presuntivo en la lesin
se debe a que la formacin de grnulos de azufre parecen proteger a las
bacterias de la fagocitosis a cargo de los neutrfilos, parece proteger a las
bacterias de la fagocitosis a cargo de los neutrfilos, permiten la colonizacin
de algunas bacterias que asocian su patogenicidad con el actinomiceto y
adems dificultan la penetracin de los antibiticos.

IDENTIFICACIN

Se desarrollan en medios de cultivo enriquecidos tales como: infusin de

cerebro y corazn, el tioglicolato de sodio y los medios de extracto de carne y
levadura. Los principales medios de cultivo selectivos para actinomyces son
tioglicolato (caldo), agar Sangre, Agar de infusin de cerebro y corazn. Los
medios de cultivo deben ser incubados a 37C en condiciones de aerobiosis.
Tioglicolato. Es recomendado para cultivar especies de actinomyces de
crecimiento lento agar sangre, forman colonias pequeas, lisas, brillantes,
convexas y no hemolticas despus de 4 a 6 das de incubacin. Agar de
infusin de cerebro y corazn, forman colonias de color rojo. Sin embargo un
medio ms selectivo consiste en gelatina, metronidazol y cadmio (GMC), se
observan colonias caractersticas: grises, secas, quebradizas, adherentes,
irregulares, a veces pigmentadas en rojo como en el caso de Actinomyces
odontolyticus.

4. Cmo deben prepararse las muestras para poder aplicar la siembra

de cultivos microbianos?
R=
Mtodo de siembra por estra en placa

Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para

ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la poblacin mixta y a
continuacin se hacen estras sobre la superficie de un medio slido preparado
en una placa Petri, conforme se van haciendo estras en zigzag con el asa,
cada vez se van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se toca en la regin donde
se han realizado las ltimas estras y se contina la siembra con la misma
tcnica, en la superficie de medio sin sembrar an. Repitiendo este proceso
varias veces se logra separar clulas individuales. A continuacin, las placas se
incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las clulas aisladas
experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar colonias visibles.
Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola
clula, no podemos asegurarlo. Quizs, dos clulas quedaron depositadas tan
juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos
de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a
partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se
desarrollen la segunda vez, sern, casi con toda seguridad, cultivos axnicos.

Mtodos de vertido en placa y extensin en placa

En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen

antes de su siembra en placa. Se siguen estas tcnicas cuando la muestra
contiene tantos microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en
una sola etapa. Por ejemplo, una suspensin con mil millones de clulas por
mililitro debe ser diluida 10 veces para obtener una suspensin con un
centenar de clulas por mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas
(en varias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en
cien. Para realizar diluciones de diez en diez, se aade 1 ml de la
suspensin bacteriana a 9 ml (de medio estril o solucin salina, igualmente
estril. Se agita vigorosamente para diluir las clulas y el proceso se repite
cuantas veces sea necesario. A continuacin, se puede proceder de dos
maneras diferentes. En el mtodo de vertido en placa, las muestras diluidas
se mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias
quedarn embebidas en el agar y otras crecern en la superficie. Las
colonias superficiales se extendern y sern ms grandes. En el segundo
mtodo (extensin en placa), las muestras diluidas se siembran
directamente en la superficie de la placa de agar, extendindolas con ayuda
de un asa de Diralsky de cristal estril. La suspensin se absorbe en el
agar, dejando las clulas microbianas sobre la superficie. En ambas
tcnicas las placas se incuban hasta la aparicin de las colonias. Como en
el mtodo de siembra por estra, no existe la seguridad de que las colonias
que aparecen en las placas sembradas por extensin o en el agar
solidificado sembrado por el mtodo del vertido en placas sean cultivos
axnicos hasta que se repita el proceso. Las dos tcnicas de siembra por
dilucin presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor nmero de
colonias aisladas que el mtodo de siembra por estra, por tanto se eligen
cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios
tipos de microorganismos. Para obtener un cultivo axnico mediante este
mtodo:
 (a) Hacer diluciones seriadas de la suspensin bacteriana hasta obtener
una muestra con slo unos pocos cientos de bacterias.

(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusin, mezclar y verter el

contenido en una placa Petri.

(c) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias en el agar (ms

pequeas) y en su superficie (ms grandes).

Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa: Para obtener

un cultivo axnico

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.

(b) introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra.

(c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una

placa Petri, y

(d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y

hacer un segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir
el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de
clulas se diluyan y se separen clulas aisladas.

(e) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar

seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar
una colonia aislada y sembrar por estras una segunda placa.

5. Explique la importancia de la identificacin de los microorganismos?

R=

Se entiende por identificacin microbiana al conjunto de tcnicas y

procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un
microorganismo. Estas tcnicas se utilizan en diferentes reas, por ejemplo:
En el rea clnica donde es de capital importancia conocer cul es el
agente causal de la infeccin que presenta un paciente, de manera de
poder tratarlo con agentes teraputicos.
En la industria farmacutica, cosmtica y de alimentos donde las normas
de control de calidad exigen la ausencia de ciertos microorganismos.
En investigacin bsica donde se asla un determinado microorganismo
que debe identificarse para comprobar si se trata de un microorganismo
conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo.
Durante su ejercicio profesional, es muy importante que el farmacutico
conozca el fundamento de los mtodos existentes para la identificacin
microbiana. En el caso del ejercicio comunitario, un farmacutico, por
ejemplo puede estar asesorando a un paciente que tiene una infeccin
bacteriana, y al cual el mdico le tom una muestra para ser enviada al
laboratorio para identificar el agente causal, si el profesional conoce el
fundamento y los mtodos de identificacin microbiana puede explicarle al
paciente la razn por la cual los resultados de la identificacin del
microorganismo y su antibiograma puede retrasarse algunos das. Si se
desempea en el rea de produccin de medicamentos y cosmticos, la
fabricacin de estos debe realizarse en reas controladas libres de
microorganismos, para evitar la contaminacin del producto, y como
consecuencia de ello, se produzca su deterioro, o lo que es ms grave que
el producto contaminado le cause una infeccin a un paciente. En el caso
que el profesional se desempee en la industria de medicamentos y/o
cosmticos, debe conocer las normas que rigen la calidad microbiolgica
del producto a ser elaborado, los microorganismos objetables y el
fundamento de los mtodos oficiales para descartar la presencia de stos.
Tambin en el caso de la industria alimentaria, los alimentos son sometidos
a una serie de controles microbiolgicos para asegurar la ausencia de
microorganismos que pueden causar enfermedades y/o descartar la
presencia de toxinas capaces de causar intoxicaciones alimentarias. Por
estas razones, es importante conocer los mtodos en los cuales se basa la
identificacin microbiana. No todos los microorganismos se identifican por
las mismas tcnicas. La mayor parte de los mtodos se realizan en un
laboratorio y se busca utilizar el menor nmero de procedimientos y
ensayos posibles.
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE IDENTIFICACIN
MICROBIANA
Los mtodos ms utilizados para la identificacin microbiana, los podemos
clasificar en:
1. Mtodos basados en criterios morfolgicos
2. Mtodos basados en tincin diferencial
3. Mtodos basados en pruebas bioqumicas
4. Mtodos basados en tipificacin con fagos
5. Mtodos basados en pruebas serolgicas
6. Mtodos basados en deteccin molecular
IDENTIFICACIN MICROBIANA

En la mayora de los casos la identificacin no se realiza con base a un solo

mtodo, sino a la combinacin de ms de uno. Ejemplo: identificacin de
bacterias con base a criterios morfolgicos, tincin diferencial, pruebas
bioqumicas y serolgicas. Antes de proceder a discutir los mtodos que se
han enumerado, es importante hacer nfasis que para cada uno de ellos se
requiere disponer de una muestra. Cuando se requiere identificar un agente
que est causando una determinada patologa, la muestra debe proceder
del sitio donde el microorganismo est causando el dao, o donde se
multiplica. Algunos ejemplos de muestras que se utilizan en microbiologa
clnica tenemos: heces, orina, hisopado farngeo, lquido cefalorraqudeo,
sangre, lgrimas, semen, fluido vaginal, etc. Tambin pueden utilizarse
tejidos. Para aplicar algunos mtodos se requiere aislar en forma pura el
microorganismo de la muestra, pero para otros no se requiere realizar dicho
aislamiento. Con fines de control de calidad de medicamentos, cosmticos y
alimentos, la muestra a ser analizada, puede ser un producto en proceso o
terminado.