XI CONGRESO NACIONAL DE BIOTECNOLOGA Y BIOINGENIERA

PRODUCCIN Y CARACTERIZACIN QUMICA DEL ALGINATO SINTETIZADO POR CEPAS

DE Azotobacter vinelandii GENTICAMENTE MODIFICADAS

Miguel Meja, Guadalupe Espn, Enrique Galindo y Carlos Pea

Departamento de Ingeniera Celular y Biocatlisis, Instituto de Biotecnologa, UNAM Apdo. Post. 510-3,
Cuernavaca, 62210 Morelos, MXICO Fax: (777) 317 23 88, e-mail: carlosf@ibt.unam.mx

Palabras clave: alginato, Azotobacter vinelandii, mutantes

Introduccin. Azotobacter vinelandii produce dos polmeros 1

0.9
de inters comercial: el alginato y el poli--hidroxibutirato

g alginato/g biomasa
0.8
(PHB). En los ltimos aos se han llevado a cabo numerosos 0.7
estudios sobre la produccin de alginato por A. vinelandii y 0.6
sobre la influencia de los parmetros ambientales. Sin 0.5
embargo, los rendimientos de alginato hasta ahora alcanzados 0.4
en la produccin por fermentacin han sido bajos (1). El uso 0.3
de cepas genticamente modificadas plantea la posibilidad de 0.2
mejorar los rendimientos de produccin. El objetivo del 0.1
presente estudio fue evaluar (en cultivo slido y sumergido) 0
la produccin de alginato y su composicin, usando cepas ATCC AT6 Nuod Nqre
mutantes de A. vinelandii, alteradas en la sntesis de PHB y Cepas
en el metabolismo respiratorio. Fig.1 Rendimiento (expresado como produccin de alginato por
biomasa) en las cepas silvestre y mutantes desarrolladas en
Metodologa. Las cepas mutantes AT6 (la cual tiene
medio slido.
bloqueada la sntesis de PHB, inhibiendo la accin de la
enzima acetoacetil-Coa reductasa), Nuod y Nqre (que Tabla 1. Caractersticas qumicas del alginato sintetizado en cultivo
presentan mutaciones en la NADH deshidrogenasa I y en la slido y en cultivo sumergido.
NADH deshidrogenasa translocadora de Na+
respectivamente), fueron caracterizadas en funcin de la Cultivo slido Cultivo sumergido
produccin de alginato y su composicin. Se hicieron Cepa Peso Gulurnico/ Peso Gulurnico/
cultivos en medio slido a 29 C y cultivos sumergidos en molecular Manurnico molecular Manurnico
matraces agitados de 500 ml con 100 ml de medio Burk a 200 (KDa) (KDa)
rpm y 29 C. Como control se utiliz la cepa silvestre ATCC9046 1624 1.88 378 1.94
ATCC9046. Se determinaron las concentraciones de alginato, AT6 1247 1.85 337 1.70
relacin de cido manurnico y gulurnico, biomasa y peso Nuod 611 0.90 287 1.45
molecular, de acuerdo a trabajos previos (2). Nqre 753 0.83 231 1.40
Resultados y Discusin. El bloqueo en la sntesis de PHB di
Conclusiones. Usando la cepa mutante AT6 de A. vinelandii
como resultado un incremento en el rendimiento de la
fue posible mejorar (con respecto a la cepa silvestre
produccin de alginato, obtenindose un mximo de 0.87 g
ATCC9046), el rendimiento de alginato por unidad celular en
alginato/g biomasa con la cepa AT6 en cultivo slido (Fig. 1).
cultivo slido. En cultivo sumergido, el control de pH
Las caractersticas qumicas (peso molecular y relacin G/M)
permiti alcanzar un rendimiento mximo de alginato de 1.16
del alginato obtenido bajo estas condiciones de cultivo, fueron
g alginato/g biomasa. Sin embargo, tanto el peso molecular
ligeramente inferiores a las del alginato obtenido por la cepa
del alginato y su relacin gulurnico/manurnico fueron
ATCC9046 (Tabla 1). Durante el cultivo sumergido en
ligeramente inferiores a los determinados en el alginato
matraces agitados, la mutante AT6 exhibi un pobre
sintetizado por la cepa silvestre.
crecimiento y por lo tanto la sntesis de alginato fue
Agradecimientos. Apoyo financiero del CONACyT (proyecto
despreciable. Lo anterior fue ocasionado por una disminucin
39955-Z) y DGAPA/UNAM (proyectos IN218201 e IN11075).
drstica del pH en el medio de cultivo. Mediante el control
Bibliografa
del pH se promovi el crecimiento y la produccin de 1. Pea, C., Trujillo-Roldn, M., Galindo, E. (2000) Influence of
alginato en la mutante AT6, obtenindose un rendimiento dissolved oxygen tension and agitation speed on alginate production
mximo de 1.16 g alginato/g biomasa. Las mutantes Nuod y and its molecular weight in cultures of Azotobacter vinelandii.
Nqre mostraron rendimientos inferiores a los exhibidos por la Enzyme Microb. Technol. 27: 390-398.
cepa silvestre, las caractersticas qumicas del alginato 2. Pea, C., Miranda, L., Segura, D., Nez, C., Espn, G.,
sintetizado fueron significativamente inferiores y se logr una Galindo, E. (2002) Alginate production by Azotobacter vinelandii
menor concentracin del polmero. mutants altered in poly--hyroxibutyrate and alginate biosynthesis.
J. Ind Microbiol. Biotechnol. 29: 209-213.