TIPOS DE ELISAS

El ELISA se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al
estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e
insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo
quedar inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un
substrato especifico que al actuar la enzima producir un color observable a simple vista o
cuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro

Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuacin

Se han desarrollado mltiples variantes de ensayos ELISA que permiten desde la

cuantificacin de un antgeno en solucin, la deteccin de un anticuerpo en una solucin
(por ejemplo en el clonaje de anticuerpos monoclonales) o la determinacin de la subclase
de un anticuerpo. A continuacin se describen los ms comunes.

ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las placas ELISA se preparan
recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el
antgeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican la presencia de antgeno
en la solucin analizada. Es necesario incluir controles negativos que sern
muestras del mismo tipo de las analizadas (sangre, orina,...) pero en las que se
tenga la certeza de la ausencia del antgeno buscado. Asimismo se incluyen
controles positivos (soluciones donde se encuentra el antgeno buscado).

ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos. Lavado para eliminar
los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
 Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima; si los anticuerpos
reaccionan con los antgenos, el complejo quedar solubilizado. Lavado para eliminar los
anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

ELISA indirecto. Las placas ELISA se preparan de la misma forma a la anterior. Los
controles positivos y negativos son los mismos. El sistema de deteccin emplea dos
anticuerpos: uno primario contra el antgeno y uno secundario marcado contra el
primario. La deteccin tiene mayor sensibilidad por presentar una amplificacin de
seal debida a la unin de dos o ms anticuerpos secundarios por cada primario.
Es el ensayo ms popular, como lo es la inmunofluorescencia indirecta, pues un
mismo secundario marcado y un mismo sistema enzimtico permite cuantificar
una gran cantidad de antgenos.

ELISA Indirecto.
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de
estudio. Lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn
especficamente con los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
 Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los
anticuerpos especficos aadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los
antgenos. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
El ELISA indirecto es el mtodo de eleccin para detectar la presencia de anticuerpos
sricos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), agente causante del
sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Segn esta tcnica, protenas
recombinantes de la envoltura y el ncleo del VIH se absorben como antgenos en
fase slida a los pocillos. Las personas afectadas de VIH producen anticuerpos
sricos contra eptopos en estas protenas vricas. En general, el ELISA indirecto
permite detectar anticuepos sricos contra VIH desde las primeras seis semanas de
una infeccin.

ELISA sndwich (Ensayo de captura de antgeno y deteccin mediante

inmunocomplejos). Se trata de un ensayo muy empleado en el que se recubre el
pocillo con un primer anticuerpo anti-antgeno. Despus de lavar el exceso de
anticuerpo se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antgeno, que
ser retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Despus de
un segundo lavado que elimina el material no retenido se aplica una solucin con un
segundo anticuerpo anti-antgeno marcado. As pues cada molcula de antgeno
estar unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al
menos, que lo marca. Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido
a la amplificacin de seal que permite el segundo anticuerpo.
ELISA Sndwich DAS (Double Antibody Sandwich).
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar.
Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal
forma que si est presente el agente patgeno de diagnstico (antgeno), reaccionar
especficamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los antgenos
que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un eptopo
diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte) conjugados con una
enzima, los cuales reaccionan con los antgenos aadidos con la muestra problema y que
se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados
que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

ELISA Sndwich HADAS.

Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar.
Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal
forma que si est presente el agente patgeno de diagnstico (antgeno), reaccionar
especficamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los antgenos
que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un eptopo
diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte), los cuales reaccionan
con los antgenos aadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los
anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos que no hayan reaccionado.
Adicin de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos empleados en el paso
anterior. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

Elisa competitiva.- Consta de las siguientes etapas:

 Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar.
Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin en concentracin conocida de una mezcla de antgenos del anticuerpo utilizado
en el paso anterior, marcados con una enzima y antgenos desconocidos objeto de estudio.
Paralelamente, aadir nicamente antgenos del anticuerpo usado en el paso anterior,
marcados con una enzima. Lavar para eliminar los antgenos que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado de ambas pruebas y comparar
los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son anlogas, el antgeno a estudio no
tienen nada que ver con los anticuerpos empleados para tapizar el soporte. Si hay
diferencia en las lecturas de ambos pocillos, el antgeno objeto de estudio, est
relacionado serolgicamente con el anticuerpo empleado para tapizar el soporte y la
diferencia de densidad ptica, es proporcional a la concentracin del antgeno problema
en la muestra.