Prácticas de Análisis Instrumental 1

Práctica 1

ANALISIS CUANTITATIVO DE UNA MEZCLA DE

PERMANGANATO Y DICROMATO POTÁSICOS POR
ESPECTROFOTOMETRIA UV-VISIBLE.

Objeto de la práctica

Adquirir destreza en la realización de medidas experimentales de

absorbancia y su aplicación a la determinación de la concentración de una
mezcla de permanganato y dicromato potásicos.

Fundamento

Cuando en una disolución hay varias sustancias que absorben radiación,

es posible, en muchos casos, llevar a cabo su determinación sin necesidad de
separar previamente los distintos componentes. Cuando se trata de dos
componentes, M y N, cuyos espectros de absorción están superpuestos a
todas las longitudes de onda, la forma de proceder es medir las
absorbancias A1 y A2 a las longitudes de onda λ1 y λ2 respectivamente, y
planteando las ecuaciones siguientes:
A1 = εM1 b CM + εN1 b CN (a λ1)
A2 = εM2 b CM + εN2 b CN (a λ2)

A M+N

λ1 λ2
.

Esto es posible porque la ley de Beer establece que la absorbancia es una

propiedad aditiva, de forma que la absorbancia total de una disolución a una
 Prácticas de Análisis Instrumental 2

longitud de onda dada es igual a la suma de las absorbancias de los

componentes individuales presentes.

En las ecuaciones anteriores, b representa el camino óptico y εM1, εM2,

εN1 y εN2 las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda λ1 y
λ2, que deben ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrón,
o mejor, a partir de las pendientes de sus representaciones de la ley de
Beer.

Reactivos
• Disolución patrón de KMnO4 0.003 M
• Disolución patrón de K2Cr2O7 0.015 M
• Disolución de H2SO4 3.75 M

Material y aparatos
• Matraces aforados de 50 mL
• Pipetas de varios volúmenes
• Espectrofotómetro provisto de cubetas de 1 cm de paso óptico.

Técnica experimental
a) Determinación de las absortividades molares el permanganato y del
dicromato a las longitudes de onda de medida
Poner en matraces aforados de 50 mL los siguientes volúmenes de la
disolución de permanganato potásico: 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 y
10.0 mL. A continuación añadir a cada uno de ellos 20 mL de la
disolución de ácido sulfúrico y enrasar con agua desionizada. Medir
las absorbancias de las disoluciones preparadas anteriormente a
440 nm y a 545 nm, frente a un blanco preparado con 20 ml de
disolución de H2SO4 y dilución a 50 mL.
Repetir el procedimiento anterior para el dicromato potásico.
b) Análisis cuantitativo de una mezcla problema de permanganato y
dicromato
Transferir 5.0 mL de la disolución problema a un matraz de 50.0 mL,
añadir 20 mL de ácido sulfúrico 3.75 M y enrasar con agua
desionizada. Medir las absorbancias a 440nm y a 545 nm frente al
 Prácticas de Análisis Instrumental 3

mismo blanco que en el caso anterior. Calcular las concentraciones

de permanganato y dicromato en la disolución problema.
Resultados

KMnO4

Volumen KMnO4 A A Volumen KMnO4 A A

mL M 440 nm 545 nm mL M 440 nm 545 nm
0.5 4.0
1.0 5.0
2.0 7.0
3.0 10.0

Ecuaciones de las rectas de regresión:

• A 440 nm:

• A 545 nm:

Absrtividades del KMnO4:

• ε a 440 nm: ...................................... L mol-1 cm-1

• ε a 545 nm: ....................................... L mol-1 cm-1

K2Cr2O74

Volumen K2Cr2O7 A A Volumen K2Cr2O7 A A

mL M 440 nm 545 nm mL M 440 nm 545 nm
0.5 4.0
1.0 5.0
2.0 7.0
3.0 10.0

Ecuaciones de las rectas de regresión:

• A 440 nm:
 Prácticas de Análisis Instrumental 4

• A 545 nm:

Absrtividades del K2Cr2O7:

• ε a 440 nm:.........................................L mol-1 cm-1

• ε a 545 nm:......................................... L mol-1 cm-1

Mezcla problema

• Absorbancia a 440 nm:

• Absorbancia a 545 nm:

Cálculos

• Concentración de KMnO4 en la mezcla:

• Concentración de K2Cr2O7 en la mezcla:

 Prácticas de Análisis Instrumental 5

Práctica 2

DETERMINACION DE HIERRO EN VINOS POR

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA

Objeto de la práctica

Llevar a cabo medidas de absorbancia atómica para la determinación de

elementos a nivel de trazas en muestras reales utilizando el método de
adición estándar

El hierro en los vinos

El contenido de hierro en los vinos suele oscilar entre 4 y 20 mg por

litro, con contenidos medios de 6 a 12 mg/L. Su origen puede ser diverso.
Una cantidad que apenas sobrepase los 3 ò 4 mg por litro constituye el
hierro normal o hierro biológico absorbido por las raíces de la viña. Otra
parte procede de la tierra o de los polvos terrosos que puedan manchar la
superficie de las uvas. Además, ciertas cantidades pueden proceder de las
herramientas metálicas utilizadas en su elaboración (trituradoras de uvas,
prensas de acero, herramientas de vendimia, etc.) o en su almacenamiento
(tornillos de las compuertas de los barriles, etc.)

Las sales de hierro se encuentran en el vino en los estados de

oxidación (II) y (III). Las sales ferrosas son totalmente solubles y dejan el
vino límpido, mientras que ciertas sales férricas (que pueden originarse por
oxidación de las sales ferrosas por el oxígeno atmosférico) son insolubles o
coloreadas. Este es el caso del fosfato férrico, sal blanquecina origen de la
"quiebra blanca". Por otra parte, las combinaciones del hierro (III) con los
poli-fenoles, coloreados de azul oscuro, son la causa de la "quiebra azul". Los
vinos blancos están más sujetos a la primera, y, por el contrario, los vinos
tintos, ricos en taninos, dejan un poso azulado o ennegrecido: "quiebra
negra". Una concentración total de hierro del orden de los 10 mg/litro
indica riesgo de quiebras férricas, si bien, este valor límite varía mucho en
función de la composición del vino.
.
 Prácticas de Análisis Instrumental 6

Reactivos
• FeSO4.(NH4)2.SO4.6 H2O (Sal de Mohr) sólido

Material y aparatos
• Matraces aforados de 50 mL
• Pipetas de varios volúmenes
• Espectrofotómetro de absorción atómica con llama

Técnica experimental

En cinco matraces aforados de 50 mL se ponen 10 mL de vino (o el

volumen adecuado al contenido de hierro). Añadir a continuación a
cada uno de ellos, 0, 5, 10, 15 y 20 mL de una disolución patrón de
hierro conteniendo 10 p.p.m. de Fe. (Esta disolución se obtendrá por
dilución de otra que contenga 500 p.p.m. de Fe, preparada a partir
de sal de Mohr ). Seguidamente se añade una gotita de n-octanol a
cada matraz, se enrasan con agua desionizada y se mide la
absorbancia atómica del hierro.

Resultados

Fe añadido
A
mL p.p.m.
0
5
10
15
20

Ecuación de la recta de regresión:

Concentración de hierro en la muestra de vino (mg/L)

 Prácticas de Análisis Instrumental 7

Práctica 3

DETERMINACION ESPECTROFLUORIMETRICA DE
QUININA EN AGUA TONICA

Objeto de la práctica
El objetivo de la práctica es la determinación del contenido de quinina
en una muestra de agua tónica comercial, para lo cual, previamente se
registran los espectros de excitación y emisión fluorescentes de la quinina
en medio acuoso ácido, tras lo cual se obtiene la curva de calibrado
correspondiente, procediendo finalmente a la determinación propuesta.

Características fluorimétricas de la quinina

La quinina es un compuesto que presenta una intensa fluorescencia en
medio ácido diluido, con longitudes de onda de máxima excitación a 250
y350 nm y una emisión fluorescente máxima a 450 nm, fácilmente
apreciables para concentraciones del orden de 2 p.p.m.

Sin embargo, pueden apreciarse otros picos debido a peculiaridades de

la red del monocromador y a efectos de dispersión Rayleigh, Tyndall y
Raman.
Reactivos
• Disolución stock de quinina conteniendo 100.0 µg mL-1 (p.p.m.),
preparada disolviendo 100.0 mg de quinina (o 120.7 mg de sulfato de
 Prácticas de Análisis Instrumental 8

quinina di-hidratado) en 50 mL de H2SO4 1 M, diluyendo

seguidamente con agua des-ionizada a 1 L en matraz aforado.
• Disolución 0.05 M de H2SO4 .
• Disolución-madre o de trabajo de quinina, de 10.0 µg mL-1, preparada
recientemente a partir de la disolución concentrada, por dilución con
H2SO4 0.05 M
Material y aparatos
• Matraces aforados de 25.0, 50.0, 100.0, 250.0 y 1000.0 mL de
capacidad.
• Pipetas de varios volúmenes
• Espectrofluorímetro con cubeta de cuarzo de 1 cm de paso óptico.

Técnica experimental
a) Preparación de la curva de calibrado
Preparar una serie de disoluciones patrón de quinina a partir de la
disolución stock de 100.0 p.p.m., haciendo diluciones secuenciales de
orden 1:10 o similar (cada vez) con H2SO4 0.05 M. De este modo se
obtendrán concentraciones de: 10.0, 5.00, 2.00, 1.50, 1.00, 0.800,
0.500, 0.200, 0.100, 0.0100 y 0.00100 µg mL-1. Efectuar diluciones
hasta que la disolución más diluida proporcione una señal de
fluorescencia similar a la del blanco (H2SO4 0.05 M). Registrar los
espectros del excitación y emisión y construir la curva de calibrado.

Sol. de partida Vol.pipeta Vol. matraz Sol. preparada

(p.p.m.) (mL) (mL) (p.p.m.)
100.0 25.00 250.0 10.0
10.0 25.00 50.0 5.00
10.0 20.00 100.0 2.00
10.0 15.00 100.0 1..50
10.0 10.00 100.0 1.00
10.0 4.00 50.0 0.80
5.00 10.00 100.0 0.50
1.00 10.00 50.0 0.200
1.00 5.00 50.0 0.100
0.100 5.00 50.0 0.0100
 Prácticas de Análisis Instrumental 9

b) Determinación del contenido de quinina en muestras desconocidas.

Desgasificar el contenido de una botella o una lata de agua tónica
comercial mediante ultrasonidos (5 minutos aproximadamente) y hacer
las diluciones correspondientes con H2SO4 0.05 M para que la
intensidad de la emisión fluorescente se encuentre en la zona lineal del
calibrado. (Normalmente esto se consigue con una dilución global de 1 a
50, que habría que efectuar en dos etapas, si bien, por economía de
tiempo puede hacerse en una sola, pipeteando 5.00 mL y diluyendo a
250.0 mL). Medir la intensidad de fluorescencia y calcular el contenido
de quinina en la muestra original.

Resultados
λ de excitación:
λ de emisión:

Quinina If Quinina If
µg mL-1 µg mL-1

Ecuación de la recta de regresión:

Intensidad de la fluorescencia emitida por la disolución diluida de la tónica:

Concentración de quinina en la muestra de agua tónica comercial:

 Prácticas de Análisis Instrumental 10

Práctica 4

POTENCIOMETRIA CON ELECTRODOS SELECTIVOS:

DETERMINACION DE FLUORURO EN AGUAS DE CONSUMO

Objeto de la práctica
Llevar a cabo medidas de potenciales redox con un electrodo selectivo de
iones fluoruro para determinar la concentración de este elemento en aguas
de consumo.
El flúor en las aguas de consumo
El flúor es considerado como un oligoelemento esencial para la formación de
dientes y huesos, pero es tóxico en exceso. En un hombre adulto hay del
orden de 2.5 g de flúor.
Se considera que dosis diarias de hasta 5 mg de flúor pueden ser
necesarias para sobrevivir, mostrándose deficiencias cuando la ingestión es
inferior a 2 mg/día. Los efectos tóxicos se presentan en dosis de 10-20
mg/día y efectos letales se manifiestan cuando la ingestión es superior a
200 mg diarios.
Desde hace tiempo se conoce la necesidad de controlar el contenido de
flúor en las aguas de consumo humano, por ser ésta la fuente de mayor
aporte de este elemento. La Organización Mundial de la Salud recomienda
consumir aguas con contenido de flúor entre 1 y 1.5 mg/L. Un aporte
insuficiente tiene mucha incidencia sobre las caries dentales, e ingestas
superiores provocan fluorosis, alteraciones del tiroides, retrasos en el
crecimiento y otras enfermedades óseas.

Características del método analítico

El método analítico utilizado para la determinación de fluoruro en
aguas es la medida potenciométrica con un electrodo selectivo de fluoruro.
Se trata de un electrodo de membrana homogénea compuesto por un mono-
cristal de LaF3 que contiene pequeñas cantidades de Eu(II), con objeto de
crear vacantes de fluoruro que permitan la conducción iónica de iones F- a
través del cristal. En su interior contiene una disolución de NaF 0.1 M y
NaCl 0.1 M, así como un electrodo de referencia interno de Ag/AgCl. La
medida del potencial se realiza mediante un montaje potenciométrico en el
que la célula electroquímica está constituida por el electrodo selectivo de
fluoruro, que actúa como electrodo de medida y un electrodo de referencia
 Prácticas de Análisis Instrumental 11

externo (Ag/AgCl) que posibilita la medida de la diferencia de potencial que

se establece entre ambos electrodos.
E lec tr o d o d e
r e fe r e n c i a i n t e r n o
Ag/AgC l

E, m V

E le c t ro d o E le c t r o d o
s e le c t i v o d e F -
d e r e f e r e n c ia
ex terno

N a F 0 .1 M y N a C l 0 .1 M

M o n c r is t a l d e L a F 3

El potencial medido responde a la expresión:

E(V)=E(Ag/AgCl)ext –E(Ag/AgCl)int – Ea –Ej – 0.059 log [F-]
donde Ea es el potencial de asimetría de la membrana, Ej es el potencial de
unión líquida y [F-] es la actividad del ión fluoruro en la disolución problema,
si bien, no es necesario conocer el valor de las constantes que implica la
cadena de potenciales que mide el potenciómetro, siempre que el electrodo
se calibre con disoluciones de concentración conocida. En estas condiciones
existe una relación lineal entre el potencial medido y el valor logarítmica de
la concentración de fluoruro. Esto se conoce como respuesta nernstiana, por
cumplirse la ecuación de Nernst:
E(mV)=constante – 59 log [F-]
Reactivos
• Disolución patrón de 1000 p.p.m. de fluoruro preparada por pesada de
0.2210 g de NaF y disolución en 100 mL (Disolución M)
• Disolución de TISAB (Total Ionic Strength Adjustement Buffer) que
contiene por litro: 15 mL de ácido acético glacial; 58.5 g de NaCl;
102.6 g de acetato sódico trihidratado y 0.3 g de citrato sódico tri-
hidratado, ajustando el pH con NaOH hasta el valor de 5.5.

Material y aparatos
• Matraces aforados de 50.0, 100.0, 250.0, 500.0 y 1000.0 mL de
capacidad.
 Prácticas de Análisis Instrumental 12

• Pipetas de varios volúmenes

• Potenciómetro provisto de un electrodo selectivo de fluoruro y el
correspondiente electrodo de referencia.

Técnica experimental
a) Preparación de la curva de calibrado
Tomar 5.00 mL de la disolución M (1000 p.p.m.) y diluir a 500 mL
(disolución R1). De esta disolución R1 se toman 0.2, 1, 2, 5, 10 y 20 mL y
se diluyen a 100 mL. Por otra parte, se toman 10 mL de la disolución M
y se diluyen a 100 mL (disolución R2). De esta disolución se toman 5, 10,
15 y 20 mL y se diluyen a 100 mL.
Poner en un vaso 50 mL de cada una de las disoluciones patrón de
fluoruro y 5 mL de la disolución de TISAB. Se introducen los
electrodos, se agita suavemente y se mide el potencial.
b) Determinación del contenido de quinina en muestras desconocidas.
Se opera de igual modo que en la construcción del calibrado, tomando
50 mL de agua y 5 mL de TISAB. Es frecuente realizar tres medidas
con tres alícuotas de la muestra y obtener el valor medio.
Resultados

[F-],
Nº mL log [F-] E, mV
p.p.m.
1 0.2 (R1) 0.02
2 1 (R1) 0.1
3 2 (R1) 0.2
4 5 (R1) 0.5
5 10 (R1) 1.0
6 20 (R1) 2.0
7 5 (R2) 5.0
8 10 (R2) 10.0
9 15 (R2) 15.0
10 20 (R2) 20.0
 Prácticas de Análisis Instrumental 13

Ecuación de calibración:

Análisis de las muestras:

Muestra E(mV) log [F-] [F-], p.p.m.

Agua Contenido (p.p.m.)

 Prácticas de Análisis Instrumental 14

Práctica 5

CROMATOGRAFIA DE GASES: DETERMINACION DE

FENOLES

Objeto de la práctica
Llevar a cabo una determinación analítica por cromatografía de gases
utilizando el método de calibrado del patrón interno.
Características de los fenoles
Los fenoles son compuestos ampliamente distribuidos en la naturaleza en
concentraciones a nivel de trazas. Se han identificado en un gran número de
plantas y también se forman por ruptura de compuestos orgánicos naturales,
como ácidos húmicos o lignina. Sin embargo, la presencia de fenoles en el
medio ambiente proviene sobre todo de las aguas residuales de un gran
número de industrias: química, petroquímica, papelera, farmacéutica, etc,
hasta el punto de que los fenoles son índices de la contaminación orgánica.
Uno de los métodos más ampliamente utilizados para la determinación de
fenoles es la cromatografía de gases con detección por ionización de llama o
espectrometría de masas.
Reactivos
• Disolución madre que contiene, disueltos en metanol, los cuatro
analitos: fenol, m-cresol, 2,4 dimetilfenol y β-naftol. (Esta disolución
debe conservarse a 4ºC)

fenol m-cresol 2,4 dimetil fenol α-naftol

• Metanol, calidad HPLC

 Prácticas de Análisis Instrumental 15

Material y aparatos
• Matraces aforados de 10.0 y de 50.0 mL de capacidad.
• Pipetas de varios volúmenes
• Cromatógrafo de gases, equipado con una columna capilar SPB-5 (poli
(5%-difenil-95%-dimetil siloxano)) de 30 m de longitud, 0.25 mm de
diámetro interno y 0.25 µm de espesor y un detector de ionización de
llama de hidrógeno. El gas portador es nitrógeno. La temperatura del
detector es de 350 ºC y la del inyector de 250 ºC. Para la columna se
trabaja con una rampa de temperaturas como la indicada en la figura.

El volumen de inyección de muestra es 1 µL, en la modalidad split.

Técnica experimental
A partir de una disolución madre de los cuatro analitos en metanol se
preparan cuatro disoluciones patrón de concentraciones del orden de
50, 100, 200 y 300 p.p.m. de fenol, m-cresol y 2,4-dimetilfenol y 150
p.p.m. de α-naftol que se utilizará como patrón interno.Se registran los
cromatogramas correspondientes y con los resultados de las alturas o
de las áreas de pico obtenidos se construyen las rectas de calibrado.

Disoluciones madre de fenoles:

Fenol: 0.0509 g + metanol -> 50.0 mL => 1018 ppm
m-cresol 0.0583 g + metanol -> 50.0 mL => 1166 ppm
2,4-dimetilfenol 0.0514 g + metanol -> 50.0 mL => 1028 ppm

β-naftol (p. interno) 0.1020 g + metanol -> 50.0 mL => 2040 ppm
 Prácticas de Análisis Instrumental 16

Patrones de calibrado:
Patrón 1: 0.50 mL de cada analito + 0.75 mL de β-naftol + metanol ->
10.0 mL (fenol=50.9 ppm; m-cresol=116.6 ppm; 2,4-dimetilfenol=102.8
ppm; β-naftol=153.0 ppm).
Patrón 2: 1.00 mL de cada analito + 0.75 mL de β-naftol + metanol ->
10.0 mL (fenol=101.8 ppm; m-cresol=58.3 ppm; 2,4-dimetilfenol=51.4
ppm; β-naftol=153.0 ppm).
Patrón 3: 2.00 mL de cada analito + 0.75 mL de β-naftol + metanol ->
10.0 mL (fenol=203.6 ppm; m-cresol=233.2 ppm; 2,4-
dimetilfenol=205.6 ppm; β-naftol=153.0 ppm).
Patrón 4: 3.00 mL de cada analito + 0.75 mL de β-naftol + metanol ->
10.0 mL (fenol=305.4 ppm; m-cresol=349.8 ppm; 2,4-
dimetilfenol=308.4 ppm; β-naftol=153.0 ppm).

Resultados

Concentración
Patrón 1 Area de pico Area analito/area
(p.p.m.) p. interno

fenol 50.9
m-cresol 58.3
2,4-dimetilfenol 51.4
β-naftol (p.i.) 153.0

Concentración
Patrón 2 Area de pico Area analito/area
(p.p.m.) p. interno

fenol 101.8
m-cresol 116.6
2,4-dimetilfenol 102.8
β-naftol (p.i.) 153.0
 Prácticas de Análisis Instrumental 17

Concentración
Patrón 3 Area de pico Area analito/area
(p.p.m.) p. interno

fenol 203.6
m-cresol 233.2
2,4-dimetilfenol 205.6
β-naftol (p.i.) 153.0

Concentración
Patrón 4 Area de pico Area analito/area
(p.p.m.) p. interno

fenol 305.4
m-cresol 349.8
2,4-dimetilfenol 308.4
β-naftol (p.i.) 153.0

Recta de calibrado:

Concentración
Muestra Area de pico Area analito/area
(p.p.m.) p. interno
desconocida
fenol
m-cresol
2,4-dimetilfenol
β-naftol (p.i.) 153.0