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AGRCOLA
Leonor Carrillo
Dra. en Ciencias Qumicas (Orientacin Biolgica)
Profesora Titular en
Facultad de Ciencias Agrarias, UNJu
y Facultad de Ingeniera, UNSa
(http://www.unsa.edu.ar/matbib)
2003
CONTENIDO
1.Microorganismos.
Reinos. Organismos procariticos: eubacterias, arqueobacterias, actinomicetos, cianobacterias,
mixobacterias. Organismos eucariticos: mohos levaduras, macromicetos, mixomicetos, protozoos,
algas, lquenes. Organismos acelulares: virus, viroides, priones. Transferencia gentica en bacterias:
conjugacin, transformacin, transduccin, fusin de protoplastos.
3. Actividad microbiana.
Suelo. Metabolismo. Degradacin de biopolmeros: celulosa, almidn, levanos, xilanos y otras
hemicelulosas, pectinas, quitina, lignina, lpidos, protenas, polinucletidos. Metabolismo productor de
energa. Respiracin: degradacin de hexosas, ciclo del cido tricarboxlico, cadena de transporte de
electrones, fosforilaciones. Fermentaciones: lcticas, alcohlica, propinicas, frmicas, butrico-
butanlica, acticas, de aminocidos. Oxidaciones incompletas. Respiracin anaerbica. Desnitrificacin,
reduccin a nitritos, sulfatorreduccin y metanognesis. Bacterias autotrficas. Nitrificacin,
sulfooxidacin, ferrooxidacin. Biosntesis. Sntesis de protenas y otros compuestos.
4. Estructuras fngicas.
Estructuras somticas. Estructuras reproductoras anamrficas y teleomrficas.
5. Rumen y biogas.
Metanognesis, diversidad de las arqueobacterias metanognicas. Rumen, un digestor natural.
Caractersticas del biogas. Digestores anaerbicos, materia prima, factores ambientales, criterios de
diseo y construccin, operacin, peligros potenciales y seguridad.
6. Micotoxinas.
Hongos en el campo y el almacenamiento. Honhos toxignicos y micotoxinas naturales. Produccin
de micotoxinas. Peligros. Prevencin.
7. Hongos.
Clasificacin. Macromicetos. Ascomycota y Basidiomycota. Hongos micorrizantes, inoculacin de
plantines. Cultivo del champin, obtencin del micelio, preparacin del compost, siembra del inculo,
produccin. Cultivo de hongos lignvoros, preparacin del substrato, inoculacin y produccin de las
setas, cultivo sobre troncos.
Apndice
Medios de cultivo y esterilizacin. Aislamiento y cultivo de microorganismos. Fijacin simbitica de
nitrgeno en leguminosas. Microorganismos del suelo. Inhibidores y desinfectantes. Digestin
anaerbica de residuos agrcolas. Morfologa microscpica de hongos. Identificacin de mohos
toxignicos. Micorrizas. Microorganismos del agua.
eucariticas 1-10
procariticas 1-3
NDICE Cianobacterias 1-9, 3 -25
Actinomicetos 1-8 Ciclo del
fijadores de nitrgeno 2-7 azufre 3-21
Aerobio 2-7 citrato 3-16
Agua 2-5 nitrgeno 3 -21
actividad 2-5 Colonias de bacterias 1-6
humedad relativa 2-5 Coloraciones A-10
microorganismos A-31 Crecimiento 2-1
potencial 2-6 Cultivos
Algas 1-13 bacterias 2-9, A-8
Amonificacin A-16 hongos 7-11, 7-12, A-11
Anaerobio 2-7, 3-19 medios 2 -9, A-2
Antibacteriano 2-14, A-21 Degradacin de
Antibiosis 2-14 almidn 3-8
Antifngico 2-14, A-21 biopolmeros 3-4
Arqueobacterias 1-7, 3-21, 5-2 celulosa 3-6, A-18
Autottrofo 2-2, 3-21, A-2 hemicelulosas 3-9
Bacterias hexosas 3-15
butricas 3-19 levanos 3-15
celulolticas 3-6 lignina 3-11
eubacterias 1-4 lpidos 3-12
fijadoras simbiticas 2 -16 pectinas 3-10
fijadoras vida libre 3-24 polinucletidos 3 -14
formas 1-7 protenas 3-13
gram-positivas 1-4 quitina 3-11
gram-negativas 1-4 xilanos 3-9
halfilas 1-8 Desinfeccin 2-13, A-21
lisognicas 1-14 Desnitrificacin 3-19, A-16
metangenas 1-8, 3-21, 5-1 Digestin anaerbica 5-2, A-23
ruminales 3-21, 5-4 carga 5-13, 5-14
termoacidfilas 1-8 construccin 5-10
Bactericida 2-14 criterios de diseo 5-10
Bacteriocinas 2-14 digestores rurales 5-5
Bacterifago 1 -14 etapas 5-2
Bacteriosttico 2-14 factores ambientales 5-9
Bacteroide 2-16, 3-25 microorganismos 5-2
Biodegradacin 3-5 operacin 5 -13
Biogas 5 -1 otros digestores 5-6
caractersticas 5-8 parmetros 5-7. 5-11
Biopelcula 2-18 residuos 5-6
Biosntesis 3-20, 3-23 seguridad 5 -14
cidos grasos 3-25 Divisin celular 1-7
aminocidos 3-23 Endosporos bacterianos 1-6
glcidos 3-26 termorresistencia 2-11
nucletidos 3-25 Esporas fngicas 1-11, 4-2
protenas 3 -23 Esterilizacin
Cadena respiratoria 3-16, 3 -20 calor 2-11, A-3
Capacidad de campo 2-6, 3-3 filtracin 2-13, A-4
Catabolismo 3-14 presin autoclave 2-11
Clulas radiaciones 2-12
Factores de crecimiento 2-3 deteriorantes 6-1
Factores ambientales 2-5, 3-3, 5-9 estructuras somticas 4-1
actividad agua 2-5 estruct. reproductoras 4-1
luz ultravioleta 2 -13 levaduras 1 -12
microondas 2-13 lignvoros 3 -11, 7 -12
oxgeno 2-7 macromicetos 1-12, 7-3
pH 2 -6 mohos 1-11
potencial agua 2-6 micorrizantes 2-18, 7-8, A -29
potencial de reduccin 2-8 teleomorfos 4-4
presin osmtica 2-5 Humedad relativa 2-5
radiaciones 2-12 Inoculantes
temperatura 2-8, 3-3 bacterianos 2-17, A-13
tensin superficial 2-6, 2-14 fngicos 7-10
ultrasonido 2-13 Interacciones microbianas 2-15
Facultativo 2-7 Levaduras 1-12, 4-1
Fermentaciones 3-17 Lquenes 1-13
actica 3-19 Macromicetos 1-12, 7 -3
cida mixta 3-18 Medios de cultivo 2-9, A-2
aminocidos 3-19 Membranas bacterianas
butanodilica 3 -18 citoplasmtica 1-4
butrico-butanlica 3-19 internas 3-22
etanlica 3-18 Mesfilo 2-8
frmicas 3 -18 Metabolismo 3-4
lcticas 3-17 bacteroides 3-25
propinicas 3-18 productor de energa 3-14, 3 -20
Ferrooxidacin 3-22 Metabolitos secundarios 3 -26, 6 -1
Fijacin del CO2 3-26 Metanognesis 3-21, 5-1
Fijacin de nitrgeno Micorrizas
vida libre 3-24, A-17 ectomicorriza 2-18, 7-9, A-29
inoculante 2-17, A-13 endomicorriza 2-18, 7-9, A-29
mecanismo 3 -24 inoculacin 7-10. A-29
simbitica 2-16, A-13 Micotoxinas 6-1
Flagelos bacterianos 1-5 mohos toxignicos 6-3, A-27
Fotosntesis bacteriana 3-26 prevencin 6-6
Fottrofo 2-2, 3-26 principales toxinas 6-3
Gentica bacteriana 1-15 produccin 6-2
conjugacin 1-16 toxicidad 6-4
genoma 1-4 Microorganismos 1-1
plsmidos 1-6 agua A-31
recombinacin 1-16 amilolticos 3-8
replicacin 1-15 celulolticos 3-6
transduccin 1-18 desnitrificantes 3 -19
transforma cin 1-17 eucariotas 1-10
Halfilo 2-6 lignvoros 3 -11, 7 -12
Hetertrofo 2-2, A-2 pectinolticos 3-10
Hongos 4-1, 7-1, A-25 procariotas 1-3
ascomicetos 4-4, 7 -3 quitinolticos 3-11
anamorfos 4-2 suelo 3-1
basidiomicetos 4-5, 7-4 tamao 1-1, A-12
clasificacin 7-1 Micronutrientes 2-3
champin 7-11 Mixobacterias 1-9
cultivo 7-11, 7-12 Mixomicetos 1-12
Mohos 1 -11 anaerbica 3-19
Mutualismo 2 -15 Rizobios 2-16, 3-24
Nitratos Rizsfera 3-2
desnitrificacin 3-19 fijadores 3-24
reduccin 3-20 Rumen 5-3
Nitrificacin 3-21, A -16 Simbiosis 2-15
Nitrgeno Suelo 3-1
fijacin vida libre 3-24, A-17 bacterias 3-1
fijacin simbitica 2-16, 3-24, A-13 biomasa 3-5
incorporacin 3 -23 efecto rizosfrico 3 -3
mecanismo fijacin 3 -24 horizontes 3-1
Ndulos radicales 2-16, 2-17, A -13 humedad 3-3
Nutricin 2-2 microorganismos 3-1, A-16
Oxgeno 2 -7 temperatura 3-3
Oxidacin del piruvato 3 -16 Sulfatorreduccin 3-20, A-17
Oxidaciones incompletas 3-19 Sulfooxidacin 3-22, A-17
Pared celular Termfilo 2-8
arqueobacterias 1-7 Temperaturas cardinales 2-8
Gram-positiva 1-3 Tiempo reduccin decimal 2-12
Gram-negativa 1-3 Transferencia gen tica 1-15
Pelos de conjugacin 1-6, 1-17 Transporte de electrones
Plsmidos 1-6, 1-17 respiracin aerbica 3-16
Predacin 2-19 respiracin anaerbica 3-20
Priones 1-15 fotosntesis bacteriana 3-28
Proteobacterias 1-4 Transporte de solutos 2-3
Protoplastos 1 -19 Va de
Protozoos 1 -1, 1-13 cetodesoxifosfogluconato 3-15
Psicrfilo 2-8 fructosa difosfato 3 -14
Psicrotrofo 2-8 pentosas 3-15
Quimiotrofo 2 -2 Viroides 1 -15
Radiaciones 2 -12 Virus 1-14
Reinos microbianos 1-2 Vitaminas 2-3
Respiracin Xenobiticos 3 -5
aerbica 3 -15
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 1
1. Microorganismos
Los ambientes capaces de albergar vida
microbiana reflejan el amplio espectro de la
evolucin de estos organismos. Se han encontrado
especies que viven a temperaturas comprendidas
entre el punto de congelacin y el punto de
ebullicin del agua, en agua salada y en agua
dulce, en presencia y en ausencia de aire. Algunos
han desarrollado ciclos de vida que incluyen una
fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes.
Los microorganismos se hallan capacitados para
acometer una extensa gama de reacciones
metablicas y adaptarse a muchos ambientes
diferentes (1). Por su poco peso pueden ser
transportados por las corrientes de aire y estar en
todas partes, pero las caractersticas del ambiente
determinan cules especies pueden multiplicarse.
Existen varias clases de microorganismos: mohos,
levaduras, bacterias, actinomicetos, protozoos,
algas, virus. La figura 1 muestra el tamao
comparativo de algunos microorganismos.
El suelo es uno de los ambientes donde un conjunto ingobernable de
microorganismos compiten entre s para obtener lo que todos ellos necesitan: nutrientes
y energa. Al mismo tiempo, los productos de su metabolismo alteran la composicin
qumica del suelo donde habitan. Ms an, los propios microorganismos evolucionan
en respuesta a la presin del ambiente (3). En un suelo agrcola estn presentes
alrededor de 1010 organismos por g de suelo y constituyen una biomasa de
aproximadamente 1500 kg por Ha, lo cual corresponde a un cordero por cien m2 . Un
gramo de suelo frtil puede contener 5 m de micelio fngico, 10 8 clulas bacterianas, 106
esporos de actinomicetos (4).
En los animales monogstricos la poblacin bacteriana alcanza su mximo nivel en el
intestino grueso y el impacto metablico de la microbiota es considerable. En el
rumiante la accin de los microorganismos contenidos en el rumen es an ms
espectacular, pues al degradar la celulosa permiten al animal alimentarse de forrajes (5).
Numerosas especies bacterianas y algunas veces incluso algas microscpicas o
protozoos, proliferan en las superficies expuestas a la humedad formando una
biopelcula de microorganismos contenidos en una matriz de polisacridos, cuyo
espesor puede oscilar entre algunos micrmetros y pocos milmetros, que se adhiere
fuertemente a la base. Las biopelculas se forman en todas las superficies sumergidas,
tanto en agua dulce como de mar, o bien sobre soportes constantemente hmedos tales
como paredes de la caera de agua, pisos o dientes. El 99% de toda la actividad
microbiana en un ecosistema abierto ocurre sobre las superficies (6).
Los mohos y levaduras forman parte de los hongos. Las levaduras son unicelulares en
condiciones normales mientras que los mohos crecen como un sistema ramificado de
filamentos (micelio). Se trata de organismos eucariticos cuyas clulas, al igual que las
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1
de vegetales y animales, tienen un ncleo cerrado por una doble membrana porosa y
llevan como mnimo dos cromosomas, a ms de veinte en algunas especies (7). Las
eubacterias y los actinomicetos son procariticos. Sus clulas carecen de membrana
nuclear y mitocondrias, adems poseen un solo cromosoma que se encuentra libre en el
citoplasma y una pared celular rgida.
Las clulas de los procariotas son, en general, mucho menores que las de los
eucariotas; unas 10 veces menor en medidas lineales y por lo tanto unas 1000 veces
menor en volumen (1). Los protozoos del suelo se alimentan de bacterias y presentan
movimientos ligados a la fagocitosis que es la ingestin de partculas mediante
invaginacin de la membrana citoplasmtica y formacin de vesculas intracelulares (4).
Las eubacterias presentan diversa morfologa: esfrica, cilndrica, espiralada e incluso
filamentosa. Los actinomicetos incluyen muchos gneros que desarrollan en forma de
delgado micelio.
Las eubacterias son organismos pequeos, que miden uno o varios micrmetros. Las
levaduras, en cambio, miden entre 6 y 12 m. Los mohos son pluricelulares y aunque
sus clulas aisladas miden a lo sumo 25 m de largo, su conjunto se distingue a simple
vista. Los hongos con reproduccin sexual pueden tener cuerpos fructferos de tamao
notable como los championes y otras setas, formados por millones de clulas (7). La
figura 2 es un esquema de las clulas procaritica y eucaritica.
1.2.1. Eubacterias
La cantidad de pptidoglucano de la pared de las clulas bacterianas vara
enormemente, desde el 90% en la pared de algunas bacterias gram-positivas hasta
menos del 10% en las bacterias gram-negativas. El trmino Gram-positivo hace
referencia a la capacidad de ciertas bacterias de retener el colorante violeta cristal en
presencia de yodo cuando se agrega alcohol, al hacer la coloracin de Gram sobre un
portaobjetos con las bacterias fijadas. Las bacterias negativas no retienen a este
colorante (7). La penicilina y otros antibiticos -lactmicos que interfieren con la
biosntesis de la pared celular llevan a la produccin de protoplastos carentes de pared
bajo condiciones osmticas apropiadas (1). El trmino esferoplasto se usa para los casos
en que persisten restos de pared. La figura 3 muestra un esquema de las paredes
celulares.
La pared celular de las bacterias Gram-
positivas contiene pequeas cantidades de
protenas y polisacridos, a menudo tambin
cidos teicoicos (polmeros de ribitol-fosfato o
glicerol-fosfato unidos mediante enlaces
fosfodister) o de cidos teicournicos. Estos
cidos estn unidos al pptido-glucano por los
fosfatos (12). En las proteobacterias (Gram-
negativas) la capa interna de la pared celular es
pobre en pptidoglucano y la capa externa rica
en lipoprotena y lipopolisacridos, los cuales
constituyen ms del 80% del peso seco de la
pared. El espacio entre la membrana externa y la
capa de pptidoglucano, llamado periplsmico,
contiene un gran nmero de protenas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 5
elementos en anillos y otros en sectores. A todos los sectores los va formando, por
propagacin centrfuga, la progenie de un antepasado comn. Algunos sectores se
diferencian del resto porque las clulas difieren en su ADN de las de los sectores
contiguos debido a mutaciones espontneas. Las bacterias de un anillo comparten
algunas propiedades entre s pero no estn emparentadas, pues tienen parentesco
directo con las de la zonas precedente y la siguiente (9). La figura 7 presenta algunas
colonias de bacterias de distinto aspecto.
Las bacterias generalmente se multiplican por fisin binaria. Despus del crecimiento
de la clula, aparece el septo y las clulas se separan o permanecen unidas con formas
caractersticas: pares de bacterias, cadenas, paquetes cbicos y acmulos planos
irregulares entre las bacterias esfricas (cocos), o pares y cadenas en las cilndricas
(bacilos) (12). La multiplicacin por brotacin es rara en los procariotas pero se observa,
por ejemplo, en la bacteria del agua estancada Hyphomicrobium. La figura 8 muestra un
esquema de las diversas formas de bacterias.
La segregacin del ADN es el proceso que distribuye igualitariamente el material
gentico en las clulas hijas. Es producida en las bacterias debido a un mecanismo
parecido al mittico. La replicacin de los plsmidos en la clula, sobre el replisoma,
entraa la formacin de un
complejo de separacin o particin
donde se adhiere el plsmido cual
regin centromrica. Una vez
formadas las copias, stas se alejan
activamente unidas a las protenas
de particin hasta que la clula se
divide. La divisin del cromosoma
parece ocurrir de igual manera (23).
La figura 9 presenta un esquema
de la divisin de una bacteria.
1.2.2. Arqueobacterias
Este grupo de procariotas en su
bioqumica y en la estructura de
los ribosomas, membrana y pared,
difieren tanto de los procariotas
como de los eucariotas. Se los
denomina arqueobacterias pues
algunas poseen un metabolismo
particularmente adecuado a las condiciones que se supone prevalecieron en los
primeros tiempos de la vida sobre la tierra. Comprende tres clases muy diferentes: las
metangenas, las halfilas extremas y las termoacidfilas (8).
Las arqueobacterias no tienen pptidoglucano en la pared. La membrana est
formada por lpidos no habituales, compuestos por un grupo glicerol ligado a dos
cadenas de alquil-isoprenoides por un enlace tipo ter (-O-) (24). Algunas de estas
bacterias tiene histonas y nucleosoma de tipo eucaritico (25).
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1
se aplica en caliente y con el fin de diferenciarla se decolora a los otros organismos con
un cido mineral diluido. Esto se debe a que el pptidoglucano est unido a los
arabino-galactanos esterificados con cidos miclicos de naturaleza cerosa (1).
1.2.4. Cianobacterias
Son organismos procariticos, unicelulares o filamentosos (por reunin de clulas
individuales adheridas por sus extremos) que contienen, adems de la clorofila, un
pigmento azulado llamado ficocianina. Estn presentes en suelos, y aguas dulces o
saladas. A veces colonizan ambientes
extremadamente inhspitos. Algunos convierten
el nitrgeno atmsferico en compuestos que los
vegetales aprovechan y fertilizan los campos y
de manera muy especial los arrozales (1). Ciertas
especies producen metabolitos secundarios
txicos (por ej. un fosfato orgnico letal) que son
liberados de las clulas en el tracto digestivo de
los animales al beber agua con verdn (27).
Algunas son unicelulares adheridas por un
limo o dentro de una cpsula, ej. Gloeocapsa.
Otras tambin unicelulares generan multiples beocitos en su interior, ej. Dermocarpa.
Las que forman cadenas de clulas (tricomas) que pueden deslizarse, suelen tener
clulas especiales donde ocurre la fijacin del nitrgeno molecular (heterocistos) y
clulas de reposo (acinetos), ej. Nostoc, o carecer de ellas, ej. Oscillatoria. Unas pocas
tienen una vaina alrededor del tricoma (12). La figura 11 presenta un esquema de la
morfologa de cianobacterias. Los gneros Anabaena, Aphanizomenon, Microcystis y
Nodularia contienen especies txicas (27). En cambio el gnero Spirulina es comestible y
apreciado por el alto tenor de protenas, del orden del 50-60% del peso seco, con un
aminograma similar al de la harina de soja. Las cianobacterias tambin pueden convivir
en simbiosis con las plantas, debido a su capacidad de fijar el nitrgeno molecular, por
ej. Anabaena en las cavidades dorsales de las hojas del helecho acutico Azolla, y Nostoc
en los ndulos caulinares del arbusto tropical Gunnera (28).
1.2.5. Mixobacterias
Las mixobacterias son organismos sociales
cuyas clulas son flexibles y no tienen una
pared celular rgida, generalmente estn
embebidas en un limo espeso. Al desplazarse
segregan un material mucoso extracelular que
se convierte en grandes avenidas por donde
avanzan miles de clulas. El movimiento es
muy coordinado. Cuando la poblacin emigra
sobre el agar, se desplaza como una unidad
indivisa. Incluso las especies que entran en
letargo como esporos unicelulares, exhiben
hbitos sociales durante buena parte de su ciclo
vital. Muchas de ellas nunca se presentan
aisladas, por el contrario, entran en una etapa
de letargo en forma de cisto pluricelular que
luego germina y libera una nueva poblacin de
millares de mixosporos (29).
Las mixobacterias son organismos del suelo y
los cuerpos fructferos se encuentran sobre material vegetal en descomposicin o
estircol. Algunas, como Myxococcus, forman cuerpos fructferos como gotitas con
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1
1.3.1. Mohos
Los mohos se caracterizan por tener ncleo verdadero, carecer de pigmentos
fotosintticos, poseer micelio con pared celular constituida por glucanos, quitosano y
quitina (polmeros de glucosa, glucosamina y N-acetil-glucosamina, respectivamente)
(7). En pocas ocasiones la pared est constituida enteramente de quitina. La pared
celular del micelio de los hongos semeja un extenso sistema tubular por el que avanza
protegido el citoplasma para su dispersin y bsqueda de nutrientes (1).
Los elementos somticos tubulares que constituyen el micelio reciben el nombre de
hifas. Las hifas pueden estar separadas en secciones, generalmente multinucleadas, por
medio de septos perforados o bien carecer de ellos. Los hongos pueden reproducirse
tanto sexual como asexualmente. Los hongos asexuales (anamorfos) generan varias
clases de esporas asexuales por mitosis del ncleo celular (mitosporas) (33).
La morfologa de las estructuras que contienen las esporas es muy variable y
constituye una de las bases de la clasificacin de los hongos. El micelio somtico no es
suficientemente discriminador para
utilizarlo en la clasificacin. El
color de muchos mohos que viven
en la materia orgnica en
descomposicin se debe al color de
sus esporas asexuales. stas
presentan varias tonalidades de
color blanco, amarillo, azul, verde,
rojo, pardo o negro (7).
Los mohos generan varias clases
de esporas asexuales, mono o
pluricelulares. Las esporas se
desarrollan en los esporforos, estructuras especializadas que se extienden en el aire a
partir del micelio vegetativo, y las esporas se acumulan en el extreno superior de los
mismos. Si las esporas estn encerradas en un esporangio (en forma de bolsa) se las
llama esporangiosporas. Los conidios son esporas externas o sea no estn encerradas.
Al madurar, estas esporas son esparcidas por el viento.
Muchos mohos pueden reproducirse tambin a travs de esporas sexuales, generadas
por meiosis, o divisin reductora, de un ncleo diploide (meiosporas). En la meiosis, el
nmero de cromosomas se divide por la mitad. Las esporas sexuales contienen slo un
cromosoma de cada par homlogo. La condicin diploide se restablece cuando dos
estructuras haploides se unen, completando el ciclo vital. Los mohos a los que no se les
conoce ciclo sexual, se consideran hongos imperfectos (33).
Los mohos con estructuras reproductoras sexuales (teleomorfos) corresponden a tres
grupos: ascomicetos, basidiomicetos y zigomicetos. Los ascomicetos producen sus
esporas en ascos, que generalmente se forman dentro de un complejo cuerpo fructfero,
el ascoma. De forma similar, los basidiomicetos desarrollan sus esporas sexuales
externamente, en los basidios que se hallan en un complejo cuerpo fructfero: el
basidioma. Pero este grupo tambin comprende a los carbones y las royas, organismos
de inters agronmico por ser parsitos vegetales. Los zigomicetos producen
zigosporas a veces visibles a ojo desnudo. En condiciones naturales, los mohos se
reproducen en la mayora de los casos asexualmente, las estructuras reproductoras
sexuales slo aparecen ocasionalmente en circunstancias favorables (33). La figura 13
muestra un moho (Rhizopus stolonifer).
12 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1
1.3.2. Levaduras
La mayora de la numerosas especies de levaduras se han clasificado desde el punto
de vista de la reproduccin, que puede ser sexual o asexual. En la reproduccin
vegetativa, generalmente, una clula madre da lugar a diversas clulas hijas por la
formacin repetida de yemas en la superficie celular; en unas pocas levaduras la
divisin asexual se hace por escisin celular luego de la duplicacin del ncleo (34).
Tres grupos de hongos acogen a las levaduras: los ascomicetos, los basidiomicetos y
los hongos imperfectos. El primer grupo incluye las levaduras cuyas estructuras
reproductoras sexuales son o l s ascos sencillos que contienen ascosporas. Una clula
diploide de levadura sufre meiosis y forma de cuatro a ocho ascosporas, encerradas en
el asco. Una ascospora es una clula haploide que al germinar genera una progenie de
clulas haploides por mitosis (reproduccin asexual). Las clulas de diferente polaridad
sexual se combinan para formar un
nuevo organismo diploide. Entre las
levaduras que pertenecen a los
ascomicetos se encuentra
Saccharomyces cerevisiae empleada
para la fabricacin del pan y la
fermentacin alcohlica. Los
basidiomicetos agrupan un nmero
reducido de levaduras. Los hongos
imperfectos incluyen levaduras que se
reproducen slo de forma asexual, ej.
Candida tropicalis (7). En la figura 14 se
muestra el aspecto de una levadura
que se divide por escisin y forma
meiosporas.
1.3.3. Macromicetos
Son hongos con cuerpos fructferos (ascoma o basidioma) que se miden en
centmetros. Entre ellos son de inters los que forman asociaciones simbiticas con
rboles (ectomicorrizas), por ej. Amanita, Boletus, Cortinarius, Lactarius, Russula,
Scleroderma, Suillus, Tricholoma, y los que crecen sobre troncos descomponiendo la
madera, por ej. Schyzophyllum, Polyporus, Coriolus, Xylaria (35). La figura 14 tambin
muestra una seta venenosa.
1.3.4. Mixomicetos
Los mixomicetos son organismos eucariticos
mucosos que forman plasmodio y luego un cuerpo
fructfero de colores destacados, sobre troncos y hojas
en descomposicin o postes viejos, de 0,5 a 1 cm (36).
La asociacin celular en los hongos mucilaginosos
est mediada por la interaccin entre protenas unidas
a carbohidratos de una clula y receptores formados
por oligosacridos especficos de otra. De este modo, la
diferenciacin de los hongos mucilaginosos desde una
forma somtica (unicelular) hasta la forma cohesiva
(agregada) va acompaada de la aparicin de lectinas
y glicoprotenas especficas en la superficie celular (17).
Las esporas liberadas de los cuerpos fructferos
germinan sobre una superficie hmeda y producen mixoflagelados que nadan o bien
mixamebas. stos se alimentan de los nutrientes lquidos o por fagocitosis de bacterias,
levaduras, esporas fngicas, etc. Las clulas flageladas pierden luego su flagelo y
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 13
1.3.5. Protozoos
Los protozoos constituyen un grupo muy
heterogneo de microorganismos eucariticos,
unicelulares y mviles (con algunas excepciones).
El ciclo de vida comprende dos fases: una de
actividad, durante la cual se desplazan, nutren y
reproducen; otra de reposo o enquistamiento. Se
alimentan de bacterias, levaduras, algas y otros
protozoos.
Se los agrupan en: rizpodos que se desplazan
por pseudpodos (amebas y testceos o foraminferos), flagelados con uno o ms
flagelos, ciliados dotados de cilias y dos ncleos, y esporozoos parsitos. Se observa un
esquema de los mismos en la figura 1 y 16. La poblacin de flagelados y amebas es del
orden de 103 - 10 5 por gramo de suelo, la de ciliados 103/g y la de rizpodos testceos
10 3 - 104 /g. Participan en el equilibrio biolgico del suelo pues consumen grandes
cantidades de bacterias, una ameba ingiere unas 40.000 bacterias entre cada divisin
celular (4).
1.3.6. Algas
Son organismos fotosintticos eucariticos. Las algas
del suelo viven en la proximidad inmediata a la
superficie o sobre la misma. Predominan, arriba las
diatomeas y abajo las clorofceas y xantofceas
ubicuas. La humedad ptima es del 40 al 60% de la
capacidad de retencin del agua por el suelo. Las
algas libres o liquenizadas constituyen el estado
inicial de la vegetacin rocas y suelos minerales
infrtiles (4). En la figura 17 se muestra un alga roja
del suelo.
1.3.7. Lquenes
Un lquen est constitudo por un hongo (el
micobionte) junto con una o ms algas y/o
cianobacterias (el fotobionte) viviendo en una
relacin simbitica y formando un cuerpo estable e
identificable (39). La figura 18 muestra una rama con
varios lquenes.
cpside, a veces tambin tiene una envoltura. Hay muchas clases de virus y se los
puede agrupar por el tipo de material gentico que portan.
Algunos tienen una molcula de ARN
monocatenario (cadena "ms") compuesto por
varios miles de subunidades nucleotdicas, que
puede ser ledo directamente por el aparato de
traduccin del hospedador, el ribosoma, como
si fuera un ARN mensajero propio. Un ejemplo
de este tipo de virus es el del mosaico del
tabaco.
Otros virus, por ej. el de la rabia, cifran sus
mensajes en cadenas "menos" de ARN, las que
en el interior de la clula deben transcribirse en
cadenas complementarias de tipo "ms" para
que empiece la replicacin.
Los retrovirus constituyen una tercera clase de
virus de ARN monocatenario. Cuando un
retrovirus infecta a una clula, la enzima
retrotranscriptasa transforma la cadena de ARN
vrico en ADN monocatenario y ste es copiado
por la ADN-polimerasa celular a ADN
bicatenario que puede integrarse al genoma del
hospedador.
Los reovirus, patgenos de plantas y animales,
tienen ARN bicatenario. Ejemplos de virus con
ADN monocatenario son los inovirus y con
ADN bicatenario los miovirus, ambos patgenos de bacterias (39).
Un fago (virus que infecta a bacterias) posee una sola molcula de cido nucleico que
se inyecta en la clula bacteriana. La figura 19 muestra la forma de un tipo de
bacterifago. En la figura 20 se observa el ciclo de un fago lambda con ADN bicatenario
lineal cuyos extremos se unen una vez dentro de la bacteria y los genes dispuestos
sobre ese anillo dirigen la sntesis de las protenas vricas, valindose de la maquinaria
bacteriana de sntesis. Parte de las protenas son enzimas implicadas en la replicacin
del cido nucleico del fago, tarea que realizan en conjuncin con enzimas de la propia
bacteria. El virus se reproduce, es decir fabrica nuevas molculas de ADN y protenas
de la cpsula. Los nuevos ADN se
introducen en las cpsulas recin
formadas y el hospedador acaba
lisndose (40). Por otra parte, el fago
puede insertarse en el ADN de la
bacteria hospedadora. En el estado
integrado, el ADN del fago es replicado
junto con el ADN bacteriano y no se
expresa la informacin contenida en el
primero. Este fago no infeccioso, que
puede pasar de clula en clula por
herencia, se denomina profago. La
excisin del fago en la clula lisognica
le devuelve la virulencia.
Otra forma de agrupar los virus es por
la forma. Se llama nucleocpside al
cido nucleico (o virin) con la cpside,
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 15
y puede estar desnuda o recubierta por una membrana. Una cpside consta de
capsmeros, y en la mayora de los casos es simtrica. Se observan dos tipos de
estructuras simtrcas: helicoidal e icosahdrica (12). En la figura 21 se muestra la forma
de algunos virus.
1.4.2. Viroides
Los viroides son ms sencillos que los virus, pues son slo filamentos muy cortos de
ARN. Producen enfermedades especficas de las plantas (42).
1.4.3. Priones
Se llama as a las protenas que actan como agentes infecciosos en algunas
enfermedades del sistema nervioso de ovejas, vacas y otros animales (43), pero es
discutible si se pueden considerar microorganismos.
1.7.1. Conjugacin
Se descubri cuando se mezclaron mutantes nutricionales (auxotrficos) con
diferentes requerimientos de la bacteria Gram-negativa Escherichia coli y crecieron sobre
un medio mnimo siendo que, separadamente, necesitaban un suplemento de
determinados nutrientes para poder multiplicarse. Los genes silvestres de una cepa
completaron los genes mutados de la otra (figura 23). Este proceso requiere el contacto
entre las clulas y se transfiere el factor sexual F (fertilidad) que es una molcula
pequea de ADN circular de doble cadena (plsmido) desde la clula donadora (F+) a
la receptora (F-). Las clulas donadoras tienen en la superficie los pelos de conjugacin
(pili F) que sirven para facilitar el contacto (figura 24). La presencia de un plsmido
altera la capacidad para sintetizar el pelo F y el desplazamiento del ADN para su
transferencia a otra clula, adems modifica los receptores superficiales.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 17
1.7.2. Transformacin
Algunas bacterias pueden captar ADN desnudo, por ejemplo las clulas de una colonia
rugosa de Streptococcus pneumoniae al ser mezcladas con el ADN de una cepa virulenta
con colonias lisas adquieren la cualidad de producir colonias lisas. La transformacin
suele ocurrir tanto en bacterias Gram-positivas como en Gram-negativas, y es utilizada
para introducir genes extraos en una bacteria (12).
Un fragmento de ADN se puede insertar en un plsmido pequeo especializado
conocido como vector de clonacin usando una enzima especfica. Este ADN
recombinante se usa para transformar las bacterias que crecern luego en un medio
selectivo apropiado para detectarlas. La capacidad de aislar ADN de un organismo e
inducir su incorporacin en otro no relacionado constituye el fundamento de una de las
manipulaciones del ADN recombinante (figura 26). El plsmido sirve as de vector para
genes que no tienen equivalente en el organismo receptor y que, por lo tanto, no
podran heredarse de forma estable mediante recombinacin homloga. Estos genes
pueden as transmitirse a travs de generaciones sucesivas conforme el plsmido va
replicndose (44). Pero a veces la bacteria pierde el plsmido espontneamente.
La mayora de las especies de rizobios, bacterias de gran importancia agronmica,
contienen plsmidos con la informacin gentica para la simbiosis en leguminosas (46).
1.7.3. Transduccin
Los genes bacterianos se pueden transferir de una cepa a otra usando bacterifagos
como vectores (figura 19), pero este fenmeno no ocurre en todas las especies de
bacterias. Segn el comportamiento del bacterifago la transduccin puede ser:
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1
a) general o inespecfica
Comnmente el bacterifago se replica dentro de la clula que infecta y con la
ruptura de la misma se liberan las nuevas partculas vricas. Estas partculas infectan
otras clulas completando el ciclo de lisis. Ocasionalmente durante el proceso ltico el
genoma bacteriano se fragmenta y algunos segmentos pasan a formar parte del nuevo
bacterifago. stos suelen carecer de parte de su propio genoma, pero aunque
defectuosos son capaces de
infectar nuevas bacterias y
dejarles la porcin de ADN
bacteriano que transportan.
Este ADN suele recombinarse
con el genoma de la clula
infectada (figura 27).
La porcin de genoma
bacteriano transportada por
bacterifagos es por lo
general menor que 1% del
ADN total. La mayora de las
partculas vricas son
normales y no participan en
la transduccin (12).
b) especializada
Los bacterifagos
moderados tambin son
capaces de formar una
relacin estable con sus
hospedadores. Luego de la
infeccin suelen incorporarse
al genoma bacteriano como
profago. ste suele codificar
otras funciones adems de las
especficas del bacterifago,
por ejemplo la produccin de
toxinas. La bacterias que
albergan profagos se llaman
lisognicas (figura 20).
Los profagos suelen vivir en
armona con su hospedador hasta
que una situacin de stress
ambiental induce el ciclo ltico.
Cuando el bacterifago se escinde
del genoma bacteriano puede
acarrear una porcin de este
ltimo. Estos fagos defectuosos
invaden nuevas bacterias. La
integracin al genoma de la clula
hospedadora es esencial para la
trasferencia de los genes. Como
cada profago tiene un particular
lugar de insercin en el genoma
de la bacteria, solamente los
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. captulo 1 19
genes adyacentes pueden ser transferidos por este proceso (12 ). La transposicin es la
recombinacin que presentan los transposones o las secuencias de insercin. Las
secuencias de ADN cambian de lugar en el genoma y se insertan en una regin que no
guarda homologa con ella. Si esta integracin sucede dentro de un gen se produce una
mutacin, pues se rompe la continuidad de la informacin codificada (47).
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 1
Algunas bacterias, por ejemplo Azotobacter que vive libre en el suelo, y Rhizobium que
crece como simbionte en los ndulos de la raz de leguminosas, as como
cianobacterias, pueden fijar el nitrgeno gaseoso de la atmsfera, es decir reducirlo
convirtindolo en nitrgeno orgnico. Por otra parte, las formas parsitas obligadas
obtienen del hospedador los complejos constituyentes de su materia viva (5).
En tanto que los sulfatos pueden ser utilizados por casi todas las bacterias y hongos,
los nitratos son a menudo menos adecuados como nutrientes. Sin embargo, la mayora
de los microorganismos hace uso del amonio como fuente nica o principal de
nitrgeno. Sin embargo, algunas bacterias requieren fuentes de azufre reducido, tal
como sulfuro o tiosulfato. Los organismos vivos necesitan tambin muchos otros
elementos, como fsforo, potasio, magnesio, manganeso, calcio, hierro, cobalto, cobre,
cinc y molibdeno (1)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 3
2. 4. Transporte de solutos
El transporte de nutrientes a travs de la membrana citoplasmtica es especfico
porque son captados por la clula solamente aqullos para los cuales existe un sistema
transportador. Existen dos tipos principales de transporte. El primario comprende los
procesos que conducen a la transferencia de iones (H +, Na+, K +) produciendo
alteraciones en el potencial electroqumico. Las fuerzas que intervienen son el
transporte de electrones respiratorio o fotosinttico, o las bombas inicas dependientes
del ATP o de la descarboxilacin de metabolitos. El transporte secundario est guiado
por gradientes en el potencial electroqumico (9).
La difusin pasiva o simple est gobernada por el tamao molecular y las
propiedades lipoflicas del material, permitiendo la entrada de agua, toxinas no-polares
y ciertos inhibidores. La difusin facilitada se lleva cabo debido a la presencia de una
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2
2.5.3. pH
El pH del medio puede influir sobre la expresin de genes y regular el transporte de
protones, la degradacin de los aminocidos, la adaptacin a condiciones acdicas o
bsicas y an la virulencia. Las clulas perciben los cambios del pH ambiente a travs
de diferentes mecanismos. La protonacn y desprotonacin de los aminocidos
inducida por el pH, puede alterar la estructura protenica secundaria y por lo tanto la
funcin que seala el cambio. La clula puede responder slo a una de las formas de las
molculas de seal. Por ejemplo, los cidos orgnicos atraviesan la membrana
citoplasmtica solamente en la forma protonada y un aumento de la concentracin
intracelular indicara un incremento en la acidez ambiental. El gradiente de protones a
travs de la membrana puede servir, por s mismo, como un sensor para ajustar los
procesos dependientes de la energa (8).
El pH intracelular puede ser mantenido sobre un valor crtico en el cual las protenas
internas se desnaturalizan irreversiblemente. En Salmonella typhimurium hay tres
mecanismos para mantener el pH interno compatible con la vida: la respuesta
homeosttica, la respuesta de tolerancia al cido y la sntesis de protenas de shock
acdico (14).
A pH ambiental mayor que 6,0 las clulas bacterianas ajustan su pH interno a travs
de la respuesta homeosttica modulando la actividad de las bombas de protones,
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 7
antiportes y simportes, para aumentar la velocidad a la cual los protones son expelidos
del citoplasma. El mecanismo homeosttico es constitutivo y funciona en presencia de
inhibidores de la sntesis proteica.
La respuesta de tolerancia al cido es iniciada por un pH externo de 5,5 a 6,0. Este
mecanismo es sensible a los inhibidores de la sntesis proteica y puede mantener el pH
interno por sobre 5,0 teniendo el pH externo valores tan bajos como 4,0. La prdida de
la actividad ATPasa, causada por las mutaciones que desorganizan genes o los
inhibidores metablicos, anula la respuesta de tolerancia al cido pero no el mecanismo
homeosttico. Esta respuesta tambin puede conferir proteccin cruzada frente a otros
agentes ambientales de estrs.
La sntesis de protenas de shock acdico es la tercera va por la que la clula regula
el pH interno. Esta sntesis es generada por un pH ambiental de 3,0 a 5,0 proveyendo
un conjunto de protenas reguladoras distintas de las protenas de la respuesta de
tolerancia al cido.
2.5.4. Oxgeno
El metabolismo de los microorganismos est fuertemente infludo por el oxgeno
molecular. Los organismos que dependen de la respiracin aerbica, para los cuales el
oxgeno es el aceptor final de electrones, se conocen como aerbicos estrictos. Un
ejemplo de stos es la actinobacteria Streptomyces. Por el contrario para los organismos
anaerbicos estrictos el oxgeno es generalmente txico. Las clulas somticas de las
bacterias del gnero Clostridium son muy sensibles al oxgeno mientras que los
endosporos estn protegidos de su efecto letal. Un grupo intermedio de organismos,
los anaerbicos facultativos, pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno
molecular, por ejemplo la levadura Saccharomyces cerevisiae que puede obtener su
energa tanto de la fermentacin como de la respiracin. Por otro lado estn los
organismos que nicamente toleran al oxgeno, como algunas bacterias lcticas que
8 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2
2.5.6. Temperatura
En muestras de agua recogidas en las proximidades inmediatas a las surgencias
termales se han hallado hasta 108 - 109 clulas bacterianas por mL. Las bacterias
adaptadas a elevadas presiones hidrostticas (250260 bares o sea 25-26 MPa) muestran
adems una notable adaptacin a las altas temperaturas, por ejemplo unas bacterias
metanognicas tenan tiempos de duplicacin entre 37 y 65 minutos a 100C bajo tales
presiones (16).
en los recipientes de vidrio que los contienen. Cuando el oxgeno es necesario para el
metabolismo, la fuente usual de suministro es el aire filtrado (5).
La mayora de los mohos, as como unas pocas bacterias y levaduras, cuando crecen
sin alteraciones, forman una pelcula fuerte y contnua en la superficie del medio. En
cambio, si crecen bajo el efecto de una agitacin vigorosa, originan bolitas de una pulpa
fibrosa dispersadas por todo el medio fludo (20).
Los requerimientos nutritivos de los mohos son muy parecidos a los de las levaduras,
salvo que los mohos presentan ms diversidad en los tipos de substratos orgnicos que
pueden asimilar (5). En el laboratorio un medio corriente es el extracto de malta, con o
sin extracto de levadura y agar. Para el crecimiento de algunos mohos se utiliza un
medio definido constitudo por sacarosa y sales minerales conocido como agar Czapek,
a veces adicionado de extracto de levadura. Cuando se desea aislar hongos osmfilos se
le agrega 20 a 50% de sacarosa (18).
Un medio con cloruro de amonio y otras sales, sin ninguna fuente de carbono, cuando
se incuba aerbicamente tendr disuelto CO2 atmosfrico y en presencia de luz
permitir el crecimiento de algas y cianobacterias. Pero si se incuba en la obscuridad
facilitar el desarrollo de bacterias que obtienen energa por oxidacin del amonio (20).
Sea cual fuere la composicin qumica del medio, es necesario que todos los
componentes estn perfectamente mezclados, de modo que el microorganismo tenga
acceso a todos los nutrientes. La mayora de las bacterias y algunas levaduras crecen
comnmente como clulas individuales o como agregados de varias de ellas, y
permanecen suspendidas en el medio. Cuando se trata de una poblacin densa o las
clulas secretan polmeros, el medio fludo se vuelve viscoso y adems, pueden formar
grandes agregados o crecer como una pelcula mucosa sobre la superficie.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 11
2. 7 Esterilizacin
2.7.1. Accin del calor
Con el fin de evitar el crecimiento de microorganismos extraos introducidos por la
contaminacin, se esterilizan con vapor de agua a presin todos los materiales que
integran el medio de cultivo. El vapor tambin se suele emplear para esterilizar
recipientes y otras superficies con las que el medio est en contacto (20).
2. 8. Desinfeccin
Los desinfectantes son substancias qumicas que matan a las clulas somticas
adheridas a las superficies inanimadas, pero no necesariamente a las formas
14 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2
2. 9. Interacciones microbianas
2.9.1. Antibiosis
Un microorganismo puede producir metabolitos que hagan el ambiente desfavorable
para el desarrollo de otros o que perturben su metabolismo hasta el punto de que
mueran o sean incapaces de reproducirse. El fenmero recibe el nombre de antibiosis o
antagonismo.
Los antibiticos constituyen un grupo heterogneo de molculas orgnicas
relativamente pequeas, producidas por unos microorganismos para inhibir a otros a
una concentracin muy baja. La mayora de los microorganismos notoriamente
productores de antibiticos se alojan en el suelo (8).
Otro grupo se molculas antagonistas son las bacteriocinas. Constituyen un grupo
relativamente heterogneo de pequeas protenas sintetizadas en los ribosomas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 15
dao ni provecho para la otra, por ejemplo cuando los microbios colonizan la superficie
externa de una planta obteniendo energa de la metabolizacin de exudados
producidos por el hospedador. Otro ejemplo es la influencia favorable de un microbio
facultativo sobre el desarrollo de uno anaerobio, el primero reduce la tensin de
oxgeno y crea un ambiente adecuado para que prospere el segundo (27).
Las comunidades microbianas estn caracterizadas por siete diferentes mecanismos
biolgicos:
a) provisin de nutrientes especficos por los diferentes miembros de la comunidad,
b) moderacin de la inhibicin del crecimiento,
c) interacciones que causan la alteracin de los parmetros de crecimiento de las
poblaciones individuales, produciendo un desempeo de la comunidad ms
eficiente y/o competitivo,
d) actividad metablica combinada no expresada por las poblaciones individuales
aisladas,
e) cometabolismo,
f) reacciones de transferencia de hidrgeno,
g) interaccin entre varias especies dominantes (28).
2.9.2.1. Fijacin simbitica del nitrgeno
Una particularidad de las plantas leguminosas es su capacidad para asociarse con
bacterias fijadoras de nitrgeno pertenecientes a los gneros Rhizobium, Sinorhizobium,
Bradyrhizobium y Azorhizobium. Esta simbiosis se traduce en el desarrollo del ndulo en
cuyo interior las bacterias se multiplican y transforman el nitrgeno del aire en amonio
(ver 3.10). La asimilacin de ese amonio por parte
de las plantas les permite crecer en suelos pobres
en nitrgeno.
En la primera etapa, la planta secreta en su
exudado radicular unos flavonoides que atraen a
los rizobios por quimiotactismo y activan en la
bacterias la expresin de ciertos genes que
determinan la produccin, en los rizobios, de
molculas fundamentales para el reconocimiento
y la infeccin de la planta hospedadora
induciendo la formacin de los ndulos. Las
bacterias se adhieren a los pelos absorbentes de la
raz e inducen la curvatura del extremo de los
mismos (29).
Los rizobios infectan la planta mediante un filamento de infeccin que avanza hacia
la base del pelo y el interior de la raz, simultneamente las clulas de la corteza interna
de la raz se dividen y forman el primordium nodular. La multiplicacin muy intensa
de estas clulas provoca la aparicin del ndulo, que es un verdadero rgano
especializado en el intercambio metablico entre ambos asociados.
Las simbiosis entre rizobios y leguminosas son muy especficas, por ejemplo R.
leguminosarum induce la nodulacin en el poroto pero no en la alfalfa (30). Las bacterias
no se mezclan con los orgnulos citoplasmticos, sino que se mantienen confinadas en
los simbiosomas que son vesculas protegidas por membranas. Los simbiosomas del
lupino tienen una sola bacteria, los de la soja varias. La figura 4 muestra el corte de un
ndulo.
La membrana del simbiosoma acta a modo de
barrera que controla el flujo de cidos carboxlicos
(malato, succinato, fumarato). stos constituyen la
fuente de carbono para los bacteroides. Tales cidos
proceden de la oxidacin de azcares sintetizados en
las hojas por la fotosntesis. Durante el proceso de
formacin de los simbiosoma s, las bacterias se van
transformando en bacteroides que expresan diversas
protenas especficas como la enzima nitrogenasa y
algunos citocromos. Las clulas intersticiales sin
infectar intervienen en las ltimas etapas de la sntesis
de ureidos, asparagina o glutamina, por incorporacin
del nitrgeno fijado. stos se exportan hacia la parte
area a travs de los vasos del xilema.
Para que los ndulos de las leguminosas fijen
nitrgeno es imprescindible que contengan
leghemoglobina cuyo grupo hemo es sintetizado por el
vegetal (32). La fijacin de nitrgeno requiere gran
cantidad de energa que se produce en los bacteroides
durante la oxidacin de los cidos dicarboxlicos y la
leghemoglobina transporta el O2 a una concentracin
baja pero estable que permite mantener una elevada
actividad respiratoria sin afectar la nitrogenasa, pues
esta enzima se inactiva en presencia de oxgeno (30).
La rizsfera de algunas plantas contienen acumulaciones de bacterias fijadoras, tal
como Azotobacter paspali sobre la superficie de la raz de Paspalum notatum y
Azospirillum brasilense en la de caa de azcar. Las bacterias se hallan en el espacio
intercelular del crtex radical, en una simbiosis donde se benefician los dos
participantes de la asociacin. Por otra parte, el helecho de agua Azolla contiene a la
cianobacteria Anabaena azollae en las cavidades de las hojas. Nostoc vive
simbiticamente en el lquen Peltigera y sobre las races areas de Cycas y Gunnera (29).
Varias dicotiledneas que no pertenecen a las leguminosas, tambin contiene ndulos
en las races capaces de fijar N2 . En la mayora de los casos se trata de actinomicetos del
gnero Frankia. En la figura 5 se esquematiza la forma en que los filamentos penetran a
las clulas de la raz y produce ndulos donde tambin se encuentra una hemoglobina
que facilita la provisin de O2 al endfito (32).
Un inoculante para enriquecer el suelo con la bacteria simbitica deseada, contiene
altas concentraciones celulares en un substrato que favorece largos perodos de
supervivencia sin prdidas de las caractersticas fisiolgicas del microorganismo. Los
pasos a seguir comprenden:
a) seleccin de las cepas convenientes por su mayor eficiencia;
b) cultivo del microorganismo en un medio lquido;
c) eleccin, preparacin y esterilizacin del material de soporte;
d) impregnacin del soporte con el cultivo lquido que posee un alto nmero de clulas,
e) control del nmero de bacterias vivas en el producto terminado (34).
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2
2.9.2.3. Biopelculas
Las biopelculas que se forman en el forraje ingerido
por el ganado vacuno y otros rumiantes, estn
inicialmente formadas por microorganismos que
digieren la celulosa del material vegetal y producen
cidos grasos y otros metabolitos. Luego las clulas de
otras especies invaden la pelcula y comienzan a usar
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 19
2.9.3. Predacin
Algunos microorganismos predadores se alimentan de las bacterias, como los
protozoos, mixobacterias, acrasiomicetos y varios flagelados fotosintetizantes que no
siempre estn clasificados como algas.
Siempre que existen protozoos en estado trfico hay una poblacin bacteriana que le
sirve de presa. Debido a que una sola clula de protozoo consume entre divisiones 10 3 a
10 4 bacterias, una comunidad con 103 protozoos por mL g est caracterizada por una
predacin activa. Un suelo suele tener 109 bacterias/cm3, pero en solucin los
protozoos reducen el nmero de clulas a 106 /cm3
Sin embargo, a pesar de su abundancia y actividad, los protozoos no suelen eliminar
sus presas porque esto acarreara la desaparicin consecuente del predador. Con una
baja densidad de presas el protozoo debe utilizar gran cantidad de energa para llegar a
las pocas clulas que le sirven de alimento y puede morir cuando se acaben o bien
enquistarse (27).
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 1
3. Actividad microbiana
3.1. Suelo
El medio donde se desarrollan los microrganismos telricos est dividido en una
multitud de microambientes donde las condiciones pueden ser muy diferentes unas de
otras, confirindole una microheterogeneidad inusual. El soporte orgnico y mineral no
es inerte y los diversos procesos fsicos, qumicos y biolgicos que ocurren en el suelo
estn ntimamente intrincados. La energa necesaria para el desarrollo de los
microorganismos hetertrofos, que son la mayora de las micropoblaciones del suelo,
proviene indirectamente de la fotosntesis. Hay tambin una microfauna que a veces
interviene activamente al lado de la microbiota (1).
El suelo est formado por cinco componentes principales: materia mineral, agua, aire,
materia orgnica y seres vivos. La cantidad de estos constituyentes no es la misma en
todos los suelos. El aire y el agua juntos representan aproximadamente la mitad del
volumen del suelo. El agua que se mueve por la gravedad se encuentra en los poros
ms grandes del suelo, que frecuentemente estn llenos de aire. Parte del agua es
retenida por interacciones con otros constituyentes del suelo y slo una fraccin de sta
es aprovechable por los organismos vivos. La aireacin y la humedad estn
directamente relacionados ya que los poros que no contienen agua estn llenos de gas.
La atmsfera subterrnea es diferente de la superficial porque contiene generalmente
de diez a cien veces ms CO2, y menos O2, debido a la actividad biolgica (2).
Un corte vertical del suelo revela un perfil definido por capas horizontales:
O) una mantillo superficial, delgado o grueso, de restos orgnicos en descomposicin;
A) un horizonte del cual han desaparecido algunos constituyentes inorgnicos durante
el largo perodo de formacin del suelo pero ms o menos rico en materia orgnica,
que contiene races, pequeos animales y la mayora de los microorganismos;
B) otro horizonte en el cual se depositan algunos constituyentes provenientes de las
capas superiores, que contiene poca materia orgnica, algunas races y escasos
microorganismos;
C) un estrato de composicin semejante al material original del cual se origin el
suelo, donde hay pocas formas de vida (3).
Distribucin de los microorganismos en un suelo expresado como miles por gramo (3)
Profundidad Bacterias Bacterias Actinomicetos Hongos Algas
cm aerobias anaerobias
3-8 7.800 1.950 2.080 119 25
20-25 1.800 379 245 50 5
35-40 472 98 49 14 0,5
65-75 10 1 5 6 0,1
135-145 1 0,4 ... 3 ...
Variacin de la poblacin fngica, en miles por gramo, a diferentes niveles de humedad (3)
Humedad promedio Total Hifas Esporas Esporas como
del suelo % % del total
8,9 99 60 39 39,4
11,2 89 57 32 36,0
18,5 142 113 29 20,5
24,2 149 133 16 10,7
27,1 173 153 20 11,5
Influencia del anegamiento sobre la densidad, en miles por gramo, de diferentes grupos
microbianos en la risfera de maz cultivado en un suelo salino (1)
Suelo a la capacidad de campo Suelo anegado
Grupos Densidad en Densidad R/S Densidad en Densidad R/S
microbianos la rizsfera fuera de la la rizsfera fuera de la
(R) rizsfera (S) (R) rizsfera
Sulfato-
reductores 44 17 2,6 550 11 50
Azotobacter 0,8 0,8 1,0 6 1 6
Amonificantes 4.200 15 280 22.000 4.500 5
3.2. Metabolismo
La energa requerida para el mantenimiento de la vida y para la sntesis de los
componentes celulares es obtenida por la transformacin ordenada de las substancias
que ingresaron a la clula. stas son modificadas por una serie de reacciones
enzimticas sucesivas, a travs de rutas metablicas especficas.
Las vas metablicas
tienen las funciones
de proveer los
precursores para los
componentes
celulares y obtener
energa para los
procesos de sntesis y
otros que requieran
energa. Primero, los
nutrientes son rotos
en pequeos
fragmentos durante el
catabolismo y luego
convertidos por las
reacciones del
metabolismo
intermediario en
cidos orgnicos y
steres de fosfato. La
mayora de los
compuestos de bajo peso molecular que representan las unidades para sintetizar la
clula, son aminocidos, bases pricas y pirimidnicas, fosfatos de azcares, cidos
orgnicos y otros metabolitos, algunos producidos al final de largas cadenas de
reacciones. Estas substancias sirven para la sntesis de las macromolculas (cidos
nucleicos, protenas, materiales de reserva, constituyentes de la pared celular) durante
el anabolismo (6). La figura 3 representa las vas metablicas de organismos que
respiran aerbicamente.
durante la hidrlisis. Producen amilasas muchos hongos del suelo as como bacterias
de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces entre otras.
La -amilasa, presente en plantas y bacterias, tambin degrada los enlaces 1,4--
glucosdicos pero comienza su accin por el extremo libre no reductor del almidn,
liberando maltosa mientras contina el color frente al yodo. La hidrlisis se detiene en
los puntos de ramificacin de la amilopectina y el residuo se conoce como dextrina
lmite (6). La pululanasa o isoamilasa hidroliza los enlaces 1,6--glicosdicos quitando
las ramas de la amilopectina o las dextrinas. La maltasa hidroliza la maltosa a glucosa
(3). Si estas enzimas acompaan a las anteriores se logra una degradacin total del
almidn.
Las amilasas son inducibles, pero
su produccin depende del tipo de
almidn empleado. Las -amilasas
de Bacillus stearothermophilus y B.
licheniformis son termo estables as
como las excretadas por algunos
clostridios termfilos, los que
tambin excretan pululanasas (4).
La actividad amiloltica vara a
veces con el tipo de vegetacin, la
humedad y las caractersticas del
suelo. El almidn es degradado por
clostridios fijadores de nitrgeno en
los suelos anegados, a los que
recientemente se incorpor material
vegetal rico en polisacridos (3).
3.3.6.Degradacin de quitina
La quitina le sigue a la
celulosa en abundancia. Forma
parte del exoesqueleto de
artrpodos y de la pared celular
de hongos filamen -tosos. Est
constituda por unidades de N-
acetil-glucosamina con enlaces
-1,4-glicosdicos (6). La
degradacin por la quitinasa
produce poca N-acetil-
glucosamina y predominan los
oligmeros (quitobiosa,
quitotriosa). Los oligmeros son
convertidos en monmero por la
-N-acetil-glucosaminidasa. La
quitin-desacetilasa transforma la
quitina en quitosano y acetato
por hidrlisis de los grupos
acetamida (10). Un gran nmero
de bacterias y actinomicetos
pueden hidrolizar quitina. Entre los hongos con tal propiedad se encuentran Mucor y
algunos Aspergillus (4). La sntesis de quitinasas es inducida en las plantas por los
agentes patgenos. La figura 11 muestra fibrillas de quitina obtenidas de la pared
fngica.
extracelulares actan como toxinas, mientras que ciertos polipptidos bacterianos son
antibiticos. La degradacin de protenas en el suelo va seguida de la formacin de
amonio por la posterior descomposicin de los aminocidos (6).
3.5.Respiracin
3.5.1. Degradacin de hexosas
Hay varias vas para convertir la glucosa a piruvato,
uno de los compuestos intermediarios ms importantes del metabolismo. Una es la va
de la fructosa-1,6-difosfato), esquematizada en la figura 17 . El balance es la formacin
de dos molculas de ATP (energa qumica por fosforilacin a nivel de substrato) y dos
de NADH2 (poder reductor),
por lo que constituye la
secuencia de reacciones ms
importante para los orga nismos
anaerbicos. Otra es la va
oxidativa de la pentosa-fosfato
que se muestra en la figura 18,
la cual adems provee ribosa-
fosfato para la sntesis de
nucletidos. El camino inverso
es la ruta ms importante en la
fijacin autotrfica de CO2 . La
va del ceto-desoxi-fosfo-
16 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3
3.6. Fermentaciones
Las rutas bioqumicas de la
fermentacin varan mucho. Por
ejemplo, las levaduras pueden
fermentar una molcula de un
monosacrido de seis carbonos,
como la glucosa o la fructosa,
produciendo dos molculas de etanol
y dos de CO2. Pero, para las
bacterias, se pueden agrupar esas
vas en dos tipos generales:
homofermentativos (un producto
principal) o heterofermentativos (dos
o ms productos). Los productos de
la fermentacin no pueden ser
metabolizados, en condiciones
anaerbicas, por el organismo que
los produce. En las fermentaciones el ATP se produce por fosforilacin a nivel de
substrato, pues se sintetiza durante el catabolismo de un compuesto y en pasos
enzimticos concretos, pero requiere que la fuente genere un intermediario de alta
energa (6).
3.6.1. Fermentaciones lcticas
Las lactobacterias llevan a cabo este tipo de fermentacin en presencia o ausencia de
aire, aunque prefieren concentraciones reducidas de oxgeno. En cambio las
enterobacterias slo producen cido lctico en condiciones anaerbicas. El ambiente
natural de lactobacterias es la leche y los lugares donde es procesada (Lactobacillus
delbrueckii var. bulgaricus, Lactococcus lactis), la superficie
de plantas intactas o podridas (Lactobacillus plantarum,
L. delbrueckii, Leuconostoc mesenteroides), el tracto
intestinal y las mucosas de animales y humanos
(Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecalis). Por tal
motivo suele encontrarse cultivos puros naturales,
como en algunos productos lcteos, material ensilado,
chucrut (14). Las bacterias homofermentativas (por
ejemplo Lactobacillus casei) producen lactato puro o casi
puro, metabolizando la glucosa por va de la fructosa-
difosfato y reduciendo el piruvato a lactato. Segn las
especies se forma D (-), L (+) o DL-lactato. Las bacterias
heterofermentativas (Lactobacillus brevis) degradan la
glucosa al comienzo por la va de las pentosas y luego
transforman el acetil-P en etanol o acetato y el piruvato
en lactato (6). La figura 23 muestra un esquema de la
fermentacin heterolctica.
La fermentacin lctica permite la conservacin de los
forrajes pues las lactobacterias cido-tolerantes
18 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3
3.8.1. Desnitrificacin
20 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3
La desnitrificacin transitoria y
localizada en los suelos consiste en
la reduccin anaerbica del nitrato
a compuestos voltiles (N2 , N2 O,
NO). Es producida por bacterias
que respiran y solamente pueden
crecer anaerbicamente en
presencia de nitrato, por ejemplo
Pseudomonas fluorescens, Bacillus
licheniformis, Paracoccus denitrificans
y Thiobacillus denitrificans. Ocurre
con frecuencia en los suelos
anegados, especialmente cuando se
aplicaron juntos fertilizantes
orgnicos y nitrato (1). No se
observa este proceso en mohos ni
actinomicetos (2). La figura 29
expone la velocidad relativa de la
desnitrificacin segn la cantidad
de agua que ocupa los poros del
suelo y la figura 30 muestra un
esquema del ciclo del nitrgeno.
3.8.2. Reduccin a nitritos
Algunas bacterias facultativas
como Enterobacter y Escherichia,
pueden respirar reduciendo el
nitrato a nitrito, que se acumula en
el ambiente, pero no producen N2 .
Luego reducen el nitrito a amonio
por la va asimilatoria, si hay
deficiencia de NH 4 + en el medio (4).
La figura 22 muestra el proceso de
transporte de electrones en
Escherichia coli cuando usa nitrato
como aceptor de electrones.
3.8.3. Sulfatorreduccin
Es la transferencia de hidrgeno
al sulfato aceptor terminal de
electrones en la respiracin
anaerbica, reducindolo a H2 S. Este proceso,
llamado tambin reduccin desasimilatoria de
sulfatos, es cumplido por bacterias anaerbicas
obligadas tales como Desulfovibrio,
Desulfatomaculum. Los donantes de hidrgeno
son lactato, acetato y otros cidos grasos,
metanol, etanol y compuestos aromticos.
Los microorganismos reductores de sulfato son
responsables de la precipitacin de Fe++ y otros
cationes metlicos en aguas polutas, y la
corrosin de metales enterrados. Desulfuromonas
y algunas arqueobacterias termoflicas pueden
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 21
reducir el azufre elemental a H2 S (5). Por otra parte, casi todas las bacterias, as como los
hongos pueden reducir sulfatos para sintetizar aminocidos azufrados por la va de la
reduccin asimilatoria de sulfatos (5). La figura 31 presenta un esquema del ciclo del
azufre.
3.9.1. Metanognesis
El ecosistema donde ocurre la
metanognesis comprende
pantanos, arrozales, sedimentos
de lagos, estanques y estuarios,
digestores de aguas residuales y el
rumen. En tales ambientes
anaerbicos los substratos
orgnicos son fermentados a
acetato, CO2 e H2 . Estos productos
son utilizados por las
arqueobacterias formadoras de
metano entre las que se
encuentran Methanobacterium,
Methanococcus, Methanosarcina,
Methanospirillum (15). Como el CO2
es usado como un aceptor de
hidrgeno durante la generacin
de energa, el proceso se suele
llamar respiracin del carbonato. Algunas
bacterias metanognicas tambin pueden
convertir el CO en metano. Por otra parte, estas
arquibacterias son auttrofas y fijan CO2 por la
va acetil-CoA y piruvato, para la sntesis del
material celular (4). Ver 5.3.
3.9.2. Nitrificacin
En el curso de la degradacin de substancias
nitrogenadas se libera amonio. La conversin
del amonio a nitrito es llevada a cabo por las
bacterias nitritantes del suelo: Nitrosolobus,
Nitrosomonas, Nitrosospira. En el ambiente
marino se encuentra Nitrosococcus. No hay
bacterias que conviertan directamente el amonio
en nitrato. El nitrito es oxidado a nitrato por las
bacterias nitratantes Nitrobacter, Nitrococcus (en
el mar) y otras. Ambos pasos constituyen la
llamada nitrificacin del suelo (1). Estas bacterias
autctonas del suelo pueden ser cultivadas en
22 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3
3.9.3. Sulfooxidacin
Los Thiobacillus son unas bacterias capaces de obtener energa por la oxidacin de
compuestos de azufre (sulfuro, azufre, tiosulfato) hasta sulfatos. La mayora son
auttrofos y dependen de la fijacin de CO 2 como T. thiooxidans, T. denitrificans (1). Entre
los hetertrofos se encuentran por ejemplo T. novellus y Sulfolobus acidocaldarius. ste
ltimo es una arqueobacteria termoflica de las aguas termales azufradas. T. thiooxidans
es un organismo aerobio que produce cido sulfrico y tolera una solucin 1N del
mismo. El agregado de azufre permite neutralizar suelos calizos y reducir la incidencia
de algunos patgenos vegetales debido a la acidificacin provocada por los
sulfooxidantes del suelo. T. denitrificans puede reducir nitratos anaerbicamente pero
no lleva a cabo una reduccin asimilatoria y necesita la presencia de sales de amonio en
el medio (3). Las bacterias filamentosas Beggiatoa y otras pueden oxidar sulfuros a
azufre elemental que se acumula en la clula. Algunas especies de Beggiatoa son
organismos heterotrficos (1).
3.9.4. Ferrooxidacin
Las siderobacterias (por ejemplo Gallionella ferruginea y Leptothrix ochracea) pueden
oxidar los iones ferrosos a frricos, y tambin Thiobacillus ferrooxidans. La vaina de la
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3 23
3.10. Biosntesis
En el metabolismo normal, todos los compuestos que necesita la clula se sintetizan
en la cantidad justa. Este control se realiza por una serie de reacciones reguladoras
estrictas que detienen la formacin de productos intermedios y finales de una reaccin
metablica, cuando un compuesto dado alcanza una determinada concentracin. Sin
embargo, existen mutantes en los que el mecanismo de regulacin es tan defectuoso
que hay una sobreproduccin de algunos metabolitos y los excretan al medio, lo que es
aprovechado en la produccin industrial (13).
3.10.3. Sntesis de
otros compuestos
Los nucletidos de
purina y pirimidina
son las unidades
para la sntesis de los
cidos nucleicos.
Tambin forman
parte de algunas
coenzimas. La parte
glicosdica deriva de
la ribosa-5-fosfato cuya reduccin a desoxirribosa ocurre a nivel del nucletido (6). La
figura 38 muestra los precursores de purinas y pirimidinas.
Entre los lpidos bacterianos predominan los cidos grasos saturados o
monoinsaturados, los triglicridos y esteroides son raros. Los ms importantes son los
lpidos complejos donde
un grupo OH del glicerol
est esterificado con
fosfato o un azcar. El
grupo fosfato a su vez
est esterificado con
serina, etanolamina o
glicerol. La formacin de
los cidos grasos de
cadena larga implica la
condensacin, en pasos
sucesivos, de los grupos
acetilo al butiril-ACP,
alargando cada vez la
cadena en dos carbonos
(6) como se muestra en la
figura 39.
Cuando las bacterias
crecen sobre lactato,
piruvato, acetato u otro
26 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 3
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 1
4.2. Reproductoras
Anamorfo es el hongo con multiplicacin
asexuada y teleomorfo es el mismo con
reproduccin sexuada. Se les asigna
distinto gnero y especie. Holomorfo
indica el ciclo de vida total.
Esporas son los elementos de
perpetuacin de la especie. De acuerdo a la
morfologa reciben distinto nombre:
alantospora con forma de banana,
aleuriospora con base plana, dictiospora
2 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4
4..3. Anamrficas
Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal que al
madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas separadas por una zona
libre de citoplasma (disyuntor) cuya pared se rompe liberando las entosporas o
clamido-artrosporas. Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o clula de
resistencia, terminal o interh ifal, con pared gruesa y substancias de reserva.
Blastosporas o blastoconidios son las esporas que se originan de una parte de una
clula somtica, una hifa, un conidiforo u otra espora, y se desarrollan antes de la
formacin del septo que lo separa de la
clula de origen.
Conidios o conidiosporas son las esporas
asexuadas externas. Si estn implantadas
directamente sobre la hifa se llaman ssiles.
La parte del micelio que origina y sostiene a
las esporas se denomina esporforo y si se
trata de conidios se dice conidiforo. Filide
es la clula conidigena que desde un
extremo origina por brotacin y sin
aumentar su longitud, los fialoconidios o
fialosporas. La pared de la filide suele
extenderse en el pice formando un collarn.
Anlide es una clula conidigena con el
pice ancho y cicatrices en anillo, que se
alarga con la formacin de cada espora. Los
conidiforos pueden ser simples o
ramificados y a veces estn agrupados en un
conidioma. En Penicillium cada nivel de
ramificaciones recibe distinto nombre, se
llama mtulas a las que sostienen a las
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 3
4.4. Teleomrficas
Gametas son las clulas
diferenciadas que se fusionan y
gametangios las estructuras que las
producen. Homotlicos son los
hongos que forman los gametangios
de distinta polaridad en el mismo
micelio. Cuando cada micelio da slo
gametangios de la misma polaridad,
es necesario enfrentar dos micelios
distintos del mismo hongo
heterotlico para originar las esporas sexuadas. En muchos macromicetos se produce la
somatogamia o fusin de clulas no diferenciadas que originan un micelio dicaritico,
a veces con una conexin hifal a manera de puente (fbula) entre cada clula.
Las oosporas son hipnosporas sexuadas originadas por heterogamia. La estructura
femenina u oogonio produce unos elementos grandes inmviles u oosferas que en
algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas) producidos en la
estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en contacto con el anteridio por
medio de los tubos de fertilizacin.
Las zigosporas son hipnosporas sexuados formados por isogamia. La hifa emite un
mameln en el que se diferencian dos partes: suspensor y gametangio. Los
gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar rodeada por hifas
protectoras nacidas de los suspensores.
Ascosporas son las esporas sexuadas internas que se originan en un nmero limitado
(generalmente 4 u 8) dentro de una clula llamada asco. En las levaduras se fusionan
los citoplasmas de dos clulas de polaridad distinta e inmediatamente o mucho
despus de la cariogamia ocurre la meiosis formndose las ascosporas dentro del asco
libre. En los hongos filamentosos se producen gametangios (anteridio y ascogonio), en
general morfolgicamente distintos, y los ncleos pasan a travs del poro formado en
el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En algunas especies
heterotlicas los espermacios, microconidios incapaces de germinar, cumplen la
funcin de gametas masculinas. Despus de la fecundacin nacen hifas ascgenas
binucleadas cuyas clulas terminales, en forma de cayado, se convierten en ascos.
Las hifas somticas
vecinas a los elementos
sexuales suelen formar un
plectnquima originando
un ascoma que si est
cerrado y es esfrico se
llama cleistotecio. Cuando
tiene las hifas frtiles
(himenio) estratificadas y
generalmente una forma
de pera, poseyendo en la
madurez un poro u ostolo
por donde salen las
ascosporas, se denomina
peritecio. Si el
plectnquima tiene forma
de copa con el himenio
expuesto se habla de
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 4 5
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 1
5. Rumen y biogas
La combinacin del reciclado de residuos animales con el cultivo de abonos verdes
pueden proporcionar el nitrgeno necesario para la tierra agrcola. El reciclado puede
hacerse mediante digestin anaerbica, pues el contenido relativo de nitrgeno es
mayor en el estircol digerido que en el fresco. El lodo remanente en el digestor es una
alternativa para mejorar los suelos hortcolas (1). Adems este proceso permite obtener
metano, un combustible gaseoso. La metanognesis ocurre naturalmente en el rumen
de los herbvoros.
El aumento del inters popular para contrarrestar la polucin ambiental hace de la
digestin anaerbica el medio conveniente para tratar tanto los efluentes lquidos como
los desechos slidos, adems de constituir una fuente alternativa de energa.
5.1. Metanognesis
El dixido de carbono es comn en la naturaleza y es un producto importante del
metabolismo energtico de los organismos quimioorganotrficos. Los procariotas
reductores de CO2 ms importantes son los metangenos, un grupo de arqueobacterias
anaerbicas estrictas que emplean generalmente el H2 como donante de electrones (2) .
Hay por lo menos diez substratos que se convierten en metano por la accin de uno u
otro metangeno, todos los cuales liberan energa adecuada para la sntesis de ATP,
incluyendo formiato, acetato, metanol, metilmercaptano y metilamina (3). Se los divide
en tres clases:
celobiosa y glucosa libre. Por accin de los fermentadores primarios, la glucosa origina
cidos orgnicos, alcoholes, H2 y CO2 . Todo el hidrgeno producido es consumido
inmediatamente por las bacterias metanognicas, las acetognicas o las reductoras de
sulfato si ste se halla en alta concentracin. Adems el acetato puede ser convertido en
metano por otros metangenos (2) .
5.3. Rumen
Los rumiantes son mamferos herbvoros que poseen un rgano especial en cuyo
interior se lleva a cabo la digestin de celulosa y otros polisacridos mediante la
actividad microbiana, porque estos animales carecen de las enzimas necesarias para
digerirlos.
El rumen tiene un tamao relativamente grande, con una capacidad de 100 a 150
litros en una vaca o 6 litros en una oveja, y se encuentra a una temperatura y acidez
constantes (39C, pH 6,5). La naturaleza anxica del rumen es un factor significativo
4 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5
para su funcionamiento (2) . El forraje llega al rumen o panza, mezclado con la saliva
que contiene bicarbonato y all es sometido a un movimiento rotatorio durante el cual
ocurren las fermentaciones. Esta accin peristltica facilita la adherencia microbiana al
material celulsico suspendido (3) .
Hay una amplia variedad de diseos pero los digestores de una sola etapa con
campana fija o flotante (figuras 2 y 3) son los ms usados en ambientes rurales. El
estircol digerido es recuperado como un lodo con 10 a 12% de slidos y un
sobrenadante con 2 a 3% de slidos.
La digestin ruminal est
estratificada en dos sub-fases una
lquida, y otra con alto contenido
en slidos donde es mayor la
actividad metablica y la
concentracin de intermediarios.
Similarmente los digestores de dos
fases tienen un mejor rendimiento
en metano que los de una sola (9) .
El digestor de campana fija cuyo esquema se muestra en la figura 3, tiene la cubierta
inmvil y cuenta con la presin hidrosttica autogenerada para distribuir el biogs.
Como se colecta el gas en el mismo digestor, parte de la suspensin digerida es
desplazada hacia un tanque de almacenamiento cuyo nivel sube con la produccin y
baja con el uso del gas. La ventaja de este modelo consiste la ausencia de partes
mviles corrobles (10) .
En la figura 2 se da el esquema de un digestor con campana colectora de gas flotante,
que puede estar directamente sumergida en la suspensin o bien en el aceite retenido
entre las dos paredes concntricas del tanque para lograr el sellado. La descarga del
lquido se hace por rebalse a travs de un cao y la de slidos por una abertura de
inspeccin. La presin del gas depende
del peso de la campana, por lo que
suele colocarse bolsas de arena sobre la
misma (6) . El digestor tipo bolsa que se
muestra en la figura 4, es til en las
regiones subtropicales y tropicales (11).
Otros tipos de reactores permiten el
manejo de grandes cantidades de
residuos por unidad de volumen
generando biogas a mayor velocidad,
como el de contacto anaerbico (figura
5) (12) .
5.5. Residuos
Los materiales que se pueden usar para la generacin de metano son muy variados,
por ejemplo:
residuos de cosechas: maloja de caa de azcar, malezas, paja, rastrojo de mz y
otros cultivos;
residuos de origen animal: desechos de establos (estircol, orina, paja de camas),
camas de gallinas ponedoras, boigas de cabras y ovejas, desperdicios de matadero
(sangre, vsceras), desperdicios de pesca, restos de lana y cuero;
residuos de origen humano: basura, heces, orina;
residuos agroindustriales: tortas de oleaginosas, bagazo, salvado de arroz, desechos
de tabaco y semillas, desperdicios del procesamiento de hortalizas y frutas, limos
de prensas de ingenios azucareros, residuos de t, polvo de las desmotadoras e
industria textil;
mantillo forestal: ramitas, hojas, cortezas;
plantas acuticas: camalote, algas marinas (14).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 7
La DQO es la cantidad total de oxgeno (en mg) necesaria para oxidar completamente
las substancias orgnicas e inorgnicas contenidas en un litro de suspensin y se
emplea como medida indirecta de la cantidad de substrato transformable. Otra manera
de expresar la cantidad de substrato disponible es mediante los valores de slidos
totales (ST) que es el material remanente despus de evaporar a 103-105C o de slidos
voltiles (SV) que es el material orgnico descompuesto a 550 + 50C (13) .
Otro parmetro de la digestibilidad de los residuos es la demanda biolgica de
oxgeno (DBO) que es el consumo de oxgeno, en mg/L de suspensin, durante la
degradacin por microorganismos durante 5 das a 20C. Tanto la DBO como la DQO
son proporcionales al contenido de materia orgnica en la suspensin a degradar, pero
la primera es ms representativa de la degradabilidad de la misma. Tambin puede
usarse el valor de carbono orgnico total (COT) que se obtiene midiendo el CO 2
formado en la combustin (8) .
En el cuadro siguiente se muestra la digestibilidad de algunos vegetales expresada
como el % de slidos voltiles desaparecidos luego de una incubacin de 48 hs con
lquido ruminal diludo en buffer fosfato-bicarbonato a 39C y otras 48 hs con pepsina-
HCl, a igual temperatura para hidrolizar parcialmente las protenas de los
microorganismos y del sustrato (7).
Los desinfectantes clorados son muy txicos an a bajas concentraciones (<1 mg/L)
pero son rpidamente absorbidos por los slidos e inactivados. La mayora de los
detergentes sintticos son degradados fcilmente pero si la concentracin es mayor que
20 mg/L pueden afectar la digestin. Los compuestos de amonio cuaternario son
persistentes y txicos a bajas concentraciones (1mg/L). Los solventes clorados y
derivados son txicos en concentraciones de 1 mg/L. La toxicidad de los sulfatos se
manifiesta a concentraciones mayores que 1 g/L y la inhibicin total ocurre por sobre
4,5 g/L (6).
5.9. Operacin
rodeados de anillos de hojas, aserrn o paja, los que generarn calor durante el
compostaje. Una vez transformados los materiales de estos anillos deben ser cambiados
por residuos frescos. El material compostado an podra contribuir a la mezcla de
alimentacin del digestor (14) . El rendimiento promedio en China, durante el verano,
es de 0,2 m3 de gas por da por m3 del digestor mientras que en Sri Lanka aumenta a 0,5
m3 de biogs diarios por m3 del digestor (19).
El operario que maneje diariamente el digestor deber estar adiestrado en la tarea y
poseer las instrucciones escritas. Entre las actividades diarias estarn las de tomar la
temperatura ambiente y del agua, reunir y homogeneizar el material de la carga,
reciclar el efluente, apreciar el olor y la presencia de insectos, y semanalmente controlar
y corregir el pH. Tambin controlar la seguridad en el uso del biogas. Identificar
prdidas, registrar la presin del gas, examinar los puntos de consumo, drenar el
agua del tubo de gas, verificar el nivel de lquido del manmetro (16) .
Pueden usarse varios mtodos para el mezclado de los diversos materiales que se
usan para cargar un diges tor:
mediante la carga diaria,
por manipulacin de los dispositivos de entrada y salida de manera que las
operaciones de alimentacin y descarga favorezcan el mezclado,
por instalacin de dispositivos de mezclado que puedan ser operados
manualmente,
introduciendo la suspensin como un chorro,
haciendo entrar la suspensin como un chorro tangencial al contenido del
digestor.
Si no se hace agitacin se puede reducir la estratificacin usando un digestor de
desplazamiento horizontal (14) . El efluente se retira con baldes o por drenaje en un
terreno desnivelado. Puede ser usado directamente como fertilizante o bien secado
para tener un abono slido (16) .
La velocidad de la degradacin de un material orgnico refleja la interaccin de la
cantidad de biomasa microbiana activa por unidad de volumen y dicho material
disponible para los microorganismos. La carga diaria para un digestor de estircol
vacuno es de alrededor de 6,5 kg slidos voltiles por m3 (9) .
De la frmula empleada para el clculo del volumen del digestor, puede obtenerse la
velocidad de carga L:
L = d/[R (1+D) tF] = C / (Y * V)
En el ejemplo dado, L=3,25 kg/m3 * da, o sea se agregara en total 14 kg de estircol
seco por da (17) .
Los digestores cargados a razn de 0,2-0,5 kg SVT/m3 por da, generalmente sin
agitacin, corresponden a las pequeas instalaciones para granjas cuyo tamao medio
es de 10 m3 . Cuando la carga es mayor que 0,5 kg SVT/m3 da se requiere un mezclado
al menos intermitente y una supervisin mayor que los anteriores (8).
5.10. Seguridad
Adems de gas, la digestin anaerbica genera un efluente que, segn los slidos
residuales y el contenido en nitrgeno o en agua, puede ser usado como abono o para
riego. Por otra parte juega un papel importante en el control de los olores de los
residuos en las granjas o las tierras de relleno. La digestin mesoflica mata organismos
patgenos tales como Salmonella y ciertos enterovirus durante un tiempo de retencin
de 20-30 das. Sin embargo, algunos parvovirus sobreviven an en el rango termoflico.
Tambin la infectividad de los huevos de Taenia saginata es reducida en gran medida
pero sobreviven los huevos de Ancylostoma sp. y Ascaris suum, aunque stos
desaparecen en el rango termoflico (6) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 5 15
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 6 1
6. Micotoxinas
Los mohos crecen sobre materiales vegetales produciendo el deterioro de los
mismos. Forman metabolitos secundarios que actan como antibiticos
favoreciendo la prevalencia del moho frente a otros microorganismos, muchos
de los cuales son txicos para plantas y/o animales. Estos metabolitos que
enferman o matan a los animales que los consumen se conocen como
micotoxinas, y la afeccin se llama micotoxicosis (1) . Las micotoxinas son
compuestos ubicuos que difieren mucho en sus propiedades qumicas, biolgicas y
toxicolgicas. Una micotoxicosis primaria se produce al consumir vegetales
contaminados, y secundaria al comer carne o leche de animales que ingirieron forrajes
con micotoxinas. La presencia de aflatoxina M1 en la leche es consecuencia de la ingesta
de aflatoxina B1 (2) .
Las caractersticas de una micotoxicosis son:
no es una enfermedad transmisible,
en los brotes observados en el campo, el problema es estacional debido a que las
condiciones climticas afectan al desarrollo del moho,
el brote est comnmente asociado a un alimento o forraje especfico,
el examen del alimento o forraje sospechoso revela signos de actividad fngica (2) .
Los primeros casos de micotoxicosis conocidos fueron debidos al centeno
contaminado con Claviceps purpurea, en la Edad Media. En la Argentina, Quevedo (3)
describi la accin de los metabolitos txicos de un Aspergillus del maz sobre varias
especies animales. Pero la intoxicacin masiva de pavos en Inglaterra llev al estudio
de las aflatoxinas en l960, llamadas as pues son producidas por especies del grupo
Aspergillus flavus (2) .
La presencia de las micotoxinas en los vegetales puede deberse:
a la infeccin de la planta en el campo por el hongo patgeno o la colonizacin de
las hojas por los saprobios,
al crecimiento de los mohos saprobios o patgenos post-cosecha sobre los frutos y
granos almacenados,
al desarrollo fngico saprobio durante el almacenamiento de los materiales ya
procesados (1) .
6.4. Peligros
Micotoxinas Trastornos
cido ciclopiaznico desrdenes gastrointestinales y neurolgicos; cambios
degenerativos y necrosis en vsceras (10, 16)
cido peniclico hepatotxico y cancergeno (17)
cido secalnico D teratognico (18)
cido tenuaznico baja eficiencia de la alimentacin, prdida de peso;
congestin y hemorragias de estmago e intestino,
agrandamiento de riones (19, 20)
aflatoxinas dao heptico agudo, cirrosis, induccin de tumores,
eratognesis; excrecin por leche, acumulacin en tejidos
(18, 21, 22,23)
alternariol-metilter mutagnica (18)
beauvericina afecta la contractilidad del msculo liso de mamferos (24)
citocalasinas inhibe la divisin celular, la funcin tiroidea y la secrecin
de amilasa (18)
citrinina toxicidad renal en monogstricos (25)
desoxinivalenol rechazo del alimento, vmitos; inmunosupresin en cerdos
y otros animales (18, 26)
esterigmatocistina cambios patolgicos en hgado, induccin de tumores (18)
fumonisinas leucoencefalomalacia equina; edema pulmonar en cerdos;
cncer heptico en ratas; excrecin por leche (27)
ocratoxina A nefropata en cerdos y aves; acumulacin en rin, hgado
y msculo (28, 29)
rizonina A gastroenteritis, afecta hgado y riones (30)
patulina trastornos gastrointestinales y neurolgicos; induccin de
tumores (10, 18)
tremrgenos (fumitremgeno, dao del sistema nervioso central, temblores (7, 10)
paspalinina, penitrem A,
territrem B y otros)
zearalenona sndrome estrognico en cerdos y ganado de cra; excrecin
por leche junto con y -zearalenol (18, 31, 32)
lmite de 0,1 mg/kg para la toxina T-2 (15) . Hay una correlacin
positiva entre el contenido de esta toxina y el cncer de esfago en
zonas de China (14).
Mientras que los psoralenos originan fotodermatitis y los
tremgenos (penitrem A y otros) afectan al sistema nervioso
provocando temblores y convulsiones, la zearalenona es
hiperestrognica (18) . El JECFA estableci como ingesta mxima
tolerable el valor de 0,5 g toxina/kg peso corporal/da (35).
La ocratoxina A tambin fu considerada como posible cancergena
y los valores presentes en granos han llegado hasta un mximo de 5
mg/kg. El JECFA estim tolerable una ingesta semanal mxima de
0,1 g/kg peso corporal. y se establecieron los lmites de 1 a 50
g/kg para el consumo humano y veinte veces mayor para los
animales (15) .
Tambin los tejidos de las plantas suelen acumular substancias
txicas como mecanismo especfico de defensa ante el ataque de
algunos hongos, como es el caso de las batatas invadidas por
Phytophthora infestans (16).
6.5. Prevencin
El manejo correcto de los cultivos y cosechas de granos y hortalizas, y el control de la
calidad de los alimentos para los animales de la granja constituyen los nicos medios
de prevencin. La presencia de cualquier alteracin organolptica de frutas u hortalizas
es causa suficiente para rechazar el producto por la potencial formacin de toxinas,
debida al deterioro fngico, las que se distribuyen con facilidad por todo el substrato
por ejemplo, en los tomates. En cuanto a los productos de granja, es difcil preveer un
problema al adquirir carnes, huevos y quesos caseros, sin conocer cul era el estado de
los animales y la calidad de los alimentos que consuman (1) .
Contenido de agua % seguro para el almacenamiento de granos a una HR ambiente del 70% (39)
Granos 20C 30C Granos 20C 30C Granos 20C 30C
Mijo 16.5 16,0 Avena 14,5 14,0 Arroz 13,5 13,0
Porotos 15,5 15,0 Trigo 14,5 13,5 Soja 12,0 11,5
Caup 15,5 15,0 Sorgo 14,5 13,5 Lino 9,0 8,5
Cebada 15,0 14,5 Maz 14,5 13,5 Girasol 8,0 7,5
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Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 1
7. Hongos
7.1. Clasificacin
Los hongos son agrupados de acuerdo a diversos criterios que convergen en la
taxonoma o sea el arte de ordenar a los seres segn sus interrelaciones fisiolgicas,
morfolgicas o moleculares. A continuacin se indican algunas caractersticas de los
reinos del dominio Eukarya que contienen a los diversos hongos y en la pgina
siguiente se muestra un esquema de la divisin de los hongos en grandes grupos. Los
mixomicetos y mastigomicetos han sido reubicados en los reinos Protozoa y Chromista
que incluyen a los protozoos y las algas respectivamente (1).
Caractersticas de los reinos del dominio Eukaryota que contienen a los hongos (1)
Fungi Chromista Protozoa
Nutricin Heterotrfica Autotrfica Heterotrfica
(por absorcin (fotosinttica (fagotrfica)
u osmotrfica) o por absorcin) o autotrfica
(fotosinttica)
Pared celular celulosa con quitina ausente en
frecuencia, y -glucanos forma trfica,
sin quitina variable si
ni -glucanos est presente
Crestas mitocondriales tubulares achatadas tubulares
Mastigonemas flagelares tubulares ausentes no tubulares
Los ascomicetos filamentosos son saprobios comunes del suelo por ejemplo
Chaetomium, o estn asociados con estircol como Ascobolus, o forman micorrizas con
rboles por ejemplo Tuber que es un hongo comestible muy apreciado. Tambin los
hay patgenos de plantas, como Sphaerotheca pannosa que causa el mildi de las rosas
(4).
Los basidiomicetos incluyen hongos que viven asociados con plantas formando
micorrizas por ejemplo Amanita una seta letal y Boletus comestible, comprenden a la
mayora de los hongos comestibles como Agaricus y Pleurotus, y algunos causan
enfermedades de vegetales como las royas, pero la mayora son saprobios que crecen
sobre mantillo, compost, estircol o suelo. Su tamao es variable, desde levaduriformes
hasta enormes hongos en repisa (2) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 3
7.2.1. Ascomycota
Xylariales
Pocos son los ascomicetos de gran tamao. Entre los Xylariales se encuentran
Xylaria hypoxylon (figura 1) que afecta a las races de los manzanos y X.
polymorpha que aparece en otoo en la base de viejos tocones. Poseen peritecios
embebidos en un estroma (4).
Entre los discomicetos u hongos con apotecios, se hallan los rdenes Pezizales,
que comprende dos gneros de inters Tuber y Morchella, y Cyttariales con el
gnero Cyttaria.
Pezizales
Las trufas (Tuber) son hipgeas o subterrneas, con ascomas cerrados,
ms o menos globosos, cuyo himenio no est expuesto al exterior sino que
recubre una serie de compartimentos internos (figura 2). Tienen una pared
gruesa que no se rompe a la madurez de los esporos (indehiscente) (4).
Cuando se cortan las trufas jvenes se ven casi blancas pero se obscurecen
con el tiempo, ms o menos segn las especies, tomando un aspecto
marmolado. Estos hongos viven en simbiosis con las races de rboles
europeos, por ejemplo T. melanosporum est asociado a especies de Quercus
(roble, encina) (5) . T. aestivum y T. brumale micorrizan con avellanos
(Corylus avellana). T. magnatum, la trufa blanca, crece en suelo calcreo al
pie de robles, sauces o tilos, con los que micorriza (7). Las truferas
comienzan con la siembra de los plantines de los rboles junto al hongo.
Las trufas sern cosechadas bajo tales rboles despus de 7 a 15 aos (8).
Debido a su olor caracterstico los animales entrenados pueden hallar la
ubicacin de los ascomas subterrneos. Suele confundirse con Elaphomyces
granulatus que no es comestible y crece semienterrado en suelos cidos,
especialmente al pie de pinos formando micorrizas (7)
o con Gauteria chilensis que crece en el mantillo de
pinares (9) .
Cyttariales
Cyttaria (figura 4) es un gnero parsito de Nothofagus, que
posee algunas especies comestibles. Tienen un cuerpo
carnoso de colores claros y casi esfrico, en el cual estn
inmersos los apotecios. Alcanzan un dimetro de 2 a 11 cm
segn las especies. C. hariotti (llao-llao) crece sobre guindo,
ire, lenga, coihue, roble de Chilo, y tiene un color amarillo-
anaranjado intenso. Es la ms extendida geogrficamente.
Otras especies tambin comestibles son C. darwinii (pan de
indio), C. berteroi (pinatra), C. espinosae (lihuee) (9) .
7.2.2. Basidiomycota
Las setas, bejines y otros basidiomas estn constitudos por hifas dicariticas que
suelen presentar fibulas. Este micelio puede crecer durante aos en el suelo o la madera
hasta que bajo la infl uencia de diversas condiciones ambientes forma los basidiomas (4) .
Auriculariales
Auricularia auricula u oreja de palo (figura 5) tiene basidiomas
coriceo-gelatinosos, prpura o pardo obscuro, que se forman en
ramas caidas y tocones de seibo, morera y otros rboles. Miden entre 3
y 10 cm de dimetro. La superficie externa es irregular, tiene un color
ms plido y est recubierta de una vellosidad casi imperceptible.
Llevan el himenio sobre la superficie interna, cncava, lisa, opuesta al
substrato. Luego de la meiosis los basidios se dividen en cuatro clulas
por tabiques transversales, de cada una nace lateralmente un
esterigma que origina un basidiosporo (13) . La especie comestible que
se cultiva es Auricularia polytricha (2) .
Cantharellales
Los cantarelos (Cantharellus) tienen forma de embudo con el
borde ondulado, sinuoso, y el himenio en pliegues
espaciados como laminillas que bajan por el pie,
anastomizadas, es decir que se juntan y ramifican (figura 6).
La especie comestible ms apreciada es C. cibarius de color
amarillo yema en su totalidad. Alcanza de 5 a 10 cm de alto.
Forman micorrizas con conferas y rboles de madera dura
(7) . Se lo puede confundir con la especie txica Omphalotus
olearius (5) .
Agaricales
El champin Agaricus bisporus (figura 7) es la especie que se cultiva comercialmente
en las zonas templadas, pero en las subtropicales se utiliza A. bitorquis. El champion
alcanza de 5 a 10 cm de alto y de 2 - 10 cm de dimetro en la parte superior o pleo.
Cuando el hongo madura, se abre el pleo blanco dejando ver por abajo las laminillas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 5
(decurrentes), el que es lateral u excntrico (16). P. eryngii y P. laciniato -crenatus son otras
especies comestibles, la ltima es nativa (15) .
Russulales
Russula (figura 20) tambin es un gnero micorrizante. Algunas
especies son comestibles como R. cyanoxantha, pero la mayora de las
especies tienen sabor acre u olor ftido por ejemplo R. foetens o son
txicas, tal como R. emetica que causa gastroenteritis (5). Se han descripto
especies propias de la Patagonia (R.
nothofaginea, R. fuegiana), algunas
relacionadas a Nothofagus (9) .
Boletales
Boletus edulis (figura 21) tiene un pie de 5 - 15 cm de
alto y un pleo carnoso, pardo, de 10 - 15 cm de
dimetro. Por el envs se ven los tubos donde se
encuentran los basidios. El pie est recubierto con una
red de finas venas, blancas al comienzo, que se tornan
amarillo-verdoso con el tiempo. Una especie comestible nativa
es B. loyo que micorriza con Nothofagus (12) . Algunos tienen
sabor amargo y otros son txicos, como por ejemplo B. satanas
que causa trastornos gastrointestinales (16) . Suillus (figura 21) es
tambin micorrizante de conferas, por ejemplo S. luteus y S.
granulatus (17) .
Poriales
Laetiporus sulphureus (figura 22) tiene un basidioma en
repisa, de color amarillo azufre, en el reverso se encuentra el
himenio en el reborde de tbulos o poros. Se presenta en
racimos y provoca la podredumbre parda de muchas maderas
(11). Fistulina antarctica es otro hongo comestible en repisa (9) .
Lycoperdales
Entre los bejines o basidiomas cerrados, Langermania gigantea
es una especie grande (de 8 a 51 cm de dimetro), globosa, de
color blanco-crema, inconfundible. Los esporos nacen en
cavidades internas y una vez maduros el pice se disuelve
dando lugar a la salida de los esporos. Es comestible mientras el
interior est blanco (7) .
Lycoperdon perlatum y L. piriforme (figura 23) son dos especies comestibles de este
gnero que crece sobre restos lignocelulsicos, generalmente en los bosques. Son
comestibles en estado juvenil. Cuando maduran tienen esporos pardos que se libera n
por una abertura del pice (7) .
Sclerodermatales
Entre otros bejines se encuentra Scleroderma (figura 23), un gnero micorrizante, con
un peridio de consistencia coricea, olor desagradable y txico (5) .
Las ventajas nutricionales que obtiene cada integrante de una asociacin micorrzica
explica, en parte, el xito de tal interrelacin. Algunos hongos micorrzicos pueden
producir auxinas o sea hormonas que estimulan el crecimiento de los vegetales, y otros
producen antibiticos. Esto ayuda a regular el microambiente alrededor de las races y
contribuye a prevenir la infeccin de las plantas. Experimentalmente se demostr que
los hongos micorrzicos proveen proteccin contra Phytophthora infestans (2) .
Pero, a pesar de los beneficios que las asociaciones micorrzicas de ciertos hongos
confieren a determinadas plantas, pueden causar un dao considerable a otros
vegetales. Incluso a veces las asociaciones micorrzicas se establecen an cuando bajo
condiciones diferentes esos mismos hongos pueden actuar como patgenos agresivos.
Esto ilustra la naturaleza compleja de la asociacin biolgica y tambin indica que las
plantas poseen mecanismos para prevenir el dao potencial causado por su socio
fngico (20).
10 Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7
Las plantas tienen una variedad de defensas contra la infeccin y sta puede ser
moderada en ejemplares que tienen asociaciones micorrcicas. Los compuestos
fenlicos y ciertas protenas protectoras (quitinasas y peroxidasas) producidas por la
planta pueden tener un efecto antimicrobiano significativo. Pero, aquellos ejemplares
que crecen sin estar asociados a un hongo forman ms de estos compuestos que las
plantas micorrizadas, pues previenen la invasin fngica (2) .
Los hongos que forman asociaciones micorrcicas con rboles en bosques son
tpicamente basidiomicetos superiores. Es poca la especificidad de estas asociaciones ya
que varios rboles pueden formar micorrizas con un hongo dado y viceversa. Ms
raramente los ascomicetos forman micorrizas. En contraste a las micorrizas de los
rboles, estn las formadas por la orqudeas. Cada una de las diferentes especies de
orqudeas tiene una alta especificidad por un hongo particular que generalmente es un
zigomiceto. El grado de interdependencia es tal que en muchos casos ninguno de los
asociados puede ser cultivado sin el otro, pues forman una verdadera simbiosis (20) .
7.3.1. Inoculacin de plantines
En general los hongos ectomicorrcicos deben incorporarse a las plntulas de rboles
y plantas ornamentales, cuando se desarrollan en medios artificiales con vermiculita o
arena. La falta de micorrizacin acarrea problemas en el transplante, excepto en los
casos en que el suelo contenga especies fngicas (21).
Las races se infectan con hongos de las micorrizas vesculo-arbusculares por las hifas
desarrolladas de propgulos presentes en el suelo, los que pueden ser esporos o
estructuras de resistencia presentes en las races muertas (20).
Las primeras tcnicas de inoculacin consistan en el transporte de suelo desde la
zona de origen de la plantacin al vivero, pero se corra el riesgo de llevar tambin
microorganismos patgenos. Para inocular con cultivos puros, el substrato (suelo,
turba) debe ser previamente pasterizado o fumigado con el fin de disminuir la
poblacin fngica nativa que podra competir con el inculo (21) .
Los hongos son incorporados al substrato de siembra con trozos de races
micorrizadas, pedazos de ascoma o basidioma, o micelio
obtenido in vitro. El agregado de micelio ofrece mayores
garantas en el caso de hongos que se desarrollan bien en
cultivo axnico. El primer paso de toda inoculacin
consiste en la seleccin del hongo. La introduccin de
especies de Pisolithus en viveros incrementa la calidad de
las plntulas de pinos, y especialmente se lo usa para
suelos muy erosionados, pobres en materia orgnica y
nutrientes minerales (20).
La figura 24 muestra los pasos de la produccin del
inoculante para micorrizar rboles con hongos
ectomicorrcicos. En cambio para la preparacin del
inculo de micorrizas vesculo-arbusculares se requiere la
separacin de los esporos del suelo por tcnicas de
tamizado hmedo y flotacin, luego se colocan en una
caja, la que se ubica a 2-3 cm ms abajo de las semillas de
Allium cepa en una maceta con suelo y arena (1+2 vol.) a
pH ligeramente cido. A los 3-4 meses se extraen las
races colonizadas, se las secciona y aade al substrato
Figura 7-24. Aislamiento del micelio con esporos, y se homogeneiza. Se mantiene a un 50% de
y produccin de inoculante (21) la capacidad de campo y a temperaturas de 5 -10C (21) .
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 7 11
7.4.4. Produccin
Durante el primer perodo o de crecimiento del inculo la temperatura de los locales
est entre 21 y 28C. Cuando el micelio coloniza todo el substrato, unos 10-12 das
despus de la siembra, ste se cubre con una capa delgada de turba sin esterilizar
mezclada con tiza (pH 7 - 8) para evitar la desecacin (22) y la temperatura ambiente se
reduce a 18C. Cuando aparecen los primeros botones de A. bisporus se baja a 15C. A.
bitorquis crece a mayor temperatura (23). La humedad del ambiente se mantiene por
encima del 70% (24) . Las bacterias de la turba liberan iones ferrosos esenciales para el
desarrollo de los basidiomas (22) .
Durante el perodo de crecimiento del micelio se requiere cambiar el aire una o dos
veces al da, pero despus de colocar la cobertura se aumenta la ventilacin haciendo 2
a 3 renovaciones del aire por hora, pues una concentracin de 1% de CO 2 provoca la
deformacin de los championes (24). El aire pasa sobre los cajones a 100 - 250
mm3 /min. El micelio que est creciendo produce metabolitos voltiles tales como
etanol, aldehdo actico, acetato de etilo y dixido de carbono (22). Para mantener la
humedad se riega con frecuencia mediante un rociador de niebla sin empapar la
cobertura.
Los primeros basidiomas se recogen a los 15-25 das despus de colocar la cobertura.
La produccin depende de numerosos factores y oscila de 5 a 8 kg por m2 y la
conversin biolgica es del orden de 50 kg de championes frescos por 100 kg de paja
seca (6). El perodo de cosecha es de unas seis semanas, al final del cual se vacan las
bandejas y el compost usado se aleja del local de produccin para usarlo como abono
(24).
En este proceso complicado hay tres hechos principales: la provisin del substrato
conveniente, la produccin de un inculo adecuado para incorporarlo al compost y la
induccin de la formacin de los basidiomas por la cobertura y la temperatura.
El compost debe contener fuentes de carbono y nitrgeno adecuadas as como de
minerales, vitaminas y acetato. La fuente carbonada es provista por la paja en forma de
celulosa, hemicelulosa y lignina. El compostado remueve a los carbohidratos simples
que podran ser usados por mohos competidores, permitiendo el desarrollo de hongos
celulolticos como los agricos. Tambin A. bisporus necesita acetato para formar
algunas macromolculas esenciales (22) . ste es formado por la actividad microbiana
que adems origina grasas y aceites que constituyen un reservorio de acetato.
A. bisporus requiere protenas como fuente de nitrgeno (22) . Los compuestos simples,
como la urea, presentes en la mezcla inicial son convertidos a protena microbiana. Los
compuestos minerales de potasio, fsforo, magnesio, calcio, hierro y microelementos se
encuentra n en la paja, el estircol y los aditivos o bien son aadidos. Adems requiere
algunas vitaminas, como biotina y tiamina, que son formadas por otros organismos
durante el compostado.
El micelio del hongo produce metabolitos voltiles que estimulan el cr ecimiento de
bacterias en la capa de recubrimiento (Arthrobacter, Bacillus, Rhizobium), particularmente
especies de Pseudomonas como P. putida que parece ser esencial para la produccin de
championes. Adems, la capa de recubrimiento realiza otras funciones como la de
proporcionar un medio pobre en nutrientes donde se desarrollan los cordones
miceliales (4) .
frescos por 100 kg de substrato seco (6) tanto sobre troncos cortados o tocones, como
sobre paja (8) .
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