Microscopia

El lmite de resolucin de ojo humano es de una dcima de milmetro por lo que si es menester,
observar estructuras ms pequeas hay que recurrir a una lupa o microscopios simples.

El lmite de la resolucin del microscopio comn es de una dcima de micra y de la del microscopio
electrnico es de 10-15 angstrom.

Microscopio de campo claro

El microscopio comn llamado tambin microscopio compuesto, ptico o fotonico ;fue ideado por
Hans y Zacaras Hansen en 1590

Partes:

1-Mecnica y montura

Pie: es la parte destinada a soportar el peso de aparato y mantenerlo en posicin

vertical por lo que debe ser pesado y amplio.
Columna: sirve de nexo entre el pie y el tubo tiene una forma tal, que pueda servir
de agarradera para transportar el microscopio.
Tubo: se encuentra ubicado en forma fija en la parte superior de la columna es un
cilindro que mide en promedio 2 centmetros de dimetro y 16 centmetros de
longitud.
Platina o mnsula: es una plancha metlica paralela al pie y perpendicular a la
columna en su parte media presenta un agujero central para no inferir con la
iluminacin.
Sub platina. Est constituida por el conjunto de aditamentos que sirven de sostn
al aparato de iluminacin.
2- Sistema ptico:
Cuando un rayo luminoso pasa oblicuamente de un medio a otro de diferente densidad
ptica. Tener en cuenta que el ndice de refraccin del aire es 1.00, el del agua es 1.33, el
del aceite de inmersin es de 1.51,el del vidrio es 1.52y el del Mono bromuro de naftaleno
es 1.66.

Lentes: es todo medio refringente limitado por una o dos superficies esfricas. Son positivos o
convergentes los que tienen capacidad para magnificar una imagen pueden ser biconvexos planos
convexos y cncavoconvexos.

Elementos:

a) Foco principal: se renen todos los rayos refractados.

1
 b) Centro ptico: es el centro de lente.
c) Centro de curvatura: centro de la esfera de donde proviene en lente.
d) Eje principal: es la recta que une el centro ptico y el centro de curvatura.
e) Rayo secundario: rayo central que pasa por el centro ptico.
f) Distancia focal: es la distancia que hay entre el foco principal y el centro ptico.
g) Foco secundario: es el punto opuesto al foco principal, cuando la distancia focal es
un metro, el poder ptico de la lente corresponde a una Diopatria.

Formacin de imgenes en los lentes convergentes:

1. Primer caso: situado ms all del centro de curvatura: la imagen que se forma
es ms pequea.
2. Segundo caso: situada en el centro de curvatura: la imagen que se forma es del
mismo tamao.
3. Tercer caso: objeto situado entre el centro de la curvatura y el foco
secundario:(caso del objetivo)la imagen que se forma es aumentada real e
invertida.
4. Cuarto caso: objeto est situado en el foco secundario: no se forma imagen
5. Quinto caso: objeto situado entre el foco secundario y el centro ptico:( caso
del ocular) la imagen que se forma es aumentada, virtual y derecha.

Partes que constituyen el sistema ptico son:

1. Objetivos
2. Oculares
3. Aparato de iluminacin
1- Objetivos: estn resaltados por un lente o por un sistema de lentes convergentes que
producen una imagen aumentada real e invertida.
En la montura llevan inscritos tres nmeros: uno indica el aumento que producir al
multiplicarse por el aumento del ocular usado, el otro indica que longitud que debe tener
el tubo del microscopio y el marca su abertura numrica.
La calidad ptica de un microscopio depende de que sus objetivos sean APLANATICOS es
decir que un punto central o un punto perifrico del campo se observen con la misma nitidez
; esto se consigue usando dobletas de lente (biconvexos de Flint y bicncavo de Crown) que
funcionan como lentes simples.
Clases de objetivos:
a) Objetivos en seco: entre el lente frontal y el preparado se interpone el aire de mayor
aumento mediano aumento y panormico
b) Objetivo inmersin: entre el lente frontal y el preparado se interpone el aceite de
inmersin que permite la utilizacin de un mayor nmero de rayos luminoso en la
formacin de la imagen.

2
Aberracin cromtica: cuando la luz blanca atraviesa una lente es descompuesta en sus siete colores
y cada uno con diferente longitud de onda formara imgenes borrosas en siete diferentes planos a
esto se le llama ABERRACION CROMATICA puede ser corregida por el aplanamiento de dos cristales
de Crown y Flint (silicato De pb y K), (silicato de Ca y K) descompone la luz descompuesta y la ase
coincidir ms o menos en su foco y de preferencia para los colores verde y rojo o verde y amarillo.

Aberracin de esfericidad: es la imposibilidad de las lentes de hacer coincidir en su foco todos los
rayos paralelos.

ESPACIO FOCAL: cuando mayor es la cobertura de la lente mayor es la aberracin

Tipos de objetivos:

A. Aplanaticos: tienen corregida la verracion de esfericidad.

B. Cromticos: tienen corregida la aberracin cromtica para dos colores y la de esfericidad.
C. Apocromticos : tienen corregida la aberracin cromtica para tres colores (rojo, verde y
violeta)
D. Semiapocromaticos: tienen corregida la verracion cromtica para todos los colores dan
imgenes ntidas y luminosas aunque no perfectas son econmicos y muy usados
E. De correccin: poseen un tornillo que baja o sube la lente superior del objetivo para corregir
las desviaciones producidas

Avertura numrica: es la capacidad de un objetivo de utilizar un mayor nmero de rayos luminosos

en la formacin de una imagen; esto depende del medio interpuesto entre el objeto y el objetivo,
esto depende del objeto que se observa y la lente frontal del objetivo, multiplicado por el seno del
semiangulo de abertura(a) de l depende el poder de resolucin del objetivo

Poder de resolucin o de separacin: es la capacidad de un objetivo de dar imgenes ntidas de dos

puntos prximos. La abertura numrica aparece indicada en la montura de los objetivos modernos.

Poder de penetracin o profundidad de foco: observar varios planos del preparado con una misma
posicin de enfoque.

Poder definicin: formar imgenes claras y contornos ntidos

2- Oculares: es un cilindro colocado en el extremo superior del tubo est destinado a aumentar la
imagen dada por el objetivo. Est compuesto por dos lentes.

La lente inferior: la imagen algo ms chica que la anterior muy luminosa y corregida.
La lente superior o lente ocular: acta como una lupa y forma una imagen virtual definida.

Tipos de oculares:

a. Oculares de Huyghens O Negativo: la convexidad de ambas est dirigida hacia el objeto que
se examina. La imagen se forma en el plano de diafragma a nivel central por ello el nombre
de negativo.

3
b. Ocular de Ramsden o positivo: constituido por dos lentes plano-convexas cuyas caras
convexas estn dirigidas hacia adentro.
c. Ocular de compensacin: est destinado a corregir la aberracin cromtica restante de los
objetivos
d. Oculares aplanaticos, ortoscopicos y periscpicos: destinados a dar campos amplios
corregidos del abombamiento producido en mayor grado por los objetivos muy potentes.

Dispositivo binocular: la visin binocular permite una observacin prolongada sin cansancio de
una imagen estereoscpica subjetiva.

3-aparto de iluminacin: situado debajo de la platina ;est formado por el espejo, el

condensador y el diafragma.

a. El espejo: posee una cara plana y otra cncava destinadas a proyectar el haz de rayos
que ha de iluminar el objeto.
b. El condensador: est constituido por un sistema de lentes convergentes

Tipos de condensador

Condensador de Abbe: compuesto por dos lentes la inferior es bicncava el

superior plano convexo, la cara plana dirigida hacia el orificio de la platina.
Condensador acromtico: compuesto por tres lentes corregidos de sus
aberraciones de esfericidad y cromtica. Se le emplea en fotomicrografa.
c. .Diafragma iris: situado debajo del condensador sirve para regular la cantidad de rayos
luminosos que llegan al objeto.
La fuente de luz puede ser:
- Luz natural
- Luz artificial: procede de una fuente luminosa de diferente origen. Los
microscopios modernos vienen provistos de un sistema de iluminacin empotrado
en el pie de la montura del microscopio
- Filtro de luz: son vidrios coloreados que dejan pasar las radiaciones corrigen la
aberracin cromtica los ms usados son el azul y el verde se colocan en una ro
porta filtro situado debajo del condensador segn la direccin que siguen los rayos
luminosos con relacin al eje ptico, se distinguen varios tipos de iluminacin.
a) Iluminacin central: es la ms usada en microscopia.
b) Iluminacin oblicua o lateral: la iluminacin oblicua es utilizada con objetivos
de gran abertura numrica es capaz de revelar estructuras no visibles con
iluminacin central.
c) Iluminacin de campo oscuro: es una iluminacin oblicua extrema esta
iluminacin se obtiene empleando diafragma para lado oscuro o
condensadores para campo oscuro. los condensadores de campo oscuro
(paraboide y cardioide) se colocan en el sitio y en remplazo del condensador
comn. De esta manera, las partculas en suspensin en la capa de lquido o de
protoplasma solidificado se destacan iluminadas, brillantes, en medio de un
campo oscuro.
Formacin de imagen microscpica: est a un punto colocado entre el centro ptico de la
lente ocular y su foco secundario.

4
 Distancia normal de proyeccin: Es de 250 mm, distancia mnima normal para la visin
distinta.

MICROSCOPIOS ESPECIALES: las estructuras celulares son muy pequeas y no tienen contraste, por
lo que adicionando al microscopio ptico algunos aditamentos, disminuyendo la longitud de onda
de los rayos utilizados y aumentados el Angulo de abertura se llega a conseguir resoluciones
mnimas de 0.1 micras y 2,000 aumentos.

MICROSCOPIO DE POLARIZACION: en medios anistropos y birrefringentes, el rayo luminoso al

entrar estas sustancias (cuarzo, turmalina, espato de Islandia, topacio, etc.), sufre una difraccin o
sea que se divide en dos rayos uno ordinario y otro extraordinario este ltimo solo vibra en un solo
plano. Se usa el microscopio ptico al que se le adiciona por debajo del condensador y por del ocular
un prisma de nicol de espato de Islandia (seccionado diagonalmente y vuelto a pegar con blsamo)
llamado analizador el superior y el inferior a este que se le ha desgastado oblicuamente en su cara
inferior para darle una inclinacin de 60 grados.

MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA:

Fundamento:

Longitud de onda: es la distancia que existe entre dos crestas del rayo luminoso la longitud
de onda da el color.
Amplitud de onda: la amplitud de onda se traduce en intensidad y la intensidad en brillo
Ondas en fase: se dice que dos ondas estn en fase cuando las crestas los valles se
encuentran paralelos, esto es que cresta con cresta y valle con valle coinciden. si estas ondas
llegaran a interferirse toman una onda de amplitud doble, a esto se llama interferencia
constructiva sea que el brillo de esta onda ser ms intenso.
Ondas luminosas con fase alterada: presentan sus crestas y sus valles no coinciden, por lo
tanto si se interfieren formaran una onda luminosa de menor amplitud o se destruira la
onda y a esto se llama interferencia destructiva (contraste a negro)
Las diferentes estructuras de los tejidos actan como filtros neutros y proporcionan ms o
menos el mismo grado de brillo por lo que para diferenciarlas haban que teirlas adems
retardan su velocidad en un cuarto de longitud de onda , no se puede visualizar por el ojo
humano pero que si se pueden hacerse perceptibles mediante la interferencia constructiva
que dar mayor o menor amplitud de onda.

MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA: se usa como interfermetro para medir el grosor o ndice de

refraccin del objeto por investigar, midiendo cuantitativamente el grado en que la fase ha sido
alterada. Se usan dos haces de ondas luminosas del mismo origen (ondas coherentes) esto se logra
colocando con el condensador un separador de haces luminosos.

El otro haz llamado haz de referencia, mantiene todas sus ondas en fase y al llegar al objetivo por
accin de otro separador , se junta con el haz del objeto cuyas fases estn alteradas, en este
momento se interfieren unas ondas con otras formando ondas de mayor o menor amplitud. Como
el haz de referencia no se altera, proporciona un estndar de medicin.

5
MICROSCOPIO DE CONTRATE DE FASE: permite observar finos detalles de estructuras transparentes
y al estado fresco (el ndice de refraccin de estos preparados no es suficiente para modificar la
amplitud de onda de modo visible para el ojo humano.

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRA VIOLETA: las imgenes producidas por la incidencia de esta luz sern
recogidas a nivel del ocular por un filme fotogrfico, ya que la luz ultravioleta es invisible y daa la
retina la importancia de este microscopio radica de que la luz ultravioleta tiene longitud de onda
muy pequea (2,400-3,650 angstroms), por lo que posee una resolucin mayor que la luz visible .

MICROSCOPIO DE FLOURESCENCIA: las estructuras histolgicas que contienen la sustancia aparecen

con un brillo caracterstico mientras que las estructuras no fluorescentes son invisibles se
consideran dos tipos de fluorescencia.

A. Fluorescencia primaria o auto fluorescencia: es la que existe en algunas sustancias o

estructuras biolgicas, como la vitamina A , el bacilo tuberculoso, la clorofila (da
fluorescencia roja ). Ribo-flamina (da fluorescencia amarilla) etc.
B. Fluorescencia secundaria: es inducida utilizada colorantes fluorescentes, el anaranjado de
acridina, la quina crina, etc.
C. En la microscopia de fluorescencia puede utilizarse un microscopio corriente se le acopla
una fuente de luz ultravioleta y uno o ms filtros capaces de impedir que la luz ultravioleta
llegue al ojo del observador.

APLICACIN:

En inmunofluorescencia: consiste en acoplar sustancias fluorescentes a antgenos y anti cuerpos

sin que estos pierdan la capacidad de reaccionar entre s de esta manera es posible detectar las
reacciones antgeno-anticuerpo.

En citogentica: para el estudio de los cromosomas en la identificacin de sustancias qumicas

gran nmero de protenas han sido localizadas por tcnica.

MICROSCOPIO DE CAMPO OBSCURO: se le adiciona diafragmas o interfecto res para campo

obscuro, que deja pasar un hilo de luz perifrica concntrica; tambin puede utilizarse
iluminacin oblicua, pero mejores resultados se obtienen con el condensador parablico de
siedentopf est formado por una lente gruesa plano-convexa ,un paraboloide de revolucin
con foco corto para concertar los rayos en la cara superior del portaobjeto.

MICROSCOPIO ELECTRONICO: son de dos tipos.

1- De Transmisin
2- De Barrido
1- MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION: en el ao 1931, knolly Ruska en Alemania
construyeron un microscopio que envs de rayos luminosas utilizaban corrientes de
electrones y campos electromagnticos para producir imgenes.

- Los electrones se propagan en el vaco, siguiendo un trayecto ondulatorio con

longitudes de onda de 1, 000 a 100,000 veces menor que los rayos visibles. la
longitud de onda se determina por el voltaje que son acelerados.

6
 - Los electrones pueden ser desviados de su trayectoria y concentrados Por campos
electromagnticos en forma similar a la reflexin de la luz con lentes
de vidrio.
- Los electrones son invisibles por el ojo humano, pero son capaces de impresionar
la pantalla fluorescentes y las placas fotogrficas.

FUNCIONAMIENTO: la corriente de electrones es generada por un filamento de tungsteno al que se

le aplica una diferencia de potencial de 60,000 a 80,000 voltios. En los microscopios electrnicos
modernos se disponen de lentes auxiliares que se colocan entre el objeto y el proyector, logrando
con esto mayores aumentos.

VENTAJAS DEL MICROSCOPIO ELECTRONICO: Nos permite observar altas resoluciones ( es posible
distinguir objetos pequeos como de 10 a 15 A).estos aumentos nos permiten conocer la ultra
estructura biolgica.

DESVENTAJAS DEL MICROSCOPIO ELECTRONICO:

- No se puede observar clula viva por cuanto los electrones se propagan en el vaco
y los cortes deben ser totalmente deshidratados previamente.
- Los cortes deben ser demasiado finos (200 a 1,000 A de espesor) los cortes se
preparan asiendo el uso del ultra micrtomo, que utiliza hojas de cristal o de
diamante.

2-MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO: Nos permite apreciar imgenes tridimensionales de la

superficie de las clulas y tejidos.

La resolucin del microscopio de barrido es muy limitada y solo alcanza 100 A. la mayor ventaja
radica en que por la gran profundidad de campo es posible obtener imgenes con una notable
calidad tridimensional.

OTROS MEDIOS DE OBSERVACION DIRECTA DE CELULAS Y TEJIDOS

1. EXTERIORIZACION Y TRNSILUMINACION DE ORGANOS algunos rganos de animales por la

buena movilidad que tiene puede ser exteriorizados y estudiados vivo por tras iluminacin
atreves del microscopio, se ha exteriorizado ovarios de rata en una cmara de perfusin y
con ello se ha firmado el proceso de la ovulacin.
2. LA CAMARA TRANSPARENTE: Resulta ser una cmara transparente natural y aqu se asieron
estudios de circulacin sangunea, trasplante de vulos fecundados para ver su ovulacin.
3. CULTIVO DE CELULAS Y ORGANOS: Harrison en 1907 demostr que de fragmentos de
medula espinal puestos en lnea coagulada, crecan fibras nerviosas, clsicamente un tejido
implantado prolifera con un coagulo sanguneo que contiene jugo de embrin con
estimulante del crecimiento .Hay procedimientos para aislar colonias derivadas de una sola
clula disponindose as de poblaciones celulares idnticas para la experimentacin .
El cultivo de tejido y clulas proporcionan medios de experimentacin con tejidos y clulas
humanas con la posibilidad de obtener unidades vivas del complejo medio ambiente del
organismo.
OTROS MEDIOS DE OBSERVACION INDIRECTA DE CELULAS Y TEJIDOS HISTORADIOGRAFIA:
Es la fotografa de los cortes histolgicos por medio de rayos x muy blandos, emitidos por

7
 una ampolla especialmente preparada para ello y aplicando directamente el corte sobre el
lado sencillo de una pelcula fotogrfica de granos muy finos, el corte debe ser delgado y
fijado.
HISTORRADIOAUTOGRAFIA: se basa en que la radiactividad de ciertos elementos (isotopos
radiactivos), se incorporan en las estructuras que normal mente contienen el elemento
inactivo correspondiente al isotopo radiactivo ,localizndose en los lugares en donde ellos
se sintetizan o renuevan por lo cual puede seguirse su evolucin o metabolismo , para
estudiar el ADN, en cuya composicin interviene la TIMIDINA (precursora de la timina ) se
usa TIMIDINA TRITIADA su presencia ser revelada en el ncleo y mitocondrias por la
radioactividad adquirida , y no as la del ARN puesto que no contiene esa base pirimidica.
MICROINCINERACION: consiste en fijar los tejidos con alcohol absoluto para conservar las
sustancias minerales en su posicin original, luego se incluyen en parafina y se obtienen
cortes delgados de 3 a 5 micras, extendindolas sobre sobre el alcohol tibio o aceite de
parafina y se recogen en lminas de vidrio duro y poco fusible. Se introducen en un horno
especial de cuarzo fundido y de temperatura graduable, hasta alcanzar entre 500 a 6000
grados centgrados durante 15 minutos, se lograra as la destruccin de la materia orgnica
sin que sin que la combustin altere la topografa de los tejidos.
Una vez cubierto con un cubre objeto se examina de preferencia con luz incidente oblicua
o en fondo mate a todo, se le conoce con el nombre de ESPODOGRAMA, las imgenes deben
ser comparadas por los colores testigos coloreados y tambin es posible conocer sus
caracteres propios las cenizas de calcio y de magnesio, la slice por su color rojo, etc.
Otras cenizas se pueden individualizar por determinadas reacciones qumicas.

TECNICA HISTOLOGICA ESTANDAR

Son procedimientos especiales y consiste en someter el material de estudio para realizar el el

examen microscpico. Este examen n puede ser de dos tipos: el inmediato y el mediato.

8
1. EXAMEN INMEDIATO: se realiza en el animal o las clulas in vivo de la siguiente
manera:
a) Examen al estado fresco sin recurrir a reactivos modificatorios as por ejemplo
, el animal anestesiado estudindose clulas, tejidos circulacin in vivo .
b) Examen en coloracin intravital para esto se administra al animal en estudio
un colorante ya sea por via digestiva, endovenosa o sub cutnea o se sumerge
al animal en el colorante; luego se sacrifica al animal se toman biopsias
(pedasos de tejidos procedentes del nimal vivo).hay colorantes vitales vasicos
(rojo neutro,verde jano , azul de metileno,azul de nilo, azul brillante , pardo de
Bismark , etc)y acidos (azul tripan, azul pirrol,carmn litinado , etc)
c) Examen de en coloracin supravital : este estudio realiza en una porcin de
tejidos que conservan la vida sumerjido en liquidos fisiolgicos (similares al del
organismo ) al que se adiciona un colorante vital ejemplo , se toma una muestra
de sangre fresca en un porta objeto , se aade suero fisiolgico y solucin de
verde jano y luego se estudia al microscopio para observar mitocondrias en
vivo .la temperatura deber ser similar a la del animal del que procede la
muestra
- Los liquidos fisiolgicos mas usados son :
. LIQUIDO DE RINGER : para animales invertebrados
Cloruro de sodio 6g
Cloruro de potasio 0.075g
Cloruro de calcio 0.10g
Cloruro de sodio 0.10g
Agua destilada cc

LIQUIDO DE LOCKE:Para animales vertebrados :

Cloruro de sodio 9g
Cloruro de potasio 0.42g
Cloruro de calcio 0.24g
Bicarbonato de sodio 0.20g
Agua destilada 1.000cc

LIQUIDO DE TYRODE : Para animales vertebrados

Cloruro de sodio 8g
Cloruro de calcio 0.2g
Cloruro de potacio 0.2g
Cloruro de magnesio 0.1g
Fosfato modosodico 0.05g
Bicarbonato de sodio 1g
Glucosa1g
Agua destilada 1.000cc

2. EXAMEN MEDIATO :
Se realiza en cortes de rganos de un animal muerto recientemente o en frotises
de sus clulas .
a) Los frotises se estudan haciendo un extendido en las clulas en un portaobjeto
, fijndolas en alcohol -eter y matndolas para luego colorearlas , con este

9
 mtodo se observara al microsopopio clulas de escamasion bucal o vaginal
(papanicolaou) , sangre (hemograma ) , secreciones , etc .
b) Los cortes histolgicos es necesario someter al tejido a la accin de sustancias
que detengan la autolisis , estas sustancias son llamadas fijadores que pueden
ser de dos tipos :
1- Fijadores fsicos : como el calor , el frio y la desecacin ; son pocos usados
, aunque son frecuentes los cortes por congelacin usados en actos
operatorios y utilizandonse la nieve carbonica o el criostato ;la ventaja es
que el procedimiento es rpido y la desventaja es que la fijacin termina a
temperatura de ambiente .
2- Fijadores qumicos : son sustancias qumicas que sustituyen el agua en los
tejidos . condiciones de un buen fijador

-matar rpidamente las clulas para que la autolisis no altere su estructura

histolgica.

-conservar los detalles estructurales que presenta invivo.

-no dificultar su ulterior corte y coloracin .
-impedir la aparicin de estructuras artificiales .
-aumentar la captacin del colorante.
-matar bacterias y grmenes actuando como anticeptico.
-inactivar las encimas que estropean el tejido por degeneracin posmorten
.
-no tomar el tejido muy duro ni muy friable ni retraerlo .
-poseer alto poder de penetracin para que los fragmentos gruesos de
tejido , sean fijado uniformemente .
-impedir que desaparezcan los elementos solubles de la celula o despus
de la fijacin.

PRINCIPALES FIJADORES QUIMICOS :

a) FIJADORES SIMPLE:
1. Formol al 10% : debe usarse este de eleccin (formol puro = aldeida
fomica al 40% en solucin acuosa), actua como reductor tiene gran
poder de penetracin, permite buena coloracin y corte ,fija cortes
delgados minimo en 6 horas ,fija bien el aparato de Golgi ,no retrae
la estrucutra pero la endurece.
2. Alcohol etlico :es un mal fijador ,retrae los tejidos eh interfiere
con la coloracin,se le usa en microquimica para demostrar
mucinas y glucgeno.
3. Alcohol metlico : empleado para fijar frotises de sangre, medula
osea. Liquidos de puncion.
4. Acido acetico al 3% a 5% :actua presipitando las protenas del
nucleo,por lo que se considera buen fijador de los cromosomas no
fija las protenas citoplasmticas ,provoca hinchamiento de los
tejidos y no los endurece, destruye las mitocondrias.
5. Acido pcrico (sol.saturada) :presipita las protenas despolimeriza
los acidos nucleicos.

10
 6. Acido cromico 0.5 a 2 % fuerte oxidante presipita toda clase de
protenas por lo que hay que lavar con agua durante 24 horas.
7. Bicromato de potacio 1 a 2% :fija de manera homogenia ,no
presipita las protenas, fija los lpidos complejos se recomienda
para estudiar mitocondrias .
8. Bicloruro de mercurio al 6% presipita las protenas sin conbinarse
con ellas posee gran velocidad de penetracin ,endurece mucho
los tejidos , debe ser eliminado con compuestos yodados , produce
artefactos , corroe el metal.
9. Tetraoxido de osmio 1 a 2% : es un fuerte oxidante y produce
fijacin homogenia , fija las mitocondrias y el aparato de Golgi
ennegreciendolo fija bien la grasa y la mielina , no contra e los
tejidos tiene poco poder de penetracin y se usa de preferencia en
microscopio electrnico.
b) FIJADORES COMPUESTOS : son mesclas proporcionales de fijadores
simples y otros compuestos qumicos que potencian su accin , entre
estos tenemos :
1. Alcohol ter -mezclado en partes iguales es usado para fijar frotises
(papanicolaou).
A) LIQUIDO DE FLEMMING :
Acido cromico al1% 15cc
Acido osmico al 2% 4cc
Acido actico 11cc
Debe prepararse en el momento de usarse, se le usa mas en
citologa fija piezas muy pequeas de 1 a 3mm de espesor en
el lapso de 1 a 3 dias y hay que lavar las piezas por 24 horas ,
nose puede colorear con hematoxilina ,por lo que se usa
safranina. Anilina o violeta de genciana.
B) LIQUIDO DE ZENKER :
Bicloruro de mercurio 10g
Bicromato de potasio 5g
Zulfato de soda 2g
Agua destilada 200g
Acido actico (agregar en el momento de usar 10cc fija piezas
de 5 mm de espesor en el lapso de 6 a 24 horas , luego lavar 24
horas en agua corriente , enseguida eliminar el sublimado con
alcohol yodado de 70 grados y por ultimo eliminar el yodo con
hiposulfito de soda al 0.25%.
C) LIQUIDO DE MULLER :
bicromato de potasio 5g
sulfato de sodio 2g
agua destilada 200cc
debe prepararse en el momento que debe ser usado es menos
efectivo que el zenker
D) LIQUIDO DE HELLY : (Llamado zenker formol )
Bicloruro de mercuro 10g
Bicromato de potasio 5g
Sulfato de sodio 2g

11
 Formol (aadir en el momento de usar) 10 cc
Agua destilada 200cc debeprepararse en el momento de usar
, las piezas no deben permanecer en el fijador mas de 6 horas
el procedimiento de lavado es idntico al de zenker .Usarlo
para coloraciones con romanowsky , eritrosina ,orange azul de
toluidina. Fija bien las mitocondrias el bensley tiene idntica
composicin pero en la proporcin de 90/10.

E) LIQUIDO DE HEYDENHAIN: (mezcla sublimada tricloro -azetica

formol ) o de SUSA :
bicloruro de mercurio 9g
cloruro de sodio 1g
agua destilada 160 cc
acido tricloroacetico 4g
acido actico glacial 8cc
formol puro 40 cc
tiene buen poder de penetracin se puede fijar piezas grandes
, fija de 12 a 24 horas luego lavar con alcohol de 90 y en los
cortes aplicar el alcohol yodado.
F) LIQUIDO DE BOUIN : ( mezcla picroformol -acetina )
Acido pitrico 75cc
Formol puro 20 cc
Acido actico 5 cc
Es el mejor fijador para histologa tiene gran poder de
penetracin , fija piezas grandes de hasta un 1 cm . De espesor
en el lapso de 1 a 3 dias sin alterarse en cuyo caso debe lavarse
en el acohol de 80 grados si el tiempo de fijacin es corto no
es necesario este lavado no debe lavarse con agua ya que las
piezas se hinchan.
Si se quiere estudiar mitrocondias centrososmas , el acido
actico debe ser remplazado por acido tricloroacetico en la
formula de Bouin.
G) LIQUIDO DE DUBOSCQ -BRAZIL O BOUIN ALCOHO -LICO :
Acido pitrico 1g
Formol puro 60cc
Acido actico 15 cc
Alcohol de 80 150 cc
Tiene mas poder de penetracin que el bouin , fija piezas
medianas en menos de 24 horas el tratamiento de piezas
despus de la fijacin es igual al del bouin
H) OTROS FIJADORES
-LIQUIDO DE AOYAMA :
(sol.acuosa de cloruro de cadmio al 1% , 50 ml . formol neutro
.agua destilada 50ml.)
-LIQUIDO DE ALINANN : Sol.acuosa de bicromato potsico al
5% un vol. ;sol.acuosa de tetraoxido de osmio al 2% un vol.

12
13