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Atividade antimicrobiana de extratos vegetais sobre bactrias patognicas humanas

1 2 3 4* 1
ALVARENGA, A.L. ; SCHWAN, R.F. *; DIAS, D.R. ; SCHWAN-ESTRADA, K.R.F. ; BRAVO-MARTINS, C.E.C.
1 2
Departamento de Cincia dos Alimentos, Universidade Federal de Lavras (UFLA); Departamento de Biologia,
3
Universidade Federal de Lavras, Campus Universitrio 37200-000, Lavras, MG; Unilavras Centro Universitrio de
4*
Lavras; Departamento de Agronomia, Universidade Estadual de Maring (UEM)-PR. Autor para correspondncia:
schwan@wnet.com.br

RESUMO: Extratos aquosos e alcolicos de alecrim (Rosmarinus officinalis), capim-limo

(Cymbopogon citratus), gengibre (Zingiber officinale), hortel (Mentha piperita), organo (Origanum
vulgare) e slvia (Salvia officinalis), a 10 e 20% (m:m), foram testados quanto atividade
antibacteriana sobre Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Listeria monocytogenes (ATCC 33090),
Salmonella choleraesuis (ATCC 14028), Shigella flexneri (ATCC 25931), Streptococcus mitis
(ATCC 9811) e Streptococcus mutans (ATCC 25175), utilizando-se o mtodo de difuso em gar
Mller Hinton. No houve ao antimicrobiana dos extratos aquosos, independente da
concentrao, sobre nenhum dos microrganismos pesquisados. Os extratos etanlicos das plantas
testadas, na concentrao de 20%, inibiram parcialmente o crescimento de Shigella flexneri.

Palavras-chave: Extratos, plantas medicinais, atividade antimicrobiana

ABSTRACT: Antimicrobial activity of plant extracts against human bacterial pathogens.

Aqueous and alcoholic plant extracts, from rosemary ( Rosmarinus officinalis), lemongrass
(Cymbopogon citratus), gingerroot (Zingiber officinale), peppermint (Mentha piperita), oregano
(Origanum vulgare ) and sage ( Salvia officinalis), at 10 and 20%, were tested against
Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Listeria monocytogenes (ATCC 33090), Salmonella
choleraesuis (ATCC 14028), Shigella flexneri (ATCC 25931), Streptococcus mitis (ATCC 9811)
and Streptococcus mutans (ATCC 25175) using the agar diffusion method. No antimicrobial activity
was found in aqueous plant extracts in both concentrations prepared (10 and 20%) upon all
microorganisms tested. All alcoholic extracts showed intermediary inhibition properties at 20%
against Shigella flexneri.

Key words: Plant extracts, antimicrobial activity, bacterial inhibition

INTRODUO
Vrias patologias que afetam a Sade
Pblica so de origem microbiana e especialmente
bacteriana. Estudos com patgenos veiculados pela
ingesto de alimentos contaminados, como espcies
de Staphylococcus, Listeria, Shigella, Salmonella,
entre outros, tm sido realizados (Murray, 2000;
Tauxe, 2002). O controle das espcies de
Streptococcus, reconhecido como uma das principais
bactrias responsveis pela crie dentria, tem sido
realizado com o uso de produtos antimicrobianos,
como forma preventiva de inibir o crescimento destas
espcies de bactrias (Yamashita et al., 1993; Koo
et al., 2003). A forma de aquisio desta bactria
por contato direto entre os hospedeiros com objetos
inanimados (chupetas e brinquedos) ou atravs da
saliva (principal via de transmisso) ou ainda pela me
(a mais importante fonte de infeco) (Yamashita et
al., 1993; Cai et al., 1994). Embora estas bactrias
apresentem vias de transmisso, sintomatologia e
mecanismos de infeco diferentes, as doenas
bucais causadas por microrganismos so
consideradas grandes problemas de sade pblica
(Silver, 2003; Chinivasagam et al., 2004). Para o
controle destas patologias bucais so utilizados
frmacos que, na maioria so sintetizados em
laboratrio, e para os quais muito tempo e recursos
econmicos so gastos em pesquisas at que
possam ser utilizados (Barraca & Minami, 1999).

Recebido para publicao em 23/11/2006

Aceito para publicao em 20/03/2007

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.86-91, 2007.


Apesar da grande diversidade de
antimicrobianos que agem sobre diversos
microrganismos patognicos, estudos buscam por
um antimicrobiano ideal, ou seja, aquele que
apresenta maior espectro de ao, menor toxicidade,
menor custo e menor indcio de resistncia
bacteriana, haja vista que j existe resistncia
bacteriana a alguns produtos antimicrobianos
(Nascimento et al., 2000; Pazhani, 2004). A atividade
antimicrobiana desejada pode ser encontrada em
espcies de plantas medicinais. A flora brasileira
apresenta-se altamente diversificada em espcies que
na sua maioria ainda no foi pesquisada
cientificamente quanto sua ao antimicrobiana
(Simes et al., 2000; Auricchio & Bacchi, 2003).
Tem-se verificado cientificamente o uso
popular de plantas com a finalidade de obteno dos
mais variados efeitos medicamentosos, incluindo sua
aplicao como antimicrobianos (Pozetti et al., 1972;
Kumar & Berwal, 1998; Castro et al., 2000; Koo et
al., 2003; Burt, 2004). O uso de plantas medicinais,
muitas delas cultivadas no fundo do quintal, prtica
secular baseada no conhecimento popular e
transmitida oralmente, na maior parte das situaes
(Nascimento et al., 2000; Castro et al., 2000). Numa
populao com baixo acesso a medicamentos, como
a brasileira, agregar garantias cientficas a essa prtica
teraputica traz variadas vantagens, como baixo custo
e fcil acesso, diminuio de efeitos adversos e evitar
ou diminuir os riscos de intoxicao por uso
inadequado (Furlan, 1998). Neste sentido, a
investigao de materiais naturais como fontes de
novos agentes antibacterianos tm aumentado
potencialmente nos ltimos vinte anos, onde diferentes
extratos de plantas medicinais, condimentares e
aromticas tm sido testados (Nascimento et al.,
2000; Castro et al., 2000).
Assim, o objetivo deste trabalho foi o de
avaliar o efeito de extratos aquoso e etanlico de
diferentes plantas aromticas ou medicinais (organo
(Origanum vulgare), hortel (Mentha piperita), alecrim
(Rosmarinus officinalis L), slvia (Salvia officinalis),
capim limo ( Cymbopogon citratus ) e gengibre
(Zingiber officinale)) sobre bactrias patognicas de
importncia em sade pblica (Staphylococcus
aureus , Listeria monocytogenes , Salmonella
choleraesuis, Shigella flexneri, Streptococcus mitis
e Streptococcus mutans).
MATERIAL E MTODO
Microrganismos testados
O experimento foi realizado no Laboratrio
de Fisiologia de Microrganismos do Departamento
de Biologia e no Laboratrio de Microbiologia de
Alimentos do Departamento de Cincia dos Alimentos
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.86-91, 2007.
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da UFLA. Foram utilizadas cepas de Staphylococcus
aureus (ATCC 25923), Listeria monocytogenes (ATCC
33090), Salmonella choleraesuis (ATCC 14028),
Shigella flexneri (ATCC 25931), Streptococcus mitis
(ATCC 9811), Streptococcus mutans (ATCC 25175),
adquiridos na Fundao Andr Tosello.
Preparo dos inculos
Para a padronizao da tcnica e
dimensionamento do inculo, uma alada de cada cepa
bacteriana foi semeada em 10 mL do meio de cultura
lquido BHI (Brain Heart Infusion) e incubadas a 37C
por 24 horas. As suspenses de microrganismos foram
ajustadas de acordo com o tubo 2 da escala de
MacFarland, expressa em nmero de bactrias mL-1
de meio de cultura (aproximadamente de 6,0 x 108
clulas mL-1). Foram removidos 100 L de cada uma
das suspenses bacterianas para posterior inoculao
nos meios de origem.
Preparo dos extratos
Para o teste de inibio dos microrganismos
foram utilizados extratos aquosos e etanlicos nas
concentraes de 10 e 20% (m/m), fornecidos pelo
Horto Medicinal do Centro Universitrio de Lavras
(Unilavras). Estes extratos foram preparados a partir
de plantas frescas selecionadas, coletadas no perodo
de 12:00 s 14:00h: folhas e caules novos de organo
(Origanum vulgare L. famlia Lamiaceae), hortel
(Mentha piperita L; famlia Lamiaceae) e alecrim
(Rosmarinus officinalis L; famlia Lamiaceae); folhas
de slvia (Salvia officinalis L; famlia Lamiaceae) e
capim limo (Cymbopogon citratus (DC) Stapf, famlia
Poaceae) e rizomas de gengibre (Zingiber officinale
[Willd] Roscoe, famlia Zingiberiaceae). As plantas
utilizadas foram botanicamente identificadas e o material
herborizado est depositado no Herbrio Luna - Unilavras.
Para o preparo dos extratos aquosos foram
adicionados 100 g de planta em 400 g de gua
destilada e triturada em Hand Blender (JD-1001)
Modelo 14A4257. O homogeneizado obtido foi coado
em gaze e filtrado em papel de germinao com
auxlio de bomba a vcuo e posteriormente em papel
de filtro quantitativo (poros de 8 m, Quanty). A
soluo foi ainda submetida filtragem, utilizando-
se filtro Millipore (0,45 m) originando a soluo
aquosa a 20% (m/m), que foi acondicionada em
frascos e congelada. Em seguida foram adicionados
250 g de gua destilada estril a 250 g da soluo a
20%, obtendo-se a soluo aquosa a 10%.
Os extratos alcolicos foram obtidos em
etanol/gua (70% v/v) nas concentraes de 10 e 20%
(m/m), por macerao durante 20 dias temperatura
ambiente. Aps este perodo, a soluo foi filtrada
em gaze e conservada em frasco mbar. O extrato
etanlico a 10% foi obtido diluindo-se o extrato a 20%
em etanol 70% (1:1).
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Semeadura dos microrganismos
Streptococcus mutans e S. mitis foram
transferidos para meio lquido BHI e incubados para
reativao e posterior cultivo em gar mitis salivarius.
Foram removidas 04 aladas de cada uma delas para
10 mL do meio de cultura lquido BHI, em tubos de
ensaio. Aps homogeneizao, os tubos foram
incubados a 37oC por 24 horas e utilizados para os
testes de inibio de crescimento. As demais
bactrias foram transferidas para o meio TSB
(Tripticase Soy Broth) para reativao e posterior
cultivo em TSA (Tripticase Soy Agar) e incubadas
conforme mencionado anteriormente. Antes de iniciar
os ensaios de inibio, a concentrao de clulas
bacterianas foi ajustada ao tubo 2 da escala de
MacFarland, apresentando aproximadamente 6 x108
bactrias mL-1, segundo padres estabelecidos pelo
National Committee for Clinical Laboratory Standards
(NCCLS, 2000). O crescimento foi evidenciado pela
constatao macroscpica da turvao deste meio
de cultura e foi realizada a colorao de Gram para
todos os isolados bacterianos utilizados no
experimento.
Avaliao da atividade antibacteriana dos
extratos
A atividade antibacteriana dos extratos
vegetais foi realizada de acordo com Nakamura et al.
(1999). Um volume de 100 L das suspenses
bacterianas foi inoculado, em triplicata, em placas
contendo gar Meller-Hinton previamente solidificado,
utilizando-se ala de Drigaslky. Aps a distribuio
da suspenso bacteriana, foram inseridos,
assepticamente, oito anis (microcilindros de ao)
no meio de cultura em cada placa ( exceo da
placa controle). Em seis destes anis foram
colocados os extratos (aquoso ou alcolico), em um
anel o solvente (gua ou etanol, a depender do extrato
a ser testado) e, no ltimo anel, o antibitico,
especfico para cada cepa de bactria testada. Os
antibiticos testados sobre os respectivos
microrganismos foram selecionados por serem
considerados como padro para os testes de inibio
do crescimento (NCCLS, 2000). Foram utilizados
vancomicina (500 mg mL -1) como controle de
Staphylococcus aureus; ciprofloxacina (250 mg mL-1)
nas placas com Shigella flexneri e Salmonella
choleraesuis; ampicilina (500 mg mL-1) sobre Listeria
monocytogenes e clorexedina (0,12% m/v) para inibir
Streptococcus mutans e S. mitis. Os antibiticos
utilizados possuem ao bactericida de largo espectro
sobre microrganismos Gram-positivos e Gram-
negativos, apresentando-se bastante efetivos contra
infeces causadas por estas bactrias (Murray et
al., 2000).
Depois de montadas, as placas foram
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incubadas a 37C por 24 horas e avaliado os halos
de inibio formados (Ejechi et al., 1999). Para a
interpretao dos resultados foram seguidas as
recomendaes do NCCLS (2000), onde os halos de
inibio formados foram comparados com a tabela
de referncia, sendo os microrganismos classificados
como resistente (zona de inibio inferior a 15 mm),
intermedirio (de 15 a 29 mm) e sensvel (de 30 a 35
mm) a determinado agente (NCCLS, 2000).
RESULTADO E DISCUSSO
Os extratos aquosos das plantas testadas,
a 10%, no promoveram a formao de halos de
inibio sobre S. aureus, S. choleraesuis, S. mitis e
S. mutans. No caso de S. choleraesuis, o extratos
aquosos a 10 e 20% no levaram formao de halo
de inibio, verificando-se resistncia ou
insensibilidade a estes extratos. No caso de S.
aureus, S. mitis e S. mutans os extratos aquosos a
10% no formaram halo. Os extratos aquosos a 20%
de gengibre e de hortel apresentaram halos de
inibio superiores quele observado pela ao da
vancomicina sobre S. aureus (Tabela 1). Os demais
extratos aquosos estudados apresentaram halos de
inibio inferiores aos apresentados pelos antibiticos
correspondentes a cada espcie bacteriana.
Na Tabela 2 podem ser observados os
resultados da atividade antibacteriana dos extratos
etanlicos testados. Os extratos etanlicos a 10%
de todas as plantas testadas no causaram qualquer
inibio no crescimento de L. monocytogenes, S.
choleraesuis e S. aureus, sendo que para este, o
extrato etanlico a 20%, tambm no apresentou
formao de halo.
exceo dos dados observados em S.
flexneri, nenhum dos extratos foi capaz de inibir o
crescimento bacteriano de forma intermediria ou
sensvel sendo os halos formados considerados na
faixa de resistncia microbiana. Todos os extratos
vegetais etanlicos, na concentrao de 20%, levaram
formao de halos de inibio intermediria de S.
flexineri. Os halos encontrados neste trabalho so
superiores aos valores encontrados na literatura,
sobre o gnero Shigella, quando submetido ao
de extratos de goiabeira, cujo halo foi de 15 mm
(Carvalho et al., 2002). Quando testados na
concentrao de 10% contra o mesmo microrganismo,
os extratos de alecrim, capim-limo e gengibre
produziram halos de inibio intermediria cujos
valores foram superiores ao gerado pelo solvente e
tambm superiores aos respectivos halos a 20%,
enquanto que os extratos de hortel, organo e slvia
levaram formao de halos de forma inversa, sendo
inferiores na concentrao de 10%.
Os resultados obtidos mostraram que os
microrganismos Gram-positivos testados (S.aureus, L.
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TABELA 1. Halos de inibio (mm) das colnias bacterianas, formados pelos extratos vegetais aquosos nas
concentraes de 10 e 20%.

R
Resistente = halo de inibio inferior a 15 mm; I Intermedirio = halo de inibio de 15 a 29 mm; S Sensvel
= halo de inibio de 30 a 35 mm; n = no adicionado. Os espaos em branco (-) indicam ausncia de halo
de inibio. S. a = Staphylococcus aureus; L. m = Listeria monocytogenes; S. f = Shigella flexneri; S. mitis =
Streptococcus mitis; S. mutans = Streptococcus mutans

TABELA 2. Halos de inibio (mm) formados pelos extratos vegetais etanlicos nas concentraes de 10 e 20%.

R
Resistente = halo de inibio inferior a 15 mm; I Intermedirio = halo de inibio de 15 a 29 mm; S Sensvel =
halo de inibio de 30 a 35 mm; n = no adicionado. Os espaos em branco (-) indicam ausncia de halo de
inibio. L. m = Listeria monocytogenes; S. c = Salmonella choleraesuis; S. f = Shigella flexneri; S. mitis =
Streptococcus mitis; S. mutans = Streptococcus mutans

monocytogenes, S. mitis e S. mutans) apresentaram Gram-positivos a leos essenciais (Smith-Palmer et

resistncia aos extratos vegetais, tanto alcolicos
quanto aquosos. Entre os dois Gram-negativos, S.
choleraesuis e S. flexneri, houve inibio intermediria
da S. flexneri pelos extratos alcolicos a 10% e 20%,
exceto da hortel e organo a 10%. Estes resultados
corroboram as informaes reportadas por outros
autores (Deans & Ritchie, 1987; Zaika, 1988; Dorman
& Deans, 2000) a respeito da tendncia de maior
resistncia a extratos vegetais em microrganismos
Gram-positivos. Em outros relatos, porm, foi
observada maior susceptibilidade de microrganismos
al.,1998; Hussein, 1990). Gonalves et al. (2005)
testaram extratos hidro-alcoolicos de 17 espcies
vegetais no controle de S. aureus e verificaram que
para 7 destes extratos, a bactria apresentou-se
resistente, demonstrando sensibilidade para os
demais.
Dos antibiticos testados, a ciprofloxacina
foi capaz de inibir o crescimento de S. choleraesuis
de forma sensvel (halo mdio de 39,0 mm). Sobre
Shigella flexneri a inibio foi intermediria (halo mdio
de 21,0 mm). Ampicilina promoveu inibio

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.86-91, 2007.

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intermediria sobre L. monocytogenes, com halo
mdio de 29,0 mm. Os demais microrganismos
apresentaram resistncia aos respectivos antibiticos
contra eles testados, de acordo com o preconizado
pela NCCLS (2000). Alguns autores (Salyers &
Ambile-Cuevas, 1997; Levy, 1997; Chartone-Souza,
1998) citam a existncia de cepas de S. aureus
multiresistentes, limitando as opes teraputicas
apenas aos antibiticos vancomicina e teicoplamina.
Neste trabalho, a cepa de S. aureus testada
apresentou resistncia a vancomicina (halo mdio de
7,5 mm), resultados tambm observados por outros
autores, que isolaram linhagens com sensibilidade
reduzida a vancomicina e meticilina (Domin, 1998;
Labischinski et al., 1998; Fridkin, 2001).
Os extratos alcolicos de todas as plantas
testadas apresentaram atividade inibitria sobre
Shigella flexineri. Para a maioria dos extratos houve
formao de halo. Podem ser pesquisadas novas
concentraes ou testar as plantas durante o
fracionamento qumico dos componentes, como
perspectivas de melhores resultados e aplicao
desses extratos como antibiticos.
AGRADECIMENTO
Os autores agradecem a Vilmar Arlindo de
Oliveira e Prof. Joo Antonio Argenta (Unilavras), por
disponibilizar os extratos de plantas testados neste
trabalho.
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