Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
REDUCTORAS.
Caro Puentes Zulma Pilar, Pachn Serna Mara Paula, Parra Botia Yurani Liceth,
Rivera Rojas Yira Xilena.
Estudiantes de Ingeniera Ambiental, rea de Microbiologa, Universidad de
Boyac, Sogamoso.
RESUMEN.
Este artculo tiene como objeto corroborar la actividad metablica de bacterias
sulfato reductoras las cuales son notablemente adaptables y pueden ser
encontradas en numerosos ambientes terrestres y acuticos en los que se ha
agotado el oxgeno debido a la descomposicin aerbica de la materia orgnica,
utilizando para ello la columna de Winogradsky como mecanismo de verificacin y
experimentacin. Adicionalmente, se logra realizar el aislamiento e identificacin de
la bacteria de utilizando el medio de lactato de sodio y la tcnica de NMP (nmero
ms probable) finalmente, se logra identificar la presencia de bacterias sulfato
reductoras como la Desulfovibrio. Para dicho estudio, se realiza la preparacin del
medio lquido de cultivo y la aplicacin de tcnicas de aislamiento o siembra de los
microorganismos con tubos sellados con parafina, identificacin de precipitaciones
color negro, incubacin, tincin de Gram y nmero ms probable. De esta manera,
se realizan investigaciones respectivas para obtener mayor informacin sobre la
presencia de la bacteria de estudio en la columna y hacer el respectivo anlisis e
identificacin de la misma.
De tal manera, este tipo de estudio experimental e investigativo tiene un gran
propsito en el contexto de ingeniera ambiental ya que permite conocer tipos de
microorganismos presentes en el entorno y su respectivo aislamiento. As mismo,
mediante el presente artculo se logra identificar bacterias sulfato reductoras
presentes en un medio sin oxgeno, en este caso en una columna de Winogradsky,
conociendo las caractersticas y funciones especficas que realiza dicha bacteria.
ABSTRACT.
This article presents the study and the process carried out for the specific analysis
of the characteristics of the bacterium Desulfovibrio, being taken as object of study
in the column Winogradsky worked during certain laboratory practices. It simulates
an ecosystem that generates the growth and development of several bacteria
1
according to the established conditions. Specifically, a sulphate-reducing bacterium
is taken as the object of study because the column had a rapid anaerobic process
of the populations present by the incident light and the environmental conditions to
which it was exposed. For this study, different techniques such as preparation of the
liquid medium, isolation or seeding of the microorganisms with sealed tubes with
paraffin, identification of black precipitation, incubation, Gram staining and most
probable number are performed. In this way, respective investigations are carried
out to obtain more information about the presence of the study bacteria in the column
and to make the respective analysis of the same ones.
KEYWORDS.
Bacterium, characterization, microbiology, microorganism, sulfate, isolation, growth,
anaerobe.
INTRODUCCIN.
Las bacterias sulfato-reductoras (BSR) son microorganismos anaerobios obligados,
metablicamente verstiles provenientes de varias familias y diferentes gneros.
utilizan sulfato u otros compuestos oxidados de azufre como aceptor final de
electrones (agente oxidante) para la produccin de H2S (). Las bacterias sulfato
reductoras son notablemente adaptables y pueden ser encontradas en numerosos
ambientes, como es en el caso de la columna de Winogradsky.
La columna de Winogradsky es el medio en el cual se logra el desarrollo y
crecimiento de una gran diversidad de microorganismos, donde cada una de las
capas agregadas con diferentes nutrientes y materiales juegan un papel importante
para simular un ecosistema que genera varias bacterias segn las condiciones
establecidas. A medida que pasa el tiempo, esta columna presenta cambios de
acuerdo a los ciclos desarrollados por los microorganismos y sus respectivas
actividades que son posibles gracias al recibimiento de la energa de la luz a la que
es expuesta.
El descubrimiento ambiental de los microorganismos cada vez avanza permitiendo
el reconocimiento de millones de especies que se encuentran en el entorno, las
cuales por su morfologa y su especial funcionamiento ofrecen un gran campo de
estudios benficos e informacin sobre la microbiologa, siendo las bacterias
organismos considerados diminutos, pero de gran importancia en procesos
qumicos, fsicos y biolgicos.
Dentro de la diversidad microbiana presente en una columna, se encuentran
bacterias reductoras de sulfato, las cuales crecen en medios anaerbicos. Estos
microorganismos cuentan con variedad de especies que se encuentran
involucradas en varios campos tiles en la cotidianidad, como es el caso de la
bacteria Desulfovibrio, reconocida por hacer parte de una especie Gram negativa,
con un alto poder reductor y de gran influencia en el ciclo o transformacin de
2
compuestos de azufre siendo esto corroborado mediante artculos cientficos e
investigaciones ya realizadas.
MATERIAL Y MTODOS.
3
FIGURA 1. Columna Winogradsky.
4
FIGURA 2. Tubos Sembrados.
TINCIN DE GRAM:
Para anlisis microscpico se emplea la tincin de Gram, la cual permite observar
distribuciones particulares de las bacterias, su morfologa y el grupo al cual
pertenecen. La observacin se realiza en 100X.
Se toma un tubo de cada una de las diluciones sembradas las cuales formaron
precipitado, para extraer una respectiva gota mediante la utilizacin de un asa
redonda, esta es expandida en un portaobjetos y fijada mediante implementacin
de un mechero.
5
Se recurre a realizar la tincin de Gram siendo uno de los mtodos de tincin
diferencial que permite distinguir grupos bacterianos. Esta tincin reconoce
bacterias Gram positivas (toman el primer colorante y lo retienen y se ven violetas)
y Gram negativas, que no retienen el colorante violeta luego de lavado con etanol o
acetona y se colorean con el colorante de contraste, rosado, como la safranina.
(MICROBIOLOGIA AMBIENTAL, 2005).
RESULTADOS.
Se obtuvo datos de tipo microscpico de la batera sulfato-reductora siendo esto
reflejado mediante precipitaciones de color negro presente en los tubos de ensayo
cultivados con diluciones de 103, 104 y 105.
PRIMERA PARTE. Nmero ms probable (NMP).
TABLA N1. Registro de precipitacin en tubos de ensayo.
DILUCION TUBOS TUBOS REGISTRO
POSITIVOS (NMP/ml)
1 3
103 2
3
1 3
104 2 460
3
1 1
105 2
3
6
FIGURA 5. Precipitacin en tubos cultivados.
Descripcin: Las bacterias sulfato reductoras llevan a cabo la reduccin del sulfato
a sulfuro presente en el medio, actuando, as como un indicador de actividad
metablica y de crecimiento (Garrity, 2005). El crecimiento bacteriano fue
evidenciado por la formacin del precipitado color negro tras un periodo de
incubacin de 18 das a una temperatura de 32C.
7
FIGURA 8. Dilucin 105.
Descripcin: Son Bacilos Gram negativos ya que se tornan de color fucsia o rosado
posteriormente a ser sometidos a tincin de Gram, tienen forma de bastoncillos tipo
curvos y alargados.
8
desulfovibrio las cuales son Tambin se puede inferir que durante
visualizadas en la columna por medio este proceso ecosistmico se
de una profunda capa negra en forma presentan interacciones tales como la
de sedimento y un olor desagradable competencia donde los
que refleja su presencia y su actividad microorganismos luchan por el
con el azufre. De acuerdo a sustrato en el mismo hbitat y donde
investigaciones y estudios ya el sustrato puede ser limitado. Es por
realizados se logra conocer que estas ello, que en la zona inferior de lodos
bacterias oxidan compuestos crecen organismos que desarrollan
orgnicos, tienen como aceptadores procesos fermentativos que producen
de electrones el sulfato, son muy alcohol y cidos grasos como
verstiles ya que oxidan compuestos subproductos de su metabolismo.
orgnicos y producen corrosin Estos productos son a su vez el
anaerbica del hierro, todo esto hace sustrato para el desarrollo de
que sean de gran importancia en las bacterias reductoras de sulfato y como
fases anaerobias del ciclo del azufre resultado se liberan sulfuros.
presente en el entorno.
Dichos microorganismos, presentan
Cabe resaltar, que este tipo de un crecimiento de 460 NMP/ml segn
bacteria y su formacin estn la tabla estipulada para la
relacionados de forma directa con correspondiente lectura, reflejando un
algunos problemas de contaminacin buen desarrollo y crecimiento de
y en ciertos casos con la interaccin dichos microorganismos capaces de
del ser humano en el medio, ya que reducir los compuestos de azufre a
son originarias de la materia orgnica sulfuro de hidrogeno como principal
descompuesta en ausencia de funcin dentro del ecosistema
oxgeno. simulado por la columna en estado
anaerobio. En cuanto a crecimiento se
En cuanto al anlisis microscpico se
reconoce una relacin inversamente
logra corroborar la presencia de la
proporcional de los tubos cultivados y
bacteria sulfato-reductora gracias a
sus particularidades, logrando as las diluciones realizadas, donde se
determinar su forma, estructura y present mayor precipitado en los
coloracin de gram. Por lo tanto, tubos de dilucin 103 y 104
segn estas caractersticas corroborando que a menor dilucin
microscpicas y artculos cientficos mayor actividad biolgica. Por esta
se cree que estas bacterias son razn, los tubos de 105 no presentaron
desulfovibrio, las cuales contaban con un crecimiento representativo de la
una fuente de hierro generada por una bacteria.
puntilla agregada en la parte inferior de la
CONCLUSIONES.
columna de Winogradsky.
Las bacterias Sulfato reductoras son
microorganismos que actan como en
el estado terminal de la degradacin
9
de la materia orgnica, mediante componentes que se encuentran a
procesos de fermentacin en diario en el entorno con el fin de
condiciones sin presencia de oxgeno. conocer los diferentes
microorganismos que trabajan en el
Durante la elaboracin de la columna
proceso de descomposicin y
de Winogradsky se pudo identificar
que el lodo agregado estaba rico en transformacin de la materia orgnica,
nutrientes y que la luz proporcionada a as como la variedad de ambientes
esta columna fue crucial para que se que se pueden presentar en el mismo.
reflejara un buen crecimiento de
microorganismos, buena actividad
biolgica y desarrollo en la zona
anaerbica en un corto lapso de
tiempo.
La tincin de Gram es una tcnica que
ayudo a tener mucho ms clara la
identificacin del microorganismo de
estudio en cuanto a su estructura y
forma, que va a acorde a la coloracin
que toma la bacteria (Gram negativo y
Gram positivo).
Se logr identificar que la bacteria
analizada contribuye de forma positiva
y cuenta con una gran aplicabilidad en
la descontaminacin de aguas
residuales las cuales contienen
sulfatos y metales procedentes de BACTERIAS REDUCTORAS DE
procesos industriales y mineros. SULFATOS, Microbiologa en suelo,
Gariboglio M.A. Y Smith S.A., 2005.
10
MICROBIOLOGIA BASICA
AMBIENTAL, Lillian Frioni. 2005.
Universidad de la repblica, Uruguay.
BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC
BACTERIOLOGY, Garrity, G. 2005. The
Proteobacteria. Volumen 2: Parte C Alfa-,
Beta-, Delta-, y Epsilon Proteobacteria.
Brenner, D., Krieg, N., Staley, J. (Eds) Berlin:
Springer-Verlag Publishers. 925-948.
11