Espectrofotometria

ESPECTROFOTOMETRIA. BASES FISICAS

Radiacin Electromagntica y su Interaccin con la Materia

El principio de funcionamiento de la espectrofotometra se basa en el empleo de las

interacciones entre la radiacin electromagntica y la materia.

Los modelos explicativos de la estructura de la materia que tienen como fundamento las
caractersticas ondulatorias de las partculas que la constituyen proporcionan un marco de
referencia conveniente para describir las interacciones entre la radiacin electromagntica
y la materia.

La energa electromagntica se encuentra constituida por fotones cada uno de los cuales
tiene como caracterstica una longitud de onda. Si asignamos una longitud de onda
caracterstica a cada tipo de radiacin, la propagacin de esa onda se har con una
frecuencia tal que al multiplicarla por su longitud debe darnos la velocidad de propagacin.
Esto es:

v = c/

La letra griega lambda minscula representa la longitud de onda y la letra V representa la

frecuencia de esa onda. c= 2,99792458108 ms-1 es la velocidad de la luz en el vaco.

El rango del espectro electromagntico va desde Rayos csmicos de alta energa (alta
frecuencia, corta longitud de onda) hasta microondas de baja energa (baja frecuencia, larga
longitud de onda).

La luz visible, que es la que podemos ver sin ningn tipo de transductor artificial, representa
apenas una pequea porcin de ese rango, con longitudes de ondas que van desde
alrededor de 400 manmetros para la luz azul, hasta alrededor de los 700 manmetros para
la luz roja. Longitudes de ondas mas cortas caen en la regin Ultravioleta, y longitudes de
onda mas largas se ubican en la regin Infrarroja.

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Los estudios de Plank describieron que a cada longitud de onda se le puede asignar un
valor de energa

Absorcin y Emisin de Radiacin por parte de la Materia

Una descripcin simplificada de la estructura de la materia permite explicar los enlaces

entre los tomos para formar molculas en trminos de la localizacin de ciertas partculas
subatmicas, los electrones, entre esos tomos. Esas partculas evidencian sus
caractersticas ondulatorias ya que interactan con la radiacin electromagntica.

La molcula en su forma estable bajo las condiciones ambientales corrientes (estado basal)
se encuentra en un determinado nivel energtico. Si se logra hacer incidir sobre esa
molcula un fotn de radiacin electromagntica con la energa apropiada, la molcula
incrementa su contenido energtico absorbiendo ese fotn. Se dice entonces que la
molcula pas a un estado excitado. En este caso se dice que la materia ABSORBE
energa.

La molcula energizada se encuentra en un estado que no es estable en las condiciones

ambientales corrientes; por lo tanto tiende a regresar a la condicin estable y para lgralo
emite un fotn con la energa que logr excitarla antes. A este fenmeno se le llama
EMISION.

La materia absorbe radiacin de diversas regiones del espectro electromagntico. Pero

esas absorciones pueden originar diferentes tipos de interacciones entre la materia y la
radiacin electromagntica.

Dependiendo del tipo de interaccin se pueden analizar las transiciones electrnicas que
se pueden causar con la radiacin ultravioleta o visible, y que son las empleleadas en la
espectrofotometra. La radiacin infrarroja interacta con los estados rotacionales y
vibracionales de las molculas, casos que no son empleados en la espectrofotometra, ya

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que el tipo de energa que la materia puede absorber de la radiacin electromagntica no

puede luego ser emitida en forma de fotones.

Caracteristicas Basicas de la Luz

Ya se dijo que la luz (fotones) es radiacin electromagntica, y que hay una pequea regin
del espectro electromagntico en el que las radiaciones son visibles a ojo humano.

La luz blanca es en si, una mezcla de todas las longitudes de onda presente en el rango
visible del espectro electromagntico.

Cuando la luz incide en un objeto, la luz puede ser:

Reflejada,
Absorbida,
Transmitida, o
Difractada.

Un prisma es un objeto con propiedades fsica capaces de descomponer la luz blanca en

los varios colores que la componen. Y si algo de la luz es absorbida, la luz transmitida o
reflejada, tendr los colores complementarios de la luz absorbida.

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APLICACIONES ANALITICAS
Un espectrofotmetro emplea un arreglo de prismas, espejos rendijas para seleccionar luz
con una longitud de onda deseada y dirigirla hacia el compartimiento de muestras y un
detector.

La funcin del detector es medir electrnicamente la intensidad de la luz que incide en el.

La muestra es colocada en la lnea de paso del haz de luz, y el instrumento compara la

intensidad de la luz que logra atravesar la muestra (I) con la intensidad de luz que se detecta
sin la muestra (Io).

El efecto que se mide puede ser:

Transmittancia (T)
Representa el porcentaje de luz que pasa a travs de la muestra. Es la relacin entre la
intensidad de radiacin transmitida por la muestra y la intensidad de radiacin que incide
sobre la muestra, medidos ambos en la misma posicin del espectro y con la misma
rendija. Se supone que el haz de radiacin es paralela y que incide sobre las superficies
planas y paralelas de la muestra formando ngulos rectos para evitar el fenmeno de
distraccin que podra desviar el haz del detector resultando en mediciones
equivocadas o errneas

T = 100(I/Io)

Absorbancia (Abs)
Representando la cantidad de luz que es absorbida por la muestra. Es el logaritmo en
base diez del reciproco de la transmitancia, en el que el disolvente puro es el material
de referencia.

Abs = - log10(T/100) = log10(Io/I)

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LEYES DE LA ESPECTROFOTOMETRIA
En las siguientes figuras tenemos un ejemplo de transmitanca y absorbancia, en el cual
suponemos que cada pelcula azul transmite el 70% de la luz que le incide.

Figura 1. Como no hay ninguna pelcula en el paso de haz de luz que absorba radiacin,
entonces el detector da una lectura de T=100% y Abs=0

Figura 2. Una nica pelcula esta en el paso del haz de luz, y su transmitancia es del 70%,
entonces:

I/Io = 0.70 ; T = 70% ; Abs = - log10(0.70) = 0.155

Figura 3. La segunda pelcula transmite el 70% de la luz que recibe, o 49% (0.70 x 70%) de
la luz original:

I/Io = 0.49 ; T = 49% ; Abs = - log10(0.49) = 0.310

Figura 3. La tercera pelcula transmite el 70% de la luz que recibe, o 34.3 % (0.70 x 49%)
de la luz original:

I/Io = 0.343 ; T = 34.3% ; Abs = - log10(0.343) = 0.465

Se puede concluir que la absorbancia es proporcional al nmero de pelculas de material

coloreado teniendo en cuenta que cada una de las pelculas tiene un espesor constante en
cada una de ellas. Eso es precisamente lo que estipula lea ley de Lamber:

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Ley de Lambert
La absorbancia es directamente proporcional lo delgado o largo de la trayectoria del
haz de luz a travs del material absorbente.

Un espectrofotmetro es comnmente usado para estudiar soluciones. Una solucin

conteniendo un material absorbente es comparada con una solucin de referencia del
mismo solvente pero sin materiales absorbentes. La transmitancia de la solucin referencia
se ajusta al 100% (Abs=0), y luego la solucin en cuestin es medida.

En el ejemplo anterior, la adicin de una gota de colorante rojo a una de las cubetas reduce
la transmitancia a 70% (Abs=0.155). La adicin de una gota a la segunda cubeta reduce la
transmitancia a 49% (Abs=0.310) duplicando la absorbancia como lo indica la ley de
Lambert, ya que la longitud que el haz atraviesa por el material colorido es ahora el doble
de la longitud inicial.

Sin embargo, si agregamos la segunda gota en la primer cubeta se obtiene exactamente el

mismo resultado que cuando fue agregada a la segunda cubeta. En este caso, la longitud
sigue siendo la misma inicial y final, pero la concentracin de material colorante ha sido
duplicada, duplicando tambin la absorbancia. A ese efecto se le conoce como la Ley de
Beer:

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Ley de Beer
A longitud constante, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin
del material absorbente.

Ambas leyes se combinan para formar:

Ley Lamber-Beer:
Abs = a x b x C

a:longitud de trayecto
b:concentracin
C:coeficiente de absorcin molar, que depende de
la longitud de onda de la luz, del material absorbente
y del medio o solvente.

Esta ley es de propiedad aditiva en el caso que haya distinto materiales absorbentes:
Abs = a1b1C1 + a2b2C2 + . . .