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2009-08-19
~~.
I ONTEC
E: MICROBIOLOGY OF FOOD ANO ANIMAL FEEDING
STUFFS - WITH HORIZONTAL METHOD FOR THE
ENUMERATION OF YEASTS ANO MOULDS. PART 1:
COLONY COUNT TECHNIQUE IN PRODUCTS WATER
ACTIVITY GREATER THAN 0,95.
I.C.S.: 07.100.30
.
El Instituto Co Iom birano de Normas Tcnicas
2269yd Certificacin,
1993
ICONTEC, es el organismo
nacional de normalizacin, segn el Decreto e .
de que responda en
de esta norma a
3MC
ALlM
TORIO LTDA
ALPINA
ANNAR D
ARCHIVO
TORIO DE
MAYOR DE BO
ASBIOQUIM LTDA
BIANLlSIS
BIOCONTROL LTOA
BIOQUILAB LTOA
BIOTRENDS LABORATOR
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA
CARULLA VIVERO SA OBILOGOS ASOCIADOS
CONGELAGRO SA ULAB LTDA
CASA LUKER S.A PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
REPES & WAFFLES SA PURIFICACiN Y ANLISIS DE FLUIDOS
ONGELAGRO LTDA
ORPOLAC - CORPOICA QUALA SA
COKAPKA SECRETARIA DISTRITAL DE SALUD DE
NZIPN LABORATORIO SA BOGOT
SUIZO SA
I DUSTRIAS ALIMENTICIAS ZEN SA
I DUSTRIA PRODUCTORA DE ACEITES UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
ENOVABLES UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VECOL SA
I STITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
CIONAL DE COLOMBIA VlLASECA LTDA
VITROFARMA SA
Adems
. . de las ant enores
. e C
sIgUientes empresas'. ,n onsulta Pblica el Proyect o se puso a consideracin de las
ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales Y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCiN DE NORMALIZACiN
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
CONTENIDO
Pgina
NTRODUCCIN 1
ALCANCE . . 2
REFERENCIAS N ....., 2
.................................... 2
5 ...................
3
51
52 ............................... 4
6. . 6
7. MUESTREO . . 6
8. PREPARACiN DE LA MU YO 7
9. PROCEDIMIENTO 7
9. INOCULACiN E INCUBACiN 7
Pgina
BIBLIOGRAFA 10
DOCUMENTO DE REFERENCIA 11
NTC 5698-1
acuosa (Aw)
as aplicaciones del
C 5698-2 pueden no
En este cas ueden utilizar mtodos
es abso necesario por razones
todo el para aplicar el mtodo
en la NTC 5698-2 , en la medida de lo
1 de 11
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
1. ALCANCE
2. REFRENCIAS NORMATIVAS
NTC 4491 (todas las partes), Microbiologa de alimentos y alimentos para animales.
preparacin de muestras para ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para anlisis
microbiolgico. Parte 1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y de
diluciones decimales.
NTC 4092 Microbiologa de alimentos y de alimentos para animales. reglas generales para el
anlisis microbiolgico.
GTC 171, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Gua para la preparacin y
produccin de medios de cultivo. Gua general para los ensayos de desempeo de medios de
cultivo.
ISO 8261, Milk and Milk Products. General Guidance for the Preparation of Test Samples, tnltie!
Suspensions and Decimal Dilutions for Microbiological Examinations.
3. TRMINOS Y DEFINICIONES
Para los propsitos de este documento, se aplican los siguientes trminos y definiciones.
NOTA Existen algunas formas intermedias y la distincin entre una levadura (vase el numeral 3.1) y un moho
(vase el numeral 3.2) puede ser arbitraria.
3.1 Levadura. Microorganismo aerbico mesoflico que, a 25 "C usando un medio de agar
micolgico bajo las condiciones descritas en esta NTC, desarrolla colonias (vase el numeral 3.4)
redondas brillantes o mate sobre la superficie del medio, que usualmente tienen un contorno regular y
una superficie ms o menos convexa.
2
NTC 5698-1
Las levaduras dentro, en lugar de sobre un medio, desarrollan colonias redondas, lenticulares.
Los mohos dentro, en lugar de sobre un medio, pueden desarrollar colonias redondas, lenticulares.
PLO Clulas vegetativas, grupos de clulas, esporas, cmulos de esporas o una porcin de micelio de
o de cultivo selectivo
una cantidad
do diluciones
ocdurante 5 d. Si es
durante 1 d a 2 d.
on respecto a la prctica actual de laboratorio, vase la NTC 4491 (todas las partes).
DILUYENTE
Generalidades
la NTC 4491 (todas las partes), ISO 861 y las normas especficas que tratan de los
uctos en cuestin.
3
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
NOTA Es posible adicionar agentes tensoactivos como poli(oxietileno)sorbatitan rnonooleato" sdico [0,05 %
(concentracin de masa)] a los diluyentes para reducir la formacin de grumos de esporas de mohos y conidias
(referencia [2]). .
Excepto para la preparacin especfica de la muestra de ensayo, se recomienda utilizar como diluyente caldo de
agua de peptona al 0,1 % (concentracin de masa).
5.2.1 Agar de Dicloran rosa de bengala y cloranfenicol (DRBC) (referencias [3] y [4])
5.2.1.1 Composicin
NOTA Teniendo en cuenta la legislacin nacional vigente se puede considerar la utilizacin de medios de cultivo
de la GTC 125; para reportar segn las indicaciones de esta Norma Tcnica Colombiana se debe utilizar el medio de
cultivo referenciado en el mismo.
5.2.1.2 Preparacin
5.2.1.2.1 Generalidades
Elabore una suspensin en agua de todos los ingredientes, excepto el cloranfenicol, y lleva a
ebullicin hasta disolverlos completamente. Si es necesario, ajuste el pH (vase el numeral 6.4)
de modo que despus de la esterilizacin est en 5,6 0,2 a 25 "C.
1)
Tween 80 es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta informacin se brinda
para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin de este producto por parte
de ISO.
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
nfre inmediatamente el medio en un bao de agua (6.3) conservado a una temperatura entre
4 "C y 47 "C. Enfre hasta alcanzar temperatura inferior a 50 "C y dispense en cantidades de
5 mi en cajas de Petri estriles (vase el numeral 6.6).
ermita que el medio se solidifique y, si es necesario, seque la superficie de las placas tal
omo se describe en NTC 4092 y GTC 171 (todas las partes).
tilice inmediatamente o almacene en un lugar oscuro, segn la GTC 171 (todas las partes)
asta que se necesite.
RECAUCIN evite la exposicin del medio a la luz ya que los productos de la ruptura citotxica pueden dar
amo resultado una subestimacin de la micoflora en las muestras.
pigmentos que
presentes en el
nte solucin de
ZnS04 7H20 19;
.1.3.1 Generalidades
5. .1.3.2 Productividad
In ubacin: 5 d a 25 C 1 C
C pas: Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
2) Ejemplo de un producto disponible en el comercio. Esta informacin se suministra para conveniencia de los
usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin del producto por parte de ICONTEC .
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
Incubacin: 5 d a 25 -c 1 -c
Cepas: Escherichia coli ATCC 24922 o
Bacillus subtilis ATCC 6633
o cepas registradas como equivalentes en otras colecciones de
bacterias.
6.3 Bao de agua, o equipo similar, con capacidad de funcionar entre 44 "C y 47 "C.
6.5 Frascos, matraces y tubos, para ebullicin y almacenamiento del medio de cultivo y
para hacer las diluciones.
6.6 Cajas de Petri, estriles, de vidrio o plstico, con un dimetro de 90 mm a 100 mm.
6.7 Microscopio, para diferenciar las levaduras de las clulas bacterianas (campo
luminoso, amplificacin de 250 veces a 1 000 veces).
7. MUESTREO
El muestreo no es parte del mtodo que se especifica en esta NTC. El muestreo debera
11 arse a cabo de acuerdo con la norma especfica, adecuada al producto en cuestin. Si no
e iste norma especfica, se recomienda que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre
e e tema.
pare la muestra de ensayo segn la NTC 4491 (todas las partes), NTC 4092 y la norma
e ecfica que trate del producto en cuestin. Si no existe norma especfica, se recomienda
q e las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre este tema.
9. PROCEDIMIENTO
9. PORCiN DE ENSA
ipeta, Agite la
partculas que
9.
9..1 Sobre una ), utilizando una pipeta o
ropipeta estril
ida, o 0,1 mi de la su
pita estas operaciones con diluciones posteriores utilizando una pipeta o micropipeta estril
ra cada dilucin decimal.
9..2 Disperse el lquido sobre la superficie de la placa de agar con un esparcidor estril
(v ase el numeral 6.8) hasta que el lquido se absorba por completo en el medio.
mbin se puede utilizar la inoculacin de las placas mediante el mtodo de vertido en placa,
ro en este caso la equivalencia de los resultados se debe convalidar en comparacin a la
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
9.2.3 Incube aerbicamente en posicin invertida las placas preparadas (vanse los numerales
9.2.2 y 6.1) a 25 "C 1 "C durante 5 d. Si es necesario, deje las placas de agar en reposo en
luz natural difusa durante los 2 primeros das.
Se recomienda incubar las cajas (vase el numeral 6.6) en una bolsa plstica abierta con el fin
de no contaminar la incubadora en el caso de diseminacin de los mohos fuera de las cajas.
NOTA 1 Los mtodos de enumeracinpara levadurasy, en especial para los mohos, son imprecisosdado que
consisten en una mezcla de micelio y esporas sexuales y asexuales. Las cantidadesde unidades formadorasde
colonias dependendel grado de fragmentacindel micelio y de la proporcinde esporas capaces de crecer en el
medioen la placa.
NOTA2 A menudose presentala no linealidadde los recuentosde las placasque contienenla dilucin,es decir,
las diluciones de 10 veces de la muestra con frecuencia no dan como resultado reduccionesde 10 veces en los
nmerosde colonias recuperadasdel medio en la placa. Esto se ha atribuido a la fragmentacindel micelio y a la
ruptura de los cmulos de esporas durante la dilucin adems de la inhibicin competitiva cuando hay un gran
nmerode coloniassobre las placas.
PRECAUCiN las esporas de los mohos se dispersanen el aire con gran facilidad. Manipulelas cajas de Pe tri
con cuidadopara evitar el desarrollode coloniassatlitesque ocasionaranuna sobreestimacinde la poblacinen
la muestra.
Si es necesario, realice un examen (vase el numeral 6.9) con microscopio (vase el numeral 6.7)
con el fin de diferenciar entre clulas de levaduras o de mohos y bacterias provenientes de las
colonias.
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N RMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
d) todos los detalles operativos que no se especifican en esta norma o que se consideran
opcionales, junto con los detalles de todos los incidentes que hayan podido tener
influencia en los resultados de ensayo,
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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 5698-1
BIBLIOGRAFA
[1] Bell, C., Neaves, P., Williams, AP. Food Microbiology and Laboratory Practice.
Blackwell, Oxford, 2005. 324 p.
[2J Beuchat, L.R. Media for Detecting and Enumerating Yeasts and Moulds. In: Corry,
J.E.L., Curtis, G.D. w., Baird, R.M, Editors. Handbook of Culture Media for Food
Microbiology, pp. 369-386. Elsevier, Amsterda m, 2003. (progress in Industrial
Microbiology, Vol 37).
[3J Beuchat, L.R., Frandberg, E., Deak, T., Alzamora, S.M, Chen, J., Guerrero, AS.,
Lpez-Malo, A, Ohlsson, t., Olsen, M., Peinado, J.M, Schenurer, J., De Siloniz, MI.,
Tornai-Lehoczki, J. (2001) Performance of Mycological Media in Enumerating
Desiccated Food Spoilage Yeasts: An Interlaboratory study. Int. J. Food Microbiol. 2001,
70, pp 8-96.
[4J King Jr., AD., Hocking, Ad., Pitt, J.I. (1979) Dichloran-Rose Bengal Medium for
Enumeration and Isolation of Moulds from Foods. Appl. Environ. Microbiol. 1979, 37, pp.
959-964.
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