EL NMERO DE BACTERIAS

RECUENTO EN PLACA
El recuento en placa es uno de los mtodos ms utilizados para determinar cul es el nmero de
microorganismos viables en un medio lquido.

Cuando la concentracin es baja se procede a filtrar la muestra a travs de una membrana que
ser pasada al medio de cultivo, en una placa de Petri. Los microorganismos retenidos en la
membrana se desarrollarn formando colonias, permitiendo su cuantificacin.

Cuando la concentracin es alta, se procede a la preparacin de diluciones seriadas en una

secuencia de 1:10, alcanzndose diluciones de 10 -7 o mayores. Pequeas alcuotas de esas
diluciones son sembradas en medio nutritivo en placa, donde las bacterias se desarrollan formando
colonias.

En las placas donde la concentracin de la alcuota sembrada es muy alta, las bacterias formarn
un csped, pero si la concentracin es muy baja, el nmero de colonias podr ser muy bajo. Entre
los dos extremos, alguna de las placas contendr un nmero de colonias entre 20 y 300,
permitiendo la cuantificacin.

Como esta tcnica demanda mucho material, consideramos que una simplificacin como la de
Wymer puede ser muy til en un laboratorio de enseanza.

BIBLIOGRAFA
MALAJOVICH M.A. Atividades prticas Trabalhar em segurana. Guia n0 67, www.bteduc.bio.br
VERMELHO A.B. et al. Prticas de Microbiologia. Rio de Janeiro, Guanabara-Koogan, 2006
WYMER P. Practical Microbiology and Biotechnology for Schools. London, McDonald & Co., 1987.

ACTIVIDAD PRCTICA

OBJETIVO

Determinar el nmero de microorganismos de un cultivo bacteriano.

MATERIALES

Cultivo de Escherichia coli preparado el da anterior y diluido a 10-4 un rato antes de la clase, 1
placa de Petri con medio nutritivo, 5 tubos de ensayo con 4,5 ml de solucin salina estril, 1 pipeta
de 1 ml, 1 pipeta Pasteur, recipiente de descarte con desinfectante, cinta adhesiva, marcador,
estufa a 37C.

Antes de comenzar, verificar la ausencia de agua de condensacin en la placa de Petri. En caso

contrario ver la Gua N 81: El secado de las placas de Petri.

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PROCEDIMIENTO

Seguir las normas de trabajo standard (ver Gua N 67). Todo el

procedimiento debe realizarse en condiciones aspticas.

A. Preparacin de una serie de diluciones

Transferir 0,5 ml de una suspensin bacteriana de un tubo al siguiente, iniciando el

procedimiento a partir del tubo que contiene la suspensin bacteriana de concentracin 10-4.
Un esquema general de los pasos a seguir se encuentra representado en la Figura 1. Entre una
dilucin y otra, mezclar bien el contenido de los tubos, mezclando por rotacin.

Figura 1. Preparacin de la serie de diluciones.

Serie de diluciones

0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

A B C D E F

10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9

Concentraciones

B. ROTULACIN DE LA PLACA

Dividir la placa en 6 sectores, como se representa

en el esquema siguiente.

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C. SEMBRADO

1. Tomar con la pipeta Pasteur una pequea cantidad de lquido del tubo F, de concentracin 10 -9
(dilucin 109).

2. Abrir la placa de Petri y dejar caer una gota en el sector rotulado -9.

3. Cerrar la placa y colocar el exceso de lquido en el tubo F.

4. Repetir los pasos anteriores con los tubos E, D, C, B y A.

5. Descartar la pipeta en el recipiente con desinfectante.

6. Cerrar la placa e incubar a temperatura adecuada durante 24-48 hs.

RESULTADOS

Observar la placa y buscar un sector donde puedan diferenciarse entre 10 y 20 colonias.

1. Calcular cuntas veces el cultivo A fue diluido en esa gota.

2. En base al nmeros de colonias y a la dilucin correspondiente, calcular la concentracin de

microorganismos en el tubo A.
Pista: se estima que en una pipeta calibrada, 1 ml de lquido contiene 20 gotas.

3. La dilucin del cultivo original fue realizada con una nica pipeta, partiendo del tubo ms
concentrado en sentido al tubo menos concentrado. Al sembrar invertimos ese sentido. Cules
son los errores introducidos con estos procedimientos?

NUESTRO COMENTARIO

Las actividades prcticas de titulacin demandan una cantidad grande de material, lo que muchas
veces resulta inviable en un laboratorio de enseanza. Este protocolo, tomado del libro de Wymer,
Practical Microbiology and Biotechnology for Schools, resulta muy interesante porque permite
introducir el procedimiento de un modo bastante simple. De todos modos exige de cierta
experiencia previa y bastante habilidad manual.

Los resultados pueden observarse en la Figura1.

CMO ARMAR UN PROYECTO?

La tcnica puede ser aplicada para determinar la concentracin de microorganismos en agua o a lo

largo de una fermentacin, siempre y cuando se utilicen los medios de cultivo correspondientes.

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Figura 1: Titulacin de un cultivo de Escherichia coli.

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