PRODUCCIN Y PATOGENICIDAD DE OCHO CEPAS DE HONGOS

ENTOMOPATOGENOS PARA EL CONTROL DE LA HORMIGA COQUI Atta

cephalotes L. BAJO CONDICIONES DE LABORATORIO

INTRODUCCION

Los hongos entomopatgenos son parasitos obligados o facultativos de insectos, con

un alta capacidad de esporulacin, sobrevivencia y parasitismo. Existen 700 especies
asociadas a insectos y sus mayores ventajas estn la facilidad de manipulacin, adaptacin a
diferentes ambientes, especificidad y capacidad de penetracin directa a travs del tegumento
(LEUCONA, 1996). Tambin se puede definir como organismos hetertrofos que poseen
clulas quitinizadas y producen una patognesis letal en insectos o arcnidos, que pueden
crecer sobre insectos. La mayora de hongos entomopatgenos estn ubicados en el filo
Ascomycota , tienen un gran potencial como agentes controladores, constituyendo un grupo
con ms de 750 especies, diseminados en el medio ambiente y provocando infecciones
fungosas a poblaciones de artrpodos (PUCHETA DIAZ et al., 2006). Entre los gneros ms
importantes estn: Metarhizium, Beauveria, Aschersonia, Entomophthora, Zoophthora, Erynia,
Eryniopsis, Akanthomyces, Fusarium, Hirsutella, Hymenostilbe, Paecelomyces y Verticillium
(LPEZ-LLORCA & HANS-BRJE, 2001). Mientras que para la (FAO, 2003), los gneros de
importancia son Metarhizium, Beauveria, Paecilomyces, Verticillium,Rhizopus y Fusarium.
Entre esos est la capacidad de regular las plagas para mantenerlas en niveles adecuados, el
mecanismo de accin de los mismos sobre su hospedero, as como investigaciones realizadas
sobre el comportamiento in vitro e in situ de los hongos de mayor utilizacin para el control de
ciertos insectos como la hormiga coqu (Atta cephalotes) (DELGADO & MURCIA-ORDOEZ,
2011).

La hormiga coqui (Atta cephalotes) es un insecto que por su organizacin, laboriosidad y a lo

numeroso de sus colonias que las caracteriza, debe mantenerse controlado, ya que constituye
una amenaza para los cultivos y plantaciones forestales, pues rpidamente arrasa con hojas y
brotes tiernos para la produccin de hongos, que son la base de su alimentacin. Los gneros
de hormigas coqui ms abundantes en el Per son Attas sp. Y Acromyrmex sp. EI gnero Atta
se encuentra en nuestro medio con mayor regularidad en porcentajes aproximados de 70 % a
80 % con respecto a otro gnero Acromyrmex que est presente en un 20 % a 30 %
(VERGARA, 2005).Esta prctica pre profesional pretende comprobar a travs de la
investigacin y la experimentacin, la produccin de hongos entomopatgenos y el efecto de
estos sobre la hormiga coqui, para poder contribuir como herramienta de manejo y control, en
las diversas actividades silviculturales (VERGARA, 2005).
Esta investigacin y la experimentacin en la produccin de hongos entomopatgenos y el
efecto de estos sobre la hormiga coqu, para poder contribuir como herramienta de manejo y
control, en las diversas actividades silviculturales. produccin en sustrato de arroz y ensayo de
patogenicidad de tres hongos entomopatgenos Beauveria bassiana (Bals.) Vuill, Metarhizium
anisopliae (Metschinihoff.) Sorokin y paecelomyces lilacinus (Thom) Samson, para el control
del hormiga coqui atta cepahlotes L.

MATERIALES Y METODOS

Ubicacin geogrfica
El presente trabajo se realiz en el laboratorio de Entomopatgenos de la Universidad Nacional
Agraria de la Selva, ubicado Av. Universitaria s/n en la ciudad de Tingo Mara, distrito de Rupa
Rupa, Provincia de Leoncio Prado, Departamento de Hunuco cuya ubicacin geogrfica es
09 18' 48" latitud sur, 75 59' 45" longitud oeste y 668.6 m.s.n.m.

Metodologa para operacin en campo y laboratorio

Fase de campo
La toma de muestra escogi un nido de hormiga coqui Atta cephalotes localizada en el bosque
reservado de la UNAS (BRUNAS) por el camino de acceso a la altura del zoocriadero y se
utiliz 135 individuos de hormigas. Luego se asperjaron con la suspensin de esporas de cada
aislamiento, cinco ejemplares por repeticin, es decir 15 ejemplares por cada tratamiento (por
cada aislamiento del hongo), durante un minuto. Los especmenes del testigo no tendrn
ninguna aspersin con el hongo, pero sern tratados con agua destilada estril durante un
minuto, Luego se acondicionaron los ejemplares de hormiga coqu dentro de envases de
plsticos de polietileno, que contenan un papel filtro estril y un algodn estril humedecido
con agua destilada estril.

Fase de laboratorio
Se utiliz ocho aislamientos de hongos entomopatgenos de los cuales cinco aislamientos
fueron adquiridos en el SENASA (B. bassiana, M. anisopliae y P. lilacinus) y los otros tres
aislamientos corresponden a la Provincia de Leoncio Prado (B. bassiana), Villa Rica (B.
bassiana) y Chiclayo (P. lilacinus) estos aislamientos se obtuvieron de colepteros infectados
estas muestras fueron llevadas al Laboratorio de Entomopatgenos donde fueron aisladas y
purificadas.
Ensayo de patogenecidad sobre hormiga coqui Atta cephalotes

Cuadro 1. Componentes en estudio

Entradas
Unidad Experimental Salidas
Cepas y aislamientos de Entomopatgenos (hormigas coqui) (Especmenes)

Cepas de Beauveria bassiana SENASA Patogenecidad de

los
Cepas Metarhizium anisopliae SENASA entomopatgenos
Hormigas coqui (Atta
sobre La hormiga
Cepa Paecilomyces lilacinus SENASA cephalotes L.)
coqui, es decir
Aislamientos de Beauveria bassiana y mortalidad de Atta
Paecilomyces lilacinus cephalotes

Siembra y replique de los emtomopatogenos.

Los entomopatgenos se prepar el medio de cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA) de dos formas
diferentes, en el cual PDA Formulado (ICN Biomedicals), en el cual se prepar PDA, 1 L de
medio de cultivo PDA en botellas de vidrio (botellas de nctar con una capacidad de 200 ml).; y
la otra forma es Agar Papa Azcar Rubia (PArA), en el cual se prepar PDA, 1 L de medio de
cultivo PArA en botellas de vidrio (botellas de nctar con una capacidad de 200 ml).
La siembra y repique de los entomopatgenos, posteriormente los hongos fueron cultivados en
el medio PDA y PArA en placas Petri 8.5 cm de dimetro previamente esterilizadas a 121 C a
15 lbs de presin por 30 minutos. Las placas Petri se incubaron a una temperatura de 24 5
C durante 10 das (tres placas Petri por aislamiento) esta operacin se realiz para obtener el
cultiv puro sin contaminante (repique). Los entomopatgenos fueron identificados por su color,
estructura del hongo, entre otros .La identificacin fue confirmada por el Ing. M.Sc. Giannfranco
Egovil Jump, Jefe del Laboratorio de Entomopatgeno del rea de Sanidad Vegetal de la
UNAS.
Produccin de los Entomopatogenos en Sustrato de Arroz
Para la preparacin del hongo en arroz se pes 200 g de arroz en una bolsa de polipropileno de
8x12, se adicion 40 ml de agua destilada luego se realiz el doblez a la bolsa se engrap,
Seguidamente se esteriliz a 121 C. y 15 lb de presin por 15 minutos. La siembra de los
entomopatgenos en el sustrato de arroz e incubacin en 24 bolsas (tres bolsas por
aislamiento). Se homogenizo el hongo, se anot la fecha y se llev a la sala de incubacin
(ambiente completamente limpio para que incube), durante 10 das, diariamente se procedi a
homogenizar, siempre estuvo con luz constante.
 RESULTADOS Y DISCUSIN

Diseo estadstico
Se us el diseo completamente al azar (DCA), con nueve tratamientos, incluyendo al
tratamiento testigo (T1) (Cuadro 2), con tres repeticiones (unidades experimentales) (4).
Cuadro 1: ANVA

cuadrado cuadrado Cuadrado

medios medios medios
FV GL Ftab GL Ftab GL Ftab
C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8
4
Trat. 8 2937.81* 2.5 7 2101.86* 215.32ns 3857.06* 2.7 5 4312* 323.9* 2410.92* 3.2

EExp. 18 282.45 15 203.95 124.44 196.62 11 659.88 66.67 537

total 26 22 16
CV(%)= 24.12 12.06 11.77 20.9 8.79 16.89 24.38

- Etapa de inoculacin a muerte de A. cephalotes

C1: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
para el control de este insecto donde el coeficiente de variabilidad fue de 24.12%, esto significa
segn (4) que entre las unidades experimentales de cada tratamiento tuvieron un
comportamiento con regular homogeneidad, esto puede deberse a que las poblaciones del
insecto fueron homogneas referente a su edad y sanidad del insecto, de tal manera la
respuesta a la aplicacin de los entomopatgenos fue similar entre los individuos de cada
tratamiento.

- Inicio de la produccin de micelio en horas

C3: Se realiz el ANVA no se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir
que no existe diferencias entre los tratamientos, donde el coeficiente de variabilidad fue de
12.06%, esto significa segn CALZADA (1986) que existe muy buena homogeneidad en el
comportamiento entre las unidades experimentales de cada uno los tratamientos.

- Porcentaje de individuos con presencia de micelio

C4: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
para una rpida produccin de micelio sobre el insecto, con un coeficiente de variabilidad de
11.77% esto significa segn CALZADA (1986) que existe regular homogeneidad en el
comportamiento entre las unidades experimentales de cada uno los tratamientos.

- Muerte del insecto a produccin de micelio en horas de los entomopatgenos

C5: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
para una rpida produccin de micelio sobre el insecto, donde el coeficiente de variabilidad fue
de 20.90%, esto significa segn CALZADA (1986) que existe muy buena homogeneidad en el
comportamiento entre las unidades experimentales de cada uno los tratamientos.

- Inicio del cubrimiento micelial

C6: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
para una mayor colonizacin sobre el insecto. El coeficiente de variabilidad fue de 16.89% esto
significa segn CALZADA (1986) que existe buena homogeneidad en el comportamiento entre
las unidades experimentales de cada uno los tratamientos.
- Porcentaje de individuos de A. cephalotes con cubrimiento micelial

C7: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
 para una mayor colonizacin sobre el insecto. El coeficiente de variabilidad fue de 8.79%, esto
significa segn CALZADA (1986) que existe buena homogeneidad en el comportamiento entre
las unidades experimentales de cada uno los tratamientos.

- Muerte a cubrimiento micelial de los individuos de A. cephalotes

C8: Se realiz el ANVA se encontr diferencias estadsticas significativas, esto quiere decir que
uno o algunos de los tratamientos de hongos entomopatgenos presenta cualidades favorables
para una rpida colonizacin sobre el insecto, El coeficiente de variabilidad fue de 24.38%, esto
significa segn CALZADA (1986) que existe regular homogeneidad en el comportamiento entre
las unidades experimentales de cada uno los tratamientos, esto puede deberse a que las
poblaciones de los insectos no tuvieron un efecto adverso sobre las cepas de cada tratamiento en
el tiempo trascurrido desde la muerte del insecto hasta el cubrimiento micelial, tambin puede
deberse a otros factores como humedad y temperatura que pudo haber afectado ms al
desarrollo del hongo sobre un individuo muerto que otro.

Cuadro 2 de Tukey (= 0.05)

TRATAMIENTOS DESCRIPCION HORA HORA INDIVIDUOS HORA HORAS INDIVIDUOS HORA

T1 Testigo 142.4 c
T2 BB-256 65.6 ab 134.4 cd 100 a 68.8 ab 188.8 b 93.33 ab 139.2 b
T3 BB-2118 59.2 ab 120 bcd 100 a 60.8 ab 137,6 ab 100 a 78.4 ab
T4 PL-701 54.4 ab 148.53cd 80 a 94.13 b
T5 MA-302 48 ab 89.6 ab 100 a 41.6 a 120 ab 100 a 72 a
T6 MA-319 40 a 76.8 a 100 a 36.8 a 102.4 a 100 a 62.4 a
T7 BB-UNAS 75.2 ab 110.8abc 93.3 a 35.6 a 188.4 b 86.67 ab 113.2ab
T8 BB-VR 51.2 ab 121,6 cb 100 a 70.4 ab 187 b 70 b 132.2ab
T9 PL-CHI 91.2 b 159.2 d 80 a 159.2 c
Prueba de Tukey

- Etapa de inoculacin a muerte de A. cephalotes

C1: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA de la etapa de inoculacin a

muerte de A. cephalotes, se procedi a realizar la prueba de TUKEY ( = 0.05) donde se
encontr diferencias estadsticas significativas entre el tratamientos, donde el tratamiento T6
(MA-319) tuvo el mejor TL50 con 31.2 horas fue superior numricamente a todos tratamientos,
siendo nuestros resultados superiores a los obtenidos en otros trabajos de investigacin como
segn BAUTISTA (1998) determino la mortalidad en adultos de langosta peruana con M.
anisopliae a los 5.77 das (138.48 horas) y con B. bassiana a los 8.69 dias (208.56 horas).

- Inicio de la produccin de micelio en horas

C3: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA del inicio de la produccin de

micelio en horas. se procedi a realizar la prueba de TUKEY donde se encontr diferencias
estadsticas significativas entre los tratamientos.

- Porcentaje de individuos con presencia de micelio

C4: Al no existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA del total de individuos con
presencia de micelio, se procedi a realizar la prueba de TUKEY (donde no se encontr
diferencias estadsticas significativas entre todos los tratamientos, siendo los tratamientos T2 (BB-
265 = 100.00), T3 (BB-2118 = 100.00), T5 (MA-302 = 100.00), T6 (MA-319 = 100.00) y T8 (BB-VR =
100.00) superior numricamente al resto de los tratamientos.

- Muerte del insecto a produccin de micelio en horas de los entomopatgenos

C5: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA de la muerte del insecto a

produccin de micelio en horas de los entomopatgenos, se procedi a realizar la prueba de
TUKEY, donde se encontr diferencias estadsticas significativas entre los tratamientos T 7 (BB-
UNAS = 35.60), T6 (MA-319 = 36.80) y T5 (MA-302 = 41.60) con el resto de los tratamientos.

- Inicio del cubrimiento micelial

C6: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA del inicio del cubrimiento micelial
en horas de los entomopatgenos sobre A. cephalotes, se procedi a realizar la prueba de
TUKEY,donde se encontr diferencias estadsticas significativas entre el tratamiento.

- Porcentaje de individuos de A. cephalotes con cubrimiento micelial

C7: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA del inicio del cubrimiento micelial
en horas de los entomopatgenos sobre A. cephalotes, se procedi a realizar la prueba de
TUKEY,donde se encontr diferencias estadsticas significativas entre el tratamiento.

- Muerte a cubrimiento micelial de los individuos de A. cephalotes

C8: Al existir diferencias estadsticas significativas en el ANVA de la muerte a cubrimiento

micelial de los individuos de A. cephalotes, se procedi a realizar la prueba de TUKEY donde se

encontr diferencias estadsticas significativas de los tratamientos T6 (MA-319 = 62.40) y T5
(MA-302= 72.00) con el resto de los tratamientos (Cuadro 20), es decir estos tratamientos
tuvieron menor tiempo en horas desde la muerte hasta el cubrimiento micelial de los
individuos de A. cephalotes.
 BIBLIOGRAFA

1. CALZADA BENIZA, J. (1986). Mtodos estadsticos para la investigacin. Lima, Per:

5ed. Ed. Milagros.

2. DELGADO, P. A., & MURCIA-ORDOEZ, B. (2011). Hongos entomopatgenos como

alternativa para el control biolgico de plagas. colombia.

3. FAO. (2003). Resistencia a los antiparasitarios: estado actual con nfasis en Amrica
Latina. Roma: direccion y sanidad animal de la FAO.

4. LEUCONA, R. (1996). Hongos Entomopatogenos. Buenos Aires - Argentina:

Microorganismos patogenos empleados en el control de insectos y plagas.

5. LPEZ-LLORCA, L. V., & HANS-BRJE, J. (2001). Biodiversidad del suelo: control

biolgicoporde nematodos fitopatogenos por hongos nematofagos.

6. PUCHETA DIAZ et al. (2006). Mecanismo de accion de los hongos entomopatogenos.

Cuba.

7. VERGARA, C. (2005). Biologa, manejo y control de la hormiga arriera. . Colombia.:

GOBERNACION DEL VALLE DEL CAUCA.