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UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO

PREPARATORIA AGRCOLA
REA DE AGRONOMA
ACADEMIA DE GENTICA

MANUAL DE PRCTICAS DE INTRODUCCIN A LA


GENTICA

Mayo 2011
UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO

PREPARATORIA AGRCOLA

REA DE AGRONOMA

ACADEMIA DE GENTICA

MANUAL DE PRCTICAS DE INTRODUCCIN A LA GENTICA

Biol. Guadalupe Brito Njera

M.C. Margarita Soto Aguilar

Dra. Verna Gricel Pat Fernndez

PRESENTACIN

El manual de prctica de Gentica, fue elaborado como material de apoyo para el


Curso de Introduccin a la Gentica, asignatura con carcter optativo que se
imparte a los alumnos del nivel propedutico de la Universidad Autnoma
Chapingo. Comprende prcticas y actividades que cubren las unidades del
programa de la materia vigente, o del nivel medio superior en cualquier otra
escuela que contenga en su Plan de Estudios los contenidos elementales de la
Gentica.

En este manual se encuentran prcticas con humanos, la mosca de la fruta, frijol,


maz, y otros vegetales, algunas actividades para relacionar los fenmenos
hereditarios y la probabilidad, observaciones de cromosomas, y un apartado de
prcticas de campo, para desarrollarse en el campo o invernadero.

Las actividades planeadas para el aprendizaje del estudiante fueron desarrolladas


a lo largo de los cursos por los profesores que en diferentes momentos hemos
impartido las clases de Gentica.

Esperamos que sea til para los estudiantes y profesores para quienes fue
diseado.

LOS AUTORES

NDICE
Pgina

PRESENTACIN...............3

Extraccin de ADN......6

Polinizacin en plantas de reproduccin sexual...12

Identificacin y manejo de la Drosophila melanogaster...............26

Cruzamiento dihbrido con Drosophila melanogaster.41

Segregacin y asociacin de genes mediante un modelo..48

Grupos sanguneos...56

Ligamiento autosmico con Drosophila melanogaster......63

Herencia ligada al sexo con Drosophila melanogaster...70

La sntesis de protenas en clulas eucariotas76

PRCTICAS MBITO DE TIEMPO DE


UNIDAD
PROGRAMADAS DESARROLLO DESARROLLO
Unidad I. Prctica de
Gentica: una laboratorio 1.5 horas
Extraccin de ADN
herramienta para 3er. semana
el agrnomo
Unidad II. El Prctica de
Polinizacin en plantas 1.5 horas
puente de la campo
de reproduccin sexual 5ta. Semana
herencia.
Unidad III. Prctica de
Identificacin y manejo
Transmisin y laboratorio 1.5 horas
de la Drosophila
distribucin de 7ta. Semana
melanogaster
los genes.
Cruzamiento dihbrido Prctica de
Unidad III.
con Drosophila laboratorio
Transmisin y 1.5 horas
melanogaster.
distribucin de 8ta. Semana
Demostracin de las
los genes.
leyes de Mendel.
Unidad III. Prctica de
Segregacin y asociacin
Transmisin y laboratorio 1.5 horas
de genes mediante un
distribucin de 10. Semana
modelo
los genes.
Unidad III. Grupos sanguneos. Prctica de
Transmisin y Determinacin de los laboratorio 1.5 horas
distribucin de grupos sanguneos en 12. Semana
los genes. los sistemas ABO Y Rh.
Unidad IV. Prctica de
Ligamiento Autosmico
Posicin de los laboratorio 1.5 horas
con Drosophila
genes en los 14. Semana
melanogaster
cromosomas
Unidad V. Genes Herencia ligada al sexo Prctica de
1.5 horas
relacionados con con Drosophila laboratorio
16. Semana
el sexo. melanogaster.
La sntesis de protenas Prctica de
Unidad VI. El
en clulas eucariotas. laboratorio 1.5 horas
secreto de la
Construccin de un 18. Semana
vida
modelo.

PRCTICA No 1. EXTRACCIN DE ADN

INTRODUCCIN
El secreto de la vida se encuentra en el cido desoxirribonucleico, abreviado como
ADN. El ADN es un tipo de cido nucleico, una macromolcula que forma parte de
todas las clulas. Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el
funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es
responsable de su transmisin hereditaria. Desde el punto de vista qumico, el ADN es
un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido.
En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en
la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes
de hidrgeno.

OBJETIVO
Obtener ADN vegetal para determinar su presencia
MATERIAL
Por equipo

1 agitador de vidrio
Detergente lquido para trastes
1 gradilla o frasco de boca ancha para colocar los tubos
1 cucharita para caf desechable
50g hojas de espinacas frescas, lavadas y secas
1 vaso de precipitado de 50 ml
Alcohol de curacin NO desnaturalizado y bien fro
3 tubos de ensayo de 7.5 cm x 0.5cm
1 probeta de 10 ml
Enzimas (Ablandador de carnes)
Pipeta Pasteur sellada (o clips comunes)

Por grupo

1 licuadora completa
Agua destilada y estril
2 vasos para papilla
2 vasos de precipitado de 250 ml
Una bolsa de plstico
2 coladeras
Toallas sanitas

PROCEDIMIENTO 11

Se necesita encontrar algo que contenga ADN. Ya que el ADN es el plano de


instrucciones para la vida, cualquier cosa viviente contiene ADN.

Para este experimento preferimos usar espinacas. Pero tambin hay montones de otras
fuentes de ADN, como por ejemplo:
Chcharos verdes
Hgado de pollo
Cebollas
Brcoli

1) Coloca en una licuadora:


Tu fuente de ADN (ms o menos 100 ml o 1/2 de taza de espinacas, libres de

1
Basado en: Genetic Science Learning Center (2011, January 24) Cmo extraer ADN de
cualquier cosa viviente. Learn.Genetics. Retrieved April 21, 2011, from
http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

nervaduras gruesas y de sus pedicelos.


Una pizca grande de sal de mesa (menos de un ml o 1/8 de cucharadita).
Agua fra. El doble de la cantidad de tu fuente de ADN (ms o menos 200 ml o 1 de
taza).

Licua todo a alta velocidad por 15 segundos.


El licuado separa las clulas de las espinacas unas de otras, por lo que ahora tienes una
muy diluida sopa de clulas de espinacas.

Vierte tu sopa de clulas de espinacas a travs de un colador dentro de otro contenedor


(como una taza medidora por ejemplo), para eliminar todos los residuos slidos.

2) A la sopa de espinacas agrega 1/6 de esa cantidad de detergente lquido (ms o


menos 30 ml o dos cucharadas soperas) y mzclalo. Deja reposar la mezcla entre 5 y 10
minutos.
Vierte la mezcla en tubos de ensayo u en otros contenedores pequeos de vidrio, cada
uno como 1/3 lleno.

3) Aade una pizca de enzima a cada tubo de ensayo y agtalo suavemente. iSe
cuidadoso! Si lo agitas demasiado fuerte rompers en ADN hacindolo ms difcil de ver.
Usa ablandador de carne como enzima.

4) Ladea tu tubo de ensayo y lentamente vierte el alcohol (isoproplico al 70-95% o


alcohol etlico) sobre la pared del tubo de manera que forme una capa sobre la mezcla
de espinacas. Sigue vertiendo hasta que tengas en el tubo aproximadamente la misma
cantidad de alcohol que de mezcla de espinacas.

El ADN se elevar desde la mezcla de espinacas hasta la capa de alcohol. Puedes usar

un palito de madera u otro tipo de gancho para arrastrar el ADN que est en el alcohol.

Qu es esa cosa pegajosa?


El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que
se formaron dos capas separadas, toda la grasa y protena que rompimos con el
detergente y la enzima en los primeros pasos.
En este proceso, la protena y la grasa irn al fondo, que es la capa acuosa, donde se
sienten ms confortables, mientras que el ADN prefiere la capa superior, el alcohol. El
ADN es una larga y pegajosa molcula a la que le gusta formar grumos.

CUESTIONARIO

1. Qu utilidad tiene la extraccin de DNA?


2. Describe breve pero sustanciosamente en qu consiste una de las tcnicas en la que se
utiliza el DNA extrado.
3. El DNA puro es completamente traslcido y puede confundirse con el alcohol por qu
entonces tiene color blanco cuando lo extraes del material vegetal?
4. Por qu el DNA puede tener color verde o amarillento al extraerlo?
5. Por qu ser tan importante que el DNA de inters el de una bacteria, de una especie
vegetal o, por ejemplo, de un cerdo- no se contamine con DNA extrao (de un patgeno,
del experimentador, etc.)?

EVALUACIN
Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la
discusin de los resultados.
El alumno deber entregar reporte de la prctica de extraccin de ADN. Con un valor de
1.5 %

BIBLIOGRAFA

APA format:
Genetic Science Learning Center (2011, January 24) Cmo extraer ADN de cualquier

10

cosa viviente. Learn.Genetics. Retrieved April 21, 2011, from


http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

MLA format:
Genetic Science Learning Center. "Cmo extraer ADN de cualquier cosa viviente."
Learn.Genetics 21 April 2011 http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

Chicago format:
Genetic Science Learning Center, "Cmo extraer ADN de cualquier cosa viviente,"
Learn.Genetics, 24 January 2011,
<http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/> (21 April 2011)

11

PRACTICA No. 2 POLINIZACIN EN PLANTAS DE REPRODUCCIN SEXUAL

La realizacin de esta prctica se puede llevar a cabo con maz (algama) o con frijol
(autgama), depender de las especies de las que dispongamos. Esta es la razn por la
que presentamos dos prcticas, aunque los equipos de estudiantes slo debern cumplir
con una, la que indique el profesor.

I. EMASCULACIN Y POLINIZACIN EN FRIJOL

INTRODUCCIN

El frijol, al igual que el chcharo, es una especie que se autopoliniza (autgama). Esto se
debe a la estructura de la flor, donde el androceo y el gineceo se encuentran juntos y
encerrados entre dos ptalos soldados espiralados (quilla); adems, las anteras dejan
caer el polen sobre los estigmas dentro de la estructura antes de que la flor abra, lo cual
hace forzosa la autopolinizacin. Esto determina que las variedades existentes sean
verdaderas lneas puras ante lo difcil de la polinizacin cruzada en forma natural entre
las variedades de esta especie (Phaseolus vulgaris), la especie ms importante desde el
punto de vista agrcola del gnero Phaseolus.

En Mxico, los mtodos que se han usado para obtener variedades mejoradas de frijol
han sido la seleccin individual y la hibridacin, ste ltimo, por el sistema de pedigree. El
Dr. Miranda (1962) sugiere para el mejoramiento de esta especie la metodologa de
seleccin en masa y el mtodo HIMSI (Hibridacin, siembra en masa y seleccin
individual). Por esto, cuando se utiliza la hibridacin para el mejoramiento gentico, se
requiere efectuar cruzamientos artificiales controlados con la finalidad de obtener nuevas
combinaciones de genes que sinteticen caractersticas deseables de dos o ms
variedades progenitoras. Otra de las finalidades es estudiar el tipo de herencia que
presentan algunos caracteres del frijol, como color de la semilla, resistencia a
enfermedades, etc. En forma similar como lo hizo Mendel el siglo pasado con la planta del
chcharo.

12

La polinizacin artificial en frijol es laboriosa, por lo que requiere conocimiento de algunos


procesos como la fisiologa de la floracin, morfologa flora, condiciones ambientales, etc.,
para lograr xito o pegue de la polinizacin efectuada, para lo cual es necesario la
habilidad que se obtiene con la prctica constante. Del dominio de lo anterior y de la
experiencia, depende que el xito de las polinizaciones flucte alrededor del setenta y
cinco por ciento.

OBJETIVOS

1) Realizar polinizaciones cruzadas entre diferentes variedades vegetales (frijol)


para explicar la forma en que se realiza este proceso.

MATERIALES

Plantas de dos variedades de frijol.

Pinzas de diseccin de punto aguda.

Recortes de papel servilleta de 6 x 15 mm.

Un frasco con agua.

Un frasco con alcohol de 96

Un vaso encerado

Etiquetas de 2 x 4 cm.

Un lpiz.

PROCEDIMIENTO

El cruzamiento artificial del frijol implica en primer lugar, efectuar la emasculacin del
progenitor que se va a considerar como hembra y luego colectar el polen del progenitor

13

masculino para aplicarlo sobre el progenitor femenino. Ambos procesos deben efectuarse
preferentemente por la maana para evitar polinizaciones indeseables realizadas por
insectos durante el da.

A). Emasculacin del progenitor femenino.

A.1. La emasculacin consiste en eliminar las anteras de la flor del progenitor antes de
que se efecte la autopolinizacin. Para esto, deben seleccionarse botones que vayan a
abrir el da siguiente. De acuerdo a la Figura 1, debe emascularse el botn d, pues la flor
b, que ya abri, ya se ha autopolinizado.

A.2. Seleccione preferentemente botones del primero o segundo nudo de la


inflorescencia, pues las vainas que se originan de los botones del pice (Figura 1c),
generalmente sufren abscisin. Del mismo modo, emascule los botones que estn listos
durante los primeros cinco o seis das desde que abri la primera flor en la planta, pues se
ha comprobado que las flores que alcanzan la antesis en la segunda mitad del perodo de
floracin, muestran mayor tendencia a sufrir abscisin o formar vainas sin granos (vainas
vanas).

A.3. Debe atraparse el botn floral elegido con los dedos ndice y pulgar de la mano
izquierda, fijando con esta mano el tallo de la planta, evitando todo movimiento que dae
el pedicelo del botn floral.

A.4. A continuacin, con la mano derecha se toman las pinzas, las cuales se colocan
cerradas con ligera presin sobre la sutura ventral del botn; al abrirse las pinzas se abre
el estandarte. Este se rompe ligeramente en el pice para doblar hacia afuera la parte
izquierda del estandarte.

14

A.5. De esta manera quedan descubiertas las alas que se cortan presionando en su base
con las pinzas, dejando al descubierto la quilla, la cual consiste de dos ptalos soldados
espiralados (Figura 2d, 3 y 4a). Esta tiene un orificio pequeo a travs del cual se toma
uno de los ptalos con la punta de las pinzas, jalando cuidadosamente hasta eliminar toda
la quilla sin daar los estigmas ni romper las anteras.

A.6. Al descubrir las anteras y el estigma (Figura 4b y 4c), deben eliminarse las anteras
cortando por su base con las pinzas. Si se observa que se ha derramado polen, o si se
daa el estigma, debe eliminarse este botn y elegir otro. Con la eliminacin de las
anteras termina la emasculacin.

B). Polinizacin.

B.1. Despus que se emascul el progenitor femenino, se efecta la polinizacin. Para


esto, se cortan flores del progenitor masculino que haya abierto el mismo da
identificndose porque las flores muestran un aspecto turgente y de color vivo (Figura 1b).
Las flores cortadas se colocan en un vaso, mantenindose en lugar fresco.

B.2. Para obtener el polen, se toma una flor con la mano izquierda fijndola por el
estandarte; con los dedos de la mano derecha se presionan las alas hacia abajo (Figura
2b), observndose que el estigma emerge por el pice de la quilla. Se sostiene en esta
posicin con la mano izquierda y con la derecha se toman las pinzas y se corta
presionndole en su base incluyendo un segmento del estilo. El estigma lleva adheridos
granos de polen que van a ser utilizados para la polinizacin.

15

Figura 1. Estructura Floral del Frijol:

1.- Inflorescencia: a) vaina en desarrollo; b) flor en antesis; c,d) botones.

2.- Flor en antesis: a) cliz; b) alas c) estandarte; d) quilla.

3.- Quilla.

4.- Interior de la quilla: a) ptalos de la quilla; b) estilo; c) anteras; d) vaina sin desarrollar;
e) ovario.

5 y 6.- Detalles de la vaina.

7.- Estigma: a) pelos del estigma.

8.- Antera.

B.3. El estigma del progenitor masculino se frota sobre el estigma del botn emasculado
del progenitor femenino, enganchndose ambos, de tal forma que hagan contacto,
dejndose en esta posicin par garantizar una mayor seguridad del cruzamiento.

16

B.4. Una vez efectuada la polinizacin, se cierran los restos del estandarte cubriendo el
botn con un trozo de papel servilleta ligeramente humedecido para proteger el pistilo que
ha sido polinizado.

B.5. Finalmente, se coloca una etiqueta sobre el pedicelo del botn donde deben anotarse
los nombres de los progenitores, la fecha de polinizacin, nombre del alumno y el nmero
del grupo para poder observar posteriormente si las polinizaciones realizadas fueron
exitosas.

B.6. Los botones polinizados pueden tener cualquiera de los siguientes destinos:
transformarse en vainas normales, lo cual sera la meta buscada; en vainas sin granos
(vanas), o bien en vainas que se caen unos das despus de efectuada la polinizacin.

CUESTIONARIO

1.- Describa la metodologa de mejoramiento denominada seleccin genealgica o


pedigree.

2.- Si usted realizara una gran cantidad de polinizaciones, cmo podra comprobar con
certeza que el producto obtenido es debido a una polinizacin controlada y no a una
indeseada?

EVALUACIN
Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la
discusin de los resultados.
El alumno realizar la polinizacin. 1.25 %
Entregar reporte de prctica. 2.0 %

BIBLIOGRAFIA

1.- Miranda, C. S. 1962. Mejoramiento gentico del frijol en Mxico. En: Produccin de
granos y forrajes de Ral Robles Snchez (1981). Ed. LIMUSA. Mxico, pp. 553-575.

17

2.- Miranda, C.S. 1965. Herencia del color de la flor en Phaseolus vulgaris L. Memoria del
Primer Congreso de fitogentica. Mxico, D.F. pp. 201-214.

3.- Miranda, S.C. 1969. Estudios sobre la herencia de tres caracteres de frijol.
Agrociencia. Vol. 4: nm. 1: 115-122.

4.- Nez, G.S. 1979. Cruzamiento artificial en frijol. Tesis de M.C. del Centro de
Gentica, C.P. 84 pp.

18

II. POLINIZACIN CONTROLADA EN MAZ

INTRODUCCIN

El maz (Zea mays) es una especie que fue domesticada en Mxico y Centroamrica hace
aproximadamente 7,000 aos, siendo en la actualidad el alimento bsico de casi todos los
pases de Amrica y uno de los cereales ms productivos del mundo.

Con el descubrimiento del maz hbrido en los Estados Unidos de Amrica en 1909 por el
Dr. G. H. Shull, se aument considerablemente la productividad de este cereal, lo cual
propici que la siembra de semilla hbrida en la faja maicera de este pas, sea casi del
100% en la actualidad. En Mxico, el mejoramiento gentico del maz inici en 1940, y no
obstante el gran nmero de variedades hbridas de polinizacin libre producidas para las
diferentes regiones agrcolas del pas, el 90% de las semillas que se siembran son
semillas criollas y nicamente el 10% son hbridos y variedades mejoradas.

El mejoramiento gentico del maz tiene como principal objetivo la obtencin de hbridos
y/o variedades mejoradas con alto potencial de rendimiento, las cuales, en lo posible, son
de amplia adaptacin, resistentes al acame, a plagas y enfermedades, adaptadas para la
cosecha mecanizada y de alta calidad, considerando el uso al que se destine el grano.

Los principales mtodos de mejoramiento que se aplican en estas especies son la


seleccin masal, la seleccin familiar (de medios hermanos, hermanos completos y
autohermanos o lneas s1), la seleccin combinada (que pretende conjuntar las
respuestas de la seleccin familiar y de la seleccin masal) y la hibridacin, con la cual se
busca explotar el vigor hbrido que se obtiene al cruzar dos lneas, dos variedades o dos
razas de la misma especie.

La comprensin de los mtodos de mejoramiento en el maz depende de la forma de la


polinizacin. El maz es una especie monoica y algama con un 95% de polinizacin
cruzada y 5% de autopolinizacin, por ende, el objetivo de la polinizacin controlada es
incorporar a la progenie caractersticas agronmicas deseables, travs de un control

19

estricto sobre el manejo de sus progenitores, o bien mantener y aumentar una poblacin
con sus principales caractersticas.

OBJETIVOS

1.- Realizar la polinizacin cruzada entre diferentes variedades vegetales (maz)


para explicar la forma en que se realiza este proceso.

MATERIALES
Lote de plantas de maz.
Bolsas de glacine (8 x 20 cm)
Bolsas de papel num. 12 (17 x 40 cm).
Cuchillo o navaja
Engrapadora
Clips.
Lpiz No. 2.

PROCEDIMIENO

El cruzamiento controlado en el maz implica el jiloteo de las plantas hembras y de la


polinizacin.

A). Jiloteo
El jiloteo consiste en preparar al jilote (inflorescencia femenina) para ser polinizadas
posteriormente. Consta de los siguientes pasos:

1.- Se seleccionan plantas cuyos jilotes no hayan expuesto sus estigmas, es decir, que no
hayan sido polinizadas.

2.- Se elimina la vaina de la hoja que cubre el jilote para facilitar la operacin.

20

3.- Con un cuchillo o navaja se cortan unos dos centmetros de la punta del jilote con el
propsito de que los estigmas emerjan uniformemente, como un cepillo.

4.- Se cubre el jilote con una bolsa de glacine, la cual debe meterse hasta la mitad para
evitar que el crecimiento del jilote la rompa.

5.- De esta manera concluye el jiloteo. Posteriormente, una vez que los estigmas crezcan
lo suficiente (5 u 8 das despus o hasta 15 20 si es necesario), puede efectuarse la
polinizacin.

B). Polinizacin

Esta consiste en la aplicacin de polen sobre los estigmas de las inflorescencias de las
plantas previamente jiloteadas. Debe hacerse por la maana (5 a 7 a.m.) para obtener el
mximo de polen. Se realizarn tres tipos de cruzamientos: autofecundacin (I),
cruzamientos fraternales (II) y cruzamientos planta a planta (III).

a). autofecundacin

La autofecundacin consiste en el cruzamiento de una planta por s misma. Se utiliza para


la obtencin de lneas puras, que pueden utilizarse en alguna metodologa de seleccin o
bien ser utilizadas, despus de varias generaciones de autofecundacin, para la
formacin de hbridos. Consiste en lo siguiente:

1.- Se cubre la espiga con una bolsa de papel manila para colectar el polen de la misma
planta que previamente ha sido jiloteada. Se toma la planta por la parte superior, con el
jilote hacia el polinizador, y se dobla con cuidado para alcanzar la espiga sobre la cual se
colocar la bolsa indicada, la cual debe cerrarse alrededor del raquis y asegurarse con un
clip.
.
2.- Unas tres o cuatro horas ms tarde (10-11 a.m.), despus de que el sol ha calentado,
habr ocurrido la dehiscencia de las anteras, por lo que se procede a colectar el polen.

21

Para esto, se dobla la planta como se indic en el inciso anterior y se golpea ligeramente
la bolsa (con la espiga dentro) para propiciar que se libere ms polen.

3.- Hecho lo anterior, se saca cuidadosamente la espiga para no derramar el polen,


procurando adems no abrir la bolsa para evitar contaminacin con polen de otras
plantas.

4.- Una vez que el polen se concentr en el fondo de la bolsa, se le hace un doblez por la
mitad. Con la primera mitad deber cubrirse parcialmente el jilote, que sigue protegido por
la bolsa de glacine. Sin exponer los estigmas, deber eliminarse esta bolsa para
posteriormente enderezar y sacudir la bolsa de papel sobre el jilote. Esta bolsa deber
fijarse sobre la planta, doblando sus mrgenes alrededor del tallo y fijndolos con una
grapa.

5.- Para identificar las polinizaciones realizadas se anota sobre la bolsa el lugar, el signo
que indica autofecundacin ( ), el nombre del alumno y del grupo y la fecha de la
polinizacin.

b). Cruzamiento Fraternal

Mediante este tipo de cruza se simula apareamiento aleatorio dentro de una poblacin. Se
utiliza para incrementar semilla de variedades de las que se desea conservar su pureza
gentica. Para este tipo de cruzamiento se deben tomar un mnimo de 20 plantas de dos
subpoblaciones de la misma variedad. Consiste en los siguientes pasos:

1.- Una vez que las dos poblaciones han sido jiloteadas, debern cubrirse las espigas de
las dos subpoblaciones con bolsas de papel manila.

2.- Se colecta el polen de cada planta, y en dos bolsas diferentes se junta el polen de
cada subpoblacin.

3.- Una vez concentrado el polen de cada subpoblacin, se eliminan las impurezas.
Posteriormente, con cada bolsa se hace un paquete efectundole dobleces, dejndolas

22

reducidas a un tercio de su tamao. Se les hace un pequeo corte en una de las esquinas
para que permitan la salida del polen.

4.- Con el polen de la subpoblacin (a), se polinizan las plantas de la subpoblacin (b), y
viceversa. Para esto se le hace un corte superior a la bolsa de glacine de cada planta
jiloteada, y sin mover la planta para evitar la autopolinizacin, se espolvorea un poco de
polen sobre los estigmas del paquete de polen respectivo.

5.- Una vez hecho esto, se elimina la bolsa de glacine y se cubre el jilote con bolsa de
manila. Esta bolsa debe fijarse a la planta como se indic en el caso de la
autopolinizacin.

6.-En la bolsa de papel debe de indicarse el lugar, el smbolo del cruzamiento fraternal (#),
el nombre y grupo del polinizador y la fecha de polinizacin.

Debern realizarse los cruzamientos directos y recprocos. Cuando sea posible, se


recomienda que se colecte el polen del mayor nmero de plantas para muestrear con
mayor efectividad la variabilidad gentica de la variedad.

c). Cruzamiento Planta a Planta

Este tipo de cruzamiento se realiza con el propsito de controlar los dos progenitores que
intervienen en el cruzamiento. Se utiliza para la formacin de familias de hermanos
completos y para estudiar el patrn hereditario de algunos caracteres de inters.

1.- Una vez jiloteadas las dos plantas, se cubren las espigas de ambas con bolsas de
papel manila.

2.- Se colecta el polen de cada planta por separado. Con el polen de la planta uno se
polinizan los estigmas de la planta dos (cruza directa) y con el polen de la planta dos se
polinizan los estigmas de la planta uno (cruza recproca). Para esto se procede como se
indic en el inciso b-4.

23

3.- Hecho lo anterior, se procede a cubrir el jilote con la bolsa de manila correspondiente.
En cada bolsa deber indicarse el lugar, el smbolo del cruzamiento planta a planta (PaP),
el nombre y grupo del polinizador y la fecha de polinizacin.

CUESTIONARIO

1.- Describa la metodologa de seleccin masal estratificada como se practica en maz


para mejorar las variedades de polinizacin libre.

2.- Investigue cual es el promedio de viabilidad de los granos de polen, as como el


perodo de receptividad de los estigmas en el maz.

3.- En forma sencilla, explique qu es la endogamia y la heterosis y cmo se obtienen en


la prctica.

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
El alumno realizar la polinizacin. 1.25%
Entregar reporte de la prctica. 2.0%

BIBLIOGRAFA

1.- Jugenheimer, R.M. 1981. Maz. Editorial Limusa. Mxico.

2.- Mrquez Snchez F. (2) Tcnicas de polinizacin en maz. Mimegrafo. Depto. De


Fitotecnia. UACh.

3.- Pohelman, J. M. 1976. Mejoramiento gentico de las cosechas. Editorial Limusa.


Mxico. 453 pp.

4.- Robles, S.E. 1982. Produccin de granos y forrajes. Editorial Limusa. Mxico 592 pp.

24

5.- Wellhausen, J. E. 1961. El mejoramiento del maz en Mxico. Avances actuales y


proyeccin hacia el futuro. Revista de la Sociedad Mexicana de Historia Natural. Tomo
XXI, No. 2.

25

PRACTICA No. 3 IDENTIFICACIN Y MANEJO DE Drosophila melanogaster

I. INFORMACIN GENERAL Y TECNICAS PARA EL USO DE Drosophila


melanogaster

INTRODUCCIN

Una vez que los experimentos de Mendel se redescubrieron en 1900, se inici el


verdadero desarrollo de la ciencia de la Gentica, y desde entonces ha jugado un papel
central la mosca de la fruta Drosophila melanogaster, como organismo experimental.

La primera etapa en el estudio de las leyes de la herencia consiste en cruzar individuos


que difieren en uno o varios caracteres bien definidos, adems es necesaria la
observacin de varias generaciones cuya descendencia sea numerosa, que su ciclo de
generacin sea rpido, que sea fcil de mantener en el laboratorio y se puedan contener
muchos individuos en poco espacio. Estas caractersticas las rene la mosca de la fruta
pues se pueden cultivar en frascos de vidrio, y una sola pareja produce varios cientos de
descendientes en 10 20 das.

Desde el estadio de huevo hasta la mosca adulta, Drosophila pasa por varias fases cuya
duracin depende de diversos factores, entre los principales est la temperatura. A 25C
el ciclo de vida se completa en 10 das aproximadamente. Mientras que a 20C son
necesarios 15 das para ellos. Es importante que los cultivos se mantengan entre los 10 y
27C, pues a 30C se observan fenmenos de esterilidad y muerte en las moscas, y a
temperaturas bajas se reduce la viabilidad y el ciclo de vida se alarga notablemente.

OBJETIVOS

Identificar lneas silvestres y mutantes, as como el ciclo de vida de la Drosophila


melanogaster para familiarizarse con el uso de este organismo experimental.

26

Figura 1. Ciclo de vida de Drosophila melanogaster

CICLO DE VIDA

Huevo: La oviposicin comienza al segundo da de emergencia de la hembra, llegando a


producir e 400 a 500 huevos en diez das. Los huevos son ovoides, pequeos
(aproximadamente de medio milmetro de longitud), y tiene dos filamentos en uno de sus
extremos, que les impiden hundirse en la superficie blanda del alimento donde son
depositados.

Larva: Del huevo emerge la larva, la cual es blanca, segmentada y de forma de gusano.
Sufre dos mudas, por lo que alcanza hasta 4.5 mm de longitud. Esta etapa es la ms
afectada por la temperatura, a 20 su duracin es de aproximadamente 10 das.

Pupa: Cuando la larva madura est lista para transformarse en pupa, generalmente sube
por las paredes de la botella o por el papel que se ha colocado en el frasco de cultivo, en
busca de un sitio seco. Ah, la ltima cubierta larvaria se endurece, oscurece y cambia de
forma a medida que se contrae; en esta etapa ocurre una compleja reorganizacin de los
tejidos (metamorfosis) y despus de 4 das emerge el adulto (Figura 1).

27

Adulto: Al llegar a su fin el estadio de pupa, emerge la mosca adulta rompiendo la


envoltura. Al principio las moscas son muy largas, frgiles, de color muy claro y no
extienden todava sus alas. Se oscurecen en pocas horas, tomando ya apariencia del
adulto; viven alrededor de un mes. Las hembras no copulan sino despus de 8 10 horas
de emergidas de la envoltura. Al copular almacenan grandes cantidades de
espermatozoides que fecundan a los vulos antes de la oviposicin. Para llevar el control
de las cruzas es muy importante el aislamiento de las hembras vrgenes que pueden
colectarse sacando del medio a las moscas adultas antes de las 8 10 horas siguientes
de su salida de la envoltura. Se separan los machos y las hembras en frascos de cultivos
diferentes hasta que sean usadas para los cruzamientos.

DIFERENCIAS SEXUALES

Se utilizan varios criterios para distinguir las moscas machos de las hembras
1. Tamao del adulto. La hembra es generalmente ms grande que el macho (figura 2).
2. Marcas en el abdomen. En la parte dorsal del abdomen de la hembra se observan
ms bandas claras y obscuras, ya que los ltimos segmentos del macho estn
fusionados (figura 2).
3. Forma del abdomen. La curva del abdomen de la hembra termina en punta; el del
macho es romo y ms corto (figura 2).
4. Peines sexuales. En los machos, existe un pequeo penacho de cerdas en el
segmento basal tarsal de cada pata delantera. Este es el mtodo ms seguro para
distinguir moscas machos y hembras jvenes (menos de dos horas de edad), ya que
los otros rasgos adultos no siempre se pueden reconocer a temprana edad (figura 3).
5. Genitales externos en el abdomen. Localizados en la punta del abdomen, el ovipositor
de la hembra es puntiagudo, los claspers del macho son oscuros de forma circular
(figura 4).
6. rganos sexuales durante la etapa larval. Durante la ltimas etapa larvaria los machos
pueden distinguirse por la presencia de una gran masa blanca de tejido testicular, este
se localiza en el tercio posterior de la larva, en los cuerpos grasos laterales, y pueden
verse a travs del tegumento. El tejido ovrico de la hembra forma una masa mucho
ms pequea.

28

Figura 2. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster.

Figura 3. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster

29

Figura 4. Dimorfismo sexual en Drosophila melanogaster.

Principales caractersticas del tipo silvestre

Antes de observar los mutantes es necesario familiarizarse con las caractersticas del tipo
silvestre (o ms comn) de Drosophila. Se conocen cientos de mutaciones pero solo se
mencionan algunas de las ms relevantes, las cuales se comparan con el tipo silvestre.

Figura 5. Drosophila melanogaster de tipo silvestre

30

1). Ojos
Silvestres: Color rojo brillante, forma oval y multifacetados.
Mutantes: color blanco, negro, durazno, rojo escarlata, rosa o caf; cambios en
la forma y nmero de facetas.

2). Alas
Silvestres: Superficie lisa, venacin uniforme, extendidas hasta afuera del
abdomen.
Mutantes: Cambios en tamao y forma; ausencia de venas especificas;
cambios en la posicin en la que se colocan las alas cuando la mosca est en
reposo.

3). Cerdas
Silvestres: Rectas, largas y lisas (distribucin especifica en cabeza y trax).

4). Color del cuerpo


Silvestre: bsicamente gris o caf claro, con patrones de reas claras y
oscuras.
Mutantes: negro en grados variables, amarillo. El color se puede determinar
ms claramente en las venas de las alas, en las patas y en el trax (en
posicin dorsal).

En general las caractersticas mutantes son recesivas respecto al tipo silvestre,


a menos que se indique lo contrario.

Mutantes de Drosophila melanogaster de uso comn en el laboratorio.

A continuacin se enlistan algunos de los mutantes de Drosophila con las


caractersticas que los distinguen y su posicin en el mapa, Los nmeros entre
parntesis indican el cromosoma en que se encuentra el gene y su posicin en
el mapa.

31

(1 1.5) Ojos casi blanco nieve, ocelos y tubo


de malpighi sin color. Aparece con una
frecuencia de 1/30000 moscas normales.
White: w Tiene numerosos alelos entre el blanco y el
normal.
(3 26.0)El color de los ojos al emerger es
caf rojizo transparente y se oscurecen hasta
el sepia, posteriormente se torna caf en los
adultos. Los ocelos son de tipo normal.
Sepia: se

(3 44.0) Ojos color amarillo rojizo muy


brillante y se oscurecen un poco con la edad.
Ausencia de color en los ocelos. La
Scarlet: st combinacin st/st, bw/bw produce ojos
blancos.

(1 57.0) Ojos barra. El nmero de facetas en


el ojo se reduce a 68 en el homocigoto(BB),
en el heterocigoto (B+B) es de 358,
Barra: B comparado con el promedio de 779 en el tipo
silvestre (B+B). Se considera una mutacin
semidominante. La visibilidad es buena.

(2 67.0) Alas atrofiadas en diferentes


grados, alterios muy reducidos. Hay varios
alelos, viabilidad reducida

Vestigial:vg

(2 7.0) Alas completamente curvas hacia


arriba. Generalmente es letal la condicin
homocigotica.
Curly: cy

(2 13.0) Alas recortadas y reducidas en su


longitud a dos terceras partes de la del tipo
normal; los vellos y setas torcicas tambin
Dumpy: dp resultan afectadas por este gene. Buena
viabilidad.

(2 48.7) Color del cuerpo, trazos y venas de


las alas son de color negro.
Ebony:e

32

II. Drosophila melanogaster: UN ORGANISMO EXPERIMENTAL

Antes de comenzar las cruzas experimentales con la mosca de la fruta, es necesario


conocer bien el organismo y su ciclo de vida. Este insecto se utiliza ampliamente en los
estudios genticos por varias razones: el ciclo vital es corto, puede mantenerse gran
nmero de individuos en espacio reducido y a bajo costo, su descendencia es numerosa y
tienen la gran ventaja de presentar caractersticas hereditarias bien definidas, con
mutaciones evidentes que facilitan su seguimiento de generacin en generacin.

Materiales

Un frasco de vidrio de boca angosta

Tapn de algodn y gasa para el frasco

Pltano maduro

Cultivos de lneas mutantes

Procedimiento

Coloque en el frasco un pedazo de pltano maduro; cuando observe moscas de la fruta


en su interior, cbralo con el tapn de algodn y gasa, y comience sus observaciones
registrando los cambios que se producen en el mismo.

Anote las fechas en que observe las diferentes etapas de desarrollo y esquematice cada
una. Lleve su cultivo al laboratorio cuando se lo indique el profesor para revisar las
moscas.

Los organismos obtenidos se denominan silvestres (+). Observe y esquematice las


siguientes caractersticas: color de los ojos, color del cuerpo (dorsal y ventral) y forma de
las alas.

Las moscas tienen dimorfismo sexual; consulte y auxliese de los esquemas, para separar
las hembras de los machos. Cercirese de que las separ correctamente consultando
con el profesor.

33

Una vez identificadas las caractersticas silvestres, observe bajo el microscopio, las
moscas mutantes que se le proporcionaron y clasifquelas de acuerdo a las caractersticas
contrastantes que presenten respecto al silvestre.

Complete el cuadro que se le presenta con un esquema y el smbolo que le corresponde a


cada mutante. Reporte por escrito sus observaciones, el cuadro de los esquemas y el
cuestionario.

Identifique y dibuje las caractersticas fenotpicas de los caracteres silvestres o mutante


que se indican a continuacin: a) color de los ojos: silvestre, White, sepia y scarlet; b)
forma de los ojos: silvestre y bar; c) color del cuerpo: silvestre, black, yellow y ebony, y d)
forma de las alas: silvestre, dumpy y vestigial.

Esquematice las caractersticas fenotpicas silvestres o mutantes que se indican con base
en las observaciones directas de los organismos y anote la simbologa correspondiente.

COLOR DE LOS OJOS

SILVESTRE__________ WHITE ____________ SEPIA _____________

COLOR DE OJOS FORMA DE LOS OJOS

SCARLET_______________________ BAR______________________________

34

COLOR DEL CUERPO

SILVESTRE_______________________ BLACK___________________________

COLOR DEL CUERPO

YELLOW_________________________ EBONY____________________________

FORMA DE LAS ALAS

SILVESTRE___________ DUMPY_______________ VESTIGIAL___________

35

III. MANEJO DE Drosophila melanogaster

Para el inicio de toda cruza experimental, con Drosophila melanogaster es conveniente


tener conocimientos de ciertas actividades que son de uso rutinario en el laboratorio. A
continuacin se explican, haciendo nfasis en el objetivo que se persigue con cada una
de ellas, as como la forma de llevarse a cabo. Es necesario llevar una bitcora en la cual
se deben registrar todas las actividades que se realicen as como la fecha en que se
hicieron.

Obtencin de hembras vrgenes

Es requisito indispensable que al iniciar toda cruza, la hembra que fungir como
progenitor sea virgen. Estas se seleccionan pocas horas despus de emergidas debido a
que no copulan sino hasta despus de 8 a 12 h. Al copular se almacenan una gran
cantidad de espermatozoides que fecundan a los vulos antes de la ovoposicin. Estas
hembras pueden colectarse antes de que emerjan de la pupa o en las primeras horas del
da. No es necesario que los machos sean vrgenes.

Inicio de la cruza (siembra)

Se seleccionan los progenitores ( y ), se colocan dos parejas en un frasco con


cultivo fresco. Estos frascos se etiquetan indicando el genotipo de los progenitores,
nmero de grupo, equipo y fecha de la siembra.

Po. _________X ________

Grupo__________Equipo_______

Fechadesiembra______________

36

Eliminacin de progenitores

Una vez se observen larvas en el medio de cultivo, elimine a los progenitores


(transfirindolos a la morgue) para evitar que se crucen con la descendencia
(Retrocruza). Estas larvas corresponden a la primera generacin (F1).

Trasvase

Emergida la F1 revise y anote las caractersticas que presenta. Transfirala a otro frasco
de cultivo con alimento fresco (debe etiquetarse como se muestra adelante) y espere a
que aparezcan larvas en el alimento, stas corresponden a la segunda generacin (F2).
Cuando tenga certeza de la presencia de la F2 es necesario eliminar a los adultos de la F1
que les dieron origen, para evitar retrocruza.

GenotipodeF1XF1________________

Fechadetrasvase__________________

Grupo______________Equipo_______

Eterizacin y reeterizacin

Las moscas se anestesian con vapores de ter o cloroformo para observar sus
caractersticas. Para ello se transfieren a los organismos a frascos vacios, semejantes a
los del cultivo; se debe tener cuidado de no dejar escapar a las moscas. Posteriormente
se tapa el frasco con un tapn de algodn y gasa al que se le han agregado tres gotas de
ter o cloroformo. Despus de 15 a 30 segundos, las moscas dormidas estn listas para
su observacin. Si las moscas se despiertan antes de tiempo anestsielas con un
reeterizador.

Antes de regresarlas a su frasco de cultivo, coloque las moscas en un frasco vacio para
que se recuperen. De no ser as se corre el riesgo de que se peguen en el alimento y
mueran.

37

Conteos

Antes de realizar el primer conteo debe desarrollarse en su cuaderno la cruza terica de


la que se trate, desde P0, hasta la obtencin de F2, para determinar cules son los
fenotipos que deben registrarse. Al emerger la F2, se cuenta el nmero de moscas de cada
fenotipo. Son necesarios por lo menos tres conteos, para acumular un nmero de
alrededor de 300 moscas de cada cultivo

Las moscas anestesiadas se colocan en una caja de Petri y se manipulan con un pincel
fino. Se observan con una lupa o con el microscopio estereoscpico. Deseche las moscas
de cada conteo depositndolas en la morgue1

Figura No. 7 Esquema general de los experimentos

Registro

Cada equipo debe registrar cuidadosamente las observaciones realizadas en su


cuaderno (bitcora).

38

Adems de lo indicado, tome en cuenta que los cultivos deben mantenerse en estado
slido y libre de bacterias y hongos, para lo cual es conveniente que atienda las
siguientes recomendaciones:

Lavarse las manos con jabn antes de manipular los frascos que contienen el medio
de cultivo. Tenga en cuenta que el medio de cultivo se esteriliz, antes de iniciar los
cultivos, con el propsito de eliminar los microorganismos que pudieran desarrollarse
en l.
Limpiar perfectamente, con agua jabonosa y cloro, la zona de trabajo.
Cuando se destapen los frascos mantener los tapones sostenidos entre los dedos,
para evitar que estn en contacto con la mesa de trabajo.

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
El alumno entregar reporte de la prctica sobre la identificacin de la Drosophila
melanogaster. 3.3%

BIBLIOGRAFA

1. Demerec, M. y B.P. Kaufman. 1961. Introduccin a la gentica y citologa de


Drosophila melanogaster. Traduccin R.F. Estrada, 1975. Instituto Nacional de
Energa Nuclear. 7. Ed. Mxico. 56pp.
2. Strickberger. M.W. 1962. Experiments in genetics with Drosophila. John Whiley
and Sons, Inc. USA.144pp.

39

Figura 6. Mapa de ligamiento de algunos de los genes ms importantes de los cuatro


cromosomas de Drosophila melanogaster. Ntese que hay una variedad de genes que
pueden afectar a un carcter especfico como el color de los ojos, la forma de las alas, las
quetas, etc. Strickberger, 1984.

40

PRCTICA No. 4 CRUZAMIENTO DIHBRIDO CON Drosophila melanogaster


DEMOSTRACIN DE LAS LEYES DE MENDEL

INTRODUCCIN

Gregorio Mendel, al realizar sus experimentos con chicharos, dise una forma de trabajo
que consisti en la cruza de variedades puras que diferan en una o varias caractersticas
contrastantes bien definidas. Analiz la descendencia de varias generaciones y elabor
un modelo para explicar sus resultados. Sus trabajos fueron redescubiertos en 1900 y, al
realizar cruzas experimentales con diversos organismos, se reconoci que los principios
planteados por l, para explicar la herencia en el chcharo, eran extensivos a los dems
organismos. Estos principios los conocemos ahora como Leyes de Mendel.

La mosca de la fruta Drosophila. melanogaster ha sido ampliamente usada en las cruzas


experimentales por las caractersticas de su ciclo de vida, fcil manejo y por que presenta
caracteres hereditarios contrastantes bien definido y fciles de seguir de generacin en
generacin.

OBJETIVOS

1. Demostrar las Leyes de Mendel mediante cruzas con Drosophila melanogaster para
comprobar la segregacin y distribucin independiente.

MATERIALES

1 frasco con alimento fresco, con 2 3 parejas de moscas

1 frasco vacio con tapn de gasa

1 caja de Petri

1 Pincel

1 frasco gotero con cloroformo

Etiquetas adhesivas y lpiz

Microscopio estereoscpico

41

PROCEDIMIENTO

A. Identificacin de los organismos. Inicio del cruzamiento

Los frascos de cultivos proporcionados, fueron sembrados con parejas de moscas


silvestres y mutantes. Para identificar el sexo y las caractersticas contrastantes es
necesario anestesiarlas y observarlas con microscopio.

Observe las caractersticas que presentan y llene el siguiente cuadro:

CARCTER COLOR DE OJOS COLOR DE CUERPO FORMA DE LAS ALAS


SEXO
Smbolo __________ Smbolo __________ Smbolo __________
Caractersticas Caractersticas Caractersticas
MACHO
___________________
__________________ ___________________

Smbolo __________ Smbolo __________ Smbolo __________


Caractersticas Caractersticas Caractersticas
HEMBRA
___________________ ___________________ ___________________

Nombre del cruzamiento _________________________________________________

Cuando un cruzamiento experimental se observa solamente un carcter contrastante el


cruzamiento se denomina MONOHIBRIDO, si se utilizan dos caractersticas
contrastantes, recibe el nombre de DIHIBRIDO.

Una vez identificado el cruzamiento correspondiente, regrese las moscas al frasco vacio
para que se despierten y posteriormente a su frasco de cultivo.

Etiquete su frasco con los siguientes datos:

Genotipo ______________X _______________

Grupo__________________Equipo__________________
42
Fecha_______________Cruza_______________________

Coloque sus frascos etiquetados en el sitio que le indique el profesor.

Figura No.1 Esquema general del experimento

B. Actividades posteriores con los cultivos

Revise su cultivo dos veces por semana y anote los cambios que se registren (cuadro 1).
Cuando observen en el cultivo, elimine a los progenitores para evitar que se crucen con
su descendencia (retrocruza). Al emerger la primera generacin filial (F1) revsela y anote
las caractersticas que presentan; transfiralas a un frasco con alimento fresco y
etiqutelo, indicando claramente el genotipo de la F1. Al observar larvas en el frasco,
elimine a los individuos F1 que sembr para evitar la Retrocruza.
Cuando la F2 emerja realice tres conteos en das diferentes, para acumular por lo menos
300 moscas. Registre sus observaciones en la hoja de registro que se anexa.

Conteos: antes de iniciar el primer conteo, plante la hiptesis de trabajo. Desarrolle el


cruzamiento para determinar los fenotipos y la proporcin esperada de estos en F1 y F2

43

Cuadro 1. Registro de las actividades realizadas en el cruzamiento dihbrido

ACTIVIDADES FECHA OBSERVACIONES

Inicio del cruzamiento Genotipo __________________

Eliminacin de los progenitores

Trasvase de la F1 Genotipo __________________

Eliminacin de la F1

Conteos de F2 1

44

HOJA DE REGISTRO

GRUPO_______________________ EQUIPO______________________________
CRUZAMIENTO (Genotipo y Fenotipo) ________________________________________
FECHA DE INICIO ________________________________________________________
OBSERVACIONES DE F1 (Indicar genotipo y fenotipo) ___________________________
________________________________________________________________________
F2: Fecha de inicio del cruzamiento ___________________________________________

NMERO DE MOSCAS DE CADA FENOTIPO


CONTEO DE F2
FECHAS:

TOTAL

Nota: Los conteos no tendrn valor si no llevan la firma del Tcnico. Favor de no tirar las
moscas a la morgue hasta que no sean revisadas por el tcnico o profesor.

Registro de los conteos de la F2 del cruzamiento dihbrido.

FECHA NMERO DE MOSCAS DE CADA FENOTIPO

C. Anlisis de resultados

Con el propsito de determinar si las proporciones observadas corresponden a las


esperadas, apliquen la prueba de X2 a los datos del equipo. Compare las proporciones de

45

cada uno de los caracteres estudiados, por separados, con la proporcin esperada para
un cruzamiento dihbrido.

Prueba de X 2 :

VALORES
FENOTIPOS (O-E) (O-E)2 (O-E)2
OBSERVADOS ESPERADOS E

TOTAL

CUESTIONARIO

1. Defina los siguientes conceptos:

a) Homocigtico e) Lnea pura


b) Heterocigtico f) Dominante
c) Genotipo g) Recesivo
d) Fenotipo h) Alelo

2. Aplique la prueba de X2 a los resultado de su equipo y del grupo Existe


diferencias significativa entre los valores esperados y los observados para el equipo?
Para el grupo? Si es as, explique las causas posibles. Si no es as Qu significa?

3. Analice el desarrollo del trabajo del equipo y seale los posibles factores que pudieron
afectar los resultados. Cmo se puede mejorar estas prcticas?

4. Al cruzar moscas hembras silvestres, con machos de alas recortadas (dumpy) la F1


tiene alas normales. Qu resultados y en qu proporcin se espera n la F2?

46

Esquematice la cruza reciproca y resuma los fenotipos esperados en la F2. Hay


diferencia en la descendencia esperada? Por qu?

5. Al comparar los valores obtenidos para cada carcter, por separado, con la proporcin
esperada para un cruzamiento monohbridos. Qu se obtuvo?

6. Investigue lo relativo a los genes que regulan las caractersticas estudiadas


(cromosomas en que se encuentra, posicin en el mapa, que otros efectos origina en
el organismo, etc.); Considera que se manifest algn efecto pleiotrpico? Por qu?

7. Es vlido extrapolar los resultados del cruzamiento en la mosca a otros organismos,


incluso el humano? Explique por qu

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
El alumno entregar reporte de la prctica realizada. 3.3%

BIBLIOGRAFA

1. Garder, E. 1977. Principios de Gentica. Ed. LIMUSA. Mxico.


2. Strickberger, W.M: 1983. Gentica, Ed. Omega, Espaa.
3. Valadez, E. 1987. Manual de Prcticas de Gentica. Dpto. de Preparatoria
Agrcola UACh. Mxico.

47

PRACTICA No 5. SEGREGACIN Y ASOCIACIN DE GENES MEDIANTE UN


MODELO

INTRODUCCIN

Los estudios que Gregorio Mendel llev a cabo en el chcharo (Pisum sativum) para
analizar el comportamiento de las caractersticas contrastantes en cruzamientos
monohbridos y dihbridos le permitieron describir el principio de la segregacin
independiente. Este principio dio origen a la Primera Ley de Mendel, que estableca
bsicamente que los factores (alelos) opuesto de un mismo carcter, se separan al
formarse las clulas sexuales (polen y vulo). A su vez dichos factores separados se
renen durante la fecundacin con los del sexo opuesto recombinndose al azar,
fundamento en el cual se basa la Segunda Ley de Mendel. Como consecuencia de esta
recombinacin gentica, se originan fenotipos nuevos en proporciones especficas, que
dependen del nmero de caractersticas que se consideren en el cruzamiento.

PROPORCIONES

TIPO DE CRUZA FENOTPICA GENOTPICA

Monohbrida 3:1 1:2:1

Dihbrida 9:3:3:1 4:2:2:2:2:1:1:1:1

OBJETIVO

Analizar el comportamiento de los genes (segregacin y asociacin independiente),


mediante un modelo para determinar las variaciones estadsticas asociadas a la expresin
gnica.

PRIMERA PARTE: CRUZAMIENTO MONOHBRIDO

48

Materiales:

Un metro de franela

Dos urnas de plstico o vasos de unicel

Cuatro canicas, dos negras y dos blancas

Un plumn de tinta indeleble

Tarjetas con las combinaciones que se pueden producir

Tabla de registro por equipo y por grupo

Procedimiento.

1. Con los materiales mencionados se pretende establecer un modelo probabilstico de los


fenmenos de segregacin y recombinacin, considerando que los genes se encuentran
agrupados en pares en el genotipo de los individuos.

Las canicas representan los alelos responsables de las caractersticas contrastantes; de


esta manera un par de canicas del mismo color constituyen una lnea pura conteniendo
slo un tipo de alelos (las canicas negras simbolizan los alelos dominantes, responsables
del carcter dominante; y las blancas a los recesivos, que a su vez determinan el carcter
recesivo.

Los estudiantes trabajaran en pares, cada pareja representar las dos lneas puras
colocando las canicas negras en un vaso y las blancas en otro. Los gametos que cada
individuo puede formar son de un tipo: dominante (canica negra) o recesivo (canica
blanca).

2. Al realizar el cruzamiento de dos lneas puras de caractersticas contrastantes, se


obtienen hbridos F1, que poseen un alelo de cada tipo (heterocigotos). Los alumnos
representarn la formacin de los hbridos depositando en los dos vasos una canica
negra y una blanca, de tal manera que cada vaso representar a un individuo de la F1,
stos se utilizarn para obtener la F2.

3. Cada vaso representa un heterocigoto para un carcter (monohbrido) y forma dos tipos
de gametos: negro (dominante A) o blanco (recesivo a). Recuerde que los genotipos que
se presentan en este modelo son diploides, originados por la unin de dos gametos
provenientes de los progenitores monohbridos.

49

Los alumnos marcarn un vaso con el nmero 1, que colocarn del lado izquierdo y el
otro con el nmero 2 que colocarn del lado derecho. Revolvern las canicas en los
vasos y extraern una canica de cada recipiente para formar un par, observar que
combinacin se produjo y anotar. Devolver las canicas a sus respectivos depsitos para
realizar 20 repeticiones. (Nota: tener mucho cuidado en devolver las canicas a sus
recipientes correspondientes).

1 2
P0 X

= A (dominante)

= a (recesivo)

F1 x F1 1 x
2

IndividuoI IndividuoII

F2 Ind. I

Ind. II

AA Aa

aA aa

Resultados.

Los datos deben manejarse por equipo y despus formar un cuadro general para el grupo.
Al comparar los datos del equipo con los del grupo comprobaran que a medida que la
muestra es mayor, tambin es mayor la aproximacin a las relaciones genotpicas y
fenotpicas esperadas: 1: 2: 1 y 3: 1

50

Tabla 1. Cruzamiento monohbrido. Resultados del equipo

FENOTIPO Dominante Dominante Dominante Recesivo

GENOTIPO AA Aa aA aa
Homocigoto Heterocigoto Heterocigoto Homocigoto
dominante recesivo
Nmero de

repeticiones

Tabla 2. Cruzamiento monohbrido resultados del grupo

FENOTIPO Dominante Dominante Recesivo

AA Aa aa
Homocigoto Heterocigoto Homocigoto
GENOTIPO dominante recesivo

Equipo

10

11

12

total

51

Anlisis de resultados.

Una vez que haya comprendido el modelo propuesto para demostrar la segregacin y la
recombinacin independiente de los genes, plantee la hiptesis de trabajo
correspondiente para esta parte de la prctica: cruzamientos monohbrido. Analice los
datos esperados y observados. Estos datos tambin los deber analizar mediante la
prueba de ji cuadrada (X2), una vez que este tema se aborde en el curso.

SEGUNDA PARTE: CRUZAMIENTO DIHBRIDO.

Materiales:

Un metro de franela

Cuatro urnas de plstico o vasos de unicel

Ocho canicas, dos negras, dos blancas, dos azules y dos rojas

Un plumn de tinta indeleble

Tarjetas con las combinaciones que se pueden producir

Tabla de registro por equipo y por grupo

Procedimiento.

1. Asignar a cada canica una letra, asocindolas por parejas, ya que se representarn
dos pares de caractersticas. Los smbolos A (negra) y a (blanca) y B (roja) y b (azul)
representan los dos pares de alelos que se seguirn en la cruza representada.

2. Para representar al individuo que posee los caracteres dominantes y en lnea pura, hay
que depositar las canicas negras en el vaso marcado con el nmero1 y las rojas en el
vaso 3; para mostrar al individuo con se colocarn las canicas blancas en el vaso 2 y las
azules en el vaso 4.

As, cada individuo queda representado con dos vasos, al que posee las dos
caractersticas dominantes (AABB) y con los otros dos al que tiene las dos
caractersticas recesivas (aabb). Se muestran as las dos lneas puras contrastantes.
Cada individuo produce slo un tipo de gametos AB y ab. Recuerde que cada gameto
lleva un alelo representante de cada par.

3. Para representar a los individuos de la F1 se debe tomar una canica del vaso 1 y una
del 2 , una del 3 y otra del 4 para despus agruparlas con los colores contrastantes y
depositarlas en sus respectivos recipientes. De esta manera se simulan los dihbridos.

52

Para realizar la cruza y obtener la F2, se necesitan dos dihbridos. Cada dihbrido puede
formar cuatro tipos de gametos AB, Ab, aB y ab y al simular la fecundacin se obtienen
16 combinaciones posibles, que se mostrarn ms adelante.

4. Para obtener la F2, se representa a un progenitor dihbrido con dos vasos marcados
con los nmeros 1 y 3 y se coloca del lado derecho; al otro dihbrido con los vasos 2 y 4
que se sitan del lado izquierdo. Se extrae una canica de cada urna (gameto con un
representante de cada par de alelos) formando as el doble par. Observar que
combinacin se produjo y anotar los resultados, posteriormente devolver las canicas a sus
respectivos vasos. Cada pareja debe realizar 20 repeticiones.

= A (dominante)
1 2
P0 3 X 4 = a (recesivo)

= B (dominante)

= b (recesivo)

1 3 2 4
F1 x

IndividuoI IndividuoII

Tabla 3. Cruzamiento dihbrido. Resultados del equipo

Ind.
F1 GAMETOS
I I
AB AB AB AB Ab Ab Ab Ab aB aB aB aB ab ab ab ab
II II
AB Ab aB ab AB Ab aB ab AB Ab aB ab AB Ab aB ab
com 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
bina
Fecundacin (F2)

cio
nes AA AA AaB Aa AA AA Aa Aa AaB Aa aaB aa Aa Aa aa aa
BB Bb B Bb Bb bb Bb bb B Bb B Bb Bb bb Bb bb
re
peti
cio
nes

53

Tabla 4. Cruzamiento dihbrido. Resultados del grupo

Ind.
F1 GAMETOS
I I
AB AB AB AB Ab Ab Ab Ab aB aB aB aB ab ab ab ab
II II
AB Ab aB ab AB Ab aB ab AB Ab aB ab AB Ab aB ab
Com 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
bin
Equip
AA AA Aa Aa AA AA Aa Aa Aa Aa aaB aa Aa Aa aa aa
BB Bb BB Bb Bb bb Bb bb BB Bb B Bb Bb bb Bb bb
1

Fecundacin (F2)
5

10

11

12

total

RESULTADOS

Registre las frecuencias genotpicas obtenidas por el equipo en la tabla que se muestra
arriba y resmalas en una tabla general del grupo.

Compare los valores obtenidos por el equipo con los del grupo y determine si al aumentar
el tamao de la muestra las proporciones genotpicas y fenotpicas observadas no se
desvan significativamente de las proporciones esperadas 4:2:2:2:2:1:1:1:1 y 9:3:3:1
respectivamente.

54

Determine si los resultados observados concuerdan con los esperados (proporcin


genotpica y fenotpica) de acuerdo con las hiptesis de trabajo planteadas anteriormente.
Estos datos los deber analizar mediante la prueba de ji cuadrada (X2), una vez que
este tema se aborde en el curso.

CUESTIONARIO

1. Escriba y explique las Leyes de Mendel.

2. En los resultados de la cruza monohbrida Qu proporciones genotpicas y


fenotpicas se esperan? Se ajustan los datos de su equipo y los del grupo a los
esperados? Explique

3. En los resultados de la cruza dihbrida Qu proporciones genotpicas y


fenotpicas se esperan? Se ajustan los datos de su equipo y los del grupo a los
esperados? Explique

4. Mencione que factores pudieron influir en el desarrollo de la prctica para modificar


las proporciones esperadas.

5. Explique que representan las canicas en cada parte de la practica

6. Qu proporciones genotpicas y fenotpicas se esperan al realizar un cruzamiento


trihbrido?

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
El alumno entregar el reporte de la prctica. 3.3%

BIBLIOGRAFA

1. Gardner, E:J: 1979. Principios de Gentica. Ed. Limusa. Mxico. 716 pp.

2. Strickberger, M:W: 1974. Gentica. Ed. Omega. Barcelona, Espaa. 916 pp.

3. Winchester, A:M: 1976. Gentica. Un estudio de los principios de la herencia.


CECSA, Mxico. 576 pp.

55

PRACTICA No 6. GRUPOS SANGUINEOS. DETERMINACIN DEL TIPO


SANGUNEO EN LOS SISTEMAS ABO Y Rh Y CLCULO DE LAS FRECUENCIAS
GNICAS DE ALELOS MLTIPLES EN EL SISTEMA ABO

INTRODUCCIN

La sangre humana es muy semejante en todas las personas: es roja, fluye por los vasos
sanguneos y transporta sustancias a todas las partes del cuerpo. Sin embargo, en la
sangre se encuentra gran variacin de elementos que difieren de una persona a otra, lo
cual determina la existencia de varios tipos sanguneos, los cuales son muy estables y
libres de los efectos de la edad, de enfermedades y de la influencia de otros genes. Por
su estabilidad, diversidad y patrones de herencia simple, la herencia de los tipos
sanguneos es un campo de estudio muy favorable para realizar estudios de gentica
humana y gentica de poblaciones.

Dentro de los diferentes sistemas de clasificacin de la sangre, debido a los elementos


que la constituyen destacan dos: el ABO y el Rh. Esta tipificacin se basa en la presencia
o ausencia de los antgenos A y B y sus respectivos anticuerpos en el sistema ABO; y en
la presencia o ausencia del antgeno Rh en el sistema Rh

Un ejemplo clsico de alelos mltiples en humanos es el sistema sanguneo ABO, en el


cual se encuentran involucrados un mnimo de tres alelos. El alelo IA codifica la protena
A (antgeno A), el alelo IB codifica el antgeno B, mientras que el alelo i no especifica
ningn antgeno. Los alelos IA e IB son codominantes entre s, pero dominantes sobre el
alelo i, por lo tanto, un individuo de tipo sanguneo A puede ser homocigtico (IA IA) o
heterocigtico (IA i). Del mismo modo, los individuos con tipo sanguneo B tambin puede
presentar cualquier de los siguientes genotipos IB IB e IB i, mientras que los individuos de
tipo sanguneo AB u O, solamente presentan un genotipo: IA IB e i i, respectivamente.

Los antgenos son sustancias de naturaleza proteica que estimulan la produccin de


anticuerpos, y se encuentran en la superficie de los glbulos rojos. Los anticuerpos son
protenas del plasma sanguneo que en la mayora de los casos, se forman solo cuando
las clulas son expuestas a un antgeno extrao. Los anticuerpos especficos contra el

56

antgeno A y el B se llama Anti A y Anti B, respectivamente, y se producen en el


organismo sin el estimulo previo de los antgenos correspondientes, por esto se les
considera antgenos naturales.

En el sistema Rh, la tipificacin se basa en la presencia o ausencia del antgeno Rh (tipo


D) y su respectivo cuerpo Anti Rh (D). Las personas que lo tienen se clasifican como Rh
positivo (Rh+) y las que carecen de l se denominan Rh negativo (Rh-). En general, este
carcter est determinado por un par de alelos, R y r, respectivamente, siendo el Rh+
dominante sobre el negativo; sin embargo, se ha planteado que estn involucrados una
serie de tres alelos (C, D y E) en la determinacin de este carcter.

OBJETIVOS

1. Identificar el tipo sanguneo de los estudiantes en el sistema ABO y Rh para


determinar cmo se distribuye este fenotipo entre los alumnos del grupo.

MATERIALES

Antisueros A, B, y Rh
Portaobjetos
Lancetas
Alcohol
Algodn
Palillos
Guantes de uso mdico

PROCEDIMIENTO

1. Limpiar con algodn y alcohol la yema del dedo pulgar.

2. Con una lanceta, hacer una puncin en el dedo pulgar y colocar tres gotas de sangre,
separadas, sobre el portaobjetos.

57

3. Mezclar cada gota con un tipo diferente de antisuero con un palillo limpio. La
aglutinacin de los glbulos rojos se sealar como positiva y la no aglutinacin como
negativa.

4. En las personas con tipo sanguneo O, como no tienen ninguno de los antgenos, no
habr aglutinacin al aplicar los antisueros A y B. En las personas con tipo sanguneo
A, como tienen el antgeno A, se presentar aglutinacin al aplicar el antisuero A; y en
las personas con tipo sanguneo AB, habr aglutinacin positiva al aplicar los
antisueros A y B, ya que tienen ambos antgenos en sus glbulos rojos.

5. Si al aplicar el antisuero Rh (D) a la tercer gota de sangre, hay aglutinacin de


glbulos rojos, el individuo tendr Rh positivo debido a que tiene el antgeno Rh (D) en
sus glbulos rojos.

Para la mejor compresin de los sistemas sanguneos ABO y Rh, complete la informacin
que se solicita en el Cuadro 1.

Cuadro 1. Tipificacin de los grupos sanguneos de acuerdo a la presencia o ausencia


de los antgenos A, B y Rh (D) y sus respectivos anticuerpos
REACCIN CON
GRUPO ANTGENOS ANTICUERPOS GENOTIPOS
SANGUNEO ANTI-A ANTI-B ANTI-Rh PROBABLES

A
B
AB
O
Rh+
Rh-

RESULTADOS

Determine el tipo sanguneo por cada integrante del equipo y vace esta informacin en el
cuadro 2. Posteriormente cada equipo escriba sus resultados en el cuadro 3, y con esta
informacin calcule (por grupo), la frecuencia gnica de los alelos IA , I B
e i como se
indica ms adelante.

58

Cuadro 2. Tipo sanguneo de los integrantes del equipo


TIPO SANGUNEO
ALUMNO A B AB O
1
2
3
4
5
TOTAL

Clculo de frecuencia gnicas en el sistema ABO.

Para calcular las frecuencias gnicas de los tres alelos involucrados en el sistema
sanguneo ABO, se procede como sigue:

Para calcular las frecuencias gnicas de los tres alelos involucrados en el sistema
sanguneo ABO, se procede como sigue:

1. Si p, q y r representan respectivamente las frecuencias de los alelos IA, IB e i en la


poblacin, la distribucin de genotipos se puede encontrar desarrollando el trinomio (p
+ q + r)2 , como se ilustra a continuacin:

p IA qIB ri
A 2 A A A B
pI p I I pq I I pr I A i
qIB pq IA I B q2 I B I B qr I B i
r i pr IA i qr IB i r2 ii

Resumiendo: (pIA + qI B + ri) 2 = p 2IA IA + 2 pqIA I B + 2 prIA i + q2 I B I B +2qriBi + r2ii

59

Como los alelos IA e I B


son codominantes entre s, y dominantes sobre el alelo i, la
relacin de genotipos y fenotipos es la siguiente:

Cuadro 2. Relacin de frecuencia genotpicas, genotipos y fenotipos en el sistema


sanguneo ABO
FRECUENCIA FENOTIPOS
GENOTIPOS
GENOTPICAS (TIPO SANGUNEO)
p2 IA IA A
2pr IA i A
A B
2 pq I I AB
2 B B
q I I B
2 qr IB i B
r2 ii O

2. Supngase que a, b y o representan las frecuencias fenotpicas de los grupos


sanguneos A, B, Y O, respectivamente.

Como el nico genotipo homocigtico, inidentificable es el i i, cuya frecuencia es


r2, la frecuencia del alelo i ser igual a la raz cuadrada del porcentaje de
individuos con tipo sanguneo O, es decir: R= r2 = 0
Dado que (p + q + r) = 1, y que p2 + 2pr + r2 = (p +r)2, y como
P+ r = 1- 1, la frecuencia del alelo IB se calcula como sigue:

q=1a+o

del mismo modo (p + q + r) = 1, y que q2 + 2qr + r2 = (q +r)2, y como q + r = 1-


p, la frecuencia del alelo IA se calcula de la siguiente manera:
p= 1 - b+o

3. Determine el tipo sanguneo por cada integrante del equipo y vace esta informacin
en el cuadro 3. Posteriormente cada equipo escriba sus resultados en el cuadro 4, y
con esta informacin calcule (por grupo), la frecuencia gnica de los alelos IA I B e i.

60

Cuadro 3. Tipo sanguneo A, B, AB y O por grupo

TIPO SANGUNEO
EQUIPO
A B AB O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
FRECUENCIA
GENICA

CUESTIONARIO

1. Cmo se originan los alelos mltiples y como deben simbolizar? Hasta qu


punto representan alteraciones del mismo fenotipo? Cmo podra descubrirse la
naturaleza allica por mtodos genticos?

2. Explique cmo se determina el tipo sanguneo utilizado los antisueros A, B y Rh


Qu indica la reaccin de aglutinacin?

3. Un hombre de apellido Prez, resulta muy lesionado en un accidente y necesita


con urgencia una transfusin de sangre. Un amigo de apellido Snchez se ofrece
para donar la sangre y la transfusin se hace con xito. Dos aos despus
Snchez necesita una transfusin y Prez, deseando devolver el favor, se ofrece
como donador, sin embargo, despus de analizar, su sangre, es rechazado.

61

Ambos desean saber por qu, Qu les dira usted? Exponga sus razones
basadas en los dos sistemas de antgeno en la sangre.

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
Entregar reporte de la prctica. 2.0%

BIBLIOGRAFA

1. Ayala, J. F. y J. A. Kiger 1984. Gentica moderna. Ed. Fondo Interamericano.


Mxico 836 pp.
2. Garder, J. E. 1964. Principios de Gentica. Ed. LIMUSA. Mxico. 551 pp.
3. Stanfield, D. W. 1982. Gentica. Serie Schaums. Ed. McGraw Hill. Mxico.
298 pp.
4. Winchester, A.M. 1977. Gentica. Ed. CECSA: Mxico, 576 pp.

62

PRACTICA No 7. LIGAMIENTO AUTOSOMICO CON Drosophila melanogaster.

INTRODUCCIN

En 1906 Bateson y Punnett en experimentos con chcharos, observaron una desviacin


de la distribucin independiente. Al cruzar plantas de flor morada y granos de polen
largos, con plantas de flores rojas y granos de polen redondos, la F1 se pareca al primero
de estos progenitores. Cuando la F1 era entrecruzada, la relacin de F2 difera de la
clsica (9:3:3:1) encontrada por Mendel. Los resultados mostraban un exceso de los dos
tipos parentales, morado largo y rojo redondo.

Cuando la F1 de otro cruzamiento (morado redondo x rojo largo) era entrecruzada,


nuevamente se observaba un predominio de los tipos parentales. Sin embargo, los genes
morado y rojo, y los genes largo y redondo segregaban en la proporcin 3:1 en la F2 lo
cual confirmaba que el color de la semilla estaba determinado por un par de alelos y la
forma por otro.

En 1910 T.H. Morgan dio una explicacin a estos resultados indicando que los pares de
alelos que no se distribuyen independientemente, se conservan unidos o ligados debido a
que estn en el mismo cromosoma; y que los recombinantes se producen por otro
mecanismo que rompe el ligamiento entre ellos, dicho mecanismo se denomina
entrecruzamiento o recombinacin.

El criterio principal para detectar el ligamiento es realizar la cruza de prueba al dihbrido.


La proporcin 1:1:1:1 es caracterstica de la distribucin independiente, mientras que la
desviacin de dicha proporcin es indicativa de ligamiento.

63

OBJETIVOS

1. Calcular el valor de ligamiento y entrecruzamiento de los genes considerados mediante


una cruza de prueba.

MATERIALES

1 frasco de cultivo con 2 parejas de moscas

1 frasco vaco con tapn de algodn y gasa

Microscopios estereoscpicos

Cloroformo

Pincel, etiquetas y lpiz

PROCEDIMIENTO

A.- Inicio del cruzamiento.

Pase las moscas del frasco de cultivo al frasco vaco, anestsielas, y revselas con el
microscopio estereoscpico, registrando sus caractersticas en cuanto a ojos, cuerpo y
alas. Una vez despiertas, regrselas al frasco de cultivo.

Aunque en esta prctica se manejarn dos caractersticas, los dos genes involucrados se
encuentran en el mismo cromosoma, es decir, en el mismo grupo de ligamiento, por esta
razn el cruzamiento recibe el nombre de LIGAMIENTO AUTOSOMICO.

64

Etiquete su frasco con los siguientes datos:

Genotipo ______________X _______________

Grupo__________________Equipo__________________

Fecha_______________Cruza:_______________________

B.- Cruzamiento de prueba

Al observar larvas en el medio, elimine los progenitores y al emerger la F1, determine su


fenotipo. Seleccione tres hembras vrgenes de esta poblacin y crcelas con machos
doble recesivos para las caractersticas que se estn siguiendo (cruza de prueba).
Etiquete sus frascos de manera que no se confundan.

de la F1 x doble recesivos
___________ x _______________

Grupo_______ Equipo__________

Fecha___________________________

Cruzamiento de prueba

65

Esquema general del cruzamiento.

Lleve el control del cruzamiento con un cuadro de registro de actividades.

Recuerde que, en los cultivos, cuando aparezcan larvas en el medio, deben eliminarse
las moscas adultas que les dieron origen para evitar retrocruzas.

Investigue en qu cromosomas se encuentran los genes considerados en este


cruzamiento y la distancia entre ellos. Con esta informacin desarrolle el cruzamiento de
prueba al dihbrido, y plantee las hiptesis correspondientes, indicando los fenotipos que
se esperan en la descendencia.

66

Cuadro 1. Registro de las actividades realizadas en el cruzamiento de prueba

ACTIVIDAD FECHA OBSERVACIONES

a) Inicio del cruzamiento Hembras F1 del cruzamiento


anterior con machos doble
recesivos

b) Eliminacin de los progenitores

e) Conteos de descendencia

CRUZAMIENTO DE PRUEBA

HOJA DE REGISTRO

GRUPO______________________________EQUIPO_________________________

CRUZAMIENTO (Genotipo y Fenotipo)_________________________________

FECHA DE INICIO:____________________________________________________

CONTEOS DE LA
DESCENDENCIA
NMERO DE MOSCAS DE CADA FENOTIPO

FECHAS

TOTAL

67

Prueba de X2c:

FENOTIPOS VALORES

OBSERVADOS ESPERADOS (O-E) (O-E)2 (O-E)2 / E

TOTAL

Nota: Los conteos no tendrn valor si no llevan la firma del Tcnico o del profesor. Favor
de no tirar las moscas a la morgue hasta que no sean revisadas por el Tcnico o profesor.

C. Anlisis de los resultados

a) Corrobore mediante X2 que las proporciones observadas se desvan significativamente


de las esperadas 1:1:1:1 en la descendencia de este cruzamiento.

b) Calcule la fuerza de ligamiento, el porcentaje de entrecruzamiento y las unidades mapa


que separan a los genes localizados en el mismo grupo de ligamiento.

c) Compare el valor de unidades mapa observado con el reportado en el mapa


cromosmico de Drosophila. Utilice X2 para comparar las proporciones observadas con

68

las esperadas. Estas ltimas calclelas mediante la distancia mapa reportada en el mapa
cromosmico.

CUESTIONARIO

Defina los siguientes trminos:

a) Grupo de ligamiento e) acoplamiento

b) Genes ligados f) repulsin

c) Entrecruzamiento g) fuerza de ligamiento

d) Unidades de mapa

2.- Describa de qu manera se determina la posicin relativa de los genes en un


cromosoma.

3.- Cuando los genes estn ligados Se cumplen las Leyes de Mendel?.

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.
Se evaluar con reporte de la prctica. 3.3 %

BIBLIOGRAFA

Ayala, F.J. y Kiger, J.A. 1984. Gentica moderna. Fondo Educativo Interamericano.
Mxico. 939 pp.

Strickberger, M.W. 1976. Gentica. Ed. Omega, Espaa. 937 pp.

69

PRACTICA No. 8. HERENCIA LIGADA AL SEXO CON Drosophila melanogaster

INTRODUCCIN

Desde la antigedad los filsofos griegos haban notado que algunos caracteres de los
humanos que se presentaban en el padre, no aparecan en sus hijos, pero reaparecan en
los varones de la siguiente generacin.

A finales del siglo XVIII, se contaba con detalladas descripciones de caracteres


hereditarios como el daltonismo y la hemofilia, que presentaban este tipo de especial
transmisin de abuelos a nietos. Sin embargo, fue hasta 1910 cuando T.H. Morgan logr
explicar este fenmeno al encontrar un carcter equivalente en D. melanogaster que
consista en que las moscas portadoras de un gene mutante presentaban ojos de color
blanco.

Conjuntando el anlisis de los cruzamientos de este mutante con moscas silvestres y las
observaciones citolgicas, Morgan logr determinar que este gene se encontraba ubicado
en el cromosoma X. Debido a lo anterior se le llam carcter ligado al sexo. A diferencia
de los caracteres autosmicos, en este caso la cruza recproca no origina la misma
descendencia que la cruza original:

En la actualidad se conocen en humanos alrededor de 120 caracteres ligados al sexo,


como los mencionados antes, adems el glaucoma juvenil, la estenosis mitral, la miopa,
la distrofia muscular juvenil, etc., por lo cual se comprende la gran importancia que se ha
dado al estudio de este patrn hereditario especial.

OBJETIVO

1. Analizar el patrn hereditario de un carcter recesivo ligado al sexo en Drosophila

melanogaster para determinar la forma en la que ocurre.

MATERIALES

1 frasco de cultivo con 2 parejas de moscas

70

1 frasco vaco con tapn de gasa


Cloroformo o ter
Microscopio estereoscpico
Pincel, etiqueta y lpiz

PROCEDIMIENTO.

A.- Inicio del cruzamiento.

Pase las moscas presentes en el cultivo al frasco vaco para anestesiarlas y revisarlas
con el microscopio estereoscpico.

Separe las hembras y los machos, y determine sus caractersticas de ojos, cuerpo y alas
como en las prcticas anteriores. Espere a que despierten y regrselas a su frasco de
cultivo. Etiquete su frasco, como se muestra a continuacin:

Genotipo ______________X _______________

Grupo__________________Equipo__________________

Fecha_______________Cruza_______________________

Coloque su frasco de cultivo en el lugar que le asigne su profesor y revselo


peridicamente.

Esquematice en su cuaderno el cruzamiento que se asign a su equipo y determine los


fenotipos y genotipos esperados en F1 y F2, as como las proporciones correspondientes.
Establezca la hiptesis de trabajo.
Una vez que se observen larvas en el frasco, elimine a los progenitores para evitar la
Retrocruza. Al emerger la F1, revsela y transfiera estas moscas a otro frasco de cultivo
con alimento fresco; al observar larvas en este nuevo cultivo, elimine la F1 que le dio
origen, y espere a que emerja la F2.

71

Realice por lo menos tres conteos de las moscas F2, hasta acumular por lo menos 350
moscas; registre el sexo y caractersticas de los ojos.

Figura No.1 Esquema general del experimento

B. Actividades posteriores con los cultivos.

Cuadro 1. Registro de las actividades realizadas en este cruzamiento


ACTIVIDADES FECHA OBSERVACIONES
Siembra
Eliminacin de progenitores
Trasvase de la F1
Eliminacin de individuos
F1
Obtencin de F2
1er. conteo
2do. conteo
3er. conteo

72

HOJA DE REGISTRO

GRUPO_______________________ EQUIPO______________________________
OBTENCIN DE F1
CRUZAMIENTO REALIZADO___________________________________
FECHA DE INICIO DEL CRUZAMIENTO ________________________________
: OBTENCION DE F1 ____________________________

CARACTERISTICAS SILVESTRES MUTANTES

HEMBRAS

MACHOS

OBTENCIN DE F2
CRUZAMIENTO REALIZADO___________________________________
FECHA DE INICIO DEL CRUZAMIENTO ________________________________

NMERO DE MOSCAS
FECHA DEL
MACHOS HEMBRAS
CONTEO
SILVESTRE MUTANTE SILVESTRE MUTANTE

TOTAL:

73

C. Anlisis de los resultados

Para determinar si las proporciones observada coinciden con las esperadas, aplique la
prueba de X2 , comparando las proporciones de los sexos y de las caractersticas del color
de los ojos.

VALORES
FENOTIPOS (O-E) (O-E)2 (O-E)2
OBSERVADOS ESPERADOS E

CUESTIONARIO

1. Esquematice el cruzamiento efectuado y el cruzamiento reciproco. Se esperan


los mismos resultados en ambos? Por qu?
2. Qu significa el trmino hemicigtico? Explique la herencia ligada al sexo en
relacin con este concepto.
3. En qu sexo se presentan con mayor frecuencia los caracteres recesivos ligados
al sexo? Por qu?
4. Qu carcter ligado al sexo se utiliza como marcador en las aves. Describa el
mecanismo.

EVALUACIN

Se evaluar el contenido, la claridad y la limpieza del reporte de las prcticas, as como la


discusin de los resultados.

74

Se evaluar con reporte de la prctica. 3.3%

BIBLIOGRAFA

1. Garder, E.J. 1977. Principios de Gentica, Ed. LIMUSA, Mxico.


2. Lpez R., J. 1985. Gentica General. Preparatoria Agrcola, UACh.
3. Valadez M., E. 1987. Manual de Practicas de Gentica Preparatoria Agrcola.
UACh.
4. Winchester, A.M.1981. Gentica. CECSA, Mxico.

75

PRCTICA 9. LA SNTESIS DE PROTENAS EN CLULAS EUCARIOTAS


CONSTRUCCIN DE UN MODELO

INTRODUCCIN

Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones en las
clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los
tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean funciones
metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas
en la sangre, inactivacin de materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los
elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura
del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos
en el sistema inmunitario.

OBJETIVO

Elaborar un modelo que represente la sntesis de protenas, para tener una mejor
compresin de este proceso.

MATERIAL

Por grupo
Proyector multimedia
Computadora

Por equipo integrado por cinco alumnos


Un esquema de una clula eucariota.
Tarjetas de 20 colores diferentes. Cada tarjeta tiene el nombre de uno de los 20
aminocidos. (repetir dos tarjetas por aminocido x 20 = 40 tarjetas).
Crculos de 20 colores diferentes. Cada crculo representa una molcula de RNA de
transferencia (tRNA). (Repetir dos crculos por tRNA x 20 =40 crculos).

PROCEDIMIENTO

76

Esquemas de transcripcin y traduccin, basados en: Annimo. Principios de


Bioqumica. Sntesis de protenas. 2011. Consultado 21 de abril de 2011.
(http://www.angelfire.com/magic2/bioquimica/sintesis_de_prote_nas.htm).

Esquema general del flujo de informacin en clulas eucariotas.

1. Coloca en el citoplasma las tarjetas y crculos que representan a los


aminocidos y a cada uno de los tRNA.
2. La transcripcin ocurre en el ncleo y el mARN, luego de sufrir un
procesamiento, se dirige al citoplasma donde se produce la sntesis de
protenas.

Representa la transcripcin
La transcripcin del DNA A RNA mensajero

77

El movimiento de mRNA al citoplasma llevando el mensaje gentico.


Agarre del mRNA a varios ribosomas formndose los polisomas.
3. Traduccin. Implica la transformacin del lenguaje de cidos nucleicos en la
molcula de mRNA al lenguaje de aminocidos de la protena. La traduccin
se da en tres etapas.

Representa la traduccin con sus tres etapas:


a) Iniciacin.
b) Elongacin
c) Terminacin

La sntesis de protenas ocurre en varias etapas: a) Iniciacin. La subunidad ribosmica


ms pequea se une al extremo 5' de una molcula de mRNA. La primera molcula de
tRNA, que lleva el aminocido modificado fMet, se acopla con el codn iniciador AUG de
la molcula de mRNA. La subunidad ribosmica ms grande se ubica en su lugar, el
complejo tRNA-fMet ocupa el sitio P (peptdico). El sitio A (aminoacil) est vacante. El
complejo de iniciacin est completo ahora.

78

Un segundo tRNA, con su aminocido unido, se coloca en el sitio A y su anticodn se


acopla con el mRNA. Se forma un enlace peptdico entre los dos aminocidos reunidos en
el ribosoma. Al mismo tiempo, se rompe el enlace entre el primer aminocido y su tRNA.
El ribosoma se mueve a lo largo de la cadena de mRNA en una direccin 5' a 3', y el
segundo tRNA, con el dipptido unido, se mueve desde el sitio A al sitio P, a medida que
el primer tRNA se desprende del ribosoma. Un tercer aminoacil-tRNA se coloca en el sitio
A y se forma otro enlace peptdico. La cadena peptdica naciente siempre est unida al
tRNA que se est moviendo del sitio A al sitio P y el tRNA entrante que lleva el siguiente
aminocido siempre ocupa el sitio A. Este paso se repite una y otra vez hasta que se
completa el polipptido.

79

Cuando el ribosoma alcanza un codn de terminacin (en este ejemplo UGA), el


polipptido se escinde del ltimo tRNA y el tRNA se desprende del sitio P. El sitio A es
ocupado por un factor de liberacin que produce la disociacin de las dos subunidades
del ribosoma.

EVALUACIN

El alumno elaborar un modelo que represente la sntesis de protena. 3.3%

BIBLIOGRAFA

Annimo. 2011 Principios de Bioqumica. Sntesis de protenas. Consultado 21 de abril de


2011. (http://www.angelfire.com/magic2/bioquimica/sintesis_de_prote_nas.htm)

80

Oliver, F. 1982. Fundamentos de gentica. Mxico,McGRAW-HILL. 394 p.

Klug, W. y R. Cummings. 1999. Conceptos de gentica. 5a ed. Trad. De Jos Luis


Mnsua Fernndez y David Bueno Torrens. Madrid, Prentice Hall Iberia. 840 p.

81

ANEXO

82

ELABORACION DEL CARIOTIPO HUMANO

INTRODUCCIN

Un cariotipo es la descripcin fsica del complemento cromosmico somtico de un


organismo. Cada especie presenta una constitucin cromosmica caracterstica, no slo con
respecto al nmero, longitud y forma de los cromosomas, sino tambin con referencia a la
naturaleza y sucesin de los genes que contiene cada uno.

En un estudio cariotipo se toman en cuenta las siguientes caractersticas de los


cromosomas: 1) Nmero de cromosomas; 2) Nmero de genomios; 3) Tamao absoluto; 4)
Longitudes relativas; 5) Posicin del centrmero; 6) Constricciones secundarias; 7) Otras
regiones diferenciadas que pueden ser aparentes o inducidas como la distribucin de
eucromatina y heterocromatina o la distribucin de bandas mediante procedimientos
especiales de tincin.

En ocasiones los cromosomas del juego haploide se pueden representar mediante un


diagrama en el que se disponen en una serie decreciente por su longitud, indicando la
localizacin del centrmero, constricciones secundarias, satlites u otras estructuras
conspcuas. A esta representacin diagramtica del cariotipo se le llama idiograma.

OBJETIVO

Que el alumno conozca qu es un cariotipo, cmo se elabora y qu utilidad tiene, as como


algunas de las tcnicas empleadas para su elaboracin.

MATERIALES

Informacin bibliogrfica y esquemas de cromosomas humanos.

1.- Preparacin de los cromosomas para su estudio

El estudio de los cromosomas slo se efecta en clulas bajo divisin, generalmente a partir
de los cromosomas en metafase. Para cultivos rpidos, se emplean glbulos blancos o
leucocitos de la sangre, ya que los eritrocitos o glbulos rojos, carecen de ncleo. De
tejidos como la piel, que adems es de fcil obtencin, se pueden derivar cultivos de largo
plazo, ya que estas clulas (principalmente los fibroplastos) son capaces de una
multiplicacin continua in vitro durante muchas generaciones.

Cuando se efectan estudios cariotpicos en fetos, se extrae una muestra de lquido


amnitico mediante puncin en el vientre de la madre (amniocentesis), ya que en este
lquido flotan clulas fetales.

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Las clulas se cultivan bajo condiciones estriles. Induciendo la divisin celular


adicionando un agente mitognico (que estimula la mitosis). Cuando se tiene una poblacin
abundante, se agrega colchicina al medio para aumentar el nmero de clulas en metafase
y facilitar la dispersin de los cromosomas.

Posteriormente se fija, se tien con un colorante adecuado y se extienden en un


portaobjetos colocando un cubreobjetos encima. Con el microscopio se observan las
preparaciones para elegir la que presente la mejor disposicin de los cromosomas, a la que
se le toma una fotografa (5 por preparacin) que se amplifica, y de la cual se recortan
individualmente los cromosomas para despus agruparlos por pares y de acuerdo a la
clasificacin de la Conferencia de Chicago (1966) sobre gentica humana.

2.- Tcnicas de bandeado

Para poder distinguir un par de cromosomas homlogos de otro par, desde 1970 se han
desarrollado nuevas tcnicas que permiten su identificacin por su patrn caracterstico de
bandas transversales, las que se ponen de manifiesto con mtodos de tincin especiales, dos
de los cuales se mencionan a continuacin:

a) Fluorescencia de la quinecrina. En este mtodo, los cromosomas se tien con


mostaza de quinecrina y luego se examinan en el microscopio de fluorescencia;
cada para aparece teido segn un patrn especfico de bandas claras y obscuras
(bandas Q).

b) Bandeado de Giemsa. Loa cromosomas se tratan con tripsina y luego se tien con
colorante de Giemsa, originando un patrn caracterstico de bandas llamadas G,
para cada par de homlogos (Fig. 1).

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Figura 1. Cariotipo masculino normal con bandas de Giemsa (G). Cada par de cromosomas
presenta un bandeado caracterstico que permite su identificacin. Los cromosomas se
ordenan segn las convenciones establecidas en congresos internacionales.

3.- Aplicaciones de los estudios cariotpicos.

El estudio cariotpico es una herramienta citogentica de multiples aplicaciones, de las


cuales las ms importantes son:

a) Estudios evolutivos. La comparacin de cariotipos de especies diferentes permite


trazar las relaciones filogenticas entre estas.

b) Taxonoma. Los cariotipos aportan informacin para la clasificacin de las especies,


subespecies, razas, etc.

c) Medicina. Algunos defectos y malformaciones genticas en humanos, como los


sndromes de Down, Klinefelter, Turner y otros, pueden detectarse a tiempo
mediante anlisis cariotpico de las clulas del feto.

d) Mutagnesis. El efecto de los agentes mutagnicos fsicos y qumicos, puede ser


visualizado en algunos casos en las aberraciones cromosmicas como delecciones,
translocaciones y otras, que se ponen de manifiesto al estudiar los cromosomas de
los tejidos afectados.

4.- Aplicaciones en medicina y gentica humana.

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Hacia mediados de la dcada de 1950, se pensaba que l nmero cromosmico somtico en


humanos era de 48. En 1956, J. H. Tjio y A. Levan, publicaron en Suecia sus
investigaciones en las cuales establecan que el nmero cromosmico es 2n = 46.

En 1960 se llev a cabo la conferencia de Denver en la cual los citogenetistas adoptaron un


sistema para clasificar e identificar a los cromosomas humanos de acuerdo a su longitud y
posicin del centrmero. Este sistema fue perfeccionado posteriormente en las
Conferencias de Londres (1963) y Chicago (1966).

Hasta entonces sin embargo, era imposible identificar consistentemente a cada par de
cromosomas homlogos, lo cual se super con el advenimiento de las tcnicas de bandeado
de Giemsa (Bandas G) y de quinacrina (Bandas Q).

Con estos avances, en la actualidad es posible detectar anormalidades en los cromosomas


como la delecin del brazo corto del cromosoma 5 que produce el sndrome de cri-duchat o
la presencia del cromosoma Filadelfia con una deficiencia en el cromosoma 23 que se
asocia con la leucemia granuloctica crnica.

Los sndromes que en los humanos se asocian a aneuploidias cromosmicas (cromosomas


de ms o de menos en el complemento somtico), se detecta fcilmente mediante anlisis
cariotipico. Algunas de estas anormalidades se enlistan a continuacin:

Frmula cromosmica Nomenclatura Sndrome clnico


cromosmica

2n + 1 (47, + 21) Down

2n + 1 (47, + 18) Edwards

2n + 1 (47, + 13) (47, + 13) Patau

2n 1 (46, X) (46, X) Turner

2n + 1 (47, XXY) (47, XXY) Klinefelter

2n + 1 (47, XXX) (47, XXX) Triple X

2n + 1 (47, XYY) (47, XYY Macho XYY

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En general estas aneuploidias en humanos estn asociadas a caractersticas fonotpicas


anormales en individuos que las padecen.

Por ejemplo, un cromosoma extra del par 21 en el sndrome de Down, origina individuos de
ojos oblicuos, retraso mental, baja estatura, hiperflexibilidad en las articulaciones, pliegue
tipo simio, propensin a las cataratas, leucemia y al envejecimiento prematuro.

Esta anormalidad en el cariotipo puede detectarse en la etapa fetal de gestacin mediante el


estudio de las clulas del producto obtenidas por amniocentesis.

PROCEDIMIENTO

Leer y analizar la informacin proporcionada y a continuacin elaborar los


cariotipos problema que se presentan utilizando como referencia el cariotipo normal.

Describir el sexo y las caractersticas fenotpicas que presentan los individuos afectados del
sndrome detectado en cada cariotipo.

CUESTIONARIO

1) Qu caractersticas se toman en cuenta para agrupar a los cromosomas en pares


homlogos?

2) Qu tcnicas facilitan la identificacin de los cromosomas?

3) Investigue el nmero cromosmico de alguna especie vegetal y mencione alguna


anomala causada por falta o exceso en su nmero cromosmico.

4) Describa qu es la no disyuncin en la meiosis y ejemplifique cmo se origina uno


de los sndromes anotados antes.

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CARIOTIPO HUMANO NORMAL (MASCULINO)

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BIBLIOGRAFIA

1.- Gardner, E. J. 1982. Principios de gentica. Ed. Limusa, Mxico. 716 pg.

2.- Lpez, R. J. et al, 1985. Gentica general. Depto. De Preparatoria Agrcola, UACH.
342 pg.

3.- Mckusick, V. 1970. Gentica humana. Ed. Hispanoamericana, Mxico.

4.- Patterson, D. 1987. Las causas del sndrome de Down. Investigacin y ciencias. 33, 28-
35.

5.- Winchester, A. M. 1981. Gentica. C.E.C.S.A. Mxico, 576 pg.

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