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Propriedades gerais dos vrus

Jos Verssimo Fernandes

Vrus: Conceito

Os vrus so agentes infecciosos que se apresentam como arranjos macromoleculares


constitudos por cidos nuclicos DNA ou RNA, protenas, lipdios e carboidratos, destitudos de
qualquer atividade metablica, dependendo inteiramente de uma clula viva para a gerao de
novas partculas virais. Os vrus possuem um nico tipo de cido nuclico, DNA ou RNA, com uma
nica exceo do Citomegalovirus que, possui genoma de DNA e carrega uma cpia de RNA
mensageiro. no genoma viral que esto codificadas as informaes genticas necessrias para
desencadear na clula infectada, a sntese de todos os constituintes da partcula viral, resultando
na biossntese de novos vrus. Os vrus esto freqentemente associados a doenas em animais,
plantas, e em organismos inferiores, tais como: fungos, protozorios e bactrias. Contudo, uma
caracterstica muito importante desses agentes, alto grau de especificidade em relao aos seus
hospedeiros, sendo na maioria das vezes, especficos para uma determinada espcie. Essa
caracterstica dos vrus em relao a seus hospedeiros est relacionada ao fato de que, para um
vrus infectar um determinado organismo, necessrio que as clulas desse hospedeiro, sejam
capazes de interagir com componentes de superfcie da partcula viral, possibilitando a captura
dos vrus presentes no meio, e que essas clulas disponham de um repertrio enzimtico
suficiente para a produo de novos vrus.
A interao entre vrus e clulas se d atravs de componentes de superfcie de
membrana da clula, utilizados por ela para a incorporao de molculas essenciais ao seu
metabolismo os quais tambm podem servir como ligantes para estruturas de superfcie da
partcula viral, possibilitando a internalizao do vrus pela clula. Assim, esse processo de
interao entre vrus e clula, apresenta caractersticas que determinam uma certa especificidade
dos vrus em relao a seus hospedeiros, de forma que os vrus de animais normalmente, no so
capazes de infectar as plantas o mesmo ocorrendo com os vrus de plantas em relao aos
animais. Existe, no entanto, exceo de alguns casos particulares em que vrus de plantas,
tambm podem infectar insetos que servem como vetores de transmisso, de vrus entre as
plantas, em que os vrus se replicam no inseto, gerando novas partculas infecciosas as quais so
inoculadas nas plantas pelo inseto e vai causar infeco. Por outro lado, os arbovrus que
infectam humanos como so os casos dos vrus da dengue e da febre amarela, tambm infectam
os mosquitos transmissores dessas doenas, nos quais se replicam antes de serem transmitidos
para os humanos pela picada do inseto infectado. No entanto, de um modo geral, entre os vrus
que infectam animais, a maioria deles, em condies naturais, s infectam um determinado grupo
de animais, como por exemplo, o vrus da peste suna clssica, s capaz de infectar os sunos,
o vrus bouba aviria s infecta aves, assim como os vrus do sarampo, da caxumba e da rubola,
em condies naturais s infectam o homem. Outros apresentam um espectro de hospedeiro mais
amplo, como o caso do vrus da raiva que infecta, todos os mamferos, atingindo desde o
morcego at o homem.
Os vrus s so capazes de replicar o seu genoma para gerar novas partculas virais
idnticas, quando a clula apresenta um arsenal enzimtico suficiente para produzir todas as
macromolculas que o vrus precisa. Quando isso ocorre diz-se que essa clula permissiva ao
vrus e, portanto, capaz de se infectar e produzir novos vrus. Se, no entanto, a clula infectada
mais, no possui a maquinaria metablica suficiente para produzir todos os constituintes virais a
infeco abortada. Neste caso diz-se que a clula no permissiva ao vrus. Assim, existem
em um mesmo hospedeiro, determinados tipos de clulas cujo repertrio enzimtico e
caractersticas metablicas as tornam mais competentes para produzir vrus que outras, fazendo
com que a infeco se expresse com intensidades diferentes em tecidos diferentes, de forma que
em um mesmo indivduo, um determinado tipo de tecido ou rgo, pode ser mais afetado que
outro. Por exemplo, o vrus da hepatite B tem como rgo alvo o fgado e, praticamente s infecta
as clulas hepticas do homem.

2. Estrutura da partcula viral

Os vrus no possuem organizao celular, como acontece com os seres vivos. Eles
so constitudos basicamente por material gentico, seja RNA ou DNA, que constitui o genoma
viral o qual se encontra recoberto por uma capa de protenas, chamada capsdio, que protege o

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genoma e serve de veculo de transporte dos vrus de um hospedeiro para outro. O capsdio
formado por um conjunto de unidades polipeptdicas chamadas capsmeros, que se agregam
entre si para formar essa estrutura de proteo do genoma viral, contra a ao das enzimas
nucleases (RNase e DNase) do organismo hospedeiro. O arranjo dos capsmeros ao se unirem
para formar o capsdio se faz de forma espontnea, por atrao eletroqumica das unidades
polipetdicas, e determina o tipo de simetria do vrus. O genoma viral constitudo por cido
nuclico, que pode ser RNA (cido ribonuclico) ou de DNA (cido desoxirribonuclico), onde
esto contidas as informaes genticas suficientes para codificar na clula, todas as protenas
necessrias sua replicao resultando na formao de rplicas do genoma as quais vo ser
incorporadas pelos capsdios para formar novas partculas virais idnticas. Alm do genoma e do
capsdio que so estruturas obrigatrias na formao da partcula viral, alguns vrus possuem uma
membrana de natureza fosfolipdica que envolve o capsdio, chamada envelope a qual obtida a
partir da membrana da clula hospedeira, modificada com protenas virais a qual removida
quando o vrus liberado da clula, aps sua replicao. Outros vrus de estrutura mais complexa
apresentam protenas localizadas no espao entre capsdio e envelope. Quando essas protenas
esto organizadas formando uma camada completa em torno do nucleocapsdio recebe o nome
de protena da matriz. Se, no entanto, elas esto dispersas no espao entre o nucleocapsdio e o
envelope denomina-se tegumento. A protena da matriz tem um papel importante na montagem
da partcula viral e ajuda a manter a estrutura do vrus. Entre as protenas que constituem o
tegumento esto enzimas importantes no processo de replicao do genoma viral. Alguns vrus
tambm apresentam em sua superfcie, glicoprotenas que funcionam como estruturas de fixao
do vrus aos receptores da clula denominadas espculas que participam dos processos de
adsoro e penetrao dos vrus na clula hospedeira. Essas espculas so glicoprotenas que se
projetam para fora da partcula viral e podem se apresentar ligadas ao envelope, ou diretamente
ao capsdio viral. O conjunto formado pelo genoma e capsdio denominado nucleocapsdio e a
partcula viral completa e com atividade infecciosa chamada vrion, que a nica forma em que
os vrus podem preservar sua atividade infecciosa fora da clula hospedeira.

3. Caractersticas e natureza dos vrus

Em virtude da ausncia total de atividade metablica, os vrus dependem inteiramente


de uma clula viva para a replicao do seu genoma, comportando-se fora dela, como um objeto
inanimado. Esta propriedade faz com que os vrus sejam muito diferentes dos organismos vivos.
Alm disso, os vrus apresentam algumas propriedades tpicas dos minerais, como por exemplo, a
capacidade de se cristalizar, quando obtidos em preparaes purificadas, aps liofilizao e o fato
de se apresentarem sob a forma de figuras geomtricas. Desta forma, se analisarmos os vrus
levando em considerao apenas a sua composio qumica, como eles so constitudos de cido
nuclicos, protenas, lipdios e carboidratos, que so molculas orgnicas as quais entram na

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constituio dos seres vivos, eles poderiam ser considerados como organismos vivos. No entanto,
como os vrus no apresentam atividade metablica, que a caracterstica mais importante dos
seres vivos, e ainda se comportam como minerais, em alguns aspectos, podemos concluir que os
vrus possuem uma dupla natureza, apresentando propriedades inerentes, tanto aos seres vivos,
quanto aos minerais e, portanto, no devem ser classificados como organismos vivos, e sim em
uma posio intermediria, entre o vivo e o no vivo. Pelo fato de no possurem atividade
metablica, para serem propagados em laboratrio, os vrus necessitam sempre de uma clula
viva, como hospedeira, a qual seja capaz de dispor dos processos metablicos, necessrio
produo de novos vrus. Esta caracterstica faz dos vrus uma classe especial de agentes
infecciosos inteiramente diferentes dos outros. Para fazer a replicao do genoma viral e sintetizar
os demais tipos de macromolculas que entram na constituio dos vrus, as clulas infectadas
necessitam de um maior consumo de energia e da mobilizao de processos metablicos
voltados para a produo de novos vrus, prejudicando assim suas funes normais. Alm disso, o
processo de biossntese viral pode resultar na ocorrncia de danos fsicos estrutura da clula
infectada, podendo lev-la morte.
Existem dois mecanismos bsicos, atravs dos quais a infeco por vrus pode
determinar a morte da clula hospedeira: um resultante de alteraes decorrentes do processo
de replicao do genoma viral que implica no apenas em prejuzos funcionais, mas tambm pode
provocar danos estruturais tais como: alteraes no citoesqueleto, aumento da permeabilidade de
membranas, acmulo de granulaes, fragmentao do DNA, fuso entre clulas vizinhas
formando sinccios, ou promovendo a lise celular. O outro um mecanismo indireto, em que o
processo de biossntese viral em si mesmo, no provoca danos celulares importantes, mas pode
determinar a morte da clula atravs do desencadeamento de um processo imunopatolgico pelo
prprio organismo hospedeiro, envolvendo mecanismos tanto da resposta imune inata, como da
adquirida que resultam na destruio da clula infectada. Tanto no primeiro quanto no segundo
caso, esses mecanismos so desencadeados em conseqncia da expresso de informaes
genticas contidas no genoma viral as quais so traduzidas pela clula infectada sob a forma de
protenas virais, estranhas para o hospedeiro. Portanto, elas tm origem na informao gentica
que est codificada no genoma do vrus. Baseado nisso, pode-se afirmar que a atividade
infecciosa dos vrus determinada pelo seu genoma. No entanto, para que um vrus tenha acesso
ao interior de uma clula, necessrio inicialmente, que essa clula possua em sua superfcie de
membrana, estruturas denominadas receptores que sejam capazes de interagir com componentes
de superfcie das partculas virais, para que ocorra a fixao dos vrus membrana das clulas.
Esse processo chamado de adsoro e se d atravs das espculas, e /ou outras protenas
virais presentes no envelope, ou do prprio capsdio viral, dependendo do tipo de vrus. Portanto,
essas estruturas de superfcie das partculas virais, que interagem com os componentes de
superfcie de membrana da clula, que determinam a especificidade dos vrus em relao aos
seus hospedeiros.

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Todos os organismos vivos, at mesmo os mais simples, como o caso das bactrias
intracelulares, possuem os dois tipos de cidos nuclicos em suas clulas, e possuem atividade
metablica prpria. J os vrus, possuem apenas um tipo de cido nuclico, DNA ou RNA e no
possuem qualquer atividade metablica. Alm disso, nos organismos vivos, o DNA se apresenta
sempre com dois filamentos, enquanto que o RNA se apresenta com filamento nico. Nos vrus, o
DNA pode se apresentar na forma de filamento nico ou duplo o mesmo ocorrendo com o RNA.
Esse um outro aspecto que torna os vrus diferentes dos seres vivos. Outra propriedade dos
vrus que os diferencia dos organismos vivos o fato de eles se apresentarem sempre sob a
forma de figuras geomtricas, e de formar cristais, semelhante aos minerais, quando so
purificados. O tipo de figura geomtrica que o vrus representa, determinado pelo arranjo das
protenas do capsdio, e essa caracterstica denominada tipo de simetria que se constitui num
importante critrio de classificao dos vrus. Quando nos referimos ao tipo de simetria de um
vrus estamos falando da forma como se apresenta o seu nucleocapsdio, a qual segue trs
padres morfolgicos: um, no qual ele se apresenta na forma de uma figura cbica com vinte
lados iguais, isto , um icosgono, que chamada simetria icosadrica; e a outra em que o
nucleocapsdio se apresenta na forma de figura cilndrica que chamada de simetria helicoidal e
um terceiro tipo, chamado de simetria complexa que tpica dos vrus bacterianos e alguns vrus
de humanos mais complexos, como o caso dos Poxvrus, a qual foge desses dois padres
morfolgicos.

4. Conceitos bsicos em virologia:

4.1- Capsmeros so as unidades polipetdicas que no seu conjunto formam o capsdio.

4.2 - Nucleocapsdeo o conjunto formado pelo genoma mais o capsdio viral.

4.3 - Vrion a partcula viral completa e com atividade infecciosa. Em alguns vrus, como o
caso do HPV, o vrion coincide com o nucleocapsdio. a forma sob a qual os vrus se
apresentam no meio extracelular e transportado de um hospedeiro para outro.

4.4 - Vrus defectivo um vrus funcionalmente defeituoso, Isto , que sofreu alguma alterao
na sua informao gentica que resultou na perda da capacidade codificar algum de seus
componentes necessrios ativao da clula para replicao do seu genoma viral e,
conseqentemente, de sua atividade infecciosa, o que ocorre geralmente, devido a mutaes
deletrias. Os vrus desse tipo podem vir a recuperar a sua atividade infecciosa, quando
estabelecem uma relao de sinergismo como outro vrus que seja capaz de suprir a sua
deficincia.

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4.5- Pseudovrus so partculas semelhantes a vrus, mas sem atividade infecciosa, que se
formam por um erro de empacotamento do cido nuclico pelas protenas do capsdio, por
ocasio da montagem das partculas, onde ao invs de empacotar o cido nuclico do vrus,
empacotado cido nuclico da prpria clula hospedeira. Neste caso forma-se uma partcula com
todas as estruturas externas iguais aquelas dos vrus normais, porm abrigando um cido
nuclico que no do vrus. Apesar dessa partcula ser capaz de se adsorver, e ser internalizada
por uma nova clula, ela no possui atividade infecciosa, pois no capaz gerar nos vrus.

4.6 - Viride so vrus desprovidos de capsdio, portanto, constitudos penas por uma molcula
de RNA de filamento nico na forma circular. Esses vrus fogem ao padro de caractersticas dos
vrus em geral, por isso no so considerados vrus verdadeiros.

4.7 - Viruside ou vrus satlite so vrus que dependem de outro vrus auxiliar para causar
uma infeco, em virtude de sua informao gentica no ser suficiente para codificar a sntese
de todas as protenas que ele precisa para gerar novos vrus. Por isso eles s se replicam na
presena de outro vrus que seja capaz de fornecer os componentes que lhe faltam. Um exemplo
clssico desse tipo de vrus o vrus da hepatite delta ou hepatite D, em que a replicao do
genoma viral e a formao de novas partculas virais completas, s ocorre na presena da
infeco pelo vrus da hepatite B.

4.8- Vrus de genoma multipartido so vrus que apresentam o genoma fragmentado em


vrias partes, onde cada fragmento representa um gene e encontra-se envolvido por um capsdio
prprio. Nesse caso, um s vrus se apresenta na forma de vrias partculas fsicas separadas e
s pode causar infeco quando todas as partculas que o compem, penetram na mesma clula.
Esse tipo de vrus encontrado principalmente como patgenos de plantas e s se transmitem
por insetos.

4.9. Prons so protenas encontradas no tecido nervo as quais em condies normais, parece
ter um papel importante nas funes do crebro, principalmente no que se refere s atividades
desse rgo relacionadas com a memria. Essas protenas quando sofrem mutaes e alteraes
conformacionais, podem passar a se comportar como um agente infeccioso, resultando em
processos patolgicos degenerativos do sistema nervoso central que pode ser transmitir de um
indivduo para outro. Isso ocorre porque essa protena alterada tem a capacidade de induzir essa
mesma alterao na clula nervosa de um indivduo normal. Nos bovinos, esse agente causa uma
doena chamada encefalopatia espongiforme, conhecida como doena da vaca louca. Nos
humanos, causa uma doena crnica degenerativa do sistema nervoso central (SCN), conhecida
como doena de Creutzfeldt-Jakob.

5. Critrios de classificao dos vrus

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Da mesma forma que os seres vivos, os vrus so classificados com base em critrios
bem definidos de acordo com suas caractersticas, as quais nos permitem diferenci-los uns dos
outros. Dentre estes critrios, os mais importantes so: o tipo de cido nuclico, tamanho e
morfologia da partcula viral (incluindo o tipo de simetria, o nmero de capsmeros, presena ou
no de envelope e de espculas), a presena de certas enzimas especficas, a forma como se
transmitem na natureza, propriedades antignicas e fsico-qumicas. Alm disso, podem ser
utilizados critrios como: a seqncia de nucleotdios do genoma inteiro ou de alguns seus genes,
e a seqncia de aminocidos de algumas protenas.

6. Comportamento frente aos agentes fsicos e qumicos

Com relao aos agentes fsicos e qumicos, os vrus apresentam diferentes graus de
sensibilidade. Mas, de um modo geral, os vrus no envelopados so mais resistentes aos
agentes fsicos e qumicos, quando comparados com os vrus envelopados. Em geral, a atividade
infecciosa dos vrus destruda pelo calor mido de 50 a 60 oC, por um perodo de 30 minutos e
pelo calor seco de 180oC, durante uma hora. A radiao como a luz ultravioleta, raios-X e outras
radiaes ionizantes de alta energia, tambm inativam os vrus, sendo que o tempo de exposio
e a intensidade de radiao so variveis para os diferentes tipos de vrus. Com relao ao pH, os
vrus so usualmente estveis na faixa de 5,0 a 9,0, sendo os vrus envelopados, com exceo do
vrus da hepatite B, sempre mais sensveis s variaes de pH, tanto em relao acidez como a
alcalinidade, quando comparados aos vrus no envelopados. Isto faz com que os vrus
envelopados no sejam capazes de ultrapassarem o estmago, em virtude da acidez do suco
gstrico. Por outro lado, todos os vrus so inativados em condies muito alcalinas. Com relao
aos agentes qumicos, os vrus envelopados, com exceo do vrus da hepatite B so sensveis
ao ter, sendo o tratamento com essa substncia, um dos testes mais utilizados para se saber se
um vrus ou no envelopado. De modo geral os vrus no envelopados so tambm mais
resistentes aos agentes qumicos que os envelopados. As substncias que possuem ao
desnaturante de cidos nuclicos e de protenas e solubilizantes de lipdios, de um modo geral,
so capazes de inativar vrus, embora as concentraes necessrias, variem para os diferentes
tipos de vrus. O cloro e os detergentes derivados do cloro como o hipoclorito de sdio, hipoclorito
de potssio, alm de formalina, fenol, so os agentes qumicos mais utilizados, em concentraes
que variam de 1 a 5% de acordo com a situao e com o tipo de vrus.

7. Mecanismos de biossntese viral

Como os vrus no possuem atividade metablica, a sua biossntese depende


inteiramente de uma clula viva, isto , a replicao do genoma viral e a sntese de protenas
necessria formao de novos vrus, ocorre s custas de processos metablicos de clulas
vivas, que sejam permissivas, isto , que disponham de um repertrio enzimtico suficiente para
sintetizar todas as macromolculas necessrias formao de novos vrus, tais como: cido

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nuclico, protenas e demais constituintes da partcula viral, que variam de acordo com o tipo de
vrus. Os bacterifagos so os nicos tipos de vrus em que a partcula viral completa no
internalizada pela clula; nesses vrus, apenas o cido nuclico injetado no interior da clula
bacteriana, e a partir dele novas partculas virais completas e com atividade infecciosa so
geradas as quais so iguais quela que deu incio infeco. Para os demais tipos de vrus, a
infeco tem incio, quando os nucleocapsdios virais so internalizados pela clula hospedeira, e
o processo de replicao do genoma e a sntese dos demais constituintes virais se desenvolve em
vrias fases, apresentando a seguinte seqncia de eventos: adsoro, internalizao,
desnudamento, fase de eclipse, maturao e liberao.
O genoma viral pode se apresentar sob vrias formas, e cada tipo de vrus apresenta
uma estratgia de replicao de seu genoma, conforme suas caractersticas. Os vrus de genoma
de RNA podem se apresentar (1) como RNA de fita simples linear e contnua com polaridade
positiva RNA (+), quando possui uma seqncia poli-A na extremidade 3 e cap de protena na
extremidade 5o prprio genoma viral reconhecido pela clula hospedeira, como RNA
mensageiro (RNA-m), o qual traduzido em uma poliprotena que aps o processamento, dar
origem s diferentes protenas virais. Quando no possui a cauda poli A nem cap, no funciona
com RNA mensageiro e tem que passar por uma transcrio para gerar o RNA mensageiro. (2)
com RNA de fita simples polaridade positiva RNA (+) com transcritase reversa (retrovrus)
em que o RNA transcrito para DNA, pela ao da transcritase reversa, seguido da sntese de
uma fita complementar do DNA, para torn-lo de duplo filamento e esse se integra ao DNA da
clula hospedeira tornando-se um pr-vrus; (3) como RNA de fita simples linear e contnua de

polaridade negativa RNA (-) que no funcionam como m-RNA e, portanto, no pode ser
traduzido diretamente, tendo que passar antes por uma transcrio por meio de uma transcritase
prpria, para d origem ao m-RNA o qual traduzido em uma poliprotena que clivada para d
dar origem s vrias protenas virais; (4) como RNA de fita simples segmentado, com

polaridade negativa RNA (-), nesses vrus, cada segmento representa genes separados, os
quais so transcritos em m-RNAs individuais que so em seguida traduzidos em suas respectivas
protenas; (4) como RNA de fita dupla, segmentado - nestes vrus, cada segmento da fita
negativa transcrito em um segmento de polaridade positiva que ir funcionar como m-RNA e, ao
mesmo tempo em que so traduzidos em suas protenas, vo servir tambm como moldes para a
replicao dos fragmentos da fita negativa; (5) como RNA de fita simples circular - Exp. O vrus
da hepatite delta, um vrus satlite do vrus da hepatite B, que se constitui uma exceo aos vrus
verdadeiros. Esse vrus possui um genoma pequeno de 1,7kb de RNA de fita simples circular,
dobrado sobre si mesmo formando uma estrutura semelhante a um basto, com cerca de 70%
das bases emparelhadas. O genoma replicado no ncleo da clula hospedeira, pela ao da
RNA polimerase II da clula, dando origem a dois tipos de RNAs: um que uma cpia exata do
RNA original, chamado de RNA antigenmico e o outro que de tamanho menor e poliadenilado

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que funciona como m-RNA. Tanto o RNA genmico original, como o antigenmoco, possuem
atividade ribozmica que promove a sua clivagem, tornando-os lineares. A linearizao do RNA
genmico original necessria para que haja a transcrio dando origem aos dois tipos de RNAs
do vrus. O RNA anti-genmico torna-se circular e posteriormente clivado, tornando-se linear
para servir de molde de replicao originando mltiplas cpias de RNA complementares que aps
a circularizao correspondero aos novos genomas. O RNA menor processado, poliadenilado e
vai para o citoplasma onde funcionar como m-RNA, sendo traduzido na protena do capsdio viral
que chamada antgeno delta.
Os vrus com genoma de DNA podem se apresentar (1) com DNA de fita simples
linear de polaridade positiva que antes de ser transcrito precisa sintetizar uma fita de DNA
complementar, com polaridade negativa a qual vai servir como molde para a replicao do DNA
viral gerando mltiplas cpias de DNA positivas que sero transcritas para m-RNA, que em
seguida, traduzido em protenas virais; (2) como DNA de filamento duplo linear em que a
transcrio pode ser feita de uma das fitas quando os genes esto todos na mesma fita, ou de
partes de ambas as fitas, quando os genes esto distribudos nas duas fitas; (3) com DNA de
filamento duplo circular que segue os mesmos princpios dos vrus de duplo filamento linear.
Para que ocorra uma infeco por vrus, necessrio que a clula, atravs de seus
receptores de superfcie de membrana, interaja com componentes de superfcie da partcula viral
de forma a permitir a internalizao dos vrus com a liberao do genoma viral no interior da
clula, havendo em seguida a expresso da informao gentica do vrus na clula, o que resulta
na replicao do cido nuclico viral e na produo dos demais constituintes, dando origem a
novos vrus. Esse fenmeno de interao entre componentes de superfcie dos vrus e das clulas
denominado adsoro e representa o primeiro estgio da infeco viral. Aps a adsoro corre
a incorporao das partculas virais pela clula que representa a fase de internalizao a qual se
d por meio de endocitose, em que a clula puxa para dentro de si, os vrus adsorvidos aos
receptores, ou alternativamente, no caso dos vrus envelopados, atravs da fuso entre envelope
do vrus e a membrana da clula. Em alguns tipos de vrus esse processo de fuso se d atravs
de glicoprotenas presentes na partcula viral que possuem atividade fusognica mediada por
interaes hidrofbicas independentes de variao do pH, em outros vrus, como o caso do
vrus da influenza, o processo de fuso depende da variao de pH, tendo em vista que a ao
fusognica das glicoprotenas de superfcie da partcula viral s ocorre com a acidificao do meio
que muda a configurao da protena expondo a regio lipoflica da espcula hemaglutinina, que
promove a fuso do envelope viral com a membrana endossmica.
Uma vez dentro da clula, o capsdio viral quebrado por enzimas lisossmicas da
prpria clula, liberando o cido nuclico viral que corresponde fase de desnudamento. Aps a
liberao do genoma viral no interior da clula, tem incio a fase de eclipse, que a etapa da
infeco em que a informao gentica do vrus expressa na clula e ocorre a replicao do
genoma viral propriamente dita. Corresponde ao perodo em que no so encontras partculas

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virais completas (vrions) no interior da clula. Em algumas situaes, como acontece com os
retrovrus, quando o genoma viral liberado no interior da clula, ele passa por uma transcrio
reversa, para formar um DNA de duplo filamento, que a seguir se integra ao DNA da clula
hospedeira para poder ser transcrito e traduzido nas protenas virais resultando na replicao do
genoma viral e na produo de novas partculas virais. Nesse caso, o vrus passa a fazer parte da
clula, de forma que, para o organismo livrar-se desse vrus, necessrio destruir a clula
infectada. Entretanto, a maioria dos vrus no requer essa integrao para que haja a expresso
de suas informaes genticas, bem como a replicao do genoma viral e gerao de novos
vrus.
Todo vrus infectante, qualquer que seja o tipo de seu cido nuclico, carrega com sigo
as informaes genticas necessrias para codificar, na clula hospedeira, a produo de todas
as macromolculas que ele necessita para gerar novos vrus. Os diferentes tipos de vrus adotam
estratgias tambm diferentes de replicao. Assim, nos vrus com genoma de RNA em grande
parte, a informao gentica expressa de uma nica vez, dando origem a um ou mais RNA
mensageiros (RNA-m) que so traduzidos em uma ou mais poliprotenas que a seguir sero
processadas por clivagem de enzimas proteolticas para dar origem s diversas protenas virais.
Em alguns casos, a partir de um RNA-m que policistrnico feita a traduo resultando em uma
nica poliprotena, a qual em seguida clivada para d origem s diversas protenas virais, tanto
as estruturais, quanto as no estruturais. Em outros podem ser produzidos RM mensageiros
diferentes para diferentes protenas. Nos casos em que o vrus possui o RNA segmentado, a
transcrio feita em RNAm separados para cada segmentos que representa um gene, ao invs
de uma molcula policistrnica, e cada um deles ser traduzido em protenas individuais. Os vrus
com RNA de fita nica de polaridade positiva que apresentam cauda poli-A na extremidade 3e
cap na extremidade 5 so reconhecidos pela clula como RNA-m, e ao ser liberado no
citoplasma, se ligam diretamente aos ribossomos. Esse RNA-m traduzido em uma poliprotena
precursora, a qual clivada em vrios passos, pela ao de proteases virais, resultando nas
protenas no estruturais e estruturais do vrus. Para que haja a replicao do RNA genmico
necessria que haja a transcrio da fita de RNA positiva para uma fita negativa a qual servir
como molde, a partir da qual so geradas as novas cpias do genoma viral. Os vrus com RNA
com polaridade positiva, mas que no possuem cauda poli-A nem cap, precisam ser transcritos
para uma fita de RNA negativa a qual servir de molde para a sntese do RNA mensageiro e como
intermedirio replicativo a partir do qual so geradas as novas cpias do genoma viral. Os vrus
com genoma de RNA (-) no carregam seqncias codificadoras de protenas, mas apenas a fita
complementar da fita que verdadeiramente codificadora. Por isso, esses vrus trazem consigo a
enzima RNA polimerase ou transcritase a qual capaz de fazer a transcrio da fita negativa para
dois tipos de RNA com polaridade positiva: um com o terminal 5 coberto pelo cap e o 3com
cauda poli-A, que vai servir, como RNA-m sendo traduzido em protenas virais e o outro, sem
essas caractersticas que vai servir como molde, a partir do qual sero copiados os RNA (-) do

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genoma viral. Os retrovrus que possuem RNA (+) e carregam consigo a enzima transcrio
reversa o RNA genmico passa por uma transcrio reversa dando origem a uma fita de DNA (-)
e em seguida a atividade DNA polimerase da prpria transcritase reversa sintetiza a fita de DNA
complementar, tornando o DNA de dupla fita, o qual torna-se circular e entra no ncleo da clula.
No ncleo ele se abre e integra-se ao genoma da clula tornando-se um pr-vrus, o qual passa a
fazer parte da informao gentica da clula. Para que haja replicao do genoma desses vrus,
necessrio que DNA do pr-vrus seja transcrito pela RNA polimerase II da clula, resultando em
dois tipos RNAs, um que vai funcionar com RNAs-m ao quais sero traduzidos em poliprotenas
as quais sero clivadas posteriormente por proteases virais, para da origem as protenas
estruturais e no estruturais do vrus. O outro tipo de RNA representa as replicas do genoma viral
as quais iro ser incorporadas pelas protenas estruturais para formar novas partculas virais.
Alguns vrus com genoma de RNA apresentam formas particulares e econmicas de utilizarem
suas informaes genticas de maneira que, a mesma regio do genoma pode apresentar
mltiplas leituras abertas, iniciadas em pontos diferentes da fita, de forma que cada uma dessas
leituras resultar em RNA-m especficos os quais so traduzidos em protenas diferentes para
cada leitura. Nos vrus com RNA de fita dupla segmentados, como os segmentos da fita positiva
no funcionam como RNA-m, esses vrus possuem uma transcritase que faz a transcrio de
cada segmentos da fita negativa para formar segmentos positivos correspondente, os quais iro
servir como RNA-m sendo traduzidos nas protenas virais, ao mesmo tempo em que servem como
molde para a replicao dos segmentos da fita negativa. Como esses vrus so sempre de
genoma segmentado, so gerados RNA-m separados para cada segmento do genoma e cada um
deles traduzido em suas respectivas protenas separadamente.
Os vrus com genoma de DNA utilizam estratgias semelhantes quelas utilizadas
pela clula eucaritica, para a formao de RNA-m e durante a replicao do genoma viral, as
macromolculas especficas do vrus so sintetizadas em uma seqncia altamente organizada.
Nos vrus de DNA a expresso da informao gentica feita em etapas separadas. Em
primeiro lugar ocorre leitura dos genes precoces, que codificam as protenas precoces, que so
protenas no estruturais, principalmente enzimas e protenas ativadoras de transcrio ligantes
de DNA, as quais tm como funes ativar a transcrio dos genes virais, bem como de desviar
as atividades metablicas da clula infectada, em funo da replicao do DNA viral. Aps a
replicao do genoma viral, ocorre a transcrio dos genes tardios, os quais codificam as
protenas estruturais ou tardias que iro compor as estruturas da partcula viral. A transcrio tanto
dos genes precoces com dos tardios, ocorre no ncleo da clula e depende de enzimas celulares.
Em ambos os casos, os respectivos RNA-m so transportados para o citoplasma onde so
traduzidos nas protenas virais. As protenas precoces alm de prepararem a clula para produzir
novos vrus, ativam a replicao do DNA viral ligando-se ao stio de origem da replicao e a
seqncia ativadora de transcrio. Aps a replicao do genoma viral que ocorre a expresso
dos genes tardios que codificam as protenas estruturais do vrus as quais vo se organizarem

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para formar novas partculas virais. No caso das protenas estruturais que compem os capsdios,
aps a sntese elas se deslocam para o ncleo, aonde os capsmeros vo se reunir para forma
capsdios os quais empacotam as cpias do genoma para formar novas partculas virais.
Enquanto isso, as protenas do envelope so endereadas para membrana citoplasmtica,
nuclear ou do retculo endoplasmtico dependendo do tipo de vrus, onde ficam ancoradas at o
brotamento das partculas virais. Se o vrus possui genoma de DNA de fita simples linear (+) ou
(-), antes da transcrio, ele faz uma fita complementar tornando-se de duplo filamento. Para isso,
existem seqncias repetidas invertidas do DNA em ambas as extremidades do genoma, as quais
se dobram e hibridizam com ela prpria para criar um iniciador a partir do qual a DNA polimerase
da clula fazer a extenso da nova fita de DNA (-) a qual vai servir como molde para a sntese de
mltiplas cpias do genoma viral. Em seguida, a fita de DNA (+) transcrita para RNA-m e
traduzido em protenas virais. Quando ele possui DNA de filamento duplo linear, a fita de DNA (+)
ou regies codificadoras de ambas as fitas so transcritas para gerar RNA-m os quais sero
traduzidos nas protenas virais. A transcrio pode ser feita de apenas uma das fitas quando os
genes esto todos na mesma fita, ou de partes de ambas, quando os genes esto distribudos nas
duas fitas. Os vrus de DNA de filamento duplo circular seguem os mesmos princpios dos vrus de
duplo filamento linear, inclusive podendo apresentar seqncia codificadoras em apenas uma das
fitas ou em regies das duas fitas. Alguns vrus de DNA de filamento duplo, como os caso dos
vrus do grupo herpes, apresentam trs fases de sntese protica, duas antes da replicao do
DNA viral que correspondem s protenas precoces imediatas e as precoces as quais tm papel
importante na replicao do DNA e a terceira que ocorre aps a replicao do DNA e corresponde
s protenas tardias ou estruturais. Nos vrus de DNA de filamento duplo, os RNA-m precoces e
tardios podem resultar da transcrio de seqncias localizadas em fitas diferentes ou de regies
diferentes da mesma fita, separadas por ntrons ou de regies superpostas da mesma fita. Neste
ltimo caso, essa redundncia reduz a quantidade de DNA viral necessria para codificar a
mesma quantidade de protenas virais, se constituindo, portanto, em um outro exemplo de
economia gentica entre os vrus.
Aps a replicao do cido nuclico, e uma vez sintetizadas as protenas estruturais,
estas unidades proticas chamadas de capsmeros iro se reunir para formar os capsdios
resultando na formao de partculas virais e essa fase chamada de maturao ou montagem
das partculas virais. Tanto nos vrus no envelopados como nos envelopados os capsmeros se
renem por meio de um processo espontneo para formar os capsdios virais que em seguida
sero preenchidos com o cido nuclico genmico, formando os nucleocapsdios. No caso dos
vrus envelopado, as protenas que iro compor o envelope so sintetizadas e transportadas para
a membrana da clula de onde as partculas virais iro brotar. Se o vrus, alm do envelope possui
espculas essas protenas so sintetizadas em seguida, glicosiladas no complexo de Golgi e
transportadas para uma membrana seja do retculo endoplasmtico, membrana nuclear ou
citoplasmtica, dependendo do tipo de vrus, onde ficaro ancoradas at o brotamento das

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partculas virais. Uma vez formados os nucleocapsdios virais comea a fase de liberao, na
qual os vrus no envelopados so liberados da clula por exocitose ou lise celular. Os vrus
envelopados saem da clula por brotamento que pode resultar ou no na morte da clula
infectada, por exocitose e em alguns casos por lise. Ao brotarem da membrana na qual esto
ancoradas as protenas do envelope e/ou espculas, as partculas virais adquirem o seu envelope,
levando consigo fragmentos da membrana da clula onde se encontram suas protenas.

8. Interferncia e Interferon

A infeco simultnea de uma cultura de clulas ou de animais ntegros por dois vrus,
pode resultar em uma recombinao gentica entre eles, ou em uma relao de sinergismo, onde
um vrus potencia a ao do outro, ou ainda, uma relao de antagonismo em que um deles inibe
a replicao do outro. Contudo, na maioria das vezes, a infeco simultnea de uma mesma
clula por dois vrus, resulta na inibio da produo de um deles, em virtude da ocorrncia de um
fenmeno chamado, interferncia viral. Esse tipo de relao no ocorre com todas as
combinaes virais, dois vrus podem muito bem, infectar uma mesma clula de forma to
eficiente quanto nas infeces isoladas, mas algumas vezes, um deles, no conseguem replicar o
seu genoma, devido ao fenmeno de interferncia de um desses vrus sobre o outro. A
interferncia ocorre quando o primeiro vrus a ser internalizado pela clula, promove alteraes
nos componentes de superfcie da membrana, fazendo desaparecer os receptores que a clula
poderia utilizar para a captura do segundo vrus. Outro mecanismo que pode levar interferncia
entre vrus ocorre quando os dois vrus so internalizados pela mesma clula, estabelecendo-se a
partir da, uma competio entre eles por espao metablico na clula, isto , pelos processos de
biossntese de seus componentes, de forma que um deles pode inviabilizar a replicao do outro,
pelo fato de no haver disponibilidade dos processos bioqumicos necessrios para a sntese de
suas macromolculas. A interferncia dita homloga quando ela se verifica entre vrus
semelhantes, heterloga, quando os vrus so muito diferentes e autointerferncia quando ela
ocorre entre partculas infectantes e no infectantes do mesmo vrus. O conhecimento desse tipo
de interao entre vrus importante para a definio sobre a possibilidade ou no da associao
de vacinas feitas com vrus atenuados. Outro mecanismo atravs do qual um vrus pode inibir a
produo de outro, ativando a clula infectada fazendo com que ela produza e secrete para o
meio extracelular, um inibidor inespecfico da infeco viral chamado, interferon (IFN), que atua
sobre as clulas que ainda no foram infectadas, ativando nestas, mecanismos bioqumicos
capazes de inibir sntese protica e bloquear a replicao do genoma viral. Nessa condio, no
ocorre sntese de protenas virais e conseqentemente a clula no oferece as condies
necessria para a biossntese viral.
A ativao pelo IFN, induz nas clulas que ainda no foram atacadas pelos vrus, o
desenvolvimento de um estado antiviral inespecfico, que impede a biossintese no apenas do

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vrus que est causando a infeco, mas tambm de outros tipos de vrus que tentem infectar
essas clulas nesse momento. Os interferons so protenas codificadas por genes celulares, tanto
em animais ntegros, como em cultura, em resposta infeco por vrus ou ao estmulo de outros
indutores como: RNA sintticos de dupla fita, toxinas de bactrias, produtos de fungos e
determinados grupamentos qumicos. Os interferons fazem parte da resposta imune inata, e
acredita-se que eles representam a primeira linha de defesa do organismo contra as infeces por
vrus. Alm disso, essa famlia de glicoprotenas tem a capacidade para modular as respostas
imunes adquiridas, tanto humoral quanto celular, e apresentam inmeras atividades reguladoras
do crescimento celular. Os IFNs so classificados em IFN-, IFN- e IFN-, de acordo com tipo de
clula em que foi produzido; com tipo de indutor que estimulou a sua produo; alm de
propriedades fsico-qumicas e antignicas. In vitro, o IFN- produzido por leuccitos, induzido
por vrus, resistente a pH 2,0 e apresenta cerca de 14 tipos antignicos diferentes. O IFN- ,
produzido por fibroblasto, induzido por vrus ou por RNA sinttico de dupla fita, resistente a pH
2,0 e apresenta dois tipos antignicos diferentes. O IFN-, tambm chamado de interferon imune,
que s produzido In vitro por linfcitos induzidos por mitgenos, sensvel a pH 2,0 e s
conhecido um nico tipo antignico. In vivo, o IFN ou imune, produzido por macrfagos e
linfcitos ativados por antgenos especficos.
Os IFNs apresentam pelo menos trs tipos de efeitos biolgicos importantes: ao
antiviral, ao antitumoral e ao imunoreguladora. A ao antiviral dos IFNs faz parte dos
mecanismos inespecficos de defesa do organismo, e tem incio cerca de 24 horas aps o
estabelecimento da infeco viral, em animais ntegros e depois de sua produo a quantidade de
vrus circulante cai drasticamente. O mecanismo atravs do qual se desenvolve a ao antiviral
dos IFNs, ainda pouco compreendido, no entanto, est claro que eles no atuam como agentes
antivirais; ao invs disso, os IFNs induzem na clula, um estado antiviral inespecfico, pela
capacidade de ativar na clula, a sntese de outras protenas que efetivamente promovem a
inibio da biossintese viral, atravs da inibio de sntese protica. As molculas de IFN ligam-se
aos receptores na superfcie das clulas ainda no infectadas, deflagrando nestas, a ativao de
cinases celulares (tirosina-cinase 2 e Janus-cinase 1) que vo promover a fosforilao de trs
protenas denominadas Stat, presentes no citoplasma. Essas protenas, uma vez fosforiladas se
juntam a outra protena celular formando um complexo o qual transportado para o ncleo onde
vai ativar a transcrio de genes que codificam a sntese de vrias enzimas que se acredita sejam
fundamentais no desenvolvimento do estado antiviral. Essas enzimas celulares promovem o
bloqueio da replicao do genoma viral por meio de mecanismos que envolvem a inibio da
traduo de m-RNA viral em protenas virais, impedindo assim, que a clula sintetize as
macromolculas necessrias formao de novas partculas virais. A ao antiviral dos IFNs
parece envolver, pelo menos duas vias enzimticas. Uma atravs da qual o IFN induz a clula
ativada a produzir uma protena quinase que promove a fosforilao e inativao de um fator de

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iniciao celular e, por conseguinte, impede a formao do complexo de iniciao necessrio para
a sntese protica. No outro mecanismo, o IFN induz a clula ativada a produzir a enzima 2-5A-
oligoisoadenilato sintetase, que catalisa a sntese do cido oligoadenlico (2-5-oligA) o qual
ativa uma endonuclease celular (RNase L), que por sua vez, degrada o m-RNA viral.
Os diferentes tipos de IFNs tm atividade antiviral quase que equivalente, entretanto,
tambm exibem uma ampla variedade de mecanismos reguladores das atividades celulares.
provvel que os IFNs se constituam em uma famlia de hormnios ou citocinas envolvidos na
regulao do crescimento e diferenciao celular, por isso eles apresentam atividade antitumoral.
A ao dos IFNs sobre os tumores pode ser direta, inibindo o processo de proliferao celular, ou
indireta, ativando clulas imunocompetentes capazes de identificar e destruir as clulas tumorais.
A ao moduladora dos IFNs sobre a resposta imune faz-se atravs do aumento da expresso de
antgenos de histocompatibilidade e da ativao de clulas matadoras naturais (NK), macrfagos
e clulas T citotxicas. Alm disso, os IFNs exercem ao sob a hipfise, que por sua vez, atravs
de seus hormnios, regula a atividade da medula ssea na produo de clulas envolvidas na
resposta imune, aumentado ou diminuindo a produo dessas clulas de acordo com as
necessidades. Desta forma, os IFNs podem atuar ativando a resposta imune, quando ela se faz
necessria, ou promovendo a sua desativao, quando a sua presena deixa de ser importante
para o organismo, ao contrrio, sua permanncia poder acarretar prejuzos a ele, podendo levar
a um processo autoimune, se no for desativada.

9. Patogenia da infeco viral

Para que haja uma infeco por vrus, necessrio que estes agentes sejam capazes
de ultrapassar as barreiras naturais do hospedeiro tais como: pele, epitlio ciliado e secrees
como muco nasal, suco gstrico e bile. Outra condio, que na porta de entrada, existam clulas
permissivas, Isto que apresentem receptores capazes de interagir com componentes de
superfcie das partculas virais, para que estas possam ser internalizadas por essas clulas, alm
de oferecer as condies metablicas necessrias produo de novos vrus. As portas de
entrada mais comuns dos vrus so as aberturas naturais do corpo, atravs das quais eles podem
ter acesso ao organismo. So portas de entrada: (1) vias areas superiores que podem servir
como porta de entrada, quando partculas virais em suspenso so inaladas, sob a forma de
aerossis formados por secrees nasais ou gotculas de saliva expelidas pelo doente durante a
respirao, mas principalmente, durante acesso de tosse ou de espirros. A eficincia dessa forma
de transmisso maior em ambientes fechados e onde as condies ambientais temperatura e
umidade permitam que o vrus se mantenha infectante por mais tempo. Para que haja a infeco
necessrio haver falhas nos mecanismos de defesa imunolgica do hospedeiro tais como: a
ausncia de IgA secretora nas mucosas, de clulas NK, macrfagos, alm de inibidores
inespecficos de glicoprotenas virais existentes no muco traqeobronquial e falhas do movimento

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ciliar do epitlio de trato respiratrio; (2) via gastrintestinal - atravs da qual se d a transmisso
feco-oral, resultante da ingesto de gua no tratada e alimentos manipulados sem as medidas de
higiene necessrias ou so preparados com gua no tratada contaminada por fezes, ou ainda
pelo contato com moscas. Alm da gua no tratada, uma das principais fontes de infeces por
vrus os quais se transmitem dessa forma, so as ostras e mariscos coletados em ambientes
poludos por esgotos, quando ingeridos crus. Esse tipo de transmisso se faz, principalmente
pelos vrus no envelopados que so mais resistentes s condies ambientais e aos agentes
fsicos e qumicos, sendo capazes de suportarem a acidez do suco gstrico e a alcalinidade da
bile, ao contrrio dos vrus envelopados que so rapidamente inativados nessas condies. Alm
disso, necessrio que esses vrus no sejam afetados pela ao de enzimas proteolticas e da
IgA secretora presentes na mucosa do trato intestinal; (3) via sexual aquela que se d atravs
da mucosa geniturinria e/ou retal durante as relaes sexuais, as quais freqentemente
apresenta pequenas leses que facilitam o acesso dos vrus ao interior do organismo. (4) via
parenteral - a camada crnea da pele funciona como barreira tanto fsica quanto biolgica contra
os agentes infecciosos em geral, incluindo os vrus, no entanto, a existncia de qualquer soluo
de continuidade na pele, o que ocorre com certa freqncia, pode permitir o acesso de vrus
durante a exposio a fluidos orgnicos de pacientes infectados. Mas, a principal forma de
transmisso por essa via se d atravs da inoculao direta na pele, por meio de insetos, mordida
de animais, ou por inoculao mecnica por meio de agulha e outros instrumentos perfurantes e
instrumentos mdicos; (5) via iatrognica quando o vrus introduzido no organismo do
indivduo por meio de transfuses de sangue e/ou derivados ou de transplante de rgos
provenientes de doadores infectados.
Aps ultrapassar essas barreiras existentes na porta de entrada do hospedeiro, os
vrus so capturados por clulas susceptveis, j na porta de entrada, expressando nestas as suas
informaes genticas resultando na produo por essas clulas de novas partculas virais. Se a
infeco fica restrita porta de entrada e adjacncias, ocorrer apenas um processo inflamatrio
localizado com leses teciduais em reas limitadas do organismo, o que caracteriza uma infeco
localizada. Quando no, entanto, os vrus se disseminam a partir da porta de entrada e espalham-
se para outras partes do organismo, caracteriza-se uma infeco sistmica ou generalizada. A
disseminao dos vrus se faz principalmente pelas correntes linftica e sangnea e alguns
vezes, pela via nervosa. No sangue os vrus podem se disseminar como partculas livres no
plasma, mas principalmente no interior de clulas sangneas, especialmente moncitos e
linfcitos. Na maioria das infeces generalizadas, aps a produo primria de vrus que ocorre
na porta de entrada, os vrus produzidos, so drenados pela corrente linftica e conduzido para os
gnglios linfticos mais prximos e da atinge a corrente sangnea fazendo uma viremia e,
atravs do sangue o vrus se dissemina, atingindo muitos outros rgos, especialmente os do
Sistema Retculoendotelial (SER), onde ocorre a produo secundria de vrus os quais vo
atingir simultaneamente o rgo alvo. Alguns vrus aps a passagem pelos rgos do SER fazem

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uma segunda viremia, para em seguida atingir o seu rgo alvo, onde a produo de vrus feita
com maior intensidade, resultando em leso tecidual mais significativa e na expresso dos
sintomas caractersticos da doena. Portanto, a gravidade da doena ser maior quando o rgo
alvo principal do vrus tem funo vital para o organismo, tais como: fgado, crebro, corao rins
e pulmes, etc.
A infeco viral dita produtiva, quando resulta na produo de novos vrus e no
produtiva, quando o vrus permanece no interior da clula, mas sem a gerao de novas
partculas vrus. A infeco produtiva denominada ltica, quando resulta em lise levando morte
celular aps a biossntese de novos vrus, e no ltica quando os vrus so produzidos pela clula
e liberados, sem que ocorra morte celular. Neste ltimo caso, a infeco viral por si s, no leva a
danos teciduais, portanto, a leso se existir, ser decorrente de um processo imunopatolgico
desenvolvido pelo organismo do hospedeiro. Quando essas clulas infectadas escapam do
sistema imune, desenvolve-se uma infeco do tipo persistente que pode se alternar em fases
produtiva e de latncia. Assim, na infeco viral, a morte da celular pode se d por dois
mecanismos patolgicos bsicos: um decorrente da ao direta do vrus sobre a clula, levando a
alteraes fisiolgicas e estruturais que se manifestam na clula como alteraes morfolgicas
que podem ser vistas ao microscpio tico, denominadas efeito citoptico. O outro mecanismo
decorrente da ativao do sistema imune do hospedeiro, desencadeado um processo
imunopatolgico que se constitui na principal causa de danos teciduais. Em alguns casos esses
dois mecanismos se processam ao mesmo tempo durante a infeco viral. A leso tecidual
decorrente da ao direta do vrus o resultado da expresso das informaes genticas do vrus
sobre as clulas infectadas e pode levar a morte dessas clulas, como conseqncia do processo
de replicao do genoma do vrus para produo de novas partculas virais. Durante esse
processo, ocorrem alteraes, no apenas metablicas, mas tambm estruturais tais como:
degradao do DNA, e de m-RNA, alteraes do citoesqueleto, alteraes na estrutura de
membrana afetando a permeabilidade e o transporte de molculas para dentro da clula. O
acmulo de componentes virais no interior da clula pode determinar o rompimento dos
lisossomos liberando enzimas que promovem a lise celular. Alm disso, muitas vezes as clulas
infectadas sofrem lise durante o processo de liberao das partculas virais que foram produzidas
no seu interior. Em outros casos, as clulas infectadas expressam protenas virais na sua
superfcie de membrana, as quais se ligam aos receptores para essas estruturas virais, presentes
nas clulas normais, promovendo a fuso de clulas infectadas com clulas normais, resultando
na formao de clulas gigantes multinucleadas conhecidas como sinccios, que acabam
morrendo. Entretanto, em alguns casos, as clulas podem produzir vrus sem que haja alteraes
aparentes nas suas caractersticas morfolgicas, das quais os vrus podem ser liberados sem
provocar a sua destruio. Isso pode ocorrer com clulas infectadas por vrus que so liberados
por brotamento ou por exocitose. Em outros casos, a infeco por vrus ao invs de resultar na
morte da clula infectada, a torna imortal e at pode transform-la em uma clula maligna, como

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acontece com os vrus oncognicos. Nesses casos em que as clulas infectadas sobrevivem
infeco, elas s vo ser destrudas por meio de mecanismos imunopatolgicos. Se esses
mecanismos falharem, a clula infectada sobrevive, e o vrus permanece no organismo por tempo
indeterminado, o que caracteriza a infeco persistente. A morte de um grande nmero de clulas
de um determinado tipo de tecido vai resultar na alterao das funes de rgos que por sua vez
determina alteraes nas funes dos sistemas, alteraes essas, cujo somatrio vai repercutir no
funcionamento do organismo como um todo, sendo mais grave, quando o rgo afetado tem um
papel vital para o organismo. Assim, os sintomas das doenas causadas por vrus so o resultado
da destruio de clulas infectadas seja em decorrncia das alteraes sofridas durante a
produo de novos vrus ou devido a mecanismos imunopatolgicos resultante da ao do
sistema imune do indivduo.
Freqentemente, a leso tecidual causada simultaneamente por ambos os
processos. A destruio das clulas infectadas leva a leses teciduais com a conseqente
disfuno de determinado rgo que se reflete nas funes dos sistemas e do organismo como
um todo. Na infeco viral ltica, a replicao do genoma viral com a produo de novas
partculas virais, resulta na morte da clula geralmente por lise. Alguns vrus impedem que haja o
reparo das alteraes ocorridas na clula infectada, inibindo os processos de sntese pela clula
de macromolculas necessrias a esses mecanismos, ou produzindo enzimas degradadativas e
protenas txicas para a clula. A replicao do genoma viral e o acmulo de componentes virais
no interior da clula podem resultar em alteraes na sua estrutura e funo, ou romper os
lisossomos, causando autlise. A formao de sinccio que ocorre na infeco por alguns vrus
tambm resulta na morte celular. Alm disso, a expresso de antgenos virais na superfcie celular,
ligados ao MHC de classe I e a ruptura do citoesqueleto, podem causar alteraes nas interaes
clula a clula, bem como na aparncia da clula infectada, transformando essa clula em um
alvo da lise mediada por processos imunopatolgico. Alm disso, tanto a infeco viral quanto os
mecanismos da resposta imune podem induzir apoptose na clula infectada.
Alguns vrus envelopados infectam a clula sem causar a sua destruio, se essas
clulas no forem destrudas pela resposta imune ocorrer ento, uma infeco que dita
persistente e pode ser do tipo produtiva, quando o vrus replica seu material gentico
produzindo novas partculas virais, as quais so liberadas por brotamento ou exocitose, sem
provocar a morte celular; ou persistente do tipo latente, quando o vrus bloqueia a transcrio de
alguns genes virais e o processo de biossntese viral, no se completa. A infeco latente pode
ser do tipo recorrente, se o vrus se mantm alternando fase de latncia com fase de reativao
da infeco na forma ltica. Durante a fase de latncia, os fatores de transcrio especficos,
necessrios replicao viral somente podem ser expressos em determinadas clulas em fase de
diviso, mas no nas clulas em repouso, ou aps a induo por hormnios ou citocinas. Alguns
vrus podem causar infeco ltica em um determinado tipo de clula e infeco persistente em
outra clula do mesmo hospedeiro; nesse ltimo caso, essas clulas infectadas s vo ser

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destrudas por meio dos mecanismos imunopatolgicos. Em muitos casos, clulas com infeco
persistente escapam da resposta imune do hospedeiro, resultando em infeco crnica.
As reaes inflamatrias decorrentes da resposta imune inata, e as reaes de
hipersensibilidade apresentadas pela imunidade adquirida podem se constituir na principal causa
das condies patolgicas associadas doena, nas infeces por vrus. O interferon produzido
pelas clulas infectadas e as clulas matadoras naturais, que compem a resposta imune inata
so os principais responsveis pelas manifestaes clnicas observadas na fase inicial da
infeco. No caso da invaso do organismo por vrus, as clulas infectadas diminuem a expresso
das molculas do MHC de classe I, tornando-se diferentes das clulas normais. Essa alterao de
superfcie das clulas infectadas faz com que estas sejam reconhecidas como estranhas por um
tipo especial de clula chamada Natural Killer (NK) ou matadoras naturais, as quais so linfcitos
grandes com uma vescula granulosa contendo no seu interior molculas citotxicas que tm ao
letal sobre outras clulas. Ao encontrar uma clula infectada por vrus, a clula NK se liga a esta
clula reconhecida como estranha, e secreta sobre ela, seus produtos txicos resultando na
induo de morte por apoptose da clula infectada. O interferon (IFN) produzido pela prpria
clula infectada desempenha um papel importante na ativao das clulas NK, aumentando a
eficincia deste mecanismo de defesa, alm de inibir a replicao viral, travs da ativao de
mecanismos celulares que levam a inibio de sntese protica.
Alguns dias, aps o incio da resposta imune inata surge a resposta imune adquirida
a qual desenvolvida especificamente contra eptopos presentes nas partculas do vrus que est
causando a infeco. Essa resposta consiste de dois tipos: a resposta imune celular que resulta
na ativao de vrios tipos de clulas que adquirem atividade citotxica especfica capaz de
reconhecer e destruir as clulas infectadas, e a resposta imune humoral que resulta na ativao
de um tipo especial de clula, o linfcito B, a qual se diferencia em plasmcitos que secretam
protenas da classe das imunoglobulinas chamadas de anticorpos os quais iro reagir com os
antgenos virais que estimularam a sua produo, visando a neutralizao do vrus. Todos esses
mecanismos visam proteger o hospedeiro da ao dos vrus, mas acabam tendo um papel
preponderante na patologia das infeces por esses agentes, tornando-se a principal causa dos
danos teciduais. Uma das principais causas de leso tecidual que ocorre nas infeces por vrus
a reao de hipersensibilidade do tipo tardia, na qual linfcitos TCD4 so ativados por
antgenos virais apresentados por macrfagos e outras clulas apresentadoras de antgeno,
contendo fragmentos de protenas virais ligados a molculas do MHC de classe II. Os linfcitos
TCD4, uma vez ativados para esses antgenos, vo entrar em atividade de proliferao dando
origem a uma populao de clulas ativadas especificamente para o tipo de antgeno que lhe foi
apresentado. Essas clulas ativadas produzem uma srie de citocinas as quais vo ativar outras
clulas como NK, macrfagos e linfcitos TCD8, sendo que estes ltimos, uma vez ativados, vo
apresentar atividade citotxica especfica capaz de destruir apenas as clulas infectadas que
apresentem esses mesmos antgenos expressos em sua membrana ligado ao MHC de classe I.

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Assim, a clula infectada por vrus e que apresente protenas virais na sua superfcie, ligadas ao
MHC de classe I ser reconhecida como estranha, pelas clulas TCD8 citotxicas, e estas vo
secretar sobre ela suas citotoxinas que ativam os mecanismos de apoptose, promovendo a
destruio da clula infectada resultando em leso tecidual.
Na resposta imune humoral, os anticorpos especficos para epitopos presentes nas
partculas virais, vo se ligar a esses antgenos presentes na membrana da clula infectada.
Como as clulas NK possuem receptor para a frao Fc de imunoglobulinas da classe IgG, elas
vo se ligar a essa poro das molculas de IgG que esto ligadas aos antgenos virais presentes
na superfcie das clulas infectadas e essa ligao ativa a clula NK a secretar sua citotoxinas
sobre as clulas infectadas promovendo a sua destruio. Esse processo denominado
citotoxidade dependente de anticorpo que apesar da participao de anticorpos, faz parte da
resposta imune inata. Por outro lado, a ligao de anticorpos aos antgenos virais presentes na
superfcie das clulas infectadas resulta na formao de complexo antgeno-anticorpo que por sua
vez, ativa o sistema complemento pela via clssica o que pode levar a dois tipos de eventos: lise
das clulas infectadas que se encontram recobertas por anticorpos, mediada pela cascata do
complemento, ou leva a uma reao de hipersensibilidade por imunocomplexo com
desenvolvimento de resposta inflamatria, em ambos os caso resultando em leso tecidual.
Em alguns casos imunidade parcial, como ocorre entre sorotipos diferentes do vrus da
dengue, pode desencadear um tipo de resposta do hospedeiro que torna a doena mais grave,
quando esse indivduo foi previamente infectado e adquiriu uma segunda infeco por outro
sorotipo do vrus, diferente do primeiro. Isto ocorre, porque os anticorpos produzidos contra o
primeiro sorotipo do vrus so capazes de se ligarem ao vrus de outro sorotipo, mas no de
impedir a sua adsoro e internalizao pelas clulas desse indivduo. Por outro lado, o complexo
antgeno-anticorpo formado, vai se depositar nos rins e paredes dos vasos, ativar o sistema
complemento pela via clssica com a conseqente clivagem dos componentes C3 e C5, cujos
produtos resultantes dessa clivagem, aumentam a permeabilidade vascular e atraem substncias
envolvidas na reao inflamatria, provocando leses nas paredes dos vasos o que resulta no
extravasamento de plasma dos vasos para os tecidos e cavidades que ocorre na forma
hemorrgica da doena. Alm disso, em alguns vrus, como o caso do vrus da dengue, os
determinantes antignicos de superfcie das partculas virais esto muito prximos uns dos outros,
de forma que os anticorpos neutralizantes se ligam em uma s partcula, ao invs de se ligarem a
vrias partculas, e assim no so formados agregados necessrios neutralizao desses vrus,
quando esto livres no sangue durante a fase de viremia. Nesse caso, ao invs de impedir a
adsoro do vrus aos receptores da clula, esses anticorpos iro facilitar a endocitose das
partculas virais que esto recobertas por eles, pelos moncitos e macrfagos, tendo em vista que
essas clulas possuem na sua superfcie, receptores para a frao Fc de IgG. A facilitao da
penetrao das partculas virais recobertas por anticorpos, por essas clulas amplifica a produo
de vrus. Os processos imunopatolgicos so to importantes na origem das leses teciduais que,

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as crianas de um modo geral, por apresentar uma resposta imune menos efetiva que os adultos,
em virtude da imaturidade do sistema imune, costumam apresentar sintomas mais leves que os
adultos nas infeces por vrus. Todavia, em alguns casos como na hepatite B, isso pode resultar
na incapacidade para eliminar a infeco, resultando em doena crnica. Por outro lado, uma
resposta imune exacerbada poder resultar em uma leso tecidual de grandes propores
podendo inclusive levar a morte do paciente. Isso acontece, por exemplo, na hepatite fulminante,
devido a uma leso macia do fgado seguida de uma resposta imune muito forte resultando na
destruio macia de hepatcitos levando insuficincia heptica que muitas vezes leva o paciente
a bito.
Na infeco viral, quando todas as clulas infectadas so eliminadas pelos
mecanismos de defesa do organismo, ocorre reverso do processo patolgico com regenerao
dos tecidos danificados, e resoluo completa da doena. Nos casos em que algumas clulas
infectadas escapam desses mecanismos, o vrus se mantm na forma de infeco persistente.
Essa persistncia na forma de infeco no produtiva, quando o vrus se mantm latente sem se
replicar, passando da clula me para as filhas, quando essa se divide. Neste caso, no haver a
produo de novas partculas virais nem morte celular. Na infeco persistente do tipo produtiva
no ltica h produo de novos vrus completos os quais so liberados por essas clulas sem
causar a sua lise e vo infectar novas clulas, j na infeco persistente do tipo produtiva ltica, o
vrus replica o seu genoma gerando novas partculas virais completas que ao serem liberadas
provocam a lise e morte celular.

10. A resposta imune como mecanismo de defesa contra os vrus

Ao mesmo tempo em que atua como um dos principais mecanismos patolgicos na


infeco viral, resultando na morte celular e conseqentemente na leso tecidual e manifestao
dos sintomas da doena, os mecanismos imunolgicos desenvolvidos pelo organismo tambm
so extremamente importantes, no controle da produo de vrus e na resoluo do processo
infeccioso. Os mecanismos da resposta imune inata tais como: interferon e a ao das clulas
NK desempenham um papel fundamental no controle da infeco por vrus na sua fase inicial,
antes que a resposta imune adquirida especfica para o vrus seja ativada e desenvolvida. Em
alguns casos, quando essa segunda fase da resposta imune do hospedeiro desenvolvida, a
infeco j foi controlada pela resposta imune inata, enquanto que em outros pode ocorrer o bito
do paciente, antes mesmo do surgimento da resposta imune adquirida. Acredita-se que o
interferon seja a primeira linha de defesa do organismo contra as infeces por vrus. Essa
famlia de glicoprotenas produzidas pelas clulas infectadas vo se ligar aos receptores das
clulas que ainda no foram atingidas pelo vrus, induzindo nestas, um estado antiviral
inespecfico, tornando essas clulas ativadas, resistentes no apenas ao vrus que est
causando a infeco, mas aos vrus de um modo geral. Alm disso, o IFN tambm capaz de

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ativar, outros mecanismos de defesa, tais com: elevao da temperatura corprea que em muitos
casos, reduz a eficincia da produo de vrus pelas clulas infectadas; ativao de clulas NK
que reconhecem e destroem as clulas infectadas, bem como da resposta imune adquirida que
uma vez desenvolvida ir ativar vrios mecanismos que visam controlar a infeco.
Para induzir o estado antiviral os IFNs induzem nas clulas mecanismos bioqumicos
que resultam, em ltima anlise, na inibio da sntese protica, impedindo assim a produo
de novos vrus. medida que os IFNs esto sendo produzidos e liberados, eles vo ativando as
clulas no infectadas fazendo com que elas fiquem impedidas de produzir vrus ao mesmo tempo
em que as clulas infectadas, vo sendo destrudas em conseqncia da prpria infeco viral
e/ou pelas clulas NK, mediante a liberao de citotoxinas letais por essas clulas resultando em
reao inflamatria e lise das clulas infectadas. Assim, por volta das 48 horas de infeco,
quando o IFN atinge o seu pico mximo a quantidade de vrus na circulao cai drasticamente.
Isso ocorre porque, na medida em que as clulas infectadas vo sendo eliminadas, deixando de
produzir novos vrus, e as partculas virais que so liberadas, no encontram clulas susceptveis
disponveis para produzir novos vrus, estes vo sendo gradativamente eliminados pelo
organismo. Quando surgem os primeiros anticorpos especficos para o vrus que est causando a
infeco, estes vo se ligar aos antgenos presentes nas partculas virais que esto livres no
plasma, impedindo que esses vrus se liguem aos receptores de novas clulas e inicie um novo
ciclo de replicao. Esse mecanismo de defesa denominado neutralizao e se constitui a forma
mais eficiente de proteo contra a infeco por vrus, sendo assim um fator determinante para a
imunidade a esses patgenos. Alm disso, os anticorpos tambm se ligam aos antgenos virais
presentes na superfcie das clulas infectadas, ligados ao MHC de classe I. Neste caso, as clulas
NK e macrfagos que possuem receptor para a frao Fc de IgG vo se ligar a essas parte dos
anticorpos que esto recobrindo essas clulas, promovendo sua destruio. Por outro lado, essas
mesmas clulas infectadas que esto recobertas por anticorpos ligados aos antgenos virais
presentes em sua superfcie, representam um complexo antgeno-anticorpo e como tal, so
capazes de ativar o complemento pela via clssica, o que resulta na lise das clulas infectadas.
De forma semelhante, esse mesmo mecanismo pode resultar na lise do envelope viral,
promovendo a inativao dos vrus envelopados quando estes se encontram na forma livre no
plasma. O processo de neutralizao envolve a participao de anticorpos especficos que so
denominados neutralizantes porque reagem com eptopos da partcula viral que se ligam aos
receptores da clula, bloqueando a entrada do vrus na clula e conseqentemente, a infeco. A
neutralizao da atividade infecciosa dos vrus s ocorre quando os anticorpos neutralizantes
conseguem formar agregados de partculas virais resultando na formao de grandes complexos
que no so internalizados por endocitose, mas so fagocitados pelas clulas apresentadoras de
antgeno e degradados pelas enzimas lisossmicas e dessa forma a infeco no se estabelece
nessas clulas.

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Para os vrus no envelopados, cujo processo de replicao do genoma viral e
formao de novos vrus, geralmente resulta na morte da clula por lise, durante a liberao das
partculas virais, os anticorpos neutralizantes tm um papel muito importante no controle da
infeco, porque se ligam as partculas virais, livres no plasma, promovendo a sua neutralizao
impedindo que estes infectem novas clulas. J com os vrus envelopados, que geralmente so
liberados da clula por brotamento, sem provocar lise celular, em que a clula se mantm viva, e
produzindo novos vrus, e os anticorpos neutralizantes, no conseguem controlar a infeco. Isto
se deve ao fato de que, apesar de promoverem a neutralizao dos vrus que se encontram livres
no meio extracelular, os anticorpos neutralizantes no impedem que a clula continue produzindo
e liberando novos vrus onde, alguns deles escapam desses anticorpos e vo infectar novas
clulas. Nestes casos a infeco s vai ser controlada pela resposta imune do tipo celular.
A resposta imune celular tem incio quando macrfagos, e outros tipos de clulas
apresentadoras de antgenos fagocitam partculas virais ou clulas infectadas por vrus, e os
degrada em fragmentos menores e apresentam esses peptdeos resultantes de protenas virais
ligados ao MHC de classe II para os linfcitos TCD4, que ao serem apresentados a esses
antgenos, so ativados e daro origem a populaes dessas clulas ativadas especificamente
para o antgeno que lhe foi apresentado. O linfcito TCD4 ao ser estimulado durante a
apresentao do antgeno pode se dividir em pelo menos trs subgrupos (Th0, Th1 e Th2), de
acordo com os diferentes tipos de citocinas que produzem. As clulas Th1 e Th2 so geradas a
partir de Th0 que ao ser induzida pelo antgeno pode produz interleucina-2 (IL2) e IFN- ou
interleucina-4 (IL4) e interleucina 10 (IL10), respectivamente. A clula Th1 produz as citocinas IL2,
IFN- e o fator de necrose tumoral (TNF-), as quais ativam clulas envolvidas na resposta
imune celular, tais como TCD8, NK e macrfagos. Este tipo de resposta mais eficiente na
eliminao de agentes intracelulares, entre estes, os vrus. Acredita-se que a resposta do tipo Th1
se desenvolve quando a estimulao do linfcito TCD4 pelo antgeno ocorre na presena de IL12,
IFN- e IL18 que so citocinas produzidas por clulas da resposta imune inata, especialmente NK
e macrfagos.
A produo de IFN- que ocorre na resposta do tipo Th1 inibe a gerao de clulas do
tipo Th2. Por outro lado, a clula Th2, produz IL4, IL5, IL10 e IL13 que so citocinas que
desencadeiam em clulas B, a troca de classe para produo de IgE e ativao de eosinfilos.
Acredita-se que a resposta do tipo Th2 se desenvolve quando a estimulao do linfcito TCD4 se
d na presena de IL4, uma citocina produzida provavelmente por mastcitos ou por um tipo
especial de TCD4 no incio da resposta. As citocinas IL4 e IL10 produzidas por Th2 inibem a
gerao de clulas Th1. A resposta imune celular, especialmente a do tipo Th1 se constitui no
mecanismo imunolgico de maior importncia no controle das infeces por vrus principalmente,
aquelas causadas por vrus envelopados, pois o linfcito TCD4 ao ser ativado e se diferenciar em
Th1 este vai produzir as citocinas IL2, IFN- e TNF- as quais vo ativar os linfcitos TCD8

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tornando-os especficos e com maior potencial citotxico para as clulas infectadas que
apresentam em sua superfcie os antgenos virais que desencadearam a resposta. Dessa forma,
as clulas TCD8 ao serem ativadas por essas linfocinas, vo reconhecer e destruir as clulas
infectadas pelo vrus e que, portanto, apresentam antgenos virais em sua superfcie, ligados ao
HHC de classe I. Alm disso, essas mesmas citocinas tambm vo ativar as clulas NK e
macrfagos, aumentando o poder de destruio dessas clulas para as clulas infectadas por
vrus, o que pode resultar na morte dessas por mecanismos inespecficos. Alm disso, a ao de
citocinas sobre as clulas infectadas por vrus tambm pode ativar os mecanismos de morte
celular programada, ou apoptose.

11. Tipos de infeces que podem ser causadas por vrus

Nem sempre uma infeco viral resulta em doena, muitas vezes as infeces por
vrus ocorrem na forma assintomtica, como pode acontecer com os vrus da poliomielite, da
dengue, da rubola, caxumba e outros vrus em que a infeco pode passar completamente
desapercebida, pela leveza ou ausncia total de sintomas. Tudo vai depender de uma srie de
fatores, tanto da parte do vrus como do hospedeiro, que interagindo entre si, vo determinar se
vai ter ou no doena. Quando os mecanismos de defesa do organismo vencem esse embate, a
infeco no se estabelece. Se ocorrer um equilbrio entre os mecanismos de agresso do vrus e
os mecanismos de defesa do hospedeiro, a infeco ocorre, mas sem expresso clnica, Isto , na
forma assintomtica. Quando, no entanto, os mecanismos de defesa do indivduo se apresentam
com falhas, a infeco se desenvolve com sintomas aparentes e estes sero tanto mais graves
quanto maior for o nmero de clulas afetadas e quanto pior for a respostas do hospedeiro. Assim,
quando um indivduo exposto a um vrus, podem ocorrer trs tipos distintos de eventos: pode
ocorrer uma infeco abortiva, isto o vrus no consegue invadir as clulas do indivduo ou
mesmo quando entra na clula, no consegue se replicar. Quando o vrus capaz de ter acesso
s clulas, mas tem a sua replicao controlada pelos mecanismos de defesa do organismo, esse
ter uma infeco assintomtica ou subclnica. Os casos em que o organismo hospedeiro no
capaz de reduzir a atividade de replicao viral, so caracterizados como infeco sintomtica
na qual a expresso dos sintomas vai ser proporcional aos danos teciduais provocados pela
replicao viral e/ou pela resposta imune apresentada pelo hospedeiro.
As infeces virais podem ser divididas em agudas e persistentes. A infeco aguda
aquela em que o vrus se replica no organismo durante um certo perodo, apresentando sintomas
ou no, e em seguida desaparece, no sendo mais detectada a sua presena nesse hospedeiro.
As infeces agudas podem ser localizadas, quando o vrus se restringe porta de entrada e
adjacncias e sistmica, quando o vrus se dissemina pelo organismo. Existem casos de infeco
em que o vrus permanece no organismo por tempo indeterminado, alguns deles pelo resto da
vida do hospedeiro, sendo estes casos, classificados como infeces crnicas ou persistentes. A

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infeco persistente pode ser do tipo produtiva ou latente. A infeco persistente do tipo
produtiva um tipo de infeco crnica em que o vrus detectado continuamente, porque a
clula infectada continua produzindo partculas virais completas e infectantes, porm no
destruda porque os vrus saem da clula por brotamento ou por exocitose de forma que preserva
a integridade da clula. Nessa forma de infeco pode haver ou no sintomas, dependendo do
grau de imunidade do hospedeiro e do tamanho da rea e do tecido afetado. A infeco
persistente do tipo latente aquela em que o vrus persiste, mas na forma oculta ou cripta, sem
completar o seu processo de replicao e sem a formao de partculas virais completas. Essas
infeces latentes podem ser do tipo recorrente em que o vrus pode ser reativado
periodicamente de acordo com as condies imunolgicas do hospedeiro, de forma que so
observados perodos alternados de reativao da infeco e de latncia.
12. Fatores que influenciam na relao vrus x hospedeiro

O estabelecimento da infeco viral em um hospedeiro, bem como a sua gravidade


est na dependncia de uma srie de fatores inerentes ao vrus e ao hospedeiro cuja interao
entre eles que vai determinar se ocorrer infeco e a intensidade com que ela se apresentar.
Entre os fatores intrnsecos do vrus que so importantes nessa relao com o seu hospedeiro,
podemos destacar: (1) A quantidade de vrus, isto a carga viral recebida pelo indivduo, pois ela
vai refletir na quantidade de clulas afetadas em um determinado tempo e, conseqentemente, na
extenso da leso tecidual; (2) A velocidade com que o vrus produzido, grau de interferncia
deste com as funes celulares e alteraes decorrentes dessa infeco. Em geral, quanto mais
rpido for o processo de biossntese viral e quanto maior forem s alteraes sofridas pela clula,
maiores sero os danos teciduais que eles causam antes que os mecanismos de defesa do
organismo sejam mobilizados; (3) Tropismo do vrus em relao tecidos e rgos - os vrus que
tm como alvo, rgos vitais para o hospedeiro, tais como: crebro, corao pulmes fgado e
rins, a infeco tende a ser mais grave; (4) A capacidade que tem o vrus para induzir a produo
de interferon e a capacidade de replicao em temperaturas acima de 37C - os vrus que so
maus indutores de IFN e que se replicam com a mesma eficincia em temperatura acima de 37 oC,
tendem a ser, mais virulentos; (5) A capacidade que o vrus tem de escapar dos mecanismos de
defesa do hospedeiro. Alguns vrus como e o caso do Herpes simples, passam de uma clula para
outra, escapando da ao dos anticorpos neutralizantes. Outros como o HIV e vrus da hepatite C
sofrem mutaes nos genes que codificam protenas que so alvo dos anticorpos neutralizantes e
por isso no so neutralizados. O Citomegalovrus produz glicoprotenas que servem como
receptor para a frao Fc de IgG nas quais esses anticorpos se ligam perdendo suas funes de
reao com o antgeno e de ativao do complemento. Tambm codifica protenas que inibem o
transporte do MHC de classe I para a membrana da clula, reduzindo assim, a apresentao de
protenas virais na superfcie da clula infectadas. O vrus Epstein-Barr desenvolveu suas prprias
defesas contra o interferon produzindo seqncias curtas de RNA que so traduzidas em

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protenas que competem com a protena quinase, uma enzima da clula que atua na formao do
complexo de iniciao de sntese protica impedindo esta funo. Ele tambm codifica um
homlogo de IL10 que mimetiza a funo dessa interleucina, reduzindo os efeitos do IFN- na
ativao da resposta imune celular. Alguns vrus codificam homlogos dos receptores de citocinas
tais como: IL-1, TNF e IFN- que so produzidas pela clula infectada e secretadas na forma
solvel, os quais vo se ligar a essas citocinas impedindo as suas atividades. O Papilomavrus
humano produz a protena E7 que inibe a produo de interferon atravs da interferncia com
fatores de transcrio dos genes envolvidos na produo dessa substncia. O vrus Vaccinia
codifica protenas homlogas das protenas de controle da ativao do complemento que capaz
de bloquear a ativao desse sistema de defesa do organismo; (6) A estabilidade do vrus em
relao s condies ambientais quanto maior for a estabilidade do vrus s condies
ambientais, maior ser o tempo que ele pode permanecer no ambiente sem perder a sua atividade
infecciosa.
Da parte do hospedeiro podemos dizer que, os fatores intrnsecos do hospedeiro
que se mostram mais importante na relao deste com os vrus, podemos destacar: (1) A idade;
em geral, as crianas e os idosos costumam se apresentar mais susceptveis s infeces por
vrus. As crianas por apresentarem o sistema imunolgico, ainda imaturo e tambm em virtude
da menor massa corporal e das caractersticas teciduais, uma vez que as clulas jovens so em
geral, mais susceptveis aos vrus. Os idosos devido a sua menor capacidade para desenvolver
uma nova resposta imune, em virtude de limitaes naturais decorrente da idade. Contudo, nas
crianas a capacidade de recuperao geralmente maior e mais rpida, em virtude de sua maior
capacidade de regenerao, ao contrrio dos idosos em que a capacidade de regenerao est
diminuda. (2) O estado imunolgico a competncia imunolgica do hospedeiro, determina a
rapidez e eficcia na resoluo das infeces, em geral. No caso das viroses, tambm pode
determinar a gravidade dos sintomas da doena. No entanto, o indivduo que se encontra
imunodeprimido, seja por causa de uma doena subjacente como: AIDS, cncer, ou pelo
tratamento com drogas imunossupressoras apresentam maior risco para desenvolver doenas
mais graves, bem como maior chance de reativao de infeces latentes; (3) O estado nutricional
- os indivduos subnutridos e desnutridos, em geral se apresentam mais susceptveis s infeces
por vrus porque a desnutrio, alm de comprometer o estado imunolgico do indivduo, pelos
prejuzos que causa resposta imune do tipo celular, reduz a sua capacidade regenerativa e
conseqentemente dificulta a recuperao; (4) As condies de vida do hospedeiro a vida em
aglomeraes, certas ocupaes e atividades profissionais, hbitos e atitudes comportamentais e
determinados estilos de vida, tambm pode ter papel importante nas infeces por vrus. As
crianas que vivem em habitaes precrias em aglomeraes e em condies higinicas
desfavorveis, tendem a se infectar precocemente, o que em alguns casos torna a infeco mais
grave. Os profissionais da rea da sade esto mais expostos a determinados tipos de vrus tais

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como: hepatite B e C e HIV. As pessoas que usam drogas injetveis ou que so sexualmente
promscuas tambm apresentam maior risco de contrair infeco por esses mesmos patgenos;
(5) A constituio gentica do indivduo tambm desempenha papel importante, especialmente as
diferenas genticas que afetam os genes envolvidos na resposta imune. Alm disso, a
quantidade de expresso de receptores de superfcie das clulas que podem interagir com vrus
est na dependncia de caractersticas genticas do indivduo. Quanto maior for a concentrao
de receptores na superfcie da clula aos quais o vrus capaz de se fixar, maior ser o grau de
susceptibilidade do indivduo a esse vrus; (6) Estado emocional em condies de stress, o
hospedeiro apresenta maior susceptibilidade aos vrus, porque esta situao interfere com a
resposta imune, principalmente no que diz respeito s funes das clulas NK, mas tambm do
sistema imune como um todo, o mesmo ocorrendo em determinadas condies fisiolgicas do
organismo, como a menstruao e a gravidez nas mulheres.

13. Diagnstico laboratorial das infeces por vrus

O diagnstico laboratorial das infeces causadas por vrus pode ser feito atravs de
mtodos convencionais como o isolamento do vrus a partir de espcimes biolgicos obtidos do
paciente tais como: urina, fezes, smen, sangue, lquo, saliva, material de garganta, fragmentos
de bipsia, etc; deteco de antgenos virais em espcimes coletados do paciente, por
microscopia eletrnica, por mtodos sorolgicos e mtodos moleculares.

13.1 - Mtodos Convencionais.

13.1.1 - Isolamento e identificao de vrus todo material que se destina ao isolamento de


vrus deve ser mantido em baixa temperatura, durante o transporte para o laboratrio e durante
todo o seu processamento, at o momento da inoculao em um sistema hospedeiro apropriado.
Para a obteno de vrus purificado parte-se, geralmente, dos espcimes orgnicos acima
mencionados, adotando-se uma metodologia prpria. A forma mais simples de processamento de
material biolgico para o isolamento de vrus a ultra-filtrao, onde o material passado por
uma membrana capaz de reter bactrias e outros agentes, de forma que em uma nica etapa se
obtm o material livre de contaminantes que pode ser inoculado diretamente no sistema
hospedeiro. No sendo possvel essa tcnica, tornam-se necessrias vrias etapas de purificao,
antes da inoculao em um sistema hospedeiro. Em alguns casos necessrio fazer inicialmente,
a concentrao das partculas virais, por meio da precipitao com sulfato de amnia, etanol,
polietileno glicol ou glicerol. Aps a concentrao, feita uma purificao preliminar, para eliminar
a maior parte do material no-viral, como restos celulares, fungos, bactrias por meio de
centrifugao diferencial em alta rotao. Coleta-se o sobrenadante em seguida, feita a
purificao propriamente dita, atravs de centrifugao zonal, utilizando gradientes de

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concentrao ou de densidade, onde as partculas virais so separadas dos contaminantes, com
base no seu tamanho e densidade de flutuao. Tambm podem ser utilizadas colunas de
cromatografia contendo uma matriz na qual o vrus se liga por afinidade qumica, e aps a
lavagem desta para remoo dos contaminantes, as partculas virais so eludas por alterao de
pH ou da concentrao de sais. Em um outro tipo de cromatografia, utiliza-se um anticorpo
especfico para o vrus incorporado matriz da coluna, ao qual o vrus se liga. Aps a lavagem da
coluna para remoo dos contaminantes, as partculas virais so eludas com o abaixamento do
pH. Aps a descontamino das amostras por um desses mtodos o material tratado com
antibiticos e inoculado no sistema hospedeiro para a propagao do vrus.
Para a propagao dos vrus em laboratrio, necessita-se de um sistema hospedeiro,
isto , de clulas vivas, que seja susceptveis e permissivas ao vrus, isto que possuam um
repertrio enzimtico capaz de produzir todos os constituintes virais, as quais vo fornecer os
processos metablicos necessrios replicao do genoma viral e produo de novos vrus. Essa
condio obtida utilizando-se animais de laboratrio, ovos embrionados de galinha, ou culturas
de clulas. Os animais de laboratrio como: coelhos, cobaias, ratos e camundongos eram os
nicos hospedeiros disponveis, nos primrdios da virologia, quando todos os estudos eram feitos
atravs da infeco experimental. Este fato dificultou enormemente os avanos cientficos nesta
rea, at que surgissem novos mtodos de propagao de vrus. A principal dificuldade
apresentada por esse tipo de sistema hospedeiro, o fato de o animal possuir uma srie de
mecanismos de defesa, principalmente o sistema imune que dificultam o estabelecimento da
infeco. Alm disso, quando a infeco ocorre, necessrio fazer o re-isolamento do vrus para
poder identific-lo, fazendo com que este mtodo seja muito demorado e pouco preciso. Tendo em
vista estas limitaes, os animais de laboratrio s so empregados atualmente, para a
propagao de vrus, em situaes especiais tais como: quando o vrus no capaz de infecta
nenhum outro tipo de hospedeiro, quando se quer estudar a patognese de um vrus, ou quando
se desejam realizar estudos relacionados com a oncognese viral. Os resultados da infeco
experimental podem ser observados com base nos sintomas apresentados pelos animais; entre
estes, a paralisia, a presena de leses e a morte. Na dcada de 30, descobriu-se que o ovo
embrionado de galinha podia ser utilizado como hospedeiro para a propagao de vrus, com
grandes vantagens sobre os animais, pelo fato de apresentar vrios tipos de tecido em ambiente
estril, e no possuir sistema imune, o que facilita a replicao dos vrus, alm da vantagem de se
poder coloc-los em estufa ou em geladeira, conforme a necessidade. So utilizados ovos de
galinha fecundados e com 6 a 12 dias de incubao, onde as clulas embrionrias so sensveis
maioria dos vrus. O resultado da produo de vrus pode ser observado pela presena de
hemorragia, morte do embrio e, no caso dos vrus que possuem espculas com atividade
hemaglutinante, atravs do teste de hemaglutinao. Outro sistema hospedeiro que considerado
ideal para a propagao de vrus em laboratrio so as culturas de clulas, que pode ser primria
ou de linhagens contnuas. A cultura primria consta de clulas diplides, humanas ou de animais,

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dependendo do tipo de vrus. Este tipo de cultura tem uma grande limitao, que o curto tempo
de durao, no suportando mais que 3 ou 4 subcultivos, isto , dura no mximo, um ms,
morrendo em seguida. As culturas de linhagens contnuas so clulas heteroplides, isto ,
clulas que passaram por uma transformao maligna, tornando-se imortais, de forma que podem
ser subcultivadas indefinidamente. Dentre as clulas de linhagens contnuas, as mais conhecidas
so: a linhagem HeLa, que uma clula epitelial humana, transformada pelo HPV18, obtida a
partir de um tumor do colo do tero, a linhagem Vero, que uma clula de rim de macaco verde
africano, transformada pelo vrus SV40 e a linhagem Hep-2, que uma clula epitelial humana. O
resultado da infeco viral em uma cultura de clulas pode ser caracterizado pela manifestao do
efeito citoptico, pela presena de corpsculos de incluso, pela produo de antgenos virais que
podem ser detectados com anticorpos fluorescentes ou pela adsoro de hemcias s clulas da
cultura, quando estas esto infectadas por vrus que possuem atividade hemaglutinante. Na
maioria das vezes, quando o vrus replicado na cultura de clulas, provoca efeito citoptico, que
pode ser visualizado ao microscpio ptico comum com iluminao invertida. Aps a propagao
do vrus isolado, feita a sua identificao, mediante teste de neutralizao, ou outras tcnicas
imunolgicas ou ainda por tcnicas moleculares. O teste de neutralizao consiste em tratar o
vrus com anti-soro de especificidade conhecida e em seguida inocular esse vrus em um sistema
hospedeiro e observar se ocorre ou no infeco. Quando o anti-soro for especfico para o vrus
que est sendo identificado, os anticorpos vo se ligar s partculas virais neutralizando sua
atividade infecciosa porque impede que ele se ligue aos receptores da clula.

13.1.2 - Deteco de antgenos virais


Pode-se tambm fazer a deteco direta das partculas vrus, ou de seus antgenos
em materiais coletados do paciente, por meio de mtodos como: imunofluorescncia direta ou
indireta utilizando-se anticorpos especficos para o vrus marcados com compostos que emitem
fluorescncia em presena de luz ultravioleta; por imunohistoqumica empregando-se anticorpos
marcados com a enzima peroxidase onde se adiciona o substrato da enzima e observa-se a
reao em microscopia tica comum e se observa uma mudana de cor quando a reao for
positiva; por aglutinao passiva utilizando-se anticorpos especficos para o vrus, ligados
partculas de ltex que resulta em uma aglutinao visvel a olho nu; e o ELISA, onde se utiliza um
anticorpo especfico para o vrus, seguido de um segundo anticorpo, dirigido contra o primeiro
marcado com uma enzima (conjugado) e depois se adiciona o substrato da enzima que ao ser
degradado resulta em alteraes que pode ser a mudana de colorao do meio ou emisso de
luz, as quais podem ser detectadas e quantificadas por meio de aparelhos especficos para esse
fim. Alm disso, partculas virais podem ser visualizadas atravs de microscopia eletrnica.

13.1.3 - Sorologia outra forma de se fazer o diagnstico de uma infeco viral pesquisando-se
a presena de anticorpos especficos para o vrus no soro do paciente. Em muitos casos utiliza-se

29
a sorologia pareada, em que duas amostras de soro do paciente, uma coletada logo aps a
suspeita de contgio e a outra, coletada 15 a 20 dias, ps a primeira. As amostras de soro so
diludas em srie e faz-se a quantificao de anticorpos das duas amostras e compara-se os
ttulos de anticorpos das duas amostras. Quando a segunda amostra de soro apresentar um ttulo
de anticorpos pelo menos quatro vezes maior que a primeira, diz-se que o paciente fez
soroconverso confirmando-se a ocorrncia da infeco no perodo compreendido entre as duas
coletas de soro. Quando a sorologia pareada no mais possvel se faz a pesquisa de anticorpos
da classe IgM em uma nica amostra do soro do paciente. Como a IgM desaparece, cerca de dois
meses aps a infeco substituda por IgG, a presena de dessa imunoglobulina indica infeco
recente. Se a IgM especfica detectada durante o curso da infeco caracteriza infeco aguda.
Os mtodos sorolgicos mais utilizados so: a Inibio da hemaglutinao para os vrus que
possuem espculas hemaglutinantes que se ligam a hemcias promovendo a sua aglutinao.
Esse mtodo consiste na diluio seriada do soro do paciente e a cada diluio adicionada uma
quantidade fixa de uma preparao do vrus purificada e incubada a 370C durante uma hora, e em
seguida adiciona-se hemcias reao. Se as hemcias aglutinarem o paciente no possui
anticorpos para o vrus testado, mas se as hemcias no aglutinarem o paciente apresenta
anticorpos para o vrus e, portanto, teve a infeco pelo vrus testado. Outros mtodos com
ELISA, radioimunoensaio, imunofluorescncia direta e indireta podem ser utilizados para a
pesquisa de anticorpos especficos em pacientes com suspeita de infeco por vrus. Outro
mtodo utilizado o Western blot uma reao sorologia muito realizada para a confirmao do
diagnstico da AIDS. Para realizar esta reao, uma preparao contendo partculas virais
quebradas submetida a uma eletroforese em gel de poliacrilamida para separar as diversas
protenas virais de acordo com o seu peso molecular, dando origem a vrias bandas no gel. Em
seguida, essas bandas so transferidas para uma membrana de naylon ou de nitrocelulose, na
qual se adiciona o soro da paciente. Se o paciente possui anticorpos para o vrus, esses iro se
ligar s respectivas protenas que estimularam a sua produo, formando-se complexos antgeno-
anticorpo os quais podem ser detectados atravs de um teste de ELISA comum ou se utilizar
anticorpos marcados com istopo radioativo, atravs da incubao da membrana onde foi feita a
reao, na presena de um filme fotogrfico seguido de usa revelao em uma autoradiografia.

13.2 - Mtodos Moleculares


Entre os mtodos moleculares que podem ser utilizados para a deteco de cidos
nuclicos virais destacam-se: a hibridizao com sondas de cidos nuclicos, Southern e Northern
blotting, conforme o tipo de cido nuclico, DNA ou RNA e reao em cadeia da polimerase (PCR)
que permitem a deteco de cidos nuclicos dos vrus, caso estes estejam presente, tanto livre
no plasma e outros fluidos orgnicos, quanto no interior de clulas. Essas tcnicas so
extremamente sensveis e especficas e permitem a deteco de vrus mesmo quando eles se
encontram em pequena quantidade no material examinado. Para isso, necessrio fazer o

30
processamento do material biolgico obtido do paciente, de forma a obter o cido nuclico do
vrus (RNA ou DNA), conforme o tipo de vrus, em um estado de purificao em que no existam
componentes que possam inibir a reao necessria para a deteco do material gentico do
vrus, caso ele esteja presente no espcime pesquisado.
A reao em cadeia da polimerase, PCR uma tcnica de amplificao usada para
sntese in vitro de seqncias especficas de cidos nuclicos isolados de tecidos ou de fluidos de
pacientes ou de culturas de clulas infectadas, utilizando a seqncia alvo como molde. Se o vrus
for de genoma de RNA, necessrio que ele seja convertido em um DNA complementar (DNAc),
atravs de transcrio reversa (RT-PCR) antes de comear o processo de amplificao. A PCR
uma reao cclica que requer; um molde de DNA, os quatro tipos de desoxinucleotdeos
trifosfatados, concentraes adequadas de cloretos de clcio e magnsio, seqncias iniciadoras
ou primers e a enzima DNA polimerase. Os primers so oligonucleotdeos com seqncia que so
complementares a seqncias especficas que flanqueiam a seqncia alvo da amplificao. Os
primers que determinam a especificidade da reao e o tamanho do produto amplificado ou
amplicon. A reao realizada em um termociclador e consta de trs fases: (1) Desnaturao
consiste em levar de temperatura a at 95oC para promover a abertura das fitas do DNA; (2)
Anelamento consta da reduo da temperatura para 40 a 55OC de acordo com o objetivo
desejado, para que haja a hibridizao dos primers aos moldes de DNA que possuem seqncias
complementares (3) Extenso consiste em elevar a temperatura para 72 oC que timo para a
atuao da enzima DNA polimerase. Nessa fase a enzima usa os dNTPs como substrato para
sintetizar uma fita complementar seqncia alvo, fazendo a extenso a partir dos primers. Esse
ciclo repetido vrias vezes para amplificar o DNA original em progresso geomtrica.

Reao em cadeia da polimerase (PCR) consiste na sntese Inn vitro de DNA, a partir de uma
seqncia de DNA de fita simples utilizada como molde. Para a realizao desta reao so
necessrios: o molde de DNA contendo a seqncia que se deseja detectar, iniciadores (primers)
que apresentem seqncias homlogas s regies que flanqueiam a seqncia que se deseja
amplificar, uma mistura dos quatro tipos de nucleotdeos trifosfatados (dNTPs), concentraes
adequadas de sais, como cloreto de potssio e cloreto de magnsio e a enzima DNA polimerase.
O material biolgico a ser analisado deve ser processado para a obteno de DNA pelo menos
parcialmente purificado. Uma alquota da suspenso de DNA a mistura dos reagentes e colocada
em um termociclador programado de acordo com as condies e nmero de ciclos desejados.
Inicialmente a temperatura elevada a 95oC para desnaturao do DNA abrindo as duas fitas, e
em seguida a temperatura baixada a 40 ou 50oC para o anelamento dos primers nas
extremidades opostas de cada uma das fitas. Em seguida a temperatura elevada a 70 oC que a
temperatura tima para atuao da enzima DNA polimerase. Nessa condio a enzima vai fazer a
extenso das fitas incorporando os nucleotdeos, a partir dos primers obedecendo seqncia
contida no molde, resultando na sntese de duas novas fitas. Terminada essa etapa se inicia um

31
novo ciclo de forma que, a cada ciclo realizado se duplica o nmero de cpias do DNA existente
Assim essa reao permite amplificar o alvo por centenas de vezes de forma que permite detectar
quantidades infinitamente pequenas da seqncia alvo presente em espcimes biolgicos. Para
visualizao dos resultados, os produtos da reao (amplicons) so submetidos a eletroforese em
gel de agarose ou de poliacrilamida, onde pode ser observada uma banda do tamanho esperado,
correspondente a seqncia alvo da amplificao. Se o vrus for de RNA, torna-se necessrio
fazer antes uma reao de RT-PCR isto uma PCR utilizando a enzima transcritase reversa para
obter um DNA complementar (DNA-c) e em seguida procede-se a amplificao desse DNA-c, da
mesma forma descrita anteriormente.
Hibridizao - baseia-se na identificao de seqncias especficas de cidos nuclicos virais,
utilizando seqncias complementares de cidos nuclicos, chamadas sondas marcadas com
biotina, radioistopos ou com enzimas. Essas seqncias so capazes de hibridizar com
seqncias complementares de DNA ou RNA que so alvos da investigao. As sondas podem
ser usadas em diferentes formatos, em fase slida ou fase lquida. No formato de hibridizao in
situ as clulas ou fragmentos de tecidos so fixados em lmina e submetida ao aquecimento ou
ao tratamento com lcalis para promover a desnaturao do cido nuclico alvo, causando a
separao das fitas. A reao lavada para remover as sondas que no hibridizaram, e no caso
da sonda est marcada com enzima, adiciona-se o substrato e o esfregao examinado ao
microscpio ptico para verificar se houve ou no a hibridizao, mediante a evidncia da
degradao do substrato pela enzima utilizada, como por exemplo, a peroxidase, revelada pela
mudana de colorao.
Southern ou Northern Blotting (DNA ou RNA) os espcimes biolgicos so tratados com
substncias que provocam o rompimento das partculas virais para a liberao do cido nuclico
viral. Em seguida feita a digesto pelo tratamento com enzimas de restrio promovendo a
fragmentao do cido nuclico viral em pontos especficos de acordo com sua seqncia de
nucleotdeos e em seguida esse material submetido eletroforese em gel de poliacrilamida,
para a separao dos fragmentos de tamanhos diferentes que aparecem em formas de bandas no
gel. Em seguida, as bandas resultantes so transferidas para uma membrana de nitrocelulose ou
naylon e hibridizada com sondas especficas, marcadas com biotina, istopos radioativos ou com
enzimas, como leitura feita posteriormente.

14. Quantificao de vrus

14.1 - Por Mtodos Convencionais:

Aps a propagao do vrus, faz-se a sua identificao atravs de teste de


neutralizao com anti-soro especfico ou por mtodos moleculares e em seguida a sua
quantificao. A contagem de partculas virais existentes em uma determinada preparao

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da mais alta importncia para se saber a concentrao aproximada de vrus no material
utilizado em estudos laboratoriais como: infeco experimental, para a determinao da
quantidade de vrus empregada por dose de vacinas, ou para determinar a carga viral
presente em uma preparao por unidade de volume. Isso pode ser feito por mtodos
clssicos ou convencionais e por mtodos moleculares. Entre os mtodos convencionais
que so mais utilizados para a contagem de vrus temos: a contagem de partculas fsicas
em microscpio eletrnico ou a determinao do nmero de unidades hemaglutinantes
por unidade de volume de uma dada preparao viral.

14.1.1- Contagem de partculas fsicas consiste em juntar a uma suspenso de vrus


purificado, uma quantidade conhecida de partculas de ltex e aps a homogeneizao,
retira-se uma alquota de volume conhecido, dessa mistura, cora-se pela tcnica de
sombreamento, e leva-se ao microscpio eletrnico onde se procede a contagem das
partculas de ltex e das partculas de vrus visualizadas. Para determinar o nmero de
partculas virais existentes na suspenso, divide-se o nmero de partculas de ltex
observadas, pelo nmero de partculas de vrus e multiplica-se o valor encontrado pelo
nmero total de partculas de ltex que foram colocadas na suspenso e em seguida pelo
volume da alquota utilizado, conforme demonstrado no exemplo abaixo. Este mtodo no
permite fazer a diferena entre partculas infecciosas e no infecciosas. O nmero de
partculas fsicas e clculo conforme exemplificado abaixo.
Exemplo: Np - Nmero de partculas virais = ?
T - Total de partculas de ltex colocadas = 2,4 x 108
X - No de partculas de ltex contadas no microscpio = 250
y - No de partculas de vrus contadas no microscpio = 25
V - volume da amostra utilizado = 0,01mL ou 10L
Np = X . T .V
Y
Np = 250 . 2,4 x 108 . 0,01ml
25
Np = 2,4 x 109 . 0,01 ml

Np = 2,4 X 107 partculas de vrus por ml

14.1.2 - Nmero de unidades hemaglutinantes consiste em fazer diluies seriadas, em


triplicata da preparao de vrus usando microplaca de titulao e em cada poo da placa
adicionado um volume constante de uma suspenso de hemcias. Aps deixar em repouso por

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uma hora a 370C, observa qual foi a diluio mxima da suspenso de vrus que ainda foi capaz
de aglutinar pelo menos 50% das hemcias. Essa anlise feita nas trs linhas de poo da placa
e fazendo-se a mdia dos resultados, tem-se o ttulo do vrus, em unidades hemaglutinantes. Esse
mtodo s pode ser empregado para os vrus que possuem atividade hemaglutinante, ou seja,
para aqueles que possuem a espcula hemaglutinina.

14.1.3 - Nmero de unidades formadoras de placas um mtodo biolgico que analisa a


atividade infecciosa do vrus para um determinado hospedeiro o qual baseia-se na contagem de
partculas infecciosas ou unidade formadora de placa ou PFU o qual denominado mtodo de
Dulbecco. Esse mtodo mais utilizado na prtica, porque como ele se baseia nas alteraes
apresentadas pelas clulas infectadas, permite contar somente as partculas virais com atividade
infecciosas que o que mais interessa, quando se quer saber a dose infectante ou a dose letal de
uma preparao de vrus. O mtodo de Dulbecco consta do seguinte: em uma monocamada de
clulas em cultura inoculado um volume conhecido de uma diluio Da suspenso de vrus e
aps o tempo necessrio para que haja a adsoro das partculas virais s clulas, estas so
lavadas como meio de cultura e em seguida cobertas com uma soluo de agarose que na
temperatura de 50oC lquido, mas ao esfriar se solidifica, formando uma camada gelatinosa
sobre as clulas, de forma a impedir que os vrus produzidos por uma clula, se espalhem para
todas as clulas da cultura. Dessa forma ao infectar uma clula, o vrus vai se replicar e destruir
apenas clula atingida, ou no mximo pode afetar clulas vizinhas, provocando a formao de
pequenas reas isoladas de clulas mortas chamadas placas, mas preservando as demais clulas
da monocamada. Assim, a maioria das clulas da cultura preservada, permanecendo vivas. Em
condies controladas, uma placa isolada pode originar-se de uma nica partcula viral infecciosa,
denominada unidade formadora de placa (PFU). Passado o tempo necessrio para a replicao
do vrus, as clulas so fixadas com formol, a camada de gelatina que cobre as clulas
removida, e a monocamada de clulas corada com um corante vital, como o caso do vermelho
neutro que cora apenas as clulas vivas, e nos locais da monocamada onde as clulas foram
mortas pelo vrus, vo aparecer reas descoradas chamadas placas. Em diluies adequadas do
vrus essas placas so facilmente contadas. Para se determinar quantidade de vrus infectantes,
presentes na amostra utilizada, conta-se o nmero de placas em toda a superfcie da
monocamada de clulas da cultura e multiplica-se valor encontrado, pelo inverso da diluio do
vrus utilizada e depois pelo volume da suspenso de vrus que foi inoculado na cultura de clulas,
conforme demonstrado no exemplo abaixo.
Exemplo: CV - Concentrao de vrus na amostra = ?
D - Diluio da amostra = 1 x 10-6
N - Nmero de placas contadas = 25
V - Volume = 0,1mL ou 100 L
CV = N . 1 . V

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D
CV = 25 . 1 . 0,1
10-6
CV = 2,5 X 107 . 0,1ml

CV = 2,5 X 106 PFU/mL

14 .2 - Por mtodos moleculares


Os mtodos moleculares so mais sensveis e permitem a realizao de estudos
clnicos atravs dos quais pode ser medida a carga viral, sem a necessidade do cultivo do vrus, o
que torna possvel prever a progresso ou no da doena, avaliar a eficcia e o regime
teraputico de drogas antivirais, determinar o risco de transmisso, alm de permitir fazer o
monitoramento para deteco do surgimento de resistncia, s drogas antivirais, bem como
avaliar a eficcia de vacinas que esto sendo testadas. Existem atualmente, vrios mtodos
baseados nas tcnicas de biologia molecular que vm sendo utilizados, tanto para a deteco
como para a quantificao de cidos nuclicos virais, os quais so muito mais rpidas, sensveis
e precisas alem de dispensarem o isolamento e cultivo do vrus, permitindo inclusive a deteco e
quantificao de vrus que no so propagados em laboratrio. O grande sucesso da PCR
contribuiu para o avano de outras tcnicas moleculares de amplificao incluindo aquelas que
permitem fazer uma acurada e precisa quantificao da carga viral em pacientes infectados que
tem trazido grandes avanos no campo da terapia antiviral bem como no estabelecimento de
prognsticos sobre a evoluo de doenas, alm de contribuir para o melhor entendimento da
histria natural de um grande nmero de infeces virais. Existem atualmente, vrios tipos de
ensaios disponveis e comercializados na forma de kits, que parecem ser sensveis, reprodutveis
e precisos para a deteco e quantificao de RNA ou DNA viral em espcimes clnicos.
Esses mtodos so baseados em alguns princpios tais como: (1) Limite da diluio
final da seqncia alvo presente no espcime, a ser amplificada; (2) Amplificao de padres
externos; (3) Amplificao competitiva ou no de padres internos e externos. O uso de padres
essencial em ensaios de quantificao por PCR, para que se tenha controle das variveis
inerentes eficincia e cintica da reao envolvendo espcimes clnicos que podem levar a uma
determinao incorreta da quantidade da seqncia alvo presente na amostra. Entre os mtodos
moleculares de quantificao viral podemos destacar:

14.2.1 - Deteco e quantificao de RNA ou DNA viral por PCR Competitivo baseia-se na
quantidade relativa de produtos da amplificao obtida a partir de uma quantidade desconhecida
da seqncia alvo, em relao quantidade de produtos obtida a partir de um nmero de cpias
conhecido de uma seqncia competidora que apresenta o mesmo stio ligante da seqncia alvo
de forma que as duas molculas so capazes de anelar-se igualmente com o primer utilizado.
feita a co-amplificao desses dois alvos, em uma srie repetida de iguais volumes da reao,

35
onde cada tubo da srie contm as mesmas quantidades do espcime, onde a partir do tubo 2 da
srie, so adicionadas quantidades conhecidas crescentes de cpias da seqncia competidora
utilizada como padro interno. O tubo 1 no qual no foi adicionada a seqncia competidora
servir como parmetro de avaliao da quantidade amplificada da seqncia alvo na ausncia do
competidor. A seqncia competidora idntica seqncia alvo, mas difere desta no tamanho e
na composio do cido nuclico, em virtude da insero ou deleo de seqncias internas. Ele
serve como controle interno, em todos os estgios da co-amplificao. A quantificao do alvo
presente na amostra testada feita, comparando-se a concentrao de produtos da amplificao
da seqncia alvo e da seqncia competidora em que o nmero de cpias conhecido,
inferindo-se que, quantidades iguais do alvo e do competidor, devero resultar em concentraes
tambm iguais de produtos amplificados, apresentando bandas de igual espessura ou a emisso
de sinais idnticos. Isso pode ser mensurado atravs da anlise de vdeo e imagem em
computador, onde a concentrao de produtos da PCR determinada por densintometria das
bandas obtidas por eletroforese em agarose, em que o cido nuclico marcado com brometo de
etdio ou em poliacrilamida corado pela prata. A quantificao tambm pode ser feita medindo-se a
quantidade de sinal radioativo emitido pela banda, quando os primers utilizados na reao so
marcados com istopo radioativo; ou pela hibridizao com sondas especficas para o alvo e para
a seqncia competidora marcadas de forma que possam ser detectadas pela tcnica ELISA
revelado por quimioluminescncia. Esse tipo de ensaio tem se mostrado altamente sensvel e
acurado, embora seja trabalhoso porque necessita de mltiplas amplificaes da mesma amostra,
tem sido utilizado com sucesso na quantificao de RNA do HCV, RNA ou DNA de HIV1.

14,2.2 - Deteco e quantificao de RNA ou DNA viral por PCR no Competitivo baseia-se
na co-amplificao de um nmero conhecido de cpias de um padro interno que possui stio
ligante para o primer igual ao da seqncia alvo do RNA ou DNA que se deseja amplificar, em
concentraes molares previamente otimizadas do alvo e do padro. Esse padro interno muito
semelhante ao alvo, mas difere deste, em relao seqncia utilizada para a deteco dos
produtos da amplificao. Para vrus de genoma de RNA, utiliza-se o padro interno tambm de
RNA, e tanto alvo como padro interno, passam pela transcrio reversa e co-amplificao com
igual eficincia e cintica, para produzir as respectivas seqncias de c-DNA que so em seguida,
quantificados. Para os vrus de genoma de DNA a amplificao feita em paralelo com um padro
interno tambm de DNA. Em ambos os casos, a quantificao dos produtos da amplificao do
alvo e do padro interno feita empregando mtodos semelhantes aos utilizados na PCR
competitiva. Para a quantificao do vrus da hepatite C que possui genoma de RNA, a mistura da
reao de PCR inclui: RN extrado do espcime, quantidade definida de RNA do padro interno,
primers biotinilados, UNG, dNTPs e transcritase reversa. Faz-se uma nica amplificao e os
produtos da reao (c-DNAs) de dupla fita, so desnaturados e diludos em srie de 5 e
submetidos a amplificao por PCR e em seguida medida a quantidade dos produtos da

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amplificao do alvo e do padro interno. Cada diluio dos produtos da reao colocada em
dois poos diferentes, de uma placa de microtitulao: um deles contm sondas de captura,
especfica para o alvo e no outro, sondas especficas para o padro interno ligadas placa. Essas
sondas vo hibridizar com suas seqncia homlogas, imobilizando-as na placa, onde so
quantificadas pela adio do conjugado estreptoavidina-Horserdish peroxidase e em seguida o
substrato da enzima e um cromgeno que muda a cor do meio, no formato ELISA, onde o
comprimento de onda pode ser medido colorimetricamente. O nmero de cpias do vrus
calculado pela variao linear das densidades ticas da amostra e do padro interno em cada
diluio e normalizado em funo do nmero de cpias do padro interno que foram adicionadas
na reao. Um controle negativo e dois controles positivos so utilizados para cada teste.

14.2.3- Amplificao baseada no cido nuclico especfico (NASBA) - baseia-se na


amplificao de uma seqncia alvo de cido nuclico, atravs de um processo que envolve um
primer (primer 1) que contm o promotor da enzima T7 RNA polimerase, a enzima transcritase
reversa que possui trs tipos de atividades, funcionando ao mesmo tempo como transcritase
reversa, fazendo a transcrio de RNA para DNA, como DNA polimerase sintetizando DNA a partir
de uma fita de DNA utilizada como molde e atividade RNase H que degrada a molcula de RNA
original, aps a sua transcrio reversa, um segundo tipo de primer (primer 2) que se liga antes do
primer que contm o promotor da enzima T7 RNA polimerase, e a enzima e a enzima T7 RNA
polimerase de um bacterifago, que capaz de fazer a transcrio de DNA (+) para RNA (-). Para
a deteco de vrus de genoma de RNA (-) a amplificao do genoma viral feita da seguinte
maneira: o primer 1 se anela a seqncia alvo e a transcritase reversa faz a extenso dando
origem a uma fita de c-DNA (+) que contm o promotor da enzima T7 RNA polimerase e a fita de
RNA original degradada pela RNase H. Em seguida ocorre o anelamento do primer 2 a um stio
ligante antes do promotor da T7 RNA polimerase e pela ao DNA polimerase dependente de
DNA da transcritase reversa, feita a extenso tornando o DNA de duplo filamento contendo o
promotor da enzima T7 RNA polimerase. Essa enzima que est presente na reao vai fazer a
transcrio da fita de DNA (+) em mltiplas cpias de RNA ( -) as quais vo reiniciar um novo ciclo,
a partir do anelamento do primer 2. Se o vrus possui genoma de RNA (+) o processo ocorre de
forma semelhante, sendo que a primeira fita de c-DNA a ser produzida pela transcrio reversa,
a fita de DNA (-). Quando o vrus for de genoma de DNA a enzima transcritase reversa utilizada
apenas na sua atividade DNA polimerase DNA dependente, e so necessrias duas
desnaturaes do DNA pelo aquecimento a 100oC: uma para que possa ocorrer o anelamento do
primer 1, para que haja a sntese da fita de DNA contendo o promotor da enzima T7 RNA
polimerase. A outra desnaturao precede o anelamento do primer 2, para que haja a sntese da
fita de DNA complementar e formar assim, um DNA de filamento duplo, contendo o promotor da
enzima T7 RNA polimerase, a partir do qual sero sintetizadas mltiplas cpias de RNA (-), pela
ao dessa enzima. As cpias de RNA (-) recm-sintetizadas vo entrar no ciclo, da mesma forma

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que ocorre com os vrus de RNA (+). Para a quantificao de vrus na amostra, necessrio
realizar a co-amplificao de um nmero de cpias conhecido de trs calibradores, Qa, Qb e Qc.
Esses calibradores servem como controle interno para cada amostra individual e diferem do alvo,
apenas por uma seqncia de 20 nucleotdios que servem como stio ligante especfico para cada
sonda detectora. A co-amplificao dos cidos nuclicos do vrus pesquisado e dos trs
calibradores feita no mesmo tubo e o produto da amplificao dividido para 4 tubos: WT, que
corresponde ao vrus presente no espcime, que se deseja quantificar e Qa, Qb e Qc que
corresponde aos trs calibradores. Em cada um dos quatro tubos, foi colocada previamente uma
sonda detectora, especfica para o seu respectivo alvo, a qual est ligada a partculas
magnetizadas, capazes de sensibilizar uma clula fotoeltrica. Qualquer que seja o tipo cido
nuclico do vrus e dos padres utilizados, a quantificao feita pela contagem do nmero de
cpias de RNA de fita simples negativa presentes aps a reao. As quantidades de produtos
gerados no processo, a partir de cada um desses componentes, isto , da seqncia alvo e de
Qa, Qb e Qc, sero determinadas pela leitura eletrnica feita em um sistema semi-automatizado
de eletroquimioluninescncia (ECL), onde a quantidade do sinal emitido proporcional
quantidade de molculas de cada alvo que foram capturadas pela sonda magnetizada. A
quantidade do alvo presente na amostra (WT) calculada determinando-se o sinal WT-ECL e o
sinal ECL dos trs calibradores em anlise de regresso linear.

14.2.4- Deteco e quantificao de cidos nuclicos ramificados (bDNA) - consiste na


amplificao do sinal emitido por sondas hibridizadas a alvos de cidos nuclicos, e no na
amplificao da seqncia alvo que se deseja quantificar, o que pode ser utilizado para a
deteco e quantificao de vrus de RNA e DNA, atravs de hibridizaes em srie. Os vrions
so quebrados para a liberao do cido nuclico viral e em seguida adicionado a um poo de
uma placa de microtitulao contendo sondas de captura especficas para o alvo que fica
imobilizado na superfcie da placa. Em seguida faz-se uma nova hibridizao, com uma sonda que
se liga na seqncia alvo e possui stio ligante para hibridizar com uma outra sonda formada poe
seqncias de DNA ramificado (sonda bDNA) ou seqncia amplificadora, a qual possui nos seus
vrios ramos, stios ligantes para uma outra sonda marcada com a enzima fosfatase alcalina. Em
seguida adicionada uma sonda contendo a enzima fosfatase alcalina, a qual vai se ligar s
ramificaes, mantendo a enzima preza ao complexo de hbridos de cidos nuclicos. Ao se
adicionar o substrato da fosfatase alcalina (dioxcetona) esse vai ser degradado pela ao da
enzima e emite luz e esta quimioluminescncia emitida, captada e mensurada por meio de um
sistema semiautomatizado. Reaes semelhantes so realizadas em paralelo, utilizando 4
padres com quantidades de cpias de cidos nuclicos conhecidas, a partir dos quais
construda uma curva-padro, bem como um controle positivo e um controle negativo para cada
amostra testada. A quantidade da seqncia alvo na amostra determinada, comparando-se os
valores de leitura obtidos da amostra com os da curva-padro, e o resultado expresso em

38
nmero de cpias do cido nuclico por mililitro. Esse tipo de ensaio tem sido utilizado para a
deteco e quantificao de HIV1, HBV, HCV e CMV.

14.2.5 - SHARP Sinal baseia-se na deteco e quantificao de alvos de DNA por meio da
hibridizao com sondas de RNA. Se o vrus possui genoma de RNA se faz inicialmente uma PCR
com transcritase reversa, para produzir o c-DNA de dupla fita e em seguida realiza-se uma PCR
normal, utilizando pimers biotinilados. Quando o vrus for de DNA essa primeira reao no
necessria. Os produtos da PCR amplificados com primers biotinilados so desnaturados com
NaOH e em seguida, hibridizados com sondas de RNA especficas para a seqncia alvo e os
hbridos DNA/RNA formados, so transferidos para outro tubo no qual a estreptoavidina foi ligada
previamente e esta vai se ligar aos hbridos que contm biotina, mantendo-os imobilizados no
fundo do tubo. Em seguida so adicionados anticorpos especficos para hbridos DNA/RNA,
conjugados fosfatase alcalina e depois, o substrato da enzima e uma substncia cromgena
que, em presena da degradao do substrato provoca mudana na cor do meio a qual pode ser
detectado atravs de mtodos colorimtricos, onde a intensidade de cor proporcional
concentrao da molcula alvo no espcime. No formato quantitativo, padres externos de
nmero de cpias de cido nuclico conhecido, so usados para construir curva de calibrao
para determinar a concentrao da molcula do alvo presente no espcime testado.

14.2.6 - Captura Hbrida baseia-se na hibridizao de seqncias alvo DNA com sondas de
RNA de fita simples. Os hbridos de DNA/RNA so detectados em um ensaio de captura em
sanduche. Se o vrus possuir genoma de RNA ser necessrio antes realizao de uma PCR
com transcritase reversa para obter o c-DNA correspondente, para em seguida, fazer a
hibridizao com sondas de RNA. Se o vrus possui genoma de DNA essa etapa no
necessria. Os espcimes biolgicos so tratados com NaOH para desnaturao e hibridizados
com sondas de RNA e os hbridos DNA/RNA formados, so transferidos para um tubo no qual
foram previamente ligados pela poro Fc, anticorpos especficos para hbridos de DNA/RNA os
quais vo capturar esses hbridos mantendo-os imobilizados no tubo. Em seguida, so
adicionados anticorpos especficos para hbridos DNA/RNA conjugados fosfatase alcalina, os
quais vo se ligar aos hbridos que se encontram imobilizados pelo anticorpo de captura. Em
seguida adicionado o substrato da enzima que ao ser degradado, emite luz a qual captada
pelo sistema de leitura tica. No formato quantitativo, adotado o mesmo procedimento utilizado
no ensaio de SHARP-Sinal, utilizando-se padres externos de nmero de cpias de cido nuclico
conhecido, para a construo da curva de calibrao para determinar a quantidade do alvo no
espcime analisado.

15 - Tipagem e comparao do genoma viral

39
A caracterizao molecular com o propsito de tipagem no relevante para o
tratamento exceto em alguns casos, como o da hepatite C, mas muito til em estudos
epidemiolgicos e investigao da patognese e progresso da doena. Os mtodos mais usados
so:

15.1 - Seqenciamento de cido nuclico - O tipo de vrus pode ser determinado fazendo-se o
sequenciamento de pores do genoma viral que confere definio de tipos e o resultado
comparado com a seqncia estabelecida para aquele tipo de vrus. Para a identificao de novos
tipos de vrus, faz-se o sequenciamento de uma regio do genoma que permita fazer a
diferenciao e em seguida compara-se com os tipos j conhecidos.

15.2 - Poilimorfismo do comprimento dos fragmentos de restrio (RFLP) o DNA viral


digerido com enzimas de restrio que clivam em stios especficos da seqncia de nucleotdeos.
Como as enzimas de restrio so capazes de clivar DNA, se o vrus for de RNA ser necessrio
a realizao de uma RT-PCR para obter um cDNA. Se essa tcnica realizada em duas amostras
de um mesmo tipo de vrus, originar fragmento de tamanhos idnticos, mas se ela for empregada
para vrus de tipos diferentes, resultar na gerao de fragmentos de tamanhos diferentes, que
vo apresentar padres de migrao de bandas diferentes, quando submetidos a eletroforese em
gel de poliacrilamida corado pela prata. Como essa tcnica requer grandes quantidades de DNA,
ela mais indicada para produtos de PCR. Isto faz-se primeiro uma reao de PCR e em
seguida digere-se os produtos desta reao com enzimas de restrio e submete-se a uma
eletroforese em gel de poliacrilamida.

15.3 - Southern Blotting uma modificao da RFLP, onde o DNA viral digerido por enzima
de restrio e os fragmentos submetidos a uma eletroforese em gel de poliacrilamida, transferido
para uma membrana de nitrocelulose ou de naylon e hibridizadas com sondas especficas
marcadas com istopo radiativo. Essa sonda podem ter como alvo de hibridizao todo o genoma,
ou apenas uma regio deste e, em seguida a reao revelada atravs de autoradigrafia.
Tambm pode ser feita Dot Blotting em que os produtos de PCR so desnaturados com hidrxido
de sdio e blotados em uma membrana nitrocelulose ou de naylon e hibirdizados com sondas
especficas marcadas com istopos radioativos.

15.4 - Hibridizao reversa (RH) baseia-se num sistema em que produtos de amostras testes
amplificados por PCR so hibridizados com sondas especficas fixadas em linhas paralelas em
fitas de membrana de nitrocelulose ou nilon. Num teste desenvolvido para tipagem do VHC, o
RNA viral amplificado por RT-PCR usando primers biotinilados e os produtos da PCR so em
seguida, hibridizados com sondas especficas para cada tipo conhecido fixas em fitas de nilon e
os hbridos so detectados com estreptoavidina conjugada a fosfatase alcalina, seguida da adio

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do substrato. A reao do fragmento amplificado com a sonda especfica resulta na formao de
linhas visveis aps a etapa de revelao, permitindo a identificao do subtipo do VHC.

15.5 - PCR - ELISA - Os produtos de PCR so desnaturados e hibridizados com sondas


especficas, fixadas em uma placa de microtitulao e em seguida, os hbridos formados so
detectados com anticorpo especficos para DNA de dupla fita que corresponde ao hbrido DNA
alvo e sonda de DNA, e a reao revelada atravs de um teste de ELISA. Para a realizao do
teste, os poos de uma placa so previamente sensibilizados com estreptoavidina e em seguida
adicionadas sondas biotiniladas, especficas para o alvo que se pretende identificar de forma a
manter as sondas imobilizadas na placa. Em seguida adiciona os produtos da PCR desnaturados
que ao hibridizarem com as sondas formam um hbrido DNA/DNA. Adiciona-se um anticorpo anti-
DNA de dupla fita e a seguir um anticorpo aint-imunoglobulina conjugado a uma enzima e depois o
substrato dessa enzima + o cromgeno e a leitura feita por colorimetria.

15.6 - Polimorfismo conformacional de DNA de fita simples (SSCP) permite identificar


alteraes na seqncia de nucleotdeos apenas de DNA de fita simples pela diferena de
mobilidade na eletroforese em gel de poliacrilamida neutro. Esse mtodo pode ser utilizado para
identificao de tipos de vrus ou de mutantes a partir de fragmentos de restrio ou de produtos
de PCR comparados com um padro conhecido. Os fragmentos de restrio ou os produtos de
PCR da amostra que se est querendo identificar e do padro so desnaturados por lcalis e
submetidos eletroforese em gel de poliacrilamida neutro e comparados os perfis das bandas
aps a colorao do gel. Se a amostra apresentarem diferenas de apenas um nucleotdeo em
relao ao padro vai apresentar diferena no perfil das bandas.

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Virologia Mdica

42
Arboviroses

Jos Verssimo Fernandes


Dengue

1. Etiologia

O agente etiolgico da dengue um arbovrus do grupo B, classificado na famlia


Flaviviridae e no gnero Flavivrus, denominado vrus da dengue. Este vrus possui genoma de
RNA de filamento nico com polaridade positiva, semelhante a um RNA mensageiro, mas no
apresenta a seqncia poliadenilada. A estrutura do capsdio no visvel no interior do vrion,
mas apresenta simetria icosadrica e encontra-se revestida por um envelope fosfolipdico
contendo estruturas em forma de espculas denominadas glicoprotena E alm de uma protena
situada ente o capsdio e o envelope denominada protena da matriz ou M. O genoma completo
do vrus da dengue traduzido em uma nica poliprotena a qual em seguida processada por
enzimas proteolticas do vrus e da prpria clula para dar origem s diferente protenas virais.
Desta forma, no existe distino temporal na traduo de protenas no estruturais e estruturais.
A glicoprotna E a estrutura de fixao do vrus aos receptores da clula estando, portanto,
relacionada atividade infecciosa e que tambm apresenta capacidade para aglutinar hemcias
de aves, isto , possui atividade hemaglutinante. As atividades hemaglutinante e infecciosa desse
vrus esto estreitamente relacionadas, de forma que, a inativao de uma delas implica
inevitavelmente na inativao da outra. Essas duas atividades apresentam estabilidade mxima
em pH 8,5 e so facilmente eliminadas pelo tratamento com enzimas proteolticas tais como:
tripsina, quimiotripsina, papana, pepsina e qualquer substncia que ataque ligaes sulfidrilas. A
inativao da atividade infecciosa desse vrus, por processos fsicos ou qumicos altera as
caractersticas antignicas das espculas, fazendo com que o vrus inativado perca o seu potencial
imunognico, isto , deixe de induzir a produo de anticorpos neutralizantes, que so os que
oferecem proteo contra a doena, o que inviabiliza a produo de vacinas com vrus inativados.
O vrus da dengue se replica no citoplasma da clula hospedeira e as partculas brotam de
vesculas intracelulares formadas a partir da membrana do retculo endoplasmticos onde esto
ancoradas as glicoprotenas das espculas e em seguida, so liberados por lise ou por exocitose.
O vrus da dengue se apresenta sob a forma de quatro sorotipos distintos, designados:
DEN1, DEN2, DEN3 e DEN4, os quais diferem entre si por caractersticas bioqumicas de
eptopos presentes, em suas espculas hemaglutinantes. Contudo, a maior parte da constituio
antignica desses quatro sorotipos do vrus, principalmente no que se refere aos antgenos de

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capsdio, apresenta antgenos comuns aos quatro sorotipos desse vrus, de forma que existem
reaes cruzadas entre eles. Assim, um indivduo que infectado por qualquer um dos quatro
sorotipos do vrus existentes, desenvolve uma imunidade tipo especfica, isto , protetora apenas
para o tipo do vrus causador da infeco, permanecendo, no entanto, susceptvel infeco
pelos outros trs sorotipos desse patgeno. Conforme demonstrado por Albert Sabin em 1952,
voluntrios infectados experimentalmente com DEN1, ainda se apresentaram susceptveis
infeco pelo DEN2, seis meses aps a primeira exposio. Portanto, apesar de apresentar
anticorpos circulantes que reagem de forma cruzada principalmente, com os antgenos do
capsdio viral, os quais so comuns todos os tipos antignicos desse vrus, o indivduo ainda
continua susceptvel aos outros trs sorotipos do vrus, aps a infeco por qualquer um deles.
Alm disso, esses anticorpos, sobretudo os da classe IgG, produzidos por ocasio da primeira
infeco, permanecem na circulao por tempo indeterminado e quando esse indivduo se infectar
pela segunda vez, com outro sorotipo do vrus, esses anticorpos podero desencadear uma
reao cruzada, envolvendo a ativao do complemento pela via clssica, que nesse caso, no
oferece proteo ao indivduo contra a infeco, pelo contrrio, o torna mais susceptvel a
desenvolver a forma grave da doena, a dengue hemorrgica. O vrus da dengue pode ser
propagado em laboratrio, pela inoculao em ovo embrionado de galinha, em camundongos
recm-nascidos e em uma variedade de culturas de linhagens celulares humanas ou de macacos
e em cultura de clulas do mosquito Aedes albopictus.

2. O vetor de transmisso

O Aedes aegypti o mais eficiente dos vetores, envolvidos na transmisso do vrus


da dengue, em virtude de apresentar hbitos domsticos, mantendo-se no ambiente domiciliar e
peridomiciliar. o principal transmissor da doena no hemisfrio Ocidental. Esse mosquito
prolifera em colees de guas limpas, acumuladas principalmente na estao chuvosa em
reservatrios construdos pelo homem, ou em qualquer recipiente que possa empoar gua,
inclusive plantas como bromlias. O Aedes aegypti, tem como habitat natural, regies urbanas e
periurbanas, reproduzindo-se nas colees de guas paradas que esto dentro ou prximas aos
domiclios. Os ovos so depositados nas paredes do recipiente, acima da superfcie da gua,
onde podem permanecer por cerca de 400 dias se a gua for retirada. Durante esse perodo se o
recipiente voltar a receber gua esses ovos eclodem e recomea o ciclo do inseto.
A fmea do Aedes aegypti necessita de sangue para a maturao de seus ovos e
supre essa necessidade, praticando hematofagia, principalmente no homem que convive no
mesmo ambiente, o que ocorre durante o dia, tendo em vista o seu hbito diurno. A fmea do
mosquito se infecta ao ingerir sangue de um humano que est com infeco pelo vrus da dengue
nas fases de viremia, quando a concentrao do vrus alta no sangue perifrico. Logo aps
ingerir sangue infectado pelo vrus da dengue, a fmea do Aedes aegypti pode eventualmente,

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transmitir a doena, mediante a troca de hospedeiro quando seu repasto foi interrompido. No
entanto, a transmisso se d principalmente, aps um perodo de incubao extrnseco que varia
de 8 a 10 dias, durante o qual o vrus se replica no trato intestinal do inseto e posteriormente nas
glndulas salivares, resultando em uma infeco persistente que mantm durante toda a vida do
inseto que de aproximadamente de 45 dias. A transmisso transovariana do vrus do dengue no
mosquito foi demonstrada em laboratrio e alguma evidncia tem sido obtida tambm em campo,
mas sua importncia real em condies naturais ainda no est bem estabelecida.

3. Patogenia e patologia

A porta de entrada do vrus da dengue no organismo a pele, atravs da picada da


fmea do Aedes aegypti infectada. A partir do ponto de inoculao, o vrus atinge a corrente
sendo levado pelas clulas dendrtricas para os gnglios linfticos mais prximos, onde se replica
nos moncitos e macrfagos. A morte das clulas infectadas resulta de uma combinao de
efeitos induzidos pelo vrus e pela resposta imune. A grande quantidade de RNA viral que
produzido pela replicao e transcrio do genoma viral bloqueia a ligao do RNA mensageiro
celular aos ribossomos impedindo a sntese protica celular e, conseqentemente, reconstruo e
manuteno da clula. O aumento da permeabilidade da membrana da clula infectada provoca
mudanas nas concentraes inicas alterando as atividades enzimticas o que favorece a
traduo do RNA mensageiro viral, em detrimento do RNA mensageiro da clula. Aps a
replicao inicial nos macrfagos e moncitos dos gnglios linfticos prximos da porta de
entrada, os vrus so liberados para a corrente sangunea livres no plasma ou dentro dos
moncitos, ocasionando a primeira viremia, durante a qual os vrus se disseminam para vrios
rgos, principalmente: bao, fgado, rins, medula ssea e linfonodos em geral. Aps a replicao
nesses rgos, o vrus volta corrente sangnea ocasionando a segunda viremia, durante a qual,
atinge as clulas endoteliais dos vasos perifricos, onde se replica, provocando a formao de
edema endotelial perivascular, com infiltrado de clulas mononucleadas, principalmente linfcitos.
O vrus tambm pode atingir eventualmente outros rgos, tais como pulmes, corao e crebro.
A presena do vrus no endotlio desencadeia eventos imunopatolgicos que resultam em leses
nas paredes dos capilares, levando a pequenos derrames de sangue na pele, resultando na
formao de um exantema maculopapular semelhante ao do sarampo, sendo que o tempo de
durao bem menor. Na medula ssea, ocorre uma depresso dos elementos medulares,
principalmente da srie megacaricitos resultando na reduo de plaquetas, que nos casos
graves pode tornar-se crtica. Os rins mostram um tipo de glomerulonefrite associada deposio
de imunocomplexos. Nos casos hemorrgicos, alm dessas alteraes, ocorrem mudanas
fisiopatolgicas devido ao aumento da permeabilidade vascular e de leses de natureza
imunopatolgicas mediadas pela ativao do complemento pela via clssica, nos indivduos que
foram expostos a outros sorotipos do vrus, e possuem anticorpos. Esses anticorpos se ligam s

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clulas infectadas das paredes dos vasos as quais apresentam protenas virais ligadas ao MHC
de classe I, formando complexos antgeno-anticorpo, promovendo a ativao do complemento
provocando lise celular que resulta em leses nas paredes dos vasos. Como o paciente apresenta
uma reduo significativa do nmero de plaquetas, nessa condio haver sada de plasma do
interior dos vasos para os tecidos e cavidades, resultando em hemoconcentrao, baixa presso,
coagulao intravascular, podendo levar ao choque hipovolmico, quando a perda de plasma for
crtica. Outras mudanas so observadas em conseqncia de distrbios da homeostase que
envolve fatores, tais como: mudanas vasculares, trombocitopenia e coagulopatia.
A presena de anticorpos decorrentes da exposio prvia a um outro sorotipo do
vrus da dengue, tambm aumenta a gravidade da doena, pelo fato de que esses anticorpos iro
facilitar a endocitose das partculas virais pelos macrfagos e moncitos do hospedeiro. Como as
glicoprotenas de superfcie da partcula viral esto muito prximas umas das outras, a tendncia
que os anticorpos se liguem a partculas virais individuais, ao invs de se ligarem a vrias
partculas ao mesmo tempo, formando complexos que seriam fagocitados e destrudos pelas
clulas de defesa. Ao contrrio, quando os anticorpos se ligam a partculas individuais de vrus
eles facilitam a endocitose do vrus, tendo em vista que os moncitos e macrfagos possuem na
sua superfcie, receptores para a poro Fc de imunoglobulinas da classe IgG e vo se ligar aos
anticorpos que se encontram recobrindo as partculas virais e assim facilita a endocitose e,
conseqentemente aumenta em cerca de 200 vezes a eficincia de infeco por este patgeno.

4. Manifestaes clnicas
Muitas vezes, a infeco pelo vrus da dengue ocorre na forma assintomtica,
deixando imunidade tipo especfica, isto apenas para o sorotipo do vrus causador da infeco. A
doena clinicamente aparente, quando ocorre, se apresenta sob duas formas clnicas
caracterizadas como: dengue clssica e dengue hemorrgica. A forma clssica da dengue a
mais comum, em geral benigna, e ocorre aps um perodo de incubao de 6 a 7 dias,
apresentando sintomas tais como: febre, mal-estar, calafrios, cefalia, inapetncia, dores
musculares, principalmente no dorso, dores nas articulaes e nos globos oculares. A doena
dura em mdia, 6 dias e freqentemente se observa dois picos febris, correspondentes as duas
viremias. O primeiro pico de febre que corresponde primeira viremia ocorre no incio dos
sintomas e dura 2 a 3 dias, havendo um pequeno intervalo de tempo sem febre, e em seguida
surge o segundo pico de febre correspondente segunda viremia que coincide com o
aparecimento do exantema.
O exantema, quando presente, inicia-se pelas articulaes principalmente joelhos
cotovelos para em seguida se espalhar pelo corpo inteiro, e dura entre 24 e 72 horas. Nesta fase,
tambm comum a ocorrncia de linfoadenopatia generalizada. A dengue hemorrgica que a
forma grave da doena, alm dos sintomas observados na dengue clssica, ocorre hemorragia
com intensa perda de plasma para os tecidos e cavidades, o que resulta em coagulao

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intravascular e choque hipovolmico, levando muitas vezes morte. Acredita-se que a forma
hemorrgica da dengue esteja relacionada com a sensibilizao prvia do indivduo pela infeco
com um dos sorotipos do vrus. Assim, um indivduo que j teve a infeco por qualquer um dos 4
sorotipos existentes do vrus, possui no seu soro, anticorpos da classe IgG, especficos para o tipo
do vrus que causou a infeco, mas que so capazes de reagirem com alguns componentes dos
outros trs sorotipos do vrus, embora no impeam a infeco. Se esse indivduo se infectar
posteriormente com outro sorotipo do vrus, diferente do primeiro, esses anticorpos vo se ligar ao
vrus, sem neutralizar a sua replicao. Esses anticorpos aos se ligarem s clulas infectadas que
expressam protenas virais na sua superfcie, e resulta na formao complexo antgeno anticorpo,
seguida da ativao do sistema complemento pela via clssica, resultando na clivagem dos
componentes C3 e C5 e os componentes c3b e c5b, resultante desta clivagem que tambm
contribui para aumentar a permeabilidade vascular que, juntamente com as leses que ocorrem
nas paredes dos vasos mediadas pela ativao do complemento pela via clssica, e a reduo do
nmero de plaquetas, resultar em hemorragia com o extravasamento do plasma para os tecidos
e cavidades, produzindo hemoconcentrao e coagulao intravascular e choque. Na forma
hemorrgica pode ocorrer hemorragia na pele e tecidos subcutneos, na mucosa do trato
digestivo e congesto em vrios rgos, com necrose focal no fgado, e corao, e efuso de soro
com alto teor protico, principalmente albumina nas cavidades pleural e abdominal. Os sintomas
da dengue hemorrgica so semelhantes aos da forma clssica da doena, sendo que antes do
quadro se estabelecer o paciente apresenta dor abdominal intensa e contnua com vmitos
persistentes, queda de presso arterial, diminuio da diurese que se constituem sinais de alerta.
Podem ocorrer manifestaes hemorrgicas na pele tais como: petquias, prpuras equimoses,
sangramento gengival e gastrointestinal, hepatomegalia e confuso mental.

5. Diagnstico laboratorial
O diagnstico laboratorial da dengue pode ser feito atravs do isolamento do vrus a
partir do soro do paciente, pela inoculao em ovo embrionado, ou em culturas de clulas,
preferencialmente, clulas do Aedes albopictus, obtidas a partir das larvas, nas quais a
replicao do vrus mais rpida. Aps o isolamento do vrus feita a identificao para se
determinar qual o sorotipo do vrus. Essa identificao deve ser feita de preferncia utilizando-se
anticorpos monoclonais, ou atravs de testes de neutralizao. O diagnstico tambm pode ser
feito atravs de sorologia pareada, determinando-se os ttulos de anticorpos especficos,
existentes em duas amostras de soro do paciente, uma coletada no incio da doena e a outra, 20
dias aps a primeira coleta. A infeco confirmada se o ttulo de anticorpos da segunda amostra
de soro, for pelo menos 4 vezes superior ao ttulo da primeira amostra. Neste caso pode-se utilizar
a tcnica de inibio da hemaglutinao que por ser de baixo custo, torna-se mais vivel para o
sistema pblico de sade. Uma alternativa a pesquisa de anticorpos especficos da classe IgM
em uma nica amostra de soro, coletada 8 dias aps o incio da doena. Neste caso, o mtodo

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mais utilizado o ensaio imunoenzimtico (ELISA), que uma tcnica mais sensvel, porm de
custo mais elevado. Tambm pode ser feita a pesquisa direta do vrus no soro do paciente,
atravs de tcnicas sorolgicas como a ELISA, empregando-se anticorpos monoclonais. Essa a
forma mais rpida de se fazer o diagnstico laboratorial da dengue, mas que s factvel nos
grandes centros, pois, alm do alto custo, ainda no existem kits comerciais para isto.

6. Epidemiologia e controle
A dengue possui uma distribuio geogrfica que abrange vrios continentes, nas
regies tropicais e subtropicais do mundo, seguindo em paralelo distribuio do mosquito Aedes
aegypti, seu principal vetor de transmisso, em todo o hemisfrio Ocidental. Nos ltimos 100
anos, grandes epidemias de dengue foram registradas no sul dos Estados Unidos, Austrlia,
Grcia, Japo, Vietn, Porto Rico, Venezuela, Colmbia, Cuba e Brasil. Estima-se que
atualmente, esteja ocorrendo a transmisso ativa da doena em mais de 60 pases dos trpicos.
No hemisfrio Oriental, sobretudo no sudeste asitico, o vrus da dengue apresenta dois ciclos na
natureza: um ciclo silvestre que ocorre entre primatas no humanos, e deste pode eventualmente
chegar at o homem que tem contato com as florestas tropicais midas. Neste ciclo, os vetores
so os mosquitos Aedes albopictus, Aedes scutellaris e Aedes polynesiensis. O ciclo urbano
que ocorre entre humanos e tem como principal vetor o Aedes aegypti. Nesse ciclo, como o
mosquito tem vo de curto alcance, no ultrapassando os duzentos metros de distncia, a
disseminao da doena se faz de domiclio a domiclio, mas mesmo assim, espalha-se
rapidamente, atingindo grandes propores da populao susceptvel, principalmente na estao
chuvosa, quando o os ndices de infestao do mosquito so maiores, em virtude da maior
facilidade de reproduo do inseto. Como ainda no se dispe de vacina contra a dengue, a forma
mais eficaz de evitar essa doena, o combate ao inseto vetor, isto ao mosquito Aedes
aegypti, eliminando os focos de infestao, evitando-se as fontes de guas paradas que servem
como criadouros do inseto.
A forma mais eficaz de combate ao vetor a eliminao das larvas encontradas nas
guas estagnadas, utilizando-se inseticidas como: Temefs a 1% para o tratamento focal de
guas potveis e o Fenitrathion a 40% para as guas no potveis. Para eliminar as formas
aladas do mosquito, recomenda-se a pulverizao com o Fenitrathion G.T. a 95%. Essa ltima
forma de combate ao inseto, alm de ser menos eficiente, mais cara e atinge outros insetos,
alterando o equilbrio do ecossistema e ainda pode provocar reaes alrgicas em algumas
pessoas. No Brasil, o Aedes aegypti foi considerado extinto em 1955, mas, por relaxamento da
vigilncia sanitria, esse mosquito foi novamente introduzido no pas em 1967, mantendo-se at
hoje, sendo que nos ltimos anos, perdeu-se completamente o controle desse vetor, de forma que
a maioria dos Estados est infestada. Essa situao bastante preocupante, tendo em vista que
esse inseto no transmite apenas a dengue, mas tambm a febre amarela urbana. Para que haja
o controle eficaz do vetor, necessria a participao direta da populao na adoo de medidas

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sanitrias de combate ao mosquito a nvel domiciliar, fazendo-se a inspeo de caixas dgua,
tanques, vasos de plantas etc, o que se torna praticamente invivel sem a participao efetiva da
comunidade, tendo em vista que os focos de reproduo do mosquito esto dentro dos domiclios.
Febre amarela

1. Etiologia

O agente etiolgico da febre amarela um arbovrus do grupo B, classificado na


famlia Flaviviridae e no gnero Flavivrus, denominado vrus da febre amarela. Este apresenta
as mesmas caractersticas estruturais e propriedades biolgicas, bioqumicas e apresentam o
mesmo espectro de hospedeiro do vrus da dengue tendo em vista que eles pertencem mesma
famlia e mesmo gnero. A diferena bsica entre esses dois vrus, que o vrus da febre amarela
se apresenta com um nico tipo antignico, diferente dos quatro tipos antignicos existentes no
vrus da dengue e que a leso tecidual que ocorre na febre amarela, muito mais devido ao efeito
citoptico direto do vrus do que da resposta imune, tendo em vista que a reao inflamatria
bastante discreta na febre amarela. Outra diferena a existncia de uma nica viremia na febre
amarela e o maior tropismo do vrus em relao ao fgado, que se replica com maior intensidade
nas clulas parenquimatosas do fgado com a produo grnulos citoplasmticos que se coram
pela hematoxilina eosina os quais so chamados corpsculos de Councilman-Rocha Lima e a
ocorrncia de necrose do tipo hialina.

2. Patogenia e Patologia

A porta de entrada do vrus da febre amarela no organismo a pele, atravs da picada


da fmea do mosquito Aedes aegypti, no caso da febre amarela urbana, ou pela picada de
mosquitos dos gneros Haemagogus, Sabethes e Cloropterus, no caso da febre amarela
silvestre. A partir do ponto de inoculao na pele, o vrus atinge a corrente linftica e drenado
para os gnglios linfticos mais prximos, onde inicia sua replicao no interior de moncitos e
macrfagos. Em seguida, atinge a corrente sangnea, ocasionando uma viremia, durante a qual o
vrus se dissemina para vrios rgos, atingindo principalmente: fgado, bao, medula ssea, rins,
corao e linfonodos em geral, onde pode permanecer por vrios dias. As leses encontradas
nesses rgos, principalmente no fgado e nos rins, so decorrentes da replicao viral e se
caracterizam pela presena de degenerao e necrose, s vezes com hemorragia. Nas clulas
parenquimatosas do fgado do indivduo infectado, aparecem incluses citoplasmticas
denominadas corpsculos de Councilman-Rocha Lima, que uma caracterstica histolgica da
infeco por esse vrus. As leses mais distintivas ocorrem no fgado, onde se desenvolve uma
necrose do tipo hialina, principalmente na regio mdio-zonal, com preservao da arquitetura
bsica do fgado e sem a presena de reao inflamatria significativa. O local do organismo,

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onde mais freqente a ocorrncia de hemorragia a mucosa da extremidade pilrica do
estmago.

3. Manifestaes clnicas

A exemplo do que acontece com a dengue, a infeco pelo vrus da febre amarela,
pode ocorrer na forma inteiramente assintomtica, deixando uma imunidade duradoura. A doena
clinicamente aparente, quando ocorre, surge aps um perodo de incubao que varia de 3 a 6
dias e o quadro clnico nas formas graves da doena, se caracteriza por apresentar duas fases
evolutivas bem caracterizadas: a fase de infeco propriamente dita e a fase de intoxicao. A
forma mais branda apresenta apenas os sintomas caractersticos da fase de infeco
propriamente dita, tais como: febre alta, tonturas, dores musculares principalmente nas pernas e
no dorso, sinais de hepatite leve com hepatomegalia, geralmente sem ictercia, com vmitos
esverdeados, cefalia e calafrios. Esse perodo representa a fase em que o vrus se encontra no
sangue, isto , a fase de viremia, que corresponde aos 2 a 3 primeiros dias da doena. A segunda
fase que s bem caracterizada na forma grave da doena, tem incio por volta do quarto dia e o
indivduo apresenta freqncia de pulso com 90 a 100 batimentos por minuto, considerada lenta,
tendo em vista o estado febril em que se encontra o indivduo. Observa-se uma queda na
temperatura corprea do paciente, com sensao de alvio, mas em seguida, a temperatura volta
a se elevar e a febre vem acompanhada de sintomas decorrentes de uma grave intoxicao
hepato-renal, com manifestaes de ictercia, albuminria, hemorragia e vmitos negros, em
conseqncia da hemorragia digestiva. Nessa forma, a febre amarela apresenta um alto ndice de
letalidade.

4. Diagnstico laboratorial

O diagnstico laboratorial da febre amarela pode ser feito atravs de exame


histopatolgico ou por imunofluorescncia direta, a partir de bipsia heptica. No exame
histopatolgico, observa-se uma necrose do tipo hialina mdio-zonal, sem a presena de reao
inflamatria, enquanto que no citoplasma das clulas parenquimatosas do fgado so encontrados
os corpsculos de Councilman-Rocha Lima que durante muitos anos, foi mtodo laboratorial
utilizado para fazer o diagnstico da doena. O isolamento do vrus pode ser feito a partir do soro,
at o 5o dia aps o incio da infeco, fazendo-se a propagao do vrus em vrias linhagens de
clulas, mas de preferncia clulas de Aedes albopictus. O vrus tambm se propaga em ovos
embrionados de galinha e em animais de laboratrio. Em seguida, feita a identificao do vrus
atravs de teste de neutralizao ou utilizando-se anticorpos monoclonais especficos para
determinantes antignicos do vrus. Aps 10 dias do incio da doena, o diagnstico laboratorial
pode ser feito atravs de sorologia, pesquisando-se a presena de anticorpos da classe IgM

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especficos para o vrus, empregando-se o mtodo de ELISA ou Imunofluorescncia indireta, ou
atravs da sorologia pareada, onde se avalia a elevao do ttulo de anticorpos de duas amostras
de soro, uma coletada nos primeiros dias da doena e a segunda, com intervalo de 20 dias, aps
a primeira. Neste caso a infeco confirmada se o ttulo de anticorpos da segunda amostra de
soro, for pelo menos 4 vezes superior ao ttulo da primeira amostra. A vantagem desse mtodo
que ele pode ser realizado por Inibio da hemaglutinao, que uma tcnica de baixo custo,
ideal para ser utilizada nos pases subdesenvolvidos onde os recursos disponveis para a sade
so limitados.

5. Epidemiologia e controle

O vrus da febre amarela apresenta dois tipos de ciclo na natureza, que so bem
conhecidos: o ciclo silvestre ocorre fundamentalmente nas florestas tropicais midas, onde o vrus
circula entre os primatas no humanos, transmitindo-se entre estes animais, e eventualmente
destes para o homem, por meio de vetores artrpodes que so mosquitos dos gneros:
Haemagogus, Sabethes e Cloropterus, os quais habitam a copa das rvores nas florestas
tropicais e subtropicais, sendo que em toda a Amrica do Sul, predomina o gnero Haemagogus.
O homem adquire a infeco ao visitar as florestas onde existem mosquitos infectados. As
pessoas que esto mais expostas febre amarela silvestre so: aquelas adeptas do turismo
ecolgico, garimpeiros, militares em treinamento, apanhadores de castanha, seringueiros,
operrios que trabalham na construo de estradas na selva etc. que se infectam ao entrarem em
contato com esses mosquitos infectados. Se esse indivduo vem para a cidade e desenvolve a
doena, este caso deve ser notificado como febre amarela silvestre, pois foi adquirida no
ambiente silvestre. Quando nesse local existe o mosquito Aedes aegypti, ele pode se infectar ao
sugar o sangue desse indivduo, e aps um perodo de 12 a 14 que o perodo de incubao
extrnseca do vrus no organismo do inseto, passa a transmitir a doena para outros humanos que
vo desenvolver a febre amarela urbana, e partir dai se inicia o ciclo urbano da doena. Caso
semelhante pode ocorrer quando um primata no humano no qual a doena ocorre na forma
assintomtica trazido para os centros urbanos onde exista o mosquito Aedes aegypti.
No Brasil, a febre amarela continua sendo altamente endmica na regio Amaznica e
parte do Centro Oeste, com a ocorrncia de casos isolados da doena na forma silvestre em
todos as regies do pas. Mas, h muitos anos no so registrados casos da febre amarela
urbana, graas existncia de uma vacina feita com uma amostra do vrus atenuado
extremamente eficaz, que vem sendo administrada aos indivduos que vo viajar para as reas
endmicas e na vacinao de bloqueio, nos locais onde so registrados casos da febre amarela
silvestre. muito elevado o nmero de casos inaparentes da infeco, mas pode ocorrer caso de
extrema gravidade. Em geral a doena mais branda, nos lactente e nos indivduos da raa
negra. Para o controle eficaz da febre amarela, devem ser adotadas as mesmas medidas de

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combate ao mosquito Aedes aegypti, referidas para a dengue, empregando-se os mesmos
mtodos. No entanto ao contrrio do que ocorre com a dengue, para a febre amarela existe uma
medida profiltica bastante eficiente e de extrema importncia no controle da doena que a
aplicao de uma vacina chamada 17D, produzida no Brasil, feita com vrus atenuado que
apresenta uma excelente imunogenicidade, desencadeado uma reposta imune protetora por pelo
menos 10 aos. Essa amostra do vrus vacinal foi obtida a partir de uma cepa africana do vrus
chamada Asibi, que foi atenuada pela passagem em srie em cultura de clulas de embrio de
camundongos e depois adaptada para ovo embrionado de galinha. Atualmente, esta vacina
produzida em polpa de pinto, que uma cultura de clulas de embries de galinha, dos quais, foi
retirado o sistema nervoso central, para evitar problemas alrgicos que a vacina antiga
apresentava para algumas pessoas vacinadas. O vrus vacinal obtido dessa forma purificado e
liofilizado para se tornar mais estvel. Essa vacina recomendada para todos os indivduos que
vo viajar para as regies endmicas, e tambm na vacinao de bloqueio, quando
diagnosticado um caso de febre amarela silvestre nos centros urbanos. Recomenda-se a
vacinao de todos os indivduos que vo viajar para reas endmicas, 10 dias antes da viagem.
A vacina gratuita e est disponvel, nos portos aeroportos e estaes rodovirias de todo o pas,
alm dos postos de sade.

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Hepatites virais
Jos Verssimo Fernandes

Hepatite A

1. Etiologia:

O vrus da hepatite A (VHA) classificado na famlia Picoranaviridae, gnero


Heparnavrus, possui genoma de RNA de filamento nico de polaridade positiva com cauda poli-A
na extremidade 3e funciona como RNA mensageiro. Esse genoma encontra-se protegido por um
capsdio de simetria icosadrica sem a presena de envelope. A informao gentica do vrus
traduzida em uma nica poliprotena que em seguida clivada por enzimas proteolticas do vrus
para dar origem s vrias protenas virais, no havendo distino temporal na traduo de
protenas no estruturais e estruturais. A partir da poliprotena, so formadas inicialmente, trs
protenas estruturais, VP0, VP1 e VP3 que durante a replicao do genoma viral vo se reunir
para formar os pr-capsdios os quais incorporam as cpias do genoma viral. Quando isso ocorre,
a protena VP0 clivada dando origem s protenas VP2 e VP4 tornando o capsdio maturo e em
seguida as partculas virais so liberadas da clula por exocitose. Pelo fato de no possuir
envelope, esse vrus bastante resistente s condies ambientais, suportando variaes de
temperatura pH e salinidade, mantendo-se infectante por longos perodos no ambiente,
principalmente nos esgotos onde existem grandes quantidades de matria orgnica em
suspenso. A transmisso desse vrus se d atravs da via feco-oral, isto pela ingesto de gua
e alimentos contaminados. Este vrus no produz efeito citoptico na clula infectada, de forma
que a leso heptica decorrente de reao imunopatolgica desenvolvida pelo prprio
organismo.

2. Patogenia e patologia:
O vrus da hepatite A tem como porta de entrada do organismo, a boca atravs da
ingesto de gua e alimentos contaminados. O vrus se replica inicialmente no tecido linfide da
orofaringe como amgdalas e em seguida atinge o intestino delgado replicando-se nas placas de
Peyer, tecido linfide que reveste a mucosa do intestino, de onde alcana a circulao porta e
atravs da corrente sangnea transportado para o fgado onde se replica vagarosamente nas
clulas parnquima heptico, hepatcitos e clulas kupffer, sem causar efeito citoptico aparente.
Os vrus so produzidos nessas clulas e liberado na bile e da para as fezes, onde so
eliminados em grandes quantidades, mesmo no caos assintomticos. A replicao viral em si, no

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produz leso tecidual, tendo em vista que o vrus no citoltico, no entanto, as clulas hepticas
infectadas so reconhecidas como estranhas pelo organismo que em resposta ativa mecanismos
imunolgicos, principalmente envolvendo clulas NK e T citotxicas que resulta na destruio
dessas clulas causando leso heptica. Na bipsia heptica de um paciente com hepatite A,
observa-se uma reao inflamatria com infiltrao de linfcitos, degenerao espaa do
parnquima heptico, necrose de hepatcitos e hiperplasia das clulas de Kupffer. O grau de
disfuno, heptica depende da intensidade da reao inflamatria e das leses. Quanto maior for
o nmero de clulas lisadas maior a liberao das enzimas transaminases hepticas liberadas no
plasma, cujos nveis so proporcionais ao grau de inflamao do fgado. Quando ocorre disfuno
heptica significativa, a doena se manifesta com ictercia porque o metabolismo heptico torna-
se insuficiente para degradao da bilirrubina a qual permanece na circulao e em conseqncia
vai se depositar na pele e nas crneas, o que resulta em pigmentao amarela. Na maioria dos
casos, as leses se restringem a pequenas reas do fgado e o indivduo se recupera totalmente
dentro de 30 a 60 dias, sem haver cronificao.

3. Manifestaes clnicas:
A hepatite A apresenta um perodo de incubao que varia de 15 a 50 dias, com curso
de durao de 30 a 60 dias e pode ocorrer na forma assintomtica ou sintomtica com ou sem
ictercia. A forma assintomtica ocorre principalmente em crianas e embora no haja sintomas a
infeco produtiva com eliminao de vrus pelas fezes e estes pacientes transmitem a doena
com a mesma eficincia dos casos sintomticos. Na forma aparente os sintomas surgem
abruptamente, com febre alta, fadiga perda do apetite, nuseas, vmito, dor abdominal e pode ser
acompanhada ou no de ictercia. A ictercia caracteriza-se, pela pigmentao de cor amarela da
pele e das crneas do paciente, em virtude do excesso de bilirrubina no sangue que vai se
impregnar na pele e nas crneas dos olhos. A presena de ictercia depende do grau de leso
heptica e, portanto, s ocorre nos casos mais graves da hepatite. Nas crianas a maioria dos
casos sintomticos, 8 em cada 10 a doena se desenvolvem sem ictercia o que indica ausncia
de leso heptica significativa, enquanto que nos adultos, 2 em cada 3 ela vem acompanhada de
ictercia indicando maior gravidade das leses hepticas.

4. Diagnstico laboratorial:
O diagnstico laboratorial da hepatite A consta de exames inespecficos e especficos.
Os no especficos so: hemograma e teste bioqumicos destinados a avaliar o grau de leso
heptica e constam de dosagem de bilirrubina srica e das enzimas transaminases hepticas as
quais se encontra em nveis elevados e cujos valores so tanto maiores, quanto mais graves
forem as leses hepticas e, conseqentemente a disfuno do metabolismo heptico. Essas
alteraes podem ser avaliadas com base nas dosagens bioqmicas da bilirrubina srica e das

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enzimas transaminases hepticas. Destas, so pesquisadas de rotina a alaninaminotransferase
sria (ALT) e aspartatoaminotransferase srica (AST). Essas enzimas se encontram em nveis
muito elevados na presena de inflamao intensa, e medida que a inflamao heptica diminui
esses nveis vo sendo reduzidos e voltam normalidade aps a cura. O exame especfico consta
da pesquisa de anticorpos da classe IgM, especficos para o vrus da hepatite A. Partculas virais
tambm podem ser detectadas nas fezes atravs de mtodos imunolgicos, tais como ELISA,
imunofluorescncia indireta.

5. Epidemiologia:
A hepatite A uma doena de veiculao hdrica cuja incidncia maior nas crianas,
especialmente nos pases em desenvolvimento, onde as condies sanitrias so precrias. Uma
das principais fontes de infeco a gua no tratada que consumida pela populao,
principalmente das periferias das grandes cidades. Outra fonte importante de infeco so os
moluscos, especialmente mariscos, ostras e mexihes apanhados em guas contaminadas por
esgotos domsticos contendo fezes humanas, quando estas so ingeridas cruas. Em geral, os
surtos de Hepatite A tm origem em uma fonte comum com: gua de abastecimento, restaurantes,
creches, colnias de frias, acampamentos. O vrus se dissemina rapidamente na comunidade
tendo em vista que as pessoas infectadas passam a transmitirem o vrus cerca de 10 dias antes
de apresentar qualquer sintoma da doena. Alm disso, as crianas que muitas vezes
desenvolvem a infeco assintomtica, transmitem o vrus com a mesma eficincia dos casos
sintomticos. Nos pases em desenvolvimento a hepatite A endmica e ocorre em surtos
epidmicos, que atingem principalmente crianas e adolescentes. O grupo de maior risco so as
crianas que freqentam creches, colnias de frias, ou que se encontram em condies onde
existem aglomeraes e deficincias de saneamento, como acampamentos de refugiados e
desabrigados por catstrofes naturais.

6. Preveno e controle:
A preveno e controle da hepatite A envolvem medidas gerais de higiene e de sade
pblica, tais como: saneamento bsico, tratamento da gua de abastecimento as populaes
humanas, manipulao correta dos alimentos e isolamento dos indivduos infectados. Uma
medida importante o tratamento das fezes do doente com hipoclorito de sdio, antes de colocar
no vaso sanitrio. Esse tipo de tratamento visa inativao do vrus, o que reduz a quantidade de
vrus infectante que so jogados nos esgotos. Contudo, somente as condies sanitrias mesmo
que sejam ideais, no suficiente par impedir totalmente a ocorrncia da hepatite A, embora
diminua significativamente o nmero de casos. A medida mais eficiente a imunizao atravs da
utilizao de uma vacina feita com vrus inativado que recomendada para as crianas e aplicada

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por via intramuscular. Uma outra vacina feita com um mutante do vrus atenuado, de aplicao por
via oral, foi desenvolvida na China, mas de uso restrito a aquele pas.

Hepatite B

1. Etiologia:

A hepatite B uma doena que tem como agente etiolgico o vrus da hepatite B
(VHB), um vrus de genoma de DNA parcialmente duplo, com duplo capsdio de simetria
icosadrica, envolvido por um envelope. O envelope do VHB apresenta caractersticas bem
diferentes dos envelopes dos outro vrus, tendo em vista que a maior parte de seus constituintes
de protena, o que torna esses vrus, muito mais resistente aos agentes fsicos e qumicos,
quando comparados aos demais vrus envelopados. Esse vrus classificado na famlia
Hepadnaviridae e no gnero Orthohepadnavrus, e apresenta uma caracterstica peculiar que
se apresentar sob a forma de trs partculas fsicas distintas: uma partcula esfrica pequena
constituda apenas de protena medindo cerca de 22nm de dimetro, uma partcula tubular com o
mesmo dimetro, mas com comprimento de at 200nm, tambm constituda apenas de protena e
uma partcula esfrica grande, denominada partcula de Dane, medindo 42nm de dimetro,
contendo no seu interior o DNA genmico do vrus. A partcula de Dane a nica das trs, que
apresenta atividade infecciosa, e se apresenta constituda por um genoma de DNA circular,
parcialmente duplo filamentar, com aproximadamente 3.200 pares de bases, o qual juntamente
com a enzima DNA polimerase dependente de RNA, encontra-se envolvido por um capsdio duplo
de simetria icosadrica que representa o antgeno AgHBc, formando um nucleocapsdio de 27nm.
Alm disso, uma protena estreitamente relaciona ao AgHBc que encontrada na forma solvel,
denominada AgHBe tambm produzida. As protenas AgHBc e AgHBe so traduzidas a partir de
RNA mensageiros (RNA-m) estreitamente relacionados, mas com leituras iniciadas a partir de
cdons de iniciao diferentes, por isso, seus processamentos, suas estruturas e localizao tanto
no vrion quanto na clula so tambm distintos. O nucleocapsdio recoberto pelo envelope, de
natureza glicoprotica, que representa o antgeno de superfcie do vrus da hepatite B (AgHBs),
um dos marcadores sorolgicos mais importantes do vrus. Esse antgeno est presente no
apenas no envelope da partcula de Dane, mas tambm o constituinte das partculas no
infecciosas esfricas pequenas e das partculas tubulares.
O vrus se liga aos receptores do hepatcito atravs das glicoprotenas do envelope.
Aps a penetrao na clula heptica o capsdio quebrado e o genoma viral liberado no
citoplasma da clula, onde a enzima DNA polimerase do vrus faz a extenso da fita que falta um
pedao, tornando-a completa, e em seguida, as extremidades da molcula de DNA de dupla fita

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se ligam covalentemente tornando-se um DNA de dupla fita circular. Nessa forma o DNA viral
transportado para o ncleo da clula, onde vai ocorrer a transcrio a qual controlada por
elementos transcricionais da clula. No ncleo, o DNA viral transcrito dando origem a trs tipos
de RNA-m maiores (2.100, 2.400 e 3500 pares de bases, respectivamente) e um menor, de 900
pares de bases. O RNA-m de 3.500 pares de bases codifica as protenas que constituem os
antgenos AgHBc e AgHBe, um iniciador protico (primer), necessrio para a replicao do DNA
viral, uma DNA polimerase dependente de RNA (transcritase reversa), alm de funcionar como
RNA pr-genmico, servindo de molde para a sntese da fita de DNA de polaridade negativa, pela
ao da transcritase reversa. Essa fita de DNA vai ser utilizada como molde para sntese parcial
da fita positiva de DNA, pela ao DNA polimerase da prpria transcritase reversa. O RNA-m de
2.100 pares de bases codifica as glicoprotenas pequenas e mdias e o RNA-m de 2.400 pares de
bases codifica a protena grande as quais iro compor o antgeno AgHBs, constituinte do envelope
viral, e o m-RNA de 900 pares de bases codifica a protena X, que promove a replicao viral,
funcionando como fator ativador da transcrio, tanto dos genes virais como da prpria clula
hospedeira, alm de possuir atividade de protena quinase. Aps a transcrio no ncleo, os RNA-
m so transportados para o citoplasma, onde so traduzidos em suas respectivas protenas. No
citoplasma as protenas que compem o AgHBc vo se reunir para montar os capsdios, enquanto
que as protenas pequena, mdia e grande, que mais tarde iro formar o envelope viral, so
transportadas para o complexo de Golgi, onde so glicosiladas e permanecem at o brotamento
das partculas virais. A replicao do DNA viral tem incio, quando o RNA pr-genmico do VHB,
ao qual est ligado o iniciador protico, acondicionado no capsdio juntamente com a enzima,
DNA polimerase do vrus, a qual possui atividade de DNA polimerase dependente de RNA, isto
atividade de transcritase reversa, fazendo transcrio de RNA para DNA; de ribonuclease H
promovendo a degradao do RNA que serviu de molde para a sntese de uma fita de DNA (-) e
de DNA polimerase dependente de DNA, fazendo a sntese de uma fita complementar de DNA (+),
utilizando outra fita negativa como molde. Desta forma, a partir do RNA pr-genmico que
utilizado como molde, pela ao da transcritase reversa, sintetizada uma fita de DNA negativo,
tendo como ponto de partida, o iniciador protico. A seguir o RNA pr-genmico degradado pela
ao ribonuclease H, e tem incio sntese da fita de DNA positivo, utilizando a fita negativa
anteriormente sintetizada como molde. No entanto este processo de sntese da fita de DNA (+)
interrompido, ficando essa fita incompleta, de forma que o genoma do vrus formado por DNA
parcialmente duplo. Em seguida, os nucleocapsdios brotam das membranas do complexo de
Golgi, onde esto ancoradas as glicoprotenas do antgeno AgHBs que iro ser incorporadas para
formar o envelope tornando vrus completo. Os Vrions podem ser liberados do hepatcito por
exocitose, ou alternativamente, podem ser transportados de volta para o ncleo e iniciar outro
ciclo de replicao na mesma clula. Em algum momento da replicao, o DNA do VHB se integra
ao DNA da clula hospedeira, por um mecanismo ainda no conhecido. Existem evidncias, de
que esse processo de integrao do DNA viral ao genoma das clulas hepticas est

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estreitamente relacionado com a transformao maligna destas clulas, resultando em carcinoma
hepatocelular. DNA do VHB tem sido encontrado integrado ao genoma tanto na clula normal
como na transformada. O fenmeno de integrao freqentemente acompanhado por rearranjos
de genes virais e celulares, resultando em translocao, amplificao, deleo e outras alteraes
no material gentico da clula hospedeira, o que provavelmente, contribui para o processo de
transformao maligna da clula.
O vrus da hepatite B apresenta uma estrutura antignica complexa se comparada aos
outros vrus; por apresentar um conjunto de marcadores sorolgicos que podem ser pesquisados
com fins de diagnstico, para avaliao da evoluo da doena ou em estudos epidemiolgicos.
Esses marcadores so os seguintes: o antgeno de superfcie do vrus da hepatite B (AgHBs), o
antgeno de nucleocapsdio (AgHBc), o antgeno solvel (AgHBe), e seus respectivos anticorpos:
anti-HBs, anti-HBc e anti-HBe, alm da enzima DNA polimerase. O antgeno AgHBs, foi
encontrado pela primeira vez por Blumberg em 1965, em um aborgine na Austrlia, por isso foi
denominado originalmente de Antgeno Austrlia. Este antgeno est presente no envelope da
partcula de Dane, nas partculas esfricas pequenas e nas tubulares. A presena do AgHBs
indica infeco pelo vrus da hepatite B. Em uma infeco de evoluo no complicada, esse
marcador do vrus detectado at por volta do sexto ms, ou um pouco mais e em seguida
desaparece da circulao. A persistncia dele alm desse perodo, indica que a doena pode est
evoluindo para a forma crnica e esse marcador permanecer em nveis detectveis no soro
desse indivduo por tempo indeterminado, tornando-o um portador crnico do vrus. O antgeno de
nucleocapsdio AgHBc, formado por uma dupla camada de protenas, organizadas formando
uma estrutura com simetria icosadrica que representa o capsdio viral, o qual encontra-se
envolvida pelo envelope do vrus e por isso esse antgeno no pode reagir com o seu respectivo
anticorpo. Isto ocorre porque, antes da liberao das partculas virais ele est dentro da clula e
aps a liberao est protegido pelo envelope, de forma que o seu anticorpo especfico no tem
acesso para reagir com ele e por isso esse antgeno no pode ser detectado no soro do indivduo
com hepatite B. O antgeno solvel associado ao capsdio, o AgHBe uma protena que
sintetizada juntamente com as protenas estruturais do capsdio, mas aps sua sntese sofre a
ao proteoltica de enzimas, tornando-se solvel e assim liberada da partcula viral, por isso
pode ser detectada facilmente no soro do indivduo portador de infeco ativa pelo vrus da
hepatite B. A presena desse marcador indica que existe vrus em atividade de replicao. A
presena do AgHBe aps 4 meses de infeco indica uma possvel cronificao da doena. A
DNA-polimerase do vrus da hepatite B, a enzima responsvel pela replicao do genoma do
vrus para gerar novos vrions, por isso s estar presente se houver vrus em atividade de
replicao. Portanto, a pesquisa desse marcador oferece o mesmo tipo de informao que se
obtm atravs da pesquisa do antgeno AgHBe.
O marcador anti-HBs o anticorpo dirigido contra o antgeno AgHBs e se constitui
num indicador de cura e imunidade. Apesar de ser produzido ainda no primeiro ms da infeco,

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anti-HBs no detectado no soro do indivduo antes de completar o sexto ms de doena. Isto se
deve ao fato de que, como o organismo est produzindo simultaneamente o antgeno AgHBs e o
seu anticorpo anti-HBs, todo anticorpo que produzido vai se combinar com o antgeno que
induziu a sua formao, resultando em complexo antgeno anticorpo, o que impossibilita a
deteco desse anticorpo na sua forma livre no soro do indivduo durante a infeco ativa. O
marcador anti-HBc o anticorpo dirigido contra o antgeno AgHBc, produzido e detectado desde
o incio da infeco e permanece por tempo indeterminado. No incio da fase aguda, da infeco,
todos os anticorpos anti-HBc encontrados so da classe IgM, e medida que a infeco evolui,
esses anticorpos vo desaparecendo e sendo substitudos gradativamente por anticorpos da
classe IgG, os quais permanecem indefinidamente no soro do indivduo, mesmo aps a cura
completa. Dessa forma, a pesquisa de anticorpos anti-HBc IgM, serve para fazer o diagnstico da
infeco no incio da fase aguda, j a pesquisa do anti-HBc total no tem valor diagnstico,
porque a presena desses anticorpos no define se o indivduo tem infeco ou imunidade, mas
muito importante em estudos epidemiolgicos. O marcador anti-HBe, o anticorpo dirigido contra
o antgeno AgHBe, e da mesma forma que o anticorpo anti-HBs, ele s pode ser detectado no
soro, quando o seu respectivo antgeno deixar de ser produzido. Assim, nos casos em que a
doena evolui favoravelmente, esse marcador normalmente, no detectado a partir do quarto
ms de infeco, o que sugere evoluo para cura. A presena do Anti-HBe indica que no existe
infeco ativa, e que o sangue desse indivduo possui um baixo potencial infectante em virtude da
baixa carga viral porque o vrus no est se replicando ativamente. Portanto, as mulheres
grvidas portadoras crnicas do antgeno AgHBs, que so positivas para o marcador anti-HBe tm
uma pequena probabilidade de transmisso vertical do vrus da hepatite B para o seu concepto.
Se, no entanto, ela apresentar o marcador AgHbe, ao invs do seu anticorpo, existe um alto risco
dessa mulher transmitir o vrus da hepatite B para o feto, tanto pela via trans-placentria, como
durante a passagem do canal do parto e tambm pela amamentao.

2. Patogenia e Patologia:
O vrus da hepatite B tem como porta de entrada do organismo, a pele ou as mucosas,
atravs do contato direto com fluidos corporais contaminados com o vrus, ou pela introduo na
pele, atravs da penetrao tissular de equipamentos contaminados e durante certos
procedimentos tais como: injees, tratamento dentrio, transfuses, transplantes, tatuagens etc.
Aps penetrar na pele o VHB atinge a corrente sangnea, onde se liga a albumina e carreado
para o fgado, e vai se replicar nos hepatcitos, provocando uma inflamao aguda do rgo,
levando a um aumento do seu volume e acarretando alteraes de suas funes metablicas, as
quais podem ser avaliadas com base nos nveis das enzimas transaminases hepticas. No exame
histopatolgico de material de bipsia heptica observa-se uma degenerao espaa do

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parnquima heptico, necrose de hepatcitos, hiperplasia das clulas de Kupffer e um infiltrado
inflamatrio rico em clulas mononucleadas, principalmente linfcitos.
O vrus da hepatite B por si s, no produz efeito citoptico na clula infectada, no
entanto, essas clulas expressam protenas virais em suas membranas, tornando-se estranhas
para o organismo. O reconhecimento das clulas infectadas, como estranhas pelo sistema imune
do indivduo, desencadeia um processo imunopatolgico envolvendo principalmente, clulas
Natural Killer (NK) e linfcitos T citotxicos que resulta na destruio das clulas infectadas.
Dessa forma, quando o fgado afetado apenas em poucas reas, e o indivduo apresenta uma
resposta imune eficiente, todas as clulas infectadas so eliminadas juntamente com os vrus,
mas sem haver grandes prejuzos das funes hepticas. Nesse caso, o indivduo apresentar
sintomas evidentes, mas a doena se desenvolve apenas na fase aguda e a cura espontnea e
completa aps 6 meses. Se, no entanto, o fgado for afetado maciamente pelo vrus e o indivduo
apresentar uma resposta imune efetiva, ocorrer uma reao citotxica exacerbada que resultar
na destruio de grandes reas afetadas do rgo, com um significativo comprometimento de
suas funes, o que poder levar a um quadro de hepatite fulminante que pode ser fatal. Se, no
entanto, a resposta imune for falha, a reao do organismo pouco intensa e em conseqncia,
os sintomas podem ser discretos ou at mesmo imperceptveis. Contudo, nesses casos, no
ocorrer a destruio de todas as clulas infectadas fazendo com que, aps a fase aguda, que
dura em mdia 6 meses, desenvolva-se uma hepatite crnica, e o indivduo permanece como
portador do vrus por tempo indeterminado. Em alguns casos, os mecanismos de defesa do
organismo conseguem manter uma relao de equilbrio com o vrus, de modo que ele permanece
na clula, mas sem se replicar ou se replicando muito lentamente, caracterizando o estado de
portador assintomtico ou a forma de hepatite crnica no ativa. Em ambos os casos o indivduo
no apresentar sintomas ou disfuno heptica, mas o antgeno AgHBs estar presente no seu
sangue tornando-o um portador crnico da doena. Nos casos em que vrus continua se
replicando com baixa intensidade de forma que o rgo no apresentar leso significativa nem
sinais de disfuno heptica e, normalmente, no h elevao dos nveis das transaminases. Em
virtude de sua extraordinria capacidade de regenerao, nessa condio, o fgado repe quase
que de imediato, as clulas destrudas pelo sistema imune, evitando as leses. Neste caso, o
antgeno AgHBs detectado facilmente no soro e em outros lquidos corporais. Se, no entanto,
ao entrar na fase crnica, o vrus continuar se replicando com grande intensidade, como o fazia na
fase aguda da infeco, e o sistema imune prossegue destruindo as clulas infectadas, em
grandes quantidades, isto resultar em leses hepticas importantes, o que caracteriza a forma de
hepatite crnica ativa. Nesse caso, o indivduo apresentar sintomas de infeco com sinais de
disfuno heptica grave, com manifestao de ictercia e que geralmente evolui para formas
muito graves como: cirrose heptica ou hepatocarcinoma ambas de prognstico bastante sombrio.
A hepatite B na sua forma aguda apresenta como caractersticas principais: necrose
hepatocelular difusa e uniforme apresentando infiltrado inflamatrio rico em clulas

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mononucleadas, principalmente, linfcitos acompanhada de regenerao. As leses mais graves
localizam-se nas regies perivasculares e nos lbulos hepticos. Nessa forma da doena,
coexistem fenmenos degenerativos e regenerativos. A degenerao das clulas hepticas
predomina sobre a necrose, sendo de dois tipos bsicos: um que se apresenta com hepatcitos
inchados, com citoplasma finamente granular e eosinoflico, com destaque para um tipo de clula
chamada balonizada. O outro tipo de degenerao observado a formao de corpo acidfilo,
encontrado com maior freqncia nos casos leves e anictricos da doena. Quase que ao mesmo
tempo, instala-se o processo de regenerao dos hepatcitos, associado ao aumento dos ncleos
e poliploidia ao lado de bi, tri, e multinucleao caracterstica desse fenmeno. A reao
mesenquimal se caracteriza pela resposta das clulas inflamatrias aos fenmenos
degenerativos, com mais intensidade nas regies perivasculares. Observa-se ainda, hiperplasia e
hipertrofia das clulas de Kupffer, com atividade aumentada dos macrfagos fagocitando restos
celulares. Na hepatite crnica ativa observa-se uma inflamao do fgado, de natureza
progressiva acompanhada de alteraes degenerativas e necrose hepatocelular alm de fibrose
de intensidade varivel, chegando ao estgio final de cirrose em grande parte dos casos. A
presena de necrose piecemeal a caracterstica mais importante e a que melhor define o
processo patolgico. Esse tipo de leso se caracteriza pela destruio das clulas hepticas na
interface entre o tecido parenquimatoso e o conectivo, associado infiltrao linfoctria e, s
vezes, clulas plasmticas. A evoluo para a cirrose heptica depende de mltiplos fatores
intercorrentes, tais como: imunotolerncia ao vrus, resposta imune celular inadequada
persistncia viral, intensidade do processo degenerativo inicial e da capacidade regenerativa do
tecido heptico. Alm desses fatores, o desenvolvimento de cirrose tambm depende do grau de
formao de fibrose no curso da hepatite crnica.

3. Manifestaes clnicas:
A hepatite B apresenta um perodo de incubao que varia de 50 a 180 dias, e tem
incio insidioso, com sintomas discretos e variados, por vezes ausentes, sendo os mais comuns:
cefalia, febre, fadiga, mal-estar geral, nuseas, vmitos, dor abdominal e perda do apetite.
Algumas vezes esses sintomas so precedidos de urticria, com erupo cutnea e artrite.
Clinicamente, a hepatite B aguda pode variar de assintomtica a fulminante. A forma aguda pode
se apresentar com ou sem ictercia e na maioria dos pacientes (cerca de 90%) dos indivduos a
infeco ocorre na forma aguda, sem maiores complicaes, evoluindo para a cura espontnea.
Isto ocorre em virtude da eliminao de todas as clulas infectadas, pela ao das clulas NK e
dos linfcitos T citotxicos, alm da formao de anticorpos anti-HBs, protetores dirigidos contra o
antgeno de superfcie AgHBs os quais se ligam ao vrus impedindo que ele se ligue aos
receptores de outras clulas para infect-las. Dessa forma, o vrus vai sendo eliminado
gradativamente do organismo at que e o indivduo atinge a cura completa. De modo geral, a

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hepatite B uma doena autolimitada, podendo-se alcanar a cura completa basta se tomar
algumas medidas como: ficar em repouso, restringir a ingesto de gorduras, evitar bebidas
alcolicas e drogas que sejam metabolizadas no fgado.
A forma aguda colesttica apresenta ictercia com caracterstica de obstruo do ducto
da vescula biliar, clinicamente indicada, por fezes claras, intolerncia ingesto de gorduras,
vmitos, colria e prurido cutneo acentuado. Esta forma da doena difere da dos fenmenos
obstrutivos da fase inicial da hepatite, por apresentar ictercia profunda e curso mais prolongado,
podendo persistir por muitas semanas ou at seis meses. Os nveis das enzimas transaminases
hepticas podem se elevar a valores acima de 500 UI inicialmente, havendo queda e ascenso
progressiva das outras enzimas. A relao AST/ALT, menor que 1 na hepatite normal pode chegar
a valores acima de 10 na hepatite colesttica. Havendo ou no manifestaes de ictercia, a
hepatite aguda evolui, na maioria das vezes para a cura completa de forma espontnea e aps 6
meses o indivduo no tem mais o antgeno AgHBs no soro, mas tem o anti-HBs, isto o anticorpo
dirigido contra ele, indicando cura e imunidade.
A sndrome da insuficincia heptica fulminante, cuja causa a hepatite viral
fulminante, definida como sendo uma forma de hepatite que se desenvolve por causa da
necrose macia de clulas hepticas caracterizada por alteraes mentais graves e progressivas,
apresentado confuso mental, topor, coma e morte. Nesta forma da doena inclui-se pacientes
nos quais os sinais de insuficincia heptica fulminante aparecem dentro de oito semanas do
incio da infeco e sem evidncias de doena heptica prvia. A sndrome de hepatite fulminante
inclui tambm: distrbios renais, eletrolticos, de coagulao, hipoglicemia e desequilbrio cido-
base. A presena de sangramento e insuficincia renal geralmente, sinal de mau prognstico.
Um pequeno percentual, (cerca de 6 a 10%) das pessoas infectadas, os vrus no so
eliminados completamente, estabelecendo-se ento, a forma crnica da doena, na qual o vrus
pode persistir por tempo indeterminado. A hepatite crnica significa uma inflamao contnua do
fgado por um perodo no inferior a seis meses, que evoluiu a partir da infeco aguda. Com
base nas evidncias circunstanciais, parece que as formas agudas anictricas so mais
susceptveis a cronificao do que as formas ictricas. O processo de cronificao pode resultar
em trs tipos: a hepatite crnica no ativa, a hepatite persistente, que apresentam evoluo
geralmente benigna, e bom prognstico, e a hepatite crnica ativa que tem um carter evolutivo
progressivo, precursor de cirrose heptica e do carcinoma hepatocelular. A hepatite crnica no
ativa normalmente no h inflamao significativa e inteiramente assintomtica. Na forma
crnica persistente da doena ocorre inflamao contnua do fgado, de leve intensidade, que
pode persistir por meses ou anos, tornando esse indivduo um portador crnico e em geral a
disfuno heptica e os sintomas so discretos, podendo passar despercebidos. Essa forma
no-progressiva e de bom prognstico, sem tendncia evolutiva para cirrose heptica.
A hepatite crnica ativa a forma da doena, em que ocorre inflamao intensa e
contnua do fgado, caracterizada por sinais progressivos de necrose hepatocelular com potencial

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evolutivo para hipertenso portal, cirrose e insuficincia heptica grave. Existem formas
agressivas com rpida deteriorao hepatocelular, ou apresentaes de progresso lenta e at
mesmo com perodos assintomticos. Os exames laboratoriais variam desde completamente
normais a significativamente alterados. Em geral, quando a doena est em atividade, elevam-se
as transaminases, os nveis de gamaglobulinas, bilirrubinas, e fosfatase alcalina. O curso clnico
da doena extremamente varivel. Habitualmente, marcado por episdios recorrentes de
atividade da doena, com tendncia evolutiva para hipertenso portal e cirrose, ocorrendo bito
por coma heptico ou por uma complicao de hipertenso portal.

4. Diagnstico laboratorial:
O diagnstico laboratorial da hepatite B compreende trs tipos de abordagens
metodolgicas, onde em cada uma delas podem ser introduzidas variaes que visam o seu
aprimoramento, no que se refere sensibilidade, especificidade, simplicidade de execuo de
acordo com as condies disponveis, de forma a permitir a utilizao em larga escala, e ao
menor custo possvel. Essa trade de procedimentos laboratoriais abrange os seguintes aspectos:
pesquisa direta do vrus ou de seus componentes antignicos no soro ou nos tecidos, pesquisa
dos marcadores sorolgicos do vrus e a deteco da presena do genoma do vrus atravs de
mtodos moleculares. A pesquisa direta do vrus ou de seus componentes antgnicos feita
principalmente atravs de imunofluorescncia direta e indireta, pela colorao com
imunoperoxidase pela tcnica ABC (complexo avidina biotina marcado com peroxidase) e a
microscopia eletrnica. Essas tcnicas so utilizadas para analisar amostras de bipsias de
fgado, ou de soro, buscando detectar a presena de antgenos ou partculas associadas com o
vrus da hepatite B. Atravs dessas tcnicas foi possvel demonstrar que, no hepatcito infectado,
as partculas contendo o antgeno AgHBc se localizam principalmente no ncleo, enquanto que o
AgHBs encontrado exclusivamente no citoplasma. No entanto, o diagnstico laboratorial da
hepatite B, empregado de rotina, divide-se em duas etapas: uma que consta de exames
inespecficos que visam avaliar as funes hepticas atravs da anlise bioqumica com base na
dosagem de bilirrubina e das enzimas transaminases heptica: alanina aminotransferase srica
(ALT), aspartato aminotransferase srica (AST) e gamaglutamil transpeptidase (GGTP), alm da
dosagem de albumina e globulinas no soro. A outra abordagem que corresponde parte
especfica, consta da pesquisa dos marcadores sorolgicos do vrus no caso, o AgHBs ou do
anticorpo da classe IgM especfico para o antgeno do nucleocapsdio, o anti-HBc. O antgeno
AgHBs pode ser detectado no soro atravs das tcnicas de aglutinao de partculas de ltex
ligadas ao seu anticorpo especfico, atravs de hemaglutinao passiva reversa, onde se utiliza
um anticorpo para esse antgeno ligado a hemcias, imunofluorescncia indireta, e atravs do
ensaio imunoenzimtico (ELISA) e de radioimunoensaio. O anticorpo anti-HBc pesquisado no
soro por meio do ELISA ou de radioimunoensaio. Quando se deseja avaliar a evoluo da doena
ou para determinar o grau de infecciosidade do indivduo, faz-se a pesquisa do marcador AgHBe,

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atravs do ELISA, ou de radioimunoensaio. A presena desse marcador no soro indica que existe
vrus em atividade de replicao, isto , infeco ativa e que o sangue desse indivduo
altamente infectante. Se isto ocorre depois do quarto ms de infeco, indica que o indivduo est
evoluindo para a forma crnica. Se ao invs do AgHBe, o indivduo apresenta o seu anticorpo, o
anti-HBe, indica uma evoluo favorvel e baixa infecciosidade do sangue. Assim, quando
encontrado o AgHBe no sangue de mulheres gestantes, indica que essas pacientes tm grande
chance de transmitir o vrus para o feto, por via placentria, ou para o recm-nascido durante a
passagem pelo canal do parto. Se, no entanto, for encontrado o anit-HBe, pouco provvel que
ocorra a transmisso do vrus para o feto pela via transplacentria.

5. Epidemiologia
A hepatite viral do tipo B acompanha o homem h sculos, se constituindo hoje, em
um dos maiores problemas de sade pblica, em praticamente todos os continentes. A distribuio
dessa virose universal, sendo, no entanto, mais prevalente em reas tropicais e subtropicais,
principalmente nas regies menos desenvolvidas do mundo. A transmisso parenteral realiza-se
basicamente atravs de duas situaes: penetrao tissular de equipamentos contaminados,
durante certos procedimentos como injeo, tratamento dentrio, tatuagem; e por ocasio de
transfuses de sangue ou de hemoderivados contaminados com o vrus. Tambm pode ocorrer
contato acidental da pele ou mucosas com pequenas gotas de sangue ou outros fluidos orgnicos,
durante procedimentos tais como: intervenes cirrgicas, coletas de sangue, prticas
odontolgicas, imunizaes em massa, acupuntura, com agulhas contaminadas, e em acidentes
de laboratrio. Acredita-se que, o primeiro episdio registrado de transmisso parenteral do vrus
da hepatite B, tenha ocorrido cem anos atrs, em Bermem, na Alemanha quando, aps a
vacinao de 1300 estivadores contra a varola, verificou-se uma epidemia da ento chamada
hepatite catarral, hoje conhecida como hepatite B. O vrus fora veiculado pela vacina em cuja
preparao entrara material contaminado, provavelmente soro, oriundo de um portador crnico da
doena. A transmisso do vrus da hepatite B pode ocorrer tanto na forma horizontal, como na
vertical, da me para o filho pela via transplacentria, durante a passagem pelo canal do parto, e
atravs da amamentao. Outra importante forma de transmisso da doena atravs do contato
sexual. Embora seja mais rara, tambm j foi comprovada a transmisso da doena por insetos
hematfagos. O AgHBs j foi detectado em praticamente todos os fludos corporais, tendo sido
comprovada a sua presena em materiais orgnicos tais como: sangue e seus derivados, saliva,
smen, urina, leite materno, suor, lagrima, secrees nasofaringes e vaginais, alm das fezes.
Estudos realizados em laboratrios clnicos reforam o conceito de que a porta de entrada do
vrus da hepatite B consiste, muitas vezes, em micro-leses invisveis da pele e mucosas.
Estima-se que a hepatite B provoca cerca de dois milhes de mortes por ano no
mundo, sendo 600 mil por hepatite aguda, 400 mil por hepatite crnica, 300 mil por carcinoma

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hepatocelular e 700 mil por cirrose heptica. Nos Estados Unidos, cerca de 200 mil indivduos so
infectados a cada ano; e cerca de 200 morrem de hepatite aguda e de 12 a 20 mil ficam
cronicamente infectados, sendo que a percentagem de portadores crnicos na populao gira em
torno de 0,7%, o que equivale a um total de aproximadamente um milho de indivduos. No Brasil,
infelizmente no existem estudos sistematizados nem dados estatsticos confiveis que possam
nos oferecer informaes precisas sobre a prevalncia real da hepatite B. No entanto, estima-se
que a prevalncia de portadores crnicos do antgeno AgHBs, se situe entre 1 e 3% da populao
do pas como um todo, chegando a 15% na populao da Regio Norte, o que corresponde a um
contingente de aproximadamente 2,6 milhes de brasileiros portadores crnicos do vrus da
hepatite B. A doena encontra as condies propcias sua propagao, onde existem os fatores
ambientais e scio-ecnmicos que favorecem a promiscuidade social. As condies de vida de
certos grupos humanos os tornam mais expostos infeco, pelas precrias condies de higiene
e de educao sanitria. Outros, por circunstncias ou por adotar certas atitudes
comportamentais, tambm apresentam maiores riscos de contrarem a infeco. Por esta razo, a
hepatite B ocorre com maior freqncia em determinados grupos populacionais, tais como: renais
crnicos, hemoflicos, indivduos que fizeram mltiplas transfuses de sangue, as que tm
relacionamento sexual com mltiplos parceiros, homossexuais masculinos, prostitutas, viciados
em drogas injetveis, presidirios, alcolatras e indivduos com retardo mental, filhos de mes
portadoras do vrus e os profissionais da rea da sade. Esses grupos populacionais
considerados mais expostos ao VHB, so denominados grupos de risco.

6. Preveno e Controle
As medidas de preveno da hepatite B constam de um controle rigoroso nos bancos
de sangue e hemocentros, atravs obrigatoriedade da pesquisa do antgeno AgHBs e do anti-HBc
total, alm de outros marcadores do vrus, em todos os doadores de sangue. Utilizar sempre
seringas descartveis, esterilizao correta de instrumentos cirrgicos, uso de preservativo nas
relaes sexuais com parceiros desconhecidos e a recomendao do uso dos equipamentos de
proteo como: luvas mscaras culos e avental para quem trabalha na rea da sade e que
mantm contato direto com os pacientes ou com fluidos corporais destes. Alm dessas medidas, a
mais importante e que est disponvel atualmente a vacinao contra a hepatite B,
recomendada para a populao em geral, especialmente para as pessoas dos grupos de risco. A
vacina consiste de uma protena viral imunognica, derivada do antgeno AgHBs obtida atravs da
tecnologia do DNA recombinante. O gene que codifica essa protena viral foi clonado, inserido em
um plasmdio e introduzido em clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae, na qual o gene
passou a se expressar e a levedura adquiriu a capacidade de produzir essa protena do vrus da
hepatite B. O cultivo dessa levedura modificada geneticamente passou a ser feito em escala
industrial obtendo-se quantidade dessa protena suficiente para atender a demanda cada vez

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maior pela vacina e com custo relativamente baixo, tornando-a acessvel a amplos segmentos da
populao.

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Hepatite C

1. Etiologia

O genoma do vrus da hepatite C (VHC) foi detectado pela primeira vez em 1989, por
meio de tcnicas moleculares, em clulas hepticas de um chimpanz que havia sido inoculado
experimentalmente, com soro humano obtido de um portador de hepatite classificada na poca,
como no-A e no-B. A partir do RNA viral isolado, utilizando a tecnologia da clonagem, e da
tcnica de PCR com transcrio reversa, foi possvel produzir protenas especficas desse vrus
em larga escala, para utilizar como antgeno o que permitiu o rpido desenvolvimento de testes
laboratoriais capazes de diagnosticar a doena atravs da pesquisa de anticorpos dirigidos contra
estas protenas. Com a disponibilidade de kits comerciais para a deteco de anticorpos dirigidos
conta o VHC, no soro de portadores da infeco, em pouco tempo j se sabia que cerca de 90%
dos casos de hepatites ps-transfusionais eram causadas por esse patgeno. Atualmente, o vrus
da hepatite C considerado uma das principais causas de doena heptica crnica, com
possibilidade de evoluo para cirrose e cncer heptico, representando assim, um grave
problema de sade pblica. Estima-se que mais de 200 milhes de indivduos em todo o mundo,
estejam infectados pelo vrus da hepatite C, cuja prevalncia mundial varia de 1,0 a 6,0% da
populao, apresentando, no entanto, grandes diferenas na sua distribuio geogrfica. A
prevalncia da infeco maior em comunidades de pases em desenvolvimento, chegando em
torno de 4,0 a 6,0% em alguns grupos populacionais de regies da frica e Oriente Mdio. Nos
Estados Unidos, Europa e Japo a prevalncia da infeco apresenta ndices mdios ente 1,0 e
2,0%. No Brasil, os dados so ainda muito precrios, mas acredita-se que a prevalncia da
hepatite C seja em mdia, de 1,5%.
A comparao das seqncias genmicas de amostras isoladas em diferentes regies
geogrficas do mundo, revelou uma grande heterogeneidade gentica desse vrus, tendo sido
identificados seis gentipos distintos numerados de 1 a 6, alguns dos quais contm vrios
subtipos designados por letras minsculas como: a, b, c etc, alm de variaes dentro de cada
subtipo que resultam em quasiespecies. A infeco por diferentes gentipos do vrus resulta em
doena heptica com caractersticas clnicas distintas, e que respondem de forma diferente ao
tratamento. No Brasil, os gentipos mais encontrados so 1a e 1b.

2. Propriedades do vrus

O agente etiolgico da Hepatite C um vrus de genoma de RNA de filamento nico (+)


semelhante a um RNA mensageiro com aproximadamente 9.600 pares de bases, no apresenta a
seqncia poliadenilada e a estrutura do capsdio no visvel no interior do vrion. O envelope
viral contm espculas de glicoprotenas em sua superfcie, formando uma partcula de
aproximadamente 60nm. Com base nessas caractersticas, esse vrus foi classificado na famlia

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Flaviviridae e no gnero Hepacivrus, apresentando muitas semelhanas com os pestesvrus e
tem uma forte tendncia para estabelecer infeces persistentes no citolticas e, portanto, para
desenvolver infeco crnica. O genoma completo traduzido em uma nica poliprotena a qual
em seguida, clivada por proteases do vrus e da prpria clula para dar origem s diversas
protenas virais. Assim no existe distino temporal na traduo de protenas no estruturais e
estruturais. O genoma do VHC possui uma regio no traduzida (UTR), mas de grande
importncia para a transcrio e traduo dos genes virais. A extremidade 5 dessa regio contm
o stio de iniciao transcricional utilizado para sntese do RNA viral, bem como o stio de entrada
do ribossomo, necessrio para a iniciao da traduo do RNA mensageiro do vrus em uma
poliprotena, que aps ser processada por enzimas virais e celulares vai d origem s protenas
estruturais no estruturais do vrus. A extremidade 3 da regio UTR do genoma viral codifica a
parte da poliprotena que corresponde s protenas estruturais do vrus e est dividida em trs
partes distintas: uma seqncia hipervarivel de aproximadamente 48 pares de bases, uma
seqncia varivel rica poly-UC que na poliprotena correspondem s protenas do envelope e
uma regio altamente conservada de 98 pares de bases que corresponde a protena do capsdio
viral. Essa regio do genoma viral codifica as protenas estruturais que compem o
nucleocapsdio viral e as glicoprotenas E1 e E2 do envelope. O restante do genoma viral codifica
a parte da poliprotena com aproximadamente 3000 resduos de aminocidos que corresponde s
protenas no estruturais que aps ser processada por proteases do vrus e da prpria clula
hospedeira, resulta em pelo menos 10 protenas no estruturais, algumas das quais so
modificadas aps a traduo. Entre essas protenas no estruturais destacam (HS2-NS5b) que
esto envolvidas na replicao viral. As glicoprotenas E1 e E2 do envelope so componentes
chaves nos processos de aderncia do vrus ao receptor de superfcie da clula e de fuso do
envelope viral com a membrana da clula, eventos determinantes no processo de adsoro e
penetrao do vrus na clula. Duas molculas tm sido descritas como provveis receptores para
o vrus da hepatite C: CD81, uma protena trans-membrana, que interage com E2 e o receptor de
lipoprotenas de baixa densidade que se liga a um componente ainda no identificado do envelope
viral. A glicoprotena E2 contm uma regio hipervarivel que pode est envolvida na evaso do
vrus da resposta imune do hospedeiro. Entre os seis gentipos identificados existe uma diferena
de cerca de 30% na seqncia de nucleotdios, alguns dos quais contm vrios subtipos referidos
como 1a, 1b, 1c etc. Em estudos realizados no Brasil foi demonstrada a presena dos gentipos
1a e 1b, pelo sequenciamento direto dos produtos de PCR. Dentro de um mesmo gentipo e
subtipos, podemos ainda ter variao denominadas quasiespecies em virtude da replicao
imperfeita do RNA viral, acarretando o surgimento de pequenas e constantes mutaes no
genoma viral, especialmente nos genes que codificam as glicoprotenas do envelope. A maior ou
menor diversidade das quasiespecies, parece est relacionada com a presso imunolgica
exercida pelo organismo do individuo infectado, pois costuma ser pequena nas fases iniciais da
doena e maiores na doena mais avanada e/ou nos caso de baixa resposta teraputica.

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3. Patogenia e Patologia

As portas de entrada do vrus da hepatite C so a pele e mucosas, expostas a fluidos


corporais contaminados, e principalmente a inoculao por via parenteral. A concomitncia de
elevada carga viral, e ausncia de alteraes histolgicas e das enzimas transaminases
hepticas, sugere que o vrus no exerce efeito citoptico direto na clula infectada, e que a leso
tecidual parece ser o resultado de um processo de natureza imunopatolgica. Foi sugerido que a
necessidade de reparo contnuo do fgado e a induo do crescimento celular que ocorrem na
infeco crnica se constitui um fator predisponente ao carcinoma hepatocelular. Os mecanismos
responsveis pela persistncia viral, ainda no foram elucidados. Mas acredita-se que, a
existncia de quasiespecies e a grande capacidade mutagncia do vrus propiciem a ocorrncia
de modificaes antignicas e o constante escape do vrus em relao resposta imune do
hospedeiro, fazendo com que cerca de 85% dos indivduos infectados evoluam para a forma
crnica. A infeco crnica pelo VHC alm de evoluir lentamente, durante anos ou dcadas,
costuma apresentar um amplo espectro clnico variando desde a forma assintomtica com nveis
normais das transaminases hepticas, at a hepatite crnica intensamente ativa, levando a cirrose
heptica e hepatocarcinoma. Evidncias sugerem que as leses hepticas so mediadas por
mecanismos imunopatolgicos e que a qualidade da resposta imune do tipo celular desenvolvida
pelo hospedeiro, parece ser crucial para a eliminao ou persistncia do VHC. Acredita-se que
uma resposta imune celular do tipo Th1, que resulta na produo interleucina 2 interferon
gama e TNF , por parte do hospedeiro, seja mais efetiva contra o vrus, promovendo a
eliminao das clulas infectadas com resoluo completa, isto , cura. Por outro lado, a resposta
do tipo Th2 que resulta na produo interleucinas 4 e 10, e inibem a resposta do tipo Th1 seja
menos efetiva contra o vrus, favorecendo a sua persistncia no organismo, tendo em vista, no
apenas a incapacidade de eliminao do vrus, mas tambm pela maior gravidade da leso.
Porm, no so conhecidos ainda, os elementos que condicionam o desenvolvimento de um, ou
outro tipo de resposta imunolgica. Outro aspecto que tambm est sendo investigado a
interao entre protenas virais e do hospedeiro. Algumas protenas do VHC teriam capacidade de
ativar um sinal iniciador de processos celulares com proliferao, e diferenciao, alm de inibir
apoptose ao se ligar ao receptor do fator de necrose tumoral (TNFR), bem como, a ao do
interferon alfa ao se ligar protena quinase R (PKR). Foi demonstrado que a protena do
nucleocapsdio viral tem um potente sinal para iniciar alteraes celulares, o que parece levar a
desregulao do ciclo celular, resultando na proliferao descontroladas das clulas. O genoma
do VHC foi detectado em linfcitos e moncitos do sangue perifrico, nos quais foram detectados
filamentos de RNA (-), sugerindo replicao extra-heptica do vrus em clulas hematopoiticas,
influindo na sua patognese. Foi demonstrado ainda, que a protena CD81 que provavelmente
funciona como receptor para o HCV, est presente tanto nas clulas hepticas com nos linfcitos

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perifricos. A leso hepatocelular se faz pelo reconhecimento imunolgico da clula infectada e
sua destruio. A dinmica desse processo mostra-se extremamente varivel, de forma que as
reaes necrticas, e inflamatrias do fgado tenham diferentes intensidades. Acredita-se que o
processo inflamatrio contnuo e ineficiente, em termos de eliminao do vrus, se constitui no
principal fator responsvel pela fibrognese do tecido heptico. No entanto, como no existe uma
correlao direta entre o processo inflamatrio e a fibrognese, provvel que outros fatores
estejam envolvidos no desenvolvimento da fibrose heptica que o principal fator de progresso
da doena. Especula-se que, fatores relacionados ao vrus, como carga viral e gentipo poderiam
influenciar a evoluo da hepatite crnica pelo VHC. Contudo no existe consenso, pois os
resultados das pesquisas a esse respeito so conflitantes.
A progresso da leso heptica, da hepatite crnica para cirrose, pode ainda est
relacionada com fatores do hospedeiro tais como: estado imunolgico, sexo, idade, uso de lcool
ou concomitncia de infeco com outros vrus. No entanto, o mais importante dos fatores do
hospedeiro, parece ser o seu estado imunolgico. Assim, o indivduo que apresentar uma resposta
imune celular vigorosa, poder eliminar o vrus e curar da infeco, o que ocorre em cerca de 15%
dos casos durante a fase aguda, enquanto que nos pacientes, com resposta imune celular
deficiente infeco tende a evoluir para a forma crnica. Alm disso, nos indivduos
imunodeprimidos, a doena evolui mais rapidamente para cirrose e hepatocarcinoma, quando
comparados com os indivduos imunocompetentes. Fatores hormonais e genticos tambm
devem est implicados na patognese da hepatite C, sendo geralmente aceito que a doena
costuma progredir mais rapidamente no sexo masculino. A idade do indivduo ao adquirir a
infeco tambm se mostra relevante, apresentando pior prognstico, quando a infeco tem
incio aps os 40 anos. Alm disso, o consumo de lcool se constitui em um importante fator de
risco, para a progresso da hepatite C. Os mecanismos como isso se d, ainda no esto bem
elucidados, mas parece que envolve aumento da carga viral induzida pelo lcool, assim como a
leso mediada por mecanismos imunopatolgico e hepatotxicos.

4. Manifestaes clnicas:

O tempo de incubao da hepatite C varia de 1 a 13 meses, mdia de 8 meses. Uma


caracterstica marcante desse vrus a capacidade que ele tem de poder infectar o homem sem
causar sintomas, e essa infeco evolui na maioria das vezes, para a forma crnica assintomtica,
mantendo-se assim por muitos anos, sem que o indivduo se d conta de que portador do vrus
e que, alm de ser uma fonte de transmisso da doena, poder vir a desenvolver no futuro, um
quadro de insuficincia heptica grave, seguido de cirrose ou carcinoma hepatocelular, o que
ocorre em cerca de 25% dos casos. A infeco aguda pelo vrus da hepatite C dificilmente
diagnosticada, tendo em vista que grande parte dos casos ocorre na forma inteiramente
assintomtica, por isso esses indivduos so identificados, na sua maioria de forma ocasional, nos
bancos de sangue ou durante um exame de rotina. A infeco aguda pela HCV no usualmente

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detectada, exceto em estudos prospectivos atravs de dosagens seriadas das transaminases
hepticas em receptores de transfuses sanguneas, tendo em vista que os sintomas se
manifestam apenas em uma minoria, cerca de 25% dos casos, e o curso clnico quando
sintomtico, geralmente leve, podendo passar despercebido. O quadro clnico quando aparente,
apresenta caractersticas semelhantes s da hepatite B. Cerca de 10% dos pacientes tornam-se
ictricos e os nveis das transaminases hepticas se elevam de moderadamente at 15 vezes o
limite normal superior. Casos isolados de evoluo grave, isto a forma de hepatite fulminante j
foram relatados. Entre outras complicaes, pode ocorrer anemia aplstica, agranulocitose e
neuropatia perifrica.

5. Diagnstico laboratorial:

No indivduo infectado pelo VHC, dentro de 4 semanas aps o incio dos sintomas,
quando eles aparecem ou cerca de 12 semanas aps a contaminao, possvel detectar a
presena de anticorpos dirigidos contra as protenas estruturais e no estruturais do vrus, atravs
de um teste de ELISA. Utilizando-se o teste de terceira gerao para anlise de sangue em
doadores possvel identificar os portadores crnicos assintomticos do vrus e prevenir a
transmisso desse patgeno atravs da transfuso de sangue, na maioria dos casos. Entretanto,
em duas situaes esse teste poder no detectar a infeco assintomtica pelo vrus da hepatite
C em pacientes que demoram at 6 meses aps a infeco para desenvolver uma resposta
imune, quando o tempo mdio esperado para essa resposta de 12 semanas aps o contgio; e
em pacientes imunodeprimidos que ocasionalmente desenvolvem a infeco pelo VHC sem
produzir anticorpos em nveis detectveis. O diagnstico de rotina da hepatite C, apesar das
limitaes, baseia-se na deteco de anticorpos, anti-HCV por ELISA de terceira gerao. Esse
anticorpo est presente geralmente, dentro de 7 a 31 semanas aps o incio da infeco. Contudo,
nem sempre ele detectado em pacientes com viremia, sugerindo que esse tipo de ensaio pode
ser eficiente apenas para a identificao da doena crnica, mas no, na fase aguda. Pesquisas
mostram que, o teste de ELISA extremamente til para o diagnstico das hepatites crnicas,
especialmente nos pacientes com alteraes das transaminases hepticas e epidemiologia
sugestiva de infeco pelo VHC, no entanto no se mostra confivel para a deteco da doena
nas fases iniciais.
As tcnicas moleculares que permitem a deteco do RNA genmico do VHC no soro
do paciente so as formas mais confiveis para o diagnstico da doena. Embora menos
acessveis mais complexas e de custo mais elevado, tornam-se necessrios para a confirmao
do diagnstico. Alm disso, so particularmente teis para comprovar a presena de viremia nas
exposies recentes ao vrus, na fase inicial da hepatite aguda e na deteco da infeco nos
imunodeprimidos assim como em pacientes de risco com reatividade para anti-HCV com
transaminases normais, a PCR a tcnica mais indicada. Como o vrus possui genoma de RNA,

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necessria uma reao prvia de RT-PCR, na qual pela ao da enzima transcritase reversa
feita sntese de um cDNA a partir do RNA genmico do vrus em seguida, faz-se a amplificao
desse DNA atravs da tcnica tradicional de PCR. As determinaes quantitativas da carga viral e
a identificao do gentipo do vrus mostram-se extremamente teis antes de iniciar o tratamento.
Dada a sua maior sensibilidade, esta tcnica est sendo recomendada pela Organizao Mundial
de Sade, como mtodo de escolha para o controle do sangue nos hemocentros, como forma de
garantir a qualidade do sangue.

6. Epidemiologia e Controle:

A transmisso do VHC se d fundamentalmente pele contato da pele e mucosa ou pela


inoculao por via parenteral, de sangue e/ou derivados, sendo considerada pouco comum
transmisso por outros fluidos corporais. A maioria de infectados de indivduos que, de alguma
formam, foram expostos a sangue contaminado. A transmisso intrafamiliar at o momento no foi
comprovada. Por isso, acredita-se que a transmisso no meio familiar, a sexual e a transmisso
vertical da me para o filho, por via placentria sejam pouco freqentes, podendo ocorrer
particularmente, durante a passagem pelo canal do parto. Assim, esto em situao de alto-risco,
as pessoas que receberam transfuses de sangue antes de 1991; usurios de drogas injetveis;
hemoflicos; hemodializados; receptores de rgos ou tecidos por meio de transplante, e em
situao de mdio-risco, os indivduos submetidos acupuntura, tatuagens e/ou piercings
realizados com instrumentos no esterilizados e os profissionais da rea de sade, especialmente
os que manipulam sangue. Atualmente, o VHC a principal causa de hepatites ps-transfusionais,
em todo o mundo, representando assim, um grave problema de sade pblica. Estima-se que
cerca de 170 a 250 milhes de indivduos no mondo inteiro, sejam portadores desse vrus e que
mais de 75% deles desenvolvero infeco crnica que poder resultar em cirrose ou
hepatocarcinoma. Nos Estados Unidos estima-se que ocorra a cada ano, cerca de 150.000 novos
casos da doena, com aproximadamente 15.000 novos casos de cirrose heptica. Cerca de 8 a
10 mil pacientes morrem a cada ano, naquele pas em decorrncia de complicaes relacionadas
a hepatopatias crnicas pelo VHC e cerca de 1000 indivduos so submetidos a transplantes de
fgado, em virtude de deteriorao heptica provocada por esse patgeno. No Brasil, a
prevalncia da infeco pelo VHC estimada em 1,5% o que representa aproximadamente 2
milhes de pessoas infectadas por esse vrus em nosso pas. A hepatite C tem distribuio
mundial, porm a sua prevalncia maior em algumas regies geogrficas, como por exemplo: da
frica e do Oriente Mdio, sul da Itlia, Espanha e Japo. Acredita-se que de 0,5 a 1,5% dos
doadores de sangue em todo o mundo, sejam soropositivos para o VHC, o que faz desse
patgeno a principal causa de hepatite ps-transfusional. A transmisso se d fundamentalmente
pela via parenteral, sendo considerada pouco comum transmisso por outros fluidos corporais. A
maioria dos indivduos infectados de usurios de drogas endovenosas e receptores de

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transfuses de sangue e/ou derivados, bem como atravs da mucosa nasal irritada pela aspirao
de droga. O grupo dos toxicmanos o que apresenta maior risco para infeco pelo VHC em
todo o mundo. Na literatura so referidas taxas de soropositividade para esse vrus nesse grupo
que variam de 46 a 86%. Este tambm o grupo em que a profilaxia se torna mais difcil,
contribuindo para o aumento da incidncia da doena a cada ano. Outros grupos considerados de
alto risco so os hemoflicos que apresentam ndices de soropositividade variando de 64 a 82%, e
os pacientes em programas de hemodilise, nos quais esse ndice est em torno de 60%. Entre
outros fatores de risco de transmisso parenteral desse vrus, alm das transfuses se inclui
ainda, as tatuagens e os acidentes ocupacionais com agulhas contaminadas com sangue. A
ocorrncia de transmisso intrafamiliar at o momento, no est comprovada. Por isso, a
disseminao familiar, a sexual e a transmisso vertical da me para o filho, durante a gravidez
so consideradas pouco freqentes. Ainda existe uma porcentagem relativamente alta de
indivduos portadores do vrus que se admite, terem adquirido a infeco, possivelmente na
comunidade, no se encontrado, no entanto, evidncia do modo de transmisso. Enquanto no se
dispe de uma vacina, o que se pode fazer para o controle da hepatite C, adotar medidas de
preveno tais como: evitar o compartilhamento de seringas para o consumo de drogas ilcitas,
esterilizao adequada de instrumentos mdicos, odontolgicos e de acupuntura, utilizar os
equipamentos de proteo adequados, no caso dos profissionais de sade, e principalmente, um
rigoroso controle de qualidade do sangue e de seus derivados, que se constitui na principal fonte
de infeco.

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Sarampo

Jos Verssimo Fernandes

1. Etiologia

O vrus do sarampo classificado na famlia Paramyxoviridae, gnero Morbillivirus,


possui genoma de RNA de filamento nico com polaridade negativa, protegido por um capsdio de
simetria helicoidal e um envelope fosfolipdico no qual esto inseridas espculas de glicoprotenas
que se projetam na superfcie da partcula viral. O nucleocapsdio constitudo por um RNA (-)
associado nucleoprotena (NP) que ajuda a manter a estrutura genmica, Fosfoprotena (P) que
facilita a sntese de RNA e a protena grande (L) que corresponde enzima RNA polimerase do
vrus. O nucleocapsdio se associa protena da matriz (M) na base do envelope lipdico. O
envelope contm espculas de glicoprotenas as quais participam ativamente dos processos de
adsoro e penetrao do vrus na clula hospedeira. As espculas do vrus do sarampo so
classificadas em dois tipos de acordo com suas atividades. A hemaglutinina (HA) que est
diretamente relacionada com a fixao do vrus ao receptor CD46 que est presente na maioria
dos tipos celulares, e com a atividade hemaglutinante do vrus para hemcias de macaco. A
espcula fusognica (F) responsvel pela fuso do envelope do vrus com a membrana
citoplasmtica da clula hospedeira, permitindo a entrada do vrus na clula, bem como pela fuso
de clulas infectadas com clulas normais ocasionando a formao de sinccios que se constitui
no principal efeito citoptico do vrus do sarampo. A glicoprotena F parece ser conservada entre
os morbilivrus, enquanto que glicoprotena HA apresenta maior variabilidade. A glicoprotena F
sintetizada na forma de precursor inativo F0 que, para adquirir atividade biolgica precisa ser
clivada por uma protease extracelular, gerando duas subunidades, F1 e F2 sendo essa clivagem,
indispensvel para a penetrao do vrus na clula hospedeira. A glicoprotena HA tem a
propriedade de se ligar aos receptores de cido cilico de hemcias humanas ou de macaco,
promovendo a sua aglutinao e est diretamente envolvida no processo de infeco, pois a
inativao da atividade hemaglutinante do vrus resulta tambm na inativao de sua atividade
infecciosa, tendo em vista que atravs dela que o vrus se liga aos receptores da clula. O
envelope uma membrana com dupla camada lipdica derivada da membrana citoplasmtica da
clula hospedeira, constituindo-se um envoltrio bastante frgil, o que torna as partculas virais
muito lbeis s condies de armazenamento, fazendo com que os vrus seja relativamente
instvel aps a sua liberao das clulas e seja propenso distoro apresentada nas
microfotografias eletrnicas.
A RNA polimerase viral transportada para a clula hospedeira como parte do
nucleocapsdio e os processos de transcrio, traduo e a replicao do genoma viral ocorrem
no citoplasma da clula. O genoma viral transcrito em RNA mensageiros individuais, para cada
protena e um filamento RNA positivo do tamanho do genoma sintetizado e utilizado como molde

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para a replicao do genoma viral. As novas cpias do genoma viral se associam s protenas L,
NP e P para formar os novos nucleocapsdios e este se associam protena da matriz que se
encontra na base da membrana da clula, onde se encontra ancoradas as glicoprotenas virais
HA e F do envelope e a seguir, os vrinos maduros brotam da membrana plasmtica da clula
hospedeira. O vrus do sarampo pertence ao grupo dos Paramixovirus, mas no possui espculas
com atividade neuraminidase, os receptores das hemcias no so destrudos pela ao dessa
enzima e suas hemaglutininas reagem apenas com hemcias humanas do grupo O e de macaco
do Velho Mundo. O vrus no se elui espontaneamente das hemcias aglutinadas mesmo quando
a reao mantida em temperatura ambiente. Essas propriedades permitem diferenciar o vrus do
sarampo dos outros paramixovrus. A atividade infecciosa do vrus do sarampo prontamente
inativada pela luminosidade fortes, pH abaixo de 5, e pela ao de enzimas proteolticas. O vrus
s mantm sua atividade infecciosa em superfcies secas se for liofilizado, devido a isso, o vrus
do sarampo eliminado nos perdigotos atravs do indivduo infectado permanece vivel por pouco
tempo no ambiente. Alm disto, perde a sua atividade infecciosa quando mantido a 37 0C por um
perodo de 2 horas. O vrus do sarampo sensvel a pH cido, portanto, ele no atravessa o
estmago, e por isso o trato intestinal inferior no afetado, pois o vrus inativado pela ao do
suco gstrico. Esse fato confirmado pela ausncia do vrus nas fezes do indivduo infectado.
Com relao ao espectro de hospedeiro, em condies naturais o vrus do sarampo capaz de
infectar apenas o homem. A infeco experimental pode ser obtida em outros animais, e
propagao possvel em vrias clulas de mamferos e tambm de embries de galinha. Este
vrus apresenta como caracterstica de efeito citoptico, a fuso de clulas com a formao de
sinccio. O vrus pode ser propagado no saco aminitico ou na membrana corioalantide de
embrio de galinha, h ainda a estirpe que se propaga em clulas de crebro de camundongos
recm-nascidos. As clulas infectadas por esse vrus apresentam corpsculos de incluso
eosinoflicos no ncleo e no citoplasma.

2. Patogenia e Patologia

O vrus do sarampo tem como porta de entrada do organismo humano, as vias


respiratrias atravs do contato com perdigotos eliminados pelo doente principalmente durante um
acesso de tosse. Inicialmente o vrus se replica nas clulas epiteliais da nasofaringe e em seguida
drenado pela corrente linftica para os gnglios linfticos mais prximos. Durante essa fase de
replicao do vrus, as clulas epiteliais da mucosa respiratria e dos gnglios linfticos so
bastante danificados. A partir dos gnglios linfticos o vrus atinge a corrente sangunea,
provocando a primeira viremia, para depois atingir outros rgos, tais como: fgado bao, pulmo,
conjuntivas, linfonodos em geral, e outros rgos, inclusive o sistema nervoso central, onde o
vrus permanece na forma de infeco latente em algumas clulas, podendo ser reativado ou no
no futuro. Aps a replicao nesses rgos, o vrus volta a corrente sangnea resultando na

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segunda viremia e em seguida vai para o endotlio dos vasos perifricos resultando em edema
endotelial perivascular. Neste local, vai ocorrer uma reao envolvendo a participao de linfcitos
TCD8 resultando em pequenas leses nas paredes dos capilares levando ao extravasamento de
sangue para a pele determinando o aparecimento de um exantema maculopapular, caracterstico
da doena.
O processo de entrada do vrus na clula se d atravs da fuso do envelope do vrus
com a membrana da clula. O vrus se adsorve aos receptores de membrana da clula por meio
da glicoprotena HA e em seguida a glicoprotena F clivada por proteases extracelulares, dando
origem a duas subunidades, F1 e F2, sendo que a frao F1 apresenta uma poro amino
terminal que hidrofbica e determina sua atividade fusognica. A infeco s ocorrer se houver
a clivagem dessa glicoprotena que est diretamente relacionada com a entrada do genoma viral
na clula hospedeira. A replicao do vrus na clula resulta na formao de incluses que esto
presentes mais comumente no citoplasma, embora possam tambm ser, encontradas no ncleo
da clula infectada, as quais so constitudas por partculas virais incompletas. Durante a fase
aguda da doena, o vrus do sarampo se replica intensamente nas clulas mononucleadas,
principalmente moncitos e linfcitos e parece que estas clulas tm um papel importante na
disseminao do vrus pelo organismo por ocasio da viremia. Nos leuccitos o vrus do sarampo
pode induzir aberraes nos cromossomos e essas aberraes provavelmente esto relacionadas
com o inicio de leucemia em alguns casos. A propagao do vrus nos linfcitos provoca a morte
de grande parte das populaes dessas clulas, principalmente dos linfcitos T, resultando como
conseqncia uma imunossupresso da resposta imune do tipo celular durante o curso da fase
aguda da infeco.

3. Manifestaes Clnicas:

O perodo de incubao do sarampo varia de 10 a 12 dias podendo ser mais longo,


dependendo da idade do indivduo. A doena se desenvolve em duas fases: a fase prodrmica,
que dura de 2 a 4 dias e se caracteriza por sintomas comuns, como: coriza, tosse, espirros, dor de
garganta, febre, conjuntivite e apresenta um sinal caracterstico conhecido como manchas de
Koplik que aprecem na mucosa oral. As manchas de Koplik so ulceraes pequenas de
colorao branco-azuladas que aparecem na mucosa da boca, na posio oposta aos molares
inferiores; apresenta clulas gigantes, resultantes da fuso de clulas formando sinccios que
podem ser observadas atravs de tcnicas histolgicas e antgenos e nucleocapsdios virais que
podem ser detectados ela tcnica de imunofluorescncia. Nesta fase o vrus pode ser encontrado
na lagrima, na urina, no sangue, nas secrees nasais e da garganta, sendo nessa fase que
ocorre o perodo de maior transmissibilidade, embora a transmisso possa ocorrer desde o incio
dos prodromos at 4 dias aps o aparecimento do exantema.

76
A fase exantemtica caracteriza-se por uma intensificao dos sintomas no primeiro
dia em que aparece o exantema maculopapular havendo diminuio dos sintomas, logo em
seguida e se no houver complicaes o indivduo entrar em franca recuperao a partir do
segundo ou terceiro dia do exantema. O exantema maculopapular caracteriza-se por manchas
avermelhadas que surgem inicialmente atars das orelhas e em seguida espalham-se por todo o
corpo e tem um tempo de durao de cerca de uma semana. O exantema ocasionado por uma
reao de hipersensibilidade do tipo tardia, envolvendo a interao de clulas TCD8 com as
clulas das paredes dos pequenos vasos sangneos, infectadas pelo vrus do sarampo. Pessoas
com a imunidade celular debilitada, no apresentam erupo cutnea, pois esta reao no
ocorre com intensidade suficiente para provocar o aparecimento do exantema. Durante a fase
aguda da doena, ocorre uma queda da imunidade celular por um perodo transitrio, afetando
especialmente os linfcitos TCD4. Essa imunossupresso em um paciente com o trato respiratrio
inflamado em conseqncia da replicao do vrus aumenta a vulnerabilidade da mucosa
respiratria tornando o indivduo mais susceptvel a invaso por bactrias, particularmente
Streptococcus beta hemoltico, Staphylococcus aureus e o Haemophilus influenza. Devido a
essas infeces secundrias, o paciente pode apresentar quadros de bronquite, pneumonia e otite
mdia.
Apesar da alta morbidade, no havendo complicaes, especialmente as decorrentes
de infeces secundrias por bactrias, provavelmente a principal causa de morte no sarampo, se
o indivduo tiver boas condies nutricionais e no apresentar doenas subjacentes, o sarampo
uma doena de recuperao relativamente rpida com baixo ndice de mortalidade, e que deixa
imunidade permanente. Contudo pode alcanar ndices de mortalidade de 10% ou mais, em
circunstncias desfavorveis, tais como em crianas nos primeiros anos de vida que apresentam
elevado grau de subnutrio ou deficincia imunolgica. No entanto, em algumas situaes
podem ocorrer srias complicaes, notadamente em crianas com idade abaixo de cinco anos,
principalmente as desnutridas ou com deficincia de imunidade celular. Essas complicaes
podem ser de dois tipos: aquelas decorrentes da infeco viral e as resultantes de infeces
secundrias por bactrias. Entre as complicaes da infeco viral destacam-se: a pneumonia
viral tambm chamada de pneumonia de clulas gigantes caracterizada pela extensa fuso de
clulas do tecido pulmonar em conseqncia da intensa replicao viral, que se constitui num
quadro extremamente grave. Porm, as complicaes mais temidas so aquelas que afetam o
sistema nervoso central como a encefalite viral que ocorre quando o vrus se replica
intensamente no tecido nervoso. Nesses casos, o vrus encontrado facilmente no lquo e nas
clulas cerebrais do paciente, sendo extremamente graves, quase sempre fatal. a complicao
mais sria que pode ocorrer na infeco aguda e apresenta incidncia de 1 para 10 mil casos da
doena, a taxa de mortalidade de aproximadamente 10%, mas os sobreviventes permanecem
com seqelas fsicas e mentais na proporo de 15 a 65% dos casos. Entre as seqelas
encontradas destacam-se alterao da personalidade, reduo do potencial cognitivo,

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esquizofrenia e epilepsia. Tambm pode ocorrer uma encefalite chamada no infecciosa,
porque o vrus no detectado no lquo do indivduo, e que parece ser de natureza imunolgica e
mais benigna que a encefalite viral. Alm disso, uma complicao neurolgica tardia, pode se
manifestar vrios anos aps a infeco aguda pelo vrus do sarampo, resultando em um quadro
crnico degenerativo do sistema nervoso central. Essa patologia chamada panencefalite
esclerosante subaguda e resultado da reativao do vrus do sarampo que se encontrava na
forma latente nas clulas cerebrais do indivduo. Apesar do vrus reativado no chegar a
completar o seu ciclo de replicao, produzindo apenas algumas de suas protenas, o resultado
a degenerao do SNC com desmielinizao progressiva e irreversvel desse sistema, evoluindo
inapelavelmente para a morte. Nessa complicao, produtos virais como genoma e protenas com
exceo da protena da matriz, so encontrados no interior de clulas cerebrais, mas no so
encontradas partculas virais completas. Nas clulas cerebrais infectadas so encontradas
tambm incluses nucleares e citoplasmticas semelhantes quelas encontradas nas clulas da
mucosa respiratria durante a infeco aguda pelo vrus do sarampo. Os ttulos de anticorpos
contra o vrus do sarampo encontrados no lquo dos pacientes com essa patologia so
extremamente elevados.
Contudo, as complicaes mais freqentes no sarampo, so aquelas decorrentes de
infeces secundrias por bactrias entre elas pneumonia, broncopneumonia e otite media,
alm de reativao de tuberculose. Outra complicao comprovada a xeroftalmia ou cegueira,
isso ocorre em pacientes com deficincia grave de vitamina A, tendo em vista que durante a
infeco pelo vrus do sarampo, ocorre um aumento do consumo de vitamina A, de forma que as
reservas dessa vitamina so comprometidas levando a uma falta de retinol que pode resultar em
leses na retina. Foi demonstrado que a concentrao do retinol srico encontra-se mais baixa em
crianas com sarampo quando comparadas com crianas sadias. Alm disso, as baixas
concentraes de vitamina A esto associadas com a maior mortalidade pelo sarampo. Pesquisas
confirmaram que a baixa concentrao srica de retinol est diretamente relacionada com a maior
gravidade da infeco pelo vrus do sarampo e, conseqentemente um tratamento com vitamina A
pode reduz a taxa de mortalidade da doena.
O sarampo pode tambm se apresentar de forma atpica, em adultos jovens que na
infncia foram vacinados com vrus inativado. Na forma atpica, o sarampo no apresenta as
manchas de Koplik sendo caracterizado por pneumonite, edema dos membros inferiores, cefalia,
dor de garganta, coriza, tosse improdutiva, febre alta, mas a erupo cutnea incomum, essa
forma da doena, pode ser confundida com a febre maculosa das montanhas rochosas,
meningococcemia, escarlatina e at mesmo, varicela.

4. Diagnstico laboratorial:
O diagnstico laboratorial necessrio nos casos de sarampo atpico ou modificado.
No caso de sarampo tpico necessrio apenas o exame clnico para ser diagnosticado com

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preciso. No diagnstico laboratorial do sarampo so usados trs mtodos de estudo, que so: o
isolamento e propagao do vrus em cultura de clulas humanas ou de rim de macaco, sorologia
e o exame direto para deteco de partculas ou de antgenos virais nas secrees das vias
respiratrias, por meio de imunofluorescncia direta ou de microscopia eletrnica. As amostras de
sangue ou swab da nasofaringe, coletado no incio dos sintomas e nas mximas 24 horas aps a
erupo cutnea, so usados com a finalidade de isolar o vrus. O crescimento do vrus muito
lento e o seu efeito citoptico caracterizado pela presena de clulas gigantes multinucleadas
contendo corpsculos de incluso no ncleo e no citoplasma s vo se encontradas por volta do
stimo ao dcimo dia de cultivo.
O diagnstico sorolgico confirmado quando constatada a soro-converso, isto ,
quando se detecta uma elevao de pelo menos 4 vezes dos ttulos de anticorpos especficos
para o vrus no soro coletado na fase convalescente em relao ao da fase aguda, ou pela
presena de anticorpos IgM especficos para o sarampo, em apenas uma amostra de soro colhida
entre a primeira e a segunda semana aps a fase exantemtica. Para se verificar se houve ou no
uma infeco passada ou imunizao comum ser feito anlise do estado imune do indivduo,
atravs da pesquisa de anticorpos da classe IgG. Isso necessrio quando no se tem registro se
o indivduo teve ou no a infeco, na ausncia de registro de vacinao ou quando se deseja
documentar falhas no processo de imunizao. O teste direto que detecta o antgeno do sarampo
pelo mtodo de imunofluorescncia direta, em clulas descamadas da faringe ou sedimento
urinrio, em geral no disponvel. Uma forma alternativa de teste direto, no de deteco do
vrus, mas de visualizao do seu efeito citoptico, evidenciao de clulas gigantes nas clulas
descamadas das vias respiratrias superiores e no sedimento urinrio, essas clulas so
denominadas clulas de Warthin-Finkeldey e so visualizadas atravs de colorao pelo mtodo
Giemsa. Mais recentemente os mtodos moleculares, principalmente a reao da polimerase em
cadeia PCR, se constituem uma alternativa de diagnstico, altamente sensvel e especfica, mas
pouco utilizada, tendo em vista o seu alto custo, o que muitas vezes a torna invivel para uso de
rotina.

5. Epidemiologia:

O sarampo uma doena febril exantemtica, altamente contagiosa, transmitida


atravs de secrees das vias respiratrias e por fomites. O perodo de maior transmissibilidade
da doena, dura aproximadamente 7 dias estendendo-se desde os primeiros dias de prodromos
at 4 dias aps o aparecimento do exantema. A fonte de infeco o prprio homem, no
existindo reservatrio animal. Existe apenas um nico sorotipo do vrus, de forma que a infeco
aguda s ocorre uma vez e quase sempre na forma sintomticas. Algumas vezes o sarampo pode
apresentar um quadro de pouca expresso clnica, mas isto um evento raro. A infeco pelo
vrus do sarampo predomina na infncia, e a imunidade adquirida permanente. O sarampo tem

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distribuio universal e apesar de no existir predisposio racial ou de sexo, parece haver maior
incidncia de complicaes em indivduos do sexo masculino. A doena endmica no mundo
todo, ocorrendo casos isolados permanentemente, e epidemias cclicas em intervalos regulares de
2 ou 3 anos. O fator determinante para este perfil epidemiolgico da doena o estado de
imunidade da populao, sendo necessrio o acmulo de crianas susceptveis para a ocorrncia
desses surtos epidmicos cclicos. Para que o vrus se mantenha em uma comunidade,
necessrio o suprimento contnuo de indivduos susceptveis, sendo necessrio uma populao
de cerca de 500 mil pessoas para manter o sarampo como doena endmica. Em comunidades
menores, o vrus desaparece at ser re-introduzido aps o acmulo de um grande nmero de
pessoas no imunes. A prevalncia e a incidncia etria do sarampo esto diretamente
relacionadas com fatores ambientais, scio-econmicos e densidade populacional, alm do nvel
de cobertura vacinal com o vrus atenuado.
Nos pases desenvolvidos, a vacinao em massa com o vrus atenuado que vem
sendo feita desde de 1963, permitiu reduzir drasticamente a incidncia do sarampo estando
atualmente sob controle e caminhando para a erradicao. Nos pases subdesenvolvidos e em
desenvolvimento, o sarampo ainda considerado um grave problema de sade pblica,
apresentando uma elevada incidncia entre crianas com at dois anos de idade, uma faixa etria
de alto risco, principalmente em crianas desnutridas. Vrios fatores influenciam na faixa etria na
qual o sarampo contrado, o tamanho da famlia e o nvel scio-econmico exercem clara
influncia. As famlias numerosas e que vivem aglomeradas em habitaes precrias, as crianas
geralmente se infectam mais cedo, com freqncia, ainda durante o primeiro ano de vida, o que
se constitui em um fator de risco, pois nessa faixa etria o sarampo costuma ser grave. O vrus do
sarampo se replica em todos os tecidos do corpo, no entanto, as clulas epiteliais da mucosa do
trato respiratrio, superior se constituem na principal fonte de disseminao do vrus de um
indivduo para outro.
O estado de desnutrio contribui de forma decisiva para um aumento significativo da
freqncia de complicaes e de mortalidade. Estudo realizado no Estado de So Paulo, no
perodo de 1974 a 1980 revelou uma mdia anual de 9.141 internamentos motivados pelo
sarampo, dos quais 28,8% das crianas tinham menos de um ano de idade. Nesse mesmo
perodo, foi registrada uma mdia anual de 2.729 mortes em todo o Brasil atribudas ao sarampo,
sendo que 41,6% desses bitos ocorreram em crianas com menos de um ano de idade. As
epidemias de sarampo ocorrem durante o inverno e a primavera nas zonas rurais. Nas reas
urbanas praticamente endmico, com a ocorrncia de casos da doena em qualquer poca do
ano. O ciclo de cada epidemia ocorre a cada dois a trs anos, prevalecendo o fato de haver
acmulo de crianas no imunizadas. Se o vrus for introduzido em reas no endmicas, onde a
exposio ao vrus rara e se nessas reas no existia casos de sarampo h muito tempo, vai
ocorrer rapidamente uma epidemia de grandes propores acometendo todas as faixas etrias,
sendo mais grave e at fatal para as crianas muito pequenas e tambm para os idosos. O ciclo

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das epidemias varia para cada regio, por exemplo: Nos Estados Unidos, o sarampo alcana seu
ponto mximo nos meses de maro e abril, j nas regies de clima temperado ocorrem casos de
sarampo durante todo o ano, e as epidemias tendem a ocorrer no final do inverno e no incio da
primavera.
6. Preveno e Controle:

A nica forma eficaz de controle do sarampo a vacinao. A introduo da vacina


feita com vrus atenuado em 1963 trouxe bons resultados de imediato, diminuindo
consideravelmente a incidncia da doena nos Estados Unidos. O vrus atenuado no causa
complicaes neurolgicas nem a transmisso a pessoas suscetveis da mesma famlia. A
induo da resposta imune com produo de anticorpos protetores de quase 100%, quando a
vacina aplicada nas condies ideais. Em 15 a 25% das crianas vacinadas ocorre produo de
febre e o exantema aparece em 10 a 15% dos casos, mas trata-se de um quadro benigno, sem
qualquer complicao. A eficcia da vacina de vrus atenuado de mais de 95% em condies
normais. Estudos revelam que dois anos aps a imunizao, no h declnio dos anticorpos
neutralizantes, mas em cinco anos eles diminuem duas a trs vezes. Quanto aos anticorpos
fixadores de complemento, eles diminuem entre seis e oito meses aps a vacinao. O insucesso
da vacina com vrus atenuado que s vezes observado, atribudo inativao da vacina seja por
estocagem em temperatura inadequada ou pela exposio luz, ou ainda a sua administrao a
lactentes com anticorpos maternos residuais. Como o vrus do sarampo muito sensvel a vacina
deve ser mantida sempre em temperaturas de no mximo 4 oC e protegida da luz. Alm disso,
como para induzir uma boa resposta imune o vrus vacinal precisa se replicar no organismo do
indivduo vacinado, esta vacina tambm pode apresentar falhas em conseqncia da interferncia
direta de outros vrus, no caso do individuo vacinado est com uma virose, ou ainda de forma
indireta pela ao do interferon que o indivduo produz durante essa virose.
No caso de lactentes, a vacinao contra o sarampo deve ser adiada se possvel at o
desaparecimento dos anticorpos maternos residuais, o que em alguns pases se d por volta dos
13 a 15 meses de vida. No entanto, outros pases, principalmente os em desenvolvimento a
perdas desses anticorpos maternos pode ocorrer j aos 6 meses de idade, fazendo com que
essas crianas adquiram o sarampo ainda no primeiro ano de vida, quando a doena muito mais
grave, especialmente em pacientes subnutridos. A idade em que as crianas perdem os
anticorpos maternos muito varivel de regio para regio dentro de um mesmo pas, o que
dificulta enormemente a definio da idade exata para vacinao dessas crianas contra o
sarampo. Nos pases desenvolvidos onde a incidncia do sarampo no primeiro ano de vida
baixa, adotou-se como regra esperar a criana completar 1 ano e 5 meses de vida, idade na qual
no h mais resduos de anticorpos maternos. Este procedimento no deve ser adotado nos
pases em desenvolvimento, pois existe um nmero significativo de crianas que adquirem a
doena inda no primeiro ano de vida.

81
Nos pases subdesenvolvidos ou em desenvolvimento, a idade tima para vacinao
contra o sarampo, tem sido motivo de muitas controvrsias, principalmente naqueles onde a taxa
de mortalidade pela doena alta j no primeiro ano de vida. Embora a vacinao antes do
primeiro ano de vida no seja recomendada nos pases desenvolvidos que apresentam baixos
ndices de mortalidade por sarampo, esta medida no era adotada pelo Brasil, onde a prevalncia
de sarampo durante o primeiro ano de vida era considerada muito alta. Diante desse fato, o
Ministrio da Sade do Brasil, estabeleceu que a vacinao contra o sarampo deveria ser feita em
duas doses, sendo a primeira a partir do nono ms de vida, com uma dose de reforo aos 15
meses de idade. Recentemente, considerando que o sarampo est sob controle no pas, o
governo brasileiro passou a adotar como regra para vacinao contra o sarampo, a partir de 2003,
uma nica dose administrada aos 11 meses de vida.
A Organizao Mundial de Sade (OMS) recomenda que todas as crianas sejam
vacinadas, com exceo das que estejam internadas com debilidade geral na sade. Outros
casos de contra indicao da vacina so: gestantes e pessoas com doenas febris, com alergia a
protenas de ovo de galinha e com imunodeficincia. No entanto, a idade ideal para a vacinao
contra o sarampo continua sendo um fator importante a ser considerado para que se obtenha
sucesso na imunizao contra a doena.

82
Papilomatoses Humanas

Jos Verssimo Fernandes


1. Etiologia

1.1 - Propriedades do vrus


Os Papilomavrus humanos (HPV), constituem um grande grupo de pequenos vrus de
genoma de DNA de filamento duplo circular, com aproximadamente 8.000 pares de bases,
envolvido por um capsdio de simetria icosadrica, constitudo por 72 capsmeros, sem a
presena de envelope, apresentando-se como partculas de aproximadamente 55 nm. O genoma
desse vrus constitudo de trs partes: uma regio no codificante, LCR (long control region),
uma regio precoce, E (de early) e uma tardia L (de late). A regio LCR corresponde cerca 10%
do genoma, e nos HPV genitais varia de tamanho, apresentando entre 800 a 900 pares de bases
e com variao substancial na seqncia de nucleotdeos entre tipos individuais do vrus. Nela
encontra-se a origem de replicao viral e elementos transcricionais responsivos que regulam a
expresso dos genes virais, e seqncias semelhantes ao elemento responsivo a glicocorticides,
incluindo os hormnios progesterona e progestinas. A regio precoce composta de seis genes e
est envolvida na replicao do DNA, na persistncia viral, e na ativao do ciclo ltico. Estudos
bioqumicos e funcionais da regio precoce revelam que seus principais genes so:
O gene E1 que codifica uma fosfoprotena nuclear de 68 kDa, bastante conservadas
entre os diferentes tipos de HPV, a qual se liga especificamente na origem de replicao viral e
apresenta atividades ATPase e helicase ATP-dependente. Alm disso, interage com a DNA
polimerase celular sendo, portanto, essencial no processo de replicao do DNA viral. A funo
reguladora dessa protena parece ser, controlar a transcrio de outros genes virais, tendo em
vista que a mutao do gene E1 resulta em aumento dos nveis de transcrio viral e o
correspondente aumento da atividade de transformante do vrus. O gene E2 codifica pelo menos
duas, e provavelmente trs protenas diferentes, com stios ligantes para DNA, todas elas atuando
como fatores de transcrio. Essas protenas podem apresentar funo trans-ativadora ou
repressora, dependendo do contexto em que seus stios ligantes interagem com a regio
promotora do vrus. Assim, elas afetam de forma diferente a expresso dos genes virais e
representam os principais reguladores intragenmicos do vrus. Alm disso, elas formam
complexos com E1 que responsvel pela replicao do DNA viral, aparentemente facilitando a
ligao dessa protena origem de replicao viral. A interao dos produtos do gene E2 com
stios ligantes da regio LCR do genoma viral, resulta na modulao da atividade promotora,
podendo levar a represso da expresso de outros genes da regio precoce. O gene E4 codifica
uma protena cujo papel no ciclo do vrus, ainda no foi determinado. Ela no requerida para a
transformao ou persistncia epissomal do DNA viral. Esta protena encontrada exclusivamente
nas clulas das camadas mais diferenciadas do epitlio, podendo ter algum papel na criao de

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condies na clula infectada, favorveis para maturao das partculas virais. Em culturas de
clulas, a protena E4 do HPV16 induz colapso da rede de citoqueratina, indicando que essa
protena pode est envolvida com a desestabilizao desta rede na clula infectada. O gene E5
codifica uma pequena protena hidrofbica encontrada principalmente no complexo de Golgi, ou
ligada membrana citoplasmtica da clula infectada, ou formando complexo com uma variedade
de protenas trans-membrana, e est envolvida com a estimulao do crescimento e
transformao da clula.Tem sido demonstrado que essa protena apresenta atividade sinrgica
com o fator de crescimento epidermal (EGF) na estimulao da proliferao de clulas epiteliais.
Alm disso, a protena E5 funciona como um regulador negativo do MHC de classe I, interferindo
na expresso reunio e transporte dessa molcula para a membrana da clula durante a infeco,
facilitando assim a evaso do vrus da resposta imune e o estabelecimento de infeco produtiva.
Apesar de ser a principal protena transformante dos papilomavrus bovinos, nos papilomavrus
humanos a sua atividade transformante muito fraca, parecendo ser importante nos passos
iniciais da infeco, mas dispensvel para a transformao maligna.
O gene E6 codifica uma oncoprotena com 151 aminocidos capaz de se ligar p53,
uma protena celular supressora de tumor, induzindo sua rpida degradao proteoltica via
sistema ubiquitina. A protena p53 um ativador transcricional que se liga a seqncias
especficas do DNA da clula, promovendo uma parada no ciclo celular na fase G1, para que haja
um tempo destinado ao reparo de possveis danos ocorridos na estrutura primria dessa
molcula, antes de sua duplicao. Se havia dano na molcula de DNA, e esse mecanismo por
algum motivo deixou de repar-lo, a protena p53 ativar na clula, outro tipo de mecanismo que
resultar na sua morte por apoptose. Uma funo importante da protena E6 do HPV a sua
atividade antiapopttica que impede a ocorrncia desse mecanismo de eliminao de clulas que
apresentem alteraes no DNA e que escaparam do controle existente na passagem da fase G1
para S do ciclo celular. Esse efeito pode ser inicialmente devido degradao de p53 mediada por
E6, mas tambm via degradao de outras protenas envolvidas com apoptose, entre elas Bak,
um membro da famlia Bcl-2. Alm disso, E6 capaz de atuar diretamente sobre a ativao das
telomerases da clula hospedeira, fazendo com que essas enzimas exeram suas funes, alm
do tempo que estava programado, impedindo assim, o envelhecimento natural das clulas, bem
com a sua morte, tornando imortais as clulas infectadas por certos tipos de HPV. A ativao
transcricional induzida por p53 em clulas que sofreram algum tipo de dano no seu DNA inibida
pela ao da protena E6 dos HPV de alto potencial oncognico, e esta interao entre E6 e p53
a primeira causa da instabilidade cromossmica que ocorre em clulas infectadas por esses vrus,
resultando no acmulo de mutaes e aneuploidias, freqentemente observadas em leses
neoplsicas de alto grau. Estudos bioqumicos analisando a ligao de E6 a p53 levaram a
identificao de uma protena celular de 100 kDa, que necessria para formao do complexo
de E6 com p53, a qual foi designada protena associada a E6 (E6-AP). Foi demonstrado que essa

84
protena requerida tanto para a ligao de E6 a p53 como para a ubiquitinao e degradao de
p53 mediada por E6.
O gene E7 codifica uma fosfoprotena nuclear de aproximadamente 21kDa, que
extremamente conservada entre os diversos tipos do vrus. Essa protena apresenta similaridade
com a protena E6, sugerindo uma relao evolutiva comum dessas duas oncoprotenas virais. As
regies conservadas de E7 esto envolvidas com ligao dessa oncoprotena viral a protenas
celulares entre elas pRB, uma protena celular de aproximadamente 105kDa, que produto do
gene de susceptibilidade ao retinoblastoma, e tem um importante papel na supresso de tumor
em clulas humanas. A atividade supressora de tumor de pRB, depende do seu estado de
fosforilao, o qual regulado durante o ciclo celular. Nas fases G0 e G1, pRB encontra-se na
forma hipofosforilada, na qual atua como regulador negativo do ciclo celular, torna-se fosforilada
em seus mltiplos resduos de serina, pela ao de uma ou mais quinases dependente de ciclina,
durante a transio da fase G1 para S e hiperfosforilada durante as fases S, G2 e incio da fase M.
A protena E7 dos HPVs de alto risco se liga preferencialmente a pRB, na forma hipofosforilada,
promovendo a sua fosforilao e conseqentemente, a inativao da funo reguladora dessa
protena sob o ciclo celular, permitindo a progresso da fase G1 para S. Em condies normais,
na fase G1 do ciclo celular, pRB e uma outra protena celular, p107 encontram-se formando
complexo com E2F, uma famlia de fatores de transcrio envolvidos na ativao de genes cujos
produtos so necessrios progresso do ciclo celular da fase G1 para S, o que determina uma
parada do ciclo na fase G1. A protena E7 dos HPV de alto risco interage com as protenas pRB e
p107, desfazendo o complexo de ambas protenas com E2F, liberando essa famlia de fatores de
transcrio que por sua vez, vo promover a ativao dos genes reguladores da proliferao
celular. A afinidade de ligao de E7 dos HPV de alto risco protena pRB aproximadamente 10
vezes maior quando comparada com E7 dos HPVs de baixo risco. Na ausncia de pRB na forma
ativa, a clula perde os mecanismos reguladores que determinam a parada do ciclo celular em
G1, e em conseqncia, no haver reparo de danos ocorridos na estrutura do DNA, gerando
instabilidade cromossmica, que pode resultar na imortalizao e transformao maligna da clula
infectada.
A regio tardia do genoma viral composta por dois genes: L1 e L2 que codificam as
protenas estruturais constituintes do capsdio viral. O gene L1 apresenta pouco mais de 1000
pares de bases e pode ser dividido em duas partes distintas: uma regio de aproximadamente 450
pares de bases, cuja seqncia de nucleotdeos altamente conservada em todos os tipos de
HPV genitais, apresentando pequenas variaes de um tipo para outro que permitem diferencia-
los entre si, e uma regio divergente cuja seqncia de nucleotdeos apresenta variaes maiores
entre os diferentes tipos do vrus. O produto desse gene a protena L1 que representa o principal
constituinte do capsdio viral, uma protena com peso molecular de aproximadamente 55 kDa,
altamente conservada, entre os diferentes tipos de HPV genitais, imunognica, apresentando
eptopos reativos que induzem a formao de anticorpos neutralizantes tipo-especficos. O gene

85
L2 codifica a protena secundria do capsdio viral, menos conservada que L1, tem peso
molecular de 75 kDa, tambm imunognica, possuindo eptopos reativos grupo-especfico.
Os papilomavrus so vrus epiteliotrpicos que infectam a pele e mucosas de vrias
espcies de vertebrados, inclusive o homem, apresentando, no entanto, uma alta especificidade
no apenas em relao aos seus hospedeiros, mas tambm ao stio de infeco. Os vrus desse
grupo que infectam cada espcie animal so classificados em tipos, de acordo com a seqncia
de nucleotdeos de sua unidade de traduo L1, uma regio altamente conservada do genoma
viral. Somente para a espcie humana, cerca de 150 tipos de HPV j foram parcialmente
caracterizados, sendo que destes, 85 tipos j foram identificados e inteiramente seqenciados,
dos quais cerca de 40 so encontrados regularmente no trato genital.
Como o HPV no se propaga em culturas de clulas pelos mtodos convencionais,
existem muitas dificuldades para a realizao de estudos mais aprofundados sobre seus
mecanismos de interao com a clula hospedeira. Mas, acredita-se que a infeco tenha lugar
inicialmente na camada basal do epitlio onde o vrus penetra por micro-leses da pele ou
mucosa. Na clula epitelial esse patgeno induz a proliferao, tanto na epiderme quanto na
mucosa, apresentando crescimento limitado que freqentemente regride espontaneamente para a
cura ou o vrus pode persistir na forma de infeco latente, podendo ser reativado posteriormente,
ou pode evoluir diretamente para uma infeco crnica do tipo produtiva. No epitlio da mucosa
uterina o vrus inicia o seu processo de replicao na camada mais baixa do epitlio e a partir da
a infeco progride em direo s camadas superiores do epitlio, havendo uma estreita relao
entre a expresso dos diferentes genes virais e o processo de diferenciao celular, de forma que
os genes tardios que codificam as protenas do capsdio, s vo ser expressos nas clulas
diferenciadas das camadas superficiais do epitlio e somente nessas clulas so encontradas
partculas virais completas.
Os HPV genitais so divididos em dois grupos, de acordo com o seu potencial
oncognico: o grupo de baixo risco, do qual fazem parte os HPVs dos tipos 6, 11, 42, 43 e 44,
sendo que os dois primeiros so freqentemente encontrados em verrugas anogenitais e tumores
benignos da laringe e, normalmente, no esto associados s leses malignas. No grupo de alto
risco, esto includos HPV dos tipos 16, 18 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, e 69 os quais
so freqentemente encontrados em leses cervicais malignas, especialmente os tipos 16 e 18.

2. Patogenia e Patologia
No epitlio da mucosa uterina a replicao viral tem incio freqentemente, na camada
basal da zona de transio escamocolunar ou zona de transformao e a partir desse ponto, a
infeco progride em direo s camadas superiores do epitlio. O vrus atinge inicialmente os
queratincitos da camada basal do epitlio cervical, provavelmente queratincitos primitivos.
Nessas clulas da camada mais profunda do epitlio apenas os genes precoces do vrus so

86
expressos. Durante o deslocamento dos queratincitos da camada basal para as camadas
superiores do epitlio, os genes virais tardios so silenciados, passando a se expressarem apenas
nas clulas das camadas superiores do epitlio que se encontram em um estgio mais avanado
do processo de diferenciao. Nessas clulas ocorre um aumento massivo do nmero de cpias
virais e tem incio expresso dos genes tardios com produo das protenas do capsdio,
seguida da montagem das partculas virais e finalmente, liberao dos vrions. O perodo mnimo
entre a infeco e a liberao das partculas virais, em mdia de 3 semanas. Estudos em
modelos animais e a observao clnica mostram que, esse intervalo pode variar de 4 semanas a
muitos meses. Durante essa fase, grande parte das leses, se resolvem espontaneamente, mas
em alguns casos, o vrus pode escapar dos mecanismos de defesa do hospedeiro, mantendo-se
na forma de infeco persistente, nas formas latente ou produtiva.
O epitlio da mucosa cervical uterina normal apresenta uma camada basal formada por
clulas pequenas arredondadas, ainda imaturas e com intensa atividade de diviso. medida que
vo se diferenciando, tornando-se maturas, essas clulas se deslocam para formar as camadas
superiores do epitlio, onde param de se dividir, adquirem mais citoplasma, produzem queratina,
desenvolvem picnose nuclear, tornam-se anucleadas e finalmente sofre descamao, sendo
ento, substitudas por novas clulas. Esse mesmo epitlio quando tem displasia, exibe graus
variados de atipia nuclear, com a presena de clulas imaturas na camada supr-abasal
apresentando mitoses anormais e alteraes no nmero de cromossomos. Tais alteraes foram
denominadas por Koss & Durfee, 1956, de atipia coilocittica, que caracterizada pela presena
no epitlio, de clulas com um amplo halo perinuclear, com bordas bem delimitadas,
freqentemente com binucleao, exibindo ncleos hipercromticos com contornos irregulares
que so conhecidas como coilcitos. Quando existe displasia, os coilcitos aparecem inicialmente
nas camadas intermedirias do epitlio, estendendo-se at as camadas superficiais, onde
geralmente se tornam mais exuberantes. Meisels & Fortin, (1976) foram os primeiros
pesquisadores a relacionar a presena de atipia coilocittica, encontrada no epitlio da mucosa
uterina com a infeco pelo HPV, pelo fato das alteraes serem idnticas quelas encontradas
nas clulas do condiloma vaginal e vulvar. Em estudos subseqentes realizados atravs de
microscopia eletrnica, foi demonstrada a presena de partculas tpicas do Papilomavrus no
interior dos coilcitos e das leses condilomatosas. Posteriormente, foi detectada a presena de
antgenos especficos do HPV no ncleo dessas clulas, empregando-se tcnicas de
imunohistoqumica. Como a presena de partculas virais, e dos antgenos de capsdio descrita
em alguns, mas no em todos os coilcitos, embora seja geralmente aceito que tais alteraes
representam o efeito citoptico do vrus, esta caracterstica no deva ser tomada de forma isolada
como indicativo de infeco pelo HPV. Este fato impe uma sria limitao ao diagnstico da
infeco pelo HPV, baseado apenas no exame citomorfolgico.
Acredita-se que a integrao do DNA viral aos cromossomos da clula infectada se
constitua num evento importante para determinao do processo de transformao maligna. Ao

87
contrrio do que ocorre com os tumores benignos e nas leses de baixo grau, onde os genomas
virais so encontrados exclusivamente na forma epissomal, isto , livres, no interior do ncleo da
clula, nos tumores malignos, o DNA viral observado regularmente integrado aos cromossomos
da clula transformada, embora uma pequena porcentagem de bipsias dessas leses, possa
conter seqncias do genoma viral na forma epissomal. Alm disso, nas leses pre-cancerosas de
graus I e II, o DNA do vrus ainda encontrado na forma epissomal, passando a se observar
genomas virais integrados somente a partir da leso de grau III, isto , no carcinoma in situ,
sugerindo que a integrao do genoma viral aos cromossomos da clula tem um papel importante
no processo de converso maligna. A integrao do DNA do HPV um fenmeno sabidamente
aleatrio no que diz respeito ao stio de integrao no genoma da clula hospedeira. Em alguns
casos, entretanto, ela pode ocorrer nas proximidades de oncogenes conhecidos, o que poderia
oferecer a essa clula uma vantagem seletiva para a progresso de uma leso neoplsica pr-
cancerosa para o cncer, mas isso apenas uma hiptese. No entanto, h uma grande
especificidade no local da clivagem do DNA do vrus, para a sua incorporao ao genoma da
clula. Na grande maioria dos tumores e linhagens de clulas positivas para o HPV estudadas, a
clivagem do DNA viral ocorre no gene E2, promovendo a ruptura desse gene viral, alterando a sua
expresso o que resulta na ausncia de seus produtos, tendo como conseqncia imediata, a
interrupo do controle transcricional exercido pela unidade de traduo E2 sobre E1 e demais
genes da regio precoce, alterando os mecanismos de expresso de genes virais, e da clula
hospedeira, interferindo assim, nos mecanismos de controle do ciclo celular.

3. Manifestaes Clnicas
A infeco genital pelo HPV uma das doenas sexualmente transmissveis mais
freqentes entre as mulheres com vida sexual ativa, em todo o mundo, representando assim, um
grave problema de sade publica, principalmente nos pases em desenvolvimento, onde
favorecida pelas precrias condies sanitrias em que vivem essas populaes, tendo em vista
os baixos nveis scio-econmicos e educacionais. O curso natural da infeco pelo HPV, est na
dependncia de fatores intrnsecos do vrus e do hospedeiro, combinados com fatores fsicos,
qumicos e ambientais. Ao infectar o epitlio da mucosa cervical uterina, o vrus passa por uma
fase de replicao inicial, levando a um aumento da atividade de proliferao celular e provocando
alteraes citolgicas que recebem a denominao genrica de displasias, cuja caracterstica
principal, a presena de clulas coilocitticas nas camadas supra-basais do epitlio, observadas
no esfregao cervical corado pelo mtodo de Papanicolau. Aps essa fase inicial, a infeco
pode regredir, espontaneamente para a cura, o que parece ocorre em 40 a 70% dos casos, ou
pode ocorrer apenas o desaparecimento temporrio das leses aparentes, mas o vrus
permanecer em estado de latncia em algumas clulas por tempo indeterminado, sem produzir
novas partculas infecciosas e sem destruir as clulas infectadas, podendo ser reativado

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posteriormente, ou ainda a infeco pode progredir diretamente para a forma crnica do tipo
produtiva, que pode resultar na transformao maligna, onde a leso mais comum o carcinoma
do colo do tero.
Durante o estado de latncia ou persistncia viral, alguns, mas no todos os genes
virais so expressos, podendo ocorrer reativao, resultando em infeco crnica do tipo
produtiva. Alm disso, episdios recorrentes de alteraes citomorfolgicas associadas ao HPV,
tambm podem ser decorrentes da re-infeco que parece ser bastante freqente, principalmente
em mulheres jovens que apresentam a atividade sexual mais intensa. A infeco do epitlio
escamoso da genitlia externa e reas perianais, por HPV de baixo potencial oncognico, resulta
em leses exofticas localizadas, conhecidas como verrugas anogenitais ou condiloma
acuminado, que so causadas principalmente, por HPV dos tipos 6 e11. Esses mesmos tipos do
vrus podem ser encontrados eventualmente na mucosa uterina, mas normalmente, no esto
associados ao cncer do colo do tero. Por outro lado, a infeco da mucosa cervical uterina,
pelos HPVs do grupo de alto risco, resulta em leses ulcerativas planas discretas, que podem
passar despercebidas, mas que tm se revelado um passo crtico para o desenvolvimento das
leses cervicais dos diferentes graus, inclusive o cncer. Embora a infeco pelo HPV s possa
ser detectada atravs de tcnicas moleculares, comum a ocorrncia de manifestaes
citopatolgicas de baixo grau que se caracterizam por cavitao citoplasmtica e atipia nuclear,
resultantes do efeito citoptico do vrus, observadas somente na infeco produtiva. Esse tipo de
leso na maioria das vezes regride espontaneamente para a cura. Por razes ainda no
conhecidas, quando a infeco no se resolve, podem surgir as leses caracterizadas por
alteraes nucleares mais severas, com pouca evidncia de infeco produtiva por HPV. Tais
leses so em geral, restritas aos HPV considerados de alto risco, e podem progredir para o
cncer cervical aps um perodo varivel de evoluo. A infeco por esses tipos de HPV
compartilha vrios fatores de risco relacionados ao comportamento sexual, destacando-se entre
estes, a idade precoce do primeiro intercurso sexual e a existncia de mltiplos parceiros sexuais,
idade da primeira gestao e o nmero de gestaes.
A infeco da mucosa cervical uterina com HPV genitais, um evento muito freqente
entre as mulheres sexualmente ativas de todo o mundo, sendo que a maior parte dessas
infeces, transitria e provavelmente, de pouco significado clnico. Assim, o maior interesse
reside, na pequena proporo de mulheres portadoras da infeco persistente por HPV de alto
risco que tm maior probabilidade de desenvolverem leses cervicais dos diferentes graus,
inclusive o cncer. Estudos recentes mostram um declnio na prevalncia da infeco por HPV
com aumento da idade das mulheres, observando-se um novo aumento da incidncia aps a
menopausa, provavelmente, devido reativao de infeces latentes, de forma que nessa fase
da vida da mulher, freqentemente relatada a ocorrncia de um segundo pico de leses
intraepiteliais escamosas de alto grau, e em pelo menos, 80% delas, o envolvimento dos HPV de
alto risco na carcinognese est muito bem caracterizado. Estudos consistentes tm demonstrado

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que, a presena de HPV de alto risco precede a ocorrncia de anormalidades citolgicas no
epitlio cervical de mulheres que posteriormente desenvolvem cncer cervical. Assim, os teste
falso-negativos para HPV de alto potencial oncognico, representa uma situao de risco para o
desenvolvimento de cncer cervical. Dessa forma, novas estratgias de preveno ao cncer
cervical, devem levar em considerao os mltiplos tipos de HPV do grupo de alto risco, incluindo
at mesmo, aqueles menos freqentes.

4. Diagnstico laboratorial
O diagnstico de rotina das leses da crvice uterina, consta de dois tipos de
abordagens: uma que feita atravs de mtodos citomorfolgicos convencionais, que no so
especficos e apresentam baixa sensibilidade, a outra feita por meio de mtodos moleculares que
so mais especficos e apresentam alta sensibilidade. O exame citolgico de Papanicolau, ainda
se constitui em um excelente recurso, enquanto mtodo de triagem, empregado na preveno do
cncer cervical, especialmente nos pases em desenvolvimento, tendo em vista a sua grande
abrangncia, em virtude do baixo custo e da facilidade de execuo. Contudo, esse mtodo
apresenta uma srie de limitaes, no que se refere sua sensibilidade e especificidade. Nos
pases desenvolvidos vem sendo observado que o exame citolgico tem falhado para a reduo
da incidncia do cncer cervical, em conseqncia de sua baixa sensibilidade. Por outro lado, ele
tende a favorecer a uma superestimao de alteraes celulares indicativas de infeco por HPV,
o que leva, muitas vezes, ao tratamento desnecessrio dessas pacientes. Isso ocorre porque, a
citologia um mtodo baseado na observao de alteraes das caractersticas celulares as
quais podem estar associadas infeco pelo HPV, mas no so especficas desse vrus e,
freqentemente, no diferem das alteraes provocadas por reao inespecfica ou de origem
inflamatria. Outra limitao do exame citolgico a possibilidade de formao de artefatos
decorrentes da tcnica, quando o espcime processado de forma inadequada, o que pode levar
a um diagnstico errado. Alm disso, os mtodos citolgicos e histopatolgicos de diagnstico so
mais passveis de erro, tendo em vista a subjetividade da interpretao dos resultados, no
permitindo o estabelecimento de parmetros rgidos de classificao das leses, observadas, o
que freqentemente, resulta em divergncias de leituras entre um observador e outro, e
conseqentemente, entre laboratrios, o que dificulta a comparao dos resultados obtidos em
diferentes estudos.
A complexidade da deteco do HPV em material da mucosa cervical humana requer a
utilizao de mtodos laboratoriais que apresentem ao mesmo tempo, um largo espectro capaz de
detectar os cerca de 40 tipos de vrus existentes nessa regio anatmica, e a capacidade para
identificar cada um deles, de forma a caracteriz-los em relao ao seu potencial oncognico.
Duas tcnicas moleculares, largamente empregadas atualmente, preenchem esses requisitos.
Uma a reao em cadeia da polimerase (PCR), que permite a amplificao de uma seqncia

90
alvo do DNA do vrus, caso ele esteja presente nos espcimes cervicais. A outra tcnica a
hibridizao (Dot Blot), empregada para fazer a tipagem dos vrus a partir dos produtos da PCR,
32
utilizando sondas marcadas com P, especficas para cada um dos tipos do vrus considerados
mais importantes, que permite identificar 19 tipos de HPV genitais, incluindo entre eles, os tipos de
baixo e de alto risco mais representativos no que diz respeito s infeces cervicais. Uma
abordagem dessa metodologia foi estabelecida onde a PCR utilizada para detectar seqncias
especficas do genoma viral de 450 pares de bases correspondentes a uma regio do gene L1, a
qual altamente conservada entre os HPV do trato genital, apresentando pequenas variaes
entre tipos individuais. Atravs desse protocolo, utilizando-se um par de primers genricos,
possvel detectar um amplo espectro de HPV genitais, por meio de uma nica reao de PCR.
Essa metodologia envolve procedimentos relativamente simples, e sendo utilizada de forma
adequada, permite a deteco de quantidades mnimas de DNA do vrus, presente em qualquer
material biolgico, inclusive queles que foram fixados em formol e conservados em blocos de
parafina por muitos anos, o que possibilita a realizao de estudos retrospectivos. Alm de
apresentar alta sensibilidade, esse mtodo de diagnstico, permite estabelecer uma diferenciao
grupo-especfica, separando os HPV que infectam a mucosa cervical, em dois grupos: os ditos de
baixo risco que, raramente so relacionados com doena maligna e os de alto risco que so
freqentemente associados ao cncer cervical uterino. A combinao dessas duas tcnicas
tornou possvel deteco do DNA do HPV e a tipagem desse vrus, tanto na infeco
clinicamente aparente, como na subclnica, oferecendo assim, maior consistncia aos estudos de
prevalncia da infeco por esse patgeno, inclusive atravs da investigao retrospectiva em
materiais arquivados em blocos de parafina, tendo em vista a grande sensibilidade e
especificidade destes mtodos. A tipagem molecular dos vrus por este mtodo apresenta grande
especificidade pelo fato de ser baseada na existncia de pequenas diferenas de seqncias de
nucleotdeos da regio conservada do gene L 1 do vrus, que permitem fazer com segurana, a
distino entre os diferentes tipos do HPV, atravs de sondas especficas que reconhecem essas
diferenas que caracterizam cada tipo do vrus. As vantagens dos mtodos moleculares sobre os
mtodos citolgicos que os primeiros apresentam maior sensibilidade e especificidade e
menores divergncias na interpretao dos resultados.
Recentemente foi desenvolvido um mtodo molecular alternativo, associando a
hibridizao de cidos nuclicos com ensaio imunoenzimtico, chamado Captura Hbrida II, o qual
foi testado e apresentou resultados encorajadores, se aproximando daqueles obtidos por PCR o
qual vem sendo sugerido para uso de rotina no diagnstico molecular da infeco pelo HPV. Esse
mtodo se baseia na hibridizao de cidos nuclicos, onde os hbridos formados entre o DNA do
vrus e sondas de RNA especficas para seqncias do genoma viral so capturados por
anticorpos ancorados na superfcie de uma placa de microtitulao. A presena dos hbridos
imobilizados na placa revelada pela adio de anticorpos especficos para os hbridos, ligados a
uma enzima, seguido da adio do substrato, que ao ser desfosforilado pela ao dessa enzima,

91
emite luz a qual absorvida e mensurada em sistema automatizado. Esse mtodo apresenta alta
sensibilidade, especificidade e alto valor preditivo positivo, e baixo valor preditivo negativo, alm
de permitir tambm, classificar o vrus detectado no grupo de baixo ou de alto risco, com a
vantagem de ser mais vivel para o uso de rotina no laboratrio clnico, tendo em vista o seu
menor custo, alm da maior facilidade de execuo pois realizado em sistema automatizado.

5. Epidemiologia
Estudando a aquisio e cura da infeco cervical pelo HPV, em um grupo de 1.425
mulheres de baixo nvel scio-econmico, da cidade de So Paulo nas quais espcimes cervicais
eram coletados a cada 4 meses, durante um perodo de 2 anos, Franco et al., 1999, observaram
que 25% dessas mulheres apresentaram infeco pelo HPV em pelo menos, uma oportunidade
ao longo do perodo estudado, com um percentual de 1,3% de novas infeces detectadas a cada
ms e um percentual acumulado de 18% de positividade, aps um perodo de 18 meses. Do total
de mulheres que foram infectadas, apenas 35,0% permaneceram com o vrus aps um perodo de
12 meses. A porcentagem de cura da infeco por ms foi maior, para a infeco por tipos no
oncognicos do vrus (12%), quando comparado com os tipos oncognicos (9,5%). O tempo
mdio de durao da infeco foi de 8,2 meses, para os tipos no oncognicos e 13,5 para os
tipos oncognicos. Esses dados mostram que, a maioria das infeces cervicais pelo HPV, parece
ser apenas transitria.
Acredita-se que a infeco transitria, pelo HPV tenha pouco significado clnico, de
forma que apenas nos casos em que ela evolui para a forma persistente que existe maior risco
de ocorrncia de neoplasia cervical subseqente. A infeco persistente pode ser definida como a
deteco por repetidas vezes, de um mesmo tipo do vrus em espcimes cervicais obtidos em
coletas subseqentes da mesma paciente. No entanto, s vezes isso pode tambm ocorrer se a
mulher for r-infectada pelo mesmo tipo de HPV, o que caracteriza infeces transitrias
consecutivas e no persistncia viral. Assim, a diferena entre infeco persistente e r-aquisio
peridica de infeces transitrias sucessivas, a partir de um mesmo parceiro sexual, no pode
ser satisfatoriamente estabelecida, a no ser por meio de estudos em srie, onde feito o
acompanhamento peridico da paciente utilizando critrios que permitam detectar a r-infeco da
mulher pelo seu parceiro sexual.
O perfil epidemiolgico do cncer cervical o de uma doena associada atividade
sexual apresentando, portanto, caractersticas que sugerem fortemente, o envolvimento de um
agente infeccioso sexualmente transmissvel, na sua etiologia. O acmulo crescente de evidncias
clnicas e laboratoriais, somadas aos estudos epidemiolgicos e moleculares realizados em
diferentes pases, e publicados nos ltimos anos, no apenas reforam essa hiptese, como
apontam de forma consistente, o papilomavrus humano (HPV), como o provvel agente etiolgico
do cncer cervical e de suas leses precursoras. Evidncias clnicas, epidemiolgicas e

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laboratoriais, revelam a existncia de uma forte associao entre certos tipos desse vrus, e os
passos iniciais do processo de carcinognese, estabelecendo uma relao direta entre as
neoplasias cervicais dos diversos graus, inclusive o cncer, e a presena do DNA do HPV,
independentemente de outros fatores de risco. Alm disso, outros tipos de cnceres como:
peniano, anal, perianal, vulvar e da orofaringe, tambm esto associados infeco por certos
tipos desse vrus.
O papel da infeco pelos HPV de alto risco na etiologia do cncer cervical est muito
bem estabelecido, com base nas seguintes constataes: (1) a presena regular do DNA viral em
espcimes obtidos do tumor; (2) a demonstrao da expresso dos oncogenes virais, E6 e E7 no
tecido obtido do tumor; (3) a necessidade da expresso dos oncogenes virais para a manuteno
do fentipo maligno em linhagens de clulas derivadas do carcinoma cervical; (4) a interao das
oncoprotenas virais com protenas celulares envolvidas na regulao do ciclo celular; (5) as
inmeras evidncias epidemiolgicas que apontam a infeco pelo HPV como o principal fator de
risco para o desenvolvimento do cncer cervical.
O carcinoma de clulas escamosas do colo uterino o segundo tipo mais freqente de
cncer diagnosticado em mulheres de todo o mundo, se constituindo uma das principais causas
de morte por cncer na populao feminina, especialmente nas regies menos desenvolvidas.
Com ndices que variam de 10 a 40 novos casos por 100.000 habitantes, diagnosticados a cada
ano, nos pases industrializados e em desenvolvimento respectivamente, o cncer cervical
apresenta uma incidncia mundial de aproximadamente 500.000 novos casos registrados
anualmente, com cerca de 225.000 mortes, 80% das quais ocorrem nos pases em
desenvolvimento. A alta incidncia desse tipo de tumor uma conseqncia da deficincia dos
programas de controle e tratamento, da doena, adotados nesses pases. Tem sido amplamente
demonstrado que a incidncia do cncer do colo do tero maior em algumas regies geogrficas
do mundo, particularmente, na frica e Amrica Latina. O Brasil considerado rea de alto risco
para esse tipo de tumor, estimando-se que cerca 40.000 mulheres brasileiras, desenvolvam a
doena anualmente, e que aproximadamente 4.000 morrem vtimas do cncer do colo do tero,
representando assim, um grave problema de sade pblica, especialmente nas regies Norte e
Nordeste do pas, onde essa patologia apresenta ndices de prevalncia que se destacam entre
os maiores do mundo.
O cncer do colo do tero classificado histologicamente em dois tipos bsicos: o
carcinoma epidermide de clulas escamosas, que tem origem a partir da juno escamocolunar
do epitlio da mucosa uterina, e o adenocarcinoma, que se origina a partir do epitlio glandular da
endocrvice. Um aspecto importante desse tipo de cncer a evoluo relativamente lenta
passando por uma fase inicial caracterizada pela presena de alteraes citolgicas restritas
superfcie do epitlio, chamada de carcinoma in situ, que precede ao carcinoma invasor. Apesar
de sua alta prevalncia, o cncer do colo do tero, pode ser considerado como uma neoplasia

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maligna possvel de ser evitada, uma vez que o exame citolgico de rotina permite detectar a
doena ainda na fase de leses pr-malignas, quando o tratamento bastante eficaz.

Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do cncer do colo do tero (1)


Infeco da crvice uterina por HPV de alto risco, (2) Incio precoce das atividades sexual e
reprodutiva; (3) o relacionamento sexual com mltiplos parceiros; (4) nmero de gestaes; (5)
hbito de fumar (6); a no realizao do exame preventivo anualmente; (7) uso prolongado de
contraceptivos orais; (8) histria familiar de cncer (9) deficincia de alguns nutrientes como cido
flico, vitaminas B6 e B12 e carotenides; (10) grau de instruo.

Preveno e Controle
Para a preveno e controle das infeces cervicais pelo HPV, bem como do cncer
cervical ao qual esse vrus est diretamente associado, devem ser adotadas medidas gerais de
preveno das doenas sexualmente transmissveis, tais como reduo do nmero de parceiros,
uso de preservativos nas relaes sexuais e o diagnstico precoce das infeces cervicais ainda
na fase inicial, quando o tratamento extremamente eficaz.
Pesquisas esto sendo desenvolvidas visando o desenvolvimento de possveis
vacinas. A imunizao de coelhos, vacas e ces, utilizando VLP (viral-like paticle) expressando
antgenos especficos para cada espcie, resultou em um grande sucesso, sendo capaz de
proteger os animais vacinados de forma muito eficiente contra a infeco pelos papilomavrus
especficos, controlando o desenvolvimento das leses e impedindo a sua progresso para
tumores malignos, observada em uma certa proporo de casos. Camundongos vacinados com
VLP quimricas expressando as protenas L1 e L2 do capsdio viral e a protena E7 produziram
anticorpos neutralizantes da infeco e uma resposta imune celular capaz de reconhecer e
destruir clulas infectadas por HPV e de controlar as leses malignas. Foi constatado que essa
proteo apresentada pelos animais vacinados era mediada por linfcitos T citotxicos restritos
para protenas de classe I. No momento est disponvel uma vacina feita com VLP expressando a
protena L1 do HPV 16 que nos teste se mostrou eficiente para prevenir a infeco por esse tipo
do vrus, a qual est sendo recomendada para adolescentes antes de iniciar a atividade sexual.
Os primeiros resultados obtidos a partir da imunizao de um grupo de mulheres utilizando esta
vacina, quando comparados com queles que receberam um placebo, so extremamente
animadores e indicam que essa vacina, parece induzir uma resposta imune que oferece proteo,
prevenindo no apenas a aquisio da infeco por esse tipo de vrus, mas tambm evitando o
desenvolvimento de persistncia viral e, conseqentemente das leses a ela associadas.

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