Reaccin antgeno-anticuerpo

La reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una de las piedras angulares en la respuesta inmunitaria del
organismo. El concepto se refiere a la unin especfica de un anticuerpocon un antgeno para inhibir o
demorar su toxicidad.

El acoplamiento estructural entre las macromolculas se realiza gracias a varias fuerzas dbiles que
disminuyen con la distancia, como los puentes de hidrgeno, las fuerzas de Van Der Waals, las interacciones
electrostticas y las hidrofbicas. El reconocimiento Ag-Ac es una reaccin de complementariedad, por lo que
se efecta a travs de mltiples enlaces no covalentes entre una parte del antgeno y los aminocidos del sitio
de unin del anticuerpo. La reaccin se caracteriza por su especificidad, rapidez, espontaneidad y
reversibilidad.

Caractersticas:

Especificidad: Capacidad del anticuerpo de unirse al antgeno que lo estimul a travs del eptopo o
determinante antignico mediante uniones intermoleculares dbiles. La unin dada por la especificidad es
muy precisa y permite distinguir entre grupos qumicos con diferencias mnimas a pesar de su similitud;
adems, permite la detencin de un slo antgeno en cuestin. Por ejemplo permite distinguir entre albmina
de un organismo a otro a pesar de que la variabilidad en los partopos sea mnima.1

Rapidez: La velocidad con que ocurre la primera etapa de la reaccin Ag-Ac es del orden de milsimas de
segundo, y est limitada nicamente por la difusin. La segunda etapa, que es ms larga, incluye todas las
manifestaciones que se presentan como consecuencia de la interaccin, tales
como precipitacin, aglutinacin, neutralizacin, etc. esto es muy importante

Espontaneidad: La reaccin Ag-Ac no requiere energa adicional para efectuarse.

Reversibilidad: Dado que la reaccin se debe a fuerzas no covalentes, es reversible y, en consecuencia, se

ve afectada por factores como la temperatura, la proporcin de Ag-Ac, el pH y la fuerza inica.

SENSIBILIZACIN: Accin de hacer a un ser vivo, a un rgano o a un tejido capaz de reaccionar de una
manera particular (reaccin alrgica: ver alergia) al contacto de un agente qumico o fsico (antgeno).
Constituye el origen de reacciones de intolerancia generales (shock, fiebre) o locales (urticaria, ictericia,
prpura, etc). Es un fenmeno inmunolgico en el cual los linfocitos desempean un papel esencial. Algunos
de ellos tienen en su superficie receptores (inmunoglobulinas) especficos de ciertos antgenos (o de ciertas
categoras de antgenos). Cuando encuentran estos antgenos, los reconocen, los captan y se transforman
entonces en clulas jvenes, blsticas (ver clulas inmunocompetentes), y despus se dividen: las clulas
nacidas de esta divisin estn sensibilizadas. Algunas participan, desde el primer momento, en la reaccin
inmunitaria. Otras guardan en memoria esta sensibilizacin y desencadenarn una respuesta inmunitaria en
caso de nuevo contacto con el mismo antgeno. Esta sensibilizacin de los linfocitos tiene lugar en los
ganglios linfticos o en el bazo. Ver reaccin de hipersensibilidad diferida o retardada, memoria inmunolgica
y receptor de reconocimiento. Este trmino se emplea, a veces, para designar el estado que resulta de esta
accin; o como sinnimo de anafilaxia o de alergia.

Neutralizacin. Es el fenmeno por el cual algunos isotipos de inmunoglobulinas como IgG, IgM e IgA son
capaces unirse a una toxina, bacteria o virus y neutralizar su actividad (captulo 5). En el caso de los virus el
fenmeno de neutralizacin permite a los anticuerpos evitar que el virus infecte una clula al cubrir la
parte viral necesaria para el anclaje con la clula. En este caso slo interviene fragmento Fab.
4.1 PROPIEDADES GENERALES

Se definen como antgenos aquellas sustancias capaces de inducir una repuesta inmune especfica.

Los antgenos exhiben (o pueden mostrar) una serie de propiedades inmunolgicas:

inmunogenicidad: capacidad de inducir una respuesta inmune especfica, humoral y/o celular. En este
sentido, antgeno sera sinnimo de inmungeno.

clulas B + Ag clulas plasmticas + clulas B de memoria

clulas T + Ag clulas T efectoras + clulas T de memoria.

antigenicidad: capacidad de combinarse con anticuerpos y/o con receptores de clulas T (TCR).

si una molcula es inmunognica, tambin es antignica;

sin embargo, la inversa no siempre es verdad: p. ej., ms adelante en este captulo hablaremos de los
haptenos, que por s mismos no desencadenan respuesta inmune, pero que pueden ligarse a Ac
preformados.

alergenicidad: capacidad de inducir algn tipo de respuesta alrgica. Los alergenos son inmungenos que
tienden a activar ciertos tipos de respuestas humorales o celulares que dan sntomas de
alergia. tolerogenicidad: capacidad de inducir una falta de respuesta especfica en la rama celular o en la
humoral.

4.2 FACTORES QUE CONDICIONAN LA INMUNOGENICIDAD

El sistema inmune reconoce molculas de los microorganismos, pero no todos los tipos de molculas tienen la
misma capacidad inmunognica:

las ms inmunognicas son las protenas

los hidratos de carbono poseen menor capacidad inmunognica

los lpidos y los cidos nucleicos slo son inmunognicos cuando van unidos a protenas o a carbohidratos.

Por otro lado, hay que tener ya presente que en la rama humoral pueden actuar de inmungenos todos los
tipos moleculares que acabamos de citar, mientras que en la rama celular slo lo son las protenas.

A continuacin trataremos los factores que condicionan la inmunogenicidad de los antgenos, diferenciando
los que dependen de la propia molcula antignica y los que dependen del sistema biolgico (el hospedador
donde ocurre la respuesta inmune).

4.2.1 Factores de la molcula inmunognica

4.2.1.1 Carcter de no-propia

Ante todo, la molcula ha de ser reconocida como una molcula extraa, ajena al individuo. Tenemos pues,
que un primer rasgo condicionador de la inmunogenicidad es el grado de falta de parecido entre el antgeno
con respecto a molculas propias.
 En general, molculas que han divergido ampliamente en los distintos linajes evolutivos actan como
buenos inmungenos en especies heterlogas.

En cambio, molculas evolutivamente conservadas (como el colgeno, el citocromo c) no son buenas

inmungenas.

Por otro lado, ciertas molculas propias pueden actuar como autoantgenos, debido a que proceden de
rganos inmunolgicamente privilegiados (secuestrados respecto del sistema inmune) en las fases
tempranas del desarrollo (p. ej., del esperma, tejido de la crnea).

4.2.1.2 Tamao molecular

En general, se puede decir que, a mayor tamao, mayor inmunogenicidad. Sustancias de unos 100.000 dalton
(Da) suelen ser buenos inmungenos, mientras que las de menos de 5.000-10.000 Da son malos
inmungenos.

4.2.1.3 Heterogeneidad en la composicin qumica

A mayor heterogeneidad de composicin qumica, mejor inmunogenicidad.

Los copolmeros sintticos repetitivos de un solo aminocido, o los polisacridos a base de un solo azcar
son malos inmungenos.

La poli [glu-lys] requiere tener 30-40 kDa de p.m. para ser inmunognica;

pero el poli {[glu-lys]-tyr} slo requiere 10 kDa;

si al anterior copolmero lo volvemos ms complejo aadiendo unidades de phe, ya slo se necesitan

tamaos moleculares de 4 kDa para desencadenar respuesta inmune.

La complejidad qumica se expresa tambin en el hecho de que contribuye la estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria de las protenas.

4.2.1.4 Degradabilidad

Slo las molculas degradables por el hospedador son buenas inmungenas. Como veremos, ello se debe a
que la inmunidad humoral y la celular dependen de la activacin de los linfocitos TH, que a su vez depende de
que ste reconozca antgeno degradado, procesado y presentado por molculas MHC-II de las clulas
presentadoras de antgeno (APC).

Las molculas no degradables no son buenas inmungenas. Por ejemplo, los polmeros de D-aminocidos no
pueden ser degradados por los macrfagos (stos no tienen enzimas hidrolticas adecuadas), por lo que no
pueden se procesados y presentados a los linfocitos TH.

En general, las molculas grandes e insolubles son mejores inmungenos, ya que son mejor fagocitadas y
procesadas.

4.2.2 Factores del sistema biolgico

4.2.2.1 Genotipo del receptor

La influencia del genotipo del hospedador se puede comprobar en experimentos usando razas puras de
animales de laboratorio. Supongamos que disponemos de una raza pura A que induce altos niveles de Ac en
respuesta a un determinado Ag, y otra raza B que produce bajos niveles de Ac ante ese mismo Ag. Los
individuos de la F1 procedentes del cruce de AxB exhiben niveles intermedios de Ac al ser enfrentados con el
citado Ag.

Por anlisis de retrocruzamiento se comprob que los genes que controlan la mayor o menor respuesta se
cartografiaban en una zona concreta de un cromosoma, dentro del llamado complejo principal de
histocompatibilidad (MHC).

Las protenas sintetizadas por dicho complejo MHC funcionan para presentar el Ag procesado a las clulas T,
y juegan un papel esencial en determinar el grado de respuesta a cada antgeno.

Aparte de la dotacin de alelos del complejo MHC que cada individuo posee, existen otros genes que tambin
influyen en el grado de respuesta inmune, como los que codifican el BCR, el TCR y los de citoquinas. Esto
ser tratado en el captulo dedicado a la regulacin de la respuesta inmune.

4.2.2.2 Dosis y ruta de administracin del antgeno

Para cada inmungeno experimental existe un protocolo de administracin ms adecuado, que supone usar
una determinada ruta y cierta dosis, lo que condiciona una respuesta inmune ptima. Determinar estos
parmetros reviste un especial inters a la hora de la administracin de las vacunas.

Dosis:

dosis muy bajas de Ag pueden no estimular a los linfocitos (falta de respuesta);

dosis demasiado altas pueden provocar un estado activo de tolerancia inmunolgica, por el que los
linfocitos entran en una situacin de no respuesta.

dosis adecuadas son capaces de estimulacin.

Un protocolo de dosis repetidas espaciadas a lo largo de varias semanas es mejor que una dosis nica,
porque provoca una mayor proliferacin clonal de linfocitos t y B especficos.

Rutas de administracin: determinan a qu organo linfoide ir a parar el antgeno.

por va oral se estimula sobre todo el MALT del tracto digestivo (pero al mismo tiempo se puede inducir
tolerancia sistmica: vase tema 15).

por va parenteral:

intravenosa: el antgeno podr quedar retenido en el bazo

intradrmica

subcutnea: el antgeno terminar en algn ganglio regional

intramuscular

intraperitoneal

4.2.2.3 Adyuvantes ( coadyuvantes)

Los adyuvantes son sustancias que cuando se mezclan con un Ag y se inyectan con l, mejoran la
inmunogenicidad de ese antgeno.

Algunos adyuvantes y sus mecanismos de accin:

Almina: sales insolubles de sulfato alumnico-potsico. Acta mediante varios mecanismos:

1. precipita el antgeno. Al inyectarse va liberando el antgeno lentamente, con lo que se suministra un

estmulo persistente (el Ag dura varios das en el lugar donde se inocul).

2. El Ag precipitado tiene mayor tamao, por lo que puede ser fagocitado ms fcilmente, y por lo tanto
es presentado ms efectivamente.

3. Induccin de granulomas.

Adyuvantes de Freund: el adyuvante incompleto de Freund consiste en una solucin acuosa con el Ag, junto
con un aceite mineral y un agente dispersante (p. ej., el manoleato). El adyuvante completo de Freund es
como el incompleto, pero incorpora una suspensin de Mycobacterium muertos por calor.

1. Ambas versiones liberan lentamente el Ag, con lo que se logra un estmulo persistente.

2. El macrfago aumenta en su superficie el nmero de molculas B7, lo que facilita su interaccin con el
receptor CD28 del linfocito TH. Como veremos en otro captulo, ello suministra la llamada seal
coestimulatoria, que potencia la interaccin entre MHC (del macrfago), Ag procesado y TCR (de la
clula T).

3. Adems, el completo es ms potente porque suministra muramil-dipptidos de la pared celular de las

micobacterias: ello permite una buena activacin de macrfagos, que liberan la citoquina IL-1, que a su
vez activa a los linfocitos TH.

4. El completo induce igualmente mejor los granulomas. El granuloma es una infiltracin celular, con una
masa densa y rica en macrfagos, con lo que se mejora el procesamiento y presentacin del Ag. Se
provoca una buena liberacin de IL-1 de los macrfagos, que activan a los linfocitos TH.

Polirribonucletidos sintticos: estimulan la proliferacin inespecfica de linfocitos.

Lipopolisacrido bacteriano (LPS): igual efecto que el anterior.

Recientemente se estn ensayando los liposomas: el antgeno se encierra en liposomas o se une a la bicapa
lipdica de este tipo de vesculas membranosas.

4.3 EPITOPOS

Los epitopos o determinantes antignicos son cada uno de los sitios discretos de una macromolcula que son
reconocidos individualmente por un anticuerpo especfico o por un TCR especfico. Son las regiones
inmunolgicamente activas de un inmungeno (las que se unen de hecho a un receptor de linfocitos o a un Ac
libre).

Por lo tanto, a partir de ahora habremos de acostumbrarnos a pensar en los antgenos como estructuras
complejas que suelen constar de varios tipos de epitopos, cada uno de ellos capaz de unirse con un Ac o un
TCR especfico diferente. En este sentido, las macromolculas son antgenos multivalentes, con muchos tipos
de determinantes antignicos distintos.

Si hablamos de Ag proteicos, esta unin suele implicar varios niveles de la estructura del antgeno, desde
la primaria a la terciaria (y, en su caso) a la cuaternaria.

En el caso de los polisacridos, las ramificaciones debidas a distintos enlaces glucosdicos suponen
 conformaciones peculiares que son reconocidas de modo especfico.

Diferencias en el modo de reconocimiento por parte de clulas B y T

Epitopos de clulas B Epitopos de clulas T

unin con el Ag binaria: Ig - Ag ternaria: TCR - Ag- MHC

(reconocimiento restringido
por el haplotipo)

se une a Ag soluble? S No

requiere MHC? No S

naturaleza qumica del Protena nicamente protenas

epitopo
Lpido

Polisacrido

Propiedades del epitopo parte externa, accesible parte interna,

desnaturalizada
hidrfilo
anfiptico
movilidad (flexibilidad)
pptido lineal; unin a
secuencial o MHC
conformacional

4.3.1 Propiedades de los epitopos de clulas B

1. El tamao de un epitopo depende del tamao del sitio de unin que posea la inmunoglobulina
especfica respectiva. Cada sitio de unin a un epitopo en una inmunoglobulina se denomina paratopo.

2. Los epitopos de clulas B de protenas nativas suelen consistir en varios aminocidos hidrfilos de la
superficie de la protena, y son los que estn ms accesibles al Ac libre o al Ac de membrana (del
BCR).
 3. Los epitopos reconocidos por clulas B pueden ser secuenciales (es decir, una serie de aminocios
contiguos) o no secuenciales (tambin llamados conformacionales).

Los epitopos secuenciales suelen depender de regiones en forma de bucle, situadas entre
cadenas a consecutivas.

Los epitopos conformacionales dependen de la configuracin nativa de la protena.

4. Si desnaturalizamos una protena, se perdern los epitopos conformacionales pero permanecern los
secuenciales.

5. Los epitopos de B tienden a situarse en regiones flexibles de la molcula, capaces de "moverse"

molecularmente. Parece que ello tiende a facilitar el encaje con las regiones complementarias
(paratopo) del Ac.

6. La mayor parte de la superficie de una protena globular es potencialmente antignica, y consiste en

numerosos epitopos parcialmente superpuestos. Ahora bien, dada una determinada protena, no todos
los epitopos son igualmente inmunognicos para distintos individuos de la misma especie. Para cada
individuo y para cada Ag suele existir un epitopo llamado inmunodominante.

4.3.2 Propiedades de los epitopos reconocidos por clulas T

Antes de desarrollar las caractersticas de estos epitopos describiremos sucintamente una serie de estudios
clave que sealaron las diferencias esenciales entre el modo en que las clulas T reconocen los epitopos
respecto a lo visto para las clulas B:

Estudios de Benacerraf (1959):

si inmunizamos un animal por primera vez con una protena nativa, se puede observar una respuesta
celular primaria.

Si inmunizamos al mismo animal una segunda vez con la misma protena nativa, se

La "sorpresa" (para las expectativas de la poca) llega cuando esa segunda inoculacin se hace con la
protena desnaturalizada: tambin ocurre una respuesta celular secundaria (algo que no ocurre con la
respuesta humoral).

La explicacin a este fenmeno no lleg hasta los aos 80: fue entonces cuando se descubri que los
linfocitos T no reconocen Ag soluble, sino Ag procesado, de modo que los pptidos resultantes son
presentados en asociacin con MHC.

1. El tamao del epitopo de clulas T queda determinado por el tamao del surco de unin al Ag de la
molcula de MHC.

Las molculas de MHC-I unen pptidos de entre 8 y 11 aminocidos.

Las molculas de MHC-II unen pptidos de entre 11 y 17 aminocidos.

2. Los pptidos antignicos reconocidos por clulas T forman un complejo trimolecular junto con el TCR
del linfocito T y el MHC de la clula presentadora o diana. El antgeno reconocido por clulas T tiene
dos zonas de unin: una para ligarse al TCR, denominada epitopo, y otra para engarzar al MHC,
denominada agretopo.
 3. Los pptidos antignicos implicados en el complejo trimolecular proceden del procesamiento
intracelular del inmungeno proteico original.

4. Los antgenos reconocidos por las clulas T presentan pptidos anfipticos. Precisamente, quiz la
funcin del procesamiento sea "desplegar" el Ag y exponer estas regiones internas anfipticas, de
modo que la porcin hidrfoba suele actuar de agretopo, mientras que la porcin hidrfila acta de
epitopo propiamente dicho.

Por programas de ordenador es posible predecir en una protena aquellas regiones anfipticas de tamao
adecuado que tericamente podran actuar como pptidos antignicos. Esto se refleja en el llamado "ndice
anfiptico", y se est aplicando actualmente al diseo de vacunas sintticas peptdicas (como en el caso de
la malaria).

Tambin se puede recurrir por ordenador a medir el "ndice de protrusin" de distintas partes de las
protenas: las zonas con menor protrusin son mejores candidatas a funcionar como pptidos de clulas T.

5. Debido a que los Ag reconocidos por clulas T lo son unidos a las molculas de MHC del individuo, y
debido a que a su vez existe una gran diversidad de alelos de MHC en las poblaciones de una
especie, los epitopos inmunodominantes en cada individuo dependen en parte del juego de molculas
MHC de ese individuo (lo cual, depende de su dotacin gentica, obviamente). En una protena slo
una minora de zonas peptdicas tienen capacidad para unirse a las molculas MHC de cada individuo,
y de esas zonas, slo algunos estimulan de hecho a la clula T.

4.4 HAPTENOS

Se define como hapteno aquel grupo qumico definido, de pequeo tamao, que por s mismo es incapaz de
desencadenar una respuesta inmune (es decir, no es inmungeno), pero que unido covalentemente a una
molcula portadora se comporta como inmungeno (llegando a constituir el nico determinante
inmunodominante del conjugado).

En los aos 20 y 30 Karl Landsteiner realiz unos famosos experimentos que mostraron por primera vez la
asombrosa especificidad del sistema inmune.

como haptenos emple una serie de derivados del benceno, como el dinotrofenol (DNP), en
configuraciones distintas (orto, meta, para), as como distintos derivados a base de distintos sustituyentes
en determinadas posiciones conocidas.

Como molcula portadora emple la seroalbmina bovina (BSA).

Obtena as distintas versiones de conjugados BSA-DNP.

Inyectaba conjugados BSA-DNP en un animal de laboratorio, esperaba a que se produjera la respuesta

inmune, y tras una sangra, obtena suero enriquecido en anticuerpos frente al hapteno (antisuero
especfico).

Finalmente, pona en contacto el antisuero con el hapteno original, y en paralelo, con otros haptenos
consistentes en variantes del original (lugar del localizacin de algn radical, naturaleza qumica del
radical).

Las conclusiones que se pueden extraer de estos experimentos son:

 Casi ms importante que la naturaleza qumica concreta del hapteno es la configuracin global del mismo
(obsrvese que el hapteno equivale a un epitopo inmunodominante) a la hora de determinar si dicho
hapteno puede reaccionar (y en qu cuanta) con el antisuero (anticuerpos).

En los experimentos se puede comprobar igualmente la existencia de algunas reacciones cruzadas, sobre
todo cuando dos haptenos comparten una configuracin parecida.

Igualmente se puede advertir de estos experimentos la enorme diversidad posible de anticuerpos:

cualquier estructura qumica definida, natural o artificial, puede dar origen, si va unida a un portador, a
anticuerpos especficos.

4.5 MITGENOS Y SUPERANTGENOS

4.5.1 Mitgenos

Los mitgenos son agentes capaces de inducir la proliferacin de una gran cantidad de clones de linfocitos T
y/o B, de modo inespecfico (por lo que tambin se denominan activadores policlonales).

Ejemplos de mitgenos:

Lectinas: conllevan la aglutinacin de clulas (entre ellas linfocitos), pero aqu nos interesan sobre todo por
su capacidad de activacin policlonal de clulas T, B, o de ambas. Como ejmplos de lectinas tenemos:

concanavalina A (conA), que es mitgeno de clulas T

fitohemaglutinina (PHA), que es mitgenos de clulas T

mitgeno de fitolaca (PWM), que es mitgeno tanto de T como de B.

Lipopolisacrido (LPS) de bacterias Gram negativas. Su actividad como mitgeno reside en la porcin de
lpido A.

4.5.2 Superantgenos

Los superantgenos son unos potentes activadores policlonales de clulas T que expresan secuencias
comunes en sus receptores: llegan a activar hasta la quinta parte del total de estos linfocitos). Esta activacin
es independiente de la especificidad hacia una combinacin particular de Ag procesado-MHC.

Unen la porcin Vb del TCR y lo entrecruzan con la parte externa del MHC, fuera del surco que normalmente
sirve para exponer y presentar el antgeno. De esta forma, entrecruzan de modo inespecfico las clulas
TH con las APC, de modo que los linfocitos T se activan sin haber reconocido Ag procesado y presentado en
el surco de MHC-II de las APC. El resultado es que un gran nmero de clones de clulas T segregan grandes
niveles de citoquinas, lo que puede llevar a shock y a muerte.

Ejemplos de superantgenos son ciertas toxinas de Staphylococcus aureus, como la toxina del sndrome del
choque txico (TSS-1), o la enterotoxina.
VACUNAS (OMS): Se entiende por vacuna cualquier preparacin destinada a generar inmunidad contra una
enfermedad estimulando la produccin de anticuerpos. Puede tratarse, por ejemplo, de una suspensin de
microorganismos muertos o atenuados, o de productos o derivados de microorganismos. El mtodo ms
habitual para administrar las vacunas es la inyeccin, aunque algunas se administran con un vaporizador
nasal u oral.