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172.

601 Biochemische Technologie

Allgemeine Biotechnologie
(Biochemical Engineering)
F. Biokatalytische Prozesse

Univ.Prof.Dr. W. Hampel
Biokatalytische Prozesse

Katalysatoreigenschaften

Reaktionskinetik

Homogene Enzymkatalyse

Heterogene Enzymkatalyse
Biokatalytische Prozesse
Enzyme (Biokatalysatoren)
CHARAKTERISTIKA
Hohe katalytische Aktivitt
moderate Reaktionsbedingungen (T, p, pH, ..)
Selektivitt / Spezifitt (Mehrzentrenbindung)
unterschiedlicher Effektoreinflu (Aktivator, Inhibitor)
Proteinnatur
makromolekular
Lslichkeit (Sphroproteine) molekulardispers
reaktive Gruppen an Oberflche (Amino-, Carboxyl-,
Imidazol-)
Denaturierung (Hitze / Chemikalien / Scherkrfte)
Bildung durch lebende Zellen (Proteinsynthese)
intrazellulre / extrazellulre Lokalisation
Reaktionskinetik
Hyperbole Sttigungscharakteristik
Modell: E + S == ES E + P fr dES/dt = 0
venz = -dS/dt = dP/dt = kcat* E * S / (KM + S)
vmax = kcat * E KM ... Michaelis-Konstante
Reaktionskinetik
Reversible Effektorwirkung
Kompetitiv: v = vmax * S / [KM*(1+I/KI) + S] e.g. Produkt
Nichtkompetitiv: v = vmax*S / [(KM + S)*(1 + I/KI)]
Unkompetitiv: v = vmax * S / [KM + S*(1 + I/KI)]
Reaktionskinetik
Unkompetitive Substratberschusshemmung
v = vmax * S / [KM + S*(1 +SI/KI)]

Reaktionsgleichgewicht [Reversibilitt]
Modell: E + S == ES == EP == E + P
K = (Vmax/KM)H / (Vmax/KM)R [Haldane]
Reaktionskinetik
Temperaturabhngigkeit
kcat = A * exp(-EA/RT) [Arrhenius]
ln kcat = ln A - (EA/R)*(1/T)
Enzyminaktivierung
1. Ordnung: -dE/dt = ki * E
E = Eo * exp(-ki*t)
0. Ordnung: E = Eo ki * t
2. Ordnung: E = Eo / (1 + Eo*ki*t)
(Autokatalyse)
Homogene Enzymkatalyse

Charakteristika
Enzymlsung zugesetzt
Umsetzung unlslicher Substrate mglich
Geringer Kostenanteil durch Enzym

Verfahrensweise
Batch (Chargenbetrieb)
-dS/dt = vmax*S / (KM + S) integriert
t * vmax = KM*ln(So/S) + (So-S) = KM*ln(1-U) +So*U
Homogene Enzymkatalyse
Kontinuierlich: D = QF/V = 1/D
Rhrkesselreaktor (CSTR)
Bilanz: QF*SE QF*SA venz*V = 0
* vmax = (SE SA)*(KM + SA) / SA
Homogene Enzymkatalyse
Rohrreaktor (PFR)
* vmax = KM * ln(SE/SA) + (SE SA)
Homogene Enzymkatalyse

Unterschiede bei Vorliegen vom Hemmungen


(MM-Kinetik / Substrathemmung/ Produkthemmung)

rSOKm = So/KM rKis = Kis /KM rKip = Kip/KM


Membranreaktoren
Enzymrckhaltung / Produkt-
abtrennung durch semi-
permeable Membran
Senkung der Enzymkosten
Enzymverluste durch
Denaturierung
Keine Coenzymrckhaltung

REAKTORSYSTEME
Kontinuierlicher Rhrkessel mit integrierter
Flachmembran
Kont.Rhrkessel mit externem
Filtrationsmodul
Schlaufenreaktor
Rohrreaktor mit externem Filtrationsmodul
Heterogene Enzymkatalyse
Bildung unlslicher katalytisch aktiver Partikel
(Enzymimmobilisierung)
Charakteristika
mehrfacher Enzymeinsatz (Wiederverwendung)
verringerte Aktivitt (Immobilisierungsverluste)/ erhhte Stabilitt
vernderte kinetische Konstanten / Stofftransportlimitierung
nur lsliche Substrate / enzymfreie Produkte
Immobilisierungstechniken
Fixierung an einem unlslichen Trger
Einschluss in eine unlsliche Matrix
Quervernetzung zur Przipitation
Trgerfixierung
Charakteristika des Trgers (Carrier)
groe Oberflche / Permeabilitt
Unlslichkeit / hydrophiler Charakter
Chemische, mechanische und thermische Stabilitt
Passende Form und Gre/Einheitlichkeit
Mikrobiologische Stabilitt
Regenerationsfhigkeit
Trgermateralien (Carrier)
Porse Materalien:[kontrollierte Poren/Porenspektrum]
Groe uere und innere Oberflche; hohe Enzymbeladung; gute
Stabilisierung
Diffusionslimitierung; hohe Kosten; Druckabfall (Gele)
Nichtporse Materialien:
Geringe Oberflche; geringe Enzymbeladung; keine
Diffusionslimitierung
Feinstpartikel: Abtrennungsprobleme (hoher Druckabfall; niedrige
Flussraten)
Trgerfixierung
Adsorption / Ionenbindung:
schwache Bindungen / Ausblutungsgefahr
hohe Immobilisierungsausbeute
enge Betriebsbereiche (pH, T, , S, etc.)
Regenerierbarkeit des Trgers
Trger: Aktivkohle, Al2O3, Celite, etc.
Ionenaustauscher: DEAE-/CM-Cellulose, Amberlith
Kovalente Bindung:
stabile Bindung / kein Ausbluten
Bildung reaktiver Gruppen am Trger / Spacereinbau
Aktivierung reaktiver Gruppen
Kupplungsreaktion mit Enzym
verminderte Immobilisierungsausbeute
keine Regenerierbarkeit
Trgerfixierung
Trger (Aktivierung)
Porses Glas (Silylierung; Aktiv.mit Thiophosgen oder
Glutardialdehyd)
Polysaccharide [porse Cellulose, Dextran, Chitin, Agarose)
Bromcyan
Synthet.Polymere bzw. Copolymere [Polyvinylacetat;
Styrol/Maleinsureanhydrid]
Teilhydrolyse / Aktivierung mit Epichlorhydrin [Eupergit] bzw.
Surechloriden
Matrixeinschluss
Geleinschluss:
Herstellung:
Enzymlsung mit Vorstufe des Gelmaterials vermischen
Gelbildung und Formgebung (Kugel/Faser/Folie)
Methoden der Gelbildung:
Thermische Gelbildung (Abkhlen) Agar, Gelatine
Ionotrope Gelbildung (Ionenzusatz) Alginat, -Carrageenan
vorwiegend fr Zellen / geringe mechan. Stabilitt
Polymerisation in Gegenwart des Enzyms
Acrylamidgele mit hoher Vernetzung (PAG)
Membraneinschlu (microencapsulation)
Semipermeable Membran (Nylon)
Liposomen
Immobilisierung
Vernetzung
Vernetzung mit bifunktionellen Linkern (Glutardialdehyd
ev. Zusatz von Fllptoteinen / gelartige Fllungen
Reaktionskinetik
Stofftransport: Diffusionseinfluss, Ficksches Gesetz
Wirkungsgrad: = vimmobilisiert / vfrei
= f (S, T, , ...)
Stofftransport
Externer Stofftransport
(Trgeroberflche -
Grenzschicht)
Interner Stofftransport
(innerhalb des Trgers;
Porendiffusion
Externer Stofftransport
Externe Stofftransportlimitierung
Nernstsche Grenzschicht: vd = kS * a* (SFl S) ; a = Ocat/Vcat
Gleichgewicht: vd = venz kS *a* (SFl S) = venz = Vapp
S/SFl = 1 venz /(kS *a* SFl) = 1 -
..... Modulus d. externen Stoffbergangs
<< keine Limitierung; 1 hohe Limitierung

Externer Stofftransport
Damkhler-Zahl (Da):
Da = Maximale enzymat. Reaktionsrate / Maximale Stoffbergangsrate
Da = Vmax / (kS * a* SFl)
Da << 1 Enzym limitiert
Da >> 1 Diffusion limitiert

Manahmen bei Diffusionslimitierungen:


Vergrerung von a (z.B. Verminderung des Trgerradius)
Verminderung der enzymat. Reaktionsrate (geringere Enzymbelegung)
Erhhung der externen Substratkonzentration (SFl)
Erhhung des Stoffbergangskoeffizienten (kS)
Vernderung von Medieneigenschaften
(Dichte; Viskositt, Diffusivitt)
Vernderung von Strmungsbedingungen (Hydrodynamik)
Interner Stofftransport
Interne Stofftransportlimitierung:
Transport ausschlielich durch Diffusion
Beschreibung von Partikelform abhngig

Sphrische Partikel: Stoffbilanz an Kugelschale gibt:


dS/dt = Deff*(r2*d2S/dr2 + 2r* dS/dr) r2*venz(S) = 0
Randbed.: dS/dr = 0 bei r = 0 ; S = So bei r = R
Normierung: S = S/So ; r = r/R
d2S/dr2 + 1/r * dS/dr = R2 * venz /(So * Deff)
= R*SQR[venz /(Deff*So)] .. Thiele Modul
2 = Stoffstrom d.Reaktion / Diffusionsstrom

Deff = f (Stoffart, Porositt,Tortuositt, etc)


Deff = Dw * P /
Interner Stofftransport
Lsung fr:
Venz = Vmax*S /(KM + S)
numerische Lsungsmglichkeit
Extremflle:
Venz = kcat*E*S / KM = k1 * S (1. Ordnung)
S = So * (R/r) *sinh(r*SQR(k1/Deff)) /N
N = (sinh(R*SQR(k1/Deff)))
2 = R2 * Vmax /(Deff * KM)
Venz = vcat*E = ko (0.Ordnung)
S = So + ko*(r2 R2) / 6Deff
max.Partikelradius: Rmax = SQR(6*Deff*So/ko)

Beobachteter Thiele Modul (Weisz):


= (Vcat/Ocat)2 * vbeob /(Deff * So)
Interner Stofftransport
Interne Effektivitt: i = vbeob / v* (= So in der ganzen Partikel)
i = f()
< 0.3 i 1
> 3 i 1/
= KM/So

Verbesserung d. internen
Stofftransfer:
- Verminderung v. venz
(Enzymbelegung)
- Partikelgrereduktion
- Verbesserung Deff
- Erhhung von So
Enzymreaktoren
Industrielle Beispiele
> 1.000.000 t/a
Glucose-Isomerase: Fruktosegewinnung; Festbettreaktoren
> 10.000 t/a
Nitril-Hydratase: Acrylamidherstellung; Batch (Nitto)
> 1.000 t/a
Penicilin-Acylase: 6-APA; Festbettreaktoren (Eli Lilly)
Aspartase: L-Asp; Festbettreaktoren (Tanabe)
Thermolysin: Aspartam (Tosoh/DSM)
> 100 t/a
Fumarase: L-pfelsure; Festbettreaktoren (Tanabe)
Aminoacylase: L-Met;L-Val, L-Phe; Membranreaktoren /
Festbettreaktoren (Degussa/Tanabe)