UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

Microbiologa Industrial

Revisin de proyecto:

Cintica de Fermentaciones

PROFESOR:
Adalberto Gmez Cruz

PRESENTAN:
CARDONA VZQUEZ JAIRO

MELNDEZ GMEZ NESTOR

HERNNDEZ HERNNDEZ ANDRS

SOLANO TORRES DAVID DANIEL

603

Chapingo, Mxico; Septiembre de 2012

ANTECEDENTES
La fermentacin alcohlica es una biorreaccin que permite degradar azcares en
alcohol y dixido de carbono. La conversin se representa mediante la ecuacin:
Las principales responsables de esta transformacin son las levaduras. La
Saccharomyces cerevisiae, es la especie de levadura usada con ms frecuencia.
Por supuesto que existen estudios para producir alcohol con otros hongos y
bacterias, como la Zymomonas mobilis, pero la explotacin a nivel industrial es
mnimo.

A pesar de parecer, a nivel estequiomtrico, una transformacin simple, la

secuencia de transformaciones para degradar la glucosa hasta dos molculas de
alcohol y dos molculas de bixido de carbono es un proceso muy complejo, pues
al mismo tiempo la levadura utiliza la glucosa y nutrientes adicionales para
reproducirse. Para evaluar esta transformacin, se usa el rendimiento
biomasa/producto y el rendimiento producto/ substrato.

Variables de la fermentacin alcohlica y sus efectos sobre el

proceso
Clase de microorganismo: Los microorganismos ms empleados para la
produccin de etanol a partir de azcares son las levaduras del gnero
Saccharomyces y Kluyveromyces y las bacterias Zymomonas mobilis.

Concentracin del sustrato: El carbono es suministrado por los azcares

contenidos en la materia prima, siendo la concentracin de azcar un valor que se
debe considerar ya que afecta la velocidad de la fermentacin, el comportamiento
y el desarrollo de las clulas de la levadura.

Concentracin de Etanol: La levadura es afectada en alto grado por la

concentracin de alcohol, una concentracin alcohlica del 3% ya influye sobre el
crecimiento; una concentracin de un 5% influye tanto sobre el crecimiento como
en la fermentacin.

Temperatura: La seleccin de esta variable es influenciada tanto por factores

fisiolgicos como por problemas fsicos (prdidas debidas a la evaporacin de
etanol al trabajar con temperatura elevada).
. En el caso de la Saccharomyces cerevisae se tiene un desarrollo ptimo entre
28-35 C, recomendable 30 C.

pH: Este es un factor importante en la fermentacin. Segn estudios se hall que

el pH ms favorable para el crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae se
encuentra entre 4.4 - 5.0, con un pH de 4.5 para su crecimiento ptimo.
OBJETIVOS:
Llevar a cabo una fermentacin alcohlica utilizando levaduras (Saccharomyces
cerevisae), con el fin de determinar la cintica de la reaccin al cuantificar el
sustrato, el producto, la biomasa y el dixido de carbono (CO2).

METODOLOGIA:

CUANTIFICACIN DE CLULAS (Cmara de Neubauer)

1. Colocar 1 Ml de la muestra en un matraz aforado de 10 mL. Cuando se
trabaja con muestras muy concentradas es necesario preparar diluciones.
2. Homogenizar la muestra y tomarla con un tubo capilar para depositar una
gota en la cmara y el cubreobjetos por el borde.
3. Localizar el cuadro central grande, que se encuentra dividido 5*5 cuadros
pequeos que a su vez se encuentran limitados por lneas triples. Estos
cuadros pequeos a su vez se encuentra dividido en 16 cuadros ms.
4. Realizar la cuantificacin de clulas con el objetivo en 40X, contando el
nmero de clulas localizadas en las cuatro esquinas y el del centro.
5. Para calcular el nmero de clulas por mL se usa la siguiente frmula:

# Clulas/5*(25 cuadros)=# clulas/0.1 mm3 *104 =# clulas/mL

El factor 104 por el cual se debe multiplicar el nmero de clulas por cuadro grande
es porque este cuadrado contiene un volumen de 0.1 mm3.

MEDICIN DEL pH
El pH se medir con un potencimetro cada 4 horas.

MEDICIN DE ACIDEZ
Se toman 10 mL y diluir en un matraz Erlenmeyer con 50 mL de agua destilada.
Se valora con NaOH utilizando fenolftalena como indicador. Hacer un testigo con
agua para corregir.

Calculo:

% de acidez= (mL de NaOH*N*0.060*Dilucin*100) / (mL de muestra)

CUANTIFICACIN DE CO2
1. Preparar soluciones de cido clorhdrico 1.92N e hidrxido de potasio 0.87N
2. Colocar 200 mL de hidrxido de potasio 0.87N en un matraz Erlenmeyer con
un tapn de hule para preparar la trampa de CO2, y agregando posteriormente
4 gotas de fenolftalena como indicador.
3. Realizar un blanco con hidrxido de potasio 0.87N para comparar con la
produccin de CO2.
4. Tomar 200 mL de hidrxido de potasio que se usaron como trampa despus de
12 h y en cuanto haya cambio de color a rosa, titular.
5. Titular con cido clorhdrico 1.92N utilizando 3 gotas de fenolftalena como
indicador.
6. Calcular la cantidad de CO2 con el uso de estequiometria.

EXTRACCIN DE ALCOHOL POR MEDIO DE LA TRAMPA DE

SOXHLET
Extraccin de soxhlet:

1. Utilizar 60 mL de la muestra problema con 60 mL de agua destilada.

2. Colocar en un matraz de bola.
3. Posteriormente someter a calentamiento hasta punto de ebullicin.
4. Extraer el alcohol

Para determinar el contenido de alcohol utilizar el mtodo de densidad relativa con

un picnmetro:

1. Determinar la masa del picnmetro a peso constante.

2. Llenar de agua y pesar en balanza analtica
3. Repetir con la muestra de alcohol

Determinar la densidad del alcohol con la siguiente frmula:

Densidad especifica (25/25C)= (p3-p1)/ (p2-p1)

Donde:

P1= peso del picnmetro con muestra

P2= peso del picnmetro con agua

P3= peso del picnmetro vaco

Nota: Corregir la densidad a 15/15C

MEDICIN DE SLIDOS TOTALES MEDIANTE LA OBTENCIN DE
GRADOS BRIX (Bx)
Los grados brix se medirn con un refractmetro cada 4 horas

DETERMINACIN DE AZUCARES TOTALES

1. Tomar 10 mL de muestra problema y verterlo en un matraz Erlenmeyer de
250 mL agregando 50 mL de agua destilada.
2. Agregar 40 mL de crema de alumbre y dejar sedimentar.
3. Filtrar con papel filtro.
4. Agregar cido clorhdrico y calentar a bao Mara por 20 minutos a 65 C y
dejar enfriar.
5. Agregar 3 gotas de fenolftalena y neutralizar con NaOH.
6. Una vez neutralizada usar la solucin para titular la solucin de Fehling.
7. Calcular el % de azucares totales con la siguiente formula:

%AT= [((100*T/V)*100)/P]

Donde:

T= Titulo de la solucin A-B.

V= Volumen en mL de la solucin problema gastados en la titulacin de 10 mL

de solucin A-B.

P= Peso de la muestra