IDENTIFICACION DE GENEROS DE BACTERIAS FITOPATOGENAS

Luis Alberto Mendoza Vargas, Kevin Alejandro Rodrguez Arvalo

Universidad Nacional de Colombia
Sede Bogot
Resultados y anlisis de resultados
Las bacterias fitopatgenas pertenecen al grupo de los procariotas, que se caracterizan
por tener el material gentico libre en el citoplasma, y por presentar membrana celular y
pared celular (Agrios, 2005). Una de las caractersticas para identificacin, es la
composicin de la pared celular que para la mayora de las bacterias fitopatgenas
tiene bajo contenido de peptidoglicano, que se puede comprobar mediante la tincin de
Gram, que permite diferenciar entre Gram negativas (bajo contenido de peptidoglicano)
y Gram positivas (alto contenido de peptidoglicano) (Loredo, 2008). Segn Agrios,
(2005) los gneros Xanthomonas, Erwinia, Pseudomonas y Pantoea son bacterias
Gram negativas, lo que concuerda con lo encontrado en este ensayo. Adicionalmente,
la prueba de KOH tambin se utiliza para la determinacin de Gram de las bacterias, en
este caso si la prueba de positiva significa que la bacteria es Gram negativa y si es
negativa la bacteria es Gram positiva (Loredo, 2008), esto permite corroborar los
resultados que se presentaron con la tincin de Gram.
Generalmente las bacterias fitopatgentas presentan una forma de varilla o de bacilos,
la nica excepcin es el gnero Streptomyces que presenta una forma filamentosa
(Agrios, 2005). Esto coincide con lo encontrado para los gneros estudiados, adems
segn Agrios, (2005) reporta que Xanthomonas, Erwinia, Pseudomonas y Pantoea
presentan forma de bacilos.
Para Xanthomonas se reporta que es una bacteria aerobia obligada, la hidrolisis de
gelatina y de almidn puede ser variable, no genera pigmentos fluorescentes, no
produce cambios en el medio TSI y produce pigmentos amarillos en medio YDCA
(Bergey, 1994; Daz, 2003; Macfaddin, 2003). La anterior descripcin concuerda con lo
encontrado en la prueba uno de Xanthomonas, excepto por la fermentacin de los 3
azucares, que debe ser negativa por tener una metabolismo aerobio. Mientras que en la
prueba dos se presentan una bacteria anaerobia facultativa y que solo utiliza glucosa
como fuente en el medio TSI, lo que no concuerda con lo reportado en literatura.
Pseudomonas presenta bacterias aerobias, generan hidrolisis de gelatina, la hidrolisis
de almidn en este gnero se utiliza para diferenciar algunas especies, puede presentar
resultados negativos y positivos. Adems producen pigmentos fluorescentes, no
fermentan lactosa, glucosa o sacarosa y no genera colonias amarillas en medio YDC
(Macfaddin, 2003; Alarcn y Olivas, 2004; Agrios, 2005). De acuerdo a lo anterior, en el
ensayo las 3 pruebas cumplen con lo descrito en la literatura para la hidrolisis de
gelatina, la utilizacin de azucares y la produccin de pigmentos fluorescentes, pero no
se cumple con el requerimiento de oxgeno, ya que se presentaron bacterias
anaerobias facultativas y se reportan como bacterias aerobias estrictas. Adicionalmente
segn Schaad et al., (2001) este gnero no presentan colonias amarillas en medio
YDCA, y los tres ensayos fueron positivos para esta prueba.
El gnero Erwinia presenta bacterias anaerobias facultativas, no producen pigmentos
fluorescentes, no presentan pigmentacin amarillas en medio YDCA, la hidrolisis de
gelatina es variable, por lo que la prueba puede ser negativa o positiva, presentan
fermentacin de glucosa, sacarosa y lactosa en el medio TSI (Daz, 2003; Agrios, 2005;
Durn y Mosquera, 2007). Las pruebas uno y dos concuerdan con lo reportado en
literatura en el requerimiento de oxgeno, pigmentos en el medio kin-B y YDCA, pero no
concuerda con la prueba en medio TSI debido a que solo se present fermentacin de
glucosa. La prueba 3 fue la ms acertada, al presentar en la prueba TSI positiva para la
utilizacin de los 3 azucares y el resto de pruebas coinciden con lo reportado en
literatura.
El gnero Pantoea presenta bacterias anaerobias facultativas, realizan fermentacin de
glucosa, lactosa y sacarosa en medio TSI, no realizan hidrolisis de almidn, no
producen pigmentos fluorescentes, generan colonias amarillas en medio YDC y la
hidrolisis de gelatina se utiliza para diferenciar especies por lo que puede presentarse
positiva o negativa (Shaad et al., 2001; Engelkirk y Engelkirk, 2008; Villalobos, 2014).
Las dos pruebas aciertan en el requerimiento de oxigeno presentando bacterias
anaerobias facultativas, la respuesta negativa en hidrolisis de almidn y produccin de
pigmentos fluorescentes. Por una parte la prueba uno difiere en la produccin de
pigmentos en el medio YDCA y utilizacin de azucares que fueron negativas. La prueba
dos presenta pigmentos amarillos en YDCA, pero tambin mostr contaminacin que
pudo ser la causa de la coloracin amarilla en el medio, y en el medio TSI solo presento
fermentacin de glucosa, por lo que no coincide con lo reportado en literatura.
Los desaciertos que se presentaron con la literatura se pueden haber presentado
porque se pudo generar un aumento en el error experimental, debido a que cada
repeticin o ensayo fueron realizados por diferentes personas. Otro factor que pudo
incidir es la edad de las colonias que se tomaron para cada ensayo en el experimento.
Conclusiones
Las pruebas bioqumicas son necesarias para la identificacin de los gneros de
bacterias fitopatgenas.
El gnero Pseudomonas se puede identificar por la produccin de los pigmentos
fluorescentes en el medio King-B.
Las bacterias pertenecientes al gnero Xanthomonas se pueden diferenciar de los
dems gneros estudiados en este ensayo por la produccin de pigmentos amarillos en
el medio YDCA y ser aerobia estricta.
Pantoea se puede diferenciar de su gnero ms cercano Erwinia por la produccin de
pigmentos amarillos en medio YDCA.
Bibliografa
Agrios, G. N. 2005. Plant pathology. Fifth edition. Elsevier Academic press, San Diego.
616-622 pp.
Alarcn, L. R. y Olivas, E. 2004. Manual de prcticas de microbiologa bsica y
microbiologa de alimentos. Primera edicin. Universidad autnoma de ciudad
Jurez. Ciudad Jurez, 36p.
Bergey, S. 1994. Manual of determinative bacteriology. Novena edicin. Editorial
Williams y Williams. Baltimore, 1093 pp.
Daz G. 2003. Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgico. Protocolos de
pruebas de identificacin bacteriana. Laboratorio de Diagnstico Clnico. San
Fernando de Henares, Madrid, 9-16 pp.
Durn, M. E. y Mosquera, P. 2007. Actividad biocontroladora de hongos de suelo sobre
microorganismos fitopatgenos. Universidad del Azuay, Mxico, 52-53 pp.
Engelkirk, P. G., y Engelkirk, J. D. 2008. Laboratory diagnosis of infectious diseases.
First edition. Wolters Kluwer. Baltimore, USA, 308p.
Loredo, J. G. 2008. Manual de prcticas de bacteriologa. Universidad autonoma de
Sinaloa. Ahome, Sinaloa.
Macfaddin, J. F. 2003. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de
importancia clnica. Primera edicin. Editorial medica panamericana. Buenos
aires, 593p.
Osman, J. R. 2008. Antagonismo in vitro de cepas nativas y de coleccin (ATCC) de
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de chile, Valdivia, 60p.
Schaad, N. W., Jones, J. B., Chun, W. 2001. Laboratory guide for identification of plant
pathogenic bacteria. Tercera edicin. Aps. Minnesota, USA. 373p.
Villalobos, M. M. 2014. Identificacin del agente causal del anillo rojo del agave
tequilero (agave tequilana weber var. Azul). Colegio de postgraduados,
Texcoco, Mxico, 26-30pp.
Tabla 1. Resultados obtenidos pruebas bioqumicas para la identificacin de gneros de bacterias fitopatgenas

Xanthomonas Erwinia Pseudomonas Pantoea

Prueba 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
Tincin de Gramm
- - - - - - - - - -
Prueba KOH
+ + + + + + + + + +
Requerimiento de
A F F F F F F F F F
oxigenoa
Utilizacin de
azucares y
liberacin de
3a G G G 3a - - - - G

sulfurosb
Hidrlisis de
gelatina
- - - - - + + + - -
Hidrolisis de
almidn
- - - - - - - - - -
Produccin de
pigmentos - - - - - + + + - -
fluorescentes
Pigmentos
amarillos en YDCA
+ + - - - + + + - +*
Formac B B B B B B B B B B
a requerimiento de oxigeno: A= areobia estricta, An= anaerobia estricta, F= aerobia facultativa.

b:Utilizacin de azucares y sulfuros: 3a= 3 azucares, G= glucosa, LS= lactosa y sacarosa, S= sulfuros.

c: Forma: B= bacilos

* Muestra contaminada