DETECO DE ADULTERAO DE LEITE DE CABRA EM P COM LEITE BOVINO EM P POR FLURESCNCIA

FRONT-FACE E POR FLUORESCNCIA RESOLVIDA PELO TEMPO

Mariana P. Brandao, Mariana Gouvea Neto, Virglio de Carvalho dos Anjos e Maria Jos V. Bell.

Alunos: Ana J. Soares e Renan Pilotti

INTRODUO vida (lifetime). Foi realizada uma deconvoluo do perfil de decaimento da

O leite uma importante fonte de nutrientes e o leite em p muito
utilizado, pois tem uma vida til prolongada, de fcil armazenamento e
transporte e no necessita de refrigerao devido ao baixo teor de
umidade. Apesar do leite de vaca ser produzido em larga escala e a
baixos preos, comum a ocorrncia de alergias, principalmente em
crianas. O leite de cabra similar ao de vaca na sua composio, porm
a falta de betacaroteno e aglutinina faz com que este tenha menor teor de
gordura e diferentes tipos de casenas, sendo assim mais fcil de digeri-
lo. Devido s caractersticas menos alergnicas, o leite de cabra vem
sendo considerado uma excelente matria-prima para alimentos
industrializados para crianas, idosos e pessoas com necessidades
mdicas particulares. Portanto, de grande importncia investigar a
autenticidade do leite em p de cabra e a possvel contaminao ou
fraude com leite em p de vaca.
Alguns mtodos j foram estudados visando investigao de
1
contaminaes ou fraudes tais como espectroscopia Raman vibracional e
2
ELISA (ensaio de imunoabsoro enzimtica) . Tambm h estudos de
propriedades importantes do leite por outros mtodos tais como
3 4 5 6
espectroscopias no UV-Vis , no IV ou FTIV , no IV prximo e mdio ,
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fluorescncia , espectroscopia Raman combinada com IV e de vaca. Observa-se que os resduos no apresentam um padro e que
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Microscopia Raman confocal .
REVISO DA LITERATURA
intensidade com o tempo utilizando um software F900 disponibilizado pela
Edinburgh. O melhor modelo que se encaixou ao decaimento foi o modelo
com trs exponenciais (i=3). Os valores de n1, n2, n3 e 1, 2, 3 foram
determinados pelo software.
Processamento de dados: Foi realizada uma regresso por mnimos
quadrados parciais (PLS) no espectro de emisso normalizado para
estudar as combinaes de variveis e comparar os padres espectrais
para amostras de leite de cabra em p, leite de vaca em p e mistura de
ambos em diferentes propores. A diferena nos valores de decaimento
1, 2 e 3 entre diferentes adulteraes foram analisadas por ANOVA
atravs de dois mtodos. Pelos ajustes de decaimento experimental foi
calculado o tempo de vida da intensidade mdia (<I>), atravs da
equao < I> = ni i/ni i.
DISCUSSO
A Figura 1 mostra os resultados obtidos para o percentual de
adulterao calculado pelo modelo PLS (ajustado) versus o valor real
medido (observado). A Figura 2 representa a diferena dos valores do
modelo ajustado e dos valores observados para as porcentagens de leite
algumas amostras apresentaram valores de resduo elevado, o que pode
ser atribudo em parte pela distribuio no homognea na superfcie das
amostras.

O leite contm muitos fluorforos, incluindo resduos de triptofano,

vitamina A, flavinas e produtos avanados da reao de Maillard, sendo
possvel utilizar tcnicas espectroscpicas baseadas na fluorescncia
para identificar possveis contaminaes e fraudes no leite. O leite em p
possui trs tempos de vida () em 315/468 nm (emisso/excitao). Os
leites de vaca em p apresentam um aumento no terceiro tempo de vida
em 315/468 nm quando comparado com o leite de cabra.
Espectroscopia front-face pode investigar propriedades
fluorescentes de amostras trbidas ou opacas enquanto a fluorescncia
resolvida pelo tempo oferece certas vantagens para a caracterizao de
produtos alimentcios quando comparada com espectroscopia steady-
state, pois essa tcnica mede a dependncia de tempo (tempos de vida)
da fluorescncia ao invs da intensidade de emisso. Os tempos de vida
so determinados pelo decaimento da intensidade da fluorescncia e no
dependem da excitao, durao da exposio luz ou o mtodo de
medida. Mais importante ainda, o foto branqueamento no altera o tempo
de vida da fluorescncia, e independente da intensidade de
fluorescncia e largamente independente das concentraes de
fluorforo.

OBJETIVOS

Investigar os mtodos de fluorescncia estacionria e de

fluorescncia resolvida pelo tempo como uma alternativa para rpida
quantificao de screening de fraudes em leite de cabra em p com leite
de vaca em p.

METODOLOGIA

Preparao da amostra: Foram adquiridos lotes de leite de cabra em

p e de leite de vaca em p do mesmo fabricante em supermercados
locais. Adulteraes do leite de cabra em p foram realizadas preparando
amostras com quantidades fixas de leite de vaca em p. O percentual de
leite bovino em p nas amostras foi de 0%, 1%, 3%, 5%, 8% 10%, 15%,
20%, 25%, 30%, 50% e 100%. As amostras foram pressionadas com uma
prensa hidrulica com o auxlio de um suporte (Edinburgh Insturments)
com o objetivo de criar um disco. As medidas foram realizadas aps a
preparao das amostras.
Espectroscopia de fluorescncia front-face: A fonte de excitao foi
realizada a 315 nm com uma lmpada ultrarrpida Edinburgh nf900
preenchida com gs hidrognio. A deteco dos ftons emitidos foi
realizada com um espectrmetro FL920 com um fotomultiplicador sensvel
ao azul.
Espectroscopia de fluorescncia resolvida pelo tempo: A intensidade As medidas de excitao/emisso em 315/468 nm da fluorescncia
de fluorescncia em funo do tempo dada pela equao: resolvida pelo tempo resultaram em trs tempos de vida de fluorescncia
I(t) = ni exp[-t/ i], onde i um fator pr-exponencial e i o tempo de para cada percentual de adulterao da amostra. Os valores de tempo de
vida so apresentados na Tabela 1. Os tempos de vida foram
determinados atravs da deconvoluo da funo de decaimento da
intensidade com o tempo. A Figura 3 apresenta a funo de decaimento
para as amostras de leite de vaca em p e leite de cabra em p. As
emisses de fluorescncia do leite de vaca em p e do leite de cabra em
p diferem significativamente. Foi realizado um tratamento estatstico dos
tempos de vida (ANOVA) e pode-se classificar o percentual de
adulterao em grupos: 100% leite de vaca, mais de 30% de leite de
vaca, entre 20%-30% de leite de vaca, entre 10%-20% de leite de vaca,
menos que 10% de leite de vaca e 100% leite de cabra quando utilizado o
terceiro tempo de vida. O percentual do intervalo de confiana alto e o
modelo apresenta um coeficiente de determinao (R) de 0,834. Pode-se
afirmar que o maior tempo de vida (3) apresenta comportamento linear
em relao ao percentual de adulterao, apresentando bons resultados.
O tempo de vida da intensidade mdia (<I>) resume a informao da
funo de decaimento da fluorescncia, pois representa a soma de
contribuies fracionrias do tempo de vida. A regresso linear apresenta
um timo ajuste, com um coeficiente de determinao (R) de 0,95 (Figura
4).
A dificuldade em atingir uma boa homogeneizao da mistura das
amostras, e a presena de mais um grupo fluorforo para
excitao/emisso em 315/468 nm so algumas das possveis razes
para o desvio dos valores em alguns grupos. Para diminuir os resduos e
os desvios, necessrio compreender os efeitos dos produtos da reao
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de Maillard, da umidade, da temperatura e da oxidao . As interaes
da vitamina A com lipdios e protenas podem ser diferentes no leite de
cabra em p quando comparado ao leite de vaca em p. Essas interaes
podem causar mudanas conformacionais na vitamina A, o que aumenta
o tempo de vida de sua fluorescncia. Estudos futuros so necessrios
para compreender a exata mudana conformacional da vitamina A, e
desta forma aumentar seu tempo de vida.
CONCLUSO
Este estudo demonstrou com sucesso que o tempo de vida de
fluorescncia pode identificar fraudes em leite de cabra em p
contaminado com leite de vaca em p. Os resultados mostram que o
tempo de vida da intensidade mdia na excitao/emisso de 315/468 nm
aumenta linearmente com o valor de leite de vaca adicionado ao leite de
cabra em p (contaminao). Estes resultados indicam a fluorescncia
resolvida pelo tempo como uma tcnica promissora para aplicao como
avaliao em tempo real do leite em p de cabra e fraudes por adio de
leite de vaca em p. Estudos futuros ainda so necessrios para
correlacionar os tempos de vida com a concentrao dos constituintes e
para entender os efeitos de outros processos, como a oxidao e o
armazenamento no leite de cabra em p.
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