ORGENTEC Diagnostika GmbH PRECAUTIONS D'USAGE

Carl-Zeiss-Strae 49 1. Tous les ractifs de cette trousse sont strictement rservs un usage de diagnostic in vitro.
55129 Mainz - Germany
2. Ne pas mlanger les ractifs provenant de trousses de lots diffrents.
Phone: +496131/92580 3. Les composs contenant du srum humain se sont rvls ngatifs pour les antignes HBs et
HIV selon des mthodes approuves par la FDA. Cependant, comme aucune mthode ne peut
Fax: +496131/925858
garantir l'absence d'antigne HBs ou HIV, tous les ractifs contenant du srum humain doivent tre
Internet : www. orgentec.com manipuls comme des produits potentiellement infectieux.
4. Eviter le contact direct avec le TMB (3,3,5,5-ttramthyl-benzidine). Le cas chant, laver abondam-
ment l'eau et au savon.
5. Eviter le contact direct avec la solution d'arrt qui contient de l'acide. Le cas ch-
ant, laver abondamment l'eau et consulter un mdecin.
6. Certains ractifs, comme les contrles, le tampon de dilution des chantillons et la solution de lavage,
Mode demploi contiennent de l'azide de sodium comme conservateur. L'azide de sodium pur (NaN3) est hautement
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toxique. Aux concentrations utilises dans nos ractifs, il n'est cependant pas dangereux. Nous recom-
mandons malgr tout de bien respecter les bonnes pratiques de laboratoire (voir 7., 8., 9.).
7. Certains ractifs contiennent du Proclin 300 comme conservateur. Lors d'une ventuelle limination de
ractifs via l'vier, veiller bien rincer afin de diluer en dessous des concentrations actives.
8. Pour manipuler les chantillons ou les ractifs, porter des gants jetables et se laver abondamment les
ORG 5BM beta-2-Microglobulin mains aprs usage.
9. Ne pas pipeter avec la bouche.
Mthode de dtection immunoenzymatique pour la dtermination quan-
10. Ne pas manger, boire, fumer ou se maquiller dans les zones de manipulation des chantillons et des
titative de la 2-microglobuline dans l'urine ou le srum ractifs.
11. Eviter le contact entre la solution tamponne au peroxyde et des matriaux facilement oxydables ; une
temprature leve peut provoquer une combustion spontane.
Suivre les recommandations pour raliser le contrle qualit adapt aux laboratoires d'analyse mdica-
Pour usage diagnostic in-vitro uniquement. le, en testant des srums de contrle et/ou des srums pools. Respecter les rglementations lgales
concernant la manipulation de tous les ractifs, les contrles et les chantillons de srum.
CONTENU DU COFFRET
Qt : 1 Microplaque scable compose de 12 barrettes de 8 puits, recouverts d'anticor- STOCKAGE ET STABILITE
ps de classe IgG polyclonaux de lapins anti-2-microglobuline humaine haute- 1. Stocker la trousse entre 2 et 8C.
ment purifie. Prt l'emploi.
2. Conserver les barrettes non utilises dans le sachet scell avec les dessicants.
6 flacons, 1.5 ml chacun Calibrateurs (A-F) 2-microglobuline dans une matrice srum/tampon (PBS,
3. Les ractifs sont stables jusqu' la date de validit de la trousse.
BSA, NaN3<0.1% (pds/pds)) aux concentrations de 0, 0.75, 1.5, 3, 6 et 12 g/ml.
Prt l'emploi. 4. Ne pas exposer les ractifs la chaleur, au soleil ou la lumire vive pendant le stockage ou lors de leur
utilisation.
2 flacons, 1.5 ml chacun Contrles 2-microglobuline positif (1) et ngatif (2) dans une matrice
srum/tampon (PBS, BSA, NaN3<0.1% (pds/pds)). Leurs concentrations sont 5. Une fois dilus, les tampons de dilution des chantillons et de lavage sont stables pendant 30 jours 2-
indiques sur le certificat de contrle. Prt l'emploi. 8C.
1 flacon, 20 ml Tampon de dilution des chantillons (Tris, NaN3<0.1% (pds/pds)), jaune, concen-
tre 5x MATERIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
1 flacon, 15 ml Conjugu (PBS, PROCLIN 300 <0.5% (vol/vol)), rouge clair, contenant des anticor- Divers matriels de laboratoire
ps polyclonaux de lapin anti-2-microglobuline humaine, marqus la peroxy-
- Lecteur de microplaque pouvant raliser des mesures en point final 450 nm.
dase de raifort. Prt l'emploi.
- Pipette multicanaux ou multi-pipette pour 100 l
1 flacon, 15 ml Solution substrat TMB. Prt l'emploi.
- Mlangeur Vortex
1 flacon, 15 ml Solution d'arrt (acide). Prt l'emploi.
- Pipettes de 10 l, 100 l et 1000 l
1 flacon, 20 ml Solution de lavage (PBS, NaN3<0.1% (pds/pds)), concentre 50x
- Minuterie

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- Logiciel d'exploitation des donnes
Matriel pour la prparation des ractifs
- Eau distille ou dsionise
- Eprouvette gradue de 100 et 1000 ml
- Rcipient plastique pour le stockage de la solution de lavage
OBTENTION, STOCKAGE ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS
1. Prlever les chantillons de sang total en utilisant les techniques mdicales appropries pour viter l'h-
molyse.
2. Laisser le sang sdimenter et sparer le srum par centrifugation.
3. Une hmolyse ou une lipmie doit tre vite mais ne modifie pas le rsultat de ce test.
4. Les chantillons peuvent tre stocks 2-8C pendant 5 jours maximum ou -20C pendant 6 mois
maximum.
5. Eviter les conglations et dconglations rptes des chantillons de srum, cel pourrait occasionner
une perte alatoire d'activit auto-anticorps.
6. Les manipulations ralises sur srums inactivs par la chaleur ne sont pas recommandes.
RECOMMANDATIONS
1. Ne pas utiliser les ractifs au del de leur date de validit.
2. Ne pas mlanger les ractifs provenant de trousses de lots diffrents.
3. Utiliser les ractifs temprature ambiante (20-28C).
4. Tous les ractifs et les chantillons doivent tre prts avant de commencer le test. L'analyse doit tre
ralise sans interruption pour obtenir des rsultats fiables et cohrents.
5. Respecter strictement l'ordre des tapes.
6. Toujours utiliser des dilutions d'chantillons frachement prpares.
7. Pipeter tous les ractifs et chantillons dans le fond des puits.
8. Pour viter les contaminations croises, changer d'embout entre chaque chantillon, contrle et calibra-
teur.
9. Il est important de laver abondamment les puits et de veiller enlever les dernires gouttes de tampon
de lavage pour obtenir des rsultats optimaux.
10. Toutes les tapes d'incubation doivent tre minutes prcisment.
11. Des srums ou pools de contrle doivent tre inclus rgulirement dans les sries de dosage, pour vri-
fier le bon droulement du test.
12. Ne pas rutiliser les puits d'une microplaque.
Les concentrations sont indiques sur les tiquettes de chaque flacon de contrle. Une courbe de calibrati-
on peut tre trace partir de ces concentrations pour obtenir un rsultat quantitatif.
PREPARATION DES REACTIFS
Tampon de dilution des chantillons
Diluer le contenu de chaque flacon de concentr (5x) de tampon de dilution des chantillons avec de l'eau
distille ou dsionise, pour obtenir un volume final de 100 ml. Conserver au rfrigrateur : le tampon est
stable 2-8C pendant au moins 30 jours aprs la prparation ou jusqu' la date d'expiration indique sur
l'tiquette.
Solution de lavage
Diluer le contenu de chaque flacon de concentr (50x) de solution de lavage avec de l'eau distille ou dsio-
nise pour obtenir un volume final de 1000 ml. Conserver au rfrigrateur : le tampon est stable 2-8C pen-
dant au moins 30 jours aprs la prparation ou jusqu' la date d'expiration indique sur l'tiquette.
Echantillons patient
Diluer les chantillons au 1/101e (urine: 1/10e) avec du tampon de dilution avant de commencer le test.
Pour cela, mlanger 10 l d'chantillon avec 1000 l de tampon chantillon dans un tube en polystyrne.
Bien homogniser. Les contrles et calibrateurs sont prts l'emploi et ne ncessitent pas de dilution.
MODE OPERATOIRE
1. Prparer un nombre suffisant de barrettes pour pouvoir dposer tous les contrles et chantillons
dilus.
2. Distribuer 100 l de calibrateurs, de contrles et d'chantillons dilus en double dans les puits.
3. Incuber pendant 30 minutes temprature ambiante (20-28C)
4. Aspirer le contenu des puits et laver 3 fois avec 300 l de solution de lavage.
5. Distribuer 100 l de conjugu dans chaque puits.
6. Incuber pendant 15 minutes temprature ambiante.
7. Aspirer le contenu des puits et laver 3 fois avec 300 l de solution de lavage.
8. Distribuer 100 l de TMB dans chaque puits.
9. Incuber pendant 15 minutes temprature ambiante.
10. Ajouter 100 l de solution d'arrt dans chaque puits et incuber 5 minutes temprature ambiante.
11. Lire la densit optique 450 nm et calculer les rsultats. Il est recommand de raliser une mesure
bichromatique avec une rfrence entre 600 et 690 nm.
La couleur obtenue est stable pendant au moins 30 minutes. Lire la densit optique pendant ce laps de
temps.
RESULTATS
Validation du test
Le test est valid uniquement si la densit optique 450 nm pour le contrle positif (1), le contrle ngatif
(2) et les calibrateurs A et F est comprise dans les intervalles indiqus sur le certificat de contrle qualit
inclus dans le coffret. Si au moins un des critres n'est pas respect, les rsultats ne sont pas valids et le test
doit tre recommenc.
Des chantillons de srum peuvent tre lus directement sur la courbe standard !
Les rsultats pour lurine doivent tre diviss par 10 aprs le calcul !
Calcul des rsultats
Pour cette trousse, la meilleure mthode de calcul est une extrapolation logistique 4 paramtres en coor-
donnes lin-log pour la densit optique et la concentration. Une mthode de pondration par lissage spli-
ne en coordonnes log-log peut galement tre utilise.
Courbe lin-log recommande
Utiliser du papier millimtr en lin-log et porter les densits optiques moyennes de chaque calibrateur en
fonction de la concentration. Tracer la meilleure courbe passant par tous les points. Les points de calibrati-
on peuvent aussi tre relis point par point. La concentration des chantillons est extrapole partir de la
courbe.
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Interprtation des rsultats
Dans une tude avec des chantillons de srum de donneurs de sang et durine sains, les critres d'inter-
prtation du test sont les suivants.
chantillons durine: 0 - 0.3 g/ml
chantillons de sang: 0 - 3.0 g/ml
Les rsultats positifs doivent tre valids avec les donnes cliniques du patient. Chaque dcision thrapeu-
tique doit tre adapte individuellement.

PERFORMANCES DE LA TROUSSE
Prcision:
Rptabilit : 2.6 - 4.2 %
Reproductibilit : 3.8 - 4.9 %
Sensibilit : 0.1 g/ml

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