III.

MATERIALES Y METODOS

3.1. Materiales

NOMBRE IMAGEN

Amilasa (Frutenzima)

cido clorhdrico

Solucin yodada
Buffer fosfato

Espectrofotmetro

Bao Mara

Tubos de ensayo
3.2. Mtodos

Obtencin de factor de conversin

El factor de conversin de obtiene a partir de la curva de calibracin, que se describe a

continuacin.

COMPONENTES BLANCO ESTANDARES

1 2 3 4 5
Almidn bufferado _ 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
(ml)
Agua destilada(ml) 3.0 2.5 2 1.5 1.0 0.5
Mezclar
HCL O.1 N (ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Mezclar
Solucin Yodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Realizando el experimento con los datos que tenemos:

PASO N 1
En un tubo de ensayo se le
aade 3 ml de agua
destilada.
BLANCO Luego mezclar con HCL
0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.

En un tubo de ensayo se
prepara 0.5 ml de almidn
con 2.5 ml de agua
TUBO N 1 destilada.
Luego mezclar con HCL
0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.
 En un tubo de ensayo se
prepara 1ml de almidn
con 2 ml de agua destilada.
TUBO N 2 Luego mezclar con HCL
0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.

Se prepara 1.5 ml de
Almidn con 1.5 ml de
agua destilada.
TUBO N 3 Luego mezclar con HCL
0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.

Se prepara 2 ml de
Almidn con 1 ml de agua
destilada.
Luego mezclar con HCL
TUBO N 4 0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.

Se prepara 2.5 ml de
Almidn con 0.5 ml de
agua destilada.
TUBO N 5 Luego mezclar con HCL
0.1N de 2.5 (ml).
Y por ltimo aadir 0.5 ml
de Solucin yodada.

Agitar bien y luego dejar reposar por 5 minutos.

 Despus de 5 minutos hacer la lectura en el espectrofotmetro a 600nm.

PASO N 2

BLANCO 0.019 de turbiedad

TUBO N 1 0.008 de turbiedad

TUBO N 2 0.016 de turbiedad

TUBO N 3 0.023 de turbiedad

TUBO N 4 0.027 de turbiedad

TUBO N 5 0.031 de turbiedad

Evolucin de actividad enzimtica.

COMPONENTE PROBLEMA TESTIGO BLANCO

Sustrato bufferado (ml) 2.5 2.5
Agua destilada 1.4 1.4 3
Incubar 5 minutos en bao Mara a 37 C
Enzima (ml) 0.5 0.5
Incubar 5 minutos en bao Mara a 37 C
HCL 0.1N (ml) 2.5 2.5 2.5
Enzima (ml) 0.1
Solucin yodada 0.5 0.5 0.5

Preparacin de las soluciones con los siguientes datos:

TUBO N 1 TUBO N 2 TUBO N 3

(PROBLEMA) (TESTIGO) (BLANCO)

PASO N Aadir en un tubo de Aadir en un tubo de ensayo Aadir en un tubo de ensayo

ensayo 2.5 ml de sustrato 2.5 ml de sustrato bufferado 1.4 ml de agua destilada.
1 bufferado con 1.4 ml de con 1.4 ml de agua destilada.
agua destilada.
IMAGEN

Incubar por 5 minutos en Bao Mara a 37 C.

PASO N Luego de haber retirado Luego de haber retirado del

del Bao Mara aadir Bao Mara aadir 1.0 ml de
2 0.1 ml de enzima. enzima.
IMAGEN
 Y luego incubar por 15 minutos en Bao Mara a 37 C.

PASO N Y por ltimo aadir 2.5 ml Y por ltimo aadir 2.5 ml Y por ltimo aadir 2.5 ml de
de HCL ms 0.5 ml de de HCL, 0.1 ml de enzima HCL ms 0.5 ml de Solucin
3 Solucin yodada. ms 0.5 ml de Solucin yodada.
yodada.

Mezclar los tubos por inversin. Dejar reposar por 5 minutos y leer la absorbancia en
espectrofotmetro a 660 nm entre de 10 a 30 minutos.

PASO N 4

BLANCO 0.192 de turbiedad

PROBLEMA 0.181de turbiedad

TESTIGO 0.181 de turbiedad