CULTIVOS

MICROBIANOS

MCROBLOGO: JAIME JUAREZ ALCANTARA

 CRECIMIENTO BACTERIANO

Atmsfera:
Aerbica, anaerbica o microaeroflica
Anaerobios facultativos u obligados
Temperatura:
37 grados C usualmente
Tiempo de incubacin:
La mayora de bacterias clnicamente importantes crece en 24-
48 horas
Excepciones: las micobacterias necesitan meses para crecer y
otras bacterias no pueden ser cultivadas.
Medios slidos y lquidos
Los medios liquidos llamados caldos de enrriquecimiento.
Los medios slidos inmovilizan a las clulas, permitindolas crecer y formar masas
aisladas visibles llamadas colonias.

Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos.
Ej., agar nutritivo

Medios enriquecidos
Medios generales a los que se aaden nutrientes especiales para mantener el
crecimiento de microorganismos hetertrofos exigentes. Ej., el agar sangre
Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej., Agar MacConkey se
emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que
inhiben el crecimiento de las bacterias Gram positivas.

Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de
forma especfica. Ej., el agar celulosa se usa para aislar bacterias que digieren la
celulosa.

Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una
identificacin tentativa de los microorganismos segn sus caractersticas biolgicas.

El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y

colorante rojo neutro, las colonias fermentadoras de lactosa (Escherichia coli)
aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fcilmente de las colonias no
fermentadoras.
 Obtencin de Cultivos Puros

2. Siembra en estras

Crecimiento de colonias confluentes

Se esteriliza el asa y al comienzo de la siembra por estra
luego se toma una
muestra del tubo
Colonias aisladas al
final
de la siembra por
estra

Se realiza una siembra

por estra en una placa de
agar con medio estril.
Despus de una estra inicail
Se hacen estras en ngulo
 CONCEPTOS
Antibiograma: son mtodos in Vitro que determinan la
susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes
antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio especfica y
estandarizada.

Concentracin Mnima Inhibitoria (CIM): Es la menor

concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca
una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible.

Antibiticos: Son sustancias qumicas producidas por

organismos vivientes, o sintetizados en el laboratorio capaces de
inhibir en pequeas cantidades los procesos vitales de
microorganismos, destruyendo e impidiendo su desarrollo y
reproduccin.
 CLASIFICACIN DE LOS
ANTIBITICOS
-lactmicos: Penicilinas, Monobactam.
Glicopptidos: Vancomicina.
Aminoglicsidos: Gentamicina, Amikacina.
Macrlidos: Eritromicina, Azitromicina, Claritromicina.
Quinolonas: Ciprofloxacino, Levofloxacino.
Tetraciclinas
Sulfonamidas y trimetoprim: bactrin.
 Mtodo de Difusin en Disco (Baeur-
Kirby)
Es el mas difundido.
Prueba la inhibicin o resistencia de los microorganismos,
enfrentndolos con los medicamentos que se encuentran
impregnados en pequeos discos.
 Medio de cultivo utilizado

Mueller Hinton
Su reproducibilidad aceptable.
Baja concentracin de
inhibidores, condicin crtica
para evaluar sulfonamidas,
trimetoprim y tetraciclina.
El crecimiento satisfactorio de
patgenos no exigentes.
Existir ya gran experiencia en
estudios de susceptibilidad.
 Factores que influyen en el Agar
pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4.
variacin de cationes divalentes:
Ca y Mg: Afectan los halos de inhibicin para
aminoglucsidos y tetraciclinas en Pseudomonas
aeruginosa.
Profundidad del Agar: La profundidad
recomendada de la capa de agar es de 3 a 5 mm.
 Preparacin del Inculo
Seleccionar la colonia a identificar su especie y
sensibilidad bacteriana.

Se prepara el inculo con ajuste a la turbidez

McFarland 0,5 que corresponde a una turbidez de
1.5 x 10 UFC/ML, directo en caldo de colonias
frescas en agar no selectivo.
 Inoculacin de la placa
Con un hisopo estril
en tres direcciones
inocule toda la placa
(giros de 60).
Esptula Drigalski
vidrio siembra en
camada.
 Aplicacin de sensidiscos

separacin: los discos deben

de estar separados 24 mm (del
centro de un sensidisco al otro
ms cercano).

Cantidad: 12 unidades en
placas de 150mm y 5 unidades
en placas se 100mm.
 Lectura e interpretacin de los
resultados

Categoras de interpretaron:
Sensible: El microorganismo presenta
un gran rea de inhibicin causada por el
frmaco. 95% xito

Intermedio: Se presenta un halo de

inhibicin mas reducido.

Resistente: Presenta muy poco o casi

nada de halo.
Medicin de los halos

Despus de incuba las placas del

antibiograma se proceder a la lectura
de este.
Se usa una regla y se mide el radio del
halo de inhibicin partiendo de un
extremo al otro; hasta donde se
inhibi el crecimiento.
La longitud obtenida despus se
compararn con estndares que nos
dirn si el medicamento ser efectivo
o no en el tratamiento.
 Antibitico Resistente Intermedia Susceptible

Ampicilina 13 14 - 16 17

Amikacina 14 15 16 17

Sulfisoxasol 12 13 - 16 17

Gentamicina 12 13 14 15

Cloranfenicol 12 13 - 17 18

Ceftriaxona 12 14 20 21

Ciprofloxacina 15 16 - 20 21

Tetraciclina 14 15 - 18 19

Acido
13 14 18 19
Nalidixico

Estrptomicina 11 12 14 15

anamicina 13 14 - 17 18

Trimetroprim/
10 11 15 16
Sulfametoxasol
 Mtodo Automatizado:

Este mtodo se basa en micro diluciones sobre micro

tubos.
El crecimiento bacteriano se va a observar por la
turbidez o fluorescencia de los micro tubos.
Es til para examinar una gran cantidad de muestras
 Hemocultivo
Determinar la presencia de microorganismos
en sangre a travs de una muestra obtenida
por una puncin y de manera asptica

El hemocultivo o cultivo microbiolgico de la

sangre constituye en los casos de septicemia,
el nico examen que permite su confirmacin.

En caso de bacteremia permite aislar el agente

causal.
 Indicaciones

Sospecha de bacteremia en pacientes con o sin

foco de infeccin, de origen desconocido

Para la identificacin del agente causal de

alguna patologa:
- Septicemia severa - Neumona
- Meningitis - Endocarditis
- Osteomielitis infecciosa
- Artritis - Episodios febriles
- Otros