Guia Practica de Mircrobiología - 3

MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA - USJB
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERA
MANUAL DE MICROBIOLOGA Y
PARASITOLOGA
Cdigo: 020319
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INDICE
1. Medidas Generales de Bioseguridad 3

2. Actividad N 1: Bioseguridad - Decontaminacin, Lavado y esterilizacin. Observaciones
microscpicas: Examen directo en fresco. Coloraciones simples: Azul de metileno, Azul
de Lactofenol, Tinta china. 4
3. Actividad N 2: Coloraciones diferenciales: Gram, Ziehl Neelsen. Medios de cultivo. Cultivo
de microorganismos. Mtodos de siembra. 11
4. Actividad N 3: Mtodos serolgicos, aglutinacin, precipitacin. Determinacin de grupos
sanguneos. Inmunidad celular (Prueba de tuberculina) 18
5. Actividad N 4: Estudio morfolgico y cultivo de especies patgenas de los Gneros

Staphylococcus, Streptococcus, Moraxella y Neisseria.
PRIMER CONTROL DE LECTURA 25
6. Actividad N 5: PRIMER EXAMEN PARCIAL. 32
7. Actividad N 6: Seminario I: VACUNAS 33
8. Actividad N 7: Estudio morfolgico y cultivo de bacilos Gram. positivos y negativos.

Procesamiento de urocultivo y coprocultivo 34
9. Actividad N 8: Brucella: Hemocultivo y aglutinaciones. Estudio morfolgico y cultivo de
Mycobacterium. Treponema VDRL. SEGUNDO CONTROL DE LECTURA 48
10. Actividad N 9: Estudio virus. Metodos de diagnstico directo: cultivo de clulas. Efecto
citoptico. Mtodos de diagnstico indirecto serolgico: ELISA y Western Blot para VIH.59
11. Actividad N 10: SEGUNDO EXAMEN PARCIAL 65
12. Actividad N 11: Seminario II: Infecciones Intrahospitalarias 66
13. Actividad N 12: Estudio de Hongos oportunistas. Estudio Malassezia. Dermatofitos. Hongos
Sistmicos. TERCER CONTROL DE LECTURA. 67
14. Actividad N 13: Mtodos de diagnstico coproparasitologicos: Enteroparsitos. Protozoarios y
Helmintos 77
15. Actividad N 14: Hemohistoparsitos: Protozoarios y Helmintos 107
16. Actividad N 15: Arcnidos e insectos 121
17. Actividad N 16: SEMINARIO III: Enfermedades metaxnicas 137
18. Actividad N 17: TERCER EXAMEN PARCIAL 138
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MEDIDAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
1. Las puertas del laboratorio debern portar emblemas que digan: "Peligro biolgico".
2. El laboratorio deber ser mantenido limpio, ordenado y libre de materiales extraos.
3. No se permitir comer, beber, fumar y/o almacenar comidas as como el uso de cualquier
otro tem personal (ej. cosmticos, cigarrillos) dentro del rea de trabajo.
4. Usar bata, chaqueta o uniforme dentro del laboratorio. Esta ropa protectora deber ser
quitada inmediatamente antes de abandonar el rea de trabajo.
5. Antes de iniciar la prctica asegrese que la piel de sus manos no presente cortes, raspones y
otras lastimaduras, en caso que as sea cubrir la herida de manera conveniente antes de
colocarse los guantes.
6. Usar guantes de ltex de buena calidad para todo manejo de material biolgico o donde
exista aunque sea de manera potencial el riesgo de exposicin a sangre o fluidos corporales.
7. Cambiar los guantes de ltex toda vez que hayan sido contaminados, lavarse las manos y
ponerse guantes limpios.
8. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.
9. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes puestos.
10. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deber ser restringido a su uso
indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes debern ser descartados en un
recipiente resistente. Se debern evitar los intentos de reintroducir las agujas descartadas
en capuchones o de romperlas o doblarlas ya que esta conducta produce aumento de la
posibilidad de accidentes por pinchazos o salpicaduras. No usar tijeras con puntas muy
agudas. Por ningn concepto las agujas sern retapadas. El conjunto aguja-jeringa deber
ser descartado en el recipiente destinado a tal fin.
11. Todos los procedimientos debern ser realizados de manera tal que sea nula la creacin de
aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.
12. Bajo ninguna circunstancia se pipetear sustancia alguna con la boca, de ser necesario se
usarn pipeteadores automticos.
13. Las superficies del rea de trabajo debern ser descontaminadas cuando se termine la tarea
diaria. Usando para tal efecto una solucin de hipoclorito de sodio en concentracin
adecuada. (Responsabilidad del Personal Tcnico).
14. El recipiente para descontaminar especmenes deber contar con tapa de seguridad para todo
traslado fuera del lugar de trabajo. En ese caso el exterior del recipiente deber ser
mantenido libre de toda contaminacin con sangre usando solucin decontaminante.
15. El desecho de los fluidos orgnicos puede efectuarse por las caeras habituales una vez que
estos hayan sido convenientemente descontaminados.
16. Una vez usados los guantes de ltex debern ser colocados dentro del recipiente con
solucin decontaminante.
17. Lavar las manos con jabn y agua inmediatamente despus que el trabajo haya sido
terminado. Si los guantes de ltex estn deteriorados, lavar las manos con agua y jabn
despus de quitarlos.
18. Informe inmediatamente al Docente responsable de la Mesa de Prctica de cualquier accidente
ocasionado con elementos del laboratorio.
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ACTIVIDAD N 1: BIOSEGURIDAD - DECONTAMINACIN, LAVADO Y

ESTERILIZACIN. OBSERVACIONES MICROSCPICAS: EXAMEN DIRECTO EN
FRESCO. COLORACIONES SIMPLES: AZUL DE METILENO, AZUL DE
LACTOFENOL, TINTA CHINA
OBJETIVO
Los alumnos deben identificar las medidas de bioseguridad en el desarrollo del trabajo en el
laboratorio de microbiologa
INTRODUCCIN
El Laboratorio de Microbiologa puede ser docente o clnico y debe cumplir con restricciones
para su ingreso y normas de bioseguridad para el trabajo en su interior.
Recomendaciones para su implementacin:
Haber una seal de Riesgo Biolgico en la puerta.

Prohibirse comer, beber, fumar, guardar alimentos, ni aplicar cosmticos.
Prohibirse llevarse material docente a la boca.
Mantenerse limpieza y aseo, sin colocar en las mesas de trabajo material no relacionado con
el trabajo microbiolgico.
Decontaminarse las mesas al terminar la prctica, y en caso de derrame.
Lavarse las manos con agua y jabn, por un minuto, al manipular material infeccioso y antes
de salir.
Reducirse la formacin de aerosoles.
Usarse mandil y guantes permanentemente.
Comunicarse al docente todo contacto con material infeccioso.
PROCEDIMIENTO:
Revisar el tema con el docente.
RESULTADOS:
El alumno habr identificado las medidas de bioseguridad que deber mantener en el

Laboratorio de Microbiologia durante el desarrollo de las prcticas y tendr una actitud
apropiada, dispuesta y de entendimiento
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DECONTAMINACIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIALES. EMPLEO DE

AGENTES FSICOS Y QUMICOS.
OBJETIVO
Proporcionar los conocimientos sobre el significado y los procedimientos de decontaminacin

hasta la esterilizacin que se utilizan dentro de un Laboratorio de Microbiologa.
INTRODUCCIN
El proceso de decontaminacin se hace para dos grupos de material, uno es el limpio pero que
contiene partculas de polvo y el que se encuentra contaminado por material biolgico ya sea
empleado en el aboratorio o aquel que pueda emplearse en algn procedimiento en el paciente.
MATERIAL LIMPIO PERO CON PARTICULAS:
PASO 1: LAVAR CON PASO 2: ENJUAGAR CON AGUA

DETERGENTE SUACE POR CORRIENTE Y SUMERGIR EN
15 MINUTOS AGUA DESTILADA POR 2 HORAS
PASO 3: ESCURRIR, SECAR PASO 4: ESTERILIZAR POR PASO 5: GUARDAR EL MATERIAL

CALOR SECO O HUMEDO Y INDICANDO EN CADA GRUPO
Y PREPARAR EL MATERIAL APLICAR INDICADORES FECHA Y PERSONAL
RESPONSABLE
MATERIAL CONTAMINADO CON MATERIAL BIOLOGICO:
PASO 1: MATERIAL PASO 2: COLOCAR EN PASO 3: ESPERAR QUE BAJE LA

CONTAMINADO COLOCAR AUTOCLAVE, CERRAR Y TEMPERATURA A 0 lbrs. ABRIR Y
EN BOLSAS ROJAS SEGUIR PROCEDIMIENTO: 15 RETIRAR EL MATERIAL PARA
lbrs/15 minutos (121C/15 PROCEDER A LAVAR
minutos)
PASO 4: LAVAR MATERIAL DE VIDRIO PASO 5: ESTERILIZAR POR CALOR

CON DETERGENTE, ENJUAGAR, SECO O HUMEDO, COLOCAR
SUMERGIR EN AGUA DESTILADA, INDICADORES DE ESTERILIDAD.
ESCURRIR, SECAR Y PREPARAR PARA ROTULAR FECHA Y RESPONSABLE
ESTERILIZAR
Esterilizacin, es el procedimiento fsico o qumico, mediante el cual un material determinado

queda exento de microorganismos sean o no patgenos. Incluye bacterias y esporas. En tanto
que la Descontaminacin es el uso de aquel proceso que permita eliminar microorganismos
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En la prctica se mostrar las formas de Esterilizacin por Calor Seco (a la llama directa), por
Calor Hmedo.
Calor seco: la esterilizacin ms frecuente es el horno o mufla. En el caso del horno el proceso se
realiza a 180C por 60 minutos, recordar que el tiempo es inversamente proporcional a la
temperatura.
Calor Hmedo: autoclavado, la esterilizacin es por presin (lbrs/minutos), el equipo contiene

agua y una vez instalado el material se cierra las llaves, encender (elctrico o gas), esperar que
la temperatura suba a 100C, depurar el vapor, cerra la valvula y esperar que suba a 15 lvrs/ 15
minutos. Es necesari en ambos casos colocar indicadores de bioseguridad.
MATERIALES:
- Tubos de 16x150, 13x100 limpios

- Placas petri
- Balones de 250 ml
- Pipetas
- Algodn
- Papel kraf
- Indicadores de esterilidad.
PROCEDIMIENTO:
- Prepara el material limpio.

- Colocar tapones de algodn a los tubos y balones
- Envolver las placas petri
- Proceder a esterilizar
PREGUNTAS:
1. Indique qu material se puede esterilizar en calor seco y calor hmedo. Ejemplos
2. Porque es necesario aplicar los controles de esterilizacin? Ejemplos de controles
3. Indique que procedimientos de esterilizacin realizara durante las prcticas.
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OBSERVACIONES MICROSCPICAS: EXAMEN DIRECTO EN FRESCO.

COLORACIONES SIMPLES: AZUL DE METILENO, AZUL DE LACTOFENOL,
TINTA CHINA
Para el desarrollo de esta prctica se recordara el uso del microscopio
OBJETIVO I
Los alumnos deben identificar las partes del microscopio y su uso. As mismo debe desplazar el
microscopio, encenderlo y regular la luz y limpiarlo adecuadamente.
INTRODUCCIN
El microscopio es un equipo fundamental que no puede faltar en un Laboratorio de

Microbiologa. En general se encienden y se regula la intensidad de luz, se colocan las laminas
con preparaciones de muestras o cultivos de microorganismos en la platina fijndolas con el asa
de el accesorio de desplazamiento de la lamina, luego se observa por el lente ocular y objetivo
de 10x, subiendo y bajando con el botn micromtrico hasta hacer foco viendo claramente el
objeto a observar, luego se coloca el objeto al centro del campo microscpico para pasar a
observar con objetivo de 40X. Para observar con objetivo de 100X debe usarse aceite de
inmersin, regularse la intensidad de luz, subiendo el condensador y abriendo el diafragma. Se
coloca una gota de aceite de inmersin sobre la zona de material en la lmina que se desea
observar, luego ajustado el foco de observacin con 10X, se pasa el objetivo de 100X y se enfoca
con botn micromtrico. Si se desea trasladar el microscopio debe agarrar con firmeza con una
mano del brazo del microscopio, y la otra mano debajo del pie o base. Los lentes del microscopio
se limpian con alcohol y papel lente o una mota de algodn.
MATERIALES
Microscopios pticos.
PROCEDIMIENTO
Identificar las partes del microscopio y su uso. Desplazar el microscopio encenderlo y realizar la
limpieza de los lentes.
RESULTADOS:
El alumno utilizar apropiadamente el microscopio ptico identificando sus partes y utilidad.
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OBJETIVO II
Los alumnos deben identificar el examen en fresco y las coloraciones simples y sus utilidades.
INTRODUCCIN
El examen microscpico tiene como propsito la identificacin de microorganismos en muestras

biolgicas y en cultivos de microorganismos.
Las bacterias pueden ser observadas con 1000 aumentos tanto en exmenes en fresco como con
coloraciones.
El examen en fresco se realiza en una lmina colocando una gota, cubierta con una laminilla, de
la secrecin biolgica o de una suspensin lquida de colonias de microorganismos. Es
especialmente til para observar la movilidad de microorganismos vivos. Es el examen
microscpico ms simple.
Las coloraciones simples utilizan un solo colorante. Se frota la secrecin biolgica o suspensin
de microorganismos en una lamina, en una extensin de 2 centmetros de largo por un
centmetro de ancho. Se observa, generalmente a 100 y 400 aumentos. La suspensin de
bacterias debe realizarse a 1000 aumentos con aceite de inmersin.
Los microorganismos miden micras (milsima parte del milmetro). Las bacterias pueden
observarse coloreadas con azul de metileno de forma redonda o alargada. Los hongos pueden
observarse con diversas estructuras redondas y en largos filamentos, coloreadas con Azul de
Lactofenol. El hongo Cryptococcus neoformans se observa transparente en el fondo negro de la
Tinta China.
MATERIALES
- Tubo con secrecin biolgica o suspensin bacteriana.

- Tubo con suero fisiolgico.
- Asa de siembra.
- Pipeta Pasteur.
- Aceite de inmersin.
- Lminas portaobjeto.
- Laminillas cubreobjeto.
- Lminas con extensin de secrecin o suspensin bacteriana coloreada con Azul de
Metileno.
- Lminas con cultivo de Hongo filamentoso coloreada con Azul de Lactofenol.
- Lmina preparada de suspensin de Cryptococcus sp en Tinta China.
- Mechero
- Descartador de lminas
- Microscopios, alcohol isopropilico, pael lente
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PROCEDIMIENTO
Durante todo el procedimiento en adelante se trabajara al lado del mechero.
Recuerde que estar con todo el equipo de proteccin personal .
Examen en fresco:
Tomar una o varias asadas, o una gota con pipeta de suspensin, en una lamina.
Cubrir la gota con una laminilla cubreobjeto.
Observar al microscopio con 100 y 400 aumentos. Finalmente colocar una gota de Aceite de
inmersin en zona con material y observar el movimiento de las bacterias.
Coloracin Azul de Metileno:
Observar la lamina coloreada con Azul de Metileno, con 1000 aumentos y aceite de
inmersin, la morfologa de bacterias.
Coloracin de Azul de Lactofenol:
Observar al microscopio con 100 y 400 aumentos al hongo Filamentoso con sus diferentes
estructuras redondas y alargadas. Esto nos permite identificar el hongo filamentoso.
Preparacin de Tinta China:
Enfocar la lmina con 100 y 400 aumentos buscando el hongo y finalmente observar al
microscopio con 1000 aumentos al hongo Cryptococcus sp. con su gran cpsula de
mucopolisacrido que rodea al cuerpo con o sin gemacin.
PROTOCOLO DE RESULTADOS:
PROCEDIMIENTO OBSERVACION
MICROSCOPICA
EXAMEN EN FRESCO
AZUL DE METILENO
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AZUL DE LACTOFENOL
TINTA CHINA
PREGUNTAS
1. Indique porque denominamos coloraciones simples.

2. De algunos ejemplos de exmenes en fresco y su utilidad
3. A que riesgos de bioseguridad podemos tener en el momento del procesamiento de las
coloraciones?
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ACTIVIDAD N 2: COLORACIONES DIFERENCIALES: GRAM, ZIEHL NEELSEN.

MEDIOS DE CULTIVO. CULTIVO DE MICROORGANISMOS. MTODOS DE
SIEMBRA
OBJETIVO
Los alumnos deben:
- Identificar la Coloracin Gram y Cocos Gram Positivos, Cocos Gram Negativos, Bacilos Gram
Positivos y Bacilos Gram Negativos.
- Identificar la coloracin Ziehl-Neelsen y Bacilos cido-Alcohol Resistentes.
INTRODUCCIN
La coloracin Gram es necesaria para clasificar, especialmente a las bacterias, en Gram Positivas
y Gram Negativas. Las bacterias Gram Positivas se tien de azul y las Gram Negativas se tien de
color fucsia o rojas.
Las bacterias Gram Positivas retienen Violeta de Genciana, por su pared gruesa rica en
Peptidoglicanos, luego de resistir la decoloracin con solucin alcohol acetona.
Las bacterias Gram Negativas no retienen Violeta de Genciana, por su pared delgada rica en
lipopolisacridos, luego de decolorarse totalmente con solucin alcohol - acetona.
La Coloracin Ziehl Neelsen nos permite identificar bacterias cido-Alcohol Resistentes. Esta
coloracin se basa en que la alta cantidad de cidos miclicos, dndole un gran contenido
lipdico, en la pared de algunas bacterias. Los acidos miclicos retienen el colorante Fucsina
fenicada luego de resistir la decoloracin con la solucin de alcohol-cido.
MATERIALES
- Caldo con pool bacteriano

- Placa petri con agar nutritivo con microorganismos
- Lamina con frotis de mezcla bacteriana.
- Pipetas
- Lamina con frotis de esputo.
- Serie de Coloracin Gram Kopelov.
- Serie de Coloracin Ziehl - Neelsen.
- Mechero de Alcohol.
- Lminas con microorganismos Gram+
- Lminas con microorganismos Gram -
- Lmina con Bacilos cido-Alcohol Resistentes.
- Asas de siembra en aro y en punta
- Microscopio, alcohol isopropilico y papel lente
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PROCEDIMIENTO
a. Realizar un frotis para realizar la coloracin
b. Realizar la Coloracin Gram en la lmina con mezcla bacteriana:
- Colocar la lamina en una rejilla de coloracin

- Cubrir con solucin de Violeta de Genciana, agregar dos gotas de Bicarbonato de Sodio.
Dejar que colorante acte por dos minutos.
- Eliminar el colorante y lavar con agua
- Agregar Lugol de Gram y cubrir la lmina con la misma solucin por dos minutos.
- Lavar la lmina con agua corriente.
- Agregar gota a gota solucin decolorante de alcohol - acetona por el borde de la lmina,
no directamente sobre la mezcla de bacterias. Se observa como se desprende la Violeta
de Genciana. Dejar actuar solo por 10 segundos.
- Lavar inmediatamente con agua corriente.
- Cubrir la lamina con solucin de fucsina bsica. Dejar actuar por 30 segundos.
- Dejar secar la lmina parada.
c. Realizar la Coloracin Ziehl Neelsen en la lmina con frotis de esputo:
- Colocar la lamina en una rejilla de coloracin

- Cubrir con solucin de Fucsina Fenicada. Aplicar el calor de la llama del Mechero de
Alcohol tres veces. Dejar que colorante acte por 3 vapores (humitos). Evitar que hierva
el colorante.
- Lavar la lmina con agua corriente.
- Agregar solucin decolorante de alcohol - cido por el borde de la lmina, no
directamente sobre la mezcla de bacterias. Se observa como se desprende la Fucsina
fenicada. Dejar actuar solo por 2 minutos mximo.
- Lavar inmediatamente con agua corriente.
- Cubrir la lamina con solucin de azul de metileno. Dejar actuar por 60 segundos.
- Dejar secar la lmina parada.
d. Observar las lminas con bacterias de diverso tipo.
e. Enfocar los microscopios con aceite de inmersin.
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COLORACION MORFOLOGIA OBSERVACION

MICROSCOPICA
PREGUNTAS:
1. Qu clasificacin tintorial y morfologica obtendremos con la coloracin Gram?
2. Cul es el fundamento para la aplicacin del calor en la coloracin de Ziehl

Neelsen?
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MEDIOS DE CULTIVO. CULTIVO DE MICROORGANISMOS. MTODOS DE

SIEMBRA
OBJETIVO
El alumno reconocer e identificaralos medios de cultivo para bacterias as como los mtodos
de siembra en cada uno de ellos.
INTRODUCCION
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos in vitro
Clasificacin de los medios de cultivo
Segn su origen:
a) Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
b) Sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) Semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Segn su consistencia
a. Lquidos: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa. Tambin estan
incluidos los medios deenriquecimiento lquidos. En este grupo podemos incluir algunos medios
lquidos especiales como el Medio Thioglicolato y Caldo de Roberson o Carne para anaerobios
b. Slidos: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a razn de 15g/litro. El
agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como
esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Este
conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de
ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran
posibles en medio lquido".
c.- Semislidos: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad
de las especies en estudio.
Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.
Segn su utilizacin:
a. Nutritivos: agar nutritivo, caldo nutritivo
b. Enriquecidos: agar sangre, chocolate etc
c. Selectivos: agar MacConkey, Manitol Salado, SS, XLD,Hekton etc.
d. Diferenciales: TSI, Citrato, LIA, Urea de Chistensen, Caldo peptonado, caldo MRVP
e. De enriquecimiento: selenito, tetrationado, APA
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Medio de TSI / MacConkey : Metabolismo de Glucosa y Lactosa:
Muchos microorganismos actan sobre un carbohidrato produciendo acidificacin del medio

(fermentacin), el cual se detecta por cambio de pH (indicador) y presencia de gas (presencia de
burbujas rotura del medio de cultivo).
Medio Citrato: Metabolismo del citrato :
Algunas bacterias pueden obtener energa por va distinta a la fermentacin de carbohidratos,

utilizando el citrato como fuente de carbono. El medio Citrato de Simons contiene el indicador
de azul de bromotimol que vira al color azul en un medio alcalino.
Prueba del Indol: Metabolismo de Proteinas:
Ciertas bacterias tienen la propiedad de desdoblar el aminocido Triptofano (en la peptona) en

cido pirvico, amoniaco y metabolitos como el indol. En la prueba del indol se utiliza el reactivo
de Ehrlich Kovac (contiene para dimetil benzaldehido) cuyo diluyente es el alcohol amlico que
va a extraer el indol del medio de cultivo lquido produciendo una reaccin positiva
Agar Sangre: Accin de la Hemolisina:
Algunos microorganismos elaboran enzimas y substancias txicas que lesionan al huesped. Hay
enzimas que lisan los glbulos rojos de manera parcial total en los medios de cultivo que
contienen sangre. Se denomina beta-hemlisis cuando la destruccin de los hemates es
completa y es alfa-hemlisis cuando la destruccin es incompleta.
Movilidad: Agar semisolido:
Algunas bacterias poseen flagelos, lo que les da la caracterstica de ser mviles.
MATERIALES
- Placas petri con agar nutritivo, sangre, chocolate, manitol salado, MacConkey y SS
- Tubosde vidrio de 16x150 con agar nutritivo inclinado
- Tubos de vidrio de 13 x 100 con medio semislido, TSI, Citrato, LIA, Urea, Caldo MRVP
- Asas de siembra en aro y en punta
- Goteros
PROCEDIMIENTOS
-Para la siembra en os agares en placa petri se realizara por el mtodo de dispersin y

agotamiento segn se muestra el esquema, tomando con el asa en aro a partir del pool de
bacterias en medio lquido (caldo)
-Para la siembra en medio semislido se toma a partir de una colonia aislada de una de las
placas que se presentan con desarrollo bacteriano con el asa en punta procediendo como el
esquema.
-Para la siembra en el medio inclinado tomar de una de las placas o de los caldos y realizar la
siembra por el mtodo de estriado.
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- Para la siembra en medios diferenciales inclinados al igual que el paso anterior proceder de las
placas sembradas y con el esquema del grfico: puntura
ESQUEMA DE LOS MTODOS DE SIEMBRA
Inoculacin Estra Dispersin y agotamiento Puntura
PROTOCOLO DE RESULTADOS
MTODOS DESCRIPCIN DE LOS CULTIVOS SEMBRADOS
Dispersin - Agotamiento
Inoculacin
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RESULTADOS
Anote y esquematice sus observaciones
MEDIOS DE
PRUEBAS Descripcin LECTURA
CULTIVO
Produccin Lactosa
Presencia de H2S
Glucosa/Sacarosa/lactosa
Indol
Citrato
Manitol
Hemlisis
Lisina
PREGUNTAS:
1. Qu caractersticas ambientales necesita el desarrollo bacteriano?
2. Cul es la temperatura de desarrollo de los microorganismos mesfilos?
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ACTIVIDAD N 3: MTODOS SEROLGICOS, AGLUTINACIN,

PRECIPITACIN. DETERMINACIN DE GRUPOS SANGUNEOS. INMUNIDAD
CELULAR (PRUEBA DE TUBERCULINA)
OBJETIVO
Proporcionar los conocimientos sobre el uso de las reacciones antgeno-anticuerpo para el

diagnstico de enfermedades infecciosas. Haciendo nfasis en la reaccin ms comn como la
aglutinacin.
INTRODUCCIN
Los mtodos serolgicos se fundamentan en la reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac). Dentro de

las reacciones Ag-Ac secundarias in vitro se tienen la aglutinacin, la precipitacin y la
floculacin. En la aglutinacin la reaccin se lleva a cabo entre un Ag particulado (bacterias, etc)
y su respectivo Ac, con la formacin de grumos visibles, ejemplo las pruebas de aglutinacin
para Salmonela tiphy y paratiphy. La precipitacin se da por la reaccin entre una
macromolcula y su respectivo Ac. La floculacin es una reaccin Ag-Ac en suspensin, ejemplo
el VDRL y el RPR.
MATERIALES
- Reactivo RPR
- Reactivo para aglutinacin: Antgenos febriles
- Lminas tarjetas para la realizacin de la prueba
- Palillos monadientes
- Sueros Positivo
- Sueros Negativo.
PROCEDIMIENTOS
1. En una lmina tarjeta enfrentar 50 microllitos del suero positivo negativo (por separado)
2. Aadir uma gota del reactivo correspondiente (RPR el reactivo de aglutinacin), evitando
el contacto directo de las muestras con el dispensador del reactivo
3. Mezclar con un extremo del monadientes, haciendo un crculo de aproximadamente 2 cm
dentro de los limites del crculo si la tarjeta que se usa est previamente diseada. Evitar
mezclar las diferentes muestras por que se alterar el resultado
4. Agitar com movimientos concntricos por aproximadamente 3 minutos
5. Leer bajo la luz directa para verificar descartar la presencia de pequeos grumos que
signifiquen aglutinacin
6. En el caso de RPR se observaran formaciones negras en el fondo de tarjetas blancas.
18
RPR Negativo
RPR Posistivo
Aglutinacin
Negativa
Aglutinacin
Positiva
Precipitacin
Al mezclar cantidades suficientes de un antgeno soluble con anticuerpos especficos, la
interaccin Ag-Ac puede dar lugar a una red capaz de ser visualizada como un precipitado. Esta
estar constituida por grandes complejos inmunes formados por la interaccin Ag-Ac. Cuando se
agregan concentraciones crecientes de antgeno soluble a una cantidad fija de suero que
contiene anticuerpos especficos, a medida que la cantidad de antgeno agregado aumenta, la
cantidad de precipitado se incrementa hasta alcanzar un mximo, luego del cual declina.
En un extremo de la curva de precipitacin, cuando se agregan pequeas cantidades de

antgeno, los complejos inmunes se forman en exceso de Ac. En el otro extremo, al agregar
grandes cantidades de Ag, los complejos inmunes se forman en exceso de Ag, son pequeos y
probablemente estn constituidos por una molcula de Ac y dos de Ag. Entre estas dos
situaciones extremas se encuentra la zona de equivalencia, en donde la relacin Ag-Ac permite
la formacin de grandes redes de complejos inmunes que precipitan.
Estos mtodos pueden ser desarrollados en medios lquidos o en geles y han demostrado una
notable eficacia para individualizar y purificar los antgenos dotados de diferencias particulares.
La unin Ag-Ac se traduce por la formacin de un precipitado insoluble con la condicin de que
los reactivos se encuentren a concentracin equivalente.
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Inmunidad celular: Aplicacin del PPD.

OBJETIVO
Que el alumno adquiera los conocimientos relacionados con la respuesta inmunitaria de tipo
celular
PRUEBA DE LA TUBERCULINA
INTRODUCCIN
Introducida en 1908 por Charles Mantoux y Mussou. Est basada en la respuesta de

hipersensibilidad retardada mediada por clulas frente a antgenos especficos del bacilo. Se
utiliza un derivado proteico purificado (PPD-S) del cultivo de M.tuberculosis desde 1951.
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Qu es la prueba de la tuberculina?
La prueba de la tuberculina es una tcnica normalizada por la OMS en 1964, que Charles
Mantoux present en 1908 ante la Academia de Ciencias. Se basa en la capacidad de la
micobacteria de inducir una reaccin de hipersensibilidad retardada, entre la 2 y 12
semana tras la infeccin, que son capaces de reconocer las fracciones antignicas y
desencadenar una respuesta frente al derivado proteico purificado (PPD) tuberculnico. La
prueba de la tuberculina o intradermorreaccin de Mantoux permite diagnosticar si la
persona ha sido infectada con el bacilo tuberculoso, Mycobacterium tuberculosis.
Se denen hacer la prueba:
- Toda persona que haya tenido contacto con alguien que tenga tuberculosis. (familiares,
amigos, compaeros de trabajo o de escuela)
- Toda persona que tenga sntomas sugestivos de tuberculosis como:
o Fiebre
o Sudores Nocturnos
o Prdida de peso
o Tos y/o Expectoracin por ms de 15 das
o Cansancio constante
o Prdida de apetito
- Personas que tienen o pueden tener enfermedades que cursan con inmunodepresin.
- Personas a las que se lo exigen por cuestiones laborales.
Descripcin de la Tcnica: Administracin
- Con el brazo del paciente ligeramente flexionado y apoyado en una superficie plana,
exploraremos e identificaremos una zona del antebrazo (preferentemente el no
dominante) a nivel de la unin entre el tercio medio y el superior, libre de
escoriaciones y alejada de los vasos, donde realizaremos la tcnica. Procederemos a
la limpieza de la zona con el antisptico elegido, dejndolo secar completamente
antes de la inyeccin para evitar que la penetracin en la dermis afecte al resultado.
Se utilizarn guantes desechables no estriles, para la administracin de este test,
como medida universal profilctica.
- Se introduce la aguja en la epidermis, con el bisel girado hacia arriba, intentando

que la punta quede intradrmica y no subcutnea, en direccin de la zona distal a la
proximal del antebrazo. La inyeccin del contenido debe ser lenta y cuidadosa para
evitar la salida de lquido al exterior, consiguiendo una ampolla del tamao similar a
una lenteja, de bordes definidos, plida y con aspecto de piel de naranja, que se
absorber en unos minutos. (Imagen 4: tcnica) En caso de no formarse la ppula
significar que el contenido se ha vertido a la dermis, con lo que se deber repetir la
prueba en una zona distante de la anterior como mnimo 5 cm. No debe
manipularse la zona hasta la completa absorcin del contenido, para evitar romper
o aplastar la ampolla.
21
Imagen 4
- Se identificar la zona de la puncin con la rotulacin de una circunferencia de ms

de tres centmetros de dimetro.
Lectura:
- Se debe realizar en las 48-72h posteriores a la inoculacin de la prueba de

tuberculina, y su base la constituye la ausencia o presencia de induracin y su
tamao, que se determina como el dimetro de induracin transversal al eje mayor
del antebrazo. (Imagen 5: lectura correcta e incorrecta). El resultado ser positivo si
la induracin es mayor que 10mm.
Registro:
- Se debe anotar el dimetro en milmetros (no como positivo o negativo), el tiempo

exacto transcurrido desde la realizacin de la prueba diagnstica, y posibles factores
que hayan podido influir en el resultado o lectura del test intradrmico.
Resultados Errneos:
- Falsos negativos:
o Casos de Anergia: infecciones vricas (incluida VIH) o bacterianas, vacunaciones

con virus vivos (sarampin, poliomelitis), malnutricin, neoplasias, terapia
inmunosupresora o corticoide, recin nacidos, primoinfeccin tuberculosa
(periodo ventana), enfermedades hematolgicas o metablicas y IRC, o
situaciones de gran estrs (ciruga, quemados).
o Relacionado con la tuberculina: Desnaturalizacin por exposicin a la luz o
calor, adsorcin al contenedor o a la jeringa (parcialmente controlado por
Tween 80), dilucin excesiva, contaminacin de la dilucin.
o Relacionado con la administracin: dosis inadecuada, inyeccin profunda o
excesivamente superficial o en lugar muy vascularizado.
o Relacionado con la lectura: inexperiencia o error de transcripcin.
22
- Falsos Positivos:
o Relacionado con la lectura: inexperiencia o equivocaciones.

o Vacunacin con BCG: puede producir una respuesta significativamente
positiva, aunque no suele exceder los 10mm y disminuye su respuesta con el
tiempo, no prolongndose ms all de los tres aos.
o Infeccin por MNT (micobacterias no tuberculosas) que producen una reaccin
positiva de la prueba por su similitud con la micobacteria tuberculosa.
o Contaminacin bacteriana de la solucin, con la consiguiente reaccin

inflamatoria.
Imagen 5
1. Qu significa tener un resultado negativo?

- Puede ser que la persona no haya sido infectada por el bacilo tuberculoso.
- Puede ser que la prueba se realiz demasiado pronto, y la persona infectada an no
responde. En este caso se debe repetir a los 2-3 meses del ltimo contacto con un
paciente tuberculoso.
2. Qu significa tener un resultado positivo?

- Puede ser que la persona est infectada con el bacilo tuberculoso, esto no significa que
tenga la enfermedad.
- Puede ser que la positividad se deba a la vacunacin BCG o a infecciones por
micobacterias no tuberculosas.
3. Cul es el siguiente paso despus de la prueba de la tuberculina?

- Si el resultado de la prueba es negativo, normalmente no es necesario hacerse otra
prueba en ese momento.
- Si el resultado de la prueba es positivo, se deber practicar una radiografa de trax para
descartar la tuberculosis.
- Si el resultado de la radiografa es normal, significa que probablemente no se padece la
enfermedad y slo se sufre infeccin tuberculosa latente.
- Si las radiografas no son normales, se practicarn ms pruebas para determinar si se
padece tuberculosis o cualquier otra enfermedad. En caso de tener tuberculosis deber
iniciarse el tratamiento especfico.
23
4. Tiene contraindicaciones o efectos secundarios la prueba de la tuberculina?

- No tiene contraindicacin alguna. Los efectos secundarios causados por la prueba de la
tuberculina son muy infrecuentes. Sin embargo, una persona que haya estado expuesta
al bacilo tuberculoso puede tener hinchazn en el brazo que desaparecer en una o dos
semanas. En casos extremos puede aplicarse una crema de corticoide.
- Todas las pruebas, medicinas y exmenes mdicos para la tuberculosis son gratuitos.
Consulte a su mdico o a la Estrategia Sanitaria de Prevencin y Control de la
Tuberculosis correspondiente del establecimiento de salud ms cercano a su domicilio.
OBSERVACIONES:
- La solucin de PPD debe conservarse protegida de la luz y a una temperatura entre 2 y

8C. Nunca congelar.
- No deber diluirse la solucin y una vez cargada la cantidad necesaria (0,1ml) en la
jeringa deber administrarse en el periodo mximo de 15-30 minutos para evitar la
absorcin de la protena por parte de las paredes de la jeringa.
- Se recomienda que los viales de tuberculina usados no deben ser guardados ms de dos
das, debiendo indicar la fecha de apertura, aunque en recientes estudios se ha
comprobado su efectividad y asepsia en ampollas abiertas semanas antes de su empleo.
Comprobar la fecha de caducidad del vial.
- No administrar el test tuberculnico hasta seis semanas despus de la administracin de
vacunas de virus vivos (DTP), aunque no est contraindicada la administracin
simultnea de la vacuna y la prueba de la tuberculina.
24
ACTIVIDAD N 4: ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DE ESPECIES

PATGENAS DE LOS GNEROS Staphylococcus, Streptococcus y Neisseria
PRIMER CONTROL DE LECTURA: La epidemia de clera en Amrica Latina:

REEMERGENCIA Y MORBIMORTALIDAD
OBJETIVO
Proporcionar al alumno conocimientos de las caractersticas morfolgicas microscpicas y de

cultivo, as como algunas pruebas de identificacin en el laboratorio de especies bacterianas de
estafilococos y estreptococos importantes que causan infecciones en el ser humano.
GENERO Staphylococcus
INTRODUCCIN
Los estafilococos constituyen un grupo de microorganismos esfricos, Gram positivos, agrupados

en forma de racimos, tetradas o aisladas, inmviles no esporulados. La especie patgena del
gnero es Staphylococcus aureus. Este microorganismo puede formar parte de la flora nasal del
hombre y tambin es causante de diversos procesos infecciosos tales como imptigo,
forunculosis, abscesos, intoxicaciones alimentarias e infecciosas particularmente graves como
bacteriemias. La especie patgena produce una enzima llamada coagulasa, que puede estar libre
(free-coagulase) o ligada (clumping factor).
Algunas especies de Staphylococcus coagulasa negativas, tales como S. epidermidis y S.

saprophyticus considerados hasta hace relativamente poco tiempo como no patgenos, vienen
teniendo un papel relevante en cuadros infecciosos bacterimicos y urinarios.
MATERIALES
- Placas petri con medio hipertnico de Chapman (MH) y agar sangre sembrado con
Staphylococcus aureus.
- Placas petri con medio hipertnico de Chapman (MH) y agar sangre sembrado con
Staphylococcus epidermidis y Staphyloccocus saprophyticus.
- Lminas demostrativas con frotises de S. aureus y S. epidermidis, teidos con Gram.
- Caldo plasma humano para pruebas de patogenicidad (coagulasa en tubo).
- Caldo nutritivo en tubo.
25
PROCEDIMIENTO
- Observar con el microscopio las lminas demostrativas con frotises de S. aureus y S.

epidermidis utilizando objetivos de inmersin, reconocer la forma de agrupacin y la
coloracin que toma la bacteria.
- Demostrativo: Observar las placas ya preparadas con 24-48 horas de incubacin.
- Observar las caractersticas de desarrollo de las colonias en los medios AS, que son las
siguientes: 2 a 3 mm, lisas, amarillas, hemolticas, y vira al amarillo el medio MH, en el caso
de Staphylococcus aureus.
- Se presenta un tubo de caldo coagulasa positivo ya preparado y otro negativo.
- Registrar sus observaciones en el Protocolo
RESULTADOS
Aislamiento e identificacin: Staphylococcus aureus y S. epidermidis
Microorganismo
Colonias
Tamao
Forma
Pigmento
Hemlisis
Manitol
Coagulasa
Gram
26
GENERO Streptococcus
INTRODUCCIN
Constituye un grupo de microorganismos esfricos o lanceolados, gram positivos, inmviles no

esporulados, en cadenas cortas o largas. En el gnero Streptococcus estn comprendidas
especies patgenas para el hombre tales como Streptococcu. pyogenes y patgeno potencial
Streptococcus pneumoniae; existen portadores asintomticos de ambas especies.
S. pyogenes es causante de faringitis, amigdalitis, otitis, escarlatina, erisipela e imptigo; la fiebre

reumtica y la glomrulo nefritis pueden ser secuelas de la infeccin. En placas de agar sangre
produce hemlisis tipo y puede ser identificada mediante su sensibilidad a la bacitracina. La
especie S. pneumoniae se presenta en forma de diplococo, posee una cpsula ntida asociada
con la virulencia del germen. Se identifican por su sensibilidad a la etilhydrocuprena (optochin),
solubilidad en sales biliares, por metabolizar la inulina. Produce hemlisis tipo alfa en Agar
sangre, carcter que comparte con los estreptococos alfa hemolticos o S. viridans. S.
pneumoniae es uno de los agentes causales ms frecuentes de neumona, meningitis, otitis
media y sinusitis.
MATERIALES
- Placas petri con agar sangre sembrado con estreptococo beta hemoltico y disco de
bacitracina.
- Cultivo de estreptococo beta hemoltico en caldo nutritivo
- Cultivo de estreptococo alfa hemoltico en caldo nutritivo.
- Cultivo de neumococos en caldo nutritivo.
- Cultivo de neumococo en agar sangre y disco de Optochin.
- Solucin de sales biliares al 10%
- Caldo inulina
- Lminas demostrativas con frotises de S. pyogenes y pneumoniae , teidos con Gram.
PROCEDIMIENTO
- Observar con lentes de inmersin los cocos gram positivos en cadena en la lmina
demostrativa de S. pyogenes y S. pneumoniae.
- Observar en medio lquido el desarrollo con formacin de sedimento (S. pyogenes).
- En las placas de agar sangre observar las colonias pequeas y rodeadas de hemlisis, sin
destapar la placa observar al microscopio con objetivo de 5x la zona de hemlisis tipo beta
(destruccin total de los hemates) y la hemlisis tipo alfa.
- En las placas de agar sangre con el disco de bacitracina, observar el halo de ausencia de
desarrollo del estreptococo beta hemoltico del grupo A. (Streptococcus pyogenes).
- En la placa de agar sangre observar la colonia pequea aplanada y rodeada de un color
verdoso por la hemlisis tipo alfa.(Neumococo).
27
- En las placas de agar sangre con disco de Optochin, observar halo de ausencia de desarrollo
con el neumococo.
- En el medio con inulina constatar la formacin de acidez por metabolismo de este
carbohidrato.
- Observar el aclaramiento del cultivo lquido al aadirse sales biliares al 10%.
- Registrar las observaciones en el protocolo correspondiente
RESULTADOS:
Streptococcus
Aislamiento del estreptococo beta hemoltico del grupo A
MEDIOS
TAMAO
FORMA
HEMLISIS
GRAM
Identificacin
MEDIOS
BACITRACINA
HEMLISIS
28
Streptococcus pneumoniae.
Aislamiento
MEDIOS
FORMA
HEMLISIS
GRAM
Identificacin.
MEDIOS
OPTOCHIN
INULINA
GRAM
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DEL GNERO Neisseria.
OBJETIVO
Proporcionar al alumno conocimientos de las caractersticas morfolgicas microscpicas y de

cultivo, as como algunas pruebas de identificacin en el laboratorio de cocos gramnegativos
(Neisseria), bacilos grampositivos: formadores de esporas anaerobios (Clostridium) y aerobios
(Bacillus) importantes que causan infecciones en el ser humano.
29
GENERO Neisseria:
INTRODUCCIN
Del gnero Neisseria, las especies patgenas para el humano son: N. gonorrhoeae, que ingresa
al organismo por las mucosas urogenitales o conjuntivales produciendo abundante secrecin
purulenta; N. meningitidis es el agente causal de la meningitis epidmica, ingresa primariamente
por la nasofaringe. Ambas neisserias son diplococos Gram negativos, intracelulares y son muy
exigentes para su cultivo, necesitando medios enriquecidos y un ambiente de CO 2.
MATERIALES
- Lminas portaobjetos con extendidos de secreciones uretrales con gonococos.

- Lminas portaobjetos con extendidos de LCR con meningococos.
- Lminas portaobjetos con frotis a partir de cultivos de: N. gonorrhoae,
- Cultivos de Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis sembrados en agar chocolate e incubados
a 37 C por 24 a 48 horas (con el mtodo de la vela).
- Tubos con medio CTA con glucosa, sacarosa, lactosa y maltosa e indicador rojo de fenol
sembrados con gonococos, meningococo, por separado.
- Tiras para la prueba de oxidasa.
- Laminas con frotises de muestras de secrecin vaginal, uretral y LCR Gram y azul de
metileno con Neisserias
- Suero fisiolgico.
PROCEDIMIENTO
Caractersticas microscpicas:
- Lminas coloreadas con Gram y azul de metileno.

- Observar las caractersticas de Neisseria gonorrhoeae, diplococos Gram negativos intra y
extracelulares, arrionados o en grnulos de caf.
- Observar las caractersticas microscpicas de N. meningitidis en las extensiones del lquido
cfalo raqudeo semejantes a la de N. gonorrhoeae.
Caractersticas macroscpicas del cultivo:
- Observar las caractersticas macroscpicas de N. gonorrhoeae en el medio de agar chocolate

de Torrey, o de agar sangre como colonias pequeas de bordes enteros y de superficie lisa.
- Observar las caractersticas macroscpicas de N. meningitidis en el medio agar chocolate de
Torrey o de agar sangre, como colonias pequeas de borde entero, redondas, translcidas o
ligeramente opacas.
30
Produccin de Indofenol-Oxidasa.
- Colocar sobre las tiras colonias frescas sospechosas de Neisseria, observar el cambio de
color, con viraje del rosado al morado oscuro hasta el negro.
Prueba bioqumica con carbohidratos.
- Apreciar el metabolismo de los carbohidratos observando el viraje del indicador como sigue:
Acidez cuando vira del rojo al amarillo en el medio CTA.
RESULTADOS
Examen directo.
AZUL DE METILENO GRAM
SECRECIN URETRAL
L.C.R.
Identificacin bioqumica
GERMEN OXIDASA GLUCOSA MALTOSA SACAROSA LACTOSA
Gonococo
Meningococo
31
ACTIVIDAD N 5: PRIMER EXAMEN PARCIAL
32
ACTIVIDAD N 6: Seminario I: VACUNAS
TEMAS:
1. Historia - Bases inmunolgicas de las inmunizaciones y Clasificacion de vacunas
2. Vacunas Bacterianas
3. Vacunas virales
4. Estrategia Nacional de las Inmunizaciones y Cadena en fro
METODOLOGIA:
- Presentacin de un triptico resumen o guia del tema de Seminario

- Exposicin 10 minutos
- Debate 5 minutos
- Al final del Seminario habr una evaluacin general
BIBLIOGRAFIA:
1. http://www.minsa.gob.pe/portada/esninm_default.asp
2.ftp://ftp.minsa.gob.pe/OEI/Sistema_His3.05_2014/Manuales_HIS/Manuales_Actu
alizados_2014/0ESN_Inmunizaciones_2014.pdf
3. http://www.enfermeriaavila.com/PDF/Vacunacion.pdf
4.http://www.colfarma.org.ar/Cient%C3%ADfica/Documentos%20compartidos/Cade
na%20de%20fr%C3%ADo.pdf
33
ACTIVIDAD N 7: ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DE BACILOS GRAM.

POSITIVOS Y NEGATIVOS. PROCESAMIENTO DE UROCULTIVO Y
COPROCULTIVO
OBJETIVO
El alumno reconocer morfolgica y microscpicamente los bacilos gram positivos.
Reconocera los medios de cultivo para un urocultivo y coprocultivo,
Identificara los medios diferenciales para la identificacin de microorganismos

causantes de ITU y del sistema digestivo
INTRODUCCIN
Comprende varias especies de bacilos Gram positivos, aerobios estrictos, formadores de

esporas. Una especie patgena es el Bacillus anthracis causante del "carbunco". B. subtilis, que
tiene la misma caracterstica es saprofito y es un germen contaminante de medios de cultivo de
laboratorio.
La lesin cutnea (antrax cutneo) o pulmonar (ntrax pulmonar), son enfermedades de los
animales herbvoros, pueden producirse en humanos por razones ocupacionales, cuyo agente es
el B. anthracis. En los medios de cultivo B. anthracis desarrolla colonias tpicas: planas,
irregulares con bordes festoneados, que semejan una "cabeza de medusa". El poder patgeno
experimental se determina al inocular por va subcutnea a un cobayo un cultivo de B. anthracis,
provocando un edema gelatinoso y hemorrgico con septicemia mortal a los 2 3 das.
MATERIALES
- Frotis de cultivo de B. anthracis, coloreados con Gram.

- Frotis de lesin drmica por B. anthracis, coloreada con Hiss para la cpsula.
- Placa de agar sangre con cultivo de B. anthracis y B. subtilis, para estudios de las colonias y la
accin hemoltica.
PROCEDIMIENTO
- Observar microscpicamente B. anthracis teido con Gram.

- Observar microscpicammente B. anthracis coloreado con Hiss para visualizar la cpsula.
- Observar las caractersticas de cultivo de B. anthracis y B. subtilis, para estudios de las
colonias y la accin hemoltica.
34
MEDIOS TIPO DE COLONIA MORFOLOGA GERMEN

MICROSCPICA
GENERO Clostridium
Las especies importantes que estn relacionados con enfermedades en el hombre corresponden
a: Clostridium tetani, C. botulinum, C. perfringens, y C. difficile; son ubicuas, se encuentran en el
suelo, aguas y heces, generalmente de forma bacilar, con esporas, anaerobias y Gram positivas.
MATERIALES
- Cultivo de Clostridium en medio Thioglicolato.

- Caldo de Robertson con cultivo de Clostridium.
- Lminas coloreadas con Gram.
- Lminas con esporas de Clostridium coloreadas (tincin de Wirtz Conklin).
PROCEDIMIENTO
- Observar el desarrollo de Clostridium en el tubo de caldo Thioglicolato.

- Observar el desarrollo en el caldo de Robertson por debajo de la capa de parafina.
- Observar en las lminas coloreadas, la presencia de esporas.
35
MORFOLOGA
MEDIOS TIPO DE COLONIA GERMEN
MICROSCPICA
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DEL GNERO Corynebacterium Y

Listeria.
OBJETIVO
Que el alumno reonozca e identifique las caractersticas morfolgicas microscpicas y de cultivo

de los gneros Corynebacterium y Listeria que causan infecciones en el ser humano.
INTRODUCCIN
La especie ms importante del gnero Corynebacterium es Corynebacterium diphtheriae. Son

bacilos gram positivos, pleomrficos, en forma de mazo que suelen agruparse en forma de
letras chinas. En un frotis coloreado con la tincin de Albert se pueden observar la presencia
de grnulos metacromticos que son reservas de fosfatos acumuladas por la bacteria. Produce la
enfermedad de la difteria, una toxiinfeccin que afecta la faringe y la toxina causa una
miocarditis. La presencia de la toxina se evidencia con la prueba de Elek. Su prevalencia ha
disminuido notoriamente desde la aparicin de vacuna contra la difteria.
La especie ms importante del gnero Listeria es Listeria monocytogenes. Son bacilos

grampositivos, rectos y pequeos casi cocoides que pueden formar cadenas cortas de hasta
cuatro elementos. Son mviles por la presencia de flagelos que se desarrollan a temperatura
36
ambiente mas no a 37C. En agar sangre desarrolla colonias lisas, traslcidas, grises, de 1 a 2 mm
de dimetro y presentan una pequea zona de hemlisis beta, similar a la de lolos estreptococos
beta hemolticos del grupo B (S. agalactiae), con los cuales se confunde. La observacin de su
movilidad sirve para su identificacin presuntiva: En un tubo de agar semislido incubado a
tempertura ambiente se observa el crecimiento en forma de paraguas; mas si el tubo es
incubado a 37C, no se desarrollan los flagelos y no se observa movilidad. Produce la
enfermedad denominada Listeriosis, una enfermedad sistmica con sntomas generales poco
caractersticos como tambin meningoencefalitis o infecciones del embrin o feto dando lugar a
abortos o partos prematuros. Se adquiere por ingesta de alimentos como leche sin pasteurizar,
quesos, vegetales contaminados, pero tambin por inhalacin y por va transplacentaria. Las
personas de mayor riesgo en enfermar son los lactantes, ancianos y gestantes.
MATERIALES
- Cultivo en placa de agar sangre anaerbico de Bacteroides fragilis.

- Cultivo en caldo thioglicolato enriquecido de Bacteroides fragilis.
- Lmina demostrativa con frotis coloreado con Gram de Bacteroides fragilis.
- Cultivo en placa de agar chocolate telurito de potasio de Corynebacterium
diphtheriae.
- Frotis coloreado con Gram de Corynebacterium diphtheriae.
- Frotis coloreado con tincin de Albert de Corynebacterium diphtheriae.
- Cultivo en placa de agar sangre de Listeria monocytogenes.
- Tubos con agar semislido sembrado con Listeria monocytogenes a temperatura
zmbiente y a 37C.
- Frotis coloreado con Gram de Listeria monocytogenes.
PROCEDIMIENTO
- Observar y describir las caractersticas de cultivo de Corynebacterium diphtheriae en la placa

de agar sangre telurito de potasio.
- Observar la morfologa de Corynebacterium diphtheriae en la lmina con el frotis teido con
Gram.
- Observar la presencia de grnulos metacromticos de Corynebacterium diphtheriae en la
lmina con el frotis teido con la tincin de Albert. Los grnulos aparecen de color azul
marino mientras el cuerpo bacteriano se tie de color verde agua.
- Observar y describir las caractersticas de cultivo de Listeria monocytogenes.
- Observar y describir las caractersticas de cultivo de Listeria moncytogenes en agar
semislido incubado a temperatura ambiente y a 37C.
- Observar la morfologa de Listeria monocytogenes en la lmina con frotis teido con Gram.
Graficar las observaciones del cultivo en placa y tubo, y las caractersticas

microscpicas.
37
BACTERIA TINCIN DE GRAM TINCIN DE ALBERT
Anaerobios
Corynebacterium
diphtheriae
Listeria monocytogenes
BACILOS GRAM NEGATIVOS: ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DEL

GNERO Escherichia, Salmonella Y Shigella.
OBJETIVO
Que el alumno de Enfermera conozca las caractersticas morfolgicas microscpicas y de cultivo

y las pruebas de identificacin en el laboratorio del Gnero Escherichia, Salmonella y
Shigella.
INTRODUCCIN
La Escherichia coli una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por
ende en las aguas negras. Descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, la
denomin Bacterium coli. Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia
coli. sta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo,
adems de producir las vitaminas B y K. Es Gram negativo, anaerobio facultativo, mvil por
flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y
la lactosa. Se distinguen seis cepas segn su poder patgeno. Puede causar infecciones
intestinales y extraintestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato
excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumona.
Salmonella es un gnero de bacterias que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado

por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos pertricos y que no desarrollan
cpsula (excepto la especie S. typhi) ni esporas. Son mviles que producen sulfuro de hidrgeno
(H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen
ureasa. Agente productor de zoonosis de distribucin universal. Se transmite por contacto
directo o contaminacin cruzada durante la manipulacin, en el procesado de alimentos o en el
hogar, tambin por va sexual.
38
Shigella es un gnero de bacterias con forma de bacilo Gram negativas, no mviles, no

formadoras de esporas e incapaces de fermentar la lactosa, que pueden ocasionar diarrea en los
seres humanos. Fue descubierto hace 100 aos por el cientfico japons Kiyoshi Shiga, de quien
tom su nombre. La infeccin por Shigella, tpicamente comienza por contaminacin fecal-oral.
Dependiendo de la edad y la condicin del hospedador, puede que solo sea suficiente alrededor
de 200 organismos para causar una infeccin. La Shigella causa disentera, resultando en
destruccin de las clulas epiteliales de la mucosa intestinal a nivel del ciego y el recto. Algunas
cepas producen una endotoxina y la toxina Shiga,
MATERIALES
- Lminas con frotis de E. coli coloreado con tincin de Gram

- Lminas con frotis de Salmonella coloreado con tincin de Gram
- Lminas con frotis de Shigella coloreado con tincin de Gram
- Placas petri con agar Mac Conkey sembrado con E. coli, Salmonella y Shigella.
- Tubos con SLU, TSI, Lisina, caldo peptonado, Citrato de Simmons, Indol, MR, VP inoculados
con las especies a estudiar.
- Medio selectivo: Salmonella - Shigella.
PROCEDIMIENTOS
- Morfologa: Observar las lminas con los frotices teidos con tincin de Gram al microscpio
ptico con lente de inmersin (100x).
- Cultivo:
Observar el desarrollo bacteriano en las placas de Agar Mac Conkey.
Las colonias rojas corresponden a bacterias que han metabolizado la lactosa (E.
coli) debido al indicador de pH cido (rojo neutro).
Las colonias incoloras corresponden a bacterias que NO han metabolizado la
lactosa, sospechosas de ser patgenas (Salmonella o Shigella).
Observar el desarrollo bacteriano en Medio Salmonella Shigella.
Observar el desarrollo de colonias negras productoras de hidrgeno sulfurado
(Salmonella).
- Bioqumica: Para su identificacin se requiere la batera de pruebas bioqumicas.
Medio TSI (Glucosa, Lactosa, Sacarosa y Fierro)
Medio Lisina: (aminoacido para la formacin de protenas)
Indol:
Citrato: (como nica fuente de carbono)
Rojo de Metilo (MR) para evidenciar el uso de azucares: se agrega rojo de metilo
Voges Proskaguer (VP)
39
Klebsiella y Proteus.
OBJETIVO
Que el estudiante reconozca las caractersticas morfolgicas y laboratoriales que requieren las
enterobacterias de los generos Klebsiella y Proteus para su crecimiento e identificacin en el
laboratorio.
40
INTRODUCCIN
Las enterobacterias son bacilos gran negativos, no esporulados, aerobios y anaerobios

facultativos que habitan en el tracto intestinal, la mayor parte de las enterobacterias son no
patgenas para el hombre como es el caso de la Klebsiella y proteus que se convierten en
patgenas condicionales al contaminar las vas urinarias y genitales, lo que las convierte en
elementos importantes a tener en cuanta en los cuidados de enfermera esencialmente en los
pacientes hospitalizados.
MATERIALES
Placas petri con agar Mac Conkey sembrado con Klebsiella y Proteus
Tubos con SLU, TSI, Lisina, Citrato, Indol, MR, VP
Medio selectivo: SS
PROCEDIMIENTOS
Posterior a la toma de muestra se realizan los cultivos en medios selectivos y enriquecidos como
el SS (Shigella Salmonella) en las que el Proteus toma el color negro por ser productora de
hidrogeno sulfurado.
Para su identificacin se requiere la batera de pruebas bioqumicas
RESULTADOS
- En el Medio TSI (Glucosa, lactosa, Sacarosa y Fierro)

- Lisina: (aminoacido para la formacin de protenas)
- Citrato: (como nica fuente de carbono)
- Rojo de Metilo (MR) para evidenciar el uso de azucares: se agrega rojo de metilo
- Voges Proskaguer (VP)
UROCULTIVO
OBJETIVO
Que el alumno reconozca, e interprete los mtodos para diagnsticar una iTU.
INTRODUCCION
41
Es el cultivo de orina para diagnosticar infeccin sintomtica del tracto urinario o infeccin
asintomtica (bacteriuria asintomtica) en pacientes con riesgo de infeccin.
Est basada en la presencia de un nmero significativo de bacterias (generalmente >100.000
bacterias/ml.)
La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnstico de infeccin
del tracto urinario, ya que prcticamente est presente en todas las infecciones urinarias. Una
excepcin es la bacteriuria asintomtica en la que la piuria puede estar ausente.
AGENTES ETIOLGICOS A INVESTIGAR RUTINARIAMENTE

- Escherichia coli
- Klebsiella spp.
- Enterobacter spp.
- Serratia spp.
- Enterococus spp.
- Proteus spp.
- Pseudomonas spp.
- Acinetobacter spp.
- Candida spp.
- Staphylococus spp.
- Estreptococo grupo B (imprescindible en embarazadas)
Toma de muestra: para la toma de muestra, transporte y manipulacin podrn tenerse en

cuenta las siguientes indicaciones:
- No estar tomando antibiticos o haberlos suspendido aproximadamente de 3 a 5 das antes
del examen
- La o rina debe estar retenida en vejiga durante 2 horas, nunca la primera de la maana
- Lavado previo de las zona de la uretra.

- Mujeres: Obtencin de la orina despus de separar los labios vaginales de manera que el
chorro de orina no toque genitales externos.
- Hombres: Retraccin del prepucio de manera que el chorro de orina salga directamente.
La correcta recogida y conservacin de la orina para urocultivos es fundamental para que
puedan obtenerse resultados fiables.
MATERIALES:
- Placas petri con agar nutritivo o CLED
- Placas petri con agar MacConkey
- Asas de siembra en aro de 0.001 ul
PROCEDIMIENTO:
- Examen Macroscpico: aspecto, color, color
- Examen Microscpico: tomar 50 ul de la muestra de orina y colocar en una cmara de
Neubauer para hacer el recuento de leucocitos y hemates(examen directo en fresco)
Realizar coloracin Gram. Ms de 6 leucocitos y presencia de germenes ITU.
42
- Examen Microbiolgico:
Recuento de colonias
Aislamiento e identificacin
Antibiograma
INTERPRETACION:
- Recuento: contar el nmero de colonias y multiplicar por la dilucin. Ejemplo: 20 colonias o
Unidades formadoras de colonia (UFC) x 1,000 = 20,000 UFC
- Menos de 1.000 10.000 UFC, se informar: Menos de 1.000 10.000 UFC/ml.
De 10.000 a 100.000 UFC.
- Un patgeno sin clulas epiteliales: informar microorganismo, nmero de colonias,
antibiograma y valorar clnicamente
- Dos patgenos: informar microorganismos, nmero de colonias y solicitar nueva muestra.
- Ms de dos patgenos: informar Cultivo mixto, probable contaminacin.
- > 100.000 ms UFC: Uno o dos patgenos: informar identificacin ms antibiograma
NO SE CULTIVARN NUNCA: por no ser muestras adecuadas:

- Catteres de Foley.
- Orina de miccin o de catter para anaerobios.
- Orinas de ms de 2 horas de su recogida sin conservacin adecuada
43
44
COPROCULTIVO
OBJETIVO
Que el alumno reconozca, identifique y diagnostique el agente causal de infecciones
causadas por bacterias patgenas en el intestino
INTRODUCCION
El coprocultivo, al igual que el urocultivo, no est indicado de forma rutinaria. La mayora de las
gastroenteritis agudas aparecen como procesos autolimitados y de curso benigno, en las que la
nica actitud recomendada es la de tratamiento sintomtico y observacin. Ser en las enteritis
graves en las que est indicado un estudio microbiolgico tanto para tratar con antimicrobianos
especficos frente al agente causal como para evitar o bloquear su difusin
En cuanto a las indicaciones del estudio microbiolgico podemos considerar razones tanto
clnicas como epidemiolgicas. Las primeras vienen dadas por la gravedad del proceso
(deshidratacin, fiebre elevada, pus o moco en las heces) o por la susceptibilidad del paciente
(granulopenia, sida, hospitalizacin, edades extremas de la vida, sndrome hemoltico-urmico).
En las segundas, las indicaciones las tendramos en brotes epidmicos (banquetes, guarderas,
hospitales), diarrea del viajero y en sospecha de posibles agentes con potencial epidmico como
el clera.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
45
Vibrio sp. es un genero de mas de 30 bacilos Gram Negativos curvados o rectos de 0.5 a 0.8
micras de ancho por 1.4 a 2.6 micras de largo, usualmente muy mviles por un flagelo polar,
aerbicos o anaerbicos facultativos, fermentan la glucosa (al igual que las Enterobacterias) y
son oxidasa positivos; algunos son haloflicos (una concentracin alta de sal facilita su
crecimiento). Vibrio cholerae es la bacteria mas importante del genero por causar el clera
epidmico reportado desde 1817 con numerosas muertes. La sptima pandemia que llego en
1991 al Per fue causada por el Vibrio cholerae, biotipo El Tor, principalmente del serotipo
Ogawa. Otros Vibrios de menor frecuencia tambin producen diarrea como V. parahemolyticus y
V. fluvialis. V. alginolyticus produce infeccin extraintestinal.
Pseudomonas sp. son Bacilos Gram Negativos rectos o ligeramente curvados, de 0.5 a 1 micra de
ancho por 1 a 5 micras de largo, aerobios, no fermentadoras de glucosa, no formadores de
esporas, mviles por un flagelo polar, carentes de cpsula, catalasa positivas, generalmente
oxidasa positivas, desarrollan pigmento y olor caractersticos. Pseudomonas aeruginosa produce
muy comnmente colonizaciones e infecciones en pacientes inmunosuprimidos. Especialmente
afecta heridas de quemaduras moderadas y graves; as mismo produce infecciones
Intrahospitalarias graves muy resistente a los antibiticos.
MATERIALES
a. Vibrio
- Cultivo de V. cholerae, V. parahemolyticus y V. alginolyticus en Agar TCBS y TSA.

- Serie bioqumica de V. cholerae y V. parahemolyticus: SLU, TSI, Lisina, Citrato, Indol,
Caldo peptonado (CP) con 0%, 3%, 7%, 10% de NaCl.
- Reactivo de Oxidasa, Reactivo de Kovacs, Reactivo de Rojo de Metilo, Reactivo de Alfa
Naftol, Hidrxido de Potasio al 40%.
- Lamina con extendido de cultivo puro de V. cholerae, coloreado con Gram.
b. Pseudomonas
- Cultivo de Pseudomonas aeruginosa en agar nutritivo, agar Mc Conkey y caldo nutritivo.

- Serie bioqumica de Pseudomonas aeruginosa en SLU, TSI, Citrato de Simmons y Caldo
Peptonado.
- Reactivo de oxidasa.
- Prueba de extraccin de pigmento de Pseudomonas aeruginosa en cloroformo.
- Lamina de extendido de cultivo puro de Pseudomonas aeruginosa coloreado con Gram.
PROCEDIMIENTO
a. Vibrio
- Observar la lamina de cultivo puro de V. cholerae.

- Observar el cultivo de V. cholerae, V. parahemolyticus y V. alginolyticus en Agar TCBS y
TSA. Realizar y observar la prueba de oxidasa en TSA.
- Realizar la lectura de la serie bioqumica.
46
b. Pseudomonas
- Observar la lamina de cultivo puro de Pseudomonas aeruginosa.

- Observar el cultivo de Pseudomonas aeruginosa en agar Mc Conkey y caldo nutritivo.
- Observar la prueba de extraccin de pigmento en Pseudomonas aeruginosa.
- Observar las pruebas bioqumicas para la identificacin de Pseudomonas aeruginosa.
METODO CARACTERISTICAS DIAGNOSTICO
COPROCULTIVO
IDENTIFICACION
BRUCELLA
BARTONELLA
PSEUDOMONAS
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ACTIVIDAD N 8: BRUCELLA: HEMOCULTIVO Y AGLUTINACIONES. ESTUDIO

MORFOLGICO Y CULTIVO DE MYCOBACTERIUM. TREPONEMA: VDRL.
SEGUNDO CONTROL DE LECTURA: LOS Virus Respiratorios
GNERO Brucella
OBJETIVO
Conocer e identificar algunos aspectos de la morfologa microscpica del gnero Brucella, la

tcnica de cultivo y los medios de cultivo para la diferenciacin de las principales especies, de
igual manera conocer la prueba serolgica de aglutinacin en placa.
INTRODUCCIN.
Son cocobacilos Gram negativos, inmviles, no esporulados y aerobios estrictos. Algunos pueden
presentar cpsula. Se observan agrupados en parejas o en cadenas cortas. Su temperatura
ptima de crecimiento es 37C y algunas especies necesitan presencia de CO2. Son catalasa +, la
mayora dan la prueba de la oxidasa +, reducen NO3- y fermentan escasos HC. Las especies del
gnero Brucella son parsitos obligados de animales y algunos producen infeccin en el hombre.
Son bacterias de crecimiento lento y se destruyen con facilidad con temperaturas de
pasteurizacin (aprox. 70C).
Se conocen las siguientes especies por su capacidad de infectar al ser humano:

- Brucella melitensis, infecta preferentemente al ganado caprino.
- Brucella abortus, infecta preferentemente al ganado bovino.
- Brucella suis, infecta preferentemente al ganado porcino.
- Brucella canis, infecta a los perros.
La brucelosis es una tpica zoonosis en la que el hombre es un husped accidental. Las posibles
fuentes de contaminacin son:
- Transmisin directa por: contacto con animales infectados, inhalacin de aerosoles,
inoculacin, contacto con mucosas principalmente en personas que trabajen con animales.
- Transmisin indirecta por: ingestin de leche y derivados no pasteurizados.
Es importante destacar el peligro que corre el personal del laboratorio que se puede infectar
por:
- contacto por piel y mucosas.
- inhalacin de aerosoles.
- inoculacin accidental con agujas contaminadas.
Es frecuente que la infeccin se localice en distintos rganos (hgado, msculo, huesos, etc.).
La Brucella melitensis causa un acusado neurotropismo (tendencia por SNC). En humanos la
complicacin ms frecuente es la osteomielitis.
48
La Brucella es el agente productor de brucelosis, fiebre malta o fiebre ondulante. Comienza con
fiebre, debilidad, dolores seos y sudoracin. La fiebre aumenta por la tarde y disminuye por la
noche seguida de sudoracin profusa. La infeccin se disemina por va linftica alcanzando los
ganglios linfticos, bazo, hgado y vrtebras donde se forman ndulos granulomatosos. Dado
que se trata de un microorganismo intracelular y las recadas son frecuentes, los tratamientos
han de ser prolongados principalmente e emplean tetraciclinas, aminoglucsidos, rifampicina y
trimetroprim-sulfametoxazol. No es fcil evidenciar la clnica de la brucelosis, debido a que en
muchas ocasiones y sobre todo al principio de la enfermedad, sta es difusa (no hay sntomas
claros de brucelosis) siendo necesario los estudios microbiolgicos y serolgicos.
MATERIALES
- Frascos de hemocultivo o mielocultivo positivos (en medio Ruiz Castaeda).

- Placas con cultivo de Brucella en medios con thionina (1/50,000) y fucsina (1/25,000).
- Tubos de cultivo de Brucella con indicadores para rea y H2S.
- Frotises coloreados con Gram, a partir de cultivos de Brucella.
- Suero de paciente brucelsico.
- Antgeno estandarizado de Brucella.
- Lminas excavadas.
- Pipetas de 0,2 mL.
- Palitos mondadientes.
PROCEDIMIENTOS
a. Estudio microbiolgico
- Toma de muestra: los productos en los que se sospecha presencia de Brucella son
principalmente sangre, mdula sea y en ocasiones lquidos orgnicos como pus y LCR
entre otros. De la muestra de sangre se realiza hemocultivo, de vital importancia ya que
la bacteremia (paso de Brucella a sangre) est presente en las primeras fases de la
brucelosis, sobre todo en manifestaciones febriles, teniendo en cuenta que un resultado
negativo de hemocultivo no excluye en principio la infeccin.
- Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es

entre 2 horas a 30 minutos antes del peak febril. Thomson y Evans demostraron en
78 episodios de bacteriemia que el porcentaje ms alto de positividad (14%) de los
hemocultivos era en el grupo de pacientes cuyas muestras se haban obtenido entre
2,5 y 0,5 horas pre-peak en comparacin con las muestras obtenidas durante el peak
(8%) y las muestras obtenidas entre 12 y 2,5 horas pre-peak o las muestras
obtenidas 1 a 12 horas post-peak (34). Por esto el mejor momento sera antes del
inicio del peak febril el que puede ser precedido por calofros (Figura N3). Sin
embargo dado que este momento no se puede predecir, se recomienda en forma
arbitraria obtener dos hemocultivos en 24 horas separados por 30 a 90 minutos o
bien obtener los dos hemocultivos al mismo tiempo, de diferentes sitios de puncin,
si se trata de un paciente que va a requerir inicio inmediato de antimicrobianos.
49
- Volumen de la muestra Se considera actualmente una de las variables ms crticas en

el aumento de la positividad de los hemocultivos. Dado que la mayora de las
bacteriemias son de baja magnitud (< 1 a 10 ufc/ml) a mayor volumen de muestra
obtenido, mayor es la sensibilidad del hemocultivo. Se sabe que por cada ml adicional
de muestra que se inocule en la botella aumenta la positividad entre un 2 a 5%.
Recientemente, en un estudio pareado, Mermel y Maki (20) demostraron una
disminucin significativa (p<0.001) de la positividad de los hemocultivos cuando se
obtenan en promedio 2,7 ml (69%) versus 8,7 ml ( 92%).
- Por esto es que las recomendaciones son obtener el mximo de volumen que la botella
sea capaz de tolerar manteniendo la relacin 1:5 a 1:10 entre la muestra y el volumen
de medio de cultivo, esta dilucin permite neutralizar las propiedades bactericidas de
la sangre y de los agentes antibacterianos que puedan estar presentes en la muestra.
Para la gran mayora de los sistemas automatizados este volumen es de 10 ml para
adultos y es variable para los nios segn la edad: 1 a 2 ml para recin nacidos, 2 a 3
ml para lactantes de 1 mes a 2 aos, 3 a 5 ml para nios mayores de 2 aos y 10 ml
para adolescentes.
- Pruebas bioqumicas: Se suele realizar la prueba de la catalasa y oxidasa (+), as como la

prueba del indol, gelatina, voges proskauer y rojo de metilo (-). Para la prctica se usar
la prueba del hidrgeno sulfurado y rea.
b. Estudio serolgico: Las pruebas ms importantes son:
- Test de aglutinacin en placa: se realizar una prueba cualitativa enfrentando el suero

problema, que contiene anticuerpos, con una gota de antgeno purificado especfico (el
Ag de la Brucella).
c. Medios de cultivo
La Brucella es un microorganismo intracelular, por lo que necesitan compuestos

nutricionales. Existen muchos medios para el aislamiento de Brucella:
- Medios lquidos: como el caldo tripticasa, el caldo de hgado, caldo de brucella, etc.
- Medios slidos: como el agar tripticasa, agar de brucella, etc.
- Medios bifsicos: como el medio de Ruiz Castaeda.
d.- Tcnicas de cultivo
- Tcnica de Castaeda: Utiliza un medio bifsico (medios que tienen una fase lquida y
otra slida en un mismo frasco). El medio lquido permite el enriquecimiento previo de
la Brucella y el medio slido sirve para la siembra. Esta tcnica tiene las siguientes
ventajas:
o manipulacin sencilla.
o frascos de cierre hermtico que dificultan la contaminacin.
o los frascos pueden llevar CO2.
50
o conservacin indefinida y transporte cmodo.
El volumen de sangre que se siembra no debe superar el 20% del volumen del medio. El
frasco se incuba a 35-37C en posicin vertical y a las 48 horas se inclina para que la fase
lquida impregne la fase slida y se incuba nuevamente en posicin vertical. El
hemocultivo se observa cada 2-3 das hasta un total de 30 das.
- Crecimiento en Agar Tripticasa Soya (en presencia de thionina y fucsina): se siembran

muestras de Brucella melitensis, Brucella suis y Brucella abortus con thionina (1/50,000)
y fucsina (1/25,000).
RESULTADOS
Las lminas teidas permiten observar cocobacilos Gram negativos.
En los medios de cultivo las colonias de Brucella son pequeas y transparentes y corresponden a
dos tipos morfolgicos:
- Colonias lisas o S: son transparentes y corresponden a cepas virulentas cuya virulencia

corresponde a dos factores virulentos: factor A y M, que son de naturaleza polisacrida.
- Colonias rugosas o R: no son patgenas.
CARACTERSTICAS DE LAS BRUCELLAS
Necesidad Crecimiento con

Micro- Husped Produccin
organismo Preferido de H2S
De CO2 Thionina Fucsina bsica
B. abortus Bovinos + ++ - +
B. melitensis Cabras - - + +
B. suis Cerdos - + + -
B. canis Perros + - + -
51
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DEL GNERO BARTONELLA.
OBJETIVO
Conocer e identificar algunos aspectos de la morfologa microscpica del gnero Bartonella, la

tcnica de cultivo y los medios de cultivo, observar a la microscopa los frotises de sangre y los
cortes histolgicos de los verrucomas.
INTRODUCCIN
Existen ms de 14 especies, las ms importantes son:
1. Bartonella bacilliformis, causante de la enfermedad de Carrin.

2. B. quintana, produce la fiebre de las trincheras, angiomatosis bacilar. Vector el piojo del
cuerpo.
3. B. henselae. Produce la fiebre del araazo de gato y tambin angiomatosis bacilar, hepatitis
peliosica. Vector la pulga (del gato).
4. B. elizabethae, produce endocarditis bacteriana en el hombre.
5. B. vinsonii, tambin es transmitida por la picadura de la pulga.
La Bartonella bacilliformis, es la de mayor inters para nuestro pas y es causante de la

Enfermedad de Carrin, a travs de la picadura de insectos hematfagos del gnero Lutzomyia.
La Barlonella, es un microorganismo que presenta un marcado polimorfismo (bacilares,

cocobacilares y cocoides); cuyas dimensiones varan de 1 a 3 micrones de largo por 0.25 a 0.3
micrones de ancho. En la fase hemtica de la enfermedad bartonelsica y en los cultivos jvenes
52
predominan las formas bacilares, mientras que al final de sta y al inicio de la fase intercalar,
que le sigue, predominan las formas cocoides, lo mismo sucede en los cultivos viejos. Se
caracteriza por presentar flagelos unipolares en nmero de 2 a 16, permitiendo a la bacteria una
gran movilidad; se colorea escasamente con los colorantes de la anilina (Gram negativa), pero
tiene gran afinidad para los colorantes derivados del Romanowski (Giemsa, Leishman, Wrigth,
etc.). Desarrolla en aerobiosis y microaerobiosis, a una temperatura ptima de 29 C, en medios
enriquecidos con sangre, plasma, peptona, trptosa, fitona, etc. Puede ser aislada de la sangre
(hemocultivo) en la fase hemtica de la enfermedad y de las lesiones eruptivas (fase verrucosa o
histioide) y del LCR en los casos de neurobartonelosis.
MATERIALES
- Frotises coloreados por el mtodo de Gram y Leshmann, procedentes de cultivo de

Barlonella bacilliformis.
- Frotises de sangre coloreados por el mtodo de Leishmann, procedentes de pacientes
carrinicos en la fase hemtica.
- Cultivos de Bartonella bacilliformis en los medios de fases: Agar y Gel. Lo mismo que en el
medio de plasma gelificado (Solano).
PROCEDIMIENTO
1. Microscopio: observar al microscopio los frotises coloreados, usando objetivos de

inmersin, para apreciar la morfologa y la tincin caracterstica de la Bartonella; que con la
tcnica de Gram, se tie muy tenuemente de un color rosado plido, pero con el Leishman
se tie ntidamente, observndose grandes masas de bacterias (sogleas), debido al entre-
cruzamiento de sus f1agelos, mientras que otras se observan aisladas debido a la carencia
de flagelos (bacterias de reciente divisin celular). En los frotises de sangre, apreciar a la
Bartonella, tanto en su forma bacilar como en la forma cocoide, parasitando a los hemates
humanos. No infecta a los animales a excepcin de las hemobartonellas que si infectan a los
animales y accidentalmente infectan al hombre.
2. Cultivos: Observar el desarrollo de la Bartonella, tanto en la superficie como en la parte

lquida del agar de fases, que a veces se visualiza como una pelcula en la superficie, se-
mejando grumos llamados "tmpanos".
53
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DEL GNERO Mycobacterium.

ESTUDIO MORFOLGICO DEL Treponema pallidum.
Gnero MYCOBACTERIUM
OBJETIVO
Los alumnos deben identificar BAAR en frotises de esputo, determinar la carga bacilar en la
baciloscopa relacionndola con la presencia de infeccin TB o enfermedad TB y finalmente
suponer la extensin o gravedad de la enfermedad.
Los alumnos deben reconocer el medio a base de huevo y las colonias de Mycobacterium
tuberculosis y otras especies.
INTRODUCCIN
Mycobacterium es un grupo de bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR) aerbicos, con

requerimientos nutricionales que incluyen protenas y compuestos del huevo de gallina. La
principal especie es el Mycobacterium tuberculosis, comnmente llamado Bacilo de Koch (BK).
Otras especies de importancia clnica son Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasii,
Mycobacterium chelonae, Mycobacterium fortuitum. Se les diferencia por su velocidad de
crecimiento en medio a base de huevo: de crecimiento rpido (en menos de siete das) o de
crecimiento lento (en mas de siete das). El Mycobacterium tuberculosis es el causante de la
Tuberculosis (TB), produciendo una reaccin inflamatoria con destruccin de tejido que lleva a la
formacin de cavidades o cavernas, especialmente en los pulmones, pero que se puede ubicar
en cualquier rgano o tejido. El diagnostico de la TB se basa en el hallazgo microscpico de
BAAR, examen denominado baciloscopa. La mitad de pacientes con tuberculosis tienen la
baciloscopa negativa y en ellos debe realizarse un cultivo para diagnosticar la enfermedad. Un
10 a 20% de enfermos de TB tienen baciloscopa y cultivo negativos y en ellos otros exmenes
diagnsticos (radiografas, otras pruebas por imgenes, examen citoqumico de lquidos y
secreciones, la Tuberculina especialmente en nios, y otros) ayudan al diagnostico. El bacilo de
la tuberculosis se transmite de persona a persona a travs de gotitas que salen al respirar,
hablar, silbar, cantar. Por lo tanto la medida de prevencin es diagnosticar y tratar la infeccin
por Mycobacterium tuberculosis. La principal medida de control de la TB es el diagnostico y
tratamiento de la enfermedad TB. La infeccin TB es un estado de latencia del BAAR en los
ganglios hiliares de las personas sanas, estado muy diferente al de enfermedad TB.
MATERIALES
- Laminas de extensiones de esputo coloreados con Coloracin Ziehl-Neelsen con carga bacilar
de una cruz, dos cruces y tres cruces.
- Tubos con Mycobacterium tuberculosis y otras especies.
54
PROCEDIMIENTO
a. Observar la lmina de una, dos y tres cruz

- Contar cuantos bacilos observa en cada campo.
- Observar 100 campos. Utilizar el Cuadro de Lectura de Baciloscopas.
b. Observacin de tubo
- Con Mycobacterium tuberculosis

- Con otras especies de Mycobacterium.
c. Anotar las observaciones en el protocolo.
CUADRO DE LECTURA DE BACILOSCOPAS:
Cada celda corresponde a cada campo microscpico. Recorrer ordenadamente el frotis donde
haya material inflamatorio (leucocitos, moco). Escribir el nmero de bacilos observados en cada
campo. Cada alumna o alumno debe usar un cuadro.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
41 42 43 44 45 46 47 48 49 50
51 52 53 54 55 56 57 58 59 60
61 62 63 64 65 66 67 68 69 70
71 72 73 74 75 76 77 78 79 80
81 82 83 84 85 86 87 88 89 90
91 92 93 94 95 96 97 98 99 100
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Numero de Caractersticas
Material Carga Bacilar Comentarios
Colonias de Colonias
Tubo de Lowenstein
Jensen con No aplica
M.tuberculosis
ESTUDIO MORFOLGICO DEL TREPONEMA PALLIDUM
OBJETIVOS :
Conocer las tcnicas diagnosticas utilizadas en la practica diaria y en salud publica para el
diagnostico de sfilis.
INTRODUCCIN
La sfilis es una enfermedad infecciosa aguda, que sin tratamiento se vuelve crnica, cuyo agente
causal es Treponema pallidum perteneciente, junto con otros treponemas, borrelias y
leptospiras, a la familia Treponemataceae. Es un microorganismo mvil con dimensiones, 5-15
um de largo por 0,2 um de dimetro, por estas medidas se encuentra en el lmite de la
resolucin ptica de los microscopios convencionales; por ello no es posible visualizarlo
mediante tinciones normales y s por contraste de fases o tinciones de plata que "engruesan la
bacteria". Tampoco es una bacteria cultivable, su multiplicacin es lenta.
La enfermedad est clasificada como ITS y es de declaracin obligatoria, siendo su mecanismo

de transmisin por contacto directo con una lesin ulcerada, por transfusin de sangre y
derivados, madre al nio durante la gestacin y el parto. Su perodo de incubacin es de 12 a 90
das (media de 21 d), donde aparece en el lugar de la inoculacin una lesin primaria, rica en
treponemas (el chancro), esta desaparece espontneamente a las pocas semanas (sifilis
56
primaria) luego T. pallidum se multiplica en los ganglios linfticos regionales y luego por la
sangre a todos los rganos del individuo (infeccin sistmica), llegando a permanecer muchos
aos infectado con destruccin de rganos y sistemas (sfilis secundaria y terciaria).
El diagnostico se realiza por mtodos directos (visualizacin del treponema) o por mtodos
indirectos mediante los anticuerpos con las pruebas serolgicas, que se hacen positivas en
pasadas 3-4 semanas de la infeccin.
Para el diagnostico rutinario y en salud pblica se utilizan las pruebas serolgicas y estas pueden
ser:
Pruebas no treponmicas: Venereal Disease Research Prueba de laboratorio (VDRL), Reagina

plasmtica rpida (RPR).
Las pruebas treponmicas confirman el diagnostico: Inmunofluorescencia: FTA-Abs (anticuerpos

absorbidos fluorescentes anti- treponema), Hemaglutinacin: TPHA y MHA-TP (sta ltima
adaptacin de la anterior con una placa de microtitulacin). ELISA de anticuerpos treponmicos.
Enzimoinmunoensayo de membrana (western-blot) treponmico. Prueba de inmovilizacin de T.
pallidum (TPI).
En la prctica realizaremos la prueba no treponmicas:
- R.P.R. (Rapid Plasma Reagin). Puede emplearse con suero y plasma. Es un antgeno con
partculas de carbn.
Puesto que no miden anticuerpos especficos frente a T. pallidum su positividad no asegura la

enfermedad sifiltica. El RPR ha pasado a ser la prueba habitual para la seleccin de sueros en
los laboratorios y en los bancos de sangre, puesto que se trata de una tcnica ms sencilla,
requiere menor cantidad de suero y no hace falta calentarlo. El VDRL es la prueba de eleccin
para el diagnstico de la neurosfilis en muestras de LCR.
MATERIALES
- Suero anticuerpos positivos

- Antigeno comercial
- Placa floculacin o portaobjetos
- Pipeta para mezclar
PROCEDIMIENTOS
El VDRL es una prueba no treponmica normalizada en la cual el suero, previamente inactivado a

56 C, se enfrenta en un portaobjetos con un antgeno de cardiolipina-colesterol-lecitina para
observar su capacidad de floculacin. Para su realizacin, el suero del paciente es mezclado con
el antgeno en un soporte circular de dimetro estndar. Si existen anticuerpos se combinan
formando una floculacin que es leda microscpicamente (100 aumentos). El VDRL necesita de
un microscopio de 100 aumentos para su lectura y deber realizarse meticulosamente tanto la
preparacin del antgeno como la lectura de la reaccin..
57
RESULTADOS
Observaremos la floculacin en partculas que harn presentes luego de agitar o mover la

mezcla del suero problema y el antgeno comercial siendo una prueba positiva, mientras que la
no formacin de partculas floculadas indicaran una prueba negativa. Todas las pruebas no
treponmicas pueden presentar fenmenos de prozona. Tanto el RPR como el VDRL son buenos
marcadores de la infeccin en su fase aguda y tiles en el control de la respuesta al tratamiento
en el paciente con inmunidad intacta si los ttulos son mayores de 1:4 hay que pensar en una
infeccin activa persistente o en una reinfeccin; si son menores de 1:8 hay que pensar en un
falso positivo. Otro problema que podemos encontrar es el fenmeno de prozona. Consiste en
un resultado negativo o positivo dbil que se observa hasta en un 2% de los infectados
58
ACTIVIDAD N 9: ESTUDIO VIRUS. METODOS DE DIAGNSTICO DIRECTO:

CULTIVO DE CLULAS. EFECTO CITOPTICO. MTODOS DE DIAGNSTICO
INDIRECTO SEROLGICO: ELISA Y WESTERN BLOT PARA VIH
OBJETIVO
El Alumno de Enfermera conocer los efectos de la infeccin viral en la clula husped, y su

utilidad en el diagnstico de las infecciones virales.
GENERALIDADES
El efecto citoptico son las alteraciones morfolgicas, inclusiones citoplasmticas, lisis

(generalizadas, focales) y/o fusiones que sufre la clula por la infeccin viral.,
Los cuerpos de inclusin son cuerpos anormales intracelulares. Es el efecto histopatolgico

asociado a la infeccin viral de algunas enfermedades humanas y de animales.
- Estas estructuras pueden encontrarse en el ncleo o en el citoplasma y su localizacin y sus

caractersticas tintoriales son generalmente especficas para una enfermedad viral.
- Acerca de la naturaleza de estos cuerpos de inclusin, se consideran en algunos casos como
conglomerados de virus infecciosos asociados a productos de reaccin de la clula
infectada.
- Cuerpos de inclusin pueden observarse en muestras tomadas directamente del paciente o
en cultivos de clulas infectadas.
CUERPOS DE INCLUSION VIRAL
VIRUS NOMBRE LOCALIZ. CARACT. TINTORIAL
Viruela Guarniere citoplasma acidfila-eosinfila

(rosado)
Rabia Negri citoplasma acidfila
Fiebre amarilla Margarino Torres ncleo acidfila
Herpes simplex Lipschutz ncleo acidfila
Adenovirus ncleo basfila (azulado)
Citomegalovirus Ojos de Lechuza ncleo basfila
Sarampin ncleo y acidfila
citoplasma
59
Virus de la rabia: Corpusculos de Negri
HERPES: Clulas gigantes multinucleadas
Citomegalovirus: ojos de lechuza
60
OBJETIVO
El Alumno de Enfermera conocer las Pruebas para el diagnstico de la infeccin por el Virus de
la Inmunodeficiencia Humana, su utilidad y la Interpretacin de los resultados obtenidos.
GENERALIDADES
No existe ninguna manifestacin clnica que sea caracterstica de la infeccin VIH o del SIDA y,
aunque la presencia de alguna de ellas pueda sugerir en un contexto determinado la presencia
de la infeccin, no es posible establecer un diagnstico clnico de la enfermedad por lo que ste
solo se puede establecer de un modo definitivo por tcnicas de laboratorio. Por medio de ellas
es posible detectar al propio virus o algunos de sus componentes, como protenas y cidos
nucleicos (mtodos directos, ya sea mediante cultivo vrico, deteccin de antgeno viral o la
amplificacin de una parte del material gentico del virus, por ejemplo por PCR (reaccin en
cadena de la polimerasa), bDNA (ADN ramificado), etc.). Sin embargo la prctica habitual es
detectar los anticuerpos especficos que el organismo produce como respuesta a la presencia del
virus (mtodos indirectos) y la mayora de las tcnicas empleadas se basan en el
enzimoinmunoanlisis (mtodo ELISA o EIA.) para las pruebas masivas de cribado o en los
inmunoblots para las pruebas de confirmacin. Por lo tanto en la mayora de los casos la
seropositividad frente al VIH se detecta a partir de una extraccin sangunea del sujeto con la
que se realiza la determinacin de anticuerpos anti-VIH por alguna tcnica serolgica
I. MTODOS INDIRECTOS
Los mtodos indirectos se dividen en (a) pruebas de cribado o screening, diseadas con un
mximo de sensibilidad para detectar todas las muestras positivas, y (b) pruebas
confirmatorias, caracterizadas por su alta especificidad y que permiten asegurar la
positividad de una muestra previamente reactiva con un test de screening.
Ambos ensayos realizados de forma secuencial obtienen resultados excelentes en cuanto a

exactitud y reproducibilidad y tienen ms del 99% y 95% de sensibilidad y especificidad
respectivamente.
a. Pruebas de cribado o screening
Existen diferentes mtodos para la realizacin de las pruebas de cribado para la

deteccin de anticuerpos especficos frente al VIH. Entre ellos las tcnicas ELISA
(enzyme-linked immunoabsorbent assay), pruebas de aglutinacin y anlisis dot-blot
son las ms utilizadas.
Las tcnicas ELISA que tambin se denomina anlisis inmunoenzimtico (abreviado,

EIA) son las ms empleadas debido a su metodologa relativamente simple, alta
sensibilidad, nivel de automatizacin y diseo para realizar un gran nmero de
pruebas de forma simultnea.
61
b. Pruebas de Confirmacin
Las muestras positivas en la prueba de cribado requieren ser confirmadas con una
prueba muy especfica tales como el Western blot (WB), la inmunofluorescencia
indirecta (IFI) o la radioinmunoprecipitacin (RIPA).
El WB es el mtodo recomendado y permite discriminar por la aparicin de bandas

reactivas, frente a qu antgenos vricos se dirigen los anticuerpos presentes en la
muestra.
La interpretacin del WB se puede realizar segn diversos criterios, los posibles

resultados pueden ser:
- Positiva: Se observan bandas reactivas que evidencian anticuerpos contra el VIH

(2 anticuerpos de membrana externa (gp 120 y 41) y uno del ncleo (p17 o p24).
- Negativo: No se observan bandas reactivas que evidencien anticuerpos contra el

virus.
- Indeterminado: Aparecen algunas bandas reactivas que evidencian anticuerpos

contra el virus, pero no los suficientes para dar como positivo el diagnstico.
La reactividad indeterminada del WB puede ocurrir en determinadas situaciones

relacionadas con la infeccin por el VIH como:
o En casos de seroconversin reciente en las que an no han aparecido todas

las bandas
o Recin nacidos de madres seropositivas, estn infectados o no, y
o En pacientes con enfermedad avanzada y grave deterioro inmunolgico.
o Es posible ante una infeccin por el VIH-2 o por un subtipo del VIH-1
distinto al habitual.
Un resultado indeterminado en WB obliga a un control del paciente y a la

repeticin de la determinacin a los 3-6 meses siendo recomendable utilizar
mtodos de diagnstico directo.
II. MTODOS DIRECTOS
Estn basados en la deteccin del virus o de alguno de sus componentes. Incluye el cultivo
vral, la determinacin del antgeno p24 en el plasma o en el suero y la demostracin de
genoma vrico mediante tcnicas moleculares.
a. Cultivo celular
Es la tcnica ms especfica para el diagnstico de la infeccin, su uso se reserva para

estudios bsicos de variabilidad gentica, epidemiologa molecular, patognesis vrica
o resistencia a frmacos. El mtodo consiste en un cocultivo de clulas
62
mononucleares de sangre perifrica del paciente a estudio junto a otras del mismo
tipo procedentes de donantes sanos. El cultivo se considera positivo por la
demostracin del efecto citoptico o la deteccin de productos vricos como el
antgeno p24 o la transcriptasa inversa.
b. Antigenemia de p24
El antgeno p24 de la cpside del VIH (core), detectado en suero o plasma mediante
una reaccin de ELISA, es un marcador precoz de infeccin aguda por VIH.
c. Tcnicas moleculares
Las tcnicas moleculares se basan en el reconocimiento de fragmentos del genoma

del virus.
Aunque el diagnstico de la infeccin por el VIH debe establecerse mediante la

deteccin de anticuerpos especficos del virus, puede ser conveniente el uso de
tcnicas moleculares.
Estas situaciones especiales se producen en casos de hipogammaglobulinemia,

infeccin perinatal, infeccin silente o infeccin por variantes del virus que pueden
escapar a la deteccin con las tcnicas habituales serolgicas, como son el VIH-2 y el
subtipo O del VIH-1.
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es el mtodo de eleccin para el

diagnstico molecular de la infeccin por el VIH. Puede aplicarse directamente a la
deteccin de ADN provrico a partir de clulas del paciente, o bien mediante una
reaccin de retrotranscripcin previa (RT-PCR), realizada habitualmente en plasma,
cuando la diana que se pretende localizar son las partculas de ARN vrico. Su
utilizacin es imprescindible para el diagnstico de VIH en los nios recin nacidos de
madres seropositivas y en los pacientes con patrones serolgicos atpicos.
Existen diversas tcnicas con rendimiento similares pero fundamentos diversos, de

modo que encontramos tcnicas de amplificacin de secuencia, como la
anteriormente referida PCR y el NASBA, y tcnicas de amplificacin de seal (bDNA).
MATERIALES
- Placa de ELISA indirecto que muestra pocillos con controles positvos, controles negativos y
muestra de pacientes.
- Tiras escaneadas de Western Blot de control pisitivo fuerte, control positivo dbil, control
negativo, control indeterminado y muestra de pacientes.
63
PROCEDIMIENTO
- En las placas de ELISA indirecto observar el cambio de color de las muestras de los pacientes
y compararla con los controles.
- Comparar las tiras de Western Blot para VIH y comparar el cambio de color de las tiras de los
pacientes con las tiras de los controles (indeterminado, control negativo, control positivo
dbil y control positivo fuerte).
64
ACTIVIDAD N 10: SEGUNDO EXAMEN PARCIAL
65
ACTIVIDAD N 11: SEMINARIO N 2: INFECCIONES INTRAHOSPITALARIAS
1. Definicin de IIH Factores condicionantes de las IIH
2. Agentes causales de IIH: Urinarias, respiratorias, sangre etc
3. Comit de IIH: objetivo, conformacin y actividades
4. IIH en el Per- IIH Accidentes laborales del personal de salud
BIBLIOGRAFIA
1. http://foroisss2010.sld.cu/index.php/Foro/2010/paper/viewFile/43/44
2. http://www.madrimasd.org/blogs/salud_publica/2008/03/11/86374
3. ftp://ftp.minsa.gob.pe/intranet/infovigia/documentos/intrahospitalarias/sveiih.pdf
4. http://instituciones.sld.cu/seccioneh/03-comite-de-control-y-prevencion-de-infecciones-
asociadas-a-la-asisitencia-sanitaria/
5. http://www.dge.gob.pe/portal/docs/tools/protocolo_iih.pdf
66
ACTIVIDAD N 12: ESTUDIO DE HONGOS OPORTUNISTAS. ESTUDIO

MALASSEZIA. DERMATOFITOS. HONGOS SISTMICOS.
TERCER CONTROL DE LECTURA: INFORME MUNDIAL SOBRE LA

TUBERCULOSIS 2012
Vilma Bejar Castillo
INTRODUCCIN
Los hongos ambientales son microorganismos ampliamente distribuidos en la naturaleza, se

encuentran en el aire, agua, tierra y sobre cualquier substrato orgnico en descomposicin.
Algunos hongos por el permanente contacto con el hombre pueden actuar como alergnicos
ocasionando cierto tipo de sensibilidad o pueden ser responsables de Micosis Oportunistas
Clsicas (Aspergilosis), o emergentes (Fusariosis, Peniciliosis, etc). Generalmente las infecciones
micticas son secundarias a otras alteraciones patolgicas como tumores linforetculares,
diabetes; en aquellas que reciben terapia inmunosupresora antibiticos de amplios espectro.
Los hongos ambientales ms comunes son: Aspergillus, Penicillium, Cephalosporium, Fusarium,

Rhizopus, Rhodotorula.
MATERIALES
- Cultivo de Aspergillus, Penicillium, Rhizopus y Rhodothorula en Agar Papa Dextrosa

Agar Sabouraud-glucosado (ASG).
- Microcultivo, de los hongos en estudio coloreados con Azul de lactofenol.
- Ver Atlas
PROCEDIMIENTO
- Estudie las caractersticas macroscpicas de los cultivos, describiendo: aspecto de la colonia,

Color, produccin de pigmento y la consistencia de la colonia. Anotar sus observaciones en
el protocolo correspondiente.
- Observe con lentes de menor y mediano aumento LOS MICROCULTIVOS.
RESULTADOS
Las caractersticas macroscpicas y microscpicas de los hongos van a identificar a cada especie.
Completar el Protocolo correspondiente
67
DESCRIPCIN DE HONGOS AMBIENTALES
ASPERGILLUS.- Desarrolla colonias al inicio de

color blanco, luego vara de acuerdo a la
especie, desde el amarillo, amarillo naranja
verde, marrn claro o negro. Presentan
Conidiforos no tabicados, que se ensanchan
en el extremo distal dando lugar a la cabeza
aspergillar que origina los esterigmas, de
donde nacen las conidias en cadena
PENICILLIUM.- Desarrolla colonias de color

azul verdosas. Microscpicamente presenta
hifas
tabicadas con conidiforos produciendo

fialides aisladas o en grupos, dando la
apariencia de un pincel o cepillo; cada
ramificacin (esterigma o fialaide) da lugar a
la formacin de conidias dispuestas en
cadena
RHODOTORULA.- Desarrolla colonias de

aspecto cremoso (caractersticas de los
hongos levaduriformes) de color rosado y de
aspecto cremoso.
Microscpicamente se observan clulas

ovoides o redondeadas con o sin yema (son
Gram positivos)
RHIZOPUS.- Colonias de aspecto algodonoso

de color blanquecino, luego se tornan de
color gris con puntos negros (Esporangios).
Microscpicamente se observan rizoides,
esporangiforos que originan en su extremo
distal esporangios, que contienen
endoesporas
68
PROTOCOLO PRCTICA
CARACTERISTICAS DE LA COLONIA
HONGOS
MICROSCOPIA
AMBIENTALES
DESARROLLO ASPECTO PIGMENTO
Aspergillus
Penicillium
Rhizopus
Rhodothorula
HONGOS PRODUCTORES DE DERMATOMICOSIS: MALASSEZIA,

DERMATOFITOS.
INTRODUCCIN
Las dermatomicosis son afecciones cosmopolitas que predominan en zonas tropicales y

subtropicales (climas clidos y hmedos). Constituyen una de las enfermedades ms
frecuentes producidas por hongos.
Los Dermatofitos son hongos filamentosos patgenos, que estn agrupados en los gneros:
Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton; estos microorganismos tienen tropismo por el
tegumento cutneo, en donde proliferan a expensas de la queratina, cistina y metionina.
69
Por su hbitat los dermatofitos se pueden tambin categorizar como: Geoflicos, Zooflicos y
Antropoflicos. Especies de dermatofitos que se encuentran en el suelo o infectando animales
pueden transmitir la infeccin al hombre (zoonosis).
DIAGNSTICO ETIOLGICO DE LAS DERMATOMICOSIS
CONDICIONES PREVIAS A LA TOMA DE MUESTRA
- Tomar la muestra antes de iniciar la teraputica antimictica, en caso contrario suspender

el tratamiento de 5 a 7 das antes.
- Si existe infeccin bacteriana asociada, someter al paciente a un tratamiento con
antibitico.
- La recoleccin de material patolgico se hace en condiciones de asepsia, en recipientes
estriles y en cantidad suficiente.
- Desinfectar las lesiones con alcohol al 70%, mediante toques (no frotar) y esperar a que
seque.
- Si se trata de lesiones de uas, someterlas al ablandamiento, colocando trozos de algodn
sobre la ua enferma, durante 20 a 30 min.
- La recoleccin del material patolgico se realiza en condiciones de asepsia, en recipientes
estriles y en cantidad suficiente.
MATERIALES
- Cultivos en Agar sabourand-glucosado de: T. rubrum, M. canis y E. floccosum.

- Microcultivos fijados con azul de lactofenol.
- Material bsico de laboratorio.
- VER ATLAS
PROCEDIMIENTO
a. EXAMEN DIRECTO de muestras de escamas o pelos infectados con hongos:
- Si se trata de hongos dermatofitos se observar la presencia de hifas tabicadas,

refringentes.
- En muestras de pelos se puede observar infeccin: Tipo exothrix cuando los
elementos del hongo rodean al pelo formando una cubierta externa, sin
comprometer el filamento de pelo; y tipo exo-endothrix cuando los elementos del
hongo se localizan en el exterior e interior del pelo.
b. CULTIVO: Estudiar las caractersticas de las colonias tomando en cuenta:
- CARACTERSTICAS MACROSCPICAS
o Velocidad de desarrollo.- Dependiendo de la especie desarrollan en de 5 a 20
das.
o Aspecto de las colonias.- Pueden ser pulverulentas, algodonosas, cerebriformes,
irradiadas.
70
o Color de la colonia.- Dependiendo de la especie presentan colonias blancas,

amarillo naranja, amarillo azufradas, cremas, violeta, etc.
o Pigmento.- En el medio de cultivo difunden pigmentos de color rojo prpura,
amarillo canela, pardo.
- CARACTERSTICAS MICROSCPICAS
o Observar los microcultivos con lentes de menor y mediano aumento. las

estructuras de los hongos
PROTOCOLO DE LA PRCTICA N 15
CARACTERSTICAS DE LA COLONIA
HONGOS
MICROSCOPA
DERMATOFITOS T. DESARROLLO ASPECTO PIGMENTO
Trichophyton
Rubrum
Microsporum
Canis
Epidermophyton
Floccosum
71
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DE HONGOS LEVADURIFORMES Y

DIMRFICOS.
VILMA BJAR CASTILLO
HONGOS LEVADURIFORMES: CANDIDA Y CRYPTOCOCCUS
INTRODUCCIN
Las especies de Candida, son hongos levaduriformes que se encuentran al estado saprfito en
cavidades naturales (tubo digestivo, pliegues cutneos, piel) suelo, agua y plantas.
C. albicans es la especie patgena ms frecuente, produce infecciones agudas y crnicas en la

piel o mucosas, onicomicosis, vulvovaginitis, etc.,
Es responsable de micosis sistmicas con localizacin preferencial en riones, pulmones,

corazn, cerebro e intestinos, puede presentarse secundariamente a enfermedades
consecutivas al uso desmesurado de antibiticos. En huspedes inmunosuprimidos, produce
infecciones que van desde un compromiso superficial hasta sistmico.
Cryptococcus. Es un gnero heterogneo constituido por hongos levaduriformes encapsulados.

Su hbitat natural es el suelo, tierra con pH alcalino y rico en nitrgeno, excremento de aves,
porcinos, etc. Cryptococcus neoformans es la especie patgena ms importante, causante de
cryptococcosis, infeccin aguda, subaguda o crnica que afecta principalmente los tejidos del
SNC, su puerta de entrada es pulmonar, rara vez cutnea. Este hongo puede afectar el aparato
respiratorio, piel, mucosas, ganglios, huesos, etc. Las otras especies del gnero Cryptococcus
se han considerado normalmente no patgenas.
MATERIALES
- Candida albicans en Agar Saboraud Glocusado y microcultivo en Agar Almidn Arroz

- Cryptococcus neoformans en ASG, en lmina con tinta china y frotis de cerebro coloreado
con Leishman
- VER ATLAS
PROCEDIMIENTO
- Observar las caractersticas macroscpicas y microscpicas de Candida albicans y

Cryptococcus neoformans
72
PROTOCOLO DE PRCTICA
ESPECIE ASG BHI Agar Urea Gram AAA Tinta china
Candida
albicans
Cryptococcus
neoformans
ESTUDIO MORFOLGICO Y CULTIVO DE HONGOS DIMRFICOS
INTRODUCCION
Los hongos dimrficos son microorganismos que presentan dos tipos de morfologa, la forma
micelial y la levaduriforme; las 3 especies consideradas patgenos primarios son: Sporothrix
schenckii (Esporotricosis), Histoplasma capsulatum (Histoplasmosis) y Paracoccidiodes
brasiliensis (Paracoccidiodomicosis)
H. capsulatum, en su fase micelial se encuentra principalmte sobre compuestos nitrogenados,

tales como excretas de aves (gallina, lechuza), excremento de murcilagos, etc. Ingresa al
organismo por va area, produciendo una infeccin pulmonar primaria, pudiendo presentar
una forma benigna, regresionando el proceso espontneamente.
73
P. brasiliensis, en su fase micelial, se encuentra en el suelo, sobre fragmentos vegetales,

espinas, etc. y en su fase de levadura en tejidos infectados, produciendo infeccin crnica,
granulomatosa de la piel, mucosa, ganglios y vsceras. Es ms frecuente entre los trabajadores
manuales rurales.
S. schenckii, se encuentra en la naturaleza como saprofito de plantas, maderas y en el suelo.

Produce una infeccin crnica que se disemina a travs de los ganglios linfticos, produciendo
ndulos subcutneos indoloros que eventualmente supuran y se ulceran.
MATERIALES
- Cultivos en agar Sabouraud Glucosado y agar enriquecido (BHI) de P. brasiliensis, H.

capsulatum y S. shenckii.
- Microcultivos coloreados con azul de lactofenol de: P. brasiliensis, H. capsulatum y S.
shenckii.
- Material bsico de laboratorio.
- VER ATLAS
PROCEDIMIENTO
- CULTIVO: Observar las caractersticas macroscpicas y microscpicas Paracoccidioides,

Histoplasma y Sporothrix. Describir la forma de crecimiento micelial o filamentosa a
temperatura ambiente y la forma levaduriforme a 370C. Las colonias son de crecimiento
lento. Los cultivos son positivos entre los 15-35 das.
RESULTADO
1. Paracocciodioides brasiliensis
En medio agar Sabouraud glucosado desarrolla colonias de micelio areo de color blanco
compacto, de crecimiento lento; microscpicamente se observan filamentos hialinos,
tabicados ramificados con microconidias esfricas o piriformes.
En medio agar infusin cerebro corazn (BHI), se observan colonias cerebriformes,

hmedas de color beige claro. Microscpicamente se observan clulas esfricas como se
encuentran en los tejidos infectados.
2. Histoplasma capsulatum
En agar Sabouraud glucosado, desarrolla colonias de color blanco de aspecto velloso.
Microscpicamente se observan hifas tabicadas y ramificadas con escasa produccin de

micronidias, gran cantidad de macronidias tuberculadas, redondeadas, de pared gruesa
con excrecencias en su superficie (clamidospora tuberculada).
74
En medio enriquecido (BHI) desarrollan colonias pequeas de aspecto membranoso,

rugoso, color marrn claro. Microscpicamente, se observan, clulas levaduriformes,
ovaladas a veces gemantes, gram positivas.
3. Sporothrix schenckii
En agar Sabouraud a 260C desarrolla colonias en un inicio blanquecinas, presentando

posteriormente un aspecto hmedo, rugoso y membranoso, de un color que puede variar
de crema, marrn a negro. Al microscopio se observa hifas tabicadas, portadoras de cortos
conidiforos en cuyo extremo se encuentran las conidias agrupadas dando el aspecto de
una margarita.
En medio enriquecido (BHI), desarrolla colonias cremosas de aspecto bacteriano se

observan clulas en gemacin ovales o en forma de puros de cigarro. Gram positivos.
CUESTIONARIO
1. Qu caractersticas importantes presentan los hongos dimrficos?
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
2. En relacin a la morfologa de Paracoccidioides brasiliensis con qu otras especies de

hongos puede confundirse en el tejido infectado?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
75
PROTOCOLO
Caractersticas macroscpicas de
Medio de las colonias Caractersticas
Microorganismos
cultivo y T0 microscpicas
Aspecto Pigmento Tiempo
Paracoccidioides
brasiliensis
Histoplasma
capsulatum
Sporothirx
schenckii
76
ACTIVIDAD N 13: MTODOS DE DIAGNSTICO COPROPARASITOLOGICOS:

ENTEROPARSITOS. PROTOZOARIOS Y HELMINTOS
OBJETIVO
El alumno reconocer e identificara los protozoarios y helmintos ms frecuente causales
de infeccin
Entamoeba histolytica/ E. dispar
OBJETIVOS
Que el alumno:
- Reconozca los diferentes estadios evolutivos.
- Conozca el ciclo evolutivo, los mecanismos de infeccin y las medidas profilcticas
para evitar la infeccin.
INTRODUCCION:
Protozoo causante de amebiosis, anaerobio facultativo. El hombre es el nico hospedero. Se
localiza en la luz del intestino grueso, puede invadir la mucosa intestinal produciendo
ulceraciones y por via sanguinea puede llegar al higado, pulmones, cerebro, etc. (localizacin
extraintestinal). Es la tercera causa de muerte por enfermedad parasitaria. Este parsito ha sido
redescrito como dos especies distintas: la patgena E.histolytica y la no patgena E. dispar,
morfolgicamente idnticas pero genticamente diferentes.
Morfologa
Presenta los estadios evolutivos de: Trofozoito, Prequiste y Quiste.
- TROFOZOITO: Mide de 10 60 m. Presenta citoplasma diferenciado: ectoplasma claro
que tiene la funcin de locomocin y un endoplasma granuloso, el ncleo presenta en
la pared nuclear cromatina distribuda en forma uniforme, con un cariosoma central y
puntiforme.
- PREQUISTE: Mide entre 5 - 20m. Redondo, de pared gruesa y en su citoplasma
presenta material de reserva, vacuolas de glicgeno y barras cromatoidales de extremos
redondeados. Puede tener 1 2 ncleos.
- QUISTE: Mide 12 15 m. El quiste maduro presenta 4 ncleos y se elimina en las
deposiciones formadas.
77
Ciclo de vida
Diagnostico
El diagnostico de certeza se realiza por la observacin de los trofozoitos mediante el
examen directo de las heces recientemente emitidas o en preparaciones coloreadas que
han sido conservadas apropiadamente.
MATERIAL DE LABORATORIO
- Lmina coloreada de frotis de cultivo con trofozoitos (Col. Gomorri Tricrome).
- Preparaciones in vivo de cultivo de trofozotos.
78
Giardia lamblia
OBJETIVOS:
Que el alumno:
- Reconozca los diferentes Estadios Evolutivos
- Conozca el ciclo evolutivo, los mecanismos de infeccin y las medidas profilcticas para
evitar la infeccin.
INTRODUCCION:
Protozoario flagelado, que se localiza en el intestino delgado que puede expresarse clnicamente
como severos episodios de diarrea aguda o evolucionar crnicamente con malabsorcin y an
no dar sntomas. Es la parasitosis intestinal por protozoarios ms frecuente en nios en el
mundo
Morfologa
Presenta dos estadios evolutivos:
- TROFOZOTO: De forma piriforme, simetra bilateral y mide
10-12 m de largo por 5-7 m de ancho. Tiene cuatro pares
de flagelos y una estructura ventral denominada disco
suctorio.
79
- Quiste: Es ovoide, mide 8-12 m de largo y 7-10 m de ancho y tiene una pared qustica
externa gruesa. Internamente, se observa dos o cuatro ncleos, cuerpos parabasales,
restos flagelares y axostilo.
Ciclo de vida
Diagnstico
- Examen directo de heces es fuertemente positiva cuando la carga parasitaria es alta.
- En casos leves utilizar tcnicas de concentracin
- Examen de la cuerda encapsulada (ENTEROTEST)
- Anticuerpos anti- giardia de tipo IgM o IgG
MATERIAL DE LABORATORIO
- Lmina de frotis de heces con quistes (Col. Hematoxilina frrica).
- Muestra de heces conservadas en formol-sal con quistes (Col. lugol).
PROCEDIMIENTO
1. Observe la lmina de frotis de heces con quistes coloreadas y reconozca a los quistes por
presentar forma ovoide, medir entre 8-12 m de largo, presentar pared quistica externa
gruesa e internamente, se observa dos o cuatro ncleos, cuerpos parabasales, restos
flagelares y axostilo.
2. En la lmina de quistes coloreados con lugol observe la forma, tamao, cuerpos parabasales
y axostilo
80
Blastocystis hominis
OBJETIVOS
Que el alumno:
evitar la infeccin
INTRODUCCION
Es un parsito protozoario anaerbico frecuentemente encontrado en el tracto gastrointestinal
humano. Inicialmente descubierto en 1911, el microorganismo fue considerado por muchos
aos una levadura incua. En 1970 los estudios llevaron a clasificar a B. hominis como un
protozoario. Es el que mas frecuentemente se detecta en las muestras de heces, pero hay
bastante controversia acerca de si es un comensal o un verdadero patgeno. Otros aspectos que
necesitan ser aclarados son: sus estados evolutivos, el modo de transmisin y ciclo evolutivo.
Morfologa:
81
Se han descrito varias formas. Mide entre 5-40 m. Se han reportado tres formas del
estado de trofozoto: vacuolar, granular y ameboide, siendo la vacuolar y granular las ms
frecuentes y la vacuolar puede transformarse en qustica.
- Forma vacuolar: Tambin denominada la forma de cuerpo central. Mide 8-10 m de
dimetro. Se observa como una clula esfrica, uni o multinucleada, con una gran
vacuola central que ocupa 50-90% de la clula. La vacuola se tie con lugol de color
naranja tenue.
- Forma granular: Morfolgicamente similar a la forma vacuolar,
excepto que la vacuola central contiene grnulos. Las formas
granulares son ligeramente ms grandes que las formas vacuolares.
- Forma ameboide: Son de forma irregular, con

frecuencia mide de 2 a 8 m en ocasiones pueden
medir hasta ms de 100 m, presentan 1 a 2 ncleos y
a menudo tienen seudpodos extendidos.
- Quiste: Fue encontrado por primera vez en 1988 en las heces de

una persona con SIDA. Muestran gran variacin en su morfologa,
pero la mayora son redondos u ovales. El tamao de los quistes
sin pared miden entre 3 a 5 m, mientras que los quistes con
pared de 8 a 10 m. El citoplasma contiene pequeas vacuolas,
en el que se observan generalmente dos ncleos.
Ciclo de vida
.
82
Diagnstico
Observacion microscpica de las heces por el mtodo directo y coloracin
MATERIAL:
- Lmina coloreada de frotis de heces con trofozoitos (Col. Hematoxilina frrica).
- Preparaciones frescas de heces con trofozoitos (Col. lugol).
PROCEDIMIENTO
- Observar la lamina de frotis de heces con trofozoitos con objetivo de 100X y observe
las formas de los trofozoitos.
- Observar la lamina de heces frescas con trofozoitos con objetivo de 10 y 40X y
observe las formas de los trofozoitos.
83
RESULTADOS: HAGA ESQUEMA DE SUS OBSERVACIONES
PROTOZOARIOS CILIADOS: Balantidium coli. COCCIDIOS:

Cryptosporidium sp,
Balantidium coli
OBJETIVOS
Que el alumno:
evitar la infeccin
INTRODUCCION
Es el protozoario ciliado que produce la zoonosis denominada Balantidiosis. La infeccin
humana es rara, se localiza en el intestino grueso. Puede producir lesiones intestinales y
sintomatologa similar a la amebiasis intestinal. Los cerdos son los reservorios ms comunes.
84
Morfologa
Presenta dos estadios evolutivos: trofozoito y quiste.
Trofozoto: De forma ovalada, mide de 30 a 200 m x
30 a 70 m y se caracteriza por presentar cilios
dispuestos en hileras, ncleo grande o macroncleo. En
el extremo anterior presenta el citostoma por donde se
alimenta y en el extremo posterior se encuentra el
citopigio. El citoplasma contiene vacuolas digestivas y
dos ncleos: el macroncleo reniforme y el microncleo
de forma esfrica, no siempre es visible.
Quiste: Es esfrico, mide de 40 a 60 m de dimetro y presenta
pared qustica gruesa. Se pueden observar los cilios, macroncleo y
vacuolas.
Ciclo de vida
Diagnstico
A travs de la identificacin de trofozotos o quistes en heces, siendo el mtodo de
Baermann la tcnica de eleccin.
MATERIALES
- Lmina con corte histolgico de intestino con trofozotos (Col. Hematoxilina eosina).
- Lmina con muestra de heces de cerdo con trofozotos in vivo (Montaje hmedo en suero
fisiolgico).
PROCEDIMIENTO
En la lmina del corte histolgico observe la presencia de los trofozoitos preste atencin al
macroncleo ms teido.
85
En la muestra en fresco de heces de cerdo observar la gran velocidad y el movimiento

rotatorio con que se desplaza.
Cryptosporidium parvum
OBJETIVOS
Que el alumno:
- Reconozca el estadio infectante.
evitar la infeccin
INTRODUCCION
C. parvum es parsito intracelular obligado que infecta las clulas del epitelio intestinal del
hospedero. Produce infeccin en el hombre y los animales conocida como Criptosporidiosis.
Ocasiona cuadros severos de diarrea en personas inmunocompetentes e inmunosuprimidas.
Morfologa
Ooquiste: Mide 4 a 6 m, forma redondeada se encuentra dentro de las
clulas del hospedero, posee una doble pared y una estructura interna
formada por cuatro esporozotos vermiformes y cuerpos residuales que
no son claramente visibles. No todos los ooquistes se colorean
intensamente pudiendo encontrase algunos no coloreados.
86
Ciclo de vida
Diagnstico
Mediante el examen microscpico de heces coloreadas por las tcnicas de Ziehl-Neelsen
modificado o Kinyoun, Safranina, Giemsa, Auramina, Rodamina e Inmunofluorescencia.
MATERIALES
- Lmina con frotis de heces con ooquistes (Col.Kinyoun o Ziehl Neelsen modificado).
PROCEDIMIENTO
Observe en la lmina coloreada los ooquistes de color rojizo.
PROTOCOLO DE RESULTADIOS
87
NEMTODOS: Ascaris lumbricoides. Enterobius vermicularis, Trichuris

trichiura. UNCINARIAS: Ancylostoma duodenalis y Necator americanus.
OBJETIVO
Que el alumno conozca los nematodos intestinales, la forma de infeccin, de transmisin y la
prevencin.
INTRODUCCIN
Son gusanos redondos, presentan aparato digestivo simple. Ascaris lumbricoides es un
nemtodo geohelminto, agente causal de la Ascariosis, se le conoce como lombriz intestinal.
Los adultos se localizan en el lumen del intestino delgado del hombre y miden
aproximadamente de 15 a 40 cms, de color blanco rosado con dimorfismo sexual, los machos
con el extremo posterior incurvado hacia la cara ventral y las hembras con el extremo
posterior cnico. Los huevos presentan capa mamelonada (corticados) que pueden perder por
accin mecnica (decorticados), se pueden observar huevos frtiles, infrtiles y larvados.
Las larvas pueden observarse a nivel pulmonar ya que pasan por el pulmn durante su ciclo
evolutivo realizando el ciclo de Loos.
Morfologa
Es un nematodo cilndrico, de color blanquecino amarillento o rosado. Est recubierto

externamente por una cutcula
El macho, en su estado adulto posee una longitud de 15 a 30 cm, con un dimetro de 2 a 4
mm. El extremo posterior del macho est incurvado ventralmente, y presenta un par de
espculas para dilatar la vulva de la hembra y facilitar la copulacin. Posee un aparato
reproductor sumamente desarrollado, que ocupa casi 2/3 de la cavidad corporal del parsito.
Tiene un testculo filiforme que rodea al intestino, un conducto deferente que desemboca en
la vescula seminal, de la cual nace el conducto eyaculador que termina en la cloaca, donde se
hallan las espculas, en la extremidad posterior del parsito.
La hembra adulta mide de 25 a 35 cm de longitud y tiene un dimetro de 3 a 6 mm. Su
extremo posterior es cnico. Posee un aparato reproductor muy desarrollado que, al igual que
en el macho, ocupa casi la totalidad de su cuerpo..
Los huevos eliminados por la hembra, unos 200 000/da, no embrionados, pueden ser frtiles o
infrtiles.
Huevos frtiles - son ovalados o redondeados, con protuberancias que les dan la apariencia de
ondulaciones, miden alrededor de 45 x 65 m y presentan coloracin parda de origen biliar.
Una pequea proporcin llega a carecer de las protuberancias.
88
Huevos no fecundados - son de mayor tamao, alargados y tienen protuberancias irregulares o

ausentes.
Ciclo de vida
Diagnstico
Observacin microscpica de los huevos caractersticos de Ascaris en las muestras fecales por
el mtodo directo o por concentracin
MATERIAL
- Muestra de museo con adultos de Ascaris lumbricoides
- Lamina con larvas de A. lumbricoides en cortes de pulmn coloreados con hematoxilina
eosina
- Muestra en fresco de huevos de A. lumbricoides coloreados con lugol.
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo las caractersticas de la hembra y macho. la forma,
tamao y color.
- Observe a 10 y luego a 40 x la lmina con el corte de pulmn los cortes longitudinales y/o
transversales de las larvas (Ciclo de Loos).
89
- Observe al microscopio la preparacin en fresco de la muestra, a 10 x ubique los huevos

de Ascaris lumbricoides y a 40 x observe sus caractersticas.
90
Enterobius vermicularis (Oxiurus)
OBJETIVOS
Que el alumno de Enfermera conozca a Enterobius vermicularis, la forma de infeccin, de
transmisin y la prevencin.
INTRODUCCION
Enterobius vermicularis es un nemtode que causa oxiuriosis o enterobiosis, una de las

parasitosis intestinales ms frecuente en todo el mundo. Asimismo Enterobius gregorii
tambien ha sido descrita y reportada como agente causal de esta parasitosis para Europa,
Africa y Asia.
La enterobiosis es una de las infecciones parasitarias ms antiguas que se conocen como lo
demuestra el hallazgo de huevos en coprolitos de diez mil aos de antigedad. Esta parasitosis
es ms comn en grupos familiares, escuelas y asilos, siendo los mas susceptibles en adquirirla
los nios. El hombre es el nico hospedero conocido, aunque otras especies de Oxiuros
parasitan a otros vertebrados. Su principal sntoma es el prurito anal.
Este parsito intestinal presenta un ciclo biolgico particular donde no se requiere de
hospedero intermedio, ni prolongada incubacin exgena para completar su ciclo de vida. Esta
peculiaridad determina la probabilidad de propiciar varios mecanismos de transmisin, lo que
explica su elevada prevalencia mundial. La manera ms frecuente de contaminacin es a
travs de las manos, En forma secundaria el rascado de la regin perianal. Los huevos de E.
vermicularis tambin pueden contaminar alimentos y bebidas o ser inhalados o deglutidos
directamente del ambiente. En recientes estudios se ha sugeridos que la transmisin area de
huevos de E. vermicularis puede tener una gran importancia en el mantenimiento de su ciclo
vital y la persistencia de esta enfermedad.
Morfologa
La hembra adulta tiene un extremo posterior puntiaguda, es 8 a 13 milmetros de largo y 0,5
milmetros de espesor. El macho adulto es considerablemente ms pequeo, la medicin de 2
a 5 milmetros de largo y 0,2 mm de grosor, y tiene un extremo posterior curvada. Los huevos
son translcidos y con una superficie que se adhiere a los objetos del entorno. Los huevos
medir de 50 a 60 micrmetros por 20 a 30 micrmetros, y tienen una cscara gruesa que est
aplanado en un lado. El pequeo tamao y colorlessness de los huevos que sean invisibles para
el ojo desnudo, excepto en grupos apenas visibles de miles de huevos. Los huevos pueden
contener un embrin en desarrollo o una larva oxiuros completamente desarrollado. Las larvas
crecen a 140-150 micrmetros de longitud.
91
Ciclo de vida
Diagnstico
Bsqueda de huevos de la muestra obtenida por el mtodo de Graham.
MATERIALES
- Muestra de museo con adultos de Enterobius vermicularis en formol al 10 %.
- Lmina con huevos de Enterobius vermicularis ( Mtodo de Graham)
- Lminas fijadas con adultos de Enterobius vermicularis (coloreadas con Hematoxilina
eosina)
- Lmina de corte histolgico de apndice cecal
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, color y tamao. Observe al microscopio a 10
x las lminas fijadas del parsito adulto la regin anterior que presenta un par de
expansiones cuticulares, el esfago con bulbo y en la regin posterior la cola, aguzada en
la hembra y ventralmente incurvada en el macho con espcula copulatriz.
- En las lminas procesadas por el Mtodo de Graham, ubique al microscopio a 10 x los
huevos de Enterobius vermicularis y con 40x observe la forma y tamao.
- Observe al microscopio a 10 x y luego a 40x la lmina de corte histolgico de apndice
humano y los cortes transversales de los estadios adultos de Enterobius observandose las
expansiones cuticulares.
92
Trichuris trichiura
OBJETIVO
Que el alumno conozca a T. trichiura, la forma de infeccin, de transmisin y la prevencin.
INTRODUCCION
Es un geohelminto que produce la infeccin parasitaria denominada tricocefalosis o

trichuriosis. Los adultos presentan dimorfismo sexual, presentan dos regiones diferentes, la
anterior delgada en forma de ltigo y la posterior gruesa, en la hembra es recta y en el macho
es incurvada en sentido ventral con la prersencia de una espicula y una vaina retrctil. Se
localizan en el colon, introduciendo la porcin delgada como hilvanando la mucosa. El huevo
presenta dos tapones mucosos en ambos polos. Se encuentran principalmente en regiones
tropicales y subtropicales, donde las caractersticas ambientales como tierra, humedad y
temperatura favorecen la evolucin y diseminacin.
Morfologa
Trichuris trichiura tiene una estrecha extremo esofgico anterior y ms corto y ms grueso ano
posterior. Estos gusanos de color blanco rosceo se enhebran a travs de la mucosa. Se
adhieren al host a travs de su extremo anterior delgado y se alimentan de las secreciones del
tejido en lugar de sangre. Las hembras son ms grandes que los machos, aproximadamente
35-50 mm de largo en comparacin con 30 a 45 mm. Las hembras tienen un extremo posterior
93
rodeos ronda en comparacin con sus homlogos masculinos con un extremo posterior
enrollado. Sus huevos son caractersticos en forma de barril y marrn, y tienen protuberancias
bipolares.
Ciclo de vida
Diagnstico
Bsqueda de huevos caractersticos en los exmenes coproparasitologicos. Cabe sealar que

se puede realizar una rectosigmoidoscopa, en la cual se observa en las paredes del recto que
estn adheridos los adultos
MATERIAL
- Muestra de museo con adultos en formol al 10 %.

- En lminas fijadas adultos de Trichuris coloreados con Carmn de Semichon.
- Muestra en fresco de heces con huevos, en formol al 10%
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, tamao del adulto de Trichuris
94
- Observe al microscopio las lminas las caractersticas de los adultos a 10x

- Observe al microscopio la preparacin en fresco de la muestra de heces, a 10 x ubique los
huevos de Trichuris por su forma ovalada, a 40 x observe los tapones
UNCINARIAS
OBJETIVO
Que el alumno conozca entre los nematodos intestinales a las Uncinarias, la forma de
infeccin, de transmisin y la prevencin.
INTRODUCCIN
Estos dos nemtodes son geohelmintos causantes de la infeccin conocida como Uncinariosis,
o anquilostomiasis.
Los adultos se localizan en el intestino delgado del hombre (primera porcin), alimentndose
de sangre pudiendo causar anemia grave, desnutricin y avitaminosis.
Ancylostoma duodenale es de mayor tamao con el cuerpo curvado en forma de C , la regin
anterior presenta la cpsula bucal con dos pares de dientes puntiagudos, los adultos
presentan dimorfismo sexual, los machos en el extremo posterior presentan bolsa o campana
copulatriz y las hembras con el extremo posterior cnico.
Necator americanus Presenta el cuerpo en forma de S, cpsula bucal con placas cortantes
semilunares.
95
Los huevos de forma ovalada miden 70 por 40 um, presentan membrana externa delgada yen
el interior se observan varios blastmeros y no se pueden diferenciar entre Ancylostoma y
Necator y por eso se les llama huevos de Uncinarias.
Morfologa
Necator americanus y Ancylostoma duodenale son gusanos cilndricos, blanquecinos y miden
entre 0.8 - 1.5 cm. Las hembras son un poco ms grandes que los machos y tienen la abertura
vulvar hacia la mitad posterior del cuerpo; los machos poseen en su extremo posterior un
ensanchamiento que corresponde a la bursa copulatriz (cuyas caractersticas son de utilidad en
estudios taxonmicos). Ambos gneros exhiben grandes cpsulas bucales y glndulas
anteriores que secretan varios productos, entre ellos proteasas.
N. americanus presenta 2 pares de placas cortantes (anterior y dorsal). La cpsula bucal de A.
duodenale est armada con 2 pares de dientes.
Los huevos de las 2 especies son indistinguibles entre s; tienen forma oval, una membrana,
miden 60 x 45 m. Son observan en diferentes fases de blastognesis.
Ciclo de Vida
96
Diagnstico
Observacin microscpica de los huevos caractersticos de Uncinarias en las muestras fecales
por el mtodo directo o por concentracin
MATERIAL
Muestra de museo con adultos de UNCINARIAS
Muestra en fresco de huevos de Uncinarias coloreados con lugol
PROCEDIMIENTO
Observe en las muestras de museo las caractersticas de la hembra y macho: forma, tamao y
color. Observe al microscopio la preparacin en fresco de la muestra, a 10 x ubique los huevos
de Uncinarias y a 40 x observe sus caractersticas.
CSTODES: Taenia solium, CISTICERCOSIS, Taenia saginata
OBJETIVOS:
Que el alumno:
evitar la infeccin.
97
INTRODUCCIN
Los cstodes son gusanos aplanados, hermafroditas, no presentan aparato digestivo,
presentan el cuerp dividido en esclex, cuello y estrbilo con progltidos inmaduros,
maduros y grvidos. Los adultos se localizan en el intestino delgado del hombre (yeyuno) y se
encuentran adheridos por las ventosas o botrios o coronas de ganchos del esclex.
Taenia solium: Conocida como tenia del cerdo. Mide 5 metros, esclex con
4 ventosas y un rostelo con doble corona de ganchos, progltidos grvidos
con 8 a 12 ramificaciones uterinas y pueden ser eliminados en grupos con las
heces.
Cisticercos cellulosae: Es el estadio larvario de T. solium, de forma ovalada,
translucido, mide 0.8 a 1 cm, se localiza en el msculo del cerdo y
accidentalmente en el msculo o sistema nervioso del hombre
(neurocisticercosis).
Taenia saginata: Conocida como tenia de la vaca. Mide 10 metros, escolex con cuatro
ventosas progltidos grvidos con ms de 12 ramificaciones uterinas que trasponen el esfnter
anal con movimiento propio.
Ciclo de vida
98
Diagnstico
Cuando se obtienen los progltidos grvidos, con cuidado y usando guantes colocar entre dos
lminas portaobjetos y observar el numero de ramas uterinas, tamao.
En el examen de heces se observaran los huevos caractersticos de Taenia sp
Se recurre a exmenes serolgicos y cortes histolgicos para el diagnstico de cisticercosis.
MATERIAL
- Muestra de museo con proglotidos grvidos de Taenia solium o T. saginata
- Lamina con proglotidos de Taenia solium o T. saginata coloreados con carmin
- Lamina con escolex de Taenia solium coloreado con carmin
- Muestra de museo con cisticercos de Taenia solium
- Muestra en fresco de huevos de Taenia sp.
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, tamao y posicin alternada de los poros
genitales de los proglotidos grvidos de Taenia solium o T. saginata
- Observe con ayuda del ocular de 10 x o de una lupa, el numero de ramas uterinas de la
lamina con proglotidos de Taenia solium o T. saginata.
- Observe en la muestra de museo del cisticerco, con ayuda del ocular 10x la forma, tamao,
presencia de la mancha blanca y luego a 40 x la lmina con esclex de Taenia solium la
forma, las ventosas y el rostelum y la corona de ganchos.
- Observe al microscopio la preparacin en fresco de la muestra, a 10 x ubique los huevos de
Taenia sp y a 40 x observe el embrioforo radiado y el embrin hexacanto.
RESULTADOS: HAGA ESQUEMAS DE SUS OBSERVACIONES
99
Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Echinococcus granulosus,

QUISTE HIDATIDTICO. TREMTODES: Fasciola hepatica. Paragonimus
sp.
Hymenolepis nana
OBJETIVOS
Que el alumno:
evitar la infeccin.
INTRODUCCION
Conocida como tenia del hombre o tenia enana. Mide de 4 a 10 cm. El hombre es
hospedero definitivo e intermediario a la vez. El hombre parasitado presenta ms de un
ejemplar adulto, llegando a miles y se localizan en el intestino delgado.
Ciclo de vida
100
Diagnstico
Bsqueda de huevos y progltidos en los exmenes coproparasitologicos.
MATERIAL
- Muestra de museo con adultos en formol al 10 %.
- Muestra en fresco de heces con huevos, en formol al 10%
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, tamao del adulto de Hymenolepis nana.
- Observe al microscopio la preparacin en fresco de la muestra de heces, a 10 x ubique los
huevos translcidos de Hymenolepis nana por su forma ovalada, a 40 x observe la
membrana interna y externa y la presencia de filamentos polares en el espacio
comprendido entre las dos membrana, dentro de la membrana interna se observa el
embrin hexacanto.
PROTOCOLO DE RESULTADO
Echinococcus granulosus, QUISTE HIDATIDTICO

OBJETIVOS
Que el alumno:
evitar la infeccin.
INTRODUCCION
El quiste hidatdico es el estadio larvario, del cstodo Echinococcus granulosus donde la capa
adventicia la forma el hospedero intermediario. De forma esfrica se localiza en Hgado,
pulmn y en menor porcentaje en rin, cerebro, hueso, etc. Es una zoonosis parasitaria que
se presenta en los departamentos ganaderos entre los que destacan Junn, Cajamarca,
Arequipa, Cerro de Pasco, Puno. El perro es el hospedero definitivo, el ganado vacuno, ovino,
101
caprino, porcino son los hospederos intermediarios habituales y el hombre es hospedero

intermediario accidental.
Morfologa
Mide de 3-5 mm de longitud. Tiene un escolex pequeo con cuatro ventosas y una doble
corona de gancho. Su cuello es delgado y corto. La estrbila posee tres progltides, la ltima
de las cuales es grvida y mide 2 mm, es decir, la mitad de largo del parsito y contiene de
500-800 huevos.
Estos huevos se expulsarn con la materia fecal del perro, contaminando el suelo, los pastos,
las verduras y el agua de bebida, de donde son adquiridos por los huspedes intemediarios:
bovinos, ovinos, porcinos y, accidentalmente, el hombre y otros mamferos de menor
importancia epidemiolgica
Los huevos (30 - 40 m), son la forma infectante para los hospederos intermediarios
(principalmente ungulados - ovejas, cerdos, ganado vacuno, cabras, caballos) y otros que
pueden tener un papel en el ciclo biolgico (marsupiales, roedores, carnvoros).
El humano es hospedero accidental.
Ciclo de vida
Diagnstico
Analizando el lquido de la vmica hidatdica para observar ganchitos y restos de arenilla
hidatdica. Utilizando tomografa, ecografa y radiografas, el antecedente epidemiolgico
de haber vivido en zona endmica o ganadera. Por mtodos inmunoserolgicos como la
inmunoelectroforesis, con la formacin del arco 5, Doble Difusin (DD5) y por Western
blot.
102
MATERIAL
- Muestra de museo con quiste hidatdico en hgado o pulmn
- Lamina con adultos de Echinococcus granulosus (obtenido de perro infectado) coloreados
con carmn
- Lamina con arenilla hidatdica coloreado con carmin
- Corte histologico de Quiste hidatidico coloreado con H-E.
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, tamao del quiste hidatdico
- Observe a 10 y luego a 40 x la lmina con el adulto de Echinococcus granulosus, las
ventosas y el rostelo del escolex y los progltidos inmaduro, maduro y grvido.
- Observe a 10 y luego a 40 x la lamina con la arenilla hidatdica
- Observe a 10 y luego a 40 x la lamina con el corte histolgico del quiste hidatdico, observe
y diferencie la capa germinativa, cutcula y adventicia.
103
Tremtodes: FASCIOLA HEPATICA. PARAGONIMUS SP.
OBJETIVOS
Que el alumno de Enfermera conozca las tremtodes, la forma de infeccin, de transmisin y

la prevencin.
INTRODUCCION
Los Tremtodes son gusanos aplanados, presentan aparato digestivo, son hermafroditas,
aparato reproductor ramificado, cuerpo en forma de hoja con dos ventosas, oral y ventral o
acetbulo, los adultos se localizan en el hgado (Fasciola hepatica) o pulmn (Paragonimus
mexicanus).
Fasciola hepatica ocasiona la fasciolosis o distomatosis heptica. El adulto se localiza en los
conductos biliares de ganado herbvoro que son los hospederos definitivos habituales, siendo
el hombre hospedero definitivo accidental. Para su ciclo evolutivo requiere como hospedero
intermediario de un caracol de agua dulce de la familia Lymnaeidae. Se encuentra en zonas
ganaderas (Cajamaraca, Junin, Arequipa, Puno, etc,)
Paragonimus mexicanus ocasiona la paragonimosis o distomatosis pulmonar. El adulto se
localiza en el tejido pulmonar de gato domstico y zarigueya que son los hospederos
definitivos habituales, siendo el hombre hospedero definitivo accidental. Para su ciclo
evolutivo requiere como primer hospedero intermediario de un caracol de agua dulce de la
familia Hydrobiidae y de un cangrejo de ro de la familia Pseudothelphusidae como segundo
hospedero intermediario. Se encuentra en el Sur de Cajamarca.
Los huevos miden de 130 a 150 micras de longitud por 60 a 90 micras de ancho; tienen
oprculo, son de color amarillento, la cubierta formada por esclerotina (proliferol y protenas).
Al ser eliminados con las heces todava no son maduros (sin embrionar). La maduracin se
efecta en el agua los 9 a 15 das a temperaturade 22 a 25C.
104
Ciclo de vida
MATERIAL
- Muestra de museo con adultos de Fasciola hepatica

- Lamina con adultos de Fasciola hepatica coloreados con carmn
- Lamina con metacercarias de Fasciola hepatica
- Muestra en fresco de huevos de Fasciola hepatica
- Muestra en fresco de huevos de Paragonimus mexicanus
PROCEDIMIENTO
- Observe en las muestras de museo la forma, tamao y posicin de las ventosas de Fasciola
hepatica, en la regin anterior, observe el cono ceflico.
- Observe con ayuda de un ocular de 10 x o de una lupa, la lamina Fasciola hepatica.
- Observe en la muestra de museo, la forma, tamao, de las conchillas de caracoles
Lymnaeidae.
- Observe a 10 y luego a 40 x la lmina con la metacercaria de Fasciola hepatica la forma y
la cubierta gruesa.
- Observe con al microscopio a 4x la lamina Paragonimus mexicanus.
105
- Observe en la muestra de museo, la forma, tamao, de los cangrejos Pseudothelphusidae.

Fasciola hepatica, a 40 x observe el oprculo, tamao, forma, color y cscara delgada.
Paragonimus mexicanus, a 40 x observe el oprculo, forma, tamao, color, cscara
delgada y ondulada.
106
ACTIVIDAD N 14: Hemohistoparsitos: Protozoarios y Helmintos
Trypanosoma cruzi y sus vectores

OBJETIVO
Que el alumno de Enfermera conozca entre los Protozoos hemohistoparsitos a Trypanoma
cruzi la forma de infeccin, de transmisin, vectores, reservorios y la prevencin.
INTRODUCCIN
Agente causal de la trypanosmosis americana o Enfermedad de Chagas, es una zoonosis
histoparasitaria transmitida en la forma adquirida por varios gneros de chinches
hematfagos de hbitos nocturnos conocidos como triatominos, ampliamente distribuidos en
las Amricas , es endmica en nuestro pas y constituye un importante problema de salud
pblica. Los vectores mas importantes de esta zoonosis son: Triatoma infestans, en el Sur, en
el Norte Panstrongylus sp y Rhodnius sp en la regin Nororiental de nuestro pas. Los
principales reservorios de esta zoonosis son: el cuy, rata, ratn, conejo, perro, cerdo,
zarigueya, mono, etc.
Morfologa
Dependiendo del ambiente en el cual se encuentra, presenta distintas formas: amastigotes,
epimastigotes y trypomastigotes. El amastigote es esfrico u ovalado de 2-4 m de dimetro,
constituye la forma de divisin intracelular en los tejidos del husped mamfero, formando los
llamados pseudoquistes.
Ciclo de vida
107
- Forma Infectante: Tripomastigotes metacclico

- Va de Infeccin: Piel o mucosas
- Mecanismo de Infeccin: Contaminacin con las heces del insecto vector
Diagnstico
a. Directo:
- En la fase aguda: Observacin en fresco de una gota de sangre al microscopio
- Frotis y gota gruesa coloreada con Giemsa
- Cultivos artificiales
- Inoculacin en animales de labortario
- Xenodiagnstico
b. Indirecto
- Puede ser captura de anticuerpos o captura de antgenos
- Reacciones sexolgicas: ELISA, Western blot, Inmunofluorescencia,
hemaglutinacin indirecta, floculacin, etc.
MATERIAL
- Lamina con frotis de sangre con tripomastigotes de T.cruzi coloreadas con Giemsa
- Lamina con cultivo de epimastigotes con T.cruzi coloreadas con Giemsa
- Lamina con corte histolgico de corazn o msculo con amastigotes de T.cruzi coloreadas
con Hematoxylina eosina
- Muestra de museo con los ciclos evolutivos de los principales triatominos del Per
- Implementos necesarios para la prueba de xenodiagnstico.
PROCEDIMIENTO
Observe al microscopio con aceite de inmersin las lminas coloreadas y busque los estadios
de Trypanosoma cruzi y observe las caractersticas morfolgicas de los diferentes estadios
evolutivos
Observe los ciclos evolutivos de los vectores.
108
PROTOCOLO DE DIAGNOSTICO
- .
Plasmodium vivax
OBJETIVOS
Que el alumno de Enfermera conozca entre los Protozoos hemohistoparsitos a Plasmodium

vivax, la forma de infeccin, de transmisin, vectores y la prevencin.
INTRODUCCIN
Agente causal de el Paludismo o Malaria, de mayor incidencia y prevalencia a nivel mundial.

Protozoo histoparasitaria perteneciente al filo Apicomplexa, familia Plasmodiidae, el Gnero
Plasmodium incluye cincuenta especies, cuatro de las cuales producen paludismo humano,
estas son: Plasmodium vivax, P. malariae, P. falciparum y P. ovale. Presentan reproduccin
sexual y asexual. Son transmitidos al hombre mediante la picadura de mosquitos hembras
Anopheles infectados con los esporozoitos de Plasmodium. En Malaria hay transmisin
transplacentaria.
Entre los estadios evolutivos que se observan en la sangre:
Trofozoto: Con ncleo rojizo, citoplasma azul que adopta formas anulares o ameboides, hay
hipertrofia del hemate parasitado, y presenta pigmento malrico o hemozona. En el eritrocito
se observan las granulaciones de Schuffner.
Esquizonte: Presenta dos o ms ncleos, pigmento malrico e hipertrofia del glbulo rojo.
Gametocitos: Ocupan casi todo el eritrocito, con ncleo a manera de una masa, ya sea de
color azul intenso o difuso segn el sexo del gametocito.
109
Ciclo de vida
Diagnstico
a. Directo:
- Exmenes de muestras de sangre perifrica, preferentemente tomadas en etapa
febril, coloreadas con Giemsa, Wright o naranja de acridina. til para la
identificacin del parsito y su estadio biolgico.
- Frotis y gota gruesa coloreada con Giemsa
- La parasitemia por encima de 100,000/mm3 (2% de eritrocitos parasitados en
recuentos normales de sangre) indica enfermedad severa y requiere de
tratamiento urgente.
- Deteccin de antgeno parasitario: Son pruebas muy fciles de realizar, rpidas
sensibles y no precisan de microscopio, pruebas inmunocromatogrficas.
- Tcnicas moleculares: Se utiliza una tcnica de PCR mltiple que permite la
deteccin del DNA genmico de las cuatro especies parasitarias. Se detectan
fracciones del parsito.
-
110
b. Indirecto:
- Serologa:
- Captura de anticuerpos: Se utiliza en determinados casos en los que la
microscopa es negativa por la toma de medicacin, o en los bancos de sangre.
- La tcnica habitual es una Inmunofluorescencia (Falciparum-spot IF,
bioMerieux). Recientemente se ha introducido un enzimoinmunoensayo
(Malaria IgG Celisa, BMD).
MATERIALES
- Lamina con frotis de sangre con los estadios de P. vivax coloreadas con Giemsa.
PROCEDIMIENTO
- Observe al microscopio con aceite de inmersin la lmina coloreada y busque los estadios
de P. vivax y observe las caractersticas morfolgicas de los diferentes estadios evolutivos
111
Plasmodium falciparum
OBJETIVOS
Que el alumno de Enfermera conozca entre los Protozoos hemohistoparsitos a Plasmodium

falciparum, la forma de infeccin, de transmisin, vectores y la prevencin.
INTRODUCCIN
Agente causal de el Paludismo o Malaria, Plasmodium falciparum es el ms agresivo de las

especies de Plasmodium que afectan al hombre. Entre los estadios evolutivos que se observan
en la sangre:
Trofozoto: Con aspecto anular y gruesa pared citoplasmtica. Los hemates no se deforman ni
hipertrofian, puede observarse parasitismo mltiple en los eritrocitos y contiene grnulos
pigmentarios gruesos y escasos (grnulos de Maurer)
Esquizonte: Se observa la presencia de merozoitos agrupados en forma de doble roseta
irregular que casi ocupa todo el glbulo rojo, el pigmento malrico muy oscuro ocupa la zona
central.
Gametocitos: En forma de banana con los extremos romos.
Ciclo de vida
112
Diagnstico
Es importante determinar la especie pues Plasmodium falciparum provoca la malaria ms
grave y se logra con las pruebas usadas para P.vivax
MATERIALES
- Lmina con frotis de sangre con los estadios de gametocitos de Plasmodium falciparum
coloreadas con Giemsa
PROCEDIMIENTO
- Observe al microscopio con aceite de inmersin la lmina coloreada y busque los

gametocitos de Plasmodium falciparum y observe las caractersticas morfolgicas.
113
Anopheles sp
OBJETIVOS
Que el alumno de Enfermera conozca a Anopheles sp mosquito vector transmisor del

paludismo, su ciclo biolgico y la prevencin.
INTRODUCCIN
Anopheles sp es un gnero de mosquito de la familia Culicidae que habitan en los cinco

Continentes del mundo, con especial intensidad en las zonas templadas, tropicales y
subtropicales, transmiten la malaria humana. Son vectores biolgicos del gnero Plasmodium.
Anopheles pseudopunctipennis es una de las especies mas importantes en nuestro medio.
Macho: En la cabeza los palpos de igual tamao que la probscide y ensanchado en la parte
Terminal, antenas plumosas.
Hembra: En la cabeza los palpos son de igual tamao que la probscide, pero de terminacin
delgada y recta, antenas pilosas.
Ciclo Biolgico
114
MATERIALES
- Lamina con especmenes adultos de Anopheles sp
PROCEDIMIENTO
- Observe al microscopio a 4 y luego a 10 x y observe las caractersticas morfolgicas
diferenciales de la hembra y del macho.
115
Leishmania sp.
OBJETIVO
Conocer la epidemiologia, ciclo biolgico, fisiopatogenia y carcteristicas de las manifestaciones
clnicas. producidas por especies de Leishmania.
INTRODUCCION
Son protozoarios intracelulares apicomplexa, comprenden varias especies y son transmitidas
en su forma natural por el mosquito hembra del genero Lutzomyia en America y Phlebotomus
en Europa, Asia y Africa, produciendo enfermedades principalmente ulceras cutneas,
mucosas y viscerales. de caracter crnico.
En el Per existen dos variedades clnicas importantes, la leishmaniosis cutnea andina
producida por la Leishmania viannia peruviana y se transmite en los valles interandinos,
dando lesiones solamente cutneas localizadas, de curso benigno, y la leishmaniosis cutneo
mucosa producida por Leishmania viannia braziliensis que se transmite principalmente en
selva baja y alta, ocasionando lesiones destructivas en las mucosas de vas repiratorias
superiores, fosas nasales, cavidad bucal, faringe, laringe y trquea.
Morfologa
AMASTIGOTES:
De forma redonda u ovoide, mide de 2 a 6 um,
intracelular obligatorio, no flagelada, se encuentra
en el citoplasma de macrfagos del hospedero,
presenta un ncleo, con cariosoma central y
blefaroplasto, se multiplican por division binaria.
Crecen en medio de cultivo celular. Se colorean
tien con Giemsa, Leishman o Wright.
Forma infectante para el vector.
PROMASTIGOTE
Forma infectante para el hombre (promastigote
metacclico).Vive en el intestino de Lutzomyia. Se
multiplica por divisin binaria longitudinal, en el
intestino del vector y cultivos. Mide 20 micras de
longitud. De forma alargada y mviles por presentar
un flagelo anterior.
116
Ciclo de vida
MATERIALES
- Lminas con frotis de lesiones cutneas y coloreadas com Giemsa o leishman para
observar a los amastigotes libres o aisladas
PROCEDIMIENTOS
- Observe con microscopio de luz y con objetivo de inmersion (100X) La lamina 1. Reconozca
los amastigotes, son pequeos ovalados de 2 a 4 um
- Observe con microscpio de luz la lamina con objetivo de inmersion (100X) observe los
promastigotes de 20 um de longitud, con su flagelo anterior que Le da La motilidad
117
Toxoplasma gondii
OBJETIVO
Conocer la biologa, carectersticas morfolgicas, ciclo biolgico, fisiopatogenia y medidas de
prevencion.
INTRODUCCION
Es un protozoario intracelular, siendo los felinos hospederos intermediarios y definitivos. Se
adquiere por ingesta de carne cruda o semicocida de ganado vacuno, porcino, ovino, etc,
produciendo infecciones en la mayora de casos benigna, sin embargo puede ser patgena en
primoinfeccion en gestantes, recin nacidos con infeccin congnita, toxoplasmosis ocular, y
en inmunodeprimidos.
Morfologa
Las formas del parasito dependen de la etapa del ciclo biolgico en que se encuentren
- Trofozoitos : Llamados taquizoitos,

de divisin rpida, se observan en la
infeccin aguda, tienen forma de
media luna y miden de 7 8 um de
largo, se visualizan con la tincin de
hematoxilina-esosina, intracelulares
obligados de las clulas nucleadas
en las cuales forman los
pseudoquistes y cuando hay
inmunidad adecuada dan lugar a la
formacin de quistes.
- Quistes: Son formas de resistencia, pared qustica. Los quistes se

miden de 10 a 200 um, contienen encuentran en cualquier rgano
miles de bradizoitos de pero predominan en el SNC,
multiplicacin lenta dentro de su musculo del corazn y esqueltico,
118
donde pueden persistir en fase de

latencia durante toda la vida y
pueden reactivarse cuando baja la
inmunidad.
- Ooquistes: Son de forma oval, mide para el hombre, mamferos y aves, el

de 10 12 um, se forman tras el ciclo ooquiste en el medio ambiente tiene
sexuado que tiene lugar en el una capacidad infectante hasta 18
intestino de los felinos, en su interior meses.
contienen 8 esporozoitos, se
eliminan con las heces de los gatos o
felinos que son los hospederos
definitivos, son formas infectantes
CICLO EVOLUTIVO
119
MATERIAL
- Laminas con trofozoitos con tincin de hematoxilina eosina
PROCEDIMIENTO
- Utilizando el microscopio de luz y con objetivo de inmersin (100x) observe las

caractersticas de los trofozoitos que se encuentran libres y tienen la forma de semiluna o
en arco
- Utilizando microscopio de luz y con objetivo de inmersin (100x) observe en cortes de
tejido los quistes tisulares y dentro de ellos observar a los trofozoitos que en este caso se
denominan bradizoitos.
120
ACTIVIDAD N 15: ARCNIDOS E INSECTOS
OBJETIVOS
Conocer la biologa, carectersticas morfolgicas, ciclo biolgico, fisiopatogenia de los

artrpodos de importancia mdica.
Musca domestica
INTRODUCCION
E s un dptero de la familia Muscidae, existe en la mayora de los climas de la tierra prximas a
las viviendas humanas en todo el mundo.
La mosca adulta como vector mecnico transporta agentes etiolgicos en sus patas peludas o
que ha ingerido y regurgitado las cuales contaminan los alimentos. Las clulas perceptoras de
los sabores se encuentran tanto en las patas como en las piezas bucales.
Viven en contacto con los seres humanos (sinantropia), pues el ciclo de vida lo desarrolla sobre
materiales generados por el hombre como son: basuras, materia fecal, drenajes las cuales
estn sujetas a una descomposicin permanente, donde las moscas se alimentan. Estas
caractersticas les confieren a las moscas convertirse en verdaderos vectores potenciales de
organismos patgenos.
Morfologa
Las moscas domsticas adultas pueden llegar a medir cerca de 5-8 mm de longitud. Trax
de color gris, con cuatro lneas longitudinales en la espalda. La parte baja del abdomen es
amarilla. El cuerpo cubierto de pelos. Posee ojos compuestos de color rojo. Las moscas
hembras son ms grandes que los machos y poseen un espacio mayor entre sus ojos.
Tienen un par de alas membranosas y por detrs de las alas se localizan los balancines.
- Adultos:
Mide 6-7 mm de longitud, bsicamente de color gris, posee dos alas y un cuerpo
dividido en: cabeza, trax y abdomen.
El trax es gris, con cuatro bandas longitudinales oscuras de igual anchura en el dorso.
El abdomen presenta costados amarillentos en la mitad basal; la parte posterior es de
color negro marrn.
Las patas son marrn negruzca. Las alas son prcticamente transparentes y la venacin
es caracterstica.
o Macho: La ubicacin de los ojos prximo a la lnea media.
o Hembra: La ubicacin de los ojos estn distantes de la lnea media.
- Huevo.
De color blanco, elptico, de aproximadamente 1 mm de longitud, con ambos extremos
romos y la parte anterior ligeramente ahusada.
- Larvas:
Con 13 segmentos, de forma vermiforme muy mviles, con el extremo posterior ancho
y delgado hacia la parte anterior. De color blanco, carece de ojos y patas. Poseen
espirculos respiratorios en el extremo posterior de forma caracterstica. Pasan por
tres estadios que duran de 2 a 3 das. Estas larvas pueden producir miasis accidental.
- Pupa:
121
El proceso de pupacin es una contraccin de la larva dentro de su propio tegumento,

de modo que ste se convierte en un pupario cilndrico de aproximadamente 6 mm de
longitud. El pupario se oscurece hasta adquirir un color marrn oscuro.
Ciclo biolgico
MATERIAL
- Adulto de Musca domestica.
HACER ESQUEMAS DE SUS OBSERVACIONES
122
Dermatobia hominis
INTRODUCCIN
Los adultos no se alimentan, viven pocos das y son zumbadores. Sus rganos bucales estn
atrofiados y por lo tanto son incapaces de morder y picar.
Dermatobia hominis es un dptero cuya larva es el agente causal de la miasis subcutnea,
tumoral es dolorosa en sus estadios finales.
Mosca que en sus estadios larvarios parasitan mamferos. Es nativa de Centroamrica. La
hembra de esta especie atrapa al vuelo a mosquitos, garrapatas y deposita de quince a treinta
huevos en el abdomen. Cuando el portador se posa sobre un vertebrado, los huevos
eclosionan con su temperatura, luego las larvas se colocan bajo la piel, herida o el agujero de la
picadura originando la miasis.
Morfologa
- Adultos
Son moscas grandes y fuertes de 1,5 a 1,8 cm de longitud con el trax velludo y de
color negro-azulado, abdomen romboidal de color azul-violceo con reflejos metlicos
y con cabeza y patas amarillentas.
- Huevo.
De forma de banana., son colocados en el abdomen de diversos dpteros hematfagos.
- Larva.
La larva recin eclosionada es de 1.5 a 2 mm; despus de la primera muda es de 4 a 5
mm y el tercer estadio llega a medir aproximadamente entre 20 a 25 mm.
Ciclo de vida
123
MATERIAL
Frascos con larvas de Dermatobia hominis
RESULTADO: HACER ESQUEMAS DE SUS OBSERVACIONES
124
Phthirus pubis
INTRODUCCIN
Phthirus pubis, pertenece a la Clase Insecta, Orden Anoplura. Conocido como ladilla o piojo
del pubis. Son hematfagos de color blanco grisceo, forma de cangrejo, de 1,5 a 2,0 mm de
largo. Se localiza en el rea pilosa del pubis de los seres humanos. Es de hbitos sedentarios.
Se instala en un punto, se sujeta a un pelo con los ganchos de sus patas y con sus estructuras
bucales insertadas en la piel.
Morfologa
- Adulto:
Se asemeja a un cangrejo. De 1 a 2 mm de longitud. Son anchos. El trax ms ancho
que el abdomen. Tienen los dos pares de patas posteriores ms grandes que el primer
par. Los tres primeros segmentos del abdomen estn fusionados.
Ciclo de vida
MATERIALES
- Lminas portaobjetos montadas con machos y hembras de Phthirus pubis.
125
Pediculus humanus
INTRODUCCIN
Los piojos son insectos que pertenecen a la Familia Pediculidae, Orden Phthiraptera, son
hematfagos permanentes y estrictos. Son pequeos, exclusivos de mamferos, miden entre 2
y 6 mm de longitud, presentan cuerpo achatado dorsoventralmente, segmentos del trax
fusionados, un par de antenas cortas, ausencia de alas, patas desarrolladas adaptadas para
fijarse a los cabellos de sus hospedadores y aparato bucal para picar y succionar sangre, tanto
hembras como machos son hematfagos.
Morfologia
- Adulto:
El tamao de los adultos oscila de 3 a 4 mm de longitud, siendo las hembras mayores
que los machos. La cabeza pequea, ovoide y se destaca bien del cuerpo, un par de
ojos simples, laterales y un aparato bucal adaptado para cortar y succionar sangre.
- Huevo
Ovoide, mide 0,8 mm. Las hembras depositan los huevos en las fibras gruesas y
costuras de la ropa quedando firmemente adheridos a los pelos o a las fibras mediante
una sustancia cementante segregada.
- Ninfas
Son hematfagas
Ciclo de vida
126
MATERIALES
- Lminas portaobjetos montadas con adultos (macho y hembra) de Pediculus humanus.
.
RESULTADO: HACER ESQUEMAS DE SUS OBSERVACIONES.
ACAROSIS: Sarcoptes scabiei
INTRODUCCIN
Sarcoptes scabiei var. hominis, es el caro de la sarna humana, clase de artrpodos Arachnida, subclase
Acarina, familia Sarcoptidae. Los caros se introducen en la capa superior de la piel, pero nunca por
debajo del estrato crneo. Las madrigueras aparecen como pequeas lneas serpenteantes que son
grisceas o de color piel y puede ser de un centmetro de longitud o ms.
Morfologa
- Adulto:
De tamao pequeo, cuerpo de forma ovalada, de color blanquecino es aplanado
dorsoventral y no segmentado. En su cara dorsal presenta espinas y pelos dirigidos
hacia atrs que determinan que el parsito no pueda retroceder en su caminar. La cara
ventral soporta cuatro pares de patas. El capitulo sobresale en el extremo anterior.
Posee cuatro pares de patas., los dos primeros de posicin anterior formados por cinco
segmentos pequeos que terminan en pedicelo con una ventosa terminal y dos de
posicin posterior que terminan en cerdas largas o en pedicelo.
o Macho:
Miden entre 0.2-0.4 mm de ancho y 0.1-0.2 mm de largo El tercer par de patas
termina en una larga cerda, el resto de patas terminan en pedicelos con ventosas.
o Hembra:
Miden entre 0.3 - 0.5 mm por 0.2-0.4 mm de largo El tercer y cuarto par de patas
terminan en largas cerdas.
- Huevo:
Ovalado.
- Larva:
Son hexpodas (tres pares de patas).
127
- Ninfa:
Presenta cuatro pares de patas.
Ciclo de vida
MATERIALES
- Lminas portaobjetos montadas con huevos, larvas, ninfas y adultos de Sarcoptes scabiei.
128
Loxosceles laeta
INTRODUCCIN
Se le conoce como araa casera o araa violn, vive en el interior de las viviendas, se les
encuentran en lugares sombros de habitaciones, detrs de cuadros, muebles y entretechos. Si
durante la caza la sorprende la luz se refugia en cualquier lugar sombro que incluye ropas
colgadas en las murallas. Protegida de las variaciones de temperatura se mantiene activa todo
el ao. Las ninfas son canbales, las que sobreviven salen a las proximidades donde cada una
forma su vivienda. Este perodo de huevo a adultos suele demorar de 9 meses a 1 ao.
Morfologa
- Adultos:
Miden de 8 a 15 mm, la hembra es ms grande y de abdomen ms prominente que el
macho, es tambin la ms peligrosa. Son de color marrn claro u oscuro. En el
cefalotrax esta cubierta por abundante pilosidad y tiene un aspecto de violn, es
ancho y en su extremo anterior se ubican tres pares de ojos dispuestos en pares
formando un tringulo.
Ciclo de vida
Se reproduce mediante huevos, la hembra coloca los huevos en una ooteca se localizan en los
ngulos interiores de las casas, detrs de los roperos, armarios, etc. La ooteca contiene los
huevos que son de color blanquecinos amarillentos. El primer estadio ninfal viven en el
interior de la ooteca, luego salen al exterior y despus de pasar por tres estadios (9 a 12
mudas) y en un tiempo de aproximadamente 315 das para hembras y 406 das para machos,
llegan al estado adulto.
129
MATERIALES
- Lminas portaobjetos montadas con ninfas o juveniles de Loxosceles laeta.
- Viales con alcohol conteniendo ejemplares adultos Loxosceles latea.
Ootecas colocadas en frascos de boca ancha
Latrodectus mactans
INTRODUCCIN
Conocido como viuda negra o araa del trigo, vive en zonas ridas silvestres y en campos. Teje
su telaraa entre rocas o entre ramas de arbustos. Ocasionalmente ingresan a ambientes
peridomiciliarios. Son de hbitos diurnos y su actividad es mayor en primavera y verano
Morfologa
- Adultos:
Mide entre 1,5 a 3 cm, presenta un abdmen globuloso, negro aterciopelado. En la
parte anterior del cefalotrax se encuentran los cuatro pares de ojos dispuestos en dos
hileras casi paralelas. El primer par de patas es ms largo que los otros dos pares.
En la hembra en la parte ventral del abdmen se observa una mancha de color rojo
intenso de forma de un reloj de arena. Los ejemplares machos y los juveniles
presentan manchas de color amarillento. Los machos son ms pequeos
Ciclo de vida
La hembra coloca 100 a 500 huevos de una vez y en pocos minutos en un capullo
blanquecino u ooteca tejido previamente. A las 3 semanas emergen ninfas, transparentes,
las que permanecen 8 meses en la ooteca, perodo en el cual se van pigmentando.Las
ninfas son canbales. Abandonan el capullo en estado de ninfas, al cabo de 1 mes mudan y
se transforman en adultos.
MATERIALES.
- Lminas portaobjetos montadas con ninfas o juveniles de Latrodectus mactans.
- Viales con alcohol conteniendo ejemplares adultos Latrodectus mactans
- Ootecas colocadas en frascos de boca ancha
130
PULGAS
Pulex irritans
INTRODUCCIN
Conocidos como pulga del hombre. Son Insectos hematfagos del Orden Siphonaptera,
considerados ectoparsitos ambientales, pteros y con patas posteriores adaptadas para
saltar.
Morfologa
- Adulto:
De 1.5 a 4 mm con cuerpo comprimido lateralmente. Aparato bucal picador, corto y
fuerte que emerge del borde inferior de la cabeza. Son pteros. Poseen 3 pares de
patas siendo los ltimos muy desarrollados, aptos para el salto. En su extremo
presentan fuertes uas que le permiten fijarse al hospedero. No presentan ctenidios
genales ni pronotales.
o Macho:
Mide 1.5 mm de longitud. La estructura genital quitinizada.
o Hembra:
De 4 mm de longitud. Presentan espermatecas.
- Huevo.
Son pequeos, de 0,5 a 1 mm de longitud, de color blanquecino, alargados y
cilndricos.
- Larva:
De forma vermiforme, activas y mvil con aparato bucal masticador. Se alimentan de
detritos orgnicos y/o de la sangre evacuada por los adultos. Son de color
blanquecinas y vermiformes (sin patas) miden entre 2 y 3 mm.
- Pupa:
Son desnudas y se van cubriendo de polvo al movilizarse hasta quedar mimetizadas
con el ambiente en un capullo.
131
Ciclo biolgico
MATERIALES
Lminas portaobjetos montadas con adultos (macho y hembra) de Pulex irritans.
132
Xenopsylla cheopis
INTRODUCCIN
Pertenece a la Clase Insecta, Orden Siphonaptera. Conocida como pulga de la rata. Son
hematfagas. Ectoparsito temporal de la rata y mamferos. Vector biolgico de Yersinia pestis
y es hospedero intermediario de Hymenolepis diminuta.
Morfologa
- Adulto:
Cuerpo aplanado lateralmente, con esternitos. Pronoto y genas sin ctenidios. Tercer
par de patas muy desarrolladas. La mesopleura dividida por una sutura a la cual se le
conoce como apodema sutura mesopleural. La hembra presenta en el abdmen la
espermateca en forma de herradura con el ngulo dirigido hacia atrs.
- Huevo:
Son ovoides o elipsoidales, de color blanquecinos. Generalmente son depositados en
los nidos de los hospederos.
- Larva:
Las larvas son vermiformes, podas de color blanco con aparato bucal tipo masticador.
En cada estadio larval incrementa de tamao siendo de 3.3 a 4.5 mm al final del tercer
estadio.
Ciclo de vida
Presenta metamorfosis completa. La pulga adquiere la infeccin con H. diminuta cuando

se encuentra en el estado de larva, al alimentarse de las heces de las rata con huevos o
progltidos con H. diminuta y cuando la pulga pasa a adulta persisten los cisticercoides.
MATERIAL
- Lminas portaobjetos montadas con adultos (macho y hembra) de Xenopsylla cheopis.
- Lminas portaobjetos montadas con larvas de X. cheopis.
133
Tunga penetrans
INTRODUCCIN
Pertenece a la clase Insecta, orden Siphonatera. Se le conoce como pique tunga
nigua. Son hematfagos. La pulga hembra fecundada produce Tungiasis.
Morfologa
- Adulto:
De tamao pequeo y en la frente presenta una prominencia angular. Presenta el
abdomen telescopado.
o Macho:
De 1 cm de longitud. Presenta la estructura genital quitinizada.
o Hembra:
De 1.5cm. Presenta la espermateca de valor taxonmico.
- Larva:
Son vermiformes, con 13 segmentos.
- Pupa:
Tiene un sustancia pegajosa a la cual se adhieren sustancias orgnicas en
descomposicin, arena y polvo para formar un capullo.
Ciclo evolutivo
134
. MATERIALES
- Lminas portaobjetos montadas con adultos (macho y hembra) de Tunga penetrans.
- Ejemplares adultos de T. penetrans en viales conteniendo alcohol 70%.
Ctenocephalides sp.
INTRODUCCIN
Pertenece a la Clase Insecta, Orden Siphonaptera. Son aplanadas lateralmente y poseen
fuertes patas traseras. La parte anterior de la cabeza est adaptada para perforar y succionar a
travs de la piel de los hospedadores.
Presenten peines (ctenidios) de espinas gruesas ubicadas alrededor de las partes bucales, a las
cuales se denomina ctenidos genales. En el pronoto que est inmediatamente detrs de la
cabeza se localiza un peine llamado ctenidos pronotales.
Las especies de Ctenocephalides felis y Ctenocephalides canis son las pulgas del gato y perro
respectivamente, pero puede atacar a otros animales as como a los humanos.
Morfologa
Adulto. Cuerpo aplanado lateralmente y torx de 3 segmentos con esternitos, pleuras y
notos. Tercer par de patas muy desarrolladas. La disposicin de los ctenidios genales y
ctenidios pronotales son una caracterstica importante para la identificacin de estas
pulgas.
En Ctenocephalides felis la cabeza es el doble de larga que de alta y puntiaguda, mientras
que en Ctenocehalides canis es menos del doble de larga que de alta y redondeada.
En C. felis el primer y segundo ctenidio genal tienen casi la misma longitud, mientras que
en C. canis el primer ctenidio genal es ms corto que el segundo.
135
Ciclo de vida
Consta de cuatro estadios: huevo, larva, pupa y adulto. Los huevos son depositados sobre
una mascota o lugar donde duerme la mascota o en grietas y ranuras del piso. Los huevos
que se ponen sobre las mascotas no estn fijas y pronto caen al suelo. Alrededor de una
semana de los huevos salen las larvas, que carecen de patas y no se alimentan de sangre
fresca sino viven de material orgnico, incluyendo partculas de sangre seca y excremento
desechado por las pulgas adultas. Las larvas crecen a su mximo tamao
aproximadamente en 12 das, pasan a la etapa de pupa y luego se transforman en pulgas
adultas. Los adultos se alimentan de sangre fresca de animal ms de una vez al da. El ciclo
de vida de Ctenocephalides felis, es de 20 a 24 das a una temperatura de 24o C.
MATERIAL
Lminas portaobjetos montadas con adultos (macho y hembra) de pulgas del gnero
136
ACTIVIDAD 16:
SEMINARIO III: Enfermedades metaxnicas
1. GENERALIDADES - DEFINICION DE ENFERMEDAD METAXENICA VARIABLES

DESENCADENANTES
2. EPIDEMIOLOGIA, CONTROL Y PREVENCION LEISHMANIA Y MALARIA
3. EPIDEMIOLOGIA, CONTROL Y PREVENCION TRIPANOSOMIASIS Y DENGUE
4. ENFERMEDADES METAXENICAS EN EL PER
BIBLIOGRAFIA
1. http://www.minsa.gob.pe/portada/esnemo_default.asp
2. http://www.minsa.gob.pe/portalweb/06prevencion/prevencion_2.asp?sub5=5
3. http://www.dge.gob.pe/iepi_prior_t01.php
4.http://www.paho.org/per/index.php?option=com_content&view=category&id=856&layout=
blog&Itemid=635
137
ACTIVIDAD 17: TERCER EXAMEN PARCIAL
138

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MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA - USJB

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERA

1. Medidas Generales de Bioseguridad 3

5. Actividad N 4: Estudio morfolgico y cultivo de especies patgenas de los Gneros

7. Actividad N 6: Seminario I: VACUNAS 33

8. Actividad N 7: Estudio morfolgico y cultivo de bacilos Gram. positivos y negativos.

MEDIDAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

ACTIVIDAD N 1: BIOSEGURIDAD - DECONTAMINACIN, LAVADO Y

Recomendaciones para su implementacin:

Haber una seal de Riesgo Biolgico en la puerta.

Revisar el tema con el docente.

El alumno habr identificado las medidas de bioseguridad que deber mantener en el

DECONTAMINACIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIALES. EMPLEO DE

Proporcionar los conocimientos sobre el significado y los procedimientos de decontaminacin

MATERIAL LIMPIO PERO CON PARTICULAS:

PASO 1: LAVAR CON PASO 2: ENJUAGAR CON AGUA

PASO 3: ESCURRIR, SECAR PASO 4: ESTERILIZAR POR PASO 5: GUARDAR EL MATERIAL

MATERIAL CONTAMINADO CON MATERIAL BIOLOGICO:

PASO 1: MATERIAL PASO 2: COLOCAR EN PASO 3: ESPERAR QUE BAJE LA

PASO 4: LAVAR MATERIAL DE VIDRIO PASO 5: ESTERILIZAR POR CALOR

Esterilizacin, es el procedimiento fsico o qumico, mediante el cual un material determinado

Calor Hmedo: autoclavado, la esterilizacin es por presin (lbrs/minutos), el equipo contiene

- Tubos de 16x150, 13x100 limpios

- Prepara el material limpio.

OBSERVACIONES MICROSCPICAS: EXAMEN DIRECTO EN FRESCO.

Para el desarrollo de esta prctica se recordara el uso del microscopio

El microscopio es un equipo fundamental que no puede faltar en un Laboratorio de

El alumno utilizar apropiadamente el microscopio ptico identificando sus partes y utilidad.

El examen microscpico tiene como propsito la identificacin de microorganismos en muestras

- Tubo con secrecin biolgica o suspensin bacteriana.

Durante todo el procedimiento en adelante se trabajara al lado del mechero.

Recuerde que estar con todo el equipo de proteccin personal .

Coloracin Azul de Metileno:

Coloracin de Azul de Lactofenol:

Preparacin de Tinta China:

1. Indique porque denominamos coloraciones simples.

ACTIVIDAD N 2: COLORACIONES DIFERENCIALES: GRAM, ZIEHL NEELSEN.

Los alumnos deben:

- Caldo con pool bacteriano

a. Realizar un frotis para realizar la coloracin

b. Realizar la Coloracin Gram en la lmina con mezcla bacteriana:

- Colocar la lamina en una rejilla de coloracin

c. Realizar la Coloracin Ziehl Neelsen en la lmina con frotis de esputo:

- Colocar la lamina en una rejilla de coloracin

d. Observar las lminas con bacterias de diverso tipo.

e. Enfocar los microscopios con aceite de inmersin.

COLORACION MORFOLOGIA OBSERVACION

1. Qu clasificacin tintorial y morfologica obtendremos con la coloracin Gram?

2. Cul es el fundamento para la aplicacin del calor en la coloracin de Ziehl

MEDIOS DE CULTIVO. CULTIVO DE MICROORGANISMOS. MTODOS DE

Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de

Medio de TSI / MacConkey : Metabolismo de Glucosa y Lactosa:

Muchos microorganismos actan sobre un carbohidrato produciendo acidificacin del medio

Medio Citrato: Metabolismo del citrato :

Algunas bacterias pueden obtener energa por va distinta a la fermentacin de carbohidratos,

Prueba del Indol: Metabolismo de Proteinas:

Ciertas bacterias tienen la propiedad de desdoblar el aminocido Triptofano (en la peptona) en

Agar Sangre: Accin de la Hemolisina:

Movilidad: Agar semisolido:

Algunas bacterias poseen flagelos, lo que les da la caracterstica de ser mviles.