Mecanismos activos y pasivos del transporte intracelular y Localizacin en bacterias

Introduccin

Debido a que son organismos relativamente 'simples', las bacterias han sido ampliamente
utilizadas como sistemas modelo para estudiar los mecanismos biolgicos bsicos. Sin embargo,
debido a su pequeo tamao, la clula bacteriana fue considerada durante mucho tiempo como
una "bolsa primitiva de enzimas", unidas por una rgida pared celular, en la que las protenas
alcanzan sus sitios de accin por simple difusin. Sorprendentemente, sin embargo, tambin se
encontraron elementos del citoesqueleto tales como homlogos de actina y tubulina, que se
pensaba que estaban restringidos a clulas eucariotas, en bacterias revelando que la clula
procaritica tiene una arquitectura subyacente compleja. Originalmente se demostr que el
citoesqueleto procaritico estaba implicado en la orquestacin de la pared celular

Sntesis y citocinesis, pero la acumulacin de pruebas tambin apunta a los papeles en otros
procesos esenciales, como la segregacin cromosmica, el posicionamiento de organelos
subcelulares, y el control de la polaridad celular [1 - 4]. Las tcnicas de fluorescencia de alta
resolucin recientemente desarrolladas revelaron que muchas protenas se clasifican en lugares
especficos para lograr sus funciones. Estos incluyen no slo receptores y protenas de sealizacin
sino tambin proteasas y otras enzimas metablicas. Un ejemplo extremo es la localizacin de un
poliqutido hbrido / pptido sintasa no ribosomal en Bacillus subtilis que se rene en una
localizacin subcelular nica en una membrana de 2,5 MDa asociada,

Organela-como la estructura [5]. La complejidad de la clula bacteriana ha sido hasta ahora

subestimada y las preguntas que eran hasta hace poco relevantes para las clulas eucariotas
necesitan ser estudiadas en bacterias. A pesar de una dcada de estudio, las funciones exactas del
citoesqueleto y la localizacin subcelular de protenas permanecen sin definir. En esta revisin,
vamos a tocar en varios mecanismos que se han formulado hiptesis para contribuir

Al transporte intracelular y localizacin de macromolculas en bacterias que abordan preguntas

tales como: Las bacterias poseen o incluso necesitan sistemas de transporte activos? Se puede
utilizar la difusin para crear la complejidad observada, o se requieren procesos dirigidos? Estn
polarizados los filamentos del citoesqueleto en las bacterias y pueden dar lugar a fenmenos de
transporte?

Transporte pasivo

Difusin en el citoplasma

El interior de una bacteria es un lugar lleno de gente. Sin embargo, la difusin todava domina el
posicionamiento de las protenas libres en el citoplasma. El trabajo pionero de Elowitz et al. Midi
la difusin de protenas en el citoplasma de Escherichia coli y encontr que las protenas se
mueven al azar con un coeficiente de difusin de 3-8 mm2 / s [6].

Este valor es aproximadamente 10 veces menor que en agua y menor que el encontrado en clulas
eucariotas. Sin embargo, en la escala celular estos coeficientes de difusin conducen a una mezcla
eficiente en la segunda escala de tiempo. Para un coeficiente de difusin de 5 mm2 / s, una
protena recorrer la longitud de una clula de E. coli (aproximadamente 2 mm) en 0,4 s y se
encontrar con un objetivo fijo, de tamao proteico en la clula cada pocos segundos [7]. Esta tasa
de difusin limitada es ms probable rpido

Suficiente para permitir que una protena encuentre un socio de unin localizado en un proceso de
bsqueda y captura. Para protenas y pequeos complejos macromoleculares en el citoplasma
celular o periplasma, por lo tanto, no est claro que un modo de transporte activo es necesario
para el transporte intracelular.

Difusin en la membrana

Las protenas de la membrana tambin pueden llegar a su destino final por difusin, aunque con
una movilidad sustancialmente reducida. El coeficiente de difusin de membrana protenas se ha
medido en el rango de 0,01-0,1 mm2 / s, uno a dos rdenes de magnitud menor que para las
protenas citoplsmicas [8 - 11]. Aunque ms lento que en el citoplasma, la difusin en la
membrana conducir a la mezcla en la escala de tiempo de los minutos. Un ejemplo de difusin y
captura en membranas bacterianas es SpoIVFB, una protena de B. subtilis que primero se inserta
uniformemente en la membrana y luego se difunde libremente para ser especficamente
secuestrada en la membrana septal [12].

Transporte activo

Los objetos grandes, tales como cromosomas enteros, necesitan ser movidos a largas distancias en
la clula y requieren maquinaria activa. Hasta la fecha, varios sistemas distintos han estado
implicados en el proceso de segregacin cromosmica. Diferentes especies de bacterias parecen
utilizar diferentes subconjuntos de estos mecanismos (ver [13 - 15] y referencias en el mismo). Dos
de estos sistemas, sin embargo, se encuentran en una gran mayora de bacterias y son necesarios
para la segregacin de alta fidelidad.
Mecanismo propuesto para la segregacin cromosmica mediada por ParAB. Se muestra la
segregacin de un cromosoma replicante. Un ParA polar-ligado Filamento (rojo) se une a ParB
(Star) en el origen de la replicacin. ParA entonces Tira del cromosoma hacia el polo mientras se
despolimeriza.

Mecanismo propuesto para la segregacin cromosmica mediada por ParAB.

Se muestra la segregacin de un cromosoma replicante. Un ParA polar-ligado

Filamento (rojo) se une a ParB (Star) en el origen de la replicacin. ParA entonces

Tira del cromosoma hacia el polo mientras se despolimeriza.

Transporte motorizado

En segundo lugar, el homlogo de actina helicoidal MreB parece desempear tambin un papel en
la segregacin cromosmica. El agotamiento de MreB produce defectos en la segregacin de los
orgenes de la replicacin y, a veces, de todo el cromosoma [4, 24 - 26]. Cmo estos procesos se
ven afectados por MreB sigue siendo difcil de alcanzar. MreB se encontr a interactuar con
regiones proximales a la replicacin de origen y por analoga con el eucaritico kinetochore, se
sugiri que MreB podra servir como una pista para una protena de motor para tirar el origen a la
otra polo [24]. Este putativo motor no se ha caracterizado, y se sugiri que podra ser la propia
polimerasa de ARN [4]. Hasta la fecha, los motores del citoesqueleto no se han encontrado en las
bacterias.

Transporte con cinta de rodamiento

El filamento MreB tambin se puede utilizar para el transporte sin la ayuda de un motor
citoesqueltico. La evidencia actual indica que el paquete helicoidal de MreB est compuesto por
protofilamentos cortos, asociados lateralmente, de 400 nm de longitud [27]. Sobre la base de esta
evidencia y algunas suposiciones acerca de la cintica de polimerizacin de MreB basado en
nuestro conocimiento de la actina biofsica, Allard y Rutenberg han creado un modelo terico de
transporte que utiliza protofilamento treadmilling para generar bidireccional modos de transporte
si una carga vincula los monmeros a granel O el final de un protofilamento [28]. En apoyo de
treadmilling, de una sola molcula experimentos de fluorescencia han puesto de manifiesto el
movimiento de los monmeros MreB individuales dentro del haz [27].

Estos resultados muestran el movimiento

De monmeros de MreB dentro del haz de MreB polimerizado, pero sin direccionalidad
consistente del movimiento del monmero. En su modelo terico Allard y Rutenberg tocan la idea
de que el movimiento direccional todava puede ser posible para geometras de haces en las que
los filamentos no estn alineados direccionalmente, pero se necesita hacer ms trabajo para
expandir esta idea.
Localizacin esttica

La localizacin de protenas es un rasgo bacteriano general que est involucrado en un nmero

creciente de funciones: no slo el posicionamiento de organelos polares, pili de tipo IV, flagelos y
tallos, sino tambin complejos de transduccin de seales, quimiorreceptores y sistemas de dos
componentes. Para revisiones extensas sobre la polaridad de la clula bacteriana el lector se
refiere a Refs. [29, 30]. Dos tipos de localizaciones en la clula parecen ser utilizados
extensivamente: los polos y la clula media.

Separacin de fases inducida por curvatura en los polos En las celdas en forma de barra, los polos
estn claramente definidos como Lugares nicos por geometra pura. Estn curvados en Dos
dimensiones, mientras que el eje de la celda slo est curvado en una direccin. Esta diferencia
puede utilizarse, en principio, para Localizacin de protenas. Por ejemplo, el fosfolpido
cardiolipina Es conocido por formar naturalmente microdominios pequeos en Clulas y se ha
demostrado que la localizacin de la protena ProP En E. coli [31 - 34]. Dos trabajos recientes han
descrito cmo un fenmeno de separacin de fases lipdicas puede conducir a esta Polar
localizacin (Figura 2a [35, 36]). Al combinar un Preferencia de curvatura inherente para esta
especie lipdica con Energa de interaccin entre las molculas lipdicas, Autores muestran que la
cardiolipina formar parches en la Dos polos de celda. As, una protena que interacta con la
cardiolipina Se localizarn naturalmente en un polo de clula.

Posibles mecanismos para definir los polos en las bacterias. (A) Los parches de cardiolipina se
forman espontneamente en los polos (crculos rojos), localizando as protenas cardiolipinantes
(azul). B) Definicin del polo flagelado en Caulobacter. Tras la divisin celular asimtrica, TipN
(azul) se dirige al nuevo polo a travs de posibles interacciones con el anillo de divisin FtsZ (rojo).
Entonces se propone que TipN acte como un punto polar para diferenciar directamente el polo
flagelado. Por analoga con las observaciones hechas en E. coli, TipN podra ser importante para
establecer un eje de polaridad mediante el reclutamiento de anillos MreB en el tabique de divisin
durante la citocinesis y, por tanto, asegurar la segregacin adecuada y la polarizacin del
citoesqueleto (verde). El ciclo TipN se reanuda despus de la dispersin de TipN desde el antiguo
polo flagelado y la reubicacin al septo de divisin. El mecanismo de esta reubicacin sigue siendo
enigmtico. La imagen fue obtenida y modificada a partir de [37, 38].

Un fenmeno de separacin de fases lipdicas puede conducir a esta localizacin polar (Figura 2a
[35, 36]). Al combinar una preferencia de curvatura inherente para esta especie lipdica con una
energa de interaccin entre las molculas lipdicas, los autores muestran que la cardiolipina
formar parches en los dos polos celulares. Por lo tanto, una protena que interacta con la
cardiolipina naturalmente se localiza en un polo de la clula.

Diferenciacin del polo nuevo y antiguo

La verdadera polaridad celular, que es una direccionalidad del eje celular, requiere que la clula se
diferencie entre los dos polos. Un mtodo para hacer esto que es usado por varias bacterias es la
distincin entre los polos ms nuevos y ms viejos en la clula. En Caulobacter crescentus, por
ejemplo, la bsqueda de factores iniciales de localizacin condujo al descubrimiento de TipN, una
protena en espiral que protege las protenas pilus, flagelares y sealizadoras (Figura 2b [37,38]). .
TipN se propuso para ser una "protena birthscar" mediante la localizacin en el septum de una
manera FtsZ-dependiente, marcando as el nuevo polo. Las interacciones directas con el anillo
septal de FtsZ no se han mostrado todava, pero si fuera el caso TipN podra ser la primera seal
intrnseca hacia la polarizacin del polo flagelado. Curiosamente, MreB se ve afectado en el
montaje del anillo divisional en ausencia de TipN [37, 38]. En E. coli, la formacin de un anillo
antes de la divisin celular se ha relacionado con la segregacin adecuada del citoesqueleto a la
divisin celular [39]. Por lo tanto, TipN podra actuar aguas arriba de reordenamientos
citoesqueleto crucial que conduce a la segregacin y el establecimiento de un eje de polaridad
(Figura 2b].
MreB se ha demostrado que afectan directamente a la localizacin de al menos algunas protenas
polares. El agotamiento o la sobreexpresin de MreB conduce en ambos casos a la localizacin
errnea de varios marcadores polares de C. crescentus [1]. Cuando las clulas agotadas se
reponan con MreB, los marcadores polares tales como DivK y PleC se relocalizaron a los polos de
la clula, pero al polo equivocado en la mitad de las clulas. Esto sugerira que el citoesqueleto
est globalmente polarizado, en aparente contraste con los datos de una sola molcula de Kim et
al. [27]. Perturbacin del citoesqueleto MreB tambin se ha demostrado que conduce a la
localizacin anormal de las protenas polares en E. coli [40].

Localizacin dinmica

Mecanismo oscilatorio define la posicin de la clula media

Quizs el mejor ejemplo estudiado de una localizacin dinmica es el de polo a polo oscilaciones
de las protenas MinCDE mostrado por primera vez en 1999 [41]. La oscilacin de estas protenas
entre los polos junto con una inhibicin de la polimerizacin FtsZ define en gran medida el plano
medio de la clula e impide la formacin de los anillos Z en los polos y cerca de ellos (vase [42]
para una revisin). Se ha demostrado que las protenas Min forman estructuras filamentosas que
oscilan a travs de la polimerizacin [43]. Un gran nmero de modelos tericos han tratado varios
aspectos de este sistema (vanse las citas 132-140 en [42]). La caracterstica principal de estos
modelos es que el comportamiento dinmico de las protenas Min est cableado en sus
propiedades bioqumicas de membrana de unin, polimerizacin y catlisis.

Dinmica de protenas durante la motilidad bacteriana. (A) Oscilaciones polares a polos dinmicas
de las protenas de motilidad durante las reversiones celulares en Myxococcus. Microscopa en
lapso de tiempo de una clula mvil que expresa protenas fluorescentes dobles, RomR-mCherry
(rojo) y FrzS GFP (verde). En T0, la clula se detiene brevemente antes de que se invierta. En el
momento de la inversin, FrzS-GFP y RomR-mCherry se dirigen a los polos principal y rezagado,
respectivamente. La imagen se obtuvo y se modific con el permiso de [45]. Barra de escala = 2
mm. B) Ciclo dinmico propuesto para FrzS y RomR. Despus de una inversin, FrzS se condensa
sobre todo en el polo principal de la clula y RomR acumulado en el poste de retraso. A medida
que la clula comienza a moverse en la nueva direccin, FrzS se acumula en el polo de retraso,
mientras que RomR se mueve al polo principal hasta que alcancen cantidades iguales en ambos
polos. En esta etapa, la clula se detiene y cada protena es redirigida rpidamente al nuevo polo,
la clula reanuda entonces el movimiento en la direccin opuesta. El comportamiento de RomR y
FrzS est estrechamente regulado por el sistema quimiosensorial de Frz.

Protenas entre los polos junto con una inhibicin de FtsZ polimerizacin en gran medida define el
plano medio de la clula y previene la formacin de Z-ring en y cerca de los polos (vase [42] para
una revisin). Se ha demostrado que las protenas Min forman estructuras filamentosas que
oscilan a travs de la polimerizacin [43]. Un gran nmero de modelos tericos han tratado varios
aspectos de este sistema (vanse las citas 132-140 en [42]). La caracterstica principal de estos
modelos es que el comportamiento dinmico de las protenas Min est cableado en sus
propiedades bioqumicas de membrana de unin, polimerizacin y catlisis.
Polaridad dinmica durante la motilidad de deslizamiento

En Myxococcus xanthus, la localizacin de las protenas de motilidad parece ser no slo dinmica,
sino tambin controlada. Durante la motilidad de deslizamiento, las clulas no cambian de
direccin haciendo "U-turnos", pero de vez en cuando experimentan reversiones celulares durante
las cuales el polo principal de la clula se convierte en el polo de la clula de retraso [44]. Las
reversiones celulares implican que los determinantes polares pueden ser cambiados rpidamente
de un polo a otro. De hecho, los principales reguladores de la motilidad, las protenas FrzS y RomR,
se encontraron especficamente para localizar a los principales y los polos de clulas rezagadas,
respectivamente, donde interactan con elementos de la motilidad maquinaria (Figura 3a yb [45,
46, 47]), . Estas protenas oscilan entre los polos celulares cuando las clulas inversa [45, 46].
Sorprendentemente, una va de transduccin de seales regula la periodicidad de las oscilaciones
(Figura 3b). Es difcil imaginar que estos interruptores abruptos en la polaridad de la celda podran
resultar de un mecanismo pasivo. En consonancia con esto, los movimientos de polo a polo de
FrzS y RomR no dependen de la sntesis de protenas de novo, descartando la degradacin
localizada de estas protenas en los polos antiguos. Cuando se analiz por Fluorescence Recovery
After Photobleaching (FRAP), una fusin fluorescente FrzS-GFP se muestra a trfico de un polo a
otro a una velocidad 10 veces ms lento que la velocidad esperada para la difusin [46]. Los
grandes grupos FrzS-GFP se movan de un polo a otro a lo largo de una trayectoria aparentemente
helicoidal y un mutante FrzS incapaz de localizar a los polos montados a lo largo de una trayectoria
helicoidal que abarcaba el citosol. Estos resultados se interpretaron como evidencia para el
transporte polo a polo de FrzS a lo largo de un filamento citoesqueltico, lo que implica que la
polarizacin regulada es un proceso activo en Myxococcus. Aunque la evidencia definitiva para el
transporte activo todava falta, la motilidad de Myxoccocus parece ser un modelo excelente para
investigar los mecanismos activos para la polaridad y el transporte intracelular.

Conclusiones

Actualmente se acepta ampliamente que la clula bacteriana es una estructura altamente

organizada donde las protenas se clasifican en lugares especficos. Tambin est claro que la
difusin por s sola puede explicar la orientacin de muchas protenas hacia su destino, dejando
abierta la cuestin de la necesidad y existencia de mecanismos activos de transporte. A pesar de
que el mecanismo de segregacin cromosmica sigue siendo en gran medida misterioso, parece
claro que los mecanismos de transporte estn involucrados. Por analoga con los sistemas
celulares eucariticos, es tentador imaginar que tanto los mecanismos pasivos como los activos
tambin son utilizados por los procariotas. Sin embargo, como se seala en esta revisin, no hay
pruebas concretas de que el trfico de protenas activas en las bacterias. Los desarrollos recientes
en microscopa de alta resolucin sern fundamentales para desentraar los mecanismos de
trfico y localizacin intracelular de protenas. En ltima instancia, la evidencia definitiva para el
transporte activo depender de la identificacin y caracterizacin de los motores moleculares
involucrados. El descubrimiento de tubulina-como y actina-como las protenas ha planteado la
cuestin de la existencia de kinesina-como, dinena-como, y miosina-como las protenas en las
bacterias. Sin embargo, los anlisis genmicos y bioqumicos no han podido identificar tales
protenas motoras, pero es til recordar que los elementos del citoesqueleto slo se aislaron
despus de generaciones de investigacin en bacterias. Posiblemente, las cepas que llevan
mutaciones en los genes motores pueden estar ya en colecciones de laboratorio etiquetadas como
genes de funciones desconocidas o genes de localizacin. Probablemente habr que desarrollar
nuevos diseos experimentales para encontrar los motores evasivos. Por ejemplo, un sistema in
vitro que recapitula el rastreo de complejos en MreB polimerizado ser instrumental.

Copper Transporting ATPases: The Evolutionarily Conserved Machineries for Balancing Copper in
Living Systems

Introduccin

El cobre es un cofactor esencial para las principales enzimas metablicas involucradas en la

respiracin, fotosntesis, desintoxicacin de radicales libres, captacin de hierro y metabolismo,
as como muchas otras reacciones bioqumicas cruciales para el correcto funcionamiento de todos
los organismos vivos. El papel vital del cobre en los procesos metablicos se asocia con su
capacidad de fluctuar entre el estado oxidado (Cu21) y reducido (Cu1), dando como resultado la
aceptacin y donacin de electrones individuales en las reacciones redox celulares. Sin embargo,
cuando no se unen dentro de la clula, los iones de cobre libres catalizan la sobreproduccin de
especies reactivas del oxgeno, causando un cambio en el equilibrio oxidante / antioxidante celular
que finalmente evoca el estrs oxidativo. Por lo tanto, las clulas evolucionaron sistemas de trfico
especficos que participan en el cobre vinculante y compartimentacin para garantizar tanto la
entrega de cobre a los compartimentos objetivo y las protenas y la desintoxicacin de Exceso de
cobre. Los componentes esenciales de estos sistemas incluyen el transporte de cobre ATPases (Cu-
ATPases), que se demostr que participan en el encaminamiento intracelular de cobre entre el
citosol y organelos diferentes, as como en el flujo de salida de exceso de cobre de las clulas. Las
Cu-ATPasas pertenecen a la subfamilia ATPasa de metales pesados (P1B-ATPases, HMAs) de las P-
ATPasas transportadoras de cationes (1). Los miembros de esta gran familia son ubicuos en las
clulas de bacterias, arqueas y eucariotas, donde utilizan la energa potencial de ATP para el
transporte activo de iones y lpidos a travs de las membranas biolgicas (1,2). La estructura
primaria de estas protenas de membrana politpica contiene motivos de secuencia conservados
en los bucles citoplsmicos, incluyendo dominios para la unin a ATP (dominio N), fosforilacin (P)
y activacin cataltica (dominio A, referencia 3). El dominio transmembrana tiene un ncleo central
de seis a ocho hlices y contiene sitios de unin a catin especficos. Como las PATPases tpicas,
las Cu-ATPasas transportan cobre a travs de las membranas celulares usando la energa de
hidrlisis de ATP. Este es un proceso de mltiples etapas que implica la unin y el suministro
especficos de cobre a la regin transmembrana Cu-ATPasa, seguido por una posterior liberacin
de metal en el otro lado de la membrana y acoplado a la unin e hidrlisis de ATP (4). Los pasos
clave en este ciclo cataltico son la fosforilacin transitoria por ATP del residuo de Asp conservador
dentro del motivo DKTG (Figura 1) del dominio P seguido por la unin de cobre a los residuos
unidos a la membrana y la desfosforilacin posterior de Asp despus Cobre de los sitios de unin
(4). El dominio especfico de unin al cobre se encuentra normalmente dentro de la extensin
terminal de NH2 de Cu-ATPasas y contiene los motivos consenso CxxC con residuos Cys unidos a
cobre, que estn rodeados por aminocidos hidrfobos conservadores, estabilizando el complejo
metal-protena (4, 5). La unin de cobre a este dominio regula la actividad de Cu-ATPasa. El
dominio ligado a la membrana para la va de translocacin de cobre est compuesto de ocho
hlices transmembrana (TMH) y contiene el motivo altamente conservado cistena / serina-
prolina-cistena / histidina / serina (CPx) dentro de la caracterstica TMH6 para las Cu-ATPasas y la
Subfamilia P1B-ATPasa (Fig. 1, referencia 6). Hasta hace poco, las ATPasas transportadoras de Cu
haban sido estudiadas a fondo en bacterias, arqueas, levaduras y seres humanos. Actualmente se
describen y caracterizan las protenas homlogas de las plantas, proporcionando nuevos
conocimientos sobre las funciones fisiolgicas especficas de las Cu-ATPasas en diversos
organismos y revelando algunos mecanismos reguladores conservadores de la actividad CuATPasa.
Esta revisin resume el estado actual del conocimiento en la estructura, bioqumica y fisiologa de
Cu-ATPases de diferentes organismos, con nfasis en los recientes avances en los estudios sobre
Cu-ATPases vegetales.

Procatiotas Cobre ATPases

Los primeros genes que codifican Cu-ATPases se aislaron de Enterococcus hirae, un patgeno
comn de mamferos y aves (7). El genoma de E. hirae codifica dos Cu-ATPasas, CopA y CopB,
mostrando homologa de secuencia alta entre s. Ambas Cu-ATPasas son inducibles por Cu21 y
Ag1; Sin embargo, transportan cobre y plata en direcciones opuestas:

En la celda (CopA) o fuera de la celda (CopB). El transporte de CopBmediated de cobre y plata se

demostr directamente, utilizando vesculas de membrana aisladas de E. hirae (8). Se observ que
tanto la plata como el cobre son transportados por CopB con una afinidad similar (Km 1 mM) y
velocidad (8). Al igual que la mayora de las ATPasas de Cu, CopA tiene una extensin N-terminal
con un dominio caracterstico de unin a metal que contiene un motivo de consenso CxxC rico en
cistena requerido para la interaccin de CopA con la chaperona CopZ (9). Por el contrario, el
dominio Nterminal de CopB contiene un estiramiento rico en His en lugar del consenso CxxC (Fig.
1, referencia 10).

CopA y CopB constituyen dos de los cuatro componentes del sistema complejo que mantiene la
homeostasis del cobre en clulas de E. hirae. Adems de copA y copB, el sistema tambin incluye
los genes copY, que codifican un represor de cobre, y copZ, que codifica a una chaperona de cobre
vinculada al trfico de cobre dentro de la clula. Los cuatro genes estn dispuestos en un opern
de cop que permite la adaptacin de E. hirae a una amplia gama de concentracin de cobre en el
medio ambiente (9). A saber, CopA cataliza la absorcin de cobre bajo condiciones de limitacin
de cobre, mientras que CopB bombea cobre fuera de las clulas bajo toxicidad de cobre (9). La
actividad de ambas protenas est regulada por CopZ, que transfiere cobre entre CopA, CopB y
CopY, Y por CopY, que induce la expresin de los cuatro genes cop en la unin de cobre (9). Las
ATPasas homlogas de transporte de copa CopA y CopB fueron identificadas y estudiadas en
detalle en el arquetipo hipertermfilo, reductor de sulfato Archaeoglobus fulgidus. Sin embargo,
ambas bombas de cobre de A. fulgidus impulsan el movimiento hacia afuera de cobre o plata y
muestran actividad mxima a 75-858C (11). Curiosamente, son activados diferencialmente por
cobre y plata. A saber, CopA es activado por cationes monovalentes Ag1> Cu1, mientras que la
activacin mxima de CopB se logra en presencia de cobre divalente y, en menor medida, de
cationes monovalentes siguiendo el orden Cu21> Ag1> Cu1 (11). La diferente selectividad de
ambas protenas para los metales probablemente resulta de la presencia de un residuo de
aminocido diferente en la secuencia consenso CPx presente en el dominio de unin a catin
transmembrana (CPC en CopA y CPH en CopB) y asegura la adaptacin eficiente de la arquea a
concentraciones txicas de Diferentes formas de cobre (11). Los aminocidos presentes en la
secuencia consenso CPx son probablemente cruciales para la unin de metales por las enzimas,
mientras que se demostr que el motivo CxxC (CopA) o estiramiento rico en His (CopB) presente
en el dominio N terminal era requerido para la actividad enzimtica mxima 11). Similarmente a E.
hirae, el genoma de A. fulgidus codifica una chaperona de cobre, CopZ. Contiene dos dominios
ricos en cistena, un dominio N-terminal largo (130 aminocidos) y un dominio de unin al cobre C-
terminal con un motivo CxxC conservado (12). La protena CopZ es capaz de unir dos iones de
cobre, uno en cada dominio, reduciendo Cu21 a Cu1 y suministrando Cu1 al dominio de unin
metlica N-terminal de la Cu-ATPasa CopA (12).

Otros estudios sobre otras bacterias confirmaron que las Cu-ATPasas procariticas contribuyen a
la destoxificacin de Cu1 por expulsin de cobre fuera de las clulas (CopA de Escherichia coli) o
en el suministro de Cu a un conjunto cuproprotena (por ejemplo citocromo c oxidasa) (ATPases de
tipo FixI / CopA2 De la bacteria patgena Pseudomonas syringae o del organismo endosimbitico
Rhizobium leguminosarum, ref. 13). Adems, los otros papeles celulares de estos transportadores
se demostraron en cianobacterias que constaban de membranas tilacoides internas en las que se
producen transporte fotosinttico de electrones y evolucin del oxgeno (Synechocystis PCC 6803
y Synechococcus PCC 7942). Synechocystis posee dos ATPases transportadoras de Cu: CtaA, que se
localiza en la membrana citoplasmtica, y PacS, que se dirige a la membrana tilacoide (14,15). El
anlisis de mutantes con una interrupcin gnica en cualquiera de estas ATPasa revel que CtaA
importa Cu1 periplasmic en el citoplasma, mientras que

PacS suministra cobre a la luz tilacoide para el correcto montaje de la plastocianina (una protena
que contiene cobre que interviene en la transferencia de electrones entre el complejo citocromo
b6f y el fotosistema I durante la fotosntesis) y una citocromo oxidasa de tipo caa3 (aceptor
terminal de la respiracin aerbica; 14 y 15). Se demostr que la chaperona de cobre Atx1 estaba
implicada en la transferencia de cobre entre CtaA y PacS (16).

ATPasa de cobre de levadura Ccc2p

El gen que codifica la ATPasa transportadora de Cu1 en la levadura Saccharomyces cerevisiae se

aisl primero en 1995 y se design como Ccc2 debido a su capacidad para complementar el
fenotipo sensible a Ca21 de mutantes csg1 (17). Ccc2p posee todas las caractersticas
caractersticas de las ATPasas transportadoras de Cu1, incluyendo dos motivos CxxC en el dominio
N-terminal (Fig. 1), y se localiza en el compartimento tardo o post-Golgi en la va secretora (18). El
anlisis de mutantes de levadura con alteracin en el gen CCC2 revel que Ccc2p es esencial para
la captacin de hierro de alta afinidad mediada por Fet3, as como para la provisin de cobre al
compartimento de Golgi (17,19). Se supone que Ccc2 cataliza el suministro de cobre del citosol al
lumen de Golgi para la incorporacin biosinttica de metal en Fet3p, una glicoprotena que
contiene multicopper que se dirige a la membrana plasmtica para formar un complejo funcional
con Ftr1 permeasa (19). Cuando est presente en la membrana plasmtica, Fet3p cataliza la
oxidacin de Fe21 a Fe31, que es adems transportada por Ftr1 a clulas de levadura.

De forma similar a las Cu-ATPasas procariticas, Ccc2p recibe su carga metlica de un receptor Cu1
citoslico, la chaperona de cobre Atx1 (20). Atx1 contiene un sitio de unin a metal, CxxC, y as se
asemeja fuertemente al dominio N-terminal nico de unin al cobre de CuATPasas. Los estudios
sobre la levadura Ccc2 ATPasa proporcionaron la primera evidencia para el transporte mediado
por ATP de cobre a la va secretora.
ATPases de Cobre Humano

Los genes humanos homlogos a procaritico CopA y CopB y levadura Ccc2p ATPases fueron
clonados poco despus del descubrimiento de la E. hirae Cu-ATPases (21, 22]. Codifican dos CU-
ATPases conservadas evolutivamente, ATP7A y ATP7B, que han sido intensamente estudiadas
durante las ltimas dos dcadas. Las Cu-ATPasas humanas juegan un doble papel en la
homeostasis del cobre intracelular, ya que son importantes tanto para el suministro de cobre a los
compartimentos objetivo y protenas como para la destoxificacin de las clulas del exceso de
cobre. As, a nivel basal, el Cu-ATP7A celular se encuentra en la red trans-Golgi y cataliza la
translocacin de cobre dependiente de ATP en la va secretora para la incorporacin de metal en
cuproenzimas, tales como dopamina-b-hidroxilasa, tirosinasa, lisil oxidasa , La monooxigenasa
peptidilglicina-a-amidante o la ceruloplasmina (4,23). Sin embargo, bajo la toxicidad del cobre, la
mayora de ATP7A es traficada desde la red trans-Golgi hasta la membrana plasmtica para
eliminar el exceso de cobre fuera de la clula (4,23). El mecanismo por el cual el cobre se extruye
de la clula todava no est claro, pero la creciente evidencia apoya la hiptesis de que el cobre no
es transportado directamente a travs de ATP7A a travs de la membrana plasmtica, sino que es
ms bien exportado a travs de la vescula mediada efluxo. Sin embargo, la actividad ATP7A
asociada con la membrana plasmtica es esencial para el flujo de cobre de las clulas intestinales
hacia los vasos sanguneos para un suministro adicional del metal a otros tejidos. Por lo tanto, la
inactivacin de ATP7A conduce a una grave deficiencia general de cobre en el cuerpo humano,
que se manifiesta por graves anomalas en el desarrollo y tejido conectivo, as como por el
deterioro neurolgico dramtico (4). Este trastorno grave, conocido como enfermedad de Menkes,
es principalmente fatal en la primera infancia. Al igual que ATP7A, ATP7B se localiza en la red
trans-Golgi y puede ser reubicado en el compartimiento vesicular citoplasmtico adyacente a la
membrana plasmtica sobre el aumento del contenido de cobre intracelular (25). Sin embargo, los
patrones de expresin de ATP7A y ATP7B son bastante distintos. ATP7A se expresa en la mayora
de los tejidos, pero no en el hgado, mientras que ATP7B se expresa en abundancia en el hgado y
el cerebro (26]. Por lo tanto, la disfuncin de ATP7B se asocia con la sobrecarga de cobre en el
hgado y el cerebro se manifiesta como neurolgicas progresivas y anomalas hepticas, as como
trastornos neuropsiquitricos (4). Adems de los diferentes patrones de expresin, ATP7A y ATP7B
presentan diferentes propiedades bioqumicas. En comparacin con ATP7B, ATP7A es un
transportador de cobre ms rpido, medido por una mayor tasa de rotacin, y muestra una menor
afinidad aparente por Cu, lo que indica que ATP7A desempea un papel ms importante en el
mantenimiento de una concentracin de Cu intracelular tolerable. En contraste, ATP7B,
Mostrando mayor afinidad aparente por Cu y una tasa de rotacin ms lenta, podra ser una
enzima clave que entrega Cu a las enzimas dependientes de Cu del compartimento de Golgi (27).
De forma similar a Atx1 bacteriano, la chaperona de cobre de mamfero ATOX1 entrega cobre a
bombas ubicadas en clulas humanas de Golgi. El dominio N-terminal de las Cu-ATPasas humanas
contiene seis copias del motivo de unin metlica CxxC (MBS1-6), que se demostr que se unen a
cuatro iones Cu1 (4, 28). Esta es una caracterstica nica de Cu-ATPasas humanas, ya que las
protenas homlogas de otros organismos contienen dos o un motivo CxxC relevante o, mucho
ms raramente, su secuencia N-terminal carece de esta secuencia (CopB en E. hirae; ). Un modelo
de chaperona-Cu-ATPasa interaccin supone que ATOX1 entrega de cobre a los primeros cuatro
sitios de unin de metal MBS1-4, causando cambios conformacionales dentro de la ATPasa
conduce a la transferencia de metal a los MBS5 y MBS6 y, finalmente, a la CPC motivo en el
Transmembrana (29). Se ha confirmado que el dominio N-terminal de ATP7B experimenta cambios
estructurales secundarios y terciarios en la unin de iones de cobre (30). Curiosamente, las
mutaciones en los sitios MBS no afectan la actividad de transporte de cobre a travs de Cu-
ATPasas, lo que sugiere que otros complejos tiol de cobre (por ejemplo, glutatin) pueden
entregar el metal directamente al sitio CPC cuando se excede el sistema ATOX1 Toxicidad del
cobre, ref. 29).

Plantas ATPases de cobre

El nmero de Cu-ATPasas en las plantas es significativamente mayor cuando se compara con otros
organismos. El genoma de Arabidopsis thaliana codifica cuatro homlogos de las ATPasas Cu1 /
Ag1 procariotas y animales (AtHMA5-AtHMA8), clasificadas en el subgrupo P1B1 de P1B-ATPasas y
una P1B4-ATPasa (AtHMA1) con una amplia especificidad para diferentes iones metlicos
divalentes , Incluyendo el cobre, que es estructuralmente diferente de las ATPasas monovalentes
de bombeo de cobre (6). Hasta ahora, se han reportado mltiples isoformas de AtHMA5 AtHMA8
en otras especies de plantas; Sin embargo, la funcin de estas ATPases adicionales es en gran
parte desconocida.

HMA5

AtHMA5 fue la primera ATPasa tipo HMA5 clonada y caracterizada en plantas. Se expresa
predominantemente en el periciclo de las races de A. thaliana y es marcada y exclusivamente
inducida por Cu en plantas enteras (31). Los mutantes de A. thaliana con alteracin en el gen
AtHMA1 son hipersensibles a Cu pero no a otros metales, lo que indica que AtHMA1 es una Cu-
ATPasa altamente especfica. Adems, bajo la toxicidad de Cu, los mutantes athma5 acumulan
altas concentraciones de Cu en las races y exhiben un fenotipo similar a la onda de las puntas de
las races y la inhibicin del crecimiento radicular, indicando claramente la participacin de
AtHMA5 en la compartimentacin del cobre y la desintoxicacin dentro de las clulas radiculares.
Al igual que el Cu / Agtransporting ATPases, AtHMA5 posee la extensin N-terminal con dos
motivos CxxC (Fig. 1]. Al igual que CopA,

Estos dominios de unin a metal de HMA5 interaccionan con chaperones de Cu en el

encaminamiento intracelular de cobre. Sin embargo, como la localizacin subcelular de AtHMA5
no se ha demostrado todava, la funcin precisa de HMA5-como las protenas en la homeostasis
de cobre an queda por aclarar.

La comprensin apropiada del papel biolgico de los HMA5s vegetales es an ms complicada

considerando el descubrimiento de mltiples ortlogos de HMA5 en diferentes especies de
plantas as como los recientes avances en la caracterizacin de tres protenas similares de arroz
(OsHMA5) y pepino (CsHMA5.1 y CsHMA5.2). El cribado de los genomas recientemente
secuenciados de las plantas dicotmicas Populus trichocarpa y Vitis vinifera revel la presencia de
cuatro genes tipo HMA5 que codifican las protenas putativas designadas como PtHMA5.1-
PtHMA5.4 y VtHMA5.1- VtHMA5.4, respectivamente. Algunos de estos genes (PtHMA5.1 y
PtHMA5.3; VvHMA5.1 VvHMA5.3) estn estrechamente relacionados y situados muy juntos en los
mismos cromosomas, lo que sugiere la duplicacin o doble duplicacin de sus antepasados (32).
Tambin se identificaron mltiples genes que codifican HMA5 en otras especies, incluyendo tres
en el monocotiledneas Sorghum bicolor (SbHMA5.1, SbHMA5.2 y SbHMA5.3) y el licofito
Selaginella moellendorffii (SmHMA5.1, SmHMA5.2 y SmHMA5. 3) y dos en arroz (OsHMA4 y
OsHMA5) y pepino (CsHMA5.1 y CsHMA5.2). Entre todos estos genes, slo OsHMA5 y CsHMA5s se
han estudiado en detalle. Ambos genes codifican protenas asociadas con la desintoxicacin del
cobre; Sin embargo, su localizacin subcelular es muy diferente. OsHMA5 est localizada
predominantemente en la membrana plasmtica de las clulas del periciclo de la raz y regin del
xilema de los haces vasculares difusos y es especficamente upregulated por el cobre (33). De
manera similar a las lneas athma5, los mutantes de arroz con disrupcin del gen OsHMA5 exhiben
una acumulacin de Cu aumentada en las races junto con un contenido disminuido de Cu en los
brotes en la etapa vegetativa, lo que sugiere la participacin de OsHMA5 en la translocacin raz-
brote del cobre 33). Por el contrario, CsHMA5.1 y CsHMA5.2 se localizan en membranas
vacuolares y participan en el secuestro de cobre dentro de las vacuolas (34). Aunque son muy
similares entre s, los dos CsHMA5s probablemente no son redundantes, ya que se expresan de
forma diferente en el pepino: la transcripcin de CsHMA5.1 se expresa exclusivamente en las
races, mientras que CsHMA5.2 mRNA es relativamente abundante y ubicuo en todos los rganos
de pepino (34). La expresin de OsHMA5 y CsHMA5s en S.cerevisiae confirm la funcin de estos
transportadores en el transporte de cobre y revel que tanto CsHMA5.1 y CsHMA5.2 actuar como
Cu1 / Ag1 ATPases (33, 34]. Un anlisis bioqumico detallado de CsHMA5s en membranas
vacuolares de levadura mostr que CsHMA5.1 y CsHMA5.2 transportan Cu1 con diferentes
afinidades (Km1 o 0,5 lM, respectivamente), aunque su afinidad para Ag1 es similar (Km 2,5 lM).
Los dominios N-terminales de CsHMA5s contienen los dos motivos CxxC de unin a metal; Sin
embargo, el primer motivo es el mismo en ambas protenas (CSAC), mientras que la composicin
del segundo motivo es diferente (CNSC en CsHMA5.1 y CTSC en CsHMA5.2). Esta diferencia puede
ser la razn de las diferentes afinidades de ambas ATPases con el cobre. Como la actividad Ag-
ATPasa de CsHMA5.1 y CsHMA5.2 es la misma, puede suponerse que los mecanismos de unin de
cobre y plata por bombas de tipo HMA5 son diferentes. Curiosamente, ambas ATPasas de pepino
estn reguladas diferencialmente por la disponibilidad de cobre. CsHMA5.2, similarmente a
AtHMA5 y OsHMA5, es significativamente upregulated bajo exceso de cobre, lo que sugiere la
importante funcin de estas bombas de cobre en la desintoxicacin de cobre (31, 33, 34]. En
contraste, la CsHMA5.1 especfica de la raz no se ve afectada por la toxicidad o deficiencia del
cobre (34). Los diferentes patrones de expresin de rganos y la regulacin diferencial de
CsHMA5.1 y CsHMA5.2 por cobre son las primeras indicaciones de que las Cu-ATPasas ortlogas
en las plantas evolucionaron para mostrar funciones biolgicas distintas. Adems, la diferente
localizacin subcelular de HMA5s en diferentes especies de plantas indica que la funcin de estas
bombas de cobre podra ser ms compleja de lo que se supona y que estudios adicionales de
otros HMA5 homlogos y orthologs son necesarios para dilucidar su significado biolgico para las
plantas.

HMA7 (RAN1, sensible a antagonista 1)

En las plantas, las ATPasas de cobre HMA7 son los parientes filogenticos ms cercanos de las
bombas HMA5 (32, 34). De forma similar a los HMA5s, los genes que codifican HMA7s vegetales
estn presentes en mltiples copias en algunas especies, incluyendo las dos identificadas en la alga
verde Chlamydomonas reinhardtii, el musgo no vascular Physcomitrella patens (PpHMA7.1 y
PpHMA7.2), el lycophyte S. moellendorffii SmHMA7.1 y SmHMA7.2), y las plantas superiores O.
sativa (OsHMA6 y OsHMA7) y P. trichocarpa (PtHMA7.1 y PtHMA7.2, ref. 32). Sin embargo, slo se
encontr una copia del gen HMA7 en los genomas S. bicolor (SbHMA7), A. thaliana (AtHMA7), V.
vinifera (VvHMA7) y C. sativus (CsHMA7) (32,34), lo que sugiere que La duplicacin o el
mantenimiento de duplicado HMA7 genes no fue tan extendida como en el caso de HMA5s. La
primera bomba HMA7 identificada y caracterizada fue AtHMA7 de A. thaliana, previamente
designada como RAN1 (responsiva a antagonista 1). La funcin de AtHMA7 como transportador de
cobre se revel en un mutante de S. cerevisiae con delecin del transportador de cobre homlogo
Ccc2. Cuando se expresa en Dccc2, AtHMA7 suprimi la deficiencia del mutante en la captacin de
hierro, lo que indica que complementa la funcin de Ccc2 en el suministro de cobre a la alta
afinidad ferro Fet3 transportador (35). El anlisis fenotpico de A. thaliana mutantes portadores de
genes AtHMA7 disfuncional proporcion la primera evidencia para el papel clave de esta bomba
de cobre en la va de respuesta de etileno. La mutacin que resulta en una actividad reducida de
AtHMA7 afecta a la especificidad del ligando de los receptores de etileno y hace que los mutantes
sean hipersensibles a los agentes de co-separacin (35, 36). Una fuerte mutacin de prdida de
funcin en AtHMA7 resulta en la prdida completa de la actividad de unin al etileno por

Receptores que activan la respuesta constitutiva de las plantas al etileno y se manifiesta por un
fenotipo letal de roseta (36, 37). Se ha demostrado mediante el ensayo de levadura que el cobre
transportado por AtHMA7 es crucial para la biognesis y la funcin del receptor de etileno ETR1 en
A. thaliana (36). Se plantea la hiptesis de que en las clulas vegetales, AtHMA7 se localiza en el
post-Golgi a travs del cual se suministra el cobre a los receptores de etileno (Fig. 2, referencia
35). Sin embargo, se demostr que los receptores ETR1 eran protenas asociadas al retculo
endoplsmico (ER) (38). Por lo tanto, surge la pregunta de cmo el AtHMA7 Golgilocalizado
suministrara cobre al ETR1 localizado en ER. La interaccin entre HMA7 y los receptores de
etileno podra ocurrir por el trfico retrgrado y antergrado de estas protenas de membrana
entre los subcompuestos de endomembranas de Golgi y ER (39); Sin embargo, se requiere
evidencia clara para la localizacin de Golgi de AtHMA7 para confirmar esta hiptesis. La
estimacin de las protenas HMA7 dentro de la clula es particularmente importante, ya que los
datos recientes indican que HMA7, al igual que HMA5, puede desempear un papel importante en
la desintoxicacin de cobre celular. El gen que codifica HMA7 se identific en dos ecotipos Silene
vulgaris, el coppertolerant Lubietova y el cobre-sensible Stranska skala (40). La protena putativa
codificada por SvHMA7 posee todas las caractersticas estructurales caractersticas de las ATPasas
transportadoras de Cu1 de plantas y es capaz de transportar Cu cuando se expresa en levadura
(40). Cuando se compara con el ecotipo sensible al cobre, la expresin constitutiva de SvHMA7 es
sustancialmente ms alta en las plantas tolerantes al cobre. Adems, se encontr que la
abundancia de transcripcin de SvHMA7 era significativamente mayor en ambos ecotipos tras la
exposicin de las plantas al exceso de cobre (40). Estos datos sugieren que la estrategia de
tolerancia al Cu de las plantas de Lubietova implica una elevada expresin constitutiva de SvHMA7
y una regulacin positiva de la protena SvHMA7 en respuesta a altos niveles de cobre en el suelo.

HMA6 (PAA1) y HMA8 (PAA2)

Los anlisis filogenticos de las P1B-ATPasas vegetales o el subgrupo P1B-1 de esta subfamilia, que
contienen slo las putativas Cu1-ATPasas, revelan que los HMA6 y HMA8 son los homlogos ms
cercanos entre s y forman un grupo claramente separado entre todos los HMA de las plantas (32,
34). Comparten un antepasado comn similar a la ATPasa transportadora Cu21 CtaA de la
cianobacteria fotosinttica Synechocystis PCC 6803 (41). Durante la evolucin de las plantas
terrestres, los genes que codifican PacS y Atx1 se han perdido, mientras que el gen que codifica el
CACA tilacoide se duplic, dando lugar a HMA6 y HMA8 (41). Los genes que codifican HMA6 y
HMA8 han sido identificados en todos los genomas secuenciados recientemente de plantas
superiores, incluyendo P. patens, S. moellendorffii, O. sativa, P. trichocarpa, S. bicolor, A. thaliana,
V. vinifera, C. Sativus y P. trichocarpa (32, 34). Adems, el gen HMA6 tambin est presente en la
planta baja C. reinhardtii (alga) y se multiplica en los genomas de P. patens y P. trichocarpa, que
codifican dos protenas altamente homlogas, PpHMA6.1 y PbHMA6.2 o PtHMA6. 1 y PtHMA6.2,
respectivamente (32). En contraste con las plantas terrestres, el alga C. reinhardtii perdi el gen
que codifica HMA8 (32). Es sabido que los organismos fotosintticos inferiores, incluyendo a C.
reinhardtii, son capaces de reemplazar la plastocianina por un hierro que contiene citocromo c6
en condiciones de limitacin de cobre, mientras que en las plantas la plastocianina es
absolutamente esencial para la fotosntesis y no puede ser reemplazada (42). El desarrollo por C.
reinhardtii de un mecanismo alternativo para la transferencia de electrones en las reacciones
dependientes de la luz de la fotosntesis podra explicar por qu no haba necesidad de mantener
el gen similar a HMA8 en esta especie. Hasta el momento, la nica informacin sobre la funcin y
regulacin de HMA6 y HMA8 en plantas proviene de estudios sobre las dos CuATPases AtHMA6
(PAA1) y AtHMA8 (PAA2) de A. thaliana.

Ambos estn dirigidos al cloroplasto, pero finalmente se localizan en diferentes membranas

cloroplsticas. AtHMA6 est asociado con la membrana de la envoltura interna del cloroplasto,
mientras que AtHMA8 est dirigido a las membranas de los tilacoides (Figura 2, ref 43). Los
mutantes de A. thaliana portadores de la prdida de funcin de AtHMA6 presentan un contenido
de cobre cloroplstico disminuido, una actividad de Cu / ZnSOD estromal reducida y un contenido
de plastocianina, un deterioro severo en el transporte de fotosntesis de electrones (43,44), lo que
indica que AtHMA6 es esencial para el suministro De cobre desde el citosol hasta el
compartimento cloroplstico. En comparacin, los mutantes con una mutacin de prdida de
funcin en el gen AtHMA8 siguen siendo capaces de transportar el cobre a los cloroplastos, pero
muestran una reduccin dramtica del contenido de Cu y plastocianina y una deficiencia en el
transporte de electrones cuando se comparan con plantas silvestres, lo que indica El papel
esencial de AtHMA8 en la importacin de cobre en el lumen thylakoid (43). La mutacin knockout
doble en los genes AtHMA6 y AtHMA8 es letal en la etapa de plntulas, destacando la importancia
de Cu-ATPases en el suministro de cobre al cloroplasto. Basndose en el ensayo de localizacin y
en los anlisis fenotpicos mutantes, se propuso que AtHMA6 y AtHMA8 suministraran cobre al
cloroplasto secuencialmente, primero sobre la envoltura hasta el estroma (AtHMA6), de modo que
pudiera incorporarse a Cu / ZnSOD ya continuacin a travs del Thylakoid (AtHMA8) a la luz de
thylakoid, donde el metal se une a la protena de destino plastocyanin (43). Este modelo de
enrutamiento de Cu1 en los cloroplastos de las plantas ha sido mejorado basndose en los
conocimientos actuales sobre la interaccin molecular de las chaperonas de cobre de las plantas
con las Cu1-ATPasas cloroplsticas. Recientemente, se ha demostrado que dos chaperones de
cobre diferentes, AtPCH1 y AtCCS2, proporcionan Cu1 especficamente a AtHMA6 o AtHMA8,
respectivamente (45). Curiosamente, AtPCH1 es una forma de empalme alternativa corta de
AtHMA6 correspondiente al dominio de unin a metal pesado N-terminal (HMBD) de esta bomba
de cobre (45). Este evento de alternancia fue observado por primera vez en el alga C. reinhardtii;
Sin embargo, el anlisis exhaustivo de los genomas de las plantas tempranas divergentes y de la
tierra apoyadas por el anlisis expresado de la etiqueta de la secuencia revel que las
transcripciones cortas de PCH1 son ubicuas en diversos linajes de la planta, representando un
mecanismo ancestral de la homeostasis Cu1. A diferencia de AtPCH1, AtCCS no se produce por un
empalme alternativo de AtHMA8 pero se expresa a partir del gen AtCCS. Estudios anteriores
demostraron que en Arabidopsis, AtCCS se localiza en el cloroplasto y tambin suministra cobre al
estroma Cu / ZnSOD por una interaccin protena-protena (43). El suministro de Cu1 de AtCCS a
AtHMA8 tambin puede producirse mediante una interaccin protena-protena que implica el
dominio de unin a Cu1 N-terminal de AtCCS, que es homloga a la HMBD N-terminal de las Cu1-
ATPasas, as como a la Atx1- Como las chaperonas de cobre (45).

La reciente caracterizacin bioqumica de AtHMA6 y AtHMA8 producida heterlogamente en E.

coli y Lactococcus lactis ha confirmado directamente las actividades de transporte de Cu1-ATPasa
y Cu1 de ambas bombas de cobre (45-47). Se demostr que AtHMA6 y AtHMA8 forman
intermedios fosforilados transitorios en presencia de ATP, Cu1 (HMA8) o Cu1 / Ag1 (HMA6) y
condiciones reductoras (46,47). Curiosamente, cuando se estudiaron en membranas aisladas de L.
lactis, AtHMA6 y AtHMA8 mostraron propiedades enzimticas diferentes. Es decir, la
concentracin de cobre requerida para la fosforilacin completa de AtHMA8 a partir de ATP era
aproximadamente tres veces menor (1 lM) que la requerida para la activacin mxima de AtHMA6
(3 lM), lo que sugiere que AtHMA8 tiene una mayor afinidad aparente para Cu1 que AtHMA6 (46 ,
47). Adems, la tasa de desfosforilacin AtHMA8 fue significativamente ms lenta que la
observada para AtHMA6, probablemente debido a las diferencias en las propiedades
electrostticas de las cavidades de liberacin de Cu de ambas enzimas.

La superficie del sitio de liberacin de Cu de AtHMA6 est en gran parte cargada positivamente de
modo que podra liberar los iones Cu1 positivos ms fcilmente que los residuos correspondientes
en AtHMA8, que parecen estar cargado principalmente negativamente (47). Las actividades
catalticas dismiles de AtHMA6 y AtHMA8 tambin pueden resultar de las diferentes cinticas de
la interaccin de ambas bombas con sus receptores cognoscitivos Cu1, ya que tanto AtHMA6
como AtHMA8 entregan cobre a diferentes protenas, metalocaperona o plastocianina,
respectivamente (47).

HMA1

Las ATPas de tipo HMA1 pertenecen al subgrupo P1B4 de P1BATPasas, incluidas las protenas
presentes slo en bacterias y plantas. Sorprendentemente, la planta P1B4-ATPases tambin est
implicada en el transporte de cobre. En Arabidopsis, AtHMA1 se dirige a la envolvente interna del
cloroplasto (Figura 2) y exhibe la actividad Cu-ATPasa cuando se estudia en membranas de
envoltura de cloroplasto purificadas (48). Cuando se expresa en S. cerevisiae, AtHMA1 tambin
contribuye a la homeostasis intracelular de cobre de la levadura (48). El motivo rico en His que
est presente en el dominio N-terminal de AtHMA1 (Figura 1) es necesario para el transporte del
metal, ya que su delecin afecta negativamente a la actividad de transporte de protenas (48). Este
motivo de poli-His caracterstico de las protenas de unin a Zn (II) probablemente permite que
AtHMA1 transporte no slo cobre sino tambin zinc, ya que los mutantes knockout Arabidopsis
athma1 son significativamente ms sensibles al cobre y al cinc cuando se comparan con las plantas
silvestres (48, 49). Adems, a nivel celular, la interrupcin del gen que codifica AtHMA1 conduce a
una mayor acumulacin de Zn en los cloroplastos, a una disminucin del contenido de cobre del
cloroplasto ya una reduccin de la actividad cloroplstica de Cu / Zn superxido dismutasa (Cu /
Zn-SOD), lo que Papel de AtHMA1 en la translocacin Cu / Zn entre el citosol y los cloroplastos (48,
49). Curiosamente, la

Expresin heterloga de AtHMA1 en levadura revel que

Al lado de zinc y cobre, AtHMA1 tambin transporta Cd y

Ca (50). Anlisis bioqumicos de la actividad ATPasa en levaduras

Fraccin microsomal confirm que AtHMA1 es activado por

Mltiples iones metlicos (zinc, cobre, cadmio y cobalto) y es

Capaz de transportar el calcio, en consonancia con la presencia

De la caracterstica de segmento tallo sensible a la tapsigargina

Para las bombas de tipo SERCA (sarcoplasmic / ER Ca21 ATPase)

AtHMA1 (50). Los datos generales indican que AtHMA1

Es una ATPasa de metales pesados / Ca21 implicada en el transporte de mltiples

Cationes metlicos entre el cloroplasto y el citosol.

Conclusiones y preguntas

La investigacin de la regulacin y las propiedades de fijacin de metales de las Cu-ATPasas de

diferentes organismos revel que estas bombas ATP son mecanismos evolutivamente
conservadores que median la importacin, distribucin, secuestro y exportacin de cobre celular.
Contribuyen a la compleja red de enrutamiento intracelular de Cu a travs de las interacciones con
las chaperonas del sensor de cobre citoplsmico soluble y las protenas aceptoras dependientes de
Cu localizadas en el citosol y los compartimentos de Golgi o cloroplastos. Por lo tanto, su actividad
estrictamente regulada es esencial para la funcin normal de todos los organismos vivos. La
disponibilidad creciente de recursos genmicos permite un rpido progreso en los estudios sobre
Cu-ATPasas en organismos no modales y revela algunas diferencias en el papel fisiolgico de estas
protenas esenciales en varias especies. Adems, el descubrimiento de mltiples isoformas de
bombas de cobre en plantas sugiere que el transporte de cobre impulsado por ATP en estos
organismos puede ser ms sofisticado y complejo cuando se compara con otros organismos. Se
necesitan estudios futuros para determinar la funcin de estas ATPases adicionales para
comprender completamente los mecanismos moleculares de la homeostasis del cobre en las
clulas vegetales. La otra cuestin intrigante se refiere a la doble funcin de las ATPasas humanas
en la biosntesis cuproprotena y la extrusin de Cu, relacionados con su relocalizacin
dependiente de Cu dentro de las clulas humanas.