ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aula 6
Espectrofotometria no UV
UV--Vis
FLUORESCNCIA MOLECULAR

Prof. Rafael Sousa

Departamento de Qumica - ICE

rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

Luminescncia x Fluorescncia Molecular

Sal cozinha

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Espectro de emisso obtido para uma amostra de sal de cozinha
 Perfil dos espectros de emisso
Espcies atmicas
Espectro de linhas
(gasoso)

Hg

Ne

Espcies moleculares Espectro de bandas

(lquido, slido ou gasoso)

Um espectro de emisso contnuas de bandas constitudo por muitas linhas

prximas que so muito difceis de serem resolvidas

Um espectro de emisso (que pode ser de fluorescncia) est

intimamente relacionado com a composio da amostra
(desde que as espcies emitam) 3
Perfil dos espectros de emisso
SLIDOS AQUECIDOS DO ORIGEM A
ESPECTROS DE EMISSO CONTNUOS:

Fenmeno radiativo
do corpo negro

As emisses observadas devem-

devem-se mais temperatura aplicada do que
composio dos materiais
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Caracterstica dos espectros de emisso
POTNCIA DA RADIAO EMITIDA PROPORCIONAL
CONCENTRAO DAS ESPCIES QUE EMITEM

Princpio da
P = kC
anlise quantitativa

Tinta branca com 0,2 % m/v

de branqueador ptico

Tinta branca com 0,4 % m/v

de branqueador ptico

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TIPOS DE Luminescncia Molecular

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 Sistemas Luminescentes
Fotoluminescncia
Fluorescncia e a fosforescncia: processos
de excitao similares (absoro de ftons)
MAS com decaimentos diferentes

Quimiluminescncia
Emisso de luz formada no decorrer de uma
reao qumica
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 ENTENDENDO a Fotoluminescncia
Absoro: 10-14 a 10-15 s
Fluorescncia: 10-5 a 10-8 s
Fosforescncia: 10-4 a 10 s

Fluorescncia Fosforescncia

Estado Estado Excitado

Estado Excitado Singleto
Fundamental Tripleto

Transies eletrnicas permitidas
Regras de seleo (Quntica) 8

 A molcula pode voltar ao seu estado
fundamental por uma combinao de vrias
etapas (processos de desativao):

Processos radiativos
Fluorescncia  RELEVNCIA ANALTICA
Fosforescncia

Processos no radiativos (aumento T do solvente)

Relaxao vibracional
Converso interna
Converso externa (colises)
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 DETALHANDO a Fotoluminescncia
Pode ocorrer em sistemas qumicos gasosos, lquidos e slidos
 TIPOS:
Fluorescncia de ressonncia:

emis = abs
(mais observada mais para espcies atmicas que moleculares)

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 DETALHANDO a Fotoluminescncia
Fluorescncia com deslocamento Stokes:
Stokes: emis > abs (fton absorvido
perde energia por inmeras vibraes microscpicas)

Existem semelhanas
entre os espectros de
excitao e o de absoro
(imagens especulares)

Ex.: Quinina, tanto a absoro em 250 nm quanto em 350 nm resultam na

Ex.:
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emisso em 450 nm
FOTOLUMINESCNCIA EM DIAGRAMAS DE
ENERGIA (Diagrama de Jablonski):

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Diagrama de Jablonski Simplificado

- Overlap de nveis eletrnicos

- No h mudana de spin

- Overlap de nveis eletrnicos

- H mudana de spin

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Outro ex
ex.. (emisso
(emisso no ressonante
ressonante):
):

Fenantreno: T1
S0 lenta 10-5 -10 s (fosforescncia)

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 DETALHANDO a Fotoluminescncia
Fatores que afetam a fluorescncia

Estrutura molecular
conjugao, rigidez, ...
Ambiente qumico
Concentrao, pH, viscosidade, presena de O2
Temperatura

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 Ex.: Fluorescncia e Estrutura
A substituio em anis aromticos afeta a
intensidade relativa de fluorescncia e os valores
dos max de absoro/emisso

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 Ex.: Fluorescncia e Estrutura
Empiricamente, observa-se que a rigidez da
estrutura favorece a fluorescncia.

Bifenil, 0,2

Fluoreno, 1 Zn-complexo >>> hidroxiquinolina

Rigidez
diminui a velocidade da relaxao no radiativa 17

 Ex.: Fluorescncia e Estrutura

Estruturas aromticas condensadas e/ou com

alto grau de conjugao apresentam alta
eficincia quntica

Heterocclicos: no
fluorescem

Heterocclicos
condensados fluorescem
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 Sobre os outros farores que afetam:
Solvente e Temperatura

Aumento de T ou diminuio de viscosidade do solvente

levam a um aumento no nmero de colises e portanto
aumenta a probabilidade de converso externas (supresso
colisional), diminuindo a eficincia da fluorescncia

pH
A fluorescncia de compostos aromticos com
funcionalidades cidas ou bsicas apresenta forte
dependncia com o pH.
Ex.: anilina/anilnio e fenol/fenolato

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 Sobre os outros farores que afetam:
Oxignio dissolvido
Oxignio e outras espcies paramagnticas tendem a
diminuir a fluorescncia pelo aumento do
cruzamento intersistemas (fosforescncia)
Tambm possvel a oxidao da espcie
fluorescente

Outras molculas em soluo

Molculas com tomos pesados (tetrabrometo de
carbono e iodeto de etila) aumentam a velocidade de
inverso de spin 20
 Caracterstica da Molculas
Luminescntes
 Rendimento quntico ou eficincia quntica :

a razo entre o nmero de molculas luminescentes

e o nmero total de molculas excitadas

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Intensidade de Fluorescncia e Concentrao
A fluorescncia diretamente proporcional a
concentrao da espcie fluorescente, desde
que em baixas concentraes (A < 0,05)
F = K.c
Desvios da linearidade:

Altas concentraes
- Auto-supresso (quenching)
- Auto-absoro
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Intensidade de Fluorescncia e Concentrao

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 Fluorescncia e Anlise Qumica
diretos:
Mtodos diretos:

ANALITO + COMPLEXANTE  COMPLEXO FLUORESCENTE

Mtodos indiretos
diretos::

ANALITO fluorecente + REAGENTE  PRODUTO menos FLUORESCENTE

Aplicaes para compostos orgnicos e inorgnicos:

inorgnicas:
Determinaes inorgnicas:

COMPLEMENTA a espectrofotometria no UV UV--Vis pois a maioria dos metais de

transio geralmente no foram complexos fluorescentes (decaimento no
radiativo muito eficiente), enquanto os outros metais podem formar produtos
fluorescentes 24
Fluorescncia e Anlise Qumica
Alguns exemplos

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 Fluorescncia e Anlise Qumica
Aplicaes:
orgnicas: PRINCIPAL APLICAO
Determinaes orgnicas:

cidos nucleicos
nucleicos,, alcalides, aminocidos, coenzimas, esteris,
frmacos,, flavonides, metablitos, porfirinas, protenas,
frmacos
vitaminas, ...

Na deteco de cromatgrafos e equipamentos de eletroforese

capilar favorecendo a obteno de LDs de 10-9 a 10-12 mol L-1 !

26
 Instrumentao: Esquema Geral

Os componentes dos instrumentos para medir a

fotoluminescncia so similares aos encontrados nos
fotmetros e espectrofotmetros UV/Vis

MAS a fonte de radiao necessita ser mais intensa que

aquelas utilizadas na absoro molecular
arco de mercrio
arco de xennio-
xennio-mercrio
lasers

A maioria dos equipamentos emprega a tica de duplo feixe

para compensar flutuaes na potncia da fonte

Espectrofluormetros corrigidos
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Instrumentao: Esquema Geral

Componentes similares a um
UV
UV--Vis

Detector a 90 o em relao
ao feixe incidente

Observa
Observa--se ambos os
espectros de excitao e
emisso

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 Componentes da Instrumentao
Fontes de radiao - Lmpadas
- Lasers (sensibilidade)

Xennio
Xennio:: produz um
espectro continuo entre
250 e 600 nm tendo um
mximo a 470 nm

Espectro de emisso de uma lmpada

de Xennio

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Componentes da Instrumentao
Fontes de radiao
Mercrio
Mercrio::

- Altas presso
presso:: mximos em 365,
365, 398 nm, , 734 nm.
nm.

- Baixa presso
presso:: mximo em 254 nm.
nm.

Espectro de emisso de uma lmpada de Mercrio

de alta presso 30
Componentes da Instrumentao
Filtros e monocromadores

Fluormetros x Espectrofluormetros

Detectores (transdutores)

Fotomultiplicadoras
Arranjo de diodos...
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Metodologias: Absoro vs Emisso

Mtodo Limite de deteco Custo Vantagem

(mol L-1)

UV-
UV-Vis 10-5 a 10-8 universal

Fluorescncia 10-7 a 10-9 Gama seleta

de espcies

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 Para responder na aula
6.1) Que fatores fsicos levam uma espcie qumica
(atmica ou molecular) emitir radiao?

6.2) Por que a fluorescncia mais utilizada na anlise

qumica do que a fosforecncia
fosforecncia??

6.3) O comprimento de onda de fluorescncia , exceto

na emisso de ressonncia, sempre maior que o de
excitao (ou de absoro)?

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Bibliografia consultada
 Anlise Instrumental
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

 Vogel - Anlise Qumica Quantitativa

GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

 Principles of Instrumental Analysis

Analysis
DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

 Anlise Qumica Quantitativa

D. Harris; 7a ed., 2008

 Tutoriais de fabricantes de espectrofotmetros

 Slides didticos fornecidos pelo Prof. Dr. Renato Rosseto (UFG)

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