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La elaboracin de las Guas est vinculada con la responsabilidad que comparten mutuamente
los laboratorios acreditados de calibracin y de ensayo, de ofrecer servicios con validez tcnica
en el marco de la evaluacin de la conformidad. La calidad de estos servicios se apoya en la
confiabilidad y uniformidad de las mediciones, cuyo fundamento est establecido en la
trazabilidad metrolgica y en la incertidumbre de medida de las mismas. Los que ejercitan la
evaluacin de la competencia tcnica de los laboratorios, as como los que realizan la prctica
rutinaria de los servicios acreditados de calibracin y ensayo, encontrarn en las Guas una
referencia tcnica de apoyo para el aseguramiento de las mediciones.
Diciembre de 2012
PRESENTACIN ........................................................................................................................ 2
GRUPO DE TRABAJO ............................................................................................................... 4
1. PROPSITO DE LA GUA TCNICA ............................................................................... 6
2. ALCANCE DE LA GUA TCNICA .................................................................................. 7
3. MENSURANDO .................................................................................................................. 8
4. MTODO Y/O SISTEMA DE MEDICIN ...................................................................... 10
5. CONFIRMACIN METROLGICA Y CALIFICACIN DE EQUIPOS ...................... 12
6. TRAZABILIDAD METROLGICA ................................................................................. 16
7. INCERTIDUMBRE DE MEDIDA .................................................................................... 20
8. VALIDACIN DE MTODOS ......................................................................................... 22
9. BUENAS PRCTICAS DE MEDICIN .......................................................................... 24
10. REFERENCIAS ................................................................................................................. 25
11. AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................... 25
ANEXO 1 DOCUMENTACIN DE TRAZABILIDAD METROLGICA E
INCERTIDUMBRE DE MEDIDA DE CG. .............................................................................. 26
ANEXO 2 GLOSARIO DE TRMINOS .............................................................................. 27
ANEXO 3 EJEMPLO DE CONFIRMACIN METROLGICA DE UNA BALANZA
ANALTICA .............................................................................................................................. 40
ANEXO 4 EJEMPLOS PARA LA CALIFICACIN DE EQUIPOS DE INSTRUMENTOS
DE MEDICIN ANALTICA (CEIMA) .................................................................................. 45
ANEXO 5 EJEMPLO DE ESTIMACIN DE INCERTIDUMBRE DE MEDIDA DE LA
FRACCIN DE MASA DE METANOL .................................................................................. 52
ANEXO 6 BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL) ........................................ 63
ANEXO 7 INFORMACIN ADICIONAL SOBRE LAS TCNICAS DE CG Y CLAR ... 66
Las medidas o resultados de medicin, son caracterizados por su trazabilidad metrolgica y por
un valor estimado de su incertidumbre de medida. La confiabilidad del resultado de una
medicin es el factor de mayor importancia para la toma de decisiones de los usuarios de este
resultado.
Con el objetivo de que la evaluacin de la conformidad sea realizada por estos laboratorios con
un mismo nivel de rigor tcnico, se ha considerado elaborar la documentacin que permita
homologar este nivel. Estos documentos se han llamado Guas Tcnicas sobre Trazabilidad
Metrolgica e Incertidumbre en las Mediciones Analticas.
Esta Gua Tcnica es aplicable para las tcnicas de medicin de Cromatografa de Gases (GC)
y Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin (CLAR), las cuales se describen a
continuacin.
2.1. Cromatrografa
La mezcla a ser separada es introducida en la fase mvil que es inducida a moverse a travs de
la fase estacionaria contenida dentro de una columna. Los componentes de la mezcla se separan
debido a su diferente afinidad por la fase estacionaria, lo cual provoca que se transporten a
diferentes velocidades en la fase mvil.
A la salida de la columna, los componentes separados podrn ser detectados por medio de un
dispositivo llamado Detector que ve los cambios en la composicin de la fase mvil, de tal
manera que si la fase mvil llega con algn componente diferente, este es detectado,
dependiendo de las caractersticas del sistema de deteccin.
El sistema de medicin entrega una diferencia en el voltaje del detector llamada respuesta, la
cual est en funcin de la concentracin del componente. Se obtiene en forma de picos, al
conjunto de picos se le llama cromatograma.
3. MENSURANDO
Los evaluadores deben solicitar a los laboratorios la identificacin clara y precisa del (los)
mensurando(s) sujeto(s) al alcance de la acreditacin, incluidos en los Mtodos de Medicin
que utilizan las Tcnicas de Medicin objeto de esta gua, empleando el formato de la tabla del
Anexo 1.
Para mayor informacin ver captulo I, artculos 5 y 6 de la Ley Federal sobre Metrologa y
Normalizacin (LFMN) y NOM-008-SCFI-2002.
Los evaluadores deben verificar que los intervalos de medida de trabajo de los mtodos que
emplean las tcnicas de Cromatografa de Gases (CG) y Cromatografa de Lquidos de Alta
Resolucin (CLAR) estn documentados con evidencia de su determinacin en la validacin
del mtodo (parcial o total) y estos deben ser coherentes con la aplicacin del resultado del
ensayo (ver Anexo 2, Glosario de Trminos para definicin del trmino de validacin).
El intervalo de trabajo de los mtodos de medicin debe tomar en cuenta los lmites mximos
permisibles o las especificaciones de la norma a la que se evale su conformidad, las
especificaciones de procesos que se estn evaluando o los requerimientos de los clientes del
laboratorio, los cuales idealmente deben estar en la seccin media del intervalo de trabajo.
Los evaluadores deben verificar la estimacin de incertidumbre de medida que emplean las
tcnicas de Cromatografa de Gases (CG) y Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin
(CLAR), solicitando la documentacin que proporcione evidencia de la estimacin de
incertidumbre de medida por parte del laboratorio, en base a lo estipulado en el captulo 7 de
esta Gua Tcnica.
El evaluador debe solicitar una descripcin suficiente de los componentes del sistema de
medida que empleen la tcnica de CG y CLAR, y que influyan sobre la trazabilidad
metrolgica y el valor de la incertidumbre de medida.
Los aspectos ms comunes del procedimiento de medida que tienen efecto en la trazabilidad
metrolgica y en la incertidumbre en la tcnica de Cromatografa de Gases (CG) y
Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin (CLAR) son:
Etapa de medida:
7. MRC
8. Controles de calidad, en caso aplicable (Blancos, muestras de control de calidad,
duplicadas, adicionadas, entre otros).
9. Curva de calibracin (material volumtrico, algoritmo empleado en la calibracin)
10. Confirmacin metrolgica de balanzas y dems instrumentos en donde aplique (Ver
captulo 5 de esta Gua).
11. Calificacin de equipos e instrumentos de medicin analtica (CEIMA) donde aplique
(Ver captulo 5 de esta Gua).
El evaluador debe solicitar los registros sobre la aptitud tcnica (anteriormente llamada prueba
inicial de desempeo del analista) que incluyan al menos datos sobre su sesgo, recuperacin,
repetibilidad, lmite de cuantificacin, lmite de deteccin si aplica al mtodo, recuperacin y
adicionalmente si es posible, los resultados de su participacin en pruebas intralaboratorio o
interlaboratorio.
El evaluador debe solicitar al laboratorio los registros que demuestran la competencia tcnica
de todos y cada uno de los analistas que realizan la medicin, los criterios de aceptacin y
rechazo as como las evidencias de los resultados obtenidos de los analistas, basados en las
especificaciones del mtodo. En caso de que el mtodo no cuente con dichas especificaciones
los criterios de aceptacin y rechazo debern estar sustentados en una fuente reconocida.
Es importante que los instrumentos de medida se mantengan bajo control, con la finalidad de
evaluar su desempeo y cumplir con los requisitos de la NMX-EC-17025-IMNC-2006[2], que
requieren a los laboratorios de ensayo la evidencia de que los instrumentos cumplen con el
propsito de uso establecido, con un estado de mantenimiento adecuado y calibrados a patrones
nacionales o internacionales, esto con la finalidad de demostrar la validez de sus resultados de
medida.
Las Caractersticas Metrolgicas del Equipo de Medicin (CMEM) son factores que
contribuyen a la incertidumbre de medida. Las CMEM permiten realizar la comparacin
directa con los Requisitos Metrolgicos del Cliente (RMC) para establecer la Confirmacin
Metrolgica (CM).
Los RMC en este sentido se refieren normalmente a los requerimientos del mtodo de ensayo
acreditado para satisfacer las necesidades del cliente del laboratorio, en cuanto al desempeo y
especificaciones de los equipos a utilizarse.
El evaluador debe solicitar la documentacin que contenga los requisitos metrolgicos del
cliente (RMC) considerados en el proceso de CM.
l evaluador debe solicitar evidencia de que la confirmacin metrolgica (CM) sea realizada
cada vez que el instrumento sea reparado, ajustado o modificado.
Debe seguir los lineamientos de la CM, para los termmetros, as como para las balanzas
analticas que se utilicen para pesar muestras y materiales de referencia.
Debe seguir los lineamientos de la CM, para el material volumtrico que se utilice para la
preparacin de los materiales de referencia (disoluciones de trabajo), salvo que dichas
disoluciones sean preparadas gravimtricamente.
Cuando no aplica la calibracin del material volumtrico (indicado en el glosario), se
debern solicitar registros de los controles que permitan la verificacin sistemtica del
mismo con referencia a las especificaciones del fabricante.
En el Anexo 4.1 y 4.2, se presentan ejemplos de CEIMA con tablas de parmetros bsicos por
etapa de calificacin, para CG y CLAR.
El evaluador debe solicitar que los registros del CEIMA se encuentren documentados de
acuerdo a las caractersticas metrolgicas del equipo, ver ejemplos del Anexo 4.1 y 4.2.
Por ejemplo: si se tena el cromatgrafo de gases calificado para uso de anlisis de plaguicidas
y actualmente se le emplea para el anlisis de Bifenilos policlorados (PCB) en Aceites de
Transformador, cambio de niveles de composicin prxima a niveles traza.
En el caso de los siguientes componentes de los sistemas de medicin que emplean las tcnicas
que se incluyen en esta Gua, el laboratorio debe seguir el siguiente lineamiento:
El material volumtrico que se utilice en las diluciones de muestras, debe ser clase A verificado
considerando su estado fsico y con base a criterios estadsticamente significativos (se deben
La verificacin contra las especificaciones debe ser realizada por el laboratorio con un
procedimiento tcnicamente vlido y registros correspondientes, sta debe ser realizada antes
de ser puesto en servicio y en periodos establecidos durante su vida til.
6. TRAZABILIDAD METROLGICA
Los aspectos relacionados con la trazabilidad metrolgica, son acordes con lo dispuesto en la
poltica vigente de la ema [10].
La trazabilidad metrolgica del resultado de una medicin est relacionada con la diseminacin
de la unidad correspondiente a la magnitud que se mide. La expresin del valor de una
magnitud incluye la referencia a una unidad de medida, la cual ha sido elegida por acuerdo, y
por tanto, las medidas de la misma magnitud deben estar referidas a la misma unidad. An
cuando la definicin de trazabilidad metrolgica no impone limitaciones sobre la naturaleza de
las referencias determinadas, es conveniente lograr la uniformidad universal de las mismas
mediante el uso de las unidades del Sistema Internacional de Unidades, SI, las cuales ya han
sido convenidas en el marco de la Convencin del Metro. En Mxico, es obligatorio el uso del
Sistema General de Unidades de Medida (SGUM) [3], el cual contiene a las unidades del SI.
Existen algunos mensurandos definidos por mediciones dependientes del mtodo de medicin,
en tales casos la trazabilidad metrolgica del valor del resultado est establecida a los valores
obtenidos mediante el mtodo, por medio de la utilizacin de MRC en la etapa de
cuantificacin y trazabilidad metrolgica al SI de cada una de las magnitudes que intervienen
en el clculo del valor del mensurando.
Adicionalmente, se deber asegurar que el mtodo est bajo control mediante el uso de
materiales de control de calidad, ya sean MRC o MR y la participacin continua en pruebas
interlaboratorio, si existen.
Por ejemplo en el caso de compuestos orgnicos CRETI, se debe tener trazabilidad metrolgica
de las magnitudes de volumen y concentracin de masa mediante la calibracin de la balanza, y
material volumtrico por laboratorios acreditados, y la utilizacin de MRC para la elaboracin
de las curvas de calibracin, adems de llevar a cabo un programa de control de calidad
estadstico con Materiales de Control de Calidad, de preferencia certificados y la participacin
continua en pruebas interlaboratorio, si existen.
El evaluador debe solicitar que los Materiales de Referencia Certificados utilizados en las
mediciones que emplean las tcnicas de CG y CLAR proporcionen trazabilidad metrolgica a
patrones nacionales certificados por el CENAM, siempre y cuando estn disponibles, o en su
defecto a patrones extranjeros con la autorizacin respectiva de la Direccin General de
Normas (DGN), segn lo especificado en los Art. 26 de la LFMN, 20 y 24 del Reglamento de
la LFMN y la Poltica de trazabilidad metrolgica de la ema.
El evaluador debe revisar los mecanismos que el laboratorio tiene para mantener la trazabilidad
metrolgica, como el uso de patrones, con los propsitos de:
8. VALIDACIN DE MTODOS
Para el caso de los mtodos incluidos en esta gua los parmetros para realizar una
confirmacin del mtodo son los siguientes:
1. Recuperacin
2. Lmite de deteccin
3. Lmite de cuantificacin
4. Intervalo lineal y de trabajo
5. Reproducibilidad (medicin durante al menos tres das)
6. Repetibilidad
7. Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la recuperacin)
8. Incertidumbre de medida (de acuerdo al punto 7 de esta gua)
En la tabla 8 se resumen los requisitos que el evaluador deber solicitar respecto a la validacin
de los mtodos de ensayo a acreditar:
CONFIRMACIN DEL MTODO
SITUACIN
O VALIDACIN DEL MTODO
Desarrollo de un mtodo para un problema en particular Validacin
Existe un mtodo evaluado para aplicarlo en un
Validacin
problema en particular
Un mtodo establecido, realizar una revisin para
Confirmacin del Mtodo o Validacin
incorporar innovaciones
Un mtodo establecido, extenderlo o adaptarlo a un
Confirmacin del Mtodo o Validacin
problema nuevo
Cuando el control de calidad indica que un mtodo
Confirmacin del Mtodo o Validacin
establecido cambia con el tiempo
Establecer un mtodo en un laboratorio diferente Confirmacin del Mtodo
Establecer un mtodo con diferente instrumentacin Confirmacin del Mtodo
Establecer un mtodo con diferente operador Confirmacin del Mtodo
El evaluador debe solicitar al laboratorio la confirmacin de todos los mtodos, que son
empleados en estas tcnicas de medicin, an cuando estos sean normalizados.
En el caso de realizar una confirmacin del mtodo, el grupo evaluador deber solicitar al
laboratorio la documentacin analtica y los registros que la sustenten.
Para el caso donde se midan concentraciones cercanas al lmite de deteccin se deben
solicitar todos los parmetros listados para confirmacin del mtodo.
El evaluador debe solicitar que las Buenas Prcticas de Laboratorio que sigue en su operacin
el laboratorio se encuentren documentadas, las cuales deben tenerlas referidas y aplicadas
dentro de su sistema de calidad (ver Anexo 6).
Una referencia til es la publicacin Manual de buenas prcticas de Laboratorio del CENAM
[5].
11. AGRADECIMIENTOS
INSTRUMENTO Y/O
INSTRUMENTO
REFERENCIA
REFERENCIA
MTODO DE
PATRN DE
La medicin se lleva a
Cromatografo Gases con
cabo con curva de
detector selectivo de si CEIMA X Si Si
calibracin y con un
masa (CG/EM
estndar interno
Balanza analtica CM
Balanza analtica CM
Balanza analtica CM
(11) Nombre del instrumento o sistemas instrumentales de medicin que se utilizan para efectuar la
medicin de cada magnitud.
(12) Nombre del instrumento y/o material volumtrico calibrado
(13) Indicar si requiere validacin
(14) Instrumento o Equipo que requiere CEIMA o CM
(15) Forma de establecer trazabilidad metrolgica
(16) Indicar si requiere estimar incertidumbre de medida
En las reuniones y talleres realizadas en las instalaciones del CENAM para la elaboracin de
las Guas Tcnicas de Trazabilidad Metrolgica e Incertidumbre de Medida, entre los
integrantes de los Grupos de Trabajo del CENAM y la ema, se acord incluir los criterios de
interpretacin a las definiciones que se utilizaran en las Guas Tcnicas con el objeto de tener
ms claridad y uniformizar los conceptos entre los evaluadores que las aplicarn.
AJUSTE: Conjunto de operaciones realizadas sobre un sistema de medida para que proporcione
indicaciones prescritas correspondientes a valores dados de la magnitud a medir.
[VIM - 3.11, NMX-Z-055-IMNC-2009]
Tabla 1
RMC
Intervalo de trabajo (20 200) g
Incertidumbre < 0.000 40 g
Repetibilidad < 0.000 03 g
Resolucin 0.000 01 g
Pruebas de repetibilidad:
Resolucin Carga Repetibilidad
0.01 mg 100g 0.000 01 g
0.01 mg 200g 0.000 04 g
Ejemplo:
Tabla 4
RMC CMEM Confirmacin metrolgica
Intervalo de trabajo (20 200) g (20 200 )g Cumple
Incertidumbre < 0.000 40 g Mximo 0.000 15 g Cumple
Repetibilidad < 0.000 03 g Mxima 0.000 04 g No cumple
Resolucin 0.000 01 g 0.00001 g Cumple
Pruebas de repetibilidad:
Resolucin Carga Repetibilidad
0.01 mg 100g 0.00001 g
0.01 mg 200g 0.00002 g
Confirmacin metrolgica
Se comparan las CMEM y los RMC (E).
Tabla 6
Como resultado de la verificacin metrolgica, se concluye que las CMEM cumplen los RMC,
se documenta la Confirmacin Metrolgica (F), se realiza la identificacin del estado de
calibracin (D) y se concluye que la balanza puede ser utilizada para el propsito para el cual
fue confirmada.
(d) C
a
(b) C l
a i
l f
i i
f c
i a
c c
a i
(a) R
c
E
i n
Q
U
n d
I
e
S
d
I
e I
T
n
O
D s
i t
s a
e l
a
o c
(c) C i
D
n
CI
Nota: Los requisitos incluidos se presentan de manera de ejemplo y no como nicas opciones.
1. Objetivo
Estimacin de la incertidumbre de medicin de fraccin de masa de metanol en una disolucin
acuosa de etanol. Empleando la tcnica de medicin de cromatografa de gases con detector de
ionizacin de flama (CG/DIF).
Las etapas involucradas en la medicin del metanol en una disolucin acuosa de etanol son las
siguientes:
a) Preparacin del Estndar Interno (EI): Se prepara gravimtricamente una disolucin madre
de 2-Pentanol de 0.08 g/mL de concentracin de masa.
b) Preparacin de las disoluciones para la curva de calibracin (CC): Las disoluciones de
calibracin son preparadas gravimtricamente a partir de compuestos puros, donde la pureza
e impurezas son medidas por cromatografa de gases; enseguida se mezclan el EI y las
disoluciones de calibracin para realizar las mediciones en CG/DIF y obtener los datos para
la construccin de la CC.
c) Preparacin de la muestra con el EI: La muestra es preparada gravimtricamente en un vial
de 2 mL de capacidad; mezclando 0.9 g de disolucin de calibracin y 0.09 g de EI para
obtener una concentracin aproximada de EI de 0.007 g/mL.
d) Medicin: Inyeccin de 1 L en el CG/DIF de cada una de las disoluciones de calibracin y
de la muestra.
3. Mensurando
= (1)
Donde:
rea bajo la curva (cromatograma) del compuesto de inters en la muestra.
rea bajo la curva (cromatograma) del estndar interno en la muestra.
Concentracin del estndar interno en la muestra.
Concentracin del compuesto de inters en la muestra.
m pendiente de la regresin lineal
b Ordenada al origen
fd Factor de dilucin
Tabla 1
x y y y y
(Ca/Cei) (Aa/Aei-1) (Aa/Aei-2) (Aa/Aei-3) (Promedio Aa/Aei)
2.297 0 1.260 9 1.274 0 1.266 3 1.267 1
2.001 7 1.116 3 1.102 4 1.113 6 1.110 7
1.755 7 0.992 7 0.990 0 0.955 4 0.979 4
1.392 3 0.779 4 0.775 1 0.779 1 0.777 9
1.109 3 0.618 4 0.617 1 0.615 4 0.617 0
0.753 5 0.419 0 0.418 7 0.418 0 0.418 6
0.577 3 0.320 5 0.319 6 0.321 1 0.320 4
0.283 1 0.158 3 0.157 4 0.157 2 0.157 6
Donde:
(3)
(4)
Esta estimacin considera como modelo matemtico la expresin (6) que involucra: la
concentracin del EI en la disolucin madre, la masa de la disolucin madre y la masa de la
muestra con EI.
. . . (7)
= 0.0073 + +
. . .
= 1.3280 10
. . (9)
( ) = 1.0991 +
. .
( ) = 9.2459 10
Las incertidumbres asociadas a la concentracin (corregida por de factor de dilucin y EI) del
analito en la muestra (modelo de regresin, factor de dilucin, EI en la muestra y relacin de
( ) ( )
= + + (13)
= + (14)
fd
CEIm
CAm(regresin lineal)
Figura 3
En la tabla 5 y figura 4 se muestran muestra el resumen correspondiente a las contribuciones de
incertidumbre en la estimacin del valor de la concentracin de masa corregida de analito en la
muestra considerando la incertidumbre asociada a la variabilidad de las relaciones de rea
experimentales, correspondientes a la muestra y al EI.
d1
CAm
Figura 4
5. Referencias
Todos los disolventes a usarse como eluentes deben filtrarse a travs de filtros de
0.45 m antes de su uso.
En el caso de disolventes a utilizarse con detectores UV-Vis, debe de verificarse su
absorbancia a las longitudes de onda de la aplicacin.
Se recomienda degasificar los disolventes empleados, mediante agitacin,
sonicacin, vaco, desplazamiento con helio, etc.
B. Fase estacionaria (Columnas)
B.0. CG y CLAR
Antes de su uso, el laboratorio debe de comprobar y documentar, por su propio
personal, el desempeo de las columnas, a condiciones del fabricante.
Peridicamente es necesario limpiar las columnas de compuestos altamente
retenidos, mediante calentamiento a temperatura lmite de operacin (CG) y /
lavado con disolventes apropiados (CLAR).
Para mejor repetibilidad de resultados es conveniente marcar el extremo de la
columna conectado al suministro de fase mvil y siempre utilizarla en el mismo
sentido.
B.1. CG
En lo posible utilizar precolumnas.
No sobre calentar las columnas. Usar Temperaturas lmites de operacin, tanto
isotrmico y como con rampa, de acuerdo con los datos del proveedor.
Cromatografa
IDENTIFICACIN DE CAMBIOS