Replicacin de ADN

El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es

decir, sintetizar una copia idntica). De esta manera de una molcula de ADN nica, se
obtienen dos o ms "clones" de la primera. Esta duplicacin del material gentico se
produce de acuerdo con un mecanismo semiconservativo, lo que indica que las dos cadenas
complementarias del ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la sntesis
de una nueva cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva doble
hlice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la complementariedad entre
las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante
propiedad de reproducirse idnticamente, lo que permite que la informacin gentica se
transmita de una clula madre a las clulas hijas y es la base de la herencia del material
gentico.

La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes de
hidrgeno entre las bases complementarias liberndose dos hebras y la ADN
polimerasa sintetiza la mitad complementaria aadiendo nucletidos que se encuentran
dispersos en el ncleo. De esta forma, cada nueva molcula es idntica a
la molcula de ADN inicial.

La replicacin empieza en puntos determinados: los orgenes de replicacin.

Las protenas iniciadoras reconocen secuencias de nucletidosespecficas en esos puntos y
facilitan la fijacin de otras protenas que permitirn la separacin de las dos hebras
de ADN formndose una horquilla de replicacin. Un gran nmero
de enzimas y protenas intervienen en el mecanismo molecular de la replicacin, formando
el llamado complejo de replicacin o replisoma. Estas protenas y enzimas son homlogas
en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias.
Proceso general

La helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la doble hlice permitiendo el avance de la

horquilla de replicacin.

La topoisomerasa impide que el ADN se enrede debido al sper enrollamiento producido por
la separacin de la doble hlice.
 Las protenas SSB se unen la hebra discontinua de ADN, impidiendo que sta se una consigo
misma.

La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra

adelantada y de forma discontnua en la hebra rezagada.

La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la sntesis de la cadena

complementaria a la cadena rezagada.

La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciacin, elongacin y terminacin.

El cebador: son pequeas unidades de RNA que se unen a los fragmentos para que la ADN
polimerasa reconozca donde debe unirse.

Los cebadores los quita la pol. I y coloca bases a la cadena en crecimiento por la ligasa.
Replicacin en E. coli
Iniciacin

Mediante consumo de ATP en direccin a la horquilla de replicacin, es decir, en direccin

5' 3' en la hebra rezagada y 3' 5' en la hebra adelantada, rompiendo los puentes de
hidrgeno que mantienen unida la doble hlice.3 El siguiente conjunto de protenas
reclutadas son las denominadas protenas SSB (single-stranded DNA binding proteins,
protenas ligantes de DNA monocatenario) encargadas de la estabilizacin del ADN
monocatenario generado por la accin de las helicasas, impidiendo as que el ADN se
renaturalice o forme de nuevo la doble hlice, de manera que pueda servir de molde. Estas
protenas se unen de forma cooperativa, por lo que su unin al DNA conforme avanza la
helicasa es rpida. Por otro lado, conforme las helicasas van avanzando se van
generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por delante de la horquilla y si
stos no fueran eliminados, llegado a un punto el replisoma ya no podra seguir avanzando.
Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los superenrollamientos
cortando una o las dos cadenas de ADN y pasndolas a travs de la rotura realizada,
sellando a continuacin la brecha.2
Elongacin

Enzimas que participan en la replicacin de E. coli: helicasa, protenas SSB, topoisomerasa, ARN
primasa, Holoenzima ADN Pol III

En el siguiente paso, la holoenzima ADN Pol III cataliza la sntesis de las nuevas cadenas
aadiendo nucletidos sobre el molde. Esta sntesis se da bidireccionalmente desde cada
origen, con dos horquillas de replicacin que avanzan en sentido opuesto. Cuando el avance
de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando dos burbujas se tocan,
se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado.

Puesto que la holoenzima ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que
una ARN primasa catalice la formacin de un fragmento corto especfico
de ARN llamado cebador, que determinar el punto por donde la ADN
polimerasa comienza a aadir nucletidos. As, durante la sntesis, en cada horquilla de
replicacin se van formando dos copias nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una
de las dos hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciacin, pero debido a la
unidireccionalidad de la actividad polimerasa de la ADN Pol III, que slo es capaz de
sintetizar en sentido 5 3', la replicacin slo puede ser continua en la hebra adelantada;
en la hebra rezagada es discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki.
La mitad del dmero de la holoenzima ADN Pol III sintetiza la hebra adelantada y la otra
mitad la hebra rezagada.3

Hebra rezagada: sntesis de cebadores, unin de fragmentos de Okazaki y eliminacin de los

cebadores

Enzimas que participan en la eliminacin de cebadores y unin de los fragmentos de Okazaki.

El cebador de ARNest pintado en azul y el ADNque lo reemplaza en naranja
En la hebra rezagada, cuando la ADN Pol III hace contacto con el extremo de
otrofragmento de Okazaki contiguo, el cebador de ARN de ste es eliminado y los dos
fragmentos de Okazaki de ADN recin sintetizado son unidos. Una vez se han juntado
todos se completa la doble hlice de ADN. La eliminacin de cebadores tambin se da en la
hebra conductora, de sntesis continua, pero debido a que en sta hay un solo cebador es un
proceso que slo tiene lugar una vez, mientras que en la hebra rezagada se dar tantas veces
como fragmentos de Okazaki haya. Para ello intervienen una serie de enzimas: la
enzima RNasa H ("H" de hbrido ARN-ADN) elimina el cebador a excepcin
del ribonucletido directamente unido al ADN; la ADN Pol I elimina este ribonucletido
gracias a su actividad exonucleasa 5' 3' y rellena el hueco con ADN quedando una
molcula completa a excepcin de una rotura (o "mella") entre el extremo 3'-OH libre y el
fosfato 5' de la cadena reparada; por ltimo, la ADN ligasa sella esa rotura catalizando la
reaccin de condensacin entre el grupo fosfato y el OH de
ladesoxirribosa del nucletido contiguo, completando el enlace fosfodister; para ello, es
preciso hidrolizar una molcula de ATP.2
Terminacin
Terminacin de los genomas lineales
El final de la replicacin se produce cuando la ADN polimerasa III se encuentra con una
secuencia de terminacin. Se produce entonces el desacople de todo el replisoma y la
finalizacin de la replicacin.
EXPRESIN DEL MENSAJE GENTICO

La informacin gentica es la causa de la sntesis de protenas especficas, entre ellas las enzimas,
responsables de las caractersticas estructurales y funcionales de un organismo.

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

El ADN forma una copia de parte de su mensaje sintetizando una molcula de ARN mensajero
(transcripcin), la cual constituye la informacin utilizada por los ribosomas para la sntesis de una
protena (traduccin).

Flujo de la informacin gentica.

ARN:

Por tanto, el mensaje gentico se realiza en dos etapas sucesivas, en las que el ARN es un
intermediario imprescindible.

TIPOS:

ARN mensajero

ARN ribosmico

ARN transferente

ARN mensajero:

Copia de una parte del ADN

Informacin utilizada por los ribosomas para unir los aa en el orden adecuado y formar
una protena concreta.

Vida muy corta.

Monocistrnico

3-5% del ARN celular.

ARN ribosmico:

Forma parte de los ribosomas (junto con un conjunto de protenas bsicas).

 Tambin se denomina ARN estructural.

Participa en el proceso de unin de los aa para sintetizar las protenas.

80-85% del ARN celular total

ARN transferente:

TRANSCRIPCIN

Transcripcin = sntesis de ARN.

Ocurre en el interior del ncleo.

Necesita:

Una cadena de ADN que acte como molde.

Enzimas: ARN-polimerasa.

Ribonucletidos trifosfato de A, G, C y U.

Proceso:

Iniciacin
 Elongacin

Terminacin

INICIACIN

- Comienza cuando la ARN-polimerasa reconoce en el ADN que se va transcribir una seal

que indica el inicio del proceso = centros promotores.
- Centros promotores = secuencias cortas de bases nitrogenadas.

ELONGACIN

- Adicin de sucesivos ribonucletidos para formar el ARN.

- ARN-polimerasa: lee ADN 3-5 sntesis ARN 5-3
- La cadena de ARN sintetizada es complementaria de la hebra de ADN que se utiliza como
molde.

TERMINACIN

- La ARN-pol reconoce en el ADN unas seales de terminacin que indican el final de la

transcripcin.
- Implica el cierre de la burbuja formada en el ADN y la separacin de la ARN-pol del ARN
transcrito.
Informe laboratorio de bioqumica
Replicacin y transcripcin ADN

DANIEL GUZMAN VERA- LUIS GUZMAN VERA

PROFESOR: ROBERTO SAAVERDA

20/06/2011