ATLAS BACTERIA EN

MICROBIOLOGIA
INTRODUCCION
Seguridad en el laboratorio
Antecedentes

Desde hace tiempo la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) reconoce que la seguridad y, en particular, la seguridad biolgica
son importantes cuestiones de inters internacional. En 1983, la OMS public la primera edicin del Manual de bioseguridad en el
laboratorio; en la que se alentaba a los pases a aceptar y aplicar conceptos bsicos en materia de seguridad biolgica, as como
elaborar cdigos nacionales de prcticas para la manipulacin sin riesgo de microorganismos patgenos en los laboratorios que se
encuentran dentro de sus fronteras nacionales. La tercera edicin del Manual de bioseguridad en el laboratorio de la OMS (2005)
proporciona la informacin ms actualizada para abordar los aspectos de la seguridad y la proteccin biolgica que se plantean en
el nuevo milenio. Asimismo, subraya la importancia de la responsabilidad personal. Adems, hace reflexionar sobre los recientes
acontecimientos mundiales que hacen evidente los peligros para la salud pblica derivados de la liberacin o el uso indebido de
agentes y toxinas microbianos. Como profesionales de estas disciplinas, es importante conocer los principios bsicos de seguridad
en el trabajo con microorganismos, considerando los peligros relativos que implican su manejo. De acuerdo con el potencial que
tienen los microorganismos para infectar al ser humano y los animales, se les ha clasificado en grupos de riesgo, que se presentan
en la Tabla

1.
La OMS y los National Institutes of Health (NIH) de los Estados Unidos, han propuesto las bases para la jerarquizacin de los
laboratorios en funcin del grupo de riesgo al que pertenecen los microorganismos que manejan, indicando las condiciones de
acceso, tipo de personal, equipo especial y diseo especfico de las instalaciones.

Normas de seguridad en los laboratorios de docencia

El Consejo Divisional de CBS aprob un Instructivo del Funcionamiento Interno y Operativo para Regular el Uso de los Servicios e
Instalaciones de los Laboratorios de Docencia que fue aprobado por el Consejo Acadmico en la Sesin nmero 314 del 9 de
noviembre de 2009.

Un aspecto muy importante que se incluye en este instructivo es el de cumplir en forma estricta las normas de seguridad para
evitar accidentes en el laboratorio, de manera particular en el captulo IV de las Normas de Seguridad Artculo17 que dice:

En el trabajo de laboratorio es fundamental la seguridad e integridad fsica de las personas involucradas; por ello, no podr
realizarse ninguna prctica o actividad experimental si el ejecutante no cuenta con los elementos de proteccin indispensables
para su desarrollo o no cumple con las disposiciones normativas aplicables, para lo cual se debern cumplir siempre las siguientes
reglas.

1. El uso de bata en el laboratorio es obligatorio cuando se realizan experimentos. Es recomendable vestir ropa sencilla, que
proteja la mayor parte del cuerpo, de preferencia de algodn, zapatos cerrados, con suelas gruesas y sin tacones o
plataformas, as como traer el pelo recogido.
2. No introducir ni consumir alimentos o bebidas en el laboratorio. No fumar, ni tocarse la cara o los ojos con las manos.
3. Lavarse de manera meticulosa las manos con jabn y agua antes de salir del laboratorio, incluso cuando salgan por breves
periodos.
4. Al manipular sustancias qumicas corrosivas o peligrosas se utilizarn guantes, lentes protectores y/o mascarillas. No
sedeber pipetear oralmente ningn tipo de solucin o cultivo microbiano. Siempre se utilizarn propipetas adecuadas para
este fin.
5. No se admitirn visitas personales ni el uso de aparatos que distraigan la atencin y pongan en riesgo la seguridad en el
trabajo.
6. Evitar la acumulacin de materiales innecesarios en las mesas de trabajo. Realizar las actividades de manera ordenada y
en silencio para evitar accidentes.
7. Localizar extintores, botiqun y salidas de emergencia.
Sobre los procedimientos

1. Antes y despus de cada sesin prctica, los alumnos limpiarn las mesas de trabajo con el desinfectante que se le
proporcionar.
2. Cuando se utilice el mechero, este ser colocado en un lugar alejado del microscopio y otros equipos.
3. En el caso de derrame de cultivos o ruptura de recipientes con cultivos activos, tratar de conservar la calma, inmediatamente
informar al profesor y/o realizar el siguiente procedimiento:

a. Colocar toallas de papel sobre el material derramado para evitar su dispersin. Agregar abundante solucin
desinfectante sobre las toallas.
b. Dejar transcurrir al menos 15 minutos, retirar las toallas y tirarlas en el receptculo destinado a la eliminacin de
materiales contaminados.
4. Al concluir cada sesin prctica, el estudiante se asegurar de que los materiales de desecho u objetos contaminados sean
colocados en recipientes especficos para ello, as como en lugares apropiados. Debern esterilizarse tal y como indique el
profesor.

Sobre el uso de instalaciones y equipos de laboratorio

1. Operar un instrumento o aparato solamente cuando se sabe hacerlo, de otra manera, solicitar la ayuda del profesor, del
ayudante o del tcnico del laboratorio, para adquirir la destreza necesaria
.
2. Una vez concluido el uso de un aparato o instrumento, seguir el procedimiento adecuado para apagarlo, desconectarlo,
guardarlo y entregarlo al responsable de su custodia.
3. Siempre dejar perfectamente limpios todos los equipos utilizados (microscopios, balanzas analticas, autoclave,
potencimetros, etc.) y reportar al maestro cualquier irregularidad en el funcionamiento.
4. Verificar que las tomas de agua, gas y aire en el lugar de trabajo estn bien cerradas. Dejar limpias y secas las mesas de
trabajo.
Materiales indispensables en cada sesin de laboratorio

1. El Manual de laboratorio.
2. 2 cubre bocas y 1 par de guantes de ltex.
3. Un pedazo de tela sin pelusa, cerillos, tijeras, cinta de enmarcar (masking-tape), marcador indeleble o etiquetas pequeas,
jabn para manos.
 Principios bsicos de epidemiologa en las enfermedades transmisibles

NTRODUCCIN

La epidemiologa es la ciencia que estudia los determinantes, ocurrencia y distribucin de los problemas afines a la salud y
enfermedad relacionados con una poblacin en su conjunto. Los estados de salud y enfermedad dependen de tres elementos
fundamentales:

1. Agente causal: microorganismos, agentes fsicos (calor, fro, electricidad, etc.), agentes qumicos (txicos y otros).
2. Hospedero: estado nutricional, defensa inmunolgica, edad, sexo.
3. Ambiente: temperatura, humedad, agua, alimentos, vectores, luz solar.
El campo de accin de esta rama de la medicina se dirige fundamentalmente hacia la prevencin, la erradicacin y el control de las
enfermedades transmisibles. Muchas de las enfermedades transmisibles causaron notables epidemias al hombre, por ejemplo: la
viruela, el clera, el tifus y el paludismo. En este ltimo siglo, por factores socioeconmicos principalmente, algunas enfermedades
que se crean erradicadas o controladas,
renacen con un patrn de virulencia inesperado. Algunas de ellas han ido desapareciendo, sin embargo, otras nuevas han surgido
como el SIDA y algunas han resurgido afectando a nuevas reas geogrficas, como el clera; o
con patrones de mayor resistencia a los antibiticos, como la shigelosis o la tuberculosis. Tambin de especial atencin son los
microorganismos de nueva aparicin, como el retrovirus del SIDA o VIH, el virus de bola (filovirus) y el virus Lassa (arenavirus),
entre otros. Se plantea que las afectaciones al medio ambiente, ya sean naturales (ciclones, terremotos, etc.) o artificiales
(construccin de las presas, carreteras y otras), han favorecido la aparicin de nuevos agentes patgenos que circulan con gran
rapidez.

ENFERMEDAD TRANSMISIBLE
Es cualquier enfermedad producida por un agente infeccioso especfico o por sus productos txicos que son capaces de
transmitirse desde un enfermo o portador (reservorio) produzca la transmisin.
Una enfermedad transmisible tiene las siguientes caractersticas:
Su causa determinante es un agente biolgico especfico (bacterias, virus, hongos, protozoarios). Tambin puede ser causada por
sus toxinas. Este agente o sus toxinas puede transmitirse de un enfermo a un sano (de un reservorio a un hospedero susceptible).

ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMERGENTES

Son las enfermedades de origen infeccioso cuya incidencia en humanos se ha
Incrementado desde las dcadas pasadas o tienden a aumentar en el futuro cercano. Por ejemplo, la aparicin de agentes
patgenos nuevos como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y otros retrovirus, los arenavirus, los hantavirus y el virus
de bola. Algunos factores o la combinacin de ellos pueden contribuir a infecciones emergentes como son los eventos sociales,
cuidado de la salud, produccin de alimentos, comportamiento humano, cambios ambientales, infraestructura en la Salud Pblica y
adaptacin y variabilidad microbiana.

ENFERMEDADES INFECCIOSAS REEMERGENTES

Es la reaparicin de agentes patgenos viejos, como los que causan el clera, el dengue hemorrgico, la peste y la fiebre amarilla.
Pueden surgir por cambios genticos en microorganismos existentes; algunas muestran una distribucin focal, otras se dispersan
ampliamente y constituyen un problema global. Ciertas enfermedades conocidas podran aparecer en la vida humana en algunas
condiciones ecolgicas variables donde se incrementa la exposicin a insectos como vectores y otros animales como reservorios o
en fuentes ambientales como patgenos novedosos. Esta reemergencia puede ocurrir por el desarrollo de la resistencia
microbiana de infecciones existentes (por ejemplo: gonorrea, malaria, enfermedades neumocccicas) o resquebrajamiento en las
medidas de la Salud Pblica para infecciones previamente controladas (clera, tuberculosis).

Adems la mutacin de algunas cepas de Mycobacterium tuberculosis, enterobacterias, estafilococos, neumococos, gonococos,
parsitos de la malaria y otros agentes patgenos que son resistentes a uno o varios medicamentos, de ah que la
farmacorresistencia constituya uno de los problemas principales en el control de estas infecciones.

MECANISMO O VA DE TRANSMISIN

Es el conjunto de todos los factores caractersticos de cada enfermedad transmisible y su modo de actuar, representando los
mecanismos mediante los cuales un hospedero susceptible es expuesto a un agente infeccioso, o sea, constituye los modos en
que un agente biolgico puede ser transmitido desde su reservorio. Existen dos vas fundamentales de transmisin de la
enfermedad, la directa y la indirecta. La transmisin por va directa es la que se establece sin vnculo de transmisin. Puede ser:

1. Inmediata o por contacto fsico.

2. Mediata o por contacto personal.
3. Exposicin directa de un tejido susceptible al hbitat de un agente infeccioso de vida saprfita.
4. Transmisin vertical o congnita.
La transmisin por va indirecta (con vnculo de transmisin) es posible por:

1. Vehculos inanimados:
a) Agua.
b)Alimentos.
c) Tierra.
d)Fomites.
e) Objetos.
f) Medicamentos y productos qumicos.
2. Vehculos areos:
a) Inhalacin.
b)Depsitos en piel y mucosas.
c) Depsitos en heridas.
3. Vehculos vectoriales:
a) Mecnico-biolgicos.
b)Permanentes.
c)Temporal o transitorio.
La clasificacin ms prctica de las enfermedades transmisibles es la basada en su va de
transmisin, o sea:
1. Digestiva.
2. Respiratoria.
3. Contacto de piel y mucosas.
4. Vectores (artrpodos y roedores).
5. Imprecisa o indeterminada.

Enfermedades de transmisin digestiva.

En estas enfermedades el agente biolgico penetra por el orificio superior del sistema digestivo, que puede tener o no como
vehculo los alimentos o el agua.
A este grupo de enfermedades que se transmiten por va digestiva pertenecen, entre otras, las siguientes: fiebre tifoidea,
colibacilosis, salmonelosis, shigelosis, clera, poliomielitis anterior aguda, hepatitis virales, ascariasis, tricocefaliasis, oxiuriasis,
taeniasis, amebiasis, balantidiasis, giardiasis, enterovirosis, intoxicaciones alimentarias y rotavirosis.
Enfermedades de transmisin respiratoria. Los agentes que producen estas afectaciones penetran por las fosas nasales o la
boca y atraviesan las distintas barreras defensivas del sistema respiratorio hasta alcanzar los tejidos ms susceptibles. Esta
transmisin puede ocurrir por la inhalacin de agentes microbianos que se encuentran en el aire. Entre las enfermedades que se
transmiten por va respiratoria tenemos las siguientes:

tuberculosis, difteria, tos ferina, parotiditis epidmica, varicela, sarampin, rubola, escarlatina, meningoencefalitis meningocccica,
influenza, adenovirus, rinovirosis, histoplasmosis,coccidioidomicocis y legionelosis.

Enfermedades que se transmiten por contacto. En este tipo de transmisin es necesaria una relacin fsica entre el reservorio y
el organismo susceptible, pues sus agentes biolgicos poseen muy poca resistencia al medio ambiente. Entre las enfermedades
que se transmiten por contacto podemos citar: la sfilis, blenorragia, chancro blando, condiloma acuminado, linfogranuloma
venreo, granuloma inguinal venreo, herpes simple genital, tricomoniasis, epidermofitosis, pediculosis, rabia, ttanos, gangrena
gaseosa, micosis, necatoriasis y esquistosomiasis. Algunos de los agentes productores de estas enfermedades necesitan de la
existencia de una solucin de continuidad de la piel como es el caso de Treponema pallidum, productor de la sfilis.

Enfermedades que se transmiten por vectores. Esta transmisin se produce si los artrpodos u otros vectores inoculan el
agente biolgico mediante la picadura o el depsito de este sobre la piel o mucosas del organismo susceptible.

A continuacin relacionamos los principales vectores biolgicos y las enfermedades que se transmiten:

1. Mosquitos: malaria, dengue, wuchereriasis, fiebre amarilla, encefalomielitis equina y otras

encefalitis por arbovirus.
2. Moscas: tripanosomiasis africana y loasis.
3. Chinche americana o triatoma: enfermedad de Chagas (tripanosomiasis americana).
4. Piojos: tifus epidmico y fiebre recurrente.

5. Pulgas: tifus endmicos y peste bubnica.

6. caros: rickettsiasis.
7. Garrapatas: fiebre hemorrgica y tularemia.
8. Flebtomas: leishmaniasis.
9. Simlidos: oncocercosis.
Enfermedades de transmisin desconocida.
A este grupo pertenecen las enfermedades donde los conocimientos cientficos no son suficientes para definir los mecanismos de
transmisin de patologas tales como: la lepra, la enfermedad de los legionarios, la fiebre de Lassa, y otras.

CONCEPTO DE INFECCIN
En trminos epidemiolgicos significa la penetracin, multiplicacin e invasin de un agente infeccioso en el cuerpo del hombre o
de los animales, sin que generalmente haya signos ni sntomas de la enfermedad que ellos producen: los individuos portadores de
Salmonella typhi y Vibrio cholerae. Varios factores van a determinar la evolucin del suceso infeccioso:

Por parte del individuo: resistencia, estado nutricional, estrs, edad, sexo.
Por parte del agente: infectividad, virulencia y otras caractersticas que le permiten producir la enfermedad.

Ya instalado el proceso, puede desarrollarse de las formas siguientes:

1. Sin que el individuo tenga signos y sntomas de la enfermedad, y todo el proceso termine sin conocer lo sucedido en la
intimidad de sus tejidos. Ha ocurrido una infeccin.
2. La aparicin de sntomas y signos, debido a las alteraciones anatmicas y funcionales que la penetracin, desarrollo y
multiplicacin que los agentes infecciosos producen, determinan la existencia de una enfermedad infecciosa. El trmino de
infeccin no debe ser confundido con el de infestacin; este concepto se aplica a la presencia, el alojamiento, el desarrollo y
la reproduccin de artrpodos en la superficie corporal de animales e incluso del hombre y su ropa. Tambin se puede
aplicar a cualquier artculo o local que albergue o sirva de alojamiento a artrpodos, roedores u otros animales.

CONTAMINACIN
Significa que el microorganismo est presente en objetos inanimados, la superficie de la piel y las mucosas, que pueden ser
contaminadas por una gran variedad de microorganismos. Los microorganismos comensales no causan dao, pero los parsitos
pueden invadir tejidos y causar infeccin.

ENFERMEDAD
Es una alteracin del estado de salud, caracterizada por cambios en el hospedero sin que interfiera con sus funciones normales.
Por ejemplo: un trabajador de la Salud que incumple las reglas de asepsia al lavar sus manos con una herida en la piel de ellas,
puede contaminarse con estafilococos; sin embargo, si no se enferma no presenta infeccin. Otro trabajador con una herida
similar, que tambin incumple las reglas de asepsia, se contamina y presenta enrojecimiento e inflamacin alrededor de la herida,
lo cual provoc fiebre y malestar. En este caso hubo contaminacin con infeccin y enfermedad.
INCIDENCIA DE UNA ENFERMEDAD
Es el nmero de individuos con la enfermedad en una poblacin, mientras que prevalencia es el por ciento de individuos con la
enfermedad al mismo tiempo.
Una enfermedad es epidmica cuando la incidencia es alta y endmica cuando es baja; pandmica se refiere a la dispersin de la
enfermedad a travs de los continentes.

DESARROLLO DEL PROCESO INFECCIOSO

EN EL INDIVIDUO

PERODO DE INCUBACIN
Tiempo que transcurre desde la entrada y multiplicacin del agente hasta la aparicin de los primeros sntomas o signos de la
enfermedad.

PERODO PRODRMICO
Despus del perodo de incubacin se desarrollan en el individuo sntomas inespecficos del proceso infeccioso (fiebre, cefalea,
malestar, debilidad, etc.).

PERODO DE ESTADO
Aqu aparecen los sntomas o signos caractersticos de la enfermedad.

PERODO FINAL O TERMINAL

Etapa final de la enfermedad, donde el enfermo puede evolucionar satisfactoriamente hasta su curacin o agravarse hasta la
muerte. En algunos casos puede prolongarse hasta hacerse crnica.

PERODO DE TRANSMISIBILIDAD
Es caracterstico de las enfermedades transmisibles. Se extiende durante todo el tiempo que la enfermedad es capaz de
transmitirse de un individuo a otro.

CADENA EPIDEMIOLGICA
Para que una enfermedad aparezca y se difunda deben concurrir una serie de factores o elementos, que interactuando entre s,
dan lugar a que se produzca y desarrolle la enfermedad; a este conjunto de factores esenciales se le denomina triada ecolgica.
Esta concepcin es importante, porque rompiendo la cadena a nivel de cualquiera de los eslabones, se puede interrumpir la
transmisin en el eslabn ms dbil, es decir, donde sea ms econmico
o ms rpido actuar. Estos elementos son:

1. El agente o los agentes causales.

2. El ambiente.
3. El hospedero susceptible o individuo capaz de enfermarse.

En las enfermedades transmisibles, el agente siempre ser biolgico y el ambiente puede actuar como va de transmisin.
Hay salud cuando existe un equilibrio entre los agentes y los hospederos susceptibles en un ambiente determinado. Si se rompe el
equilibrio, se ir pasando al estado de enfermedad.

Este proceso es dinmico y se nombra proceso salud-enfermedad.

En las enfermedades transmisibles se conoce como proceso infeccioso en el cual la ruptura del equilibrio se manifiesta por la
llamada infeccin, o sea, la penetracin, desarrollo o multiplicacin del agente infeccioso en el organismo de una persona o animal,
que no es sinnimo de enfermedad infecciosa, pero s el inicio de ella.

Existe un modelo epidemiolgico que se representa generalmente en forma de cadena y se denomina cadena epidemiolgica o de
transmisin, en este modelo se resumen las etapas del proceso infeccioso; ellas son: agente, reservorio, puerta de salida, va de
transmisin, puerta de entrada y hospedero susceptible.

PROPIEDADES RELACIONADAS CON LA SUPERVIVENCIA EN EL MEDIO

Latencia. Es el intervalo entre el tiempo en que un patgeno es excretado y el tiempo en que puede infectar a un nuevo
hospedero.

Persistencia. Es la capacidad de un patgeno de sobrevivir por un perodo determinado en el medio, o sea, su viabilidad. Esta
propiedad es uno de los mejores indicadores de la posibilidad de que un microorganismo sea transmitido; si persiste por un corto
tiempo, debe rpidamente encontrar un nuevo hospedero susceptible.

Multiplicacin. Bajo ciertas condiciones los patgenos pueden multiplicarse en el medio, especialmente en alimentos, a
concentraciones suficientes para provocar infeccin.
MTODOS EPIDEMIOLGICOS
Las tres principales tcnicas epidemiolgicas son: la descriptiva, la analtica y la experimental.
Aunque todas pueden ser usadas en la investigacin de la ocurrencia de una enfermedad, el mtodo ms utilizado es la
epidemiologa descriptiva.

RESUMEN
Este captulo trata sobre los principios bsicos de la epidemiologa en las enfermedades transmisibles, enfatizando en conceptos
importantes como son: enfermedad transmisible, enfermedad emergente y reemergente, mecanismos de transmisin de las
enfermedades, sus vas, infeccin, infestacin, contaminacin, enfermedad, incidencia, prevalencia, el desarrollo del proceso
infeccioso en el individuo, la cadena epidemiolgica y los mtodos epidemiolgicos.
ESTAFILOCOCOS
INTRODUCCIN
Segn el Bergeys Manual of Sistematic Bacteriology se incluye el gnero Staphylococcus junto con los micrococos en la familia
Micrococcaceae. Los estafilococos son clulas esfricas grampositivas con un dimetro de 0,5 a 1,5 m, que se agrupan
irregularmente en forma de racimos de uva. Ogston es quien introduce el nombre de Staphylococcus (Staphyl, que significa
racimos de uva). Rosenbach, sobre una base taxonmica, es quien describe por primera vez este gnero. Los estafilococos son no
mviles, no esporulados, usualmente catalasa positiva y no capsulados o tienen limitada la formacin de la cpsula. La mayora de
las especies son anaerobios facultativos, con excepcin del S. saccharolyticus y S. aureus spp. anaerobius que crecen ms rpido
bajo condiciones de anaerobiosis; estos organismos excepcionales son tambin catalasa negativa. Los estafilococos patgenos
hemolizan la sangre, coagulan el plasma y producen enzimas y toxinas extracelulares. Un tipo comn de envenenamiento
alimentario es el producido por una enterotoxina estafilocccica termoestable. Los estafilococos desarrollan con rapidez
resistencia a muchos agentes antimicrobianos, por lo que resulta difcil su tratamiento.

El gnero Staphylococcus tiene, por lo menos, 30 especies; siete subespecies han sido descritas, de las cuales a tres se les ha
dado nombre. Esas subespecies son:
S. aureus sub especie anaerobius;
S.capitis
Sub especie urealyticus;
S. cohnii
Sub especie urealyticum;
S. cohnii subespecie 3;
S. haemolyticus subespecie 2;
S. warneri subespecie 2
S. auricularis subespecie 2.

El nombre de la subespecie est dado sobre bases de las simples caractersticas fenotpicas. Las tres especies principales de
importancia clnica son: S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus. La mayora de las cepas de estafilococos crecen en
presencia de un 10 % de cloro-sodio y a temperatura de 18 a 40 0C, el metabolismo es respiratorio y fermentativo. Los
carbohidratos y aminocidos son utilizados como fuente de carbono y energa. Los estafilococos son susceptibles a la lisis por
lisostafina, pero resistentes a la lisis bajo condiciones estndar.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN

Microorganismos tpicos. Son clulas esfricas, con un dimetro que va de 0,5 a 1,5 m, grampositivas y agrupadas en racimos.
En cultivos lquidos se encuentran cocos aislados, en pares, ttradas y cadenas cortas (de tres a cuatro clulas). Los cocos
jvenes se tien intensamente con coloracin de Gram; al envejecer, muchas clulas se vuelven gramnegativas.

Cultivo. Los estafilococos proliferan fcilmente en la mayora de los medios bacteriolgicos bajo condiciones aerobias o
microaerfilas a temperatura de 37 0C, formando mejor el pigmento a temperatura ambiente (20 a 25 0C). Las colonias
desarrolladas en medios slidos (agar-sangre de carnero), en un perodo de 18 a 24 horas tienen un dimetro de 1 a 3 mm y de 3
a 10 mm en incubacin prolongada durante 5 das; las mismas son redondas, lisas, elevadas y resplandecientes. Staphylococcus
aureus suele formar colonias de color gris a amarillo dorado intenso. Las colonias de S. epidermidis casi siempre son de color gris
a blanco en el aislamiento primario; muchas colonias desarrollan pigmentos con la incubacin prolongada. No se produce pigmento
en condiciones de anaerobiosis. S. epidermidis era conocido anteriormente como S. albus debido a sus colonias blancas; no
obstante, basado en las pruebas de fermentacin de manitol y coagulasa, algunas cepas blancas pueden ser clasificadas como S.
aureus a pesar de la falta de pigmento amarillo. Ocurren varios grados de hemlisis por la accin de S. aureus y, en ocasiones, de
otras especies. Las especies de Peptococcus, que son cocos anaerobios, poseen una morfologa parecida a la de Staphylococcus.

Caractersticas del crecimiento. Los estafilococos producen catalasa, que los distingue de los estreptococos; fermentan con
lentitud muchos carbohidratos y elaboran cido lctico, pero no gas. Su actividad proteoltica vara de una cepa a otra. Los
microorganismos de esta especie que son patgenos producen muchas sustancias intracelulares que se describen
ms adelante. Estos microorganismos son relativamente resistentes a la desecacin, al calor (soportan 50 0C durante 30 min) y al
cloruro de sodio al 9 %, pero los inhiben con facilidad ciertas sustancias, por ejemplo, el hexaclorofeno en solucin al 3 %. Los
estafilococos son variablemente sensibles a muchos agentes antimicrobianos; su resistencia corresponde a varias clases:
1. Es comn la produccin de -lactamasa; esta se encuentra bajo el control de plsmidos, convirtiendo a estos
microorganismos resistentes a las penicilinas (penicilina G, ampicilina, tetraciclina y agentes semejantes); los plsmidos se
transmiten por transduccin y quiz tambin por conjugacin. 2. La resistencia a la nafcilina (lo mismo que a la meticilina y a
la oxacilina) es independiente de la produccin de -lactamasa. Los agentes de la resistencia se relacionan con la falta de
ciertas protenas fijadoras de penicilina o con la inaccesibilidad a las mismas en los microorganismos.

2. El trmino "tolerancia" implica que los estafilococos experimentan inhibicin por la accin del frmaco, pero este no los
mata; es decir, hay una diferencia muy grande entre las concentraciones inhibidoras mnimas y mortal mnima de cada
agente antimicrobiano. A veces la tolerancia se atribuye a la falta de activacin de enzimas autolticas en la pared celular.
 3. Los plsmidos tambin pueden presentar genes para la resistencia a la tetraciclina, eritromicina, aminoglucsidos y otros
frmacos. Los estafilococos conservan su sensibilidad a la vancomicina.

Variaciones. Un cultivo de estafilococos contiene algunas bacterias que difieren del grueso de la poblacin en su expresin de
caractersticas coloniales (tamao de la colonia, pigmento, hemlisis), en la elaboracin de enzimas, en la resistencia a los
frmacos y en la patogenicidad. In vitro, la expresin de estas caractersticas se ve influida por las condiciones de crecimiento;
cuando se incuba S. aureus, resistente a la nafcilina a 37 0C sobre agar-sangre,uno de cada 107 microorganismos expresa
resistencia a este antibitico; cuando se incuba a 30 0C en agar que contiene de un 2 a un 5 % de cloruro de sodio, uno de cada
103 microorganismos manifiesta esta resistencia.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
Los estafilococos contienen polisacridos y protenas antignicas, lo mismo que otras
sustancias importantes de la estructura de la pared.
El peptidoglucano, un polmero polisacrido que comprende subunidades enlazadas, es
el constituyente del exoesqueleto de la pared celular. Es importante en la patogenia de las
infecciones, desencadenando la produccin de interleuquina-1 (pirgeno endgeno) y
anticuerpos opsnicos por medio de los monocitos. Puede ser un agente quimioatrayente de
los leucocitos polimorfonucleares, tiene actividad de tipo endotoxnica, produce el fenmeno
de Shwartzman localizado y activa el complemento.
Se encuentran enlazados al peptidoglucano, cidos teicoicos que son antgenos especficos
de especies de S. aureus y S. epidermidis (polisacridos A y B respectivamente);
estos son polmeros de glicerol fosfato de ribitol y pueden ser antignicos formando el
complejo peptidoglucano-cido teicoico; este constituye el sitio de fijacin del bacterifago. A
este nivel existen antgenos de especie, cuyo determinante antignico es N-acetilglucosamina
enlazado con fosfato de ribitol. En los pacientes con endocarditis bacteriana activa por
S. aureus, suelen encontrarse anticuerpos antiteicoicos perceptibles por difusin en gel.
La protena A es un componente de la pared celular de muchas cepas de S. aureus, la
cual se fija a la porcin Fc de las molculas de inmunoglobulina G, salvo la IgG 3. La porcin
Fab de la IgG se fija a la protena A, que est en libertad de combinarse con un antgeno
especfico. Es por ello que la protena A se ha convertido en un importante reactivo en
inmunologa y tecnologa diagnstica.
Algunas cepas de S. aureus poseen cpsulas que inhiben la fagocitosis de los leucocitos
polimorfonucleares, a menos que estn presentes anticuerpos especficos. La mayor parte
de las cepas de S. aureus tienen coagulasa o factor coagulante sobre la superficie de la pared
celular; la coagulasa se fija de manera no enzimtica con el fibringeno y de esta forma
produce agregacin bacteriana.
TOXINAS Y ENZIMAS
Los estafilococos pueden producir enfermedades tanto por su capacidad para multiplicarse
y extenderse en los tejidos, como por la produccin de muchas sustancias extracelulares;
algunas de estas sustancias son enzimas, otras se denominan toxinas, aunque pueden funcionar
como las anteriores. Muchas de las toxinas se encuentran bajo el control gentico de
los plsmidos, otras estn incluidas bajo el control cromosmico o extracromosmico. En
ciertos casos no se ha podido definir el mecanismo de control gentico; entre toxinas y
enzimas citamos:
Catalasa. Los estafilococos producen catalasa, la cual es una enzima que descompone
el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. Qumicamente la catalasa es una hemoprotena
de estructura similar a la hemoglobina, excepto que los cuatro tomos de hierro estn en
estado oxidativo (Fe+++ ) en lugar de reducido (Fe++). La prueba de la catalasa diferencia a los
estafilococos que son catalasa positiva de los estreptococos que son catalasa negativa.
Coagulasa. El S. aureus produce coagulasa, que es una enzima proteoltica de composicin
qumica desconocida con actividad semejante a la protrombina, capaz de transformar
el fibringeno en fibrina, lo cual provoca la formacin de un cogulo visible en un
sistema analtico adecuado, y coagula el plasma oxalatado o citratado en presencia de un
factor contenido en muchos sueros. La accin de la coagulasa supera la cascada normal de
la coagulacin. La coagulasa puede depositar fibrina sobre la superficie de los estafilococos,
con lo cual es capaz de interferir en su ingestin por clulas fagocticas y su destruccin
dentro de dichas clulas. Se considera que la produccin de coagulasa es sinnimo de
potencial invasor patgeno.
Otras enzimas. Hialuronidasa o factor de extensin; estafilocinasa, que da por resultado
la fibrinlisis, la cual acta ms lentamente que la estreptocinasa; proteinasa; lipasa
enzima, la cual hidroliza los lpidos, lo que le permite colonizar los sitios sebceos de la piel;
-lactamasas; fosfatasa alcalina; pirrolidonil arilamidasa; ornitina descarboxilasa;
termonucleasa y -galactosidasa.

Exotoxinas. Entre estas hallamos varias enzimas que son mortales para los animales tras
su inyeccin, ya que producen necrosis de la piel y contienen hidrolisinas solubles, las
cuales pueden separarse por electroforesis. Se conocen cuatro hemolisinas: alfa (), beta (),
gamma (), y delta ().
La hemolisina es una protena heterloga que puede producir lisis de los eritrocitos y
lesionar las plaquetas; es, probablemente, la que identifica al factor dermonecrtico de la
exotoxina. Se plantea, adems, que tiene una accin muy poderosa sobre el msculo liso
vascular.
La hemolisina degrada la esfingomielina y es txica para muchas clases de clulas e,
incluso para los eritrocitos humanos.
Estas toxinas son antignicamente distintas y no guardan relacin con las hemolisinas
estreptocccicas.
Leucocidina. La leucocidina del S. aureus es capaz de lisar leucocitos polimorfo-nucleares
y macrfagos, tanto humanos como de conejos. Su actividad ltica se atribuye a una
alteracin de la bomba sodio-potasio seguida de una serie de elementos secundarios, incluyendo
un aumento de la permeabilidad a cationes, secrecin de protenas y acumulacin de
calcio.
Toxina exfoliativa (conocida tambin como toxina epidermoltica). Esta toxina del S.
aureus est constituida, por lo menos, por dos protenas que producen la descamacin
generalizada del sndrome estafilocccico de piel escaldada. Hay anticuerpos especficos
que protegen al sujeto contra la accin exfoliativa de la toxina.
Dicha toxina divide la capa del estrato granuloso por desdoblamiento de los dermosomas
que unen a las clulas de esta capa. La toxina es elaborada por el fago grupo II del S. aureus;
esta produccin puede ser mediada por plsmidos o por cromosomas.
Toxina del choque txico. La mayor parte de las cepas de S. aureus aisladas de pacientes
con sndrome de choque txico, producen una toxina llamada toxina 1, del sndrome de
choque txico (TSST-1,Toxic Shock Syndrome Toxin 1). La TSST-1 es un superantgeno
prototpico que promueve las manifestaciones diversas del sndrome de choque txico. En el
ser humano, la toxina se asocia con fiebre elevada, shock, vmitos, diarreas, trombocitopenia,
insuficiencia renal y heptica, afecciones de aparatos y sistemas mltiples, incluyendo un
exantema descamativo en la palma de las manos y planta de los pies. Este complejo sintomtico
es atribuible a una infeccin local con organismos productores de TSST-1. Un 80 % del
sndrome de choque txico se asocia con la menstruacin y el uso de tampones; un 20 % de
los casos ocurre junto a infecciones posquirrgicas y otros tipos de infecciones locales
(cutneas, seas, pulmonares).
Enterotoxinas. Existen, por lo menos, seis toxinas solubles designadas con letras de la
A a la F, producidas por casi el 50 % de las cepas de S. aureus. Las enterotoxinas son
termoestables (soportan ebullicin durante 30 min) y resisten la accin de las enzimas intestinales.
Las enterotoxinas de S. aureus son causa importante de envenenamiento alimentario,
sobre todo cuando se degradan protenas o carbohidratos.
Quiz el gen de la produccin de enterotoxinas se encuentre sobre el cromosoma, pero
puede haber un plsmido que lleve a la protena y regule la produccin activa de esta toxina.
La ingestin de 25 g de enterotoxina B por el hombre y los macacos provoca, en un
perodo de 2 a 6 horas, un cuadro caracterizado por vmitos y diarreas. El corto perodo de
incubacin y la ausencia de fiebre lo diferencian del envenenamiento alimentario por
Clostridium y Salmonella. Probablemente el efecto emtico de la enterotoxina sea el resultado
de la estimulacin del Sistema Nervioso Central, una vez que la toxina ha actuado sobre
los receptores neuronales del intestino. Las enterotoxinas pueden ser investigadas mediante
pruebas de precipitacin (difusin en gel).

PATOGENIA
Los estafilococos, en particular S. epidermidis, son miembros de la flora normal de la
piel, las vas respiratorias y gastrointestinales del hombre. Del 40 al 50 % de los seres
humanos son portadores nasales del S. aureus. Los estafilococos se encuentran tambin con
regularidad en las ropas personales, las ropas de camas y otros fomites de los ambientes humanos.

La capacidad patgena de una cepa determinada de S. aureus est dada por mecanismos
y factores patognicos que incluyen la presencia de cpsula, la cual inhibe la fagocitosis
(algunas cepas de S. aureus). La produccin de enzimas y toxinas permite su establecimiento,
multiplicacin y propagacin a otros rganos y sistemas, as como la colonizacin de
sitios especficos del hospedero y la elaboracin de slime, el cual es un glicoconjugado
extracelular producido por S. aureus y ciertas cepas de estafilococos coagulasa negativa,
que desempea en estos ltimos un importante papel en la ocurrencia de enfermedades.
El slime inhibe la quimiotaxis de los neutrfilos y la fagocitosis, e inhibe la actividad
antimicrobiana de los glicopptidos antimicrobianos como vancomicina y tercoplanin. Adems,
acarrea efectos sobre la funcin inmunitaria, sugirindose que este interfiere en la
activacin y produccin de linfoquinas o clulas T auxiliadoras, las cuales son necesarias
para la estimulacin de otras clulas del sistemas inmune.
PATOLOGA
La lesin tpica ocasionada por S. aureus es el furnculo o cualquier otro absceso
localizado; dicho microorganismo establecido en un folculo piloso, causa necrosis hstica
(factor dermonecrtico). Se produce coagulasa, que coagula a la fibrina alrededor de la lesin
y dentro de los linfticos, y da por resultado la formacin de una pared que limita el proceso
y queda reforzada por la acumulacin de clulas inflamatorias y ms tarde tejido fibrtico. En
el centro de la lesin ocurre licuefaccin del tejido necrtico (fomentada por la hipersensibilidad
retardada), y el absceso hace punta en direccin de la menor resistencia. El drenaje del
tejido necrtico licuado va seguido de llenado lento de la cavidad por tejido de granulacin
y, por ltimo, cicatrizacin.
La supuracin focal (absceso) es tpica de la infeccin estafilocccica. Desde cualquier
foco, los microorganismos pueden extenderse por los linfticos y la sangre hacia otras partes
del cuerpo. Un aspecto comn de esta diseminacin es la supuracin dentro de las venas
acompaada por trombosis. En casos de osteomielitis, el foco primario de crecimiento de S. aureus
es de manera tpica, un vaso sanguneo terminal de la metfisis de un hueso largo donde
produce necrosis sea y supuracin crnica.
S. aureus puede ocasionar tambin neumona, meningitis, empiema, endocarditis y sepsis
con supuracin en cualquier rgano. Los estafilococos de baja invasividad participan en
muchas infecciones cutneas (por ejemplo: el acn, el imptigo). Los cocos anaerobios
(Peptococcus) participan en las infecciones anaerobias mixtas.
Los estafilococos producen enfermedades por la elaboracin de toxinas e infeccin
invasora manifiesta. El sndrome de piel escaldada se debe a la produccin de toxinas
exfoliativas, mientras el sndrome de choque txico est relacionado con el sndrome de
choque txico por toxina 1 (TSST-1).
Staphylococcus epidermidis pocas veces origina supuracin, pero puede infectar prtesis
ortopdicas o cardiovasculares, as como causar enfermedades en personas con afeccin
inmunitaria. El S. saprophyticus produce infecciones de las vas urinarias en mujeres
jvenes.

DATOS CLNICOS
Las lesiones de piel causadas por S. aureus son las infecciones humanas ms comunes
por este agente; estas incluyen: foliculitis, furnculos, carbunco, celulitis, imptigo, sndrome
de piel escaldada e infeccin de heridas posoperatorias.
Un desorden adquirido comnmente lo constituye el envenenamiento alimentario originado
por la toxina termoestable elaborada por el S. aureus en los alimentos (carbohidratos y
protenas), causante de vmitos y diarreas tras un perodo de incubacin breve de 2 a 6 horas,
con rpida convalescencia y sin fiebre.
Otros procesos graves como la bacteriemia, endocarditis, meningitis, neumona,
pioartrosis y osteomielitis pueden aparecer en infecciones tanto adquiridas en el hospital
como en la comunidad.

Desde finales de la dcada del 50 y comienzos de la dcada del 60, S. aureus ha causado
morbilidad y mortalidad en pacientes hospitalizados como patgeno nosocomial. El uso de
penicilinas resistentes y penicilinas semisintticas en estos aos ha condicionado una adecuada
teraputica en las infecciones por S. aureus. Sin embargo, las cepas de S. aureus resistentes
a la meticilina (MRSA) han emergido como un problema clnico epidemiolgico en los
hospitales desde la dcada de los 80. Sin embargo, las MRSA han sido aisladas en pacientes
extremadamente enfermos, en salas de terapia de los hospitales, en pacientes de hospitales
en pequeas comunidades y salas de rehabilitacin; la mayora de esas cepas son resistentes
a los agentes antimicrobianos comunes, incluyendo macrlidos, aminoglucsidos,
-lactmicos, tetraciclinas y cloranfenicol. Las serias infecciones causadas por MRSA han
sido tratadas adecuadamente con otro tipo de antibitico: la vancomicina.
Una enfermedad adquirida en la comunidad, de consecuencia potencialmente seria, es el
sndrome de choque txico atribuido a S. aureus, el cual se observa en un 80 % de mujeres
jvenes en edad menstrual que utilizan tampones absorbentes durante varios meses. El
sndrome de choque txico se manifiesta por iniciacin sbita de fiebre alta, vmitos, diarrea,
mialgias, un exantema escarliforme e hipotensin con insuficiencia cardaca y renal en los
casos ms graves. Sin embargo, la toxina 1 del sndrome de choque txico (TSST-1)
producida por S. aureus est presente en otros sitios fuera del rea genital, en mujeres que
no menstran y en hombres.
Los estafilococos coagulasa negativa (CNS) son un componente importante de nuestra
microflora, especficamente de la piel; estos microorganismos estn considerados saprofticos
o de baja patogenicidad para los humanos. Sin embargo, varias especies de CNS se estn
reportando como importantes patgenos oportunistas en humanos, especialmente en pacientes
sometidos a procederes mdicos invasivos e instrumentados.
Los CNS se aslan con gran frecuencia en los servicios de oncologa y neonatologa en
pacientes con sepsis nosocomiales. El S. epidermidis ha sido aislado en un 74 a 92 % en
bacteriemias intrahospitalarias; causa infecciones cardacas en pacientes despus de una
sustitucin vascular, ciruga cardiovascular y cardiotoma; estas infecciones incluyen: infecciones
de los marcapasos, infecciones de las vlvulas artificiales, endocarditis asociadas a
prtesis valvular y prolapso de la vlvula mitral.
Staphylococcus epidermidis es un agente primario en las peritonitis durante la dilisis
peritoneal ambulatoria y un agente comn de infecciones urinarias tales como: cistitis, uretritis
y pielonefritis.
Las cepas de CNS aisladas de hemocultivos de pacientes hospitalizados muestran una
resistencia por encima del 56 %. Las infecciones nosocomiales por CNS resistentes a la
meticilina (MRSE) constituyen un problema clnico en pacientes con prtesis de vlvulas
cardacas, utilizndose en estos casos una teraputica combinada de vancomicina con
rifampicina o aminoglucsidos.
Otro CNS de importancia clnica es el S. haemolyticus, el cual ha sido implicado en
endocarditis de vlvulas naturales, en septicemias, peritonitis, infecciones del tracto urinario
y de heridas.
Dos nuevas especies del CNS han sido descritas: S. lugdunensis y S. schleiferi, de
gran importancia como patgenos oportunistas, colonizando los catteres y drenajes.
S. lugdunensis ha sido implicado en serias infecciones tales como: endocarditis de vlvulas
naturales y artificiales, septicemia con shock, abscesos cerebrales, infecciones de tipo profundas,
ostetis, osteoartritis crnica, infecciones de piel y de heridas. Muchos de estos
pacientes tienen factores predisponentes a la infeccin, entre ellos: diabetes mellitus, ciruga
o traumas, fallo renal, cncer, SIDA, eczema o psoriasis. S. schleiferi aparece con menos
frecuencia que el anterior en el ambiente respiratorio y en las infecciones humanas; ha sido
aislado de empiema cerebral, infecciones de heridas, bacteriemia, drenaje craneal y catter
yugular.
Staphylococcus saprophyticus es una causa comn de infecciones del tracto urinario
en mujeres jvenes sexualmente activas; es un agente de uretritis no gonocccica, prostatitis,
infecciones de heridas y septicemia.
Otras especies de CNS tales como: S. hominis, S. warner, S. simulans, S.cohnii,
S. saccharolyticus, S. capitis y S. xylosus, tienen baja incidencia en infecciones humanas.
S. warneri ha sido reportado como agente causal de osteomielitis vertebral e infecciones del
tracto urinario en mujeres y hombres.
Distintas especies de estafilococos coagulasa positiva como S. intermedius y S. hycus
son de importancia en medicina veterinaria. Estas especies y S. aureus son patgenos oportunistas
en animales.
PRUEBAS DIAGNOSTICAS DE LABORATORIO.
Muestras. Las muestras dependen de la localizacin del proceso; son tiles el pus de
absceso, los hisopados de heridas, la secrecin endotraqueal y la sangre para hemocultivo,
entre otros.
Frotis. Se realiza frotis de la muestra y coloracin de Gram; se observan cocos
grampositivos agrupados en racimos irregulares.
Cultivo. Las muestras deben ser sembradas en placas de agar-sangre, agar infusin
cerebro-orazn, agar-soya-tripticasa o P-agar; deben incubarse durante 18 a 24 horas a temperatura
entre 34 y 37 0 C, y se obtienen colonias circulares, lisas, elevadas y resplandecientes
con un dimetro de 1 a 3 mm . Forman pigmentos a temperatura ambiente (20 a 25 0 C), de
color amarillo dorado en S. aureus y blanco en S. epidermidis. S. aureus produce hemlisis en
placas de agar-sangre.
Existen medios selectivos que inhiben el crecimiento de microorganismos gramnegativos
y de otros cocos grampositivos, por ejemplo:
1. Schleifer-Kramer agar.
2. Agar manitol salado.
3. Agar CNA Columbia.
4. Agar lipasa manitol salado.
5. Agar feniletil alcohol.
Existe una variedad de tcnicas que pueden ser utilizadas como marcadores
epidemiolgicos para la identificacin y diferenciacin de cepas; entre las que citamos:
1. La morfologa colonial.
2. Las pruebas fisiolgicas o reacciones bioqumicas: estas incluyen no slo la actividad
enzimtica (catalasa, coagulasa, fosfatasa alcalina; ureasa; -glucuronidasa; arginina
dihidrolasa; esterasa; nitrato reductasa, pirrolidonil arilamidasa; lipasa; proteasa;
hemolisina), sino tambin la determinacin de la produccin de cido a partir de varios
carbohidratos (L-lactosa, maltosa, D-turanosa, D-manitol, D-trehalosa, D-melozitosa,
D-manosa, sacarosa, D-ribosa, D-xilosa, L-arabinosa).
Dada la importancia de las pruebas de catalasa y coagulasa en el diagnstico de los
estafilococos, haremos nfasis en ellas:
Prueba de la catalasa. Se lleva a cabo en portaobjeto o en tubos.
Prueba en portaobjeto: con una aguja de puncin o un palillo aplicador con la punta
aguzada, se transfieren clulas del centro de una colonia a la superficie de un portaobjeto.
Se aaden una o dos gotas de perxido de hidrgeno al 3 %: si la prueba es positiva,
aparecen gas, burbujas o efervescencia. Se utiliza para diferenciar estafilococos (catalasa
positiva) de estreptococos (catalasa negativa).
Prueba de la coagulasa. La coagulasa est presente en dos formas: libre y fija, cada una
de las cuales posee diferentes propiedades que requieren del uso de tcnicas separadas.
Coagulasa fija (prueba en portaobjeto): la coagulasa fija, conocida como factor de aglutinacin,
est unida a la pared celular bacteriana y no se halla presente en los filtros de
cultivos. Los hilos de fibrina formados entre las clulas bacterianas suspendidas en el
plasma (fibringeno) provocan aglutinacin, indicada por la presencia de agregado visible
en el portaobjeto. La actividad de la coagulasa fija no es inhibida por los anticuerpos
formados por la coagulasa libre.
Coagulasa libre (prueba en tubos): la coagulasa libre es una sustancia semejante a la
trombina, que se encuentra presente en los filtros de cultivos; cuando una suspensin de
bacterias se mezcla en partes iguales con una pequea cantidad de plasma en un tubo de
ensayo, se forma un cogulo visible como consecuencia de la utilizacin de los factores
de coagulacin del plasma, de manera similar a cuando se aade trombina.
Mtodo: se mezcla plasma de conejo (o humano) citratado y diluido (1:5), con un volumen
igual de caldo de cultivo de la cepa a estudiar y se incuba a 37 0 C. Se incluye como testigo
un tubo con plasma, mezclado con caldo estril; si se forma un cogulo en un plazo de 1
a 4 horas, la prueba ser positiva.
3. La susceptibilidad a los patrones antimicrobianos (antibiogramas): deben practicarse
con regularidad pruebas de susceptibilidad mediante microdilucin en caldos (concentracin
mnima inhibitoria) o difusin en disco (Kirby-Bauer), a las cepas de estafilococos
aisladas de infecciones clnicamente significativas.
Se conoce que aproximadamente el 85 % de S. aureus es resistente a la penicilina G, lo
cual est mediado por la produccin de enzima penicilinasa, una -lactamasa que inactiva
al antibitico antes de que cause dao irreversible en la clula bacteriana. La capacidad
de producir penicilinasa est determinada por la presencia de un plsmido.
La meticilina y otras penicilinas resistentes a la -lactamasa son usadas en el tratamiento
contra S. aureus. Sin embargo, en los ltimos aos se ha visto un incremento en el
aislamiento de cepas resistentes a estos antibiticos; es decir, a los -lactmicos. Las
cepas de S. aureus resistentes a la meticilina (MRSA), son resistentes, adems, a
cefalosporinas de tercera generacin, estreptomicinas, tetraciclinas y sulfonamidas. La
vancomicina es la droga de eleccin para las cepas MRSA.
Se reporta que de un 10 a un 20 % de S. aureus son resistentes a la nafcilina (oxacilina y
meticilina). La resistencia a la nafcilina se correlaciona con la presencia del gen MecA y
el gen que codifica una protena fijadora de penicilina no afectada por esos frmacos.
El estudio de CNC muestra una resistencia de un 26 a un 74 % a las penicilinas y un 79 %
pueden ser resistentes a la meticilina, por lo que se debe utilizar contra estos la vancomicina,
aunque en la actualidad Schwalbe y colaboradores han reportado cepas resistentes a la
misma.
4. La tipificacin de cepas por bacterifagos: se emplea para la investigacin epidemiolgica
en brotes graves de infecciones por S. aureus en un hospital.
5. La composicin de los plsmidos.
6. El anlisis de plsmidos y ADN cromosomal, con enzimas de restriccin (endonucleasas).
La identificacin de las cepas debe realizarse mediante dos o ms tcnicas de las anteriormente
mencionadas.
Sistemas comerciales de identificacin
1. API Staph-Ident (BioMrieux-Vitek) que utiliza 10 parmetros para la identificacin.
2. Staph-Trac. System (BioMrieux-Vitek).
3. ID 32 STAPH (BioMrieux-Vitek).
4. RAP; DEC Staph System (BioMerieux-Vitek).
5. DNA probe kit accuprobe (Gen-Probe, Inc; San Diego).
Identificacin por medio molecular. Aqu citaremos el DNA probe kit accuprobe (Gen
Probe, Inc, San Diego).
Pruebas serolgicas y de tipificacin. Se pueden identificar anticuerpos contra el cido
teicoico en las infecciones profundas prolongadas (ejemplo: osteomielitis, endocarditis
estafilocccica) y a veces los distinguen del cuadro de bacteriemia estafilocccica. Estas
pruebas serolgicas tienen poca utilidad prctica.
La tipificacin de cepas se usa para la investigacin epidemiolgica de la infeccin slo
en los brotes graves de infecciones por S. aureus, por ejemplo, en un hospital.

TRATAMIENTO
Como los microorganismos patgenos se extienden a menudo desde una lesin (ejemplo:
fornculos) hacia otras regiones de la piel, los dedos y la ropa, es importante la antisepsia
local escrupulosa para controlar la forunculosis recurrente.
Cuando se producen infecciones cutneas mltiples (acn, forunculosis) en adolescentes
o en pacientes que reciben ciclos prolongados de corticoides, se utiliza tetraciclina para
el tratamiento a largo plazo.
Los abscesos y otras lesiones supurativas cerradas se tratan mediante drenajes y medicamentos
antimicrobianos. En la osteomielitis crnica y recurrente, el drenaje quirrgico con
recepcin del tejido se acompaa de la administracin prolongada de frmacos apropiados,
aunque es difcil erradicar los estafilococos infectantes. Se ha logrado ayuda para curar la
osteomielitis crnica mediante oxgeno hiperbrico y aplicacin de colgajos miocutneos
vascularizados.
La bacteriemia, endocarditis, neumona y otras infecciones graves causadas por S. aureus,
requieren tratamiento intravenoso prolongado con penicilina resistente a la -lactamasa. En
caso de resistencia a la nafcilina, se emplea vancomicina, pues esta ltima sigue siendo el
frmaco ms ampliamente eficaz contra los estafilococos.

RESUMEN
El gnero Staphylococcus se incluye en la familia Micrococcaceae; se caracterizan por
ser cocos grampositivos agrupados en racimos, inmviles, no esporulados, anaerobios
facultativos, que crecen con facilidad en los medios de laboratorio; son metablicamente
activos; fermentan carbohidratos; son catalasa positiva y producen pigmentos que van
desde el blanco al amarillo intenso; muchas cepas son hemolticas. Algunos son flora
normal de la piel y las mucosas, mientras otros producen supuracin y absceso. El gnero
incluye alrededor de 30 especies y siete subespecies; de ellas, las de mayor importancia
clnica son: S.aureus, S. epidermidis y S. saprofiticus.
S.aureus produce varias enzimas y toxinas responsables de la patogenia y del cuadro
clnico; son causa de abscesos, fornculos, infecciones pigenas diversas, sepsis mortal,
sndrome de choque txico, meningitis, neumona, pioartrosis, osteomielitis y ocasionan
envenenamiento alimentario por la produccin de enterotoxina.
Son, en su mayora, resistentes a las penicilinas y las cepas MRSA son resistentes a los
macrlidos, aminoglucsidos, -lactmicos, tetraciclinas y cloranfenicol, constituyendo estas
cepas un serio problema desde el punto de vista clnico y epidemiolgico. Su identificacin
se realiza mediante cultivo y pruebas fisiolgicas como la catalasa, coagulasa y la
fermentacin de carbohidratos. La droga de eleccin para su tratamiento es la vancomicina.
Por su parte, los estafilococos coagulasa negativa desempean un importante papel
como causa de sepsis nosocomial en salas de oncologa, neonatologa, ciruga y terapia,
reportndose el S. epidermidis en el 74 al 92 % de las bacteriemias intrahospitalarias. Se han
encontrado cepas resistentes a la meticilina (MRSE), utilizndose para su tratamiento combinaciones
de antibiticos como vancomicina o aminoglucsidos. S. epidermidis es causa de
infecciones cardacas despus de una ciruga cardiovascular.
Staphylococcus saprophyticus es un agente primario de las peritonitis en pacientes
con dilisis peritoneal ambulatoria y un agente comn de infecciones urinarias.
Existen especies de estafilococos anaerobios como S. saccharolyticus y S. aureus ssp.
anaerobius, as como otros estafilococos que coagulan el plasma (S. intermedius y S. hyicus)
de particular importancia en medicina veterinaria
Estreptococos
INTRODUCCIN
A pesar de los progresos recientes de las investigaciones fundamentales y aplicadas
sobre las enfermedades estreptocccicas, estas siguen constituyendo un problema de salud
mundial, independiente de las condiciones climticas, ecolgicas y culturales. Al finalizar el
siglo XX, las infecciones por estreptococos del grupo A (Streptococcus pyogenes) y sus
secuelas supuradas y no supuradas, las infecciones por Streptococcus del grupo B y por
Streptococcus pneumoniae, representan, todava, causas importantes de morbilidad y mortalidad.
La reciente reaparicin de la fiebre reumtica y las infecciones estreptocccicas graves
como el sndrome de choque txico, las erisipelas y la fascitis necrosante, constituyen un
reto para los mdicos de atencin primaria, los especialistas en enfermedades infecciosas,
los microbilogos y las autoridades de Salud Pblica, tanto en los pases industrializados
como en los que estn en vas de desarrollo.
Los estreptococos se encuentran distribuidos en la naturaleza de manera amplia. Unos
forman parte de la flora normal humana, otros se relacionan con enfermedades con cuadros
clnicos muy dismiles, atribuibles, en parte, a la infeccin por el microorganismo y, por otra
parte, a la sensibilizacin hacia ellos.
El microbilogo clnico, el mdico de asistencia al paciente, el epidemilogo y los laboratorios
de referencia deben llevar a cabo acciones que aseguren la identificacin precisa de
las infecciones estreptocccicas, indispensable para los programas de lucha contra estas
infecciones y sus secuelas.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Los estreptococos son bacterias grampositivas, de formas
esfrica u ovoide que miden menos de 2 m de dimetro. Se agrupan en pares o en cadenas,
cuyas longitudes varan se-gn las especies y estn condicionadas por factores ambientales.
Son inmviles y no for-man esporas.
Algunas especies elaboran cpsulas, constituidas por polisacridos como en el caso de
los neumococos o por cido hialurnico como en algunas cepas de los grupos A, B y C.

Estas estructuras impiden la fagocitosis y se observan con mayor facilidad en cultivos muy
jvenes.
No son productores de catalasa y son oxidasa negativa. Con excepcin del Streptococcus
pneumoniae, no son solubles en bilis y la mayora de las especies no lican la gelatina.
La especie Streptococcus pneumoniae (neumococo) es similar a las otras especies del
gnero Streptococcus en lo que se refiere a su metabolismo fermentativo y en que el cido
lctico es el producto final predominante; pero se presentan como diplococos grampositivos,
lanceolados y agrupados en cadenas, fundamentalmente cortas.
Cultivo. Los requerimientos nutricionales varan con las distintas especies. La mayora,
y principalmente las patgenas al hombre, son exigentes en sus requerimientos y necesitan
pptidos, purinas, pirimidina y vitaminas. Con el fin de obtener un mejor crecimiento de las
cepas de estas especies de estreptococos, los medios de cultivo se enriquecen con sangre
o con lquidos hsticos diversos. La mayora de las especies son anaerobias facultativas y
obtienen la energa, sobre todo, por utilizacin de azcares. Algunas especies requieren la
adicin de un 5 a 10 % de CO2 para crecer e incrementar su hemlisis y otras son anaerobias
estrictas.
La temperatura ptima de crecimiento es alrededor de 37 C, aunque las temperaturas
mximas y mnimas varan segn la especie.
Caractersticas del crecimiento. La mayor parte de las especies crecen en medios
slidos formando colonias discoidales, grises, opalescentes, delicadas, de bordes lisos o
arrugados, y miden entre 0,5 y 2 mm o ms de dimetro. Las colonias se hacen visibles en
placas de agar-sangre generalmente en 18 a 24 horas. En los estreptococos del grupo A se
diferencian tres aspectos principales: colonias mucoides, mates y brillantes. Pueden
aparecer formas intermedias a las descritas. Cepas de los grupos F y G pueden producir
colonias diminutas.
Tradicionalmente se pensaba que las cepas del grupo A que dan colonias lustrosas
producen menos protena M especfica de tipo y que por ello se podan considerar menos
virulentas que las colonias mucoides o posmucoides. En la actualidad esa relacin presenta
muchas excepciones y se sabe que el aspecto mucoide de la colonia se debe a la presencia de
la cpsula de cido hialurnico y no guarda relacin con la presencia de la protena M, que
es el factor de virulencia ms importante.
La determinacin de la propiedad hemoltica que producen los estreptococos, basada
en las modificaciones que las colonias, al crecer en placas de agar-sangre, imprimen al medio,
fue introducida por Schott-Mller en 1903 y constituye la base para su reconocimiento e
identificacin.
Brown, en 1919, precis las condiciones tcnicas para llevar a cabo la diferenciacin por
la prueba de hemlisis en placa e introdujo la denominacin de hemlisis alfa () para la hemlisis
parcial, con tono verdoso; hemlisis beta (), para la hemlisis completa con halo
incoloro en torno a la colonia; y gamma (), cuando el medio no se modifica. Estas denominaciones
corresponden, respectivamente, a las de viridans, hemolticos y no hemolticos de
Schott-Mller.
Cuando aparece un pequeo halo de eritrocitos intactos o parcialmente lisados adyacente
a la colonia bacteriana, seguido de una zona de hemlisis total, se denomina o
zona amplia.
En algunas cepas se puede observar una decoloracin verdosa parecida a la - hemlisis
alrededor de las colonias, que evoluciona hacia la lisis total (-hemlisis) slo despus de una
incubacin prolongada. Se ha sealado que este fenmeno se debe a la inhibicin de la
hemlisis por el factor de opacidad producido por algunas cepas del grupo A.
Desde los inicios de la dcada de 1980, Zuazo y colaboradores, con vista a un mejor
reconocimiento de la hemlisis de los estreptococos en los primocultivos, ensayaron en
Cuba el mtodo de siembra por estra-profundidad y la observacin de los cultivos, a simple
vista y con ayuda del microscopio, segn lo recomendado por la OPS y por Rotta y Facklam.
Por los buenos resultados obtenidos se norm el mtodo en Cuba, fundamentalmente
en los primocultivos de los productos patolgicos donde el hallazgo de los estreptococos
fuera frecuente e importante.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
Es variada y compleja. Su estudio resulta de gran importancia para la microbiologa
clnica, pues pocas veces el hombre se enfrenta a bacterias con estructura antignica tan
compleja y con produccin de diversas sustancias extracelulares.
Con el conocimiento de estas estructuras se comprenden eventos relativos a su patogenia
y nos permite una mejor interpretacin de los resultados del laboratorio de microbiologa
clnica.
En una presentacin estereoqumica de una clula de la especie tipo (Streptococcus
pyogenes) encontramos a la cpsula constituida por cido hialurnico, como la estructura
ms externa.
Hacia el interior de la clula se halla la pared bacteriana, cuya composicin es la tpica
de las bacterias grampositivas, constituida, bsicamente, por peptidoglucano, cido teicoico,
una gran variedad de hidratos de carbono y de antgenos proteicos de superficie. Est
cubierta de protrusiones de tipo piloso o fimbrias formadas por los antgenos protenicos M,
T y R, y por cido lipoteicoico.
Las protenas R y T son marcadores epidemiolgicos muy tiles, pero se desconoce su
funcin biolgica. El cido lipoteicoico facilita la adherencia de los estreptococos a las
mucosas. La protena del grupo M es un destacado factor de virulencia y se ha logrado
identificar 80 serotipos antignicos.
El factor de opacidad del suero (FO o SOF) es una enzima especfica de tipo, asociada
antignicamente a ciertos serotipos de protenas M, que produce opacidad en los sueros de
distintas especies de mamferos. Actualmente se reconocen alrededor de 27 tipos que
producen el factor de opacidad.
El polisacrido C es otro constituyente esencial de la pared estreptocccica, cuya estructura
antignica es determinante de los grupos serolgicos (segn la clasificacin de
Lancefield, desde el grupo A hasta el H y desde el grupo K al V, ms los grupos provisionales
W al Z).
Ms internamente se encuentra la membrana citoplsmica y el citoplasma, este ltimo
con un complejo conjunto de nucleoprotenas, algunas dotadas de actividad enzimtica. Los
antgenos de estas estructuras no son utilizados en la actualidad en la clasificacin ordinaria
de los estreptococos.
Los Streptococcus pneumoniae tienen sus peculiaridades en cuanto a su estructura
antignica. El polisacrido capsular es inmunolgicamente diferente para cada uno de
los 84 tipos existentes. Su porcin somtica contiene una protena que es caracterstica de
cada tipo y un carbohidrato que es comn para todos los neumococos.
TOXINAS Y ENZIMAS
Los estreptococos del grupo A producen ms de 20 productos extracelulares, entre los
que encontramos:

Toxinas eritrognicas A, B y C. Son exotoxinas antignicas, responsables, entre otras

cosas, del exantema en la escarlatina. Se producen en cepas que se encuentren en estado
lisognico, o sea, infectadas por un fago. Es un potente pirgeno.
Su naturaleza proteica les confiere antigenicidad, lo que estimula la produccin de
anticuerpos neutralizantes.
Estreptolisina S. Es una toxina no antignica, estable en oxgeno, produce la hemlisis
alrededor de las colonias de los estreptococos que se desarrollan en la superficie de las
placas de agar-sangre.
Estreptolisina O. Es una citolisina oxgeno lbil, de modo reversible. Posee una accin
cardiotxica. Debido a su inestabilidad en presencia del oxgeno, se pone de manifiesto en
placas cultivadas en aerobiosis, en las colonias que crecen por picaduras de la superficie del
agar, o sea, las colonias que han crecido en la profundidad.
Provoca una respuesta de formacin de anticuerpos, antiestreptolisina O, cuya titulacin
se utiliza en el diagnstico inmunoserolgico como prueba de la infeccin.
Hialuronidasa. Es una enzima que desdobla al cido hialurnico, constituyente importante
del tejido conjuntivo, por lo cual favorece la diseminacin de los microorganismos
infectantes.
Es antignica, por lo que se hallan anticuerpos especficos despus de una infeccin
por estreptococos productores de la enzima.
Estreptocinasa, fibrinolisina o estreptoquinasa. La producen diferentes cepas de
estreptococos -hemolticos y provoca la transformacin del plasmingeno en plasmina. Es
una enzima proteoltica activa, que digiere a la fibrina y a otras protenas. Se conocen dos
tipos: A y B. Es antignica y estimula la formacin de un anticuerpo especfico, la
antiestreptocinasa.
Se administra por va endovenosa para el tratamiento de embolias pulmonares y de
trombosis venosas. En nuestro pas, con el desarrollo de la biotecnologa, se produce con
fines teraputicos.
Estreptodornasa o desoxirribonucleasa. Enzima que depolimeriza el ADN y se conocen
cuatro tipos: A, B, C y D. Anticuerpos a las DNasas se desarrollan despus de las infecciones
estreptocccicas, especialmente despus de infecciones cutneas (piodermitis).
Se emplea en la teraputica junto a la estreptocinasa en el desbridamiento enzimtico,
fluidificando exudados y facilitando la remocin de pus y tejido necrtico.
Difosfopiridn nucleotidasa. Es una enzima elaborada en el medio ambiente por algunos
estreptococos y se relaciona con la capacidad de estos microorganismos para destruir
leucocitos.
Otras enzimas. Algunas cepas son productoras de proteinasa y de amilasa.
CLASIFICACIN DE LOS ESTREPTOCOCOS
El gnero Streptococcus, perteneciente a la familia Streptococcaceae, est constituido
por una gran diversidad de especies que presentan caractersticas biolgicas y exigencias
nutricionales muy variadas. La especie tipo del gnero es Streptococcus pyogenes (Rosenbach,
1884).
Si partimos de la ubicacin taxonmica de los estreptococos, que aparece en la 9na
edicin del Manual de Bergey del ao 1986, y hacemos un anlisis retrospectivo y prospectivo,
observamos cmo a travs del tiempo, la clasificacin de los estreptococos ha sufrido una
gran cantidad de variaciones tales como: la inclusin y exclusin de especies y la reutilizacin
de los grupos taxonmicos (antes llamados pigenos, enterococos, viridans y lctico)
que han recibido diferentes denominaciones y cada uno abarca varias especies.
En algunos casos, nombres de especies distintas se han usado para describir los mismos
microorganismos y algunos miembros de la misma especie se han incluido en otra
especie o clasificado por separado.
Estas modificaciones se han ido realizando al aplicar resultados de taxonoma numrica,
quimiotaxonoma y tcnicas genticas, dndole cada vez menos peso a los criterios
serolgicos (grupos de Lancefield), ya que este aspecto resulta de gran inters en la identificacin
prctica de los estreptococos patgenos, pero no debe usarse como la base principal
que permita establecer relaciones taxonmicas entre los estreptococos.

Como resultado de estos intentos de clasificacin, se han originado diversos esquemas

y an en el momento actual muchos difieren en la denominacin y reconocimiento de especies.
Estas diferencias en las especies viridans continan causando confusiones en la terminologa
de los mismos. Quedan todava muchas interrogantes sobre las especies de
estreptococos, muchas sin nomenclatura y sin afiliacin definida.
Un cambio importante lo constituy la creacin del gnero Enterococcus que haba sido
sugerido por Kalina en 1970, pero no fue hasta 1984 en que Schleiffer, Klipper-Blaz y Collins
lo fundamentan y se sustenta por datos de estudios de hibridacin (ver captulo
"Enterococos").
A travs de muchos aos, se ha manejado una serie de caractersticas con el fin de crear
clasificaciones prcticas. Entre ellas: la morfologa de las colonias y sus reacciones hemolticas,
las especificidades serolgicas de la sustancia de la pared celular que indica el grupo y otros
antgenos de pared o de cpsula, las reacciones bioqumicas y de resistencia a factores
fsicos y qumicos, y caractersticas ecolgicas. Tambin se han usado pruebas bioqumicas
adicionales y gentica molecular para estudiar las relaciones de las especies entre s.
La combinacin de los mtodos citados ha permitido establecer clasificaciones de
estreptococos con propsitos de conveniencia clnica y epidemiolgica, producindose
como resultado final la descripcin de varias clasificaciones. Por razones esencialmente
prcticas y con vista a facilitar el diagnstico desde el enfoque de la microbiologa clnica,
Rotta y Facklam propusieron que los grmenes del gnero Streptococcus se dividan en dos
categoras:
1. Los estreptococos -hemolticos, los cuales, salvo excepciones, son clasificados en
grupos segn el sistema de Lancefield.
2. Los estreptococos -hemolticos y no hemolticos, que pueden pertenecer a grupos de
Lancefield o no.
En la actualidad, en el campo de la microbiologa mdica se tiende a sealar la clasificacin
de aquellos estreptococos de inters mdico, con un anlisis de las propiedades antes
sealadas; a continuacin se relacionan los siguientes (Cuadro 19.1):
1. Streptococcus pyogenes: son -hemolticos y poseen antgenos del grupo A. Son susceptibles
a la bacitracina y producen hidrlisis de l-pirrolidonil-2-naftilamida (positivos a
PIR). Se subdividen en tipos serolgicos.
2. Streptococcus agalactiae: son -hemolticos, con una zona de hemlisis muy estrecha y,
en algunas ocasiones, con una hemlisis de doble zona. Hidrolizan el hipurato de sodio,
dan respuesta positiva a la prueba de CAMP y la mayora de las cepas son resistentes a
la bacitracina.
3. Streptococcus bovis: producen -hemlisis o no son hemolticos. A veces se clasifican
como viridans. Pertenecen al grupo D de Lancefield. Proliferan en presencia de bilis,
hidrolizan la esculina (positivos a la prueba de bilis-esculina), no crecen en NaCl al 6,5 %,
son PIR negativos, generalmente son CAMP positivos y fermentan la lactosa.
4. Streptococcus grupo C y G: son -hemolticos, con una zona de - hemlisis ms grande
que la del grupo A. Se puede realizar el diagnstico presuntivo probando su sensibilidad
frente a discos con sulfametoxazol-trimetoprim, su resistencia a la bacitracina y la no
hidrlisis del hipurato; la prueba de CAMP resulta negativa, fermentan la trehalosa y no
el sorbitol. Se identifican por reacciones con inmunosueros especficos.
5. Streptococcus pneumoniae: son -hemolticos. Son sensibles al clorhidrato de
etilhidrocuprena (optoquina) y son solubles en bilis y en sales biliares.
6. Streptococcus viridans: son -hemolticos (de aqu su nombre viridans). La optoquina
no inhibe su crecimiento y las colonias no son solubles en bilis ni sales biliares. No
hidrolizan esculina ni hipurato, son CAMP negativos, no crecen en caldo con NaCl al
6,5 %. Algunas cepas son susceptibles a la bacitracina. Para la identificacin y especiacin
de las cepas del grupo viridans se requiere la realizacin de mltiples pruebas y, por lo
general, se identifican las especies slo cuando el aislamiento es a partir de pacientes con
infecciones severas o si fuera necesario desde el punto de vista epidemiolgico.

7. Estreptococos nutricionalmente variantes: suelen ser -hemolticos y algunos no

hemolticos. Se han conocido como estreptococos deficientes nutricionalmente,
estreptococos dependientes de piridoxal, estreptococos satlites y con otras denominaciones.
Requieren cistena o las formas activas de la vitamina B6 (piridoxal o piridoxamina).
Pueden sembrarse estras de estafilococos sobre la placa de agar-sangre para lograr el
crecimiento de estos estreptococos en forma de satelitismo.
Las especies Streptococcus defectivus y Streptococcus adjacens pertenecen a este grupo.
8. Streptococcus anaerobios: producen hemolisinas de modo variable. Proliferan solamente
bajo condiciones anaerobias.
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Muestras. Las muestras que se van a obtener dependen de la naturaleza de la infeccin
estreptocccica. Se pueden obtener con mayor frecuencia: muestras de exudado farngeo,
pus, LCR, sangre, esputos, exudado tico y otras.
Exmenes microscpicos de frotis. Los frotis hechos a partir de exudados, fundamentalmente
purulentos, suelen mostrar cocos aislados, en pares o en cadenas muy cortas. Se
observan grampositivos. Si se ven estreptococos en los frotis de pus y no se recupera el
microorganismo del cultivo, hay que valorar la presencia de un estreptococo anaerobio.
La interpretacin de los resultados de la observacin de los frotis depende del producto
patolgico a estudiar, ya que los frotis de exudados farngeos hechos con hisopos no son
dilucidantes, debido a la normal presencia de los estreptococos viridans, con iguales
caractersticas morfolgicas y tintoriales. Sin embargo, resulta de gran valor cuando se
observan diplococos lanceolados, encapsulados y grampositivos en una muestra de un
LCR o de un pus, lo que nos sugiere la presencia de un neumococo.
Cuando se trata de la muestra de esputo de un paciente con neumona neumocccica,
los frotis teidos por el mtodo de Gram muestran los organismos tpicos.
Pruebas de deteccin de antgenos. Estn dirigidas, en lo fundamental, a la deteccin de
los antgenos de Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcus grupo
C y Streptoccoccus pneumoniae.
Existen diferentes mtodos para la deteccin de los mismos, entre los que podemos
citar: la contrainmunoelectroforesis (CIE), mtodos inmunoenzimticos (IEA) y las pruebas
de aglutinacin, empleando partculas de ltex adheridas al inmunosuero (LA) o dicho suero
unido a la protena A de clulas estafilocccicas (coaglutinacin [COA]).
Otro mtodo a emplear es la tincin con un anticuerpo especfico fluorescente y su
observacin al microscopio de fluorescencia.

En pacientes con neumona neumocccica, el esputo fresco emulsionado y mezclado

con antisueros (suero polivalente o suero antipolisacrido especfico del tipo) da hinchamiento
de la cpsula o reaccin de Quellung, para identificacin de neumococos y del
serotipo respectivamente.
La principal ventaja de estas pruebas es la obtencin rpida de sus resultados, entre
minutos y algunas horas despus de tomada la muestra. Este tiempo est en dependencia
del mtodo utilizado. Tienen una sensibilidad entre un 60 a 90 % y una especificidad de 98 a
99 % cuando se les compara con los mtodos de cultivo.
Cultivo. Las muestras se cultivan en placas de agar-sangre. Si hay sospecha de
anaerobios, se inocularn los medios propios para estos microorganismos. La siembra en
superficie de medios slidos en placas de Petri, se realizar por estras con cortes en el agar.
La muestra de sangre para hemocultivo se sembrar en los medios lquidos adecuados.
El crecimiento de los estreptococos en estos casos puede ser ms lento.
La incubacin en CO2 entre 5 y 10 % (mtodo de la vela o incubadora de CO2), puede
acelerar la hemlisis y resulta indispensable cuando realizamos un cultivo donde se sospecha
la presencia de neumococos.
Identificacin. El reconocimiento de las caractersticas de las colonias y el tipo de
hemlisis, son las premisas de la identificacin; pero un informe de microbiologa clnica que
indique slo la presencia de estreptococos -hemolticos es muy insuficiente. El diagnstico
clnico preciso depende de que se conozca el grupo serolgico especfico de los
estreptococos implicados en la infeccin.
El agrupamiento serolgico y la tipificacin debern realizarse siempre que sea posible
para una clasificacin definitiva y por razones epidemiolgicas. Los carbohidratos especficos
de grupo pueden ser extrados por diferentes mtodos: calor, cido caliente o enzimas.
Cuando dichos antgenos se enfrentan a los sueros correspondientes, dan reacciones de
precipitacin especfica que permiten clasificar a la cepa aislada, en los grupos serolgicos
de Lancefield. Se emplean tambin mtodos de aglutinacin ltex (LA) y de coaglutinacin
(COA).
A las cepas de Streptococcus pyogenes (grupo A), se les puede completar su identificacin
en serotipos M.
La especificidad antignica de los polisacridos capsulares del Streptococcus
pneumoniae y del Streptococcus agalactiae se usa para tipificar los mismos.
Para completar la identificacin de especie, se pueden usar pruebas bioqumicas, pruebas
de susceptibilidad o resistencia a ciertos agentes qumicos y presencia de enzimas.
Se han elaborado pruebas para la identificacin presuntiva de algunos grupos de
estreptococos, sobre todo los de mayor importancia mdica. Entre las pruebas disponibles
para los estreptococos del grupo A figuran la prueba del disco de bacitracina y la prueba
PIR; para los del grupo B se encuentran la hidrlisis del hipurato y la prueba de CAMP; para
el neumococo tenemos la prueba de la optoquina y la solubilidad en bilis; para los grupos C
y G se utiliza el disco de bacitracina junto a uno de sulfametoxazol-trimetoprim; y para los
estreptococos del grupo D (no enterococos) empleamos el cultivo en medio de bilis-esculina
y NaCl al 6,5 %.
Es importante recordar que estas pruebas no son totalmente fiables, tienen buena sensibilidad
y especificidad, fundamentalmente si se combinan y se hace una adecuada interpretacin
de sus resultados (ver Cuadro 19.1), pero en algunos casos se requieren pruebas de
confirmacin.
Existen en la actualidad mtodos no serolgicos que permiten la identificacin de cepas.
Estos mtodos se han elaborado, en parte, como respuesta a los problemas que conlleva, a
menudo, la produccin de un elevado nmero de sueros diagnsticos especficos para la
serotipificacin estreptocccica. Adems ofrecen la ventaja de que pueden utilizarse para
identificar y definir relaciones entre cepas cuyo tipo no se puede determinar mediante las
tcnicas convencionales. Entre los mismos podemos citar: fagotipia, tipificacin por
bacteriocina, electroforesis en gel de ADN en pequeos fragmentos, ribotipia, electroforesis
en gel en campo pulsante de ADN en fragmentos grandes, tipificacin vir y otras.
Pruebas serolgicas para determinar anticuerpos. Las autnticas infecciones por
estreptococos del grupo A son las que van seguidas de una respuesta inmunolgica especfica,
consistente en un aumento significativo del ttulo de anticuerpos frente a uno, por lo menos, de los antgenos estreptocccicos
extracelulares (estreptolisina O,
desoxirribonucleasa B, hialuronidasa o nicotinamida-adenina-dinucleotidasa). Dichas respuestas
pueden utilizarse para diferenciar la infeccin autntica del estado de portador.
La elevacin de los ttulos puede comenzar poco despus del inicio de la infeccin: los
ttulos mximos de antiestreptolisina O (AELO) suelen aparecer entre 3 y 5 semanas despus
del inicio de la infeccin, pero el ttulo de anti-Dnasa B no alcanza el nivel mximo hasta 6 a
8 semanas despus del comienzo.
El descenso progresivo del ttulo de anticuerpos comienza en pocas semanas, pero la
tasa de descenso vara considerablemente de un enfermo a otro; los ttulos de anti-Dnasa
suelen permanecer elevados ms tiempo que los de AELO.
Un aumento del ttulo de anticuerpos puede interpretarse como indicio de una infeccin
reciente por estreptococos del grupo A. Sin embargo, un hecho que tiende a confundir la
interpretacin de los resultados de laboratorio, es cuando vamos a considerar alto o bajo el
nivel absoluto de anticuerpos.
La dificultad surge al tratar de establecer el criterio de normalidad, ya que la determinacin
de dichos ttulos de AELO presenta los mismos problemas tericos que la definicin
de cualquier caracterstica biolgica normal.
El llamado lmite superior de un ttulo normal es simplemente un valor estadstico para
una poblacin dada, en un momento determinado y debe aplicarse con precaucin. Por lo
tanto, este lmite puede variar de acuerdo con la edad, la estacin del ao, el rea geogrfica,
condiciones sociales, estado econmico y otros factores relacionados con la frecuencia de
la infeccin estreptocccica en la poblacin estudiada.
Por lo antes expuesto es necesario fijar los lmites de normalidad para cada regin. En
Cuba, Zuazo y colaboradores han realizado diferentes estudios sobre el tema, valorando a
travs de varios aos el ttulo medio de AELO en poblacin adulta y en grupos de nios,
sanos y con diagnstico de fiebre reumtica. Los grupos de poblacin estudiados pertenecan
a distintas provincias del pas. Los ttulos medios de AELO encontrados en la poblacin
adulta sana (entre 18 y 57 aos de edad) correspondi a 250 U Todd y en la poblacin infantil
se hallaron cifras promedio de 350 U Todd.
El ttulo de AELO tiende a ser ms alto en enfermos con fiebre reumtica aguda que
despus de infecciones sin complicaciones. En los estudios realizados por Zuazo, Sanchn
y colaboradores, se registraron diferencias significativas entre los ttulos promedio de AELO
de los nios con fiebre reumtica activa (518 U Todd) e inactiva (364 U Todd).
Los individuos normales pudieran tener ttulos ms elevados que los valores promedio
aceptados como normales, y, adems, representar infecciones pasadas y no equivalentes a
enfermedad.
Otras pruebas de laboratorio. Para el diagnstico de neumococos, se utiliza la inyeccin
intraperitoneal del esputo a ratones de laboratorio. Los animales mueren entre 18 y 48
horas. La sangre del corazn da cultivo puro de neumococos.
INMUNIDAD
La resistencia contra las enfermedades estreptocccicas es especfica de tipo. Un hospedero
que se haya recuperado de una infeccin por estreptococo del grupo A, de un tipo M
determinado, es ms o menos resistente a las reinfecciones por el mismo tipo M, pero sensible
a infecciones por otros tipos M.
La inmunidad para la toxina eritrognica est dada por la presencia de antitoxina en
sangre del hospedero, lo cual protege slo contra el exantema de la escarlatina. La elevacin
de los anticuerpos AELO no indica inmunidad.
En la infeccin neumocccica, la inmunidad es especfica de tipo y depende de los
anticuerpos al polisacrido capsular.

RESUMEN
El gnero Streptococcus est constituido por diferentes especies con factores de
patogenicidad muy diversos. Muchas forman parte de la flora indgena del hombre, en
distintas localizaciones y son capaces de producir enfermedad cuando se encuentran fuera
de su hbitat. Otras especies son patgenas y son los agentes causales de variadas manifestaciones
clnicas. Las especies que se encuentran relacionadas con la infeccin humana son
S. pyogenes, S. agalactiae, S. bovis, S. pneumoniae, Streptococcus viridans y los anaerobios.
Son bacterias redondeadas, grampositivas, agrupadas en cadenas, excepto el S.
pneumoniae que se presenta como diplococo lanceolado, encapsulado o en cadenas cortas.
El diagnstico de laboratorio resulta de utilidad para el inicio del tratamiento y con fines
epidemiolgicos. Son microorganismos con estructura antignica muy compleja y productores
de una gran cantidad de sustancias extracelulares. Existen varios sistemas de clasificacin,
uno muy til en la prctica mdica es el empleo de los grupos de Lancefield, basado en
la deteccin de un carbohidrato grupo especfico. Otro marcador importante es el reconocimiento
de la hemlisis que se produce alrededor de las colonias. Se describen pruebas
presuntivas que permiten la identificacin de especies patgenas, con una alta sensibilidad
y especificidad. Se enuncian los patrones de sensibilidad a los antimicrobianos, segn el
comportamiento de las diferentes especies relacionadas con la infeccin humana. Se describen
las caractersticas epidemiolgicas y las medidas de prevencin y control de las infecciones
estreptocccicas en el hombre.

Enterococos
INTRODUCCIN
Antiguamente, las especies enterocccicas pertenecan al gnero Streptococcus, debido
a estudios de hibridacin gentica de ADN y ARN han sido clasificadas dentro de un
nuevo gnero: Enterococcus, publicado en 1984 por Schleifer y Kilpper-Balz.
La especie tipo del gnero es E. faecalis, dividida, a su vez, en tres subespecies:
faecalis, liquefaciens y zymogenes. Esta especie, junto al E. faecium, fueron las primeras
especies transferidas al nuevo gnero Enterococcus. En ese mismo ao, E. avium y E.
gallinarum fueron transferidas tambin a dicho gnero; posteriormente, nuevas especies se
fueron incluyendo.
CLASIFICACIN TAXONMICA
Familia : Streptococcaceae.
Gnero: Enterococcus.
Especies: E. faecalis E. mundtii
E. faecium E. raffinosus
E. durans E. solitarius
E. hirae E. seriolicida**
E . dispar E. columbae
E. avium E. malodoratus
E. cecorum* E. saccharolyticus
E. gallinarum E. pseudoavium
E. sulfureus E. casseliflarus
* Habita en patos, pollos, canarios, perros, gatos, cerdos.
** Habita en peces.
Los enterococos constituyen un numeroso grupo bacteriano de la flora intestinal del
humano y los animales. Hasta principios de los aos 80, este comensal del tracto intestinal
no era reconocido como un patgeno problemtico, sus afecciones clnicas se limitaban a cuadros de endocarditis y raros casos de
meningitis. Desde finales de los aos 80 e inicios de
los 90, este microorganismo comenz a emerger como uno de los ms importantes agentes
nosocomiales, responsable de bacteriemias, infecciones de heridas quirrgicas e infecciones
del tracto urinario. De las especies bacterianas pertenecientes al gnero Enterococcus,
E. faecalis y E. faecium son las ms comnmente aisladas del ser humano, aconteciendo
para un 85 a 95 % y 5 a 10 % de las afecciones clnicas respectivamente.
HBITAT
Los enterococos se encuentran aproximadamente en todos los animales. En el humano,
son flora normal del tracto gastrointestinal (TGI), tracto genitourinario (TGU), vas respiratorias
superiores, cavidad oral, piel, vagina y uretra femenina. Tambin se hallan en las superficies
del entorno ambiental, en el agua, en la vegetacin, resultado de la contaminacin por
excrementos de animales y en aguas albaales no tratadas. En el humano, la concentracin
del enterococo en las heces es de 108 UFC/g.
Los factores microbiolgicos y ecolgicos que favorecen la colonizacin intestinal
permanecen an oscuros.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Los enterococos son clulas esfricas u ovoides que miden de 0,6 a 2,0 x 0,6 a 2,5 _m;
son cocos grampositivos que aparecen en par o en cadenas cortas en medio lquido; son no
capsulados, no forman endosporas; son anaerobios facultativos; poseen requerimientos
nutricionales complejos; son catalasa negativa, aunque algunas cepas de E. faecalis pueden
ser positivas debido a la produccin de una pseudocatalasa cuando crecen en medios
que contienen sangre. Raras cepas son mviles por la presencia de flagelos. Fermentan una
amplia variedad de carbohidratos con elaboracin de cido lctico sin produccin de gas; la
temperatura ptima de crecimiento es de 37 C.
Todas las cepas hidrolizan leucina-b-naftilamida (LAP) y la mayora hidrolizan L-pirrolidonil-
-naftilamida (PIR), con excepcin de E. cecorum, E. columbae y E. saccharolyticus.
Dentro de la familia Streptococcacea constituyen los agentes ms resistentes a la desecacin
y a los desinfectantes.
Toleran altas condiciones de pH: 9,6; usualmente fermentan la lactosa; rara vez reducen
nitratos. El contenido de G + C del ADN es de 37 a 45 mol%. Producen, por lo general, o
hemlisis, excepto algunas especies que pueden mostrar -hemlisis, como: E. faecalis, E.
durans y E. gallinarum.
Otros aspectos microbiolgicos importantes en su identificacin son:
1. Crecimiento usual a temperaturas de 10 a 45 C, tolerando valores superiores a 60 C.
2. Crecimiento en presencia de 6,5 % de NaCl.
3. Hidrlisis de la bilis-esculina.
4. Reduccin de la leche con azul de metileno.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
A diferencia de otros estreptococos, el antgeno grupo D no es un carbohidrato de
pared celular. Est formado por cido lipoteicoico asociado a la membrana citoplsmica; es
un poliglicerol fosfato que contiene D-alanina y glucosa. Existen variaciones en la estructura
del peptidoglucano entre las diferentes especies del grupo; E. faecalis contiene solamente
cido glutmico, lisina y alanina, mientras que E. faecium y E. durans tambin contienen
cido asprtico.
Se han reportado tres protenas de superficies de diferentes pesos moleculares como
antgenos prominentes de E. faecalis, las cuales parecen ser especficas de este. Anticuerpos
frente a estos antgenos han sido encontrados en pacientes con endocarditis por E. faecalis,
pero no en aquellas causadas por otros estreptococos o en distintas infecciones producidas
por el mismo.

IMPORTANCIA CLNICA
Est dada por:
1. Rpida emergencia como uno de los ms problemticos patgenos nosocomiales.
2. Rpida resistencia a drogas antimicrobianas.
Dos tipos de enterococos causan infeccin:
1. Aquellos que provienen de la flora nativa del paciente, los cuales no tienen otra resistencia
que no sea la intrnseca, mediada cromosmicamente y que, por lo general, no se
transmiten de cama en cama.
2. Aquellos con tendencia a resistencia mltiple y son capaces de transmisin nosocomial.
Las infecciones del tracto urinario, infecciones de heridas quirrgicas y bacteriemias,
son las entidades clnicas ms frecuentes producidas por este germen.
Infecciones del tracto genitourinario. Ocurren, fundamentalmente, en hombres de
edad avanzada con enfermedad prosttica, en pacientes sometidos a procederes urolgicos,
cateterismo vesical, anomalas estructurales renales y trasplantes renales. Las manifestaciones
clnicas son similares a aquellas producidas por otras bacterias.
Bacteriemias. El 25 a 45 % de estas son polimicrobianas asociadas, principalmente, a
bacilos gramnegativos y Staphylococcus aureus. El 75 % son nosocomiales, y el 25 a 35 %
son comunitarias. Slo se aslan en el 5 % de los cultivos de sangre positivos. El factor de
riesgo principal lo constituye la terapia prolongada con cefalosporinas y hospitalizacin
prolongada del paciente. Con mayor frecuencia se originan a partir de heridas quirrgicas,
infecciones del tracto urinario, uso de catter intravenoso, afecciones intraabdominales,
afecciones del tracto biliar e infecciones cutneas, y el 25 a 45 % de estas son de causa
desconocida. Por lo general se presentan en personas mayores de 50 aos de edad con
enfermedades subyacentes.
Endocarditis. Su frecuencia de aislamiento es de 10 a 15 %, producindose con mayor
periodicidad en pacientes hemodializados, con cardiopatas previas, afecciones colorrectales
y pacientes sanos de edad avanzada. Es ms habitual en los hombres.
Los enterococos tambin ocasionan otras enfermedades, entre las que se encuentran:
infecciones del tracto biliar; septicemias con frecuencia recurrentes, sepsis ligada a catter;
abscesos intraabdominales, peritonitis recurrentes en pacientes quirrgicos, infecciones
plvicas, neumonas.
Como enfermedades inusuales se han reportado: otitis externa, empiemas, osteomielitis
vertebral, infecciones profundas del cuello, tromboflebitis mesentrica, celulitis, tambin
han sido aislados de prtesis ortopdicas.
Los neonatos hospitalizados en las salas de Unidades de Cuidados Intensivos Neonatales
(UCIN) presentan un alto riesgo de padecer infecciones enterocccicas, no slo los recin
nacidos de bajo peso, sino tambin aquellos de peso normal. La adquisicin en muchos de
ellos puede ser maternal a partir de la colonizacin del tracto genital en el 50 % de los casos
y se presentan en forma de meningitis, bacteriemias y septicemias.
Se han reportado infecciones humanas (endocarditis y septicemias) producidas por
enterococos aislados de animales, por ejemplo, E. cecorum, especie aislada de pollos, vacas,
caballos, gatos, patos y canarios; E. avium, aislado de las aves; y E. bovis ha originado
septicemias y endocarditis relacionadas con carcinoma de colon.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Procedencia de muestras
Las muestras deben obtenerse segn la naturaleza de la infeccin enterocccica. En
infecciones humanas se aslan de sangre, orina, exudados de heridas, lquido cefalorraqudeo
(LCR), punta de catter, lquido asctico, esputo; vagina; pus; lquido sinovial; exudado
tico; lceras de decbito. Para estudios de colonizacin se han realizado aspirados traqueales,
gstricos, exudados orofarngeos y rectales.
Debido a que el enterococo raramente contamina especmenes de sitios estriles (fluidos
corporales, sangre, LCR, lquido sinovial), su aislamiento a partir de los mismos debe
considerarse infeccin; sin embargo, el aislamiento de exudados de superficies mucosas
requiere una adecuada interpretacin.
Identificacin
Frotis. El examen microscpico por medio del examen directo con tincin de Gram
revela cocos grampositivos en parejas o dispuestos en cadenas cortas. Tambin se ha
usado la tincin de tinta china y de cristal violeta.
Cultivo. Las muestras bajo sospecha de contener enterococos se cultivan, fundamentalmente,
en agar-sangre 5 % de carnero. Existen otros medios generales como agar-chocolate,
agar-tripticasa-soya y agar-infusin-cerebro-corazn con 5 % sangre de carnero.
Dentro de los medios selectivos se encuentran: el agar enterococel, caldo para E.
faecalis (SF); el caldo estreptocccico Kenner fecal (KF) y el caldo buffer-azida-glucosaglicerol
(BAGG) para recuperar enterococos del agua, los alimentos, orina o materia fecal.
Los bacilos coliformes y gramnegativos son inhibidos y los enterococos crecen produciendo
un pigmento de color visible debido a la elaboracin de cido a partir de la glucosa
presente.
El componente inhibidor lo constituye la azida de sodio.
La incubacin se realiza durante 24 horas a una temperatura ptima de crecimiento de
35 a 37 C.
Morfologa macroscpica y microscpica: desde el punto de vista morfolgico son
colonias ms grandes que las de los estreptococos del grupo A, menos opacas y a veces
blancas brillantes semejantes a colonias de estafilococos. Pueden mostrar o hemlisis
y ms raramente -hemlisis, en especfico E. faecalis var. zymogenes, E. durans y E.
gallinarum en sangre de caballo, conejo y humano. Recientemente se report una morfologa
inusual colonial de E. faecalis dada por el aspecto mucoide relacionado con la
encapsulacin del agente, proveniente de una infeccin del tracto genitourinario, el cual
constituye un emergente morfotipo de muestras clnicas que dificulta la identificacin de los
aislamientos como especies de enterococos.
Pruebas de gnero
1. Hidrlisis de la bilis-esculina: determina la capacidad del agente de hidrolizar el glucsido
esculina en esculetina y glucosa, en presencia de bilis (10 al 40 %). La esculetina
reacciona con una sal de hierro para formar un complejo castao oscuro a negro.
a) Positiva: presencia de un color negro a castao oscuro en el pico de flauta.
b) Negativa: no se produce el ennegrecimiento del medio o ennegrecimiento de menos
de la mitad del tubo despus de 72 horas de incubacin. Existe una modalidad rpida
de la prueba con tiras reactivas impregnadas con esculina y bilis (Pathotec).
c) Resultados: dentro de 1 a 4 horas de la incubacin.
2. Tolerancia a 6,5 % de NaCl: determina la capacidad del microorganismo de tolerar altas
concentraciones de cloruro de sodio.
a) Positiva: si hay crecimiento dado por turbidez del medio, que se comprueba sembrando
una asada del inculo en una placa de agar-sangre.
b) Negativa: no crecimiento visible.
Pruebas de especiacin (Cuadro 20.1)
Otras pruebas bioqumicas
El PIR test (L-pirrolidonil--naftilamida), sustrato para la pirridonilpeptidasa: despus
de la hidrlisis del sustrato por la peptidasa, la naftilamida resultante produce un color rojo
al agregarse 0,01 % de reactivo cinamaldehdo. La especificidad de la prueba es de 73 a 91 %
y es positiva en las especies de enterococos, con excepcin de E. cecorum, E. columbae y
E. saccharolyticus.
Lap test (leucina--naftilamida), sustrato para la leucinoaminopeptidasa: es una prueba
rpida de deteccin de dicha enzima en cultivos de bacterias y resulta positiva en especies
de enterococos.
Mtodos bioqumicos comerciales: API 20STREPP (BioMriux).
Tcnicas de diagnstico rpido
Se dispone de pruebas serolgicas como la prueba de aglutinacin de partculas de ltex
(mtodo serolgico ms usado), la contrainmunoelectroferesis y un sistema ELISA para el
diagnstico serolgico de E. faecalis, el cual se ha usado, adems, para valorar respuesta al
tratamiento.

RESISTENCIA ENTEROCCCICA Y TRATAMIENTO

El principal problema de las especies del gnero Enterococcus es su resistencia a los
agentes antimicrobianos; esta puede ser de dos tipos: intrnseca y adquirida.
Resistencia intrnseca: es caracterstica de la especie y derivada de sus genes cromosmicos,
existiendo bajos niveles de resistencia para los siguientes antimicrobianos:
Tomado de: Stein JH. Bacterial Disease. In: Internal Medicina. 4 th ed. 1994:2087-90.
Esto trae como consecuencia:
1. Lmite de opciones teraputicas.
2. Se requiere de altas dosis de penicilinas para el tratamiento de infecciones graves.

3. Es necesario el uso de combinaciones sinrgicas (Ejemplo: ampicilina ms gentamicina)

para lograr efecto bactericida.
4. No se logra un efecto sinrgico bactericida contra E. faecium ante la combinacin de
ampicilina o vancomicina ms tobramicina, netilmicina y sisomicina.
Resistencia adquirida: puede ser resultado de una diseminacin clonal, plasmdica o
por transposones, y es debida, mayormente, a la produccin de enzimas que inactivan al
agente antimicrobiano o a cambios en los sitios dianas moleculares de este.
RESUMEN
Los enterococos constituyen un numeroso grupo bacteriano de la flora intestinal del
humano y los animales, incluidos en el nuevo gnero Enterococcus desde 1984. Hasta
principios de los aos 80, este germen no era reconocido como un problemtico patgeno.
Desde finales de los aos 80 y principio de los 90, este microorganismo comenz a emerger
como uno de los ms importantes patgenos nosocomiales, responsable de bacteriemias,
infecciones de heridas quirrgicas e infecciones del tracto urinario. De las especies bacterianas
pertenecientes al gnero Enterococcus, E. faecalis constituye la especie tipo y junto al E.
faecium son los ms comnmente aislados del ser humano, aconteciendo para un 85 a 95 %
y 5 a 10 % de las afecciones clnicas respectivamente.
Son cocos grampositivos que se caracterizan, fundamentalmente, por crecer en presencia
de 6,5 % de NaCl, e hidrolizar la bilis-esculina.

El principal problema de las especies del gnero Enterococcus consiste en su resistencia

intrnseca a las diferentes drogas antimicrobianas y su gran capacidad para adquirir la
misma, hacindose cada vez ms carentes las opciones teraputicas para tratar sus infecciones.
Para el tratamiento de las mismas se ha usado convencionalmente la combinacin de un
antibitico -lactmico (penicilina, ampicilina) ms un aminoglucsido (gentamicina o
estreptomicina), lo que ejerce un efecto sinrgico y provoca la muerte del microorganismo.
La resistencia a la penicilina o a la vancomicina, el aumento de los niveles de resistencia
a los aminoglucsidos y la multidrogorresistencia, es la problemtica ms importante en los
ltimos aos.
Los estudios de biologa molecular constituyen una herramienta fundamental en la
tipificacin y caracterizacin de cepas de enterococos. La electroforesis en campo pulsado
es el mtodo gold standard para dichas investigaciones.
Bacilos grampositivos no
esporulados

INTRODUCCIN
Los bacilos grampositivos que no forman esporas son un grupo variado de bacterias.
Muchos miembros del gnero Corynebacterium; y sus equivalentes anaerobios, las especies
del gnero Propionibacterium, forman parte de la flora normal de la piel y las membranas
mucosas del hombre. En trminos quimiotaxonmicos, el gnero Corynebacterium est
estrechamente relacionado con los gneros Rhodococcus, Nocardia y Mycobacterium.
Otras corinebacterias se encuentran en animales y plantas. El miembro ms importante del
grupo, que incluye 16 especies, es el Corynebacterium diphteriae, el cual produce una
potente exotoxina causante de la difteria humana. Listeria monocytogenes y Erysipelothrix
rhusiopathiae se hallan en su mayora en animales y ocasionalmente pueden causar enfermedad
grave en el hombre.
CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
La causa y el modo de transmisin de la difteria fueron establecidos muy temprano; su
modo de prevencin fue subsecuentemente desarrollado con xito al aplicar la inmunizacin
con el correspondiente toxoide. El trmino difteria viene del griego diphtera: piel o membrana,
haciendo alusin a la pseudomembrana localizada en la orofaringe y formada por fibrina,
bacterias y leucocitos. En 1883 el agente fue descrito por Klebs en frotis coloreados a partir
de membranas diftricas y un ao despus fue cultivado por Loeffler, que reprodujo la
infeccin en animales.

MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Las corinebacterias (del griego coryne: palo, garrote) son
bacilos grampositivos que miden de 1 a 1,5
Bacilos grampositivos esporulados
Aerobios

INTRODUCCIN
El gnero Bacillus est compuesto por ms de 40 especies de bacilos grampositivos,
esporulados, grandes, que crecen mejor en condiciones aerobias. La mayora de las especies
son saprfitas y se encuentran en el suelo, agua, vegetales y aire. La especie de mayor
importancia patognica es B. anthracis, agente etiolgico del ntrax o carbunco, una enfermedad
primaria del ganado, que puede afectar al hombre de manera ocasional, asociada al
trabajo de veterinarios, granjeros y agricultores. La especie que se asla con mayor frecuencia
es B. cereus, el cual puede estar relacionado con brotes de intoxicacin alimentaria por la
produccin de una enterotoxina. En raras ocasiones puede asociarse a meningitis, endocarditis,
conjuntivitis o gastroenteritis, en individuos inmunocomprometidos. B. cereus y B.
subtilis a menudo son aislados como contaminantes de medios de cultivo.
BACILLUS ANTHRACIS
Fue el primer microorganismo que se relacion con enfermedad al ser aislado de la
sangre de ovejas con ntrax en 1850 y luego aislado en cultivo puro por R. Koch en 1877. En
1881, Pasteur realiz el primer ensayo de inmunizacin empleando bacilos atenuados por
crecimiento a 42 C en cabras y ovejas, que luego fueron inoculadas con cepas virulentas,
demostrando la proteccin conferida.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Las clulas tpicas miden 1 3-4 m, tienen terminaciones
cuadradas y se disponen en largas cadenas. Poseen esporas centrales que no se observan
en microorganismos aislados de animales vivos y son inmviles. En frotis de tejidos infectados
aparecen como organismos aislados o en cadenas cortas.
Cultivo. Las colonias de B. anthracis son redondas, blanco-grisceas, rugosas y con
apariencia de "vidrio no pulido" o "cabeza de medusa" a la luz transmitida. No son habitualmente hemolticas en agar-sangre (al
contrario de otras especies saprfitas). Lican la gelatina
y su crecimiento mediante inoculacin por puncin tiene la apariencia de "pino invertido".
Caractersticas del crecimiento. El bacilo del ntrax se cultiva en medios nutritivos
habituales y aunque es capaz de crecer en condiciones de anaerobiosis, crece mejor y
produce esporas en presencia de oxgeno. Los requerimientos nutricionales incluyen tiamina
y ciertos aminocidos. El uracilo, la adenina, guanina y el magnesio estimulan el crecimiento
de muchas cepas. La mayora fermentan el manitol, la glucosa, la sacarosa y la maltosa.
Las esporas del ntrax son relativamente resistentes al calor y a los desinfectantes qumicos.
Se destruyen por ebullicin durante 10 minutos y en calor seco a 140 C durante 3 horas.
Permanecen viables durante meses en la piel de animales y durante aos en tierra seca.

TOXINA
La toxina del ntrax desempea un papel importante en los estadios iniciales de la
infeccin, mediante dao directo a los fagocitos. Los animales cuyos leucocitos resisten
este efecto son menos susceptibles a la infeccin. El sitio primario de accin de la toxina es
desconocido. La muerte sobreviene repentinamente, por fallo cardaco, incremento de la permeabilidad vascular, shock, hipoxia y
fallo respiratorio con trombosis capilar pulmonar y
depresin del Sistema Nervioso Central. Los animales que sobreviven, son resistentes a la
reinfeccin. La inmunidad parece deberse a la produccin de anticuerpos contra la toxina y
el polipptido capsular. Hay especies altamente sensibles, en tanto que otras son muy
resistentes. Este hecho se ha atribuido a la actividad de los leucocitos, a la temperatura del
cuerpo y a la accin bactericida del plasma por la existencia de algunos polipptidos que
matan al bacilo.
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Muestras. Lquidos de la lesin local (ppulas y vesculas), pus, sangre (la muestra ms
til) y esputo (poco til). Las muestras ambientales, de preferencia, deben ser previamente
descontaminadas por agitacin en detergente (Tween 80) durante 1 hora y luego centrifugadas
para utilizar el "pellet" como inculo. El trabajo con B. anthracis se llevar a cabo en
gabinete de seguridad biolgica. Se recomienda el agar-sangre para muestras de sitios estriles
y el agar feniletil-alcohol para muestras de sitios contaminados.
Examen directo. A partir de la lesin local y de la sangre de animales muertos, se
observan bacilos grampositivos grandes. Puede aplicarse inmunofluorescencia a frotis secos
de lesiones y esputo.
Cultivo. Las muestras (antes de la aplicacin de antimicrobianos) pueden cultivarse en
agar-sangre en atmsfera de CO2 o en medios con enriquecimiento de suero y bicarbonato.
La fermentacin de carbohidratos carece de utilidad, aunque se realiza una serie de pruebas
bioqumicas y fenotpicas para diferenciar las diversas especies. En agar semislido B.
anthracis se muestra inmvil, contrariamente a otras especies como B. subtilis y B. cereus.
Se ha utilizado una clasificacin simple que divide en tres grupos el gnero Bacillus,
basada en el ancho de los bacilos y en el hecho de que las esporas sobrepasen o no el ancho de
la pared celular. El grupo I incluye a B. anthracis, B. cereus, B. thuringiensis y B. megaterium,
los que de acuerdo con estudios de homologa del ADN estn estrechamente relacionados
como cepas de una misma especie. Se dispone en la actualidad de un sistema comercial (API)
para identificacin de especies de Bacillus que ha resultado superior a la mayora de los dems
mtodos. Incluye la diferenciacin entre cepas virulentas o no de B. anthracis

OTROS BACILOS AEROBIOS ESPORULADOS

DE INTERS

invasor oportunista con ms frecuencia que las dems especies. Puede ser causa de brotes
de intoxicacin alimentaria como resultado de la germinacin de las esporas en alimentos
como cereales o granos insuficientemente cocinados o recalentados luego de una insuficiente
refrigeracin (forma emtica), o carnes con salsas o jaleas (forma diarreica).
Numerosos productos de uso mdico, en investigacin o en la agricultura son elaborados
por especies de Bacillus. Por ejemplo, la bacitracina (antibitico), la penicilinasa (del B. cereus),
endonucleasas de restriccin para clonaje de ADN, insecticidas potentes (B. thuringiensis) y
esporas termorresistentes para control de esterilizacin (B. stearotermophilus).

RESUMEN
El gnero Bacillus est compuesto por ms de 40 especies de bacilos grampositivos,
esporulados, grandes, que crecen mejor en condiciones aerbicas. La mayora de las especies
son saprfitas y se encuentran en el suelo, agua, vegetales y aire. La especie de mayor
importancia patognica es B. anthracis, agente etiolgico del ntrax o carbunco. La especie
que se asla con mayor frecuencia es B. cereus, el cual puede estar asociado a brotes de
intoxicacin alimentaria por la produccin de una enterotoxina. Las clulas tpicas miden
1 3-4 m, tienen terminaciones cuadradas y se disponen en largas cadenas. Poseen
esporas centrales. El bacilo del ntrax se cultiva en medios nutritivos habituales y aunque es
capaz de crecer en condiciones de anaerobiosis, crece mejor y produce esporas en presencia
de oxgeno. Las esporas del ntrax son relativamente resistentes al calor y a los desinfectantes
qumicos. Permanecen viables durante meses en la piel de animales y durante aos en
tierra seca. Slo las cepas que producen tanto cpsula como toxina son altamente patognicas.
El hombre se infecta accidentalmente mediante la penetracin de esporas a travs de la piel
o mucosas lesionadas y rara vez por aspiracin. Las muestras consisten en lquidos de la
lesin local (ppulas y vesculas), pus, sangre y esputo, y pueden cultivarse en agar-sangre
en atmsfera de CO2 o en medios con enriquecimiento de suero y bicarbonato. La penicilina
es eficaz en el ntrax, excepto en su forma pulmonar.
Clostridios

INTRODUCCIN
Los bacilos anaerobios esporulados pertenecen al gnero Clostridium (del griego:
kloster, astilla, esquirla). Su hbitat natural es el suelo y el tracto gastrointestinal de animales
hervboros y el hombre. En circunstancias apropiadas, algunos de estos organismos actan
como patgenos humanos, produciendo enfermedades diferentes: botulismo, ttanos, celulitis
anaerobia, gangrena gaseosa, bacteriemia, colitis pseudomembranosa y gastroenteritis.
La patogenicidad de estos organismos depende de la produccin de potentes exotoxinas
o de enzimas altamente destructivas y se han agrupado de la siguiente forma:
1. Los que producen una gran infeccin y una gran intoxicacin (especies histotxicas),
que ocasionan la gangrena gaseosa.
2. Los que producen una mnima infeccin y una gran intoxicacin (agente etiolgico del
ttanos).
3. Los que producen una gran intoxicacin sin provocar infeccin (agente etiolgico del
botulismo).
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Los clostridios son bacilos grampositivos, largos y
pleomrficos. En cultivos de 48 horas muchos de ellos se observan gramnegativos. Todas
las especies forman esporas, aunque con variaciones en las condiciones requeridas. Las
esporas tienen forma oval o esfrica; son, a menudo, ms anchas que la clula original,
situadas ecuatorial, terminal o subterminalmente. La mayora de las especies poseen flagelos
pertricos y son mviles. Algunos, como C. perfringens, son encapsulados.
Cultivo. La mayora crecen slo en condiciones de anaerobiosis. El uso de medios
enriquecidos proporciona condiciones ptimas para el crecimiento. Entre los suplementos
ms comnmente empleados estn: el extracto de levadura, sangre, hemina, vitamina K y
algunos aminocidos.
Los mejores medios para la recuperacin de microorganismos anaerobios son aquellos
que nunca han sido expuestos al oxgeno, es decir, medios recin preparados (frescos) o prerreducidos, esterilizados
anaerbicamente, eliminando el oxgeno y reduciendo de modo
parcial los ingredientes mediante ebullicin o aadiendo agentes reductores. La preparacin
de medios anaerobios es impracticable por la mayora de los laboratorios, sin embargo,
existen sistemas anaerbicos comercialmente disponibles.
Las muestras recomendadas para cultivo anaerobio deben ser inoculadas en placas con
medio agar-sangre no selectivo (Columbia, Brucella, BHI, TSB), medio anaerobio selectivo
(agar-sangre-feniletil-alcohol, agar-sangre-vancomicina-kanamicina) y medio lquido de enriquecimiento
(tioglicolato y glucosa-carne molida). Los medios lquidos deben ser calentados
durante 10 minutos antes de ser inoculados.
Tanto el medio selectivo como el no selectivo deben ser empleados en el aislamiento
primario. El medio de enriquecimiento servir para el control del cultivo primario en placas,
para recuperar microorganismos que hayan crecido en bajo nmero y para el aislamiento de
organismos de crecimiento lento. La seleccin de los diversos medios vara con la procedencia
y la naturaleza de la muestra.

CARACTERSTICAS ANTIGNICAS
Los clostridios comparten antgenos, pero tambin parecen poseer antgenos especficos
solubles que permiten agruparlos por medio de pruebas de precipitacin.
La identificacin presuntiva de las especies de clostridios, al igual que de otros
anaerobios, est recopilada en diferentes manuales (CDC Laboratory Manual, Virginia
Polytechnic Institute Anaerobe Manual y Wadsworth Anaerobic Bacteriology
Manual).

DATOS CLNICOS
Los sntomas comienzan a las 18 a 24 horas de haber ingerido el alimento contaminado,
con nuseas, vmitos, parlisis de los msculos oculares, de la faringe (disfagia, disfona),
del cuello, tronco y miembros. La muerte sobreviene generalmente por parlisis de los
msculos respiratorios.
El botulismo de heridas ocurre como complicacin de una herida contaminada con
esporas, por presencia de tierra o por abuso de drogas. Los sntomas son similares al botulismo
de origen alimentario, con la diferencia de que los sntomas neurolgicos se desarrollan
sin antecedentes alimentarios.
El botulismo infantil aparece como consecuencia de la ingestin de alimentos contaminados
con esporas, que germinan y producen toxinas a nivel del intestino. Hay antecedentes
de ingestin de algunos alimentos slidos, miel o un trnsito intestinal enlentecido. La
severidad del cuadro vara de una infeccin inaparente a la muerte.
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
En caso de sospecha de botulismo, se emplea la inoculacin del suero del paciente, el
alimento o extractos de las heces fecales en ratones. Aparece parlisis en 1 a 5 das. La
neutralizacin de la toxina con antisueros especficos tiene efecto protector y sirve como
identificacin del tipo antignico. Tambin se emplean la hemaglutinacin pasiva y el
radioinmunoensayo.
TRATAMIENTO Y PREVENCIN
Existen potentes antitoxinas especficas contra los tres tipos de toxina botulnica, pero
ya que la causa suele desconocerse, se emplea la antitoxina trivalente (A, B, E) disponible en CDC, Atlanta, Georgia. El uso de un
toxoide pentavalente slo se justifica en trabajadores de
laboratorio y en ganado vacuno en reas endmicas.

RESUMEN
Los bacilos anaerbicos esporulados pertenecientes al gnero Clostridium, en circunstancias
apropiadas actan como patgenos humanos, produciendo enfermedades diferentes:
botulismo, ttanos, celulitis anaerobia, gangrena gaseosa, bacteriemia, colitis
pseudomembranosa y gastroenteritis.
La mayora crecen solamente en condiciones de anaerobiosis. Se han introducido varios
sistemas comerciales para la identificacin de anaerobios de importancia clnica. La seleccin de
los diversos medios vara con la procedencia y la naturaleza de la muestra. Todos tienen caractersticas
culturales similares. C. perfringens es la ms frecuentemente aislada de las especies de
clostridios. La identificacin de C. tetani y C. botulinum no se lleva a cabo habitualmente en
laboratorios de diagnstico. Se ha identificado una gran variedad de enzimas en los filtrados de
cultivos de clostridios, incluyendo colagenasa, otras proteinasas, hialuronidasas,
desoxirribonucleasa, lecitinasa y neuraminidasa. Otras potentes exotoxinas son las toxinas
botulnicas, la toxina tetnica y las enterotoxinas del C. perfringens y el C. difficile. La toxina
botulnica acta sobre el sistema nervioso, y produce enfermedad grave con dao de los nervios
craneales y debilidad o parlisis. La toxina tetnica es ligeramente menos potente que la toxina
botulnica tipo A; al igual que esta, se une a un receptor a nivel de la membrana de las clulas
nerviosas. Diferentes clostridios que producen toxinas pueden ocasionar infecciones invasivas
si se introducen en tejido lesionado. Alrededor de 30 especies pueden originar tal efecto,
aunque el ms comn es C. perfringens (90 %), que adems puede ser causa comn de
intoxicacin alimentaria. Otras especies relacionadas que pueden producir el mismo efecto son:
C. novyi, C. septicum, C. bifermentans, C. histolyticum y C. sordelli.
Algunas cepas de C. perfringens producen una enterotoxina potente. En ocasiones C.
perfringens del tipo C provoca una enteritis necrosante de mortalidad elevada en nios. C.
difficile se asocia con el 90 al 100 % de los casos de colitis pseudomembranosa, con el 50 al
75 % de las colitis asociadas a antibiticos y con el 15 al 25 % de las diarreas asociadas a
antibiticos.
Neisserias y Moraxella catarrhalis

INTRODUCCIN
La familia Neisseriaceae est compuesta por cocos o cocobacilos gramnegativos aerobios
con tendencia a agruparse en parejas. Esta familia comprende los gneros Neisseria,
Acinetobacter, Kingella y Moraxella. El desarrollo de los estudios genticos conducen a
cambios en la taxonoma de esta familia, encontrndose dentro de estos, la inclusin de
Moraxella catarrhalis (antes Neisseria catarrhalis) en el gnero Moraxella. Las especies
de neisserias y Moraxella catarrhalis son semejantes respecto a su morfologa, actividad
metablica limitada y hbitat acostumbrado, pero difieren en su potencial patgeno y en sus
caractersticas genticas.
Estos microorganismos son cocos gramnegativos que pueden ser refractarios a la
decoloracin, se agrupan en pares (diplococos) con los lados adyacentes planos y en las
preparaciones microscpicas presentan la apariencia de rin o grano de caf. Dentro del
gnero Neisseria, Neisseria meningitidis (meningococo) provoca meningitis y septicemia, y
Neisseria gonorrhoeae (gonococo) es el agente etiolgico de la gonorrea o blenorragia, una
enfermedad de transmisin sexual (ETS). Mediante la observacin microscpica directa de
muestras clnicas, ambos se detectan dentro o fuera de los leucocitos polimorfonucleares.
Las especies patgenas son muy exigentes, slo se cultivan en medios enriquecidos,
dentro de lmites estrechos de temperatura (35 a 37 0C) y pH (7,2 a 7,6). Son sensibles a la
accin de agentes externos (desecacin, antispticos, desinfectantes, cambios de temperatura).
Para su crecimiento precisan de medios enriquecidos, humedad elevada y una atmsfera
con un 5 a 10 % de CO2. Su crecimiento se inhibe por la accin de ciertos constituyentes
txicos del medio, por ejemplo, cidos grasos o sales. Para contrarrestar esta situacin se
aaden a los medios sustancias tales como almidn, suero, albmina y carbn.
Las especies no patgenas forman parte de la flora normal de las vas respiratorias
superiores del hombre, su localizacin es extracelular y con raras excepciones producen
enfermedad (patgenos oportunistas). En contraste con las especies patgenas, las neisserias
no patgenas son poco exigentes, no precisan de medios enriquecidos, pueden crecer a 22 0C
y son poco sensibles a los agentes externos. En el cuadro 24.1 se reflejan algunas caractersticas
de estos microorganismos.
Desde el punto de vista gentico, Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae
estn estrechamente relacionadas respecto a la composicin de su ADN, presentando una homologa del 70 %. Estas especies se
diferencian por algunas pruebas de laboratorio,
caractersticas especficas y las manifestaciones clnicas que producen. A diferencia de los
gonococos, los meningococos presentan cpsula de polisacrido y rara vez portan plsmidos
de resistencia. De manera casi uniforme, Neisseria meningitidis coloniza las vas respiratorias
superiores y puede ocasionar, posteriormente, en algunos individuos, bacteriemia y(o)
infeccin del Sistema Nervioso Central (meningoencefalitis); en tanto que Neisseria
gonorrhoeae provoca, fundamentalmente, una enfermedad de transmisin sexual (blenorragia
o gonorrea).
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Los microorganismos tpicos tienen forma esfrica, son
gramnegativos, se presentan aislados o en parejas (diplococos) con los lados adyacentes
planos y la apariencia de granos de caf. Slo Neisseria elongata constituye una excepcin,
se presenta como bacilos cortos de 0,5 m, agrupados en parejas o cadenas cortas. En dependencia
de la especie, fuente de aislamiento y edad del cultivo, el resto de los
microorganismos muestran un dimetro entre 0,6 a 1,5 m. Entre otras caractersticas estn
las de presentar cpsulas y pili (fimbrias), no producir esporas y ser inmviles.
Cultivo. Las especies patgenas del gnero Neisseria necesitan de medios de cultivo
enriquecidos (agar Mueller-Hinton, agar Thayer-Martin, agar-sangre o agar-chocolate). En
estos medios, Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae forman colonias de 1a 5 mm
de dimetro, mucoides, convexas, elevadas, de aspecto transparente u opaco, no pigmentadas
y no hemolticas. Neisseria flavescens, Neisseria subflava y Neisseria lactamica pueden
presentar pigmentacin amarilla; y Neisseria sicca da lugar a colonias no pigmentadas,
opacas, frgiles y arrugadas.
Caractersticas del crecimiento. Las neisserias son aerobias y algunas especies requieren
de elementos nutricionales complejos. La mayora degradan pocos carbohidratos y
originan la produccin de cido, pero no de gas. Los patrones de fermentacin que producen
constituyen uno de los principales mtodos para su diferenciacin (Cuadro 24.1). Excepto
Neisseria elongata, todas las especies elaboran oxidasa y catalasa, pruebas claves en la
identificacin del gnero Neisseria. Para efectuar la deteccin de produccin de oxidasa, se
realiza una estra de la cepa en cuestin sobre un papel de filtro impregnado con una solucin
acuosa al 1 % de clorhidrato de tetrametil-parafenilendiamina; inmediatamente despus, las
colonias oxidasa positiva, tomarn un color prpura oscuro.

Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae necesitan de medios enriquecidos

con sangre, hemina, protenas animales y(o) suplementos comerciales qumicamente definidos
(Isovitalex, Vitox). Para su crecimiento se incuban a 35 a 37 0C y en atmsfera hmeda con
5 a 10 % de CO2. El crecimiento de estos microorganismos se inhibe por la accin de compuestos
txicos (cidos grasos y sales) libres en el medio. Las neisserias patgenas son
sensibles a la desecacin, luz solar, calor hmedo y a la accin de los desinfectantes. Producen
enzimas autolticas que conducen la tumefaccin y lisis rpida in vitro a 25 0C y pH
alcalino.
Conservacin y transporte. Las neisserias patgenas son muy sensibles a las condiciones
ambientales adversas, y a menudo hay pocos microorganismos presentes en el material
clnico. Por ello, para preservar su viabilidad, las muestras clnicas y cepas aisladas deben
transportarse al laboratorio con rapidez y sumo cuidado. Los mtodos de eleccin para
mantener las cepas por largos perodos son la liofilizacin y crioconservacin (-60 a -80 0C),
en sangre de conejo desfibrinada, caldo peptonado, o leche descremada. Cuando no es
posible utilizar estos mtodos, las cepas pueden transportarse y conservarse en diferentes
medios de cultivo (Transgrow, Stuart, CTA, TC), en los cuales el tiempo de viabilidad vara
(horas, semanas, meses). Para su conservacin y transportacin, los microorganismos deben
inocularse a partir de cultivos puros y jvenes (cultivos de 18 a 24 horas). Si la cepa se
encuentra en buen estado fisiolgico, se obtendrn subcultivos viables.
Entre los principios generales que deben tenerse en cuenta para la conservacin de
estos microorganismos se citan: sensibilidad a las variaciones de pH, sensibilidad a la deshidratacin,
sensibilidad a variaciones de temperatura y la autlisis de las cepas (sobre todo
gonococo y meningococo).
NEISSERIA GONORRHOEAE (GONOCOCO)
Es un diplococo gramnegativo, aerobio, fastidioso, sensible a los agentes externos y
capaz de degradar la glucosa por oxidacin. Difiere de las otras especies del gnero por sus
caractersticas antignicas y por producir colonias ms pequeas. Su crecimiento en medios
qumicamente definidos permite su clasificacin en auxotipos. Estos caracteres estables se
utilizan como marcadores en estudios sobre virulencia, capacidad invasiva y sensibilidad a
los agentes antimicrobianos. Las cepas que requieren de arginina, hipoxantina y uracilo
(cepas AHU o Arg , Hyx, Ura) son, por lo general, sensibles a la penicilina, resistentes a la
accin bactericida del suero normal y responsables de la mayora de las infecciones localizadas
en las mucosas.
Neisseria gonorrhoeae produce infecciones en la mucosa del aparato urogenital, en su
mayora de transmisin sexual, constituyendo la gonorrea la expresin clnica ms frecuente.
La incidencia de las infecciones gonocccicas aumenta en el mundo y paralelamente se
presenta una disminucin progresiva de la sensibilidad del gonococo a la penicilina.

NEISSERIA MENINGITIDIS (MENINGOCOCO)

Es un diplococo gramnegativo perteneciente al gnero Neisseria (oxidasa y catalasa
positivas), se caracteriza por su difcil crecimiento y sensibilidad a los agentes externos. La
mayora de las cepas degradan la glucosa y la maltosa por oxidacin, aunque se describen
cepas que presentan patrones diferentes (cepas deficientes). Es un parsito de la mucosa de
las vas respiratorias superiores del hombre y produce cuadros clnicos diversos, donde la
meningitis cerebroespinal epidmica ocupa un lugar destacado.

MORAXELLA CATARRHALIS
Moraxella catarrhalis, antigua Neisseria catarrhalis, se reporta desde 1886 por Frosch
y Kolle, a partir de muestras de esputos obtenidos de pacientes con bronquitis o
pleuroneumona y durante muchos aos fue considerada un comensal de la orofaringe. Sin
embargo, en 1972, a partir de estudios realizados en pacientes con bronquitis crnica, se
pone en evidencia su poder patgeno. En 1977 se detecta la primera cepa productora de -lactamasa,
este hecho conduce a un mayor inters por este microorganismo, especialmente en
los aspectos relacionados con su resistencia y la adquisicin y diseminacin de cepas
-lactamasa positiva. En los nios se comporta como patgeno importante de otitis media y
sinusitis; en los adultos, provoca exacerbaciones agudas en pacientes con afeccin pulmonar
obstructiva crnica. Adems de estas enfermedades, produce septicemia, endocarditis y
meningitis.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Son diplococos gramnegativos arrionados, inmviles; no
poseen cpsula y presentan pili o fimbrias.
Cultivo y caractersticas del crecimiento. Es un microorganismo aerobio, oxidasa y
catalasa positiva; no produce cido a partir de los hidratos de carbono; no es exigente en sus
requerimientos nutricionales; se cultiva fcilmente en los medios de cultivo habituales (agarsangre,
agar-chocolate); su temperatura ptima de crecimiento es de 37 0C, aunque tambin
puede crecer a 22 0C y en agar-nutriente. En estos medios produce colonias homogneas, de
contornos bien definidos, color blanco cremoso, no pigmentadas, no hemolticas y
entre 0,5 y 1 mm de dimetro. No crece en los medios selectivos que se emplean en el
aislamiento de algunas neisserias.

OTRAS NEISSERIAS
Las especies del gnero Neisseria pueden dividirse en dos grupos. El primero incluye:
Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria lactamica, Neisseria cinerea,
Neisseria flavescens, Neisseria polysaccharea y Neisseria gonorrhoeae subespecie kochii.
Las subespecies pertenecientes a este grupo producen colonias translcidas y no
pigmentadas. Neisseria flavescens da lugar a colonias pigmentadas y constituye la nica
excepcin. El segundo grupo incluye especies comensales sacarolticas: Neisseria subflava,
Neisseria flava, Neisseria perflava, Neisseria sicca y Neisseria mucosa. Sus colonias son
opacas, aunque algunas cepas de Neisseria perflava producen colonias no pigmentadas y
transparentes. La mayora de las otras especies producen colonias pigmentadas de amarillo.
Sin embargo, Neisseria sicca y Neisseria mucosa se describen, habitualmente, como no
pigmentadas. Existen especies recin descritas: Neisseria weaveri (1993), asociada a
mordeduras de perro; Neisseria iguanea (1994), aislada de llagas de lagartos; Neisseria
gonorrhoeae var. kochii (1986), bacteria intermedia entre meningococo y gonococo; Neisseria
elongata ssp. elongata (1970); Neisseria elongata ssp. glycolytica (1976) y Neisseria
elongata ssp. nitroreducens (1990), aisladas de la orofaringe humana y la sangre (endocarditis).
Neisseria flavescens se asla de un brote de meningitis en Chicago. Sus cepas son
pigmentadas, sensibles al colistin y producen polisacrido a partir de sacarosa. Neisseria
mucosa se describe en 1906; se distingue de Neisseria perflava y Neisseria sicca por su
habilidad para reducir los nitratos. Neisseria sicca, Neisseria subflava, Neisseria mucosa y
Neisseria flavescens, se aslan en empiema, neumona, septicemia, meningitis, endocarditis
bacteriana subaguda y pericarditis. Neisseria elongata, descrita en 1970, presenta morfologa cocobacilar y produce filamentos
cuando se expone a condiciones subletales de penicilina. Forman parte de la flora
normal de la orofaringe y se asla de casos de faringitis. Aunque tiene forma de bacilo y es
catalasa negativa, se considera dentro del gnero Neisseria.
Se describen tambin en el grupo de neisserias excepcionales: Neisseria macacae,
Neisseria denitrificans y Neisseria canis.
Neisseria lactamica se reporta en 1969, es resistente al colistin, crece en medios selectivos
y se diferencia de Neisseria meningitidis por producir -galactosidasa. Forma parte de
la flora normal de la orofaringe y en raras ocasiones produce meningitis, septicemia e infecciones
urogenitales. La presencia de Neisseria lactamica en la nasofaringe estimula la formacin
de anticuerpos bactericidas que protegen contra la EM, puesto que hay reaccin
cruzada serolgica entre ambos microorganismos.
Neisseria cinerea puede confundirse con Neisseria gonorrhoeae, forma parte de la
flora normal del aparato respiratorio superior y se califica como oportunista. Ocasiona neumona
en casos con sndrome de inmunodeficiencia adquirida. Sus colonias se parecen a las
del gonococo, diferencindose de esta especie mediante la prueba de sensibilidad a la colistina.
Neisseria gonorrhoeae var. kochii se asla de pacientes con conjuntivitis en Egipto.
Muestra caractersticas tanto de gonococo como de meningococo. Los aislamientos que se
asemejan al gonococo, degradan la glucosa y no producen -glutamil-aminopectidasa. Sin
embargo, no reaccionan con los AcMs especficos contra la P1 y a diferencia del meningococo,
requiere de cistina/cistena en el medio de Neda (medio qumicamente definido para identificar
auxotipos). Por razones prcticas, estas cepas se identifican como Neisseria gonorrhoeae
subespecie kochii. Se reportan en pacientes con uretritis.
Neisseria polysaccharea se describe, en 1983, por Riou y colaboradores. Se caracteriza
por degradar la glucosa y la maltosa, y producir polisacrido a partir de la sacarosa. Se
clasifica inicialmente como Neisseria meningitidis no agrupable. En medios de cultivo con
un 5 % de sacarosa, forma colonias circulares, convexas, brillantes, de 3 a 4 mm de dimetro.
Es un coco gramnegativo arrionado, se agrupa en ttradas y es capaz de crecer en medios
selectivos a 37 0C y 5 a 10 % de CO2. No produce hemlisis en agar-sangre y no crece a 22 0C.
Requiere de cistena para su crecimiento y reduce los nitritos, pero no los nitratos. Al igual
que Neisseria meningitidis, produce cido de la glucosa y maltosa, es catalasa y oxidasa
positivas. Tiene ausencia de actividad -galactosidasa, tributirina, Dnasa, y -glutamilaminopectidasa.
Es menos sensible que el meningococo a la penicilina y ampicilina. Hasta la
fecha slo se localiza en la nasofaringe.

RESUMEN
GONOCOCO
Nombre cientfico: Neisseria gonorrhoeae, pertenece a la familia Neisseriaceae y al
gnero Neisseria.
Son diplococos gramnegativos, se agrupan en pares y tienen la apariencia de rin o
grano de caf. Presentan una localizacin intra o extracelular; poseen pili; no presentan
esporas, flagelos ni cpsula de polisacrido. Crecen en medios enriquecidos, son aerobios y
se incuban de 35 a 37 0C en atmsfera hmeda con 5 % de CO2.
Se localizan en las mucosas y serosas del hombre, nica especie para la cual es patgena.
Provoca afecciones purulentas en varios tejidos, pero la enfermedad ms importante se
presenta a nivel del aparato urogenital. En el varn, la uretritis se puede diseminar a estructuras
vecinas (epididimitis, orquitis y prostatitis). En la mujer, el espectro clnico es amplio;
en un porcentaje considerable de casos la infeccin es asintomtica; en otras, puede extenderse
a las glndulas de Bartholino, endometrio, peritoneo y producir EIP. En algunas mujeres
conduce a la esterilidad. Fuera de los genitales, las localizaciones ms frecuentes son: el
recto, la faringe y la conjuntiva.
El diagnstico se realiza por examen directo y cultivo de: exudados uretrales,
endocervicales, farngeos, conjuntivales y recto. Se deben realizar estudios de resistencia y
deteccin de plsmidos en las cepas aisladas.

Sus factores de patogenicidad son: LOS, IgA proteasas y pili.

Desde el punto de vista epidemiolgico, la ETS constituye la expresin clnica ms
frecuente. Esta se presenta, principalmente, durante la segunda y tercera dcadas de la vida,
en personas promiscuas, prostitutas y homosexuales.
Por el aumento de cepas PPNG y TRNG, la ceftriaxona constituye el medicamento de
eleccin y como alternativos, ciprofloxacina y espectinomicina. La penicilina se puede utilizar
si se demuestra la sensibilidad a este antimicrobiano.
No existen vacunas disponibles. La medida ms importante radica en evitar la promiscuidad
sexual y eliminar la fuente de infeccin mediante el diagnstico y tratamiento precoz. El
uso del condn proporciona alguna proteccin, pero no es segura en todos los individuos.
MENINGOCOCO
Nombre cientfico: Neisseria meningitidis, pertenece a la familia Neisseriaceae y al
gnero Neisseria.
Son diplococos gramnegativos y se agrupan en pares. Presentan cpsulas, fimbrias,
morfologa similar a granos de caf y localizacin intracelular. Crecen en aerobiosis, en
medios enriquecidos, a la temperatura de 35 a 37 0C y atmsfera hmeda con 5 % de CO2.
Producen infecciones purulentas en varios tejidos, pero la enfermedad ms importante
es la meningoencefalitis. Esta puede manifestarse de forma endmica o epidmica y provoca
altas tasas de morbilidad y mortalidad. La puerta de entrada es la nasofaringe; se adquiere
por inhalacin del microorganismo a partir de portadores asintomticos. Despus de colonizar
la nasofaringe puede invadir el torrente sanguneo y llega al SNC. El cuadro clnico se
caracteriza por fiebre, cefalea, vmitos, dolores musculares, petequias, rigidez de nuca,
hiperreflexia y convulsiones.
El diagnstico se realiza mediante el estudio del LCR, sangre y petequias e incluye:
examen directo, cultivo, tcnicas inmunolgicas y moleculares. El diagnstico presuntivo,
mediante la observacin microscpica y(o) tcnicas de diagnstico rpido, es fundamental y
necesario. La EM tiene una evolucin rpida y puede conducir a la muerte en pocas horas.
La identificacin a partir del cultivo incluye: prueba de oxidasa (positiva), catalasa
(positiva), formacin de cido a partir de la glucosa y maltosa, -glutamil-aminopectidasa
(positiva), ONPG (negativo) y reaccin de aglutinacin positiva frente a los antisueros
especficos de grupo.
Los atributos de patogenicidad son: PCs, secrecin de IgA proteasa, PMEs, LOS, produccin
de estructuras vesiculares y presencia de pili.
Se identifican 12 serogrupos (A, B, C, X, Y, Z, 29E, W-135, H, I, K, L), 22 serotipos, ms
de 12 subtipos y 13 inmunotipos.
La penicilina es el antimicrobiano de eleccin en el tratamiento de casos clnicos; los
alternativos pueden ser el cloranfenicol y las cefalosporinas de tercera generacin. Para la
quimioprofilaxis se recomienda: rifampicina, espiramicina, minociclina, ciprofloxacina y
ceftriaxona. Se realiza la prevencin por vacunas de PCs contra los serogrupos A, C, Y, W-
125, o a partir de PMEs contra el serogrupo B.
MORAXELLA CATARRHALIS
Nombre cientfico: Moraxella catarrhalis, es miembro de la familia Neisseriaceae y del
gnero Moraxella.
Es un diplococo gramnegativo arrionado, aerobio, oxidasa y catalasa positivas; no
produce cido a partir de azcares, no es exigente en sus requerimientos nutricionales y no
crece en medios selectivos.
En los nios produce otitis media aguda y en los adultos provoca complicaciones
broncopulmonares. Producen -lactamasas (80 a 90 %) de las cepas. Sus factores de
patogenicidad son: PMEs, LOS y pili.
El diagnstico se basa en su aislamiento a partir de los productos patolgicos. Su
diagnstico diferencial descansa en la produccin de Dnasa, lipasas y no elaborar cido a
partir de azcares.
Bacilos y cocos gramnegativos
Anaerobios

INTRODUCCIN
Las bacterias anaerobias cobran importancia mdica por las infecciones que causan, a
menudo estas son polimicrobianas, es decir, la bacteria anaerobia se encuentra en infecciones
mixtas con otros anaerobios, anaerobios facultativos y aerobios. Estas se hallan en el
cuerpo humano formando parte de la flora normal y causan infeccin cuando llegan a zonas
estriles del cuerpo o cuando existen factores predisponentes que alteran el potencial de
xido-reduccin en los tejidos.
En este captulo se estudiarn las infecciones por bacilos y cocos gramnegativos, pues
los clostridios, espiroquetas anareobias y Campylobacter sp. anaerobios se explican en
otros captulos.
BACILOS GRAMNEGATIVOS ANAEROBIOS
Los bacilos gramnegativos anaerobios son parte de la flora normal de la boca, tracto
respiratorio superior, tracto intestinal y urogenital de los humanos y de los animales inferiores.
Sus miembros incluyen los siguientes gneros: Anaerovibrio, Bacteroides, Biophila,
Butyrivibrio, Centipeda, Desulfomonas, Desulfovibrio, Fibrobacter, Fusobacterium,
Leptotrichia, Megamonas, Mitsuokella, Porphyromonas, Prevotella, Rikenella,
Ruminobacter, Sebaldella, Selenomonas, Succinimonas, Succinivibrio, Tissierella y
Wolinella.
De los gneros anteriores, slo cuatro necesitan ser considerados por su importancia en
especmenes clnicos, ellos son: Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella y Porphyromonas.
Los gneros anteriores son identificados presuntivamente basndose en la morfologa
celular y colonial, produccin de pigmentos, fluorescencia bajo luz ultravioleta, susceptibilidad
a los discos de antibiticos (vancomicina, colistina y kanamicina) y caractersticas
bioqumicas; mientras que el diagnstico confirmativo se realiza mediante cromatografa en
gas-lquido.

BACTEROIDES
La taxonoma de los bacilos gramnegativos anaerobios ha tenido grandes cambios en
los ltimos aos, tendencia que continuar. El nuevo gnero Bacteroides incluye miembros
del grupo B. fragilis, B. splanchnicus y al grupo B. ureolyticus.
Este gnero se incluye en la familia Bacteroidaceae. El grupo B. fragilis comprende las
siguientes especies: B. distasonis, B. caccae, B. eggerthii, B. fragilis, B. merdae, B. vulgatus,
B. ovatus, B. stercoris, B. thetaiotaomicron, B. uniformis; mientras en el grupo B. ureolyticus
con taxonoma incierta se incluyen como especies: B. ureolyticus y B. gracilis.
Las especies de Bacteroides sensibles a la bilis y moderadamente sacarolticas han sido
reclasificadas en el nuevo gnero Prevotella, y especies de Bacteroides asacarolticas son
ahora miembros del gnero Porphyromonas.
Otras especies de Bacteroides han sido reclasificadas en nuevos gneros, y con la
excepcin de Tissierella praecuta (antes B. praecutus), no son de importancia clnica.
El grupo B. ureolyticus ha sufrido mltiples cambios en los ltimos aos; estudios
recientes por Han y colaboradores reportan que B. ureolyticus y B. gracilis, miembros de
dicho grupo, as como Wolinella recta y Wolinella curva son similares a los verdaderos
Campylobacter. Debido a la taxonoma incierta del grupo B. ureolyticus, se sigue considerando
como una especie de Bacteroides.
Las especies de Bacteroides son el grupo ms importante de anaerobios que causan
infecciones humanas; son habitantes normales del intestino y otros sitios del cuerpo. Las
heces normales contienen 1011 microorganismos de B. fragilis por gramo. B. fragilis es la
especie ms importante de todas las bacterias anaerobias, no slo por su frecuencia en
infecciones clnicas, sino por su resistencia creciente a los agentes antimicrobianos.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Son bacilos gramnegativos irregularmente teidos, delgados,
pleomrficos; pueden observarse formas cocobacilares; son anaerobios obligados, no
esporulados, inmviles o mviles mediante flagelos pertricos.
Cultivo. Crecen en anaerobiosis, a temperatura de 35 a 37 C y a pH 7; crecen en medios
con bilis al 20 % y en agar-sangre con kanamicina (1 mg/mL), vancomicina (5 _g/mL) o
colistina (10 _g/mL); crecen bien en Brucella base agar con sangre de carnero suplementado
con hemina y vitamina K1 incubados durante 2 3 das.

PRUEBAS DIAGNSTICAS DE LABORATORIO

Muestras. La toma de muestra para cultivo de anaerobios debe tener en cuenta el efecto
letal del oxgeno atmosfrico, por lo que a este fin se han ideado contenedores especiales de
transporte con atmsfera prerreducida. Las muestras para cultivo deben ser el pus de absceso
y lesiones, la sangre y tejidos.
Frotis. Los frotis con tincin de Gram muestran bacilos gramnegativos delgados con
extremos redondeados, pleomrficos y formas cocoides, teidos de forma irregular. Teniendo
en cuenta que los organismos anaerobios infectantes tienen su origen en la flora normal
de las superficies mucocutneas, es imposible distinguir al patgeno del comensal mediante
tincin de Gram. Puede emplearse inmunofluorescencia directa a la muestra para la deteccin
rpida de los miembros del grupo B. fragilis.
Cultivo. Los cultivos deben incubarse de 35 a 37 0C, a pH 7, y bajo condiciones de
anaerobiosis de 2 a 5 das. Los medios a emplear pueden ser: no selectivos y selectivos.

Medios no selectivos: agar-sangre para anaerobios, agar Brucella, infusin cerebro-corazn

suplementada con extracto de levadura, agar Columbia, agar Schaedler y agar-soya
tripticasa; todos los medios suplementados con vitamina K1 y hemina.
Medios selectivos: agar-sangre CDC para anaerobios, agar-sangre con vancomicina y
kanamicina, bacteroides bilis esculina agar (BBE), tioglicolato con vitamina K1 (0,1 _g/mL) y
hemina (5 _g/mL), agar-sangre feniletil alcohol.
Las muestras transportadas en medios adecuados para anaerobiosis deben ser inoculadas
de forma duplicada en los medios seleccionados e incubadas tanto en anaerobiosis
como en aerobiosis. Las muestras sembradas en anaerobiosis no deben ser examinadas
antes de las 48 horas.
Las colonias son de 2 a 3 mm de dimetro, circulares, de bordes enteros, convexas, lisas,
translcidas a opacas de forma general; la mayora de las especies del grupo B. fragilis se
observan ennegrecidas en agar BBE por la hidrlisis de la esculina, excepto B. vulgatus. El
grado de hemlisis vara con la especie:
B. fragilis: algunas cepas son -hemolticas.
B. distasonis: algunas cepas son -hemolticas.
B. ovatus, B. thetaiotaomicron, B. vulgatus: son no hemolticas.
Pruebas fisiolgicas. Las especies que integran el gnero Bacteroides fermentan la
glucosa, sacarosa y maltosa; son resistentes a la bilis al 20 %; son indol negativo en su
mayora. Las especies del grupo B. ureolyticus son resistentes a la vancomicina y susceptibles
a la kanamicina y colistina, mientras que el grupo B. fragilis es resistente a los tres
antibiticos sealados.
Mediante cromatografa en gas-lquido se obtienen los productos finales del metabolismo
de la glucosa tales como: el cido propinico, cido succnico y cido actico.

RESUMEN
Los bacilos gramnegativos anaerobios incluyen 22 gneros, de ellos cuatro son importantes
en la prctica mdica; estos son: Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella y
Porphyromonas. Los mismos forman parte de la flora normal de la mucosa oral, tracto respiratorio
superior, tracto intestinal y urogenital del hombre y animales superiores, por lo que
causan infecciones polimicrobianas de origen endgeno.
Los cocos gramnegativos anaerobios se incluyen en la familia Veillonellaceae, que
consta de tres gneros: Veillonella, Megasphaera y Acidaminococcus. Estos microorganismos
forman parte de la microflora de las cavidades del cuerpo de los animales y el hombre,
especialmente a nivel de la boca, el aparato respiratorio superior y el intestino grueso. Se
reportan muy raramente como patgenos humanos significativos. V. parvula es la especie
aislada con ms frecuencia en este grupo de microorganismos, los cuales son resistentes a
la vancomicina y sensibles a la kanamicina y colistina.
El diagnstico presuntivo de estos microorganismos se basa en la morfologa colonial y
celular, produccin de pigmentos, fluorescencia bajo luz ultravioleta, susceptibilidad a los
discos de antibiticos (vancomicina, kanamicina y colistina) y caractersticas bioqumicas;
mientras que el diagnstico de laboratorio se realiza mediante cromatografa en gas-lquido.
El tratamiento de estas infecciones por bacilos gramnegativos es quirrgico, a travs del
drenaje de los abscesos y con drogas antimicrobianas; se emplea la penicilina G en aquellas
infecciones en las que no participen especies de Bacteroides, Prevotella y Porphyromonas
productoras de -lactamasa. Las drogas de eleccin son la clindamicina y el metronidazol.
Enterobacterias
INTRODUCCIN
Las bacterias que conforman la familia Enterobacteriaceae estn constituidas por bacilos
gramnegativos no esporulados, que fermentan y oxidan la glucosa, carecen de indofenol
oxidasa, reducen los nitratos a nitritos y se hallan ampliamente distribuidos por la naturaleza;
muchas de sus especies tienen como hbitat el intestino del hombre y los animales, mientras
que otras pueden parasitar a plantas o tener vida saproftica.
Pueden ser mviles por medio de flagelos pertricos, o pueden carecer de estos y ser
inmviles.
Las especies que se encuentran en ella son de las que ms frecuentemente se identifican
en los laboratorios de microbiologa clnica como causa de infecciones tanto comunitarias
como nosocomiales.
Entre las infecciones que ocasionan, se sealan: infecciones entricas o infecciones
fuera del tracto intestinal.
La clasificacin y nomenclatura de esta familia ha sido y es muy cambiante, por lo que
existen diversas clasificaciones para sus miembros.
A nuestro criterio, una de las clasificaciones que ms ayuda en el diagnstico de los
miembros de esta familia es la presentada por Farmer y utilizada en los laboratorios de
bacteriologa entrica del Centro de Prevencin y Control de Enfermedades.
Los gneros que conforman esta familia son: Budvica, Buttiauxella, Cedecea,
Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia-Shigella, Ewingella, Hafnia,
Klebsiella, Kluyvera, Koserella, Leclercia, Leminorella, Moellerella, Morganella,
Obesumbacterium, Pragia, Proteus, Providencia, Rhanella, Salmonella, Serratia,
Tatumella, Xenorhabdus, Yersinia y grupos entricos.
Cada uno de estos grupos est conformado por una o ms especies bacterianas con
caractersticas fenotpicas y genotpicas muy similares, que a su vez estn ampliamente
distribuidas en la naturaleza, en el agua, en la tierra y en el intestino del hombre y los
animales, as como en sus superficies expuestas al medio ambiente.
No todos los gneros y especies que integran esta gran y compleja familia se hallan
como frecuente causa de enfermedad; de ellos, alrededor de 25 especies han sido confirmadas
como presentes en patologa humana.
Las primeras clasificaciones realizadas a esta familia se basaron en las caractersticas
fenotpicas y estudios serolgicos. Estas clasificaciones han variado mucho, lo que ha dado
lugar a que nuevas especies se hayan incorporado a las ya conocidas.
En la actualidad, se aaden a los estudios ya establecidos por comportamiento fisiolgico
y carga antignica de estas bacterias, los de hibridacin de ADN y anlisis
computarizados. Las investigaciones para sus clasificaciones abarcan desde las reacciones
bioqumicas hasta estudios de resistencia, fagotipaje, presencia de toxinas y anlisis sobre
las lesiones en la mucosa entrica.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. Las enterobacterias son bacilos gramnegativos que, en ocasiones,
en cultivos jvenes, se pueden observar formas cocobacilares y hasta cocoides. Sus
bordes son rectos y sus extremos, curvos. En algunas especies como Proteus, las formas
jvenes pueden presentarse formando filamentos.
El tamao promedio de la mayora de estas bacterias oscila entre 0,5 y 2 _m de ancho, y
de 2 a 4 _m de largo.
La presencia de una cpsula puede ser observada en Klebsiella, aunque en algunas
cepas de E. coli es posible apreciar esta misma estructura.
Las bacterias pertenecientes a esta familia no pueden clasificarse sobre la base de la
coloracin de Gram, puesto que todos sus miembros se presentan con la misma forma y
afinidad tintoreal.
Cultivo. La temperatura ptima de crecimiento de la mayora de sus especies es de 37 C,
aunque algunas E. coli y Salmonella toleran temperaturas hasta de 42 C, y otras como
Yersinia y Serratia pueden crecer a baja temperatura, entre 1 y 5 C.
De acuerdo con sus requerimientos de oxgeno son aerbicas o anaerbicas facultativas.
Los requerimientos de nutrientes en el metabolismo de los miembros de esta familia no
son altamente exigentes y crecen de manera muy similar, cualquiera de sus especies, en la
mayora de los medios que se utilizan, por lo general, en el laboratorio de microbiologa
clnica diagnstica, desde un agar nutriente, agar-sangre, agar-sangre-chocolate o caldo
nutritivo.
Caractersticas del crecimiento. En los medios slidos se observan colonias relativamente
grandes, de color grisceo, de aspecto hmedo y de bordes definidos. Klebsiella da
lugar en estos medios a colonias mucoides que tienden a levantarse con el asa de forma
filamentosa; esta caracterstica se corresponde con la presencia de la cpsula, por lo que
otras colonias pertenecientes a otras especies de enterobacterias pueden presentar las mismas
caractersticas. Las colonias que pertenecen a Proteus se esparcen en la superficie como
una sbana.
En los medios lquidos, las cepas de enterobacterias enturbian el medio homogneamente.
Las diversas tribus, gneros y especies que conforman la familia Enterobacteriaceae,
no pueden ser diferenciados en los medios universales. La diferenciacin primaria de las
distintas especies se fundamenta en la presencia o ausencia de enzimas codificadas por el
material gentico cromosomal o adquiridas por medio de plsmidos. Estas enzimas se presentan
en alguno de los pasos del metabolismo bacteriano y pueden ser detectadas usando
medios diferenciales o selectivos, as como medios para estudios de utilizacin de sustratos
como son los carbohidratos y para decarboxilacin o deaminacin de aminocidos, a los
cuales, adems del sustrato seleccionado, se les aade un indicador para poder detectar la
utilizacin de este en el metabolismo bacteriano.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
La familia Enterobacteriaceae se caracteriza por tener antgenos somticos (O) que
determinan los grupos serolgicos; se han identificado ms de 150 de estos antgenos
formados por lipopolisacridos que poseen la caracterstica de ser termoestables, y pueden
ser reconocidos por mtodos de evidencia como la aglutinacin y la hemaglutinacin pasiva;
la respuesta de tipo inmune frente a estos antgenos es predominantemente de IgM.
Cada uno de los gneros de Enterobacteriaceae se caracteriza con antgenos O especficos,
y pueden estar presentes ms de uno de estos antgenos O en un mismo microorganismo. En

ocasiones se manifiesta en Enterobacteriaceae entrecruzamiento antignico entre los

antgenos O de una especie con otra. Los antgenos K presentes en aquellas cepas que
poseen cpsulas, pueden estar constituidos por polisacridos o protenas, son termolbiles
y se han reconocido hasta el momento ms de 100 antgenos diferentes; estos antgenos K
interfieren con el reconocimiento de los antgenos O, actan como adhesinas y desempean
un importante papel en la virulencia de las cepas; los antgenos K1 de las cepas de E. coli
estn presentes en las que producen meningitis del neonato. Estos antgenos capsulares
pueden ser reconocidos por medio de reacciones de aglutinacin o mediante la reaccin de
hinchazn de la cpsula utilizando anticuerpos especficos para estos antgenos.
Algunas enterobacterias como Salmonella poseen antgenos M presentes que son
antgenos de cubierta. El antgeno Vi es un antgeno somtico externo que se halla en la
Salmonella typhi y en algunas cepas de E. coli y Citrobacter. Los antgenos H se relacionan
con los flagelos de las cepas mviles; se han reconocido ms de 50 de estos antgenos, los
cuales estn constituidos por flagelina, que es la protena flagelar; se destruyen con el calor
y se aglutinan con anticuerpos anti-h, principalmente con IgG. Dentro de un mismo serotipo
se puede presentar ms de un antgeno flagelar, mostrndose en dos fases: fase 1 (representados
por letras minsculas) y fase 2 (representados por nmeros arbigos). Los
microorganismos pueden variar de una fase a otra, lo cual se denomina variacin de fase.
Internacionalmente se han propuesto diversos esquemas para la clasificacin serolgica de
esta familia; algunos de ellos, como los de Salmonella, Shigella, E. coli y Klebsiella estn
estandarizados otros mantienen las clasificaciones de los laboratorios de referencia que
estudian las cepas de los distintos grupos.
BACTERIOCINAS
Las colicinas son sustancias bactericidas producidas por E. coli, que tienen actividad
contra algunas cepas de su misma especie o de especies relacionadas. Se relacionan, adems,
con la presencia de un plsmido en las cepas que las producen y las cepas que lo portan
son resistentes a su propia bacteriocina, por lo cual puede ser utilizado para la determinacin
de tipo en algunas especies de enterobacterias.
ENDOTOXINAS
Las bacterias gramnegativas se caracterizan por poseer una membrana interna y otra
externa conformadas por capas de lpidos y transmembranas proteicas; la porcin ms
visible de la membrana externa contiene un lpido nico, un lipopolisacrido (LPS), que es
una barrera contra los agentes liposolubles, enzimas lticas y metales pesados. Este LPS
contiene un carbohidrato altamente variable, el antgeno O. Este LPS le confiere a la clula
bacteriana proteccin contra la lisis mediada por complemento y contra la fagocitosis.
Se considera que el LPS es un factor de virulencia de las bacterias gramnegativas y es
altamente patognico cuando es liberado en el torrente circulatorio, por lo que puede producir
shock endotxico y llevar hasta la muerte a un paciente en el cual se d esta condicin. Su
unin a los macrfagos da lugar a un sistema de seales caracterizado por la liberacin de
citoquinas y otros mediadores presentes en el shock endotxico.
RESISTENCIA ANTIMICROBIANA
Los microbilogos, mdicos de asistencia, epidemilogos y otro personal de la Salud
deben permanecer muy alerta en el comportamiento de esta familia frente a los antibiticos,
pues constantemente emergen cepas resistentes que causan graves problemas, sobre todo
con afecciones debidas a infecciones adquiridas dentro de las unidades de Salud. La resistencia
en estas cepas se debe, en lo fundamental, a la adquisicin de un plsmido (R) que le
confiere esta caracterstica o ser una resistencia intrnseca. (Ver captulo sobre "Resistencia
antimicrobiana".) La resistencia a los agentes antimicrobianos vara notablemente en esta
familia, la misma especie puede presentar patrones de resistencia muy diferentes de una institucin a otra e, incluso, dentro de una
misma institucin de una sala a otra. As mismo,
los patrones de resistencia de las cepas aisladas de infecciones nosocomiales difieren de
aquellos de las cepas identificadas a partir de infecciones comunitarias.
INFECCIONES EN EL HOMBRE
Las infecciones por los miembros de esta familia se pueden clasificar en: infecciones
intestinales e infecciones extraintestinales, tomando en cuenta su localizacin.
Desde el punto de vista de su origen pueden ser: infecciones comunitarias o infecciones
nosocomiales.
INFECCIONES INTESTINALES
Las infecciones intestinales estn limitadas a las producidas por las seis clases de
E. coli que en la actualidad se consideran como patgenas entricas, estas son: E. coli
enteropatgena (ECEP), E. coli enterotoxignica (ECET), E. coli enteroinvasiva (ECEI),
E. coli enterohemorrgica (ECEH), E. coli enteroagregativa (ECEA), E. coli difusamente
adherente (ECDA) y a las producidas por Salmonella, Shigella y Yersinia enterocolitica.
Otros miembros de Enterobacteriaceae como: Citrobacter, Proteus, Morganella,
Enterobacter, Hafnia y Serratia, principalmente cuando se encuentran cultivos puros en las
heces fecales, han sido relacionados, en ocasiones, con la produccin de diarreas. Muchas
veces esta situacin est relacionada con un cambio de la flora normal del intestino humano.
E. coli como patgena entrica
La E. coli es el principal representante de la flora intestinal normal del hombre y los
animales, sin embargo, existen cepas productoras de diarreas que pueden dar lugar a cuadros
leves, evolucionar hasta la diarrea persistente u originar complicaciones que pueden
llegar hasta la muerte de un paciente.
Las cepas de cualquiera de las seis clases de E. coli productoras de diarreas, anteriormente
sealadas, se presentan en los cultivos primarios, en los medios diferenciales, como
cepas fermentadoras de la lactosa, por lo que no pueden distinguirse las clases en estos
primos cultivos y hay que utilizar otros mtodos que se explicarn en cada tipo de E. coli
para poder hacer su diferenciacin. Cada una de estas categoras tiene sus propios patrones
clnicos, sus caractersticas epidemiolgicas y patognicas, y su diferenciacin serolgica,
as como diversas formas de interactuar con la mucosa intestinal.
E. coli enteropatgena (ECEP)
Esta fue la primera clase de E. coli descrita como causa de diarreas, pero debido a que se
puede presentar en la flora intestinal de individuos sanos, su papel como patgeno entrico
ha sido relegado en muchas ocasiones.
No obstante, su participacin en brotes y epidemias de diarreas siempre se ha tomado
en consideracin desde que en 1940, en Londres y Abarden, se identificaron serogrupos de
ECEP como causa de estos procesos.
Los serogrupos que conforman esta clase de E. coli son los siguientes: O 26; O 55; O 111;
O 117; O 86; O 119; O 124; O 125; O 126 y O 128. En la actualidad, los serogrupos O 119 y
O 26 han sido reagrupados dentro de la categora de ECEH por su accin patognica.
La ECEP se diferencia de otras categoras por sus habilidades para determinar sus
caractersticas histopatolgicas conocidas como adhesin y borramiento (A/E), y su inhabilidad
para producir citotoxinas.
Los estudios realizados in vitro en relacin con la unin de ECEP a la clula del hospedero,
han permitido definir tres etapas en el fenmeno de adherencia y borramiento:
1. Adherencia inicial.
2. Transduccin de la seal por medio de protenas secretadas.
3. ntima unin: intimina.

Adherencia inicial. Est en relacin con la caracterstica de ECEP de formar densas

microcolonias en la superficie de la clula, dando lugar al patrn denominado adherencia
localizada. Esta caracterstica est asociada a un plsmido de gran tamao que es comn a
estas cepas y que est unido a la produccin de fimbrias tipo IV conocido como BFP (pilis
en forma de haz o mechn); recientemente se han reportado los 14 genes que caracterizan el
cluster bfp del plsmido de ECEP, los cuales determinan la biognesis del BFP.
Otro elemento que se requiere para la adherencia localizada es una enzima periplasmtica
que es indispensable para la unin disulfuro de protenas, la cual est codificada
por el gen dsba.
En una segunda etapa, cuando se adhiere ECEP a las clulas epiteliales, se producen los
cambios conocidos como A/E. El borramiento se refiere a la prdida de las microvellosidades
del enterocito.

Datos clnicos
La enfermedad puede aparecer en forma de brotes o presentarse en casos espordicos.
La incubacin del microorganismo dura de 2 a 3 das hasta 2 semanas. La infeccin puede ser
inaparente, y constituir esta poblacin los portadores del microorganismo; puede presentarse
en la forma clnica de colitis hemorrgica o dar lugar a una diarrea sin sangre, la cual es una
de las formas en que ms frecuentemente se asla este microorganismo en Cuba, segn
reportan Valds-Dapena y col. La forma mejor descrita es la colitis hemorrgica, que se
caracteriza por comenzar con una diarrea acuosa y despus presentarse la sangre en las
heces fecales. La fiebre est casi siempre ausente y puede estar acompaada de vmitos o
no. La evolucin subsiste desde pocos das hasta 2 semanas.
Como complicaciones de esta infeccin se han sealado: el abdomen agudo por colitis
isqumica, la neumona, el edema pulmonar, infarto del miocardio, convulsiones y coma.
Otras complicaciones frecuentemente descritas son el sndrome urmico hemoltico y la
prpura trombocitopnica trombtica, las cuales se han relacionado con la presencia de la
VT1. En trabajo realizados en nuestro medio por Rodrguez y col. no se describen estas
complicaciones.
Aunque desde el punto de vista de la resistencia antimicrobiana, ECEH presenta una
amplia sensibilidad, el uso de antibiticos no es recomendado, pues en los casos donde se
han empleado es en aquellos que con ms frecuencia han presentado complicaciones, relacionndose
este efecto con la desaparicin de la flora intestinal y la permanencia de las

cepas ECEH resistentes, as como mayor liberacin de la citotoxina por lisis de la clula
bacteriana.
Diagnstico de laboratorio
Examen directo. En el examen directo de heces fecales la presencia de polimorfonucleares
es escasa o no estn presentes.
La identificacin del microorganismo se hace por mtodos directos o mtodos indirectos.
Cultivo (mtodo directo). Se debe hacer con heces fecales recin emitidas en los primeros
6 das de la enfermedad. El aislamiento se hace en medio Mac Conkey con sorbitol, donde
se observan las colonias blancas que indican la no utilizacin de este sustrato. Segn
Valds-Dapena, puede usarse el Mac Conkey con lactosa y hacer la seleccin de colonias
fermentadoras de este carbohidrato e inocularse en tubos con sorbitol al 1 %, para determinar
a las 24 horas el no empleo del sorbitol.
Todas las cepas deben ser comprobadas por medio de estudios fisiolgicos que son E.
coli y posteriormente ser enfrentadas al suero clasificador O 157 para determinar el serogrupo.
Otro mtodo utilizado es el de la determinacin de VT, que puede hacerse directamente
a partir de filtrados de heces fecales o de colonias aisladas. Las tcnicas a utilizar para este fin
son: el cultivo en clulas Vero para observar la citotoxicidad, la hibridacin del ADN
cromosomal, por la reaccin de la polimerasa en cadena (PCR) o por el mtodo de
inmunoensayo enzimtico (ELISA).
La determinacin del plsmido puede llevarse a cabo por medio de la hibridacin del
ADN o por PCR. La enterotoxina alfa es posible detectarla por anticuerpos monoclonales o
por ELISA y la beta, utilizando placas de agar-sangre de carnero lavada. La adherencia se
detecta por la inoculacin de ECEH en cepas HEp-2 y se observa la adherencia localizada
caracterstica.
La fluorescencia puede determinarse por el uso de medios especiales, as como la presencia
de actina por coloraciones fluorescentes y el uso de la microscopia electrnica.
Entre los mtodos indirectos se han descrito la determinacin de anticuerpos utilizando
sueros pareados contra los antgenos O y la determinacin de antitoxina contra VT.

Salmonella
Salmonella es una de las enterobacterias que es causa importante de afectacin en la
salud del hombre. El primer microorganismo descrito en este gnero fue la S. typhi por Eberth
en 1880 y Gaffky en 1884. Otros serotipos han sido descritos dentro de este gnero, hasta
llegar en la actualidad a ms de 2 300. La clasificacin en serotipos se llev a cabo por vez
primera por Schuetze en 1920, pero no fue hasta 1929 que White realiz el trabajo que sent
las pautas para la clasificacin serolgica; Kauffman, en 1941, confirm todo el trabajo
efectuado con anterioridad y sistematiz la presente clasificacin serolgica del gnero.
La nomenclatura y clasificacin de las bacterias que conforman este gnero se ha hallado
en constante cambio; actualmente se considera que el gnero Salmonella est integrado
por una sola especie, Salmonella enterica, dentro de la cual se encuentran todos los serotipos
descritos. Basado en la hibridacin del ADN y la electroforesis enzimtica, Salmonella
enterica se ha subdividido en siete grupos subespecficos, perteneciendo la mayora de las
cepas que afectan a los humanos a la subespecie I. Los subgrupos son:
Salmonella 1 (S. cholerae-suis)
Salmonella 2 (S. salamae)
Salmonella 3A (S. arizonae)
Salmonella 3B (S. diarizonae)
Salmonella 4 ( S. houtenae)

Salmonella 5 ( S. bongori)
Salmonella 6 (S. indica)
Los nombres puestos entre parntesis se refieren a la clasificacin de Le Minor.
Caractersticas de los cultivos
En los medios de aislamiento primarios, ya sean diferenciales o selectivos, que contienen
como sustrato de diferenciacin la lactosa, las colonias de Salmonella se observan
como no fermentadoras de este carbohidrato. La mayora de las cepas son mviles, producen
cido y gas a partir de la glucosa, aunque algunas especies como S. typhi son anaerognicas.
Producen cido y gas a partir del manitol, dulcitol y sorbitol. Raramente utilizan la lactosa en
su metabolismo, la sacarosa, salicina o adonitol. La produccin de indol es excepcional, no
hidrolizan la urea ni deaminan la fenilalanina. La mayora de los serotipos emplean el citrato
como fuente de carbono, aunque algunos, como S. typhi, no lo utilizan; igualmente ocurre
con la produccin de H2S. Casi nunca crecen en el medio KCN.

Yersinia pestis
Es el agente causal de uno de los azotes mayores de la humanidad: la peste. Las grandes
epidemias ocurridas desde el ao 542 d.C. han sido exterminio de grandes poblaciones, y han
dado lugar a grandes pandemias, siendo la ltima a principios del siglo xx, la cual afect a casi
todos los continentes, incluyendo a Amrica.
Las caractersticas generales y de cultivo de este microorganismo ya han sido descritas
en Yersinia.

Yersinia pseudotuberculosis
Comparte las mismas caractersticas morfolgicas, de cultivo y antignicas del gnero,
ya descritas con anterioridad. Se conocen seis serotipos y la clasificacin est basada en los
antgenos O y H.
RESUMEN
Enterobacteriaceae es una compleja familia, compuesta por bacilos gramnegativos,
oxidasa negativa, que fermentan la glucosa en su metabolismo. Diversos son los gneros
que conforman esta familia, pero los principales patgenos o potencialmente patgenos
para el hombre se circunscriben a 25 especies como las ms frecuentes.
Por medio de su estructura antignica, muchos de estos microorganismos pueden agruparse
en serogrupos y serotipos; otros, en los cuales sus antgenos se comparten entre
muchos miembros de la familia, esta clasificacin no puede aplicarse por el entrecruzamiento
antignico.
Las enfermedades producidas por estas bacterias pueden estar localizadas en el intestino,
como ocurre con las diferentes clases de E. coli, Salmonella, Shigella y Yersinia; cada
una de ellas tiene un patrn de patogenicidad propio, as como caractersticas clnicas y
epidemiolgicas que las definen.
Otros gneros y especies de enterobacterias forman parte de la flora intestinal normal y
de las superficies expuestas, pero pueden ser causa importante de enfermedad cuando
actan como oportunistas, y ocasionan enfermedades comunitarias o nosocomiales.
Algunos miembros del gnero Salmonella como la S. typhi y S. paratyphi A, B y C, se
comportan como patgenos primarios extraintestinales; lo mismo ocurre con Y. pestis y
Y. pseudotuberculosis.
Los mecanismos con que cuentan las enterobacterias para producir enfermedad son
variados, pudiendo estar presentes la invasin, la toxigenicidad por toxinas termoestables o
termolbiles, las citotoxinas, las endotoxinas, la adhesin y la diseminacin hemtica. En la
actualidad, cada uno de los mecanismos ha sido identificado en las distintas especies,
estando muchos de ellos relacionados con la informacin mediada por plsmidos o la
cromosmica.
El diagnstico se basa en su comportamiento fisiolgico, en su definicin de antgenos,
el estudio del ADN, la determinacin de plsmidos, el estudio de las toxinas y la determinacin
de los patrones de resistencia.
Los diagnsticos por niveles de anticuerpos estn enmarcados slo en algunas enfermedades
como la yersiniosis y la bsqueda de portadores de S. typhi o S. dysenteriae.
A pesar de los nuevos conceptos introducidos en esta familia y de las nuevas clasificaciones,
estas importantes bacterias estn constantemente sometidas a cambios en su clasificacin
y mecanismos de patogenicidad.
Haemophilus y Gardnerella vaginalis
HAEMOPHILUS
Este gnero de la familia Brucellaceae est conformado por varias especies, unas son
patgenas humanas y otras forman parte de la flora normal o nativa de la nasofaringe. El
trmino deriva del griego haemo: sangre y philos: afinidad, amor. Los microorganismos de
este grupo son bacterias pleomrficas, gramnegativas, pequeas, que requieren factores de
crecimiento proporcionados por la sangre. La especie tipo, Haemophilus influenzae, causa
diversas enfermedades humanas, que van desde las respiratorias crnicas hasta infecciones
invasivas. El Manual de Bacteriologa Sistemtica de Bergey incluye el gnero Haemophilus
en la seccin denominada "Bacilos gramnegativos anaerobios facultativos". El gnero
Haemophilus es uno de los tres de la familia Pasteurellaceae.
Un microorganismo dado es asignado habitualmente a este gnero sobre la base de sus
requerimientos de los factores X o V (o ambos), derivados de la sangre. El factor X
(termoestable) es protoporfirina IX en el caso de H. influenzae o hemina, en el caso de H.
aegyptius, ya que este ltimo carece de la enzima ferroquelatasa. Este factor es necesario
para la sntesis de enzimas respiratorias que contienen hierro, citocromos, citocromo-oxidasa,
catalasa y peroxidasa. El factor V (termolbil) es dinucletido de nicotinamida y adenina
(NAD), una coenzima necesaria para las reacciones de oxidacin-reduccin.
Se conocen 16 especies de Haemophilus y tres de ubicacin incierta (incertae sedis).
Las siguientes especies han sido relacionadas con enfermedad en humanos: H. influenzae,
H. aegyptius, H. ducreyi, H. parainfluenzae, H. parahaemolyticus, H. paraphrohaemolyticus,
H. aphrophilus, H. segnis, H. haemolyticus y H. paraphrophilus.
HAEMOPHILUS INFLUENZAE
Errneamente relacionado como causa de una pandemia de influenza en 1890 debido a
que fue aislado en un gran nmero de pacientes por Pfeiffer, este microorganismo est
ampliamente distribuido en todo el mundo. Con antelacin, Koch lo haba descrito como
causante de conjuntivitis en pacientes procedentes de Egipto, en 1883. Quiz su asociacin
con la influenza (de origen viral) se debi a la frecuencia de su aislamiento como invasor
secundario en casos clnicos y en necropsias de pulmn de fallecidos. El serotipo b de H.
influenzae habita en la nasofaringe del 1 al 5 % de la poblacin sana en un tiempo determinado

(en nios que asisten a guarderas puede alcanzar el 91 %), disminuyendo en adultos y nios
muy pequeos. Otras especies, excepto H. aegyptius y H. ducreyi, se aslan tambin del
tracto respiratorio superior en personas sanas.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. En las muestras de infecciones agudas, los microorganismos
son bacilos cocoides cortos (1,5 m) que forman a veces pequeas cadenas. En cultivo, la
morfologa depende tanto de la edad como del medio empleado. A las 6 u 8 horas de cultivo
en medio enriquecido, predominan las formas cocobacilares y luego aparecen bastoncillos
ms largos y pleomrficos. En cultivos jvenes, los microorganismos presentan una cpsula
definida. En ocasiones, utilizando la coloracin de Gram con decoloracin insuficiente, puede
llegarse a la identificacin errnea de estreptococos o neumococos que forman cadenas
cortas.
Cultivo. En agar infusin de cerebro-corazn con sangre, se desarrollan en 24 horas
colonias redondas, convexas, pequeas (de menos de 1 mm de dimetro), con intensa
iridiscencia y aspecto de roco. En agar-chocolate, tardan de 36 a 48 horas en alcanzar
dimetros de 1 mm. La sangre de ternero es la ms adecuada, siguiendo en orden la de
carnero, la humana, la de conejo, la de aves de corral y la de caballo.
Caractersticas del crecimiento. La identificacin de los miembros del grupo depende,
en parte, de que se demuestre la necesidad de ciertos factores de crecimiento, llamados X y
V. Los organismos que requieren el factor V no crecen bien en agar-sangre de carnero
convencional. Esto se atribuye a que ese factor no difunde bien en el medio a partir de los
eritrocitos y a que los glbulos de carnero poseen una NADasa que inactiva el factor V
disponible. Para utilizar este medio en aislamiento primario, es necesario proporcionar algn
otro microorganismo, como, por ejemplo, estafilococo, suministrador de grandes cantidades
de factor V, que es excretado al medio. Las colonias alrededor de la estra de estafilococo (o de
otros microorganismos como Neisseria y Pseudomonas, que tienen esa caracterstica) crecen
mucho ms grandes. A esto se le conoce como fenmeno del satelitismo (Cuadro 27.1).
Variaciones. En cultivos jvenes pueden aparecer mutantes espontneas no
encapsuladas, que dan lugar a colonias rugosas y opacas. Cuando las condiciones de
cultivo no son ptimas, la frecuencia de aparicin de estas variantes se incrementa.
Transformaciones. Se ha demostrado que puede tener lugar una transformacin mediada
por ADN en la sntesis del antgeno capsular, similar a la del neumococo, en los tejidos del
hospedero; es decir, que H. influenzae es capaz de transferir especificidad de tipo a otras
clulas. La resistencia al cloranfenicol y ampicilina se encuentra bajo control de genes en
plsmidos transmisibles.
ESTRUCTURA ANTIGNICA
Haemophilus influenzae encapsulado contiene polisacridos capsulares (PM > 150 000)
de seis tipos diferentes: a, b, c, d, e, f. El antgeno capsular del tipo b es un fosfato de
polirribosa-ribitol (PRP). En el tipo a, la ribosa es remplazada por glucosa. La estructura de los
cuatro tipos restantes est ntimamente relacionada. Las reacciones cruzadas entre
polisacridos de microorganismos puede contribuir a la formacin de anticuerpos naturales.
Existe reactividad cruzada entre H. influenzae tipo b y cepas de S. pneumoniae serotipos 6;
15a; 2a y 35; Streptococcus pyogenes, S. faecalis, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus
y S. epidermidis, quiz basada en el fosfato de ribitol de sus cidos teicoicos. La reaccin
cruzada con cepas de E. coli K 100 est probablemente basada en el ribitol y la ribosa de sus
antgenos.
Haemophilus influenzae encapsulado puede tipificarse por una prueba de hinchazn
de la cpsula con antisuero especfico (anloga al quellung de los neumococos). Mediante
inmunofluorescencia es posible hacer una tipificacin equivalente. La clasificacin en
serotipos capsulares debe realizarse a partir de cultivos jvenes, ya que la estructura del polisacrido tiende a deteriorarse en
cultivos viejos. La mayora de estos microorganismos
en la flora normal de las vas respiratorias son no encapsulados.
Los antgenos somticos de H. influenzae consisten en protenas de la membrana externa.
Los lipooligosacridos (endotoxinas) comparten muchas estructuras con las de Neisseria.
GARDNERELLA VAGINALIS
Gardnerella vaginalis est asociada con la vaginosis bacteriana, una infeccin
polimicrobiana que tambin involucra bacterias anaerobias. Esta infeccin, caracterizada por
una secrecin vaginal blanco-griscea y maloliente, as como por un bajo pH, presencia de
clulas"ndice" o"gua" y poca o ninguna inflamacin del epitelio, fue inicialmente denominada
vaginitis inespecfica. El trmino vaginosis es ms adecuado debido a la presencia de
mnima o ninguna inflamacin y a su causa polimicrobiana. Se ha sugerido su transmisin
sexual, pero esto, ms que una evidencia, es una observacin circunstancial.
Durante los ltimos 30 aos se han hecho varios cambios en la taxonoma de este
microorganismo. En 1955, Gardner y Dukes aislaron este bacilo gramnegativo pequeo a
partir de secreciones vaginales de mujeres con vaginitis inespecfica. A causa de su morfologa
y a su necesidad de ciertos factores de la sangre, fue denominado Haemophilus
vaginalis. Estudios posteriores, sin embargo, demostraron que los factores X y V no eran
absolutamente necesarios para el crecimiento, aunque lo estimulaban. Zinnermann y Turner
estudiaron aislamientos de H. vaginalis de Dukes y otros investigadores en 1963. El hecho
de que muchos aislamientos fueran pleomrficos y, en ocasiones, grampositivos o
gramvariables, como las corinebacterias, llev a los autores a proponer su reclasificacin
como Corynebacterium vaginale. En 1980, Greenwood y Pickett reportaron los resultados
de estudios de hibridizacin del ADN y de anlisis bioqumicos de la pared celular, los cuales
revelaron que el microorganismo era nico y, por tanto, deba ser incluido en un nuevo
gnero. Se propuso el nombre Gardnerella vaginalis, actualmente incluida en el volumen 2,
seccin 15: "Bacilos grampositivos irregulares no esporulados", del Manual de Bergey.
MORFOLOGA E IDENTIFICACIN
Microorganismos tpicos. La coloracin de Gram revela cocobacilos pequeos,
pleomrficos, gramnegativos o gramvariables, algunos de los cuales tienen extremos en
punta.
Cultivo. Los medios debern incubarse a 35 C en atmsfera de un 5 a 10 % de CO2 o por
el mtodo de la jarra con vela.
Caractersticas del crecimiento. En medio agar-sangre humana con Tween 80 (HBT)
las colonias son -hemolticas, opacas, grises, convexas, de 0,3 a 0,5 mm de dimetro. En
agar- vaginalis (V-agar), las colonias aparecen opacas, en cpula, de 0,5 mm de dimetro y
rodeadas por una zona difusa de -hemlisis.

Aunque G. vaginalis se asla virtualmente de todas las mujeres con vaginosis bacteriana,
puede tambin ser aislada en el 40 % de mujeres sanas, de modo que un frotis del exudado
vaginal unido a otros hallazgos clnicos resulta ms til en el diagnstico que el cultivo.
Cuando se desea la confirmacin por cultivo, es factible emplear medios con sangre
semiselectivos (con Tween 80) o medios no selectivos. Puede utilizarse tambin el medio
agar Columbia colistina-cido nalidxico (CNA), aunque no es posible observarse la hemlisis.

RESUMEN
Se conocen 16 especies de Haemophilus y tres de ubicacin incierta. La especie tipo,
Haemophilus influenzae, causa diversas enfermedades humanas, desde las respiratorias
crnicas hasta infecciones invasivas. El serotipo b de H. influenzae es el ms importante
patgeno del grupo; habita en la nasofaringe. Son bacilos cocoides cortos (1,5 m) que
forman a veces pequeas cadenas. H. influenzae encapsulado contiene polisacridos de
seis tipos diferentes: a, b, c, d, e, f. Desde la nasofaringe, puede extenderse localmente o
invadir el torrente sanguneo y causar meningitis, epiglotitis, artritis sptica, neumona y
osteomielitis. H. aegyptius (conocido tambin como bacilo de Koch-Weeks o como H.
influenzae biotipo III), es el responsable de una conjuntivitis aguda y contagiosa. Algunas
cepas pueden causar la fiebre purprica brasilea (FPB). Otra de las enfermedades producidas
es el "chancro blando", transmitida por contacto sexual, causada por H. ducreyi.
Las muestras tiles para el diagnstico de Haemophilus consisten en hisopados
nasofarngeos, sangre, pus y LCR, tanto para frotis como para cultivo. El examen de LCR es
de gran utilidad. Las muestras se siembran en agar-chocolate enriquecido. Se dispone de
mtodos de diagnstico rpido (aglutinacin de ltex, contrainmunoelectroforesis o
coaglutinacin). La biotipificacin mediante pruebas bioqumicas es til en Epidemiologa.
La mayora de las cepas son sensibles al cloranfenicol, las cefalosporinas de tercera generacin
han resultado tiles. Una vacuna conjugada de protenas con polisacrido capsular,
aplicada a partir de los 3 meses de edad, puede evitar la enfermedad invasiva en nios. En
Cuba se trabaja actualmente en la obtencin de una vacuna de este tipo.
Gardnerella vaginalis son cocobacilos pequeos, pleomrficos, gramnegativos o
gramvariables. Aunque se asla virtualmente de todas las mujeres con vaginosis bacteriana,
puede tambin ser aislada en el 40 % de mujeres sanas. Un frotis del exudado vaginal unido
a otros hallazgos clnicos resulta til en el diagnstico. Puede aislarse de la sangre de
mujeres con fiebre puerperal y de neonatos con sepsis. Un examen en fresco de secrecin
vaginal revela la presencia de las clulas"gua" caractersticas unidas a cocobacilos
gramnegativos o gramvariables. Estos hallazgos son de importancia diagnstica en pacientes
con vaginosis.
Uso del microscopio y observacin de varios tipos celulares
El microscopio es uno de los instrumentos ms utilizados por los microbilogos.
Este permite observar, medir y cuantificar organismos muy pequeos. Existen varios tipos de microscopios entre los cuales se
encuentran el microscopio ptico, el microscopio de barrido, el microscopio de contraste de fase, invertido, el microscopio
electrnico, los cuales poseen diferentes poderes de aumento y resolucin. Los rangos aproximados de magnificacin se
encuentran entre 4x y 40x, 20x 25x, 400x-1500x, 10000x-160000x (este ltimo del microscopio electrnico), donde X hace
referencia al tamao real del objeto a observar.

Objetivos
Adquirir experiencia en el uso y manejo del microscopio y sus funciones.
Observar objetos y diferenciar sus partes.

Partes del microscopio

Oculares, objetivos, revolver, porta objetos, diafragma, condensador, fuente de iluminacin, base brazo, platina, carro mecnico,
tornillos macro y micromtrico. Colocar el objeto de menor aumento, observe en el microscopio, mueva el micrmetro y ajuste el
diafragma, iluminando en forma homognea.

Preparacin de materiales
El material se coloca en el portaobjeto, los porta son muy delicados as mismo
debe ser su cuidado.
Observacin y preparacin del material vegetal
Observar clulas en las capas interiores de la cebolla.
Cortar una cebolla en 4 pedazos iguales.
Separar de un catafilo la epidermis y poner sobre el portaobjetos, Aada
una gota de agua.
Observe la preparacin con el objeto de menor aumento.
Observe un grupo de clulas con el lente de mayor aumento y dibuje las
siguientes estructuras: Pared celular, membrana celular, ncleo, citoplasma.
Observacin de clulas humanas
En esta prctica se observaran clulas epiteliales de la boca.
Para desprender estas clulas se hace un raspado suave de la mucosa con
un palillo estril.
Se coloca la muestra sobre una gota de azul de metileno.
Observe y dibuje las estructuras celulares. Membrana celular, ncleo,
citoplasma.
Observacion de micoorganismos (protozoarios)
de aguas estancadas
Se realiza a partir de aguas estancadas, donde hay abundancia de este tipo
de microorganismos unicelulares. Mediante una cuidadosa manipulacin del
condensador y el diafragma obtenga la mejor iluminacin para ese tipo de
microorganismo.
Deposita una gota de lugol en el borde de la preparacin y espere a que el colorante
se difunda y observe con el lente de menor aumento, posteriormente, pase
a la lente de mayor aumento (tenga en cuenta agregarle aceite de inmersin a
la preparacin).

Realice un dibujo de los diferentes tipos de microorganismos observados. Identifique

si estos son mviles o no.
Observacin de clulas de levadura
Disuelva algo de levadura seca en agua.
Colocar la suspensin sobre la lmina portaobjetos.
Observe con el lente de menor aumento y luego con el de mayor aumento.
Haga otra preparacin y agrega una gota de lugol, observe y haga esquemas.
Responda las siguientes preguntas.
Cules es la funcin del lugol en la preparacin?
Puede usted considerar a las levaduras como procariotas o eucariticas
segn lo observado?
Demostracin de la presencia
de los microorganismos
en mltiples lugares
De todos los organismos vivos no hay ninguno de mayor potencialidad invasora
que los microorganismos, estos se encuentran en cualquier clase de ambientes,
incluso en ambientes hostiles, donde se pensara que es imposible que exista
vida tal y como la conocemos.
Esto hace de los microorganismos uno de los seres vivos ms verstiles que se
conocen, los cuales por ser de diminuto tamao y no observables a simple vista
pueden pasar desapercibidos.
La microbiologa, luego de establecer las exigencias nutritivas de los microorganismos,
ha logrado desarrollar medios de cultivo para el crecimiento de bacterias
y hongos, logrando aislarlos y crecerlos fcilmente.
Objetivo
Comprobar la presencia de microorganismos en varios ambientes: mesa, aire,
manos, boca, suelo.
Materiales
5 cajas de Petri.
5 aplicadores.
Incubadora a 35 oC.
Mtodo
Rotule las cajas de Petri (fecha, tipo de muestra y nombre del grupo).
Destape la caja rotulada dejndola abierta durante una hora.
Pase un aplicador varias veces por la superficie de una mesa, destape la
caja rotulada mesa y frote suavemente en el agar.
Pase un aplicador varias veces por la superficie del suelo, destape la caja
rotulada suelo y frote suavemente en el agar.
Destape la caja rotulada manos y pase suavemente sus dedos sobre el
agar.
Destape la caja rotulada y tosa sobre ella, coloque nuevamente la tapa.
Destape la caja rotulada boca y despus de pasar el aplicador en el interior
de la boca (dientes), frote el aplicador sobre el agar y cierre nuevamente
la caja.
 Introducir invertidas sobre la incubadora a 37 C y observar los resultados
a las 24 horas.
Interpretacin de los resultados
Observe la coloracin, forma y tamao de las colonias y cuente el nmero de
ellas en cada caja.
Preparacin de extendidos
y coloraciones diferenciales
Preparacin de extendidos
Para observar las caractersticas de las bacterias es necesario hacer un frotis
sobre una lamina portaobjetos y lograr luego un proceso de coloracin para
poder ver las clulas al microscopio.
Algunos hongos filamentosos y levaduras son fcilmente observables al microscopio
sin realizar ningn tipo de tincin, sin embargo, las bacterias por ser
microorganismos mucho ms pequeos generalmente requieren de coloracin
para su observacin.
Objetivos
Aprender la tcnica del montaje de placas con bacterias y levaduras y
Familiarizarse con el manejo de cultivos microbianos.
Materiales
Lminas porta objetos.
Lminas cubre objetos.
Asa de inoculacin.
Mechero.
Goteros.
Agua destilada.
Cultivo de bacterias (Escherichia coli).
Cultivo de Levaduras (Saccharomyces cerevisiae).
Mtodo
En una lmina portaobjeto limpia coloque en el asa una gota de agua.
Esterilice el asa ponindola verticalmente a la llama del mechero hasta
que se coloque de color rojo en toda su longitud.
Enfre el asa introducindola en el borde del medio de cultivo.
Con el asa tome suavemente una pequea porcin de colonia bacteriana
o de las colonias de levaduras, sin tomar medio de agar.
Coloque la muestra sobre la gota de agua presente en el portaobjeto, haga
una extensin delgada (extendido) con el fin de esparcir las bacterias y/o
levaduras. Si usted observa que la suspensin no se extiende en la superficie
del portaobjeto, sino que se recoge en gotas, significa que ste se encuentra
engrasado o est sucio. En este caso, se deber repetir el proceso con un
portaobjeto completamente limpio.
Realice extendidos con todos los cultivos de bacterias y levaduras disponibles.
Deje que la preparacin se seque al aire.
Fije la preparacin flamendola (pasndola al menos dos veces por el
mechero) de este modo los microorganismos pierden agua y quedan firmemente
adheridos al portaobjeto.
Nota: Cuando se realicen extendidos a partir de cultivos en medio lquido, no
es necesario colocar la gota de agua.
Coloraciones diferenciales
La morfologa de las bacterias se puede confirmar de dos maneras, observndolas
teidas, donde se aprecia su movilidad u observndolas teidas con colorantes.
Los colorantes sirven para observar la estructura interna de las clulas, que de
otra manera seran invisibles. Es importante que todos los colorantes se preparen
en el laboratorio siguiendo las instrucciones especficas del fabricante. Es
preciso seguir paso a paso los detalles cuando se preparan mezclas o compuestos,
colorantes mltiples, el perodo y las condiciones de almacenamiento pueden
ser factores crticos para determinar la composicin y la calidad tintrea de la
solucin final.
Coloracin de Gram
Esta coloracin fue elaborada por el Dans Hans Gram en 1884, y permite
distinguir entre diferentes bacterias con una morfologa similar. El examen
microscpico de un extendido coloreado por el mtodo de Gram con una flora
bacteriana mixta, aparecen las caractersticas diferenciales del mtodo. Muchas
bacterias conservan la coloracin cristal-violeta-yodo y se teirn de prpura
(Gram positivas), otras se colorean de rojo debido al contra-colorante el cual
puede ser safranina o fucsina (Gram negativa). De esta manera, con el procedimiento
no solo se hace visible la forma, el tamao y otros detalles estructurales,
sino que pueden agruparse los microorganismos presentes en tipos Gram
positivos y Gram negativos, de acuerdo a sus reacciones frente a los colorantes.
La diferencia en la reaccin de coloracin entre las Gram positivas y las Gram
negativas se atribuye a la diferencia de la composicin qumica de las paredes
celulares. Las bacterias Gram negativas poseen mayor contenido lipdico que las
Gram positivas pero tambin poseen menor cantidad del polisacrido peptidoglucano,
el cual en las Gram positivas pueden observarse varias capas. Aunque
en ambos tipos bacterianos se forma un complejo cristal-violeta-yodo a partir
de la coloracin de Gram, el alcohol extrae ms fcil el lpido de las clulas
Gram-negativas, aumentando la permeabilidad celular, dando como resultado
la prdida del color morado (producto del cristal violeta) y colorendose la
pared celular de rojo debido al contracolorante utilizado safranina o fucsina.
En el caso de las Gram positivas el lpido presente en la pared es muy poco y
el colorante cristal violeta colorea a varias capas del peptidoglucano, siendo
retenido este colorante fuertemente a partir de la adicin del mordiente (Solucin
de lugol). Posteriormente, cuando se agrega el contra-colorante (safranina
o fucsina) este no realiza un cambio de color visible puesto que predomina el
violeta, color tomado al final de la coloracin por las bacterias Gram positivas.
Materiales
Cristal violeta.
Lugol de Gram.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Cultivos bacterianos.
Mtodo
Coloracin de Gram
Preparar un extendido fino de una colonia bacteriana y dejarlo secar al
aire.
Fijar el material al portaobjeto de modo que no sea arrastrado durante el
proceso de tincin, pasando el portaobjeto 3 o 4 veces sobre la llama del
mechero.
Colocar el preparado sobre un soporte de tincin y cubrir la superficie con
solucin cristal-violeta durante 1 minuto.
Lavar bien con agua destilada.
Cubrir el preparado con solucin de yodo (Lugol de Gram) durante 1
minuto.
Lavar nuevamente con agua destilada.
Sostener el portaobjeto y baar la superficie con el decolorante (alcohol
cetona), hasta no arrastrar s ms colorante violeta (esto requiere habitualmente
unos 10 segundos ms o menos).
Lavar nuevamente con agua corriente y colocar el porta objeto sobre el
soporte, cubrir con safranina o el contra-colorante a utilizar durante 1
minuto.
Lavar nuevamente con agua destilada.
Examinar el preparado al microscopio, las bacterias Gram positivas se
observan de color violeta y las Gram negativas de color rojo o rosadas.
Coloracion de cpsulas
La cpsula de las bacterias no posee la misma afinidad por los colorantes que
otros componentes de las clulas, y por eso exige el empleo de mtodos de
coloraciones especiales.
Algunos estn destinados a colorear la clula y el fondo pero no la cpsula, de
manera que la envoltura se aprecia por contraste, como el mtodo de Anthony.
Otros procedimientos producen un efecto colorante diferencial, cuando la
cpsula admite un contra-colorante. Otro procedimiento utiliza el principio de
la coloracin negativa como el mtodo de tinta china.
Materiales
Cristal violeta al 1% (solucin acuosa).
Sulfato de cobre al 20% (solucin acuosa).
Cultivos bacterianos en agar leche desnatada.
Bandeja de coloracin.
Metodo de Anthony (coloracin de cpsula)
1. Preparar un extendido fino y uniforme de un cultivo de klebsiella pneumoniae,
efectuado en leche desnatada, extendindolo con un portaobjetos
en ngulo recto.
Si no se trata de un cultivo en leche, se podr mezclar una parte del material
recogido con un asa bacteriolgica, con una cantidad igual de leche desnatada,
extendindola para obtener una base uniforme.
2. Secar al aire. No fijar por calor.
3. Colorear con una solucin acuosa de Cristal violeta al 1%, durante 2
minutos.
4. Lavar con solucin de sulfato de cobre al 20%.
5. Dejar secar al aire en posicin vertical y observar al microscopio.
La cpsula aparece sin colorear contra un fondo de color prpura, las clulas
se tien intensamente.
Coloracin de esporas
Las esporas son relativamente resistentes a los agentes fsicos y qumicos y no se
colorean con facilidad. En mtodos de coloracin de rutina como la coloracin
de Gram, aparecen como cuerpos retrctiles no coloreados. Por lo general, en
mtodos especiales de coloracin se requiere el calor para permitir la penetracin
del colorante de esporas
Materiales
Solucin acuosa de verde de malaquita al 5%.
Solucin acuosa de safranina al 0.5%.
Cultivo bacteriano.
Bandeja de coloracin.
Mtodo
Realizar un extendido de una colonia de Bacillus cereus del agar con el asa
bacteriolgica.
Cubrir el portaobjeto con una tira de papel filtro.
Baar todo el portaobjeto con solucin acuosa de verde de malaquita al 5%.
Calentar al vapor durante 3 a 6 minutos sin dejar secar.
Enjuagar con agua corriente.
Contra colorear con solucin de Safranina al 0,5% durante 30 segundos.
Al observar las esporas estas se ven en forma de esfrulas verdes en los bastoncillos
coloreados de rojo, o junto con desechos de color rojo.
Preparacin de medios de cultivos
Las bacterias son organismos supremamente adaptables a diferentes sustratos.
Con base a sus requerimientos nutricionales se consideran como exigentes y
no exigentes. Su estudio se ha hecho posible gracias a la implementacin de
los medios de cultivos que le suministran al organismo los elementos necesarios
para su crecimiento. Los medios de cultivo son preparaciones utilizadas para
diferentes propsitos tales como: aislamiento e identificacin de microorganismos,
prueba de esterilidad, anlisis de agua, ambientales, alimentos y productos
bacteriolgicos, prueba de sensibilidad a los antibiticos.
Las bacterias auttrofas pueden utilizar el nitrgeno libre, amoniaco o nitrato,
de tal manera que los medios pueden ser muy simples. Los hetertrofos con una
capacidad sinttica ms limitada requieren compuestos ms complejos debido a
que las clulas no pueden obtener sus requerimientos de nitrgeno directamente
de las protenas, stas deben estar hidrolizadas en compuestos nitrogenados ms
disponibles conocidos como peptonas, las cuales son derivados de las protenas
por medio de cidos, lcalis o enzimas y son solubles en agua.
Composicin de los medios de cultivos
Aunque los diferentes medios contienen gran cantidad de sustancias dependiendo
del microorganismo a aislar, bsicamente estn compuestos de:
Peptonas
Varan en pureza y calidad dependiendo del tipo de hidrlisis realizada. Los
lcalis tienden a destruir el contenido vitamnico de la protena y tambin hacen perder parte de los aminocidos, la hidrlisis
conserva las vitaminas
y aminocidos. La casena pura no contiene carbohidrato, pero si contenido
vitamnico y de triptfano.
Infusin y extractos
Son de carne y otros tejidos, se trata de material de origen proteico, soluble
en agua, sin accin enzimtica. Las protenas mismas se coagulan por accin
del calor. Afortunadamente, la accin enzimtica microbiana y el tiempo de
incubacin aumentan la facilidad de utilizacin.
Agentes solidificantes: Agar, gelatina, agarosa, agar noble.
Colorantes: Cristal violeta o verde brillante, inhiben Gram positivos.
Otros componentes:
 Indicadores de pH.
Indicadores de oxido-reduccin: azul de metileno.
Cuidados y recomendaciones
Los medios de cultivo pueden prepararse a partir de sus componentes o
segn las recomendaciones del fabricante, cuando este se consigue comercialmente
hay varias reglas que se deben guardar para asegurar la buena
calidad del medio preparado.
El agua utilizada debe ser destilada o desmineralizada, proveniente de un
sistema adecuado de destilacin, su medida debe ser exacta y en ningn
momento con aproximaciones que generalmente se traducen en una alteracin
de la consistencia del medio, especialmente cuando se trata de
agares.
Si los ingredientes necesarios para preparar el medio de cultivo son deshidratados
estos deben permanecer en remojo durante 15 minutos, con la
finalidad de permitir una hidratacin total de las molculas, lo cual evita
el calentamiento excesivo que conduce generalmente a evaporacin y
descomposicin del medio.
Antes de someterse a la accin de la autoclave, el medio debe estar completamente
disuelto. No se debe disolver con la temperatura de la autoclave,
generalmente el exceso de calor produce un medio con grumos debido a
una deficiente disolucin.
Los medios de cultivo con yema de huevo, carbohidratos, urea o cualquier
nutriente, no pueden ser esterilizados en autoclave. Estos medios se preparan
esterilizando por separado lo que conocemos como base (se esteriliza
en autoclave) y los suplementos por filtracin o vapor fluente; la mezcla de
los componentes se realiza cuando la base se ha enfriado entre 45 y 50 C.
Los medios de Agar SS, Bismuto de sulfito y otros no pueden ser esterilizados
en autoclave.
Todos los medios de cultivo despus de prepararlos y vertidos en la caja de
Petri, deben ser secados, con la finalidad de eliminar el exceso de agua. Para
evitar la coalescencia y mezcla de las colonias cuando se hace la siembra.
Clasificacin de los medios de cultivos
Slidos: Contienen agar, gelatina o huevo coagulado.
 Lquidos: Son los tambin llamados caldos de cultivo.
Selectivos: Poseen sustancias que favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos,
ejemplo Agar McConkey.
Diferenciales: Son aquellos donde el metabolismo bacteriano produce
cambios en el medio, lo cual permite identificar la bacteria.
Mantenimiento: Son preparaciones utilizadas para conservar cepas de bacterias.
Ejemplo. BAB y agar blanco para enterobacterias.
Medios no selectivos: Permite el desarrollo de diversos tipos de bacterias.
Ejemplo: Caldo nutritivo y agar nutritivo.
Enriquecidos: Contienen sangre, leche, suero, extracto de animales o vegetales.
Lo cual incrementa el nmero de bacterias deseadas. Estos medios
de cultivo y su utilizacin se basan en el aprovechamiento ptimo de
nutrientes combinados con temperatura y pH adecuados. Ejemplo: Agar
Sangre.
Objetivo
Aplicar tcnicas para la preparacin de los medios de cultivo y reconocer la
importancia de sus componentes para el crecimiento bacteriano.
Materiales y mtodos
1. Observacin de medios de cultivos deshidratados: Para cada uno de los
medios de cultivos deshidratados o de otros componentes que estn dispuestos
en exhibicin, anote los siguientes datos: Nombre, composicin,
usos, preparacin, destape el envase y determine (sin tocar su contenido):
color, olor, textura (cristales, grnulos, polvo).
2. Preparacin de medios de cultivo: las formulas son las siguientes:
a. Caldo de infusin de carne:
Carne fresca 500g.
Agua destilada 1L.
Peptona 10g.
NaCl 5g.
Coloque la carne en agua destilada toda la noche, luego hierva por media
hora, manteniendo el volumen durante el proceso (adicionando ms agua
si es necesario). Enfri, filtre y adicione la peptona y la sal, caliente para
disolver, ajuste pH entre 7.4 y 7.6; esterilice por 15 minutos a 15 libras de
presin y 121 C.
b. Caldo nutritivo y Agar nutritivo:
Extracto de carne 3g.
Peptona 5g.
Disolver los ingredientes en un litro de agua, calentar hasta ebullicin,
luego esterilizar a 121 C durante 15 minutos; en el caso de agar se le
adiciona 15g de agar-agar y se procede de la misma forma.
Preparacin de medios de cultivos vegetales
a. PDA (Papa, dextrosa, agar):
Este medio favorece el crecimiento de hongos, utilizado en el aislamiento de
hongos patgenos y no patgenos de plantas y animales. Contiene:
Caldo de papa 1L.
Dextrosa 20g.
Agar 15g.
Coloque 200 g de papa en 800 ml de agua y lleve hasta ebullicin, filtre

mediante una gasa delgada y posteriormente agregue la dextrosa y el agar,

enrase a 1 litro.
b. Agar Zanahoria:
Este puede ser preparado de igual forma que la papa. El jugo de tomate se
usa a menudo en las mismas proporciones como el extracto de carne y se ha
encontrado que es un medio para el crecimiento y la esporulacin de hongos.
Tome 40-50 g de Zanahoria fresca picada en trozos, agregue 800 ml de agua
destilada, cocine la Zanahoria hasta que se ablande, decante el lquido y complete
hasta 1 litro, agregue 15 g de agar, caliente y agite constantemente, esterilice
en autoclave.
Preparacin de medios de cultivos comerciales
Prepare 100 ml de Agar Nutritivo Comercial, Siga las instrucciones de la
etiqueta del frasco.
Despus de sacarlos del autoclave deje enfriar hasta 50 C y vierta en caja
de Petri cerca de 20 ml, deje enfriar, rotule y guarde en la nevera.
Efectu los clculos para preparar 30 ml de Caldo Nutritivo, siga las
instrucciones de la etiqueta, vierta porciones de 5ml en tubos de ensayo,
rotule esterilice y deje enfriar, luego guarde en la nevera.
Estos medios se guardarn para ser empleados en la siguiente prctica.
Caracteristicas de los cultivos
bacterianos y aislamiento
de microorganismos
La observacin e interpretacin de los cultivos primarios despus de la incubacin
es el paso definitivo en la decisin de continuar o no con la identificacin
de los microorganismos aislados, la observacin se basa en la identificacin de
cada tipo de colonia, grado de pureza, coloracin de gran y los cambios en el
medio de cultivo que rodea la colonia.
La decisin anterior est basada en la observacin de cada colonia (caractersticas
como color, forma, tamao, nmero) y en el grado de pureza, coloracin
de Gram y la actividad metablica reflejada por los cambios que ocurren en
el medio, esto ltimo uno de los criterios bsico usado en la identificacin
microbiolgica.
Caractersticas del crecimiento: Se debe tener en cuenta el aspecto que
presenta en cuanto a: Tamao, elevacin, margen, color, superficie, consistencia
y forma (puntiforme, circular, filamentos, rizoide, etc.).
Cambios en medios diferenciales: Varios colorantes indicadores de pH evidencian
la actividad metablica y ayudan a identificar colonias aisladas.
Objetivo
Aplicar los mtodos ms usados en microbiologa para el crecimiento y aislamiento
de microorganismos.

Materiales
1 Tubo con agar nutritivo inclinado.
Caja de Petri con Agar nutritivo.
4 cajas de Petri vacas y estriles.
3 tubos de ensayo con Agar nutritivo fundido y enfriado a 45 C.
1 tubo de ensayo con Agar nutritivo en columna.
1 tubo con Caldo nutritivo.
Mtodos de siembra
Caracteristicas de los cultivos bacterianos
Esterilizar el asa utilizando la llama del mechero como se menciona anteriormente
en este libro de protocolos.
 Con el asa siembre separadamente una muestra del cultivo que le corresponda:
Proteus sp, E. coli, Salmonella sp, S. aureus, Pseudomonas sp, o
klebsiella sp, en un tubo inclinado. Para esto introduzca el asa e inocule la
superficie del medio, flamee la boca del tubo y tpelo. Flamee nuevamente
y esterilice asa para posteriormente colocarla en el porta asas.
Repita el procedimiento anterior con Agar nutritivo en columna.
Obtenga otra muestra del cultivo bacteriano y raye suavemente de manera
horizontal sobre la superficie del agar.
Inocule de manera similar el cultivo disponible en caldo nutritivo, agitando
bien el asa dentro del tubo.
Incube por 18-24 horas, haga observaciones y esquemas, describa como
crece el microorganismo estudiado.
Obtencin de cultivos axnicos
Con el asa tome una muestra de un tubo con un cultivo bacteriano mixto, siembre
por estras sobre un tercio de la caja de Petri, que contiene agar nutritivo,
de la siguiente manera:
Flamee el asa.

En un extremo de la caja con Agar realice rayados suaves en forma horizontal

sobre la superficie del agar utilizando el asa, para el primer aislamiento
gire la caja 90 grados y flamee el asa. Contine el aislamiento realizando
el mismo procedimiento en los tres extremos restantes de la caja. En el
ltimo extremo, cuando est realizando la estriacin tenga cuidado de no
tocar con el asa el primer rayado que realiz.
En profundidad
Esta tcnica es muy usada para realizar el recuento a partir de diluciones. Con
este mtodo de siembra es ms fcil observar reacciones metablicas bacterianas,
tales como: Liplisis, protelisis, y fermentaciones.
El medio de cultivo preparado en tubos grandes, debe estar fundido y a 45 C.
Se le agrega 1 de la dilucin a sembrar en el centro de la caja de Petri
estril.
Verter el medio de cultivo en la caja de Petri y homogeneizar por movimientos
giratorios horizontales en varias direcciones, teniendo cuidado de
no formar burbujas, dejar solidificar e incubar.
Por dilucin en agar
Este mtodo se basa en la siembra de la muestra directamente en tubo de agar
fundido y enfriado a 45 C. Se realizan varias diluciones de la muestra con el
fin de lograr un buen aislamiento.
En el tubo No 1 con agar fundido coloque la muestra tomada con el asa,
agite por rotacin suave para mezclar el inoculo.
Con el asa tome una muestra del tubo 1 y siembre en el tubo 2.
Deposite el contenido del tubo 1 en la caja de Petri vaca y estril.
Con el asa estril tome una muestra del tubo 2 y siembre el tubo 3, vierta
el contenido del tubo 2 en una caja de Petri vaca, haga lo mismo con el
tubo 3.
Lleve las cajas marcadas a la incubadora.
Deje incubar por 18-24 horas haga observaciones y saque sus propias
conclusiones sobre cada mtodo.
Caracterizacin bioqumica
de enterobacterias
Esta familia est compuesta por bacilos gran negativos de tamao mediano,
anaerobio facultativo, mviles o inmviles, pero no esporulados.
Estas bacterias crecen bien en medios artificiales, tienen necesidades nutritiva
simples, fermentan la glucosa con produccin de acido o acido y gas, reducen
los nitratos a nitritos y son oxidasa negativas, son organismos ubicuos de distribucin
mundial, encontrndose en el suelo, el agua, la vegetacin y formando
parte de la flora bacteriana normal de casi todos los animales.
Objetivo
Realizar las pruebas bioqumicas utilizadas por los microbilogos para la identificacin
de cepas conocidas de Enterobacterias para lograr una correcta
identificacin de gnero y especie.
Materiales
Cepa de Enterobacterias.
Medios de cultivo para pruebas bioqumicas.
Mtodo
De los caldos, realice una siembra por agotamiento en agar Mc conkey,
medio diferencial que nos separa las colonias fermentadoras de lactosa de
las que no lo hacen, incubar a 37C por 18-24 horas.

Observe la morfologa, tamao aspecto y color de las colonias, aquellas

que presentan color rosado habrn fermentado lactosa.
De las colonias aisladas, procedentes del agar sembrar en las siguientes
pruebas bioqumicas.
TSI: contiene glucosa 0.5-1.0% fenol) sacarosa y lactosa, adems rojo de fenol,
que indica fermentacin y sulfato ferroso, para demostrar la produccin de H
2
S,
la siembra se hace punzando con el asa recta en profundidad y en estra en la
superficie.
**Alcalino-Rojo *Acido-Amarillo
Lisina Decarboxilasa: La decarboxilacin es el proceso por el cual las bacterias
que poseen la enzima decarboxilasa son capaces de atacar a los aminocidos
en su grupo carboxilo (-COOH), dando una amina o una diamina y anhidro
carbnico, se siembra igual que TSI: K/A, A/A o K/K.
Interpretacin: La prueba es positiva cuando hay cambio de color del prpura
a amarillo (producido por la cadaverina); la prueba es negativa cuando no hay
cambio de color. Se reporta con las mismas convenciones que el TSI: K/A,
A/A; o K/K.
Citrato Simmons: Este medio contiene citrato como nica fuente de carbono
y sales de amonio como fuente de nitrgeno. No contiene aminocidos, las
bacterias que pueden utilizar el citrato tambin extraen nitrgeno con la produccin
de amonio que alcaliniza el medio de cultivo, el indicador de pH es
azul de bromotimol, se siembra nicamente en superficie.
Interpretacin: La prueba es positiva cuando se observa un crecimiento con un
color azul intenso, y negativa cuando no se observa cambio de color.
Urea de Christensen: Si la bacteria posee la enzima ureasa, hidroliza urea del
medio liberando amonio y CO2
, el indicador es rojo de fenol se siembra en
superficie por estras
Interpretacin: La prueba es positiva cuando se observa un cambio de color
amarillo a rosado, negativa cuando no hay cambio de color.
Prueba de Indol y Motilidad: La movilidad se observa en el medio SIM por desplazamiento
alrededor de la lnea de inoculacin, realizada en profundidad y
en el centro del agar.
Las bacterias con la enzima triptofanasa, son capaces de hidrolizar y desaminar
el triptfano con la produccin de indol, acido piruvico y amonio. Se siembra
con el asa recta, punzando el agar en profundidad.
Despus de incubacin por 18-24 horas adicione 0.1 del reactivo de Kovacs a
los tubos con medio SIM, la presencia de Indol de destaca por la coloracin roja.
La movilidad se observa por desplazamiento del crecimiento alrededor de la
lnea de inoculacin. Algunos microorganismos producen ennegrecimiento del
medio por formulacin de sulfuro de hidrogeno.
Interpretacin: Despus de la inoculacin por 24 horas, se le debe agregar 8
gotas del reactivo de Kovacs, la presencia de Indol se observa por la aparicin
de una coloracin rojiza en la superficie del tubo.
La movilidad se observa por el desplazamiento del crecimiento alrededor de la
lnea de inoculacin. Algunos microorganismos pueden producir ennegrecimiento
del medio por formacin de sulfuro de hidrgeno.
Reaccin del rojo de metilo: Sembrar con el asa un tubo con caldo MRVP, incubar
por 24-48 horas, pasado este tiempo adicionar 5 gotas de la solucin rojo de
metilo.
Algunas bacterias utilizan la glucosa, de forma que el valor de pH desciende
a menos de 4.4. En cambio otras bacterias producen menos cido, reduciendo
en menor cantidad el pH del medio. Esta distincin puede hacerse a travs del
rojo de metilo, que presenta color amarillo por encima del pH 5.1 y color rojo
cuando el pH desciende de 4.4.
Ensayo de Voges Proscaver: Sembrar con el asa un tubo con caldo MRVP, incubar
pro 24-48 horas, pasado este tiempo adicionar 4-6 gotas de la solucin
de sulfato de cobre. En caso positivo se presenta un viraje a rojo despus de
algunos minutos.

A partir de la glucosa, numerosos microorganismos forman acetona, 2.3 butanoidol

o diacetilo. La produccin de estos productos metablicos se lleva a
cabo con reactivos de O MEARA, mejorado por levine y col) con sulfato de
cobre o con el reactivo de Barrit.
Anlisis microbiolgico
de alimentos
La investigacin de alimentos requiere especial atencin para identificar microorganismos
patgenos para el consumidor. Este examen permite obtener pautas
para establecimiento y sobre todo para las normas de higiene.
Microorganismos Indicadores: Este trmino se aplica a cualquier grupo taxonmico,
fisiolgico o ecolgico de microorganismos cuya presencia proporcione
evidencias indirectas de que los alimentos estuvieron expuestos a condiciones
que pudieran determinar la llegada de microorganismos peligrosos o permitir
la proliferacin de especies patgenas o toxicognicas. Los organismos patgenos
son de gran utilidad tanto para determinar la calidad bacteriolgica de los
alimentos como la garanta que ofrecen al consumidor.
Escherichia coli y coliformes: Estos microorganismos habitan en el tracto digestivo
de hombre y animales, su presencia indica contaminacin directa o indirecta
de origen fecal, la presencia de E. coli advierte el riesgo de que pudieran estar
presente bacterias patgenas entricas. Los coliformes son buenos indicadores
de limpieza y desinfeccin inadecuada, o de manipulacin o tratamientos incorrectos
de los alimentos.
Streptococcus salivarus: Es un microorganismo indicador de contaminacin oral,
puesto que forma parte de la flora bucal.
Staphylococcus aureus: Su presencia en el alimento se interpreta como contaminacin
proveniente de la piel, la boca o fosas nasales.

Clostridium botulinum y Clostridium perfingens: La presencia de esporas en alimentos

enlatados no cidos, es seal de un tratamiento trmico insuficiente.
Objetivo
Determinar la calidad del producto en trminos de contaminacin microbiana.
Establecer el nmero y tipo de microorganismos que se encuentran en
distintos alimentos.
Materiales
Cajas de Petri esterilizadas.
Frasco con 90 ml de agua peptonada.
Tubos de ensayo con 9ml de agua peptonada.
 Tubos de ensayo con 10ml de caldo brilla.
Agar base ogye o saboreaud.
Pipetas esterilizadas.
Agar cuenta grmenes
Cajas con agar EMB.
Gradilla para tubos.
Agar cristal violeta rojo neutro..
Mtodo
Dilucin de la muestra de alimentos:
Mantener en refrigeracin hasta 24 horas despus de tomada la muestra.
Antes de abrir los envases se debe desinfectar con alcohol al 70% y agitarse
para homogenizar. Si es un material slido se debe utilizar un mortero
estril para fragmentar el alimento.
Se preparan diluciones del alimento de 10-1 hasta 10-5.
La dilucin 10-1 se prepara midiendo 10 gramos 8slido) o 10 ml (lquido)
de la muestra en un frasco dilucin se prepara midiendo 10 o gramos de la
muestra en un frasco que contenga 90 ml de diluyente (agua peptonada).
Transferir 1 ml. de la dilucin 10-1 a un tubo que contenga 9 ml del diluyente
(agua peptonada9 para obtener la dilucin 10-2 y as sucesivamente
hasta formar la dilucin 10-5
Cada dilucin sucesiva disminuir 10 veces la concentracin anterior. Los
tubos deben estar bien rotulados.
Inoculacin el alimento
Nmero ms probable de coliformes totales y fecales
Prueba presuntiva para coliformes totales
Se debe pipetear 1 de cada una de las diluciones (10-1 a 10-3) en tubos con
caldo brilla, utilizando 3 tubos por dilucin.
Incubar los tubos a 37C por 24-48 horas.
Pasadas las 24-48 horas anotar los tubos que muestren produccin de gas,
lo cual puede observarse por el desplazamiento del tubo de Durham.
Prueba confirmativa para coliformes totales
Confirmar que los tubos con produccin de gas en la prueba presuntiva son
positivos, inoculando 3 a 5 gotas en otros tubos con caldo brilla
 Incubar los tubos a 44.5C por 24 horas bao mara.
Pasado 24 horas anotar los tubos que muestren produccin de gas
Anotar los tubos que tiene produccin gas y revelar el caldo triptona con
el reactivo de Kovacs; agitar suavemente y observar la presencia de un
anillo rojo en la superficie.
Interpretacin de los resultados
Leer la tabla NMP (Nmero ms probable) para saber el resultado de acuerdo
con el nmero de tubos positivos, tanto para los coliformes totales, segn el
resultado de la prueba confirmativa y para los coliformes fecales, segn el caldo
brilla y el caldo triptona incubado a 44.5 C.
Determinacin de E. coli
A partir de los tubos positivos de la prueba confirmativa, sembrar por estra,
tomando una muestra con una asa de cada uno de los tubos en la superficie de
una placa de agar EMB (Eosina azul de metileno).
Incubar las cajas invertidas a 37 C por 24 - 48 horas.
Pasado este tiempo se hace la lectura de las colonias tpicas de E coli, aquella
que presentan un brillo verde metlico.
Recuento de mesfilos
La presencia de este tipo de microorganismos refleja las deficiencias en el proceso
de elaboracin del alimento.
Se debe transferir por duplicado alcuotas de 1 ml de cada una de las diluciones
10-1 a 10-5 en cajas de Petri vacas estriles y previamente marcadas.
Inmediatamente adicionar a las cajas el agar cuenta grmenes fundidos.
Inmediatamente mezclar el inoculo con el medio fundido, moviendo
suavemente la caja hacia arriba, hacia abajo y en forma circular.
Dejar solidificar el Agar.
Invertir e incubar las cajas de petri a 37 C durante 24 horas- Pasado
este tiempo se deben contar las colonias que hayan crecido en cajas que
contengan entre 30 y 300 colonias observables.
Los resultados deben expresarse con 2 dgitos y el resto en potencia de 10.
Cuando el recuento se utiliza para determinar la aceptacin de un alimento se
compara con los valores lmites establecidos segn la normatividad del Ministerio
de Salud, del INVIMA o las Normas ICONTEC.
Recuento de Enterobacterias totales
Generalmente, la contaminacin del alimento se adquiere por un proceso de
manipulacin inadecuado y posterior a la preparacin misma del producto.
Transferir por duplicado alcuotas de una de cada uno de las diluciones
(10-1 a 10-3) en cajas de Petri estriles y previamente marcadas.
Adicionar el agar cristal violeta rojo neutro bilis glucosa.
Mezclar las diluciones con el medio. Agregar 5 ml del agar mencionado
anteriormente.
Incubar durante 24 horas.
Seleccionar las placas que contengan entre 30 y 300 colonias violeta,
rodeadas de un precipitado rojo violeta.
Confirmar estas colonias con la prueba de oxidasa..

Prueba de Oxidasa
Tomar una colonia del crecimiento del agar cristal violeta rojo neutro bilis
glucosa, sembrar en la superficie del agar nutritivo inclinado, incubar a 37 C
por 24 horas.
Despus de la incubacin realizar la prueba de oxidasa, tomando una colonia
del crecimiento del agar nutritivo, colocndola sobre un papel blanco, adicionarle
una gota del reactivo de oxidasa, si la colonia se torna de color rosado
la prueba es positiva, si permanece del mismo color del medio la prueba se
considera negativa.
Recuento de hongos y levaduras
Generalmente, la presencia de hongos y levaduras en los alimentos se da por
contaminacin del aire en el momento de empaque del alimento, por manipulacin
de personas con lesiones en la piel ocasionados por hongos o por mal
almacenamiento del producto.
Transferir por duplicado alcuotas de cada una de las diluciones (10-1 a
10-3) en cajas de Petri estriles previamente marcados.
Inmediatamente se debe adicionar agar Ogye o Saboreaud fundido y
mantenido a 45 C, mezclar suavemente.
Dejar solidificar.
Invertir e Incubar las cajas a temperatura ambiente durante 5 a 8 das.
 De aqu en adelante se procede igual a la prueba de recuento de mesfilos.
Caracterizacin bioqumica
de Bacillus Cereus
Introduccin
La bsqueda de bacterias capaces de producir toxiinfecciones alimentarias es
de especial importancia en la microbiologa de los alimentos. El incremento de
estas infecciones ha llevado a que la presencia de sus agentes se determine cada
vez ms en forma rutinaria y completa. El Bacillus cereus es un bacilo esporulado
y aerbico que normalmente se encuentra presente en el suelo, polvo y agua.
Los alimentos en los cuales se pueden encontrar este bacilo, pueden ser platos
de cereales a partir de maz o almidn de maz, pur de papas, verduras, carne
picada, embutido de hgado, platos de arroz al estilo oriental, sopas, etc. El
nmero mnimo de organismos necesarios para causar los sntomas es de unos
107 /g, excepto en el caso de nios pequeos en los que se produce la enfermedad
con solo 105 /g.
Objetivo
Proporcionar al estudiante los elementos necesarios para hacer el diagnstico
bacteriolgico de Bacillus cereus, mediante la identificacin del mismo.
Materiales
Caja de Petri con agar selectivo para Bacillus cereus.
Tubos de ensayo con medios: Agar leche, Agar almidn, Agar gelatina,
Caldo nitrato, Caldo Glucosa, Caldo Arabinosa, Caldo Xilosa.
Solucin de Lugol.
Reactivo de Griess.
Cloruro de Mercurio al 15%.
Mtodo
De la caja de Petri que contiene el cultivo de B. cereus siembre con un asa una
muestra en cada uno de los tubos que contienen los siguientes medios:
1. Agar leche, Agar almidn, Agar gelatina, Caldo nitrato, Caldo glucosa,
caldo arabinosa, Caldo xilosa.
2. Incube a 37 C por 24 horas.
3. Al da siguiente lea las pruebas bioqumicas de la siguiente manera:
Agar Almidn: Cubrir la superficie del tubo con solucin de lugol,
si no se ha producido hidrlisis de almidn, se tie de azul. Las reas
hidrolizadas aparecen como zonas claras.
Agar Gelatina: Aada al tubo 5 gotas de cloruro de mercurio, elimnelo
despus de 5 minutos, lave el tubo con agua corriente. La reaccin es
positiva cando una zona clara rodea la estra.
Agar leche: Observe una zona clara que aparece alrededor del crecimiento,
lo cual indica degradacin de la casena.
Caldo Glucosa, Arabinosa y Xilosa: Observe si hubo o no fermentacin,
indicada por un color rosado en el medio de cultivo y si hubo o no
produccin de gas, indicada por la aparicin de burbujas en el caldo.
Glucosa + (sin gas); Arabinosa (-); Xilosa (-).
Caldo Nitrato: Aada al tubo unos miligramos del reactivo de Griess
y observe el color que presenta. El color rojo indica prueba positiva de
reduccin de nitratos. Si no hay cambio de color la prueba es negativa
Anlisis bacteriolgico del agua
por el mtodo de lo tubos mltiples
Introduccin
La orientacin de estos anlisis se ha basado principalmente en el inters en
los aspectos sanitarios. No se conocen bien las bacterias cuyo medio propio es
el agua, en parte porque es difcil que muchas de ellas crezcan en medios de
cultivo en laboratorio, pero hay muchas que se han identificado como poblacin
natural, entre las cuales encontramos Serratia sp, Pseudomonas sp, sarcina,
micrococcus, caulobacterias.
Es necesario el anlisis bacteriano del agua para determinar su calidad para el
consumo humano, asi como para controlar la eficacia de los sistemas de potabilizacin
del agua y de las piscinas de uso pblico.
Objetivos
Realizar anlisis bacteriolgico del agua tratada y sin tratar para establecer
su calidad sanitaria.
Realizar el aislamiento de Pseudomonas en una muestra de agua de piscina.
Materiales
Agua peptonada.
Cajas de petri vacas estriles.
Caldo brilla y caldo EC.
Caldo nutritivo.
Pipetas serolgicas graduadas.
Agar cuenta grmenes.
Lauryl sulfato triptona.
Agar McConkey.
Agar cetrimide.
Mtodos
Anlisis bacteriolgico del agua cruda
1. Recuento de mesofilos aerobicos viables (mesoaerobios).
a. Dilucin de la muestra: a partir de la muestra de agua tomar 10ml y
agregarlos a 90ml de agua peptonada (dilucin 10-1), seguidamente
hacer diluciones sucesivas hasta 10-5 para agua cruda.
b. Realizar el procedimiento de la misma forma que en anlisis de alimentos.
2. Prueba presuntiva para coliformes totales.
Realice el procedimiento de la misma forma que en anlisis de alimentos,
pero utilice el caldo lautyl sulfato, recomendado para anlisis de aguas,
puesto que permite el desarrollo de bacterias gran negativas por ser
un medio selectivo y de enriquecimiento.
Realice la lectura en la tabla de nmeros mas probable (NPM), para
saber el resultado acuerdo con numero de tubos positivos.
3. Prueba confirmativa para determinacin de coliformes totales.
Realice el procedimiento de la misma forma que en anlisis de alimentos.
4. Prueba para coliformes fecales.
De todos los tubos positivos tomar 0.5ml y agregar a cada tubo de caldo
EC, incubar a 45C por 24-48 horas.
Considere positivos los tubos que presenten turbidez y produccin de gas.
Anotar sus resultados y buscar en la tabla adjunta, para realizar la
lectura del ndice del NMP, y limites de confianza de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se
utilizan
tre alcuotas de 10, tres de 1 y tres de 0.1ml-.
Determinacion de Escherichia Coli
A partir de los tubos EC positivos transfiera una asada a agar McConkey
e incube a 35-37C por 24 horas.
Escoja colonias aisladas lactosa positivas.
Realizar pruebas bioqumicas e identificar E.coli.
Anlisis bacteriolgico de agua potable
1. Recuento estndar de mesofilos aerobicos viables.
Realizar el procedimiento de la misma forma que el agua no tratada,
pero sembrando 1ml, 0.1ml y 0.01ml de la muestra original.
2. Prueba presuntiva para determinacin de coliformes totales
A 100 de muestra agregar 0.1 de tiosulfato de sodio al 10%, para neutrlizar
la accin del cloro sobre las bacterias.
A 3 tubos de lauryl sulfato concentracin doble, agregar 10 de agua sin
diluir.
A 3 tubos de lauryl sulfato concentracin sencilla, agregar 1 de agua
sin diluir.
 A 3 tubos de lauryl sulfato concentracin sencilla, agregar 0.1 de agua
sin diluir.
Incubar los tubos a 35-37C por 24 a 48 horas.
Tomar como positivos los tubos que tengan turbidez y gas.
3. Prueba confirmativa para determinacin de coliformes fecales.
Realizar el procedimiento de la misma forma que el agua no tratada.
4. Determinacin de Escherichia coli.
Realizar el procedimiento de la misma forma que el agua no tratada.
Anlisis bacteriolgico del agua de piscina
El agua de piscina se debe considerar como agua potable, por lo tanto, el anlisis
de mesofilos y coliformes se realiza de la misma forma que el agua tratada, con
dos variantes adicionales.
1. A los 100 de muestra se le debe agregar 0.3 de tiosulfato de sodio al 10%.
2. Realizar aislamiento de Pseudomonas sp.
Aislamiento de Pseudomonas sp.
Se recomienda incluirlo en el anlisis de agua de piscina, por la implicacin
clnica que pueda tener como agente etiolgico de otitis.
Sembrar 50ml de la muestra en 50ml de caldo Olson.
Incube a 35C durante 24 horas.
Transfiera dos asadas del caldo Agar Cetrimide sembrando en superficie
por agotamiento.
Incube a 37C por 24 a 48 horas.
Informe el aislamiento.
ANEXOS
BIBLIOGRAFIA:

MANUAL DE PROTOCOLOS DE MICROBIOLOGIA GENERAL

RAUL ALBERTO CUERVO MULET