Guia de Practicas Bioquimica Aplicada Al LC 335 0

3B-2
GUA DE PRCTICAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA
LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA
BIOQUMICA
APLICADA AL LABORATORIO CLINICO
Autor:
Lic. TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA
2016
F-CV3-3B-2 1 Rev. Junio 2007

INDICE
PAGINA
CARATULA 1
INTRODUCCION 3
PRACTICA 01:
Uso y reconocimiento de los instrumentos y unidades de medicin volumtrica. Determinacin
de la actividad Creatinkinasa y la Isoenzima Creatinkinasa (CK-MB) en suero. Grfica de la 4
cintica de una reaccin.
PRACTICA 02:
Determinacin de la actividad Lactato Deshidrogenasa y Gamma-glutamiltranspeptidasa en
suero. Principios de espectrofotometra y mtodo de Punto Final. Resuelve problemas 7
propuestos sobre unidades del SI, diluciones.
PRACTICA 03:
Cuantificacin de la glucemia. Diseos y desarrollo de la prueba de tolerancia a la glucosa y
prueba de glucosa post prandial. Resuelve problemas de concentracin y conversin de 10
unidades
PRACTICA 04:
Determinacin cuantitativa de Hemoglobina y Hemoglobina glicada. Precisin y exactitud de
las mediciones. 12
PRACTICA 05:
Determinacin de Triglicridos en suero. . Resuelve problemas de Espectrofotometra y 14
Mtodo Cintico
PRACTICA 06:
Cuantificacin de Colesterol total y sus fracciones. Adaptacin y cambios de la metodologa.
Desarrollo de la frmula de Friedewald. Determinacin de los ndices de Castelli. Desarrolla 16
protocolos con frmula completa de espectrofotometra
PRACTICA 07:
Determinacin de Bilirrubina y sus fracciones en sangre. Factores que alteran la Bilirrubina en
la muestra. Cuantificacin de Amilasa pancretica en suero. Resuelve problemas de 18
SEMANA N 08 PRIMER EXAMEN ESCRITO
PRACTICA 09:
Cuantificacin de las Protenas totales y Albmina en suero. Calculo de las globulinas, ndice
21
A/G. Anlisis y clculos en la grfica del electroforetograma.
PRACTICA 10:
Determinacin de la actividad de las Transaminasas en suero. Grfico de las curvas de
calibracin de las enzimas ALT y AST. Resuelve problemas sobre concentraciones y 23
espectrofotometra
PRACTICA 11:
Determinacin de la concentracin de cido rico y Creatinina en suero y su excrecin en
orina. Prueba de depuracin de Creatinina Endgena. Anlisis de las diferentes frmulas para 25
su determinacin. Resuelve problemas sobre recoleccin de orina de 24 horas
PRACTICA 12:
Determinacin del Hierro srico y la capacidad de unin del Hierro (TIBC), Determinacin de
la saturacin de Transferrina. Anlisis de la frmula para su determinacin. 28
PRACTICA 13:
Cuantificacin de la concentracin de Calcio en suero y orina.
Determinacin de la actividad de la Fosfatasa alcalina. Resuelve problemas de Buffer y pH I. 30
PRACTICA 14:
Determinacin de la concentracin de Fsforo en suero y orina. Diagnstico de casos de
33
acidosis o alcalosis y gases sanguneos. Resuelve problemas de Buffer y pH II.
PRACTICA 15:
Examen completo de orina y la lectura de la bioqumica y estudio del sedimento urinario.
35
Tema de discusin: Pruebas bioqumicas en lquidos serosos.

INTRODUCCIN
La Gua de Prcticas de Bioqumica Aplicada al

Laboratorio Clnico est elaborada de acuerdo al
Programa de Bioqumica para la Escuela Acadmico
Profesional de Tecnologa Mdica: Laboratorio
Clnico y Anatoma Patolgica y contiene trabajos que
se realizaran dentro del laboratorio que permiten a los
estudiantes adquirir habilidades y destrezas para el
anlisis individual del material biolgico: Suero Humano,
plasma sanguneo, orina, etc.
Con los principios aplicados en esta gua, los estudiantes

los podrn orientarse en la realizacin de trabajos de
investigacin que involucren procedimientos de
diagnstico de metabolitos o actividad de las enzimas de
inters clnico. Cada prctica tiene un pequeo resumen
terico.
Al iniciar cada prctica el alumno tendr una pequea

orientacin sobre la importancia del anlisis y de la
utilidad del ensayo contenida en el Marco Terico,
seguidamente se mencionarn los objetivos que se
alcanzarn y que van acorde al tema asignado en el
Silabus del curso de Bioqumica Aplicada al Laboratorio
Clnico.
En cada prctica tambin se indicar la lista de reactivos y materiales de laboratorio a

utilizar, el procedimiento a seguir segn los protocolos estandarizados, los principales
resultados a obtener, una pequea lista de preguntas contenidas en un cuestionario que se
complementar sus conocimientos y por ltimo la bibliografa recomendada donde se
apoyar cada prctica.
Los experimentos descritos son de fcil ejecucin y permiten al estudiante desarrollar su
capacidad y criterio cientfico de acuerdo a la tecnologa utilizada y al reactivo que se
aplicar. Los temas de laboratorio se han diseado teniendo en consideracin la
accesibilidad de material e instrumentos con que cuenta la universidad.
La presente Gua orienta el procedimiento de las prcticas que complementa el
aprendizaje de Bioqumica Aplicada al Laboratorio Clnico y que est orientada al
diagnstico clnico y que van de acuerdo al desarrollo terico del curso.
Lic. TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA

PRACTICA N 01
Uso y reconocimiento de los instrumentos y unidades de medicin volumtrica.

Determinacin de la actividad Creatinkinasa y la Isoenzima Creatinkinasa (CK-MB) en
suero. Grfica de la cintica de una reaccin.
1.1 MARCO TERICO
La Creatinfosfokinasa (CPK) o Creatinkinasa (CK) es una enzima clave en el sistema de los

fosfgenos, especficamente del sistema ATP-PC, el cual es una va metablica que aporta
energa (resntesis de ATP) de forma inmediata, por lo tanto predomina en esfuerzos fsicos de
alta intensidad y corta duracin, como es el levantamiento de pesas, los lanzamientos, saltos y
sprints, entre otros (Gonzales & Rivas, 2002;Conley, 2007).
La mayor parte de la creatina del organismo, as como de Fosfocreatina (PC), se encuentra en

las clulas musculares, en donde acta como fuente de grupos fosfatos de alta energa para la
conversin del ADP en ATP (Ganong, 2002; Lpez & Lpez, 2008).
Esta enzima, muy especfica del msculo estriado, aunque tambin es sintetizada en otros
rganos como el hgado, rin y pncreas, es rpidamente captada por aqul. Las
concentraciones (catalticas o de masa) sanguneas de CK pueden variar entre diferentes
individuos en relacin con su edad, sexo y etnia1,2. Su actividad cataltica disminuye con la
edad en todos los individuos. En las mujeres la actividad cataltica es ms elevada en la
infancia que en la juventud y en ambas ms que en la vida adulta; lo mismo sucede en los
varones entre la infancia y la adolescencia, mientras que permanece estable tras sta. No
existen diferencias significativas entre sexos hasta la adolescencia, pero la actividad de la CK
es ms elevada en los varones en la vida adulta, consecuencia probablemente de su mayor
masa muscular. Las razas caucasianas tienen valores ms bajos de CK que las orientales y
africanas, pudindose hasta doblar los valores de referencia entre los primeros y los ltimos.
Estas variaciones hacen recomendable establecer valores de referencia segn el grupo tnico.
La creatina quinasa (EC 2.7.3.2) es una enzima dimerica, compucsta por dos subunidades
polipcptidicas denominadas M (tipo muscular) y B (tipo cerebral) y que poseen una masa molar
de alrededor de 43 000 g/mol (I). Estas cadenas polipcptidicas tienen un origen genetico
dislinto, dada su dislinta composici6n en aminoacidos y la ausencia de reaeciones
inmunol6gicas cruzadas entre elias. De las distintas uniones entre los dos mon6meros se forman
tres isoenzimas con una masa molar de 80 000 g/mol (2):
Creatina quinasa I: Constituida por dos mon6meros B. Predomina en musculo liso

(cerebro mayoritariamente)
Creatina quinasa 2: Constituida por un mon6mero M y otro B. Predomina en miocardio.
Creatina quinasa 3: Constituida por dos mon6meros M. Predomina en msculo
esqueltico.
Los incrementos CK BB aparecen en determinados tipos de cncer (prstata, pulmn), ciruga

cardiaca, traumatismo cardiaco, enfermedades del tejido conectivo.
Los aumentos de CK MB se presentan en enfermedades miopticas y enfermedades
inflamatorias del corazn. En el infarto de miocardio la fraccin de actividad total CK MB es
>0.06, mostrando las determinaciones seriadas, picos de rpido ascenso y descenso.
Los lpidos y las lipoprotenas pueden formar complejos con la CK o macro CK. El complejo
migra entre CK MM y CK MB.

Los inmunocomplejos de interbanda con BB o MM pueden determinar
resultados de MB falsamente positivos en las tcnicas de inmunodifusin y en columna.
1.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Interpreta los protocolos estandarizados segn el reactivo utilizado. Describe el proceso de
dilucin de muestras concentradas y reconoces las unidades de expresin en los resultados
obtenidos.
- Procedimentales:
Grfica de la cintica de una reaccin enzimtica. Reconoce y usa los instrumentos y
unidades de medicin volumtrica. Determina la actividad Creatinkinasa y la Isoenzima
CreatinKinasa (CK-MB) en suero humano. Resuelve problemas propuestos sobre unidades del
SI, diluciones.
- Actitudinales:
Demuestra capacidad analtica, diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las
reglas acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
1.3 MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS CANT

Reactivo CK-NAC VALTEK 20mL
MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT
Reactivo CK-MB (NAC) VALTEK 20mL
Piceta 500ml. 5
Micropipeta (100 - 1000) 4 PERECIBLES CANT
Micropipeta (10 - 100) 4 Tubos Vacuteiner sin aditivo 10
Cronometros 4 Agujas para toma de muestra 10
Gradillas de metal 8 Capuchn 5
Tubos de ensayo 13x100 90 Algodn 20 g
Espectrofotometro 1 Alcohol 70 5 mL
Bao maria 1 Puntas amarillas 30
Centrifuga 1 Puntas azules 30
1.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto
1.5 RESULTADO
Reporte de los resultados de las muestras segn el formato del protocolo del reactivo de
trabajo
Interpretacin de los resultados segn los valores referenciales
Mencin de los problemas presentados en la realizacin de la prctica que influyan en el
resultado
Numeracin de las posibles soluciones.
1.6 CUESTIONARIO
a) Cul es la metodologa aplicada para el desarrollo de la prctica para CK total y CK-MB?

b) Qu significa reaccin de primer orden, segundo orden y orden cero? Grafique.
c) En qu orden de reaccin se realiza la lectura de las absorbancias?
d) Cul es el fundamento de la determinacin del CK-MB?
e) En qu consiste el DELTA de Absorbancia en el mtodo de Cintico?
f) Qu son las macroquinasas y cuando se presentan?
g) Cundo se presenta una sobrestimacin de la CK-MB? Cite un ejemplo.
h) Qu otros marcadores de infarto de corazn existen?

i) Cul es el tiempo de aparicin de dichos marcadores?
j) Qu es la Troponina y cuantas clases hay?
1.7 FUENTES DE INFORMACION
Agatngelo Jos, Latorre Jos, Navarro Ricardo. Gua prctica: Marcadores Bioqumicos
Cardacos en sangre en el Sndrome Coronario Agudo. En lnea
http://www.google.com.pe/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=9&cad=rja&uact=8
&ved=0CE0QFjAI&url=http%3A%2F%2Fwww.gastrosoler.com%2FGu%25C3%25ADa%2520pr%25C
3%25A1ctica%2520marcadores%2520cardiacos%2520con%2520capitulo%2520XIII%2520editorial
%25202009%2520final.pdf&ei=hi7mVJWzL4yoNtakg_gK&usg=AFQjCNFqm3HjuEBJHh7l0vsxydP
9NM8Stw&bvm=bv.85970519,d.eXY
Calmarza Pilar, Vzquez Jos l. Sobrestimacin de la CK-MB obtenida por inmunoinhibicin
debido a la presencia de macro-CK tipo I. Rev Electron Biomed . Espaa. 2004;1:63-67.
Galan Onega, D. Balsells Rosell y col. Recomendaciones para la determinacin de isoenzimas
de la creatina quinasa en suero sanguneo humano. Sociedad Espaola de Bioquimica Clinica
y Patologa Molecular. Rev. Qumica Clnica 1996; 15 (I), 53-56
Guzmn Ana, Quiroga Teresa. Troponina en el diagnstico de infarto al miocardio:
Consideraciones desde el laboratorio clnico. Rev Med Chile 2010; 138: 379-382
Soto Jorge. Mediciones de Creatinkinasa Srica como Biomarcador en el Control del
Entrenamiento Deportivo. En lnea http://g-se.com/es/evaluacion-
deportiva/blog/mediciones-de-creatinkinasa-serica-como-biomarcador-en-el-control-del-
entrenamiento-deportivo

PRACTICA N 02
Determinacin de la actividad Lactato Deshidrogenasa y Gamma-

glutamiltranspeptidasa en suero. Principios de espectrofotometra y mtodo de
Punto Final. Resuelve problemas propuestos sobre unidades del SI, diluciones.
2.1 MARCO TERICO
LCTICO DESHIDROGENASA
La lctico deshidrogenasa (LD; EC 1.1.1.27) o LDH, es una enzima del metabolismo intermedio
presente en todas las clulas del organismo bajo cinco formas isoenzimticas diferentes. Los
distintos tejidos contienen diferentes cantidades y formas de esta enzima, as mientras corazn,
rin, cerebro y hemates.
Esta enzima est formada por la asociacin de cinco cadenas peptdicas de dos diferentes tipos de
monomeros: M y H.Las variantes encontradas en el ser humano son:
LDH1: M M M M (abundante en el corazn, el cerebro y

los eritrocitos; alrededor del 33 % de la LDH en el suero
humano es de este tipo)
LDH2: M M M H (abundante en el corazn, el cerebro y
los eritrocitos; alrededor del 45 % de la LDH en el suero
humano es de este tipo)
LDH3: M M H H (abundante en el cerebro, los riones y
los pulmones; constituye alrededor del 18 % de la LDH
en suero humano)
LDH4: M H H H ((abundante en el hgado, musculo
esqueltico y el tejido renal; constituye alrededor del
3 % de la LDH srica)
LDH5: H H H H (abundante en el tejido heptico,
musculo esqueltico y el ileo; apenas hasta 1 % de la
LDH del suero humano es LDH5)
GAMMA-GLUTAMILTRANSPEPTIDASA
La gamma glutamil transferasa (EC. 2.2.3.2.) tambin llamada: GGT, gamma

glutamiltranspeptidasa, glutamina:D-glutamil pptido 5-glutamil transferasa; es una glicoprotena
heterodimrica unida a la membrana plasmtica que desempea una funcin fundamental en el
metabolismo del glutatin y el transporte de aminocidos, catalizando la transferencia de grupos -
glutamil de un aminocido a otro o de un pptido a un aminocido y se relaciona directamente con
el metabolismo del glutatin.
La GGT est presente en las membranas celulares de muchos tejidos, incluyendo los riones, el
conducto biliar, pncreas, hgado, bazo, corazn, cerebro, y las vesculas seminales como tambin
lo son las transaminasas y el lactato deshidrogenasa. Est involucrada en la transferencia de
aminocidos a travs de la membrana celular y el metabolismo de los leucotrienos. Su rol principal

es en el metabolismo del glutatin mediante la transferencia de la fraccin
glutamil a una variedad de molculas aceptoras como el agua, algunos L-aminocidos y pptidos,
dejando el producto cistena para preservar la homeostasis intracelular del estrs oxidativo. En
general la reaccin es:
(5-L-glutamil)-pptido + un aminocido pptido + 5-L-glutamil-aminocido. Glutation (5-L-
Glutaminil-cisteinil-glicina) + un aminocido = Cisteinil-glicina + 5-L-Glutamil-aminocido
Valores sricos elevados de la GGT pueden ser encontrados en enfermedades hepticas, del
pncreas y de la va biliar. Al estar elevada en conjunto a la fosfatasa alcalina, el diagnstico
orienta altamente a enfermedad de la va biliar. An no se sabe exactamente si la GGT tiene mayor
sensibilidad para la enfermedad colestsica en comparacin con la fosfatasa alcalina. La utilidad de
la elevacin de la GGT yace en descartar que el aumento de la fosfatasa alcalina no provenga de
alguna patologa sea.
La GGT tambin se eleva posterior al consumo excesivo de alcohol. Elevaciones aisladas o

desproporcionadas en comparacin con el aumento del resto de otras enzimas hepticas puede
indicar abuso de alcohol o hepatitis alcohlica. El aumento puede permanecer incluso 3-4 semanas
despus de la ingesta. Se desconoce el mecanismo por el cual ocurre este aumento. El alcohol
puede aumentar ya sea la sntesis de GGT va induccin microsomal o la salida de la enzima
directamente desde los hepatocitos.
2.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Interpreta los protocolos estandarizados segn el reactivo utilizado. Describe el proceso de
dilucin de muestras concentradas y reconoces las unidades de expresin en los resultados
obtenidos.
- Procedimentales:
Determina la actividad lactato deshidrogenasa y Gamma-glutamiltranspeptidasa en suero.
Disea una curva de calibracin por el mtodo de espectrofotometra.
- Actitudinales:

2.3 MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES Y/ EQUIPOS CANT REACTIVOS CANT

Piceta 500ml. 5 Reactivo lactato deshidrogenasa Valtek 20mL
Micropipeta (100 - 1000) 4 Reactivo -glutamil transpeptidasa VALTEK 20mL
Micropipeta (10 - 100) 4 Permanganato de potasio 1% 20mL
Cronometros 4
Gradillas de metal 8 PERECIBLES CANT
TUBOS DE ENSAYO 13x100 90 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Espectrofotmetro 1 Agujas para toma de muestra 10
Bao maria 1 Capuchn 5
Centrifuga 1 Algodn 20 g
Alcohol 70 5 mL
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
2.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto
2.5 RESULTADO
trabajo
Interpretacin los resultados segn los valores referenciales
Mencin y comentario de los problemas presentados en la realizacin de la prctica que
influyan en el resultado
2.6 CUESTIONARIO
a) Por qu la hemlisis incrementa considerablemente los niveles de LDH?
b) Qu relacin existe entre la LDH y el sndrome de Lisis Tumoral?
c) Qu indica una elevacin del nivel de LDH en Liquido Cefalorraquideo?
d) El cdigo enzimtico de la Gamma-glutamiltranspeptidasa es EC. 2.2.3.2 Qu significa esto?
e) En una colestasis Cules son las enzimas que se encuentran elevadas en su actividad?
f) Qu es el Glutation y cul es su funcin?
g) Se puede medir glutation en sangre? Qu metodologa se utiliza?
Aranda, Eduardo. Interpretacin de la deshidrogenasa lctica. Rev Soc Bol Ped Bolivia: 2010;
49 (2): 132 4
Prez L, Bequer L, Gmez T, Gonzlez O, Heredia D, Molina O, Actividad de la Gamma
Glutamil transferasa srica: distribucin estadstica, variaciones segn edad y sexo e
intervalos de referencia en Villa Clara. Acta Bioclinica. Cuba: Vol 3, N6, Julio-Diciembre
2013.
Snchez, C. Olivers, M. Pea, J. Hurtado, A Samaniego M. Isoenzimas de lactato
deshidrogenasa en el suero y aspirado bronquial de recin nacidos con dificultad respiratoria
de etiologa diversa. Anales espaoles de pediatra. Espaa.1996.

PRACTICA N 03:
Cuantificacin de la glucemia. Diseos y desarrollo de la prueba de tolerancia a la

glucosa y prueba de glucosa post prandial. Resuelve problemas de concentracin y
conversin de unidades
3.1 MARCO TERICO
La Diabetes Mellitus (DM), es una enfermedad crnicodegenerativa, no infectocontagiosa,

incurable, pero controlable, que afecta al 15% de la poblacin mundial, de esta proporcin de la
poblacin, a la Diabetes Mellitus Tipo (DM1), le corresponde el 10%, mientras que a la Diabetes
Mellitus Tipo 2 (DM2), el 85%.
La Prueba de Tolerancia a la Glucosa es un estudio que se utiliza en todo el mundo para identificar
y clasificar pacientes con diversos grados de alteracin en la tolerancia a la glucosa, especialmente
en mujeres embarazadas y en pacientes asintomticos con factores de riesgo.
Se sabe mediante estudios epidemiolgicos que la Prueba de Tolerancia a la Glucosa supera a la
determinacin basal de glucosa sola o en combinacin con la hemoglobina glucosilada para el
diagnstico temprano de diabetes mellitus o intolerancia a la glucosa, y no para el seguimiento en
pacientes diabticos sintomticos.
3.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Interpreta los protocolos estandarizados segn el reactivo utilizado. Evala el desarrollo de
la Prueba de Glucosa basal y Tolerancia a la Glucosa, teniendo en cuenta sus requisitos y las
dificultades en el proceso. Interpreta la curva de la prueba de Tolerancia a la Glucosa
- Procedimentales:
Determina los niveles de la glicemia. Disea la curva de la prueba de tolerancia a la glucosa.
Realiza la prueba de glucosa post-prandial. Resuelve problemas de espectrofotometra y
curva de calibracin.
- Actitudinales:
MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT PERECIBLES CANT

Piceta 500ml. 5 Tubos vacuteiner sin aditivo 30
Micropipeta (100 - 1000) 4 Agujas para toma de muestra 30
Micropipeta (10 - 100) 4 Capuchn 5
Cronmetros 4 Algodn 50 g
Gradillas de metal 8 Alcohol 70 5 mL
Tubos de ensayo 13x100 90 Puntas amarillas 30
Espectrofotmetro 1 Puntas azules 30
Bao mara 1
Centrifuga 1
REACTIVOS CANT
Reactivo de Glucosa-Oxidasa Valtek 50mL
Glucosa (Estandar) Valtek 0.5mL

3.4 PROCEDIMIENTO
Tomar muestra de suero o plasma al paciente en estado de ayunas (min 8 horas).

Determinar la glicemia y evaluar al paciente si puede proseguir con la prueba.
Si el paciente se encuentra apto, preparar la sobrecarga de glucosa agregando 1.75g de
glucosa anhidra por kilogramo de peso del paciente hasta un mximo de 75g en 300mL de
agua y lo tomar en un tiempo mximo de 5 min.
Luego tomar muestras de sangre cada 30 min hasta las 2 horas (el paciente debe de estar en
reposo durante toda la prueba)
Medir la glicemia segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo
provisto.
Graficar los niveles de glucosa segn el tiempo de extraccin de la muestra en papel
milimetrado
3.5 RESULTADO
trabajo
Interpretacin de los resultados segn los valores referenciales
Interpretacin de la grfica de la Curva de la Tolerancia oral a la Glucosa.
Comentario de los problemas presentados en la realizacin de la prctica que influyan en el
resultado
3.6 CUESTIONARIO
a) Cul es el principio del Floruro de Sodio para inhibir la gluclisis de los hemates?
b) Cules son las dificultades que se pueden presentar en el desarrollo de la prueba de
Tolerancia a la glucosa?
c) Cules son los criterios que inhabilitan el desarrollo de la prueba?
d) En qu casos se suspende la prueba?
e) Qu es el test de OSullivan, en qu casos se utiliza?
f) Cmo se mide la insulina en sangre, cuales son los valores referenciales?
g) Qu es el Pptido C, cul es su utilidad diagnstica, cmo se mide en laboratorio cules son
los valores referenciales?
Aguilar M. Criterios diagnsticos de la diabetes mellitus: Un debate permanente. Av Diabetol

2001; 17: 133-140
Almirn M, Gamarra S, Gonzlez M. Diabetes gestacional. Revista de Posgrado de la VIa
Ctedra de Medicina N 152.2005
Benzadn M, Forti L, Sinay I. Actualizacin en el diagnstico de la diabetes. Rev MEDICINA
2014; 74: 64-68
Diabetes mellitus: Definicin y Etiopatogenia. [En linea]
http://escuela.med.puc.cl/paginas/cursos/tercero/IntegradoTercero/ ApFisiopSist/
nutricion/NutricionPDF/DiabetesMellitus.pdf.
Ferran Rius Riu. La hemoglobina glucosilada como criterio diagnstico de diabetes
mellitus.Rev Endocrinologa y Nutricin. 2010;57(4):127129
Olivares Reyes J, Arellano Plancarte A. Bases moleculares de las acciones de la insulina. REB
27 2008 (1): 9-18
Trujillo Arriaga H. La curva de tolerancia a la glucosa oral. Un enfoque alternativo. Rev
ContactoS 64. 2007:2124

PRACTICA N 04:
Determinacin cuantitativa de Hemoglobina y Hemoglobina glicada. Precisin y

exactitud de las mediciones.
4.1 MARCO TERICO
LA HEMOGLOBINA es una heteroprotena de la sangre, de masa molecular de 64.000 g/mol (64

kDa), de color rojo caracterstico, que transporta el oxgeno desde los rganos respiratorios
hasta los tejidos, el dixido de carbono desde los tejidos hasta los pulmones que lo eliminan y
tambin participa en la regulacin de pH de la sangre. La forman cuatro cadenas polipeptdicas
(globinas) a cada una de las cuales se une un grupo hemo, cuyo tomo de hierro es capaz de
unir de forma reversible una molcula de oxgeno
Si una prueba de hemoglobina revela que el nivel de hemoglobina es menor de lo normal,

significa que tiene un bajo recuento de glbulos rojos (anemia). La anemia puede tener muchas
causas diferentes, incluyendo deficiencias de vitaminas, hemorragias y enfermedades crnicas.
Si una prueba de hemoglobina muestra un nivel ms alto de lo normal, hay varias causas
posibles, como la policitemia vera, vivir en una altitud elevada, el tabaquismo, la
deshidratacin, quemaduras y vmitos excesivos.
LA HEMOGLOBINA GLICOSILADA (o glucosilada) es una heteroprotena de la sangre que resulta

de la unin de la hemoglobina (Hb) con glcidos unidos a cadenas carbonadas con funciones
cidas en el carbono 3 y el 4.
La medicin de la Hb glucosilada es una prueba de laboratorio muy utilizada en la diabetes
para saber si el control que realiza el paciente sobre la enfermedad ha sido bueno durante los
ltimos tres o cuatro meses (aunque hay mdicos que consideran slo los dos ltimos meses).
De hecho el 50% del resultado depende slo de entre las cuatro y seis ltimas semanas.
4.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Describe los procedimientos para determinar la concentracin de Hemoglobina y el
porcentaje de hemoglobina glicosilada. Evala los valores de tendencia central y de
dispersin para interpretar los niveles de Precisin y Exactitud.
- Procedimentales:
Determina cuantitativamente la concentracin de Hemoglobina y Hemoglobina glucosilada.
Determina la precisin y exactitud de las mediciones.
- Actitudinales:

MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT REACTIVOS CANT

Beaker 100ml. 4 Reactivo Drabkin Hemoglobina Valtek 50 ml
Probeta 100ml. 4 Estandar Hemoglobina Valtek 5 mL
Pipeta serolgica 5ml. 4 Kit De Hemoglobina Glicada 5U
Pipeta serolgica 10ml. 4
Propipetas de jebe 4
Piceta 500ml. 5
Micropipeta (10 - 100) 4 Tubos vacuteiner con edta k3 10
Cronmetros 4 Agujas para toma de muestra 10
Gradillas de metal 8 Capuchn 5
Tubos de ensayo 13x100 90 Algodn 20 g
Espectrofotmetro 1 Alcohol 70 5 ml
Bao mara 1 Puntas amarillas 30
Centrifuga 1 Puntas azules 30
4.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto para
Hemoglobina y Hemoglobina Glucosilada.
Realizar las mediciones de hemoglobina por cuadriplicado
4.5 RESULTADO
Reporte de los valores de hemoglobina y Hemoglobina glicosilada.
Anlisis de los valores de las medidas de tendencia central y de dispersin de los datos de
Hemoglobina.
Determinacin de la Precisin y Exactitud con los valores de Desviacin Estandar y
Coeficiente de variacin.
4.6 CUESTIONARIO
a) Por qu se dice que la Hemoglobina es un quelato de Hierro?
b) Qu es la HbAc1?
c) Cul es el fundamento de la determinacin de la Hemoglobina Glicosilada?
d) Qu diferencia existe entre Glicacin y glucosilacin?
e) Qu es la glucosilacin y porqu lo realiza nuestro organismo?
f) Qu diferencia existe entre un control y un calibrador?
g) Qu es la grfica de Levey-Jennings y en qu consiste?
h) Qu son las reglas de Westgard y cules son?

Cohen E. La glicosilacin no enzimtica: una va comn en la diabetes y el envejecimiento.
Med Cutan Iber Lat Am 2011;39(6):243-246
Condori M, Morales L. Calidad en el laboratorio de bioqumica: concepto, herramientas y
ejemplos de aplicacin. Curso de formacin continuada a distancia 2011-2012. Asociacin
Espaola de Biopatologa Mdica. Espaa 2012.
Lpez E, Oliveira M, Arenas A, Maci C, Gutirrez B, Gacimartn M, Venta R. Hemoglobina
glicosilada: nuevas indicaciones en la diabetes. Boletn Informativo: Hospital San Agustn.
Unidad de Gestin Clnica de Anlisis Clnicos. Bioqumica 2013, Vol 13 Nm. 1
Mnera M, Restrepo M, Gmez L. Mesa D, Ramirez B. Hemoglobina glicosilada A1c vs.
Glucemia plasmtica en ayunas de pacientes ambulatorios de un laboratorio mdico. Rev.
salud pblica 2011. 13 (6): 980-989

PRACTICA N 05:
Determinacin de Triglicridos en suero. Resuelve problemas de Espectrofotometra y

Mtodo Cintico
5.1 MARCO TERICO
Los triglicridos son el principal tipo de grasa transportado por el organismo. Recibe el nombre
de su estructura qumica. Luego de comer, el organismo digiere las grasas de los alimentos y
libera triglicridos a la sangre. Estos son transportados a todo el organismo para dar energa o
para ser almacenados como grasa.
El hgado tambin produce triglicridos y cambia algunos a colesterol. El hgado puede cambiar
cualquier fuente de exceso de caloras en triglicridos. Los niveles de triglicridos varan con la
edad, y tambin dependen de qu tan reciente ingiri alimentos antes del examen.
La medicin es ms precisa si no se ha comido en las 12 horas previas al examen. El valor

normal es de 150 mg/dL. Para quienes sufren problemas cardiacos, los niveles de esta sustancia
deben ser inferiores a los 100 mg/dl.
Si el colesterol tiene un valor normal, un nivel elevado de triglicridos no parece ser un factor
de riesgo de enfermedad cardiaca, pero s puede ser riesgoso al asociarse con diabetes y
pancreatitis
Qu causa los altos niveles de triglicridos?
Puede tener varias causas:

Exceso de peso: los triglicridos aumentan generalmente a medida que aumenta el peso.
Lea nuestro artculo Consejos/Tips para perder peso
Consumo excesivo de caloras: Los triglicridos se elevan a medida que se aumenta de peso
o se ingieren demasiadas caloras, especialmente provenientes de azcar y del alcohol. El
alcohol aumenta la produccin de triglicridos en el hgado. La dieta mediterrnea es ideal
para disminuir sus triglicridos.
Edad: los niveles de triglicridos aumentan regularmente con la edad
Medicamentos: Algunas drogas como los anticonceptivos, esteroides, diurticos causan
aumento en los niveles de los triglicridos.
Enfermedades: La diabetes, el hipotiroidismo, las enfermedades renales y hepticas estn
asociadas con niveles altos de triglicridos. Entre los grupos que deben vigilar con mayor
cuidado su nivel de triglicridos se encuentran los diabticos y las mujeres despus de la
menopausia. Ms de un 75% de los diabticos tienen los niveles de triglicridos altos y el 30%
de las mujeres que han pasado por la menopausia sufren de este mismo problema.
Herencia: algunas formas de altos niveles de triglicridos ocurren entre miembros de una
misma familia.
5.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Definir el concepto de triglicridos, conformacin y estructura, as como el fundamento de
su medicin en sangre y las enfermedades que involucran la elevacin de su concentracin.
- Procedimentales:
Determina los triglicridos en suero. Tema de discusin: Tejido adiposo: obesidad. La
leptina y adiponeptina. Resuelve casos de Trigliceridemia y problemas con diluciones.
- Actitudinales:

MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT PERECIBLES CANT
Piceta 500ml. 5 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Micropipeta (10 - 100) 4 Capuchn 5
Cronmetros 4 Algodn 20 g
Gradillas de metal 8 Alcohol 70 5 ml
Tubos de ensayo 13x100 90 Puntas amarillas 30
Espectrofotmetro 1 Puntas azules 30
Bao mara 1
Centrifuga 1 REACTIVOS CANT
Reactivo Trigliceridos Gpo-Pap Valtek 40 ml
Estandar Trigliceridos Valtek 0.5 ml
5.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto.

Resuelve problemas de diluciones.
5.5 RESULTADO
Reporte de la concentracin de triglicridos en sangre.

Reporte de la dilucin adecuada que se aplicar a una muestra lipmica
5.6 CUESTIONARIO
a) Cul es la estructura de un Triglicrido?

b) Cmo se forman los triglicridos endgenos?
c) Cules son las enfermedades que presentan elevados niveles de triglicridos?
d) Cules son los sntomas de trigliceridemia?
e) Qu procedimiento realizara usted para eliminar la interferencia de la lipemia en las
determinaciones espectrofotomtricas?
Domnguez A. Adiponectina: El tejido adiposo ms all de la reserva inerte de energa.

Revista de Endocrinologa y Nutricin 2007. Vol. 15, No. 3
Lpez C, Maselli M, Di Milta N, Recalde G, Vanrell G, Uvilla A, Messina D, Prez R, Lpez J.
Influencia de la leptina y la adiponectina sobre el cncer de prstata. Arch. Esp. Urol. 2009;
62 (2): 103-108
Prez C, Ortiz H, Rodrguez M, Sanctis J. Efectos de los lpidos de la dieta en la contraccin
vascular y la concentracin de derivados del xido ntrico en plasma de ratas. Archivos
Venezolanos de Farmacologa y Teraputica. Vol 26, nmero 2. 2007
Pinto X. Protocolos hipertrigliceridemias. Sociedad Espaola de Medicina Interna 2008

PRACTICA N 06:
Cuantificacin de Colesterol total y sus fracciones. Adaptacin y cambios de la

metodologa. Desarrollo de la frmula de Friedewald. Determinacin de los ndices de
Castelli. Desarrolla protocolos con frmula completa de espectrofotometra
6.1 MARCO TERICO

El colesterol es un esterol (lpido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma
sanguneo. Se presenta en altas concentraciones en el hgado, mdula espinal, pncreas y
cerebro. Pese a que las cifras elevadas de colesterol en sangre tienen consecuencias
perjudiciales para la salud, es una sustancia esencial para crear la membrana plasmtica que
regula la entrada y salida de sustancias en la clula. El nombre de colesterol procede del
griego kol bilis y stereos slido, por haberse identificado por primera vez en
los clculos de la vescula biliar por Michel Eugne Chevreul quien le dio el nombre de
colesterina, trmino que solamente se conserv en el alemn (Cholesterin)
El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de lpidos que son
transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoprotenas plasmticas. La
determinacin de estos parmetros es un procedimiento analtico bsico para el diagnstico y
seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Entre estos parmetros
analticos que se pueden determinar estn: el colesterol total, el colesterol transportado por
las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los triglicridos totales, ciertas apoprotenas
particulares etc.
Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares, en
especial aquel unido a las LDL (colesterol malo). El colesterol de las HDL (colesterol bueno),
puesto que representa aquella fraccin de colesterol que se transporta al hgado para su
metabolizacin y excrecin por va biliar, no se asocia con riesgo de enfermedad
6.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Define el Colesterol y sus fracciones que se hallan en el plasma sanguneo. Describe la
metodologa de su determinacin y evala su fundamento.
- Procedimentales:
Cuantifica el colesterol total y sus fracciones. Desarrolla la frmula de Friedewald.
Determina los ndices de Castelli. Adapta y cambia el protocolo de trabajo. Desarrolla
- Actitudinales:

REACTIVOS CANT
MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT Reactivo Colesterol Chod-Pap Valtek 50 ml
Piceta 500ml. 5 Estandar Colesterol Valtek 1 ml
Micropipeta (100 - 1000) 4 Reactivo Precipitante Col - Hdl Valtek 20 ml
Micropipeta (10 - 100) 4 Reactivo Precipitante Col - Ldl Valtek 20 ml
Cronmetros 4
PERECIBLES CANT
Gradillas de metal 8
Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Tubos de ensayo 13x100 90
Agujas para toma de muestra 10
Espectrofotmetro 1
Capuchn 5
Bao mara 1
Algodn 20 g
Centrifuga 1
Alcohol 70 5 ml
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30

6.4 PROCEDIMIENTO
6.5 RESULTADO
Demuestra el fundamento de los valores de los factores para el HDL y LDL

Presentacin de la concentracin de Colesterol Total, HDL y LDL de una muestra de sangre.
Determinacin del VLDL segn la frmula de Friedewall.
Determinacin los valores de los ndices de Castelli.
Resolucin de problemas de Espectrofotometra con la formula madre.
6.6 CUESTIONARIO
a) Demuestra el fundamento para demostrar la expresin de la formula madre en

espectrofotometra
b) Por qu son importantes los ndices de Castelli?
c) Cules son los valores que definen los ndices de Castelli?
d) Cules son las enzimas que intervienen en el metabolismo de las lipoprotenas y dnde se
encuentran?
e) Por qu se elevan las concentraciones de Colesterol Total en sangre principalmente en las
mujeres?
f) Qu enfermedades se relacionan con el incremento de Colesterol Total en sangre?
g) Qu es la Homocistena y para que nos es til conocer su concentracin en sangre?
h) Qu otros marcadores pueden ser til para conocer el riesgo coronario?
Maiz A. El sndrome metablico y riesgo cardiovascular. Boletin de la Escuela de Medicina

vol 30 N1 2005
Martnez M, Lozano de Castro J. Hipertrigliceridemia y preeclampsia: papel fisiopatolgico y
evidencia actual. MedUNAB Vol. 8 No. 2 Agosto 2005
Miguel P. Dislipidemias. ACIMED. 2009; 20(6): 265-273
Miguel P. El sndrome metablico: un alto riesgo para individuos sedentarios. ACIMED. 2009;
20(1)
Milln J, Pint X, Muoz A, Ziga M, Rubis J, Pallardo L, Masana L, Mangas A, Hernndez
A, Gonzlez P, Ascaso J, Botet J. Cocientes lipoproteicos: significado fisiolgico y utilidad
clnica de los ndices aterognicos en prevencin cardiovascular. Clin Invest Arterioscl.
2010;22(1):25-32
Siniawskimtsac D, Massonmtsac W, Sorroche P, Casaas L, Kraussmtsac J, Cagide A.
Correlacin entre las razones apolipoprotena B/apolipoprotena A1 y colesterol
total/colesterol-HDL en una poblacin saludable: debera actualizarse el ndice de Castelli?
Rev Argentina de Cardiologa. vol 79 N 1. Ene-feb.2011

PRACTICA N 07:
Determinacin de Bilirrubina y sus fracciones en sangre. Factores que alteran la

Bilirrubina en la muestra. Cuantificacin de Amilasa pancretica en suero. Resuelve
problemas de protocolos con frmula completa de espectrofotometra
7.1 MARCO TERICO
LA BILIRRUBINA es un pigmento biliar de color amarillo anaranjado que resulta de la

degradacin de la hemoglobina de los glbulos rojos reciclados. Dicha degradacin se produce
en el bazo. Ms tarde la bilirrubina se conjuga en el hgado. Estos pigmentos se almacenan en
la vescula biliar formando parte de la bilis (que luego es excretada hacia el duodeno, lo que da
el color a las heces).
Esta biomolcula se forma cuando los eritrocitos desaparecen del aparato circulatorio, por su
extrema fragilidad, cuando han alcanzado la plenitud de su vida (aproximadamente 120 das).
Su membrana celular se rompe y la hemoglobina liberada es fagocitada por los macrfagos
tisulares del organismo, sobre todo los macrfagos del bazo, el hgado y la mdula sea.
En esta degradacin de la hemoglobina, se separan, por un lado, la molcula de globina y, por

otro, el grupo hemo.
La hemooxigenasa degrada el grupo hemo en los macrfagos, abriendo el anillo tetrapirrlico

para dar origen a una molcula lineal de 4 anillos pirrlicos llamada biliverdina, adems de
hierro libre (se oxida el Fe2+ a Fe3+) y CO (monxido de carbono). La biliverdina es luego
reducida por la enzima biliverdina reductasa para dar bilirrubina. Durante las horas o los das
siguientes los macrfagos liberan el hierro de la hemoglobina que ser transportado por la
transferrina hasta la mdula sea (para formar nuevos hemates), o almacenado en el hgado y
otros tejidos en forma de ferritina para situaciones de necesidad.
Los macrfagos de los tejidos transforman la porfirina de la hemoglobina en bilirrubina que

viaja unida a la albmina srica (protena transportadora) por el torrente sanguneo al hgado,
donde se separan, y la bilirrubina se secreta por la bilis (por eso el color amarillo-verdoso de la
bilis) y se degrada.

LA AMILASA, denominada tambin sacarasa o ptialina, es un enzima
hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del
componente -amilasa al digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples. Se
produce principalmente en las glndulas salivales (sobre todo en las glndulas partidas) y en
el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7. Cuando una de estas glndulas se
inflama, como en la pancreatitis, aumenta la produccin de amilasa y aparece elevado su nivel
en sangre (amilasemia).
Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien en un
principio la bautiz con el nombre de "diastasa".
La amilasa sirve en el diagnstico de enfermedades al determinar sus niveles en plasma para

saber si se puede producir una pancreatitis. Sus niveles pueden estar elevados por un dao a las
clulas productoras de la enzima en el pncreas, o bien, por una deficiencia renal (excrecin
reducida) o tambin por paperas.
7.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Define la bilirrubina y sus fracciones, describe su metabolismo y los mtodos de laboratorio
para su determinacin. Describe la amilasa pancretica, su importancia y el mtodo para
determinar su actividad srica.
- Procedimentales:
Cuantifica la concentracin de bilirrubina y sus fracciones en sangre. Determina los factores
que alteran la bilirrubina en la muestra. Modifica el protocolo. Cuantifica los niveles de la
amilasa pancretica en suero. Resuelve problemas de protocolos con frmula completa de
espectrofotometra
- Actitudinales:

Piceta 500ml. 5 Reactivo Bilirrubina Total Y Directa Valtek 30 mL
7.3
Micropipeta (100 - 1000) 4 Reactivo Amilasa Valtek 30 mL
Micropipeta (10 - 100) 4 MATERIALES
Cronmetros 4 Y PERECIBLES CANT EQUIPOS
Gradillas de metal 8 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Tubos de ensayo 13x100 90 Agujas para toma de muestra 10
Espectrofotmetro 1 Capuchn 5
Bao mara 1 Algodn 20 g
Centrifuga 1 Alcohol 70 5 ml
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
7.4 PROCEDIMIENTO

Bilirrubinas Totales y Bilirrubina Directa y para Amilasa.

7.5 RESULTADO
Presentacin de la dilucin adecuada de la muestra para el anlisis.

Reporte de la concentracin de Bilirrubina Total, Bilirrubina Directa y Bilirrubina Indirecta
Reporte de la actividad de Amilasa en suero.

7.6 CUESTIONARIO
a) Se dice que la Bilirrubina es un agente antioxidante. Explique

b) Qu es la Bilirrubina Delta y en qu casos se presenta?
c) Describir el proceso de glucoronizacin de la bilirrubina
d) Cul es la concentracin de Bilirrubinas con el cual ya se puede apreciar una ictericia?
e) Por qu es txica la Bilirrubina en los recin nacidos?
f) Qu otros mtodos existen para el dosaje de Bilirrubinas en suero?
g) Qu es una pancreatitis aguda y como se diferencia de la crnica? Cules son sus causas?
h) Qu es una colestsis y que pruebas de laboratorio se utilizan para su diagnstico?
i) Cules son los mtodos antiguos para el dosaje de amilasa?
j) En qu casos se presenta un incremento de amilasa?
k) Cmo se descartara una elevacin de la actividad de amilasa en suero producto de una
pancreatitis o de una papera?
l) Qu mtodo se utiliza para determinar la actividad de lipasa en suero?
m) Cules son los valores de actividad de lipasa en suero?
Gonzales X. Sindrome de Gilbert: una hiperbilirrubinemia frecuente (Reporte de un Caso).

Rev Med de Costa Rica y Centroamerica 2009: 66(589) 285-287
Hermida J, Tutor M, Tutor J. Lipasa y amilasa total y sus isoenzimas como marcadores de
dao pancretico en pacientes tratados con frmacos antiepilpticos. Rev Farmacia
Hospitalaria Espaa 2007, 31.(5): 303-306
Lopez J. Bilirrubina, una vieja amiga con una nueva historia. Rev de Investigacin Sur de
Mxico. 2,012: 19(4):228-234.
Martnez L. Ictericia neonatal, hiperbilirrubinemia indirecta. CCAP Colombia 2,013, 12(2)

PRACTICA N 09:
Cuantificacin de las Protenas totales y Albmina en suero. Clculo de las globulinas,

ndice A/G. Anlisis y clculos en la grfica del electroforetograma.
9.1 MARCO TERICO
La cuantificacin de protenas presentes en los medios biolgicos (sangre, orina, lquido

cefalorraqudeo) es utilizada como prueba complementaria para ayuda en el diagnstico. Esta
cuantificacin puede englobar al conjunto de protenas, como es el caso de la proteinemia,
proteinuria y proteinorraquia, o referirse a protenas especficas, como albmina, Bence Jones,
-antitripsina, ceruloplasmina, etc.
Las protenas son polmeros complejos de aminocidos que producen las clulas vivas. Cada
forma de vida se define en gran parte por las protenas que produce. Cada protena est
formada por 20 aminocidos en diversas cantidades y secuencias (aminocidos proteicos).
Las protenas pueden ser estudiadas por diversos y muy diferentes mtodos analticos como:
Turbidimetra, Nefelometra, Electroforesis, Electroforesis bidimensinal, Electroforesis capilar
Cromatografa, Enfoque isoelctrico, Inmunoelectroforesis, SDS PAGE.
Las protenas que se analizan con mayor frecuencia son las plasmticas. Sin embargo, tambin
es posible analizarlas en otros lquidos del organismo: Orina, Lquido cefalorraqudeo, Lquido
Pleural, etc.
La mayora de las protenas plasmticas son sintetizadas en el hgado y la principal excepcin
son las inmunoglobulinas, que son producidas por las clulas plasmticas.
Electroforesis de protenas plasmticas:
La electroforesis es la migracin de iones en un campo elctrico. Es una de las tcnicas

analticas ms importantes dentro de la Bioqumica. Las molculas biolgicas (ADN, protenas,
vitaminas, etc.) poseen cargas elctricas, y por tanto poseen esta propiedad de movilidad en
un campo elctrico. La movilidad depender de la carga que presentan al pH que trabajemos.
La electroforesis en gel es el mtodo ms conveniente para realizar separaciones de
macromolculas (ADN y Protenas). El soporte de la electroforesis (el gel) es un entramado
tridimensional que impide o reduce la difusin. Este gel ha de ser compatible con los tampones
usados y debe permitir la entrada del lquido en los poros (reticulados hidratables).
Para llevar a cabo la electroforesis se necesita: A) una fuente de Tensin que proporciona el
campo elctrico, mediante dos electrodos, positivo (nodo) y negativo (ctodo), entre los que
se establece la diferencia de potencial. B) una cubeta o recipiente, en cuyos extremos se
sitan los electrodos. C) un soporte electrofortico. D) el tampn de electroforesis: durante la
electroforesis se produce electrolisis del agua, generndose protones en la proximidad del
nodo e iones hidroxilos en la proximidad del ctodo; el tampn evitar que el entorno andico
se acidifique y el catdico se haga ms bsico a lo largo de la electroforesis.

9.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Describe el proceso del anlisis de cuantificacin de protenas totales y albumina el suero,
segn protocolo de trabajo del reactivo provisto y el proceso de Electroforesis de protenas,
as como su interpretacin y el anlisis de algunas patologas.
- Procedimentales:
Cuantifica las protenas totales y albmina en suero. Calcula las globulinas, ndice A/G.
Analiza y realiza clculos en la grfica del electroforetograma.
- Actitudinales:
9.3 MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS CANT

Reactivo Proteinas Totales Valtek 20 mL
MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT Estandar Proteinas Totales Valtek 0.5 mL
Piceta 500ml. 5 Reactivo Albumina Valtek 20 mL
Micropipeta (100 - 1000) 4 Estandar Albumina Valtek 0.5 mL
Micropipeta (10 - 100) 4
PERECIBLES CANT
Cronometros 4
Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Tubos vacuteiner con edta k3 10
Agujas para toma de muestra 10
Espectrofotometro 1
Capuchn 5
Bao maria 1
Algodn 20 g
Centrifuga 1
Alcohol 70 5 ml
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
9.4 PROCEDIMIENTO
Protenas Totales y Albmina.
Determinacin de reas y sus porcentajes en el electroforetograma presentado y anlisis de
cada patologa en la concentracin de protenas.
9.5 RESULTADO
Presentacin de los resultados de Protena Totales y Albmina.
Determinacin de reas en las grficas de electroforetograma presentado.
Anlisis de las reas segn las posibles patologas.
9.6 CUESTIONARIO
a) Cul es el fundamento bioqumico de la prueba de Protenas totales y Albmina?

b) Qu otros mtodos bioqumicos existen para la determinacin de protenas sricas o
plasmticas? Comentar.
c) Qu diferencia existe entre turbidimetra y nefelometra?
d) Cules son los tipos de electroforesis que se realizan en el laboratorio?
e) Se puede determinar la concentracin de protenas totales en Liquidocefaloraquideo con el
reactivo de Biuret? S, no Por qu?

Corte Z, Zakariya-Yousef Breval F, Lequerica P, Ferreiro N, Gutirrez B, Venta R. Inters
clnico de la electroforesis de protenas. Hospital San Agustn. Servicio de anlisis clnicos.
Bioqumica. Boletin Informativo. Espaa 2008: Vol 9 N1
El proteinograma en la prctica clnica [en lnea] http://www.elsevier.es el 12/03/2015.

PRACTICA N 10:
Determinacin de la actividad de las Transaminasas en suero. Grfico de las curvas

de calibracin de las enzimas ALT y AST. Resuelve problemas sobre concentraciones y
espectrofotometra
10.1 MARCO TERICO
Las aminotransferasas o transaminasas son un conjunto de enzimas del grupo de las

transferasas, pues transfieren grupos amino desde un metabolito a otro, generalmente
aminocidos. Su reaccin es libremente reversible y su constante de equilibrio es cercana a la
unidad. Estas enzimas son inducibles, porque su actividad puede aumentarse por la accin de
diversas hormonas como la tiroxina o los glucocorticoides.
Papel de las aminotransferasas en el metabolismo

Los humanos ingerimos nitrgeno a partir de aminocidos de la dieta, protenas y amonaco
fijado por las nitrogenasas de las bacterias del intestino, el glutamato deshidrogenasa. La
glutamina sintasa convierten el amonaco a glutamato y glutamina respectivamente, de los
cuales las transaminasas transfieren sus grupos amino y amido a otros esqueletos de carbono
por reacciones de transaminacin y transamidacin.
La reaccin de transaminacin tiene lugar en el citosol y en las mitocondrias. Al ser reversibles,
se pueden utilizar los -cetocidos para la sntesis de aminocidos; por ejemplo, si los
alimentos contienen los -cetocidos que corresponden a los esqueletos de carbono de los
aminocidos esenciales podrn sintetizarse estos aminocidos con una simple transaminacin,
catalizada por la aminotransferasa correspondiente. El sentido de la reaccin lo determinan las
concentraciones de productos y reactivos en el hgado porque en ste los metabolitos estn
prximos al equilibrio.
La GOT cataliza la reaccin hacia la formacin de oxaloacetato:
aspartato + -cetoglutarato oxalacetato + glutamato
La GPT cataliza otra reaccin, hacia la formacin de piruvato:
alanina + -cetoglutarato piruvato + glutamato
Los niveles de transaminasas en sangre se utilizan como indicador para detectar posibles
patologas en las funciones del hgado.
Tanto la AST y ALT estn presentes en el suero en concentraciones inferiores a 30-40 Ul/l, pero
si el hgado est daado, la permeabilidad de la membrana celular aumenta y estas enzimas
son liberadas a la sangre en grandes cantidades, hecho que no siempre requiere la necrosis de
los hepatocitos. De hecho, hay escasa correlacin entre el dao celular heptico y el grado de
elevacin de las transaminasas. Prcticamente cualquier enfermedad heptica que comporte
un dao necroinflamatorio puede ser la causa.
Las enfermedades hepticas -hepatitis viral, cirrosis-, el hgado graso, el consumo excesivo de
alcohol, quistes o tumores en el hgado u obstruccin graves de la va biliar pueden provocar un
aumento notable de la transaminasa en sangre.

10.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Define las enzimas Transaminasas, su funcin y sus significancia clnica. Evala la curva de
su actividad enzimtica.
- Procedimentales:
Determina la actividad de las transaminasas. Grafica de las curvas de calibracin de las
enzimas ALT y AST.
- Actitudinales:

Piceta 500ml. 5 Reactivo Transaminasas Punto Final Valtek 60 mL
Micropipeta (100 - 1000) 4 Reactivo Transaminasas Cintica 30 mL
Cronmetros 4 PERECIBLES CANT
Gradillas de metal 8 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Espectrofotmetro 1 Capuchon 5
Bao mara 1 Algodn 20 g
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
10.4 PROCEDIMIENTO
Graficar la curva de calibracin de las transaminasas ALT y AST en papel milimetrado
10.5 RESULTADO
Hallar la dilucin correcta de la muestra en caso de ser necesario.
Determinacin de la actividad de la ALT y AST en la grfica de la curva de calibracin
10.6 CUESTIONARIO
a) Cules son las funciones de las transaminasas dentro de las clulas?
b) En qu rutas metablicas participan las transaminasas?
c) Qu otras metodologas existen para determinar la actividad de las transaminasas?
d) Cul es la utilidad clnica del diagnstico de laboratorio de las transaminasas?
e) Por qu en una cardiopata se observa una elevacin de la AST?
f) En qu otras patologas (adems de las enfermedades que involucran el hgado y corazn)
se pueden observar el aumento de la actividad de las transaminasas?

Avaria M, Beyta M, Kleinsteuber K, Rodillo E, Alegra S. Aumento de transaminasas: una
manifestacin de distrofia muscular de Duchenne. Rev Chil Pediatr 2012; 83 (3): 258-261.
Garca M, Zurita A. Transaminasas: Valoracin y significacin clnica. Protocolos diagnstico-
teraputicos de Gastroenterologa, Hepatologa y Nutricin Peditrica SEGHNP-AEP. [en
lnea] https://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/transaminasas.pdf
Lesmes Molt L , Albail M. Aumento aislado de transaminasas: aproximacin diagnstica.
Form Act Pediatr Aten Prim.2013;6(1)35-42
Vieira Pascual C., Martnez Cerezal C., Brnez Sevilla A., lvarez Montero S.. Evaluacin de
enzimas hepticas alteradas en pacientes con marcadores clnicos diagnsticos negativos.
Medifam [revista en la Internet]. 2002 Mar [citado 2015 Mar 15] ; 12(3): 92-99.
Disponible en: http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1131-
57682002000300007&lng=es. http://dx.doi.org/10.4321/S1131-57682002000300007.

PRACTICA N 11:
Determinacin de la concentracin de cido rico, Urea y Creatinina en suero y su

excrecin en orina. Prueba de depuracin de Creatinina Endgena. Anlisis de las
diferentes frmulas para su determinacin. Resuelve problemas sobre recoleccin de
orina de 24 horas
11.1 MARCO TERICO
Para conocer el estado de la funcin del rin, se realizan un conjunto de pruebas

bioqumicas a partir de muestras de sangre y de orina recogida durante 24 horas, junto con la
observacin al microscopio del sedimento urinario. Estas pruebas ayudan al clnico a enfocar
bien el diagnstico y tratamiento de una enfermedad.
El cido rico es un qumico creado cuando el cuerpo descompone sustancias llamadas purinas,
las cuales se encuentran en algunos alimentos y bebidas, como el hgado, las anchoas, la
caballa, las judas y arvejas secas, y la cerveza.
La mayor parte del cido rico se disuelve en la sangre y viaja a los riones, desde donde sale a
travs de la orina. Si el cuerpo produce demasiado cido rico o no lo elimina lo suficiente, la
persona se puede enfermar. Los altos niveles de cido rico en el cuerpo se denominan
hiperuricemia.
La CREATININA es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina

(que es un nutriente til para los msculos). Se trata de un producto de desecho del
metabolismo normal de los msculos que habitualmente produce el cuerpo en una tasa muy
constante (dependiendo de la masa de los msculos), y que normalmente filtran los riones
excretndola en la orina. La medicin de la creatinina es el modo ms simple de monitorizar la
correcta funcin de los riones.
La Depuracin de Creatinina Endgena o Aclaramiento de Creatinina es una prueba utilizada en

el laboratorio para poder estimar la capacidad de filtracin del glomrulo del nefron, para que
el mdico pueda tener una orientacin sobre el funcionamiento del rin y tomar decisiones
teraputicas en caso lo amerite. Para su determinacin se utilizan varios datos como el peso, la
talla, el volumen recolectado de orina en 24 horas, la edad, el sexo, etc, dependiendo la
frmula que se utilizar para su diagnstico.
La UREA es un compuesto qumico cristalino e incoloro descubierto por Friedrich Whler; de

frmula CO(NH2)2. Se encuentra abundantemente en la orina y en la materia fecal. Es el
principal producto terminal del metabolismo de protenas en el hombre y en los dems
mamferos. La orina humana contiene unos 20 g/L, un adulto elimina de 25 a 39 g diariamente.
Es uno de los pocos compuestos orgnicos que no tienen enlaces C-C o C-H
Se forma en el hgado a partir de la destruccin de las protenas. Durante la digestin las

protenas son separadas en aminocidos, estos contiene nitrgeno que se libera como in
amonio, y el resto de la molcula se utiliza para generar energa en las clulas y tejidos. El
amonio se une a pequeas molculas para producir urea, la cual aparece en la sangre y es

eliminada por la orina. Si el rin no funciona bien la urea se acumula en
la sangre y se eleva su concentracin
11.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Definir e interpretar los niveles de cido rico, Urea y Creatinina es sangre y los valores de
Depuracin de Creatinina. Comparar las frmulas utilizadas para su diagnstico. Determinar
la excrecin en orina de 24 horas
- Procedimentales:
Determina la concentracin de cido rico, urea y creatinina en suero su excrecin en
orina. Determina la depuracin de Creatinina Endgena y evala sus diferentes frmulas.
- Actitudinales:

Beaker 100ml. 4 Reactivo Creatinina - Punto Final Valtek 40 mL
Beaker 500ml. 4 Estandar Creatinina Valtek 2 mL
Probeta 1 litro 3 Reactivo Acido Urico - Trinder Valtek 40 mL
Piceta 500ml. 5 Reactivo Acido Urico Valtek 0.5 mL
Micropipeta (100 - 1000) 4 Reactivo Urea - Punto Final Valtek 40 mL
Micropipeta (10 - 100) 4 Estandar Urea Valtek 2 mL
Cronmetros 4
Gradillas de metal 8 PERECIBLES CANT
Tubos de ensayo 13x100 45 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Espectrofotmetro 1 Agujas para toma de muestra 10
Bao mara 1 Capuchn 5
Centrifuga 1 Algodn 20 g
Alcohol 70 5 ml
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
11.4 PROCEDIMIENTO

Recolectar orina en 24 horas en un frasco limpio.
Determinar el volumen de recoleccin.
Solicitar el peso y la talla.
Determinar la depuracin de creatinina segn las formulas propuestas.
Determinar la excrecin de cido rico, Urea y Creatinina en orina de 24 horas.
11.5 RESULTADO
Reporte de la dilucin necesaria de la recoleccin de orina de 24 horas para la

determinacin de cido rico, urea y creatinina.
Reporte de los resultados de depuracin de creatinina.
Reporte de los resultados de excrecin de cido rico, urea y creatinina.

11.6 CUESTIONARIO
a) Cules son las dificultades que se presentan en la determinacin de la depuracin de

creatinina endgena?
b) La creatinina y la urea srica es til para el diagnstico temprano de enfermedad renal?
por qu?
c) Qu es el BUN y como se determina?
d) Cules son las enfermedades donde se produce un incremento de la concentracin srica
de cido rico?
Martn M, Barroso S, Herrez O, De Sande F, Caravaca F. Cistatina C como estimador de la

funcin renal en estadios avanzados de enfermedad renal crnica. Rev Nefrologa Espaa:
2006; 26(4).
Martinuzzi A, Alcntara S, Corbal A, Di Leo M, Guillot A, Palaoro A, Ferraresi E, Feller C,
Santana S. Nitrgeno ureico urinario como indicador del metabolismo proteico en el
paciente crtico. Rev Cubana Aliment Nutr Cuba 2011;21(2):224-235
Teruel J, Sabater J, Galeano C, Rivera M, Merino M, Fernndez M, Marcn R, Ortuo J. La
ecuacin de Cockroft-Gault es preferible a la ecuacin MDRD para medir el filtrado
glomerular en la insuficiencia renal crnica avanzada. Rev Nefrologa. Espaa 2007. 27(3).

PRACTICA N 12:
Determinacin del Hierro srico y la capacidad de unin del Hierro (TIBC),

Determinacin de la saturacin de Transferrina. Anlisis de la frmula para su
determinacin.
12.1 MARCO TERICO
La capacidad total de transporte de hierro (TIBC) generalmente se utiliza, junto con la

concentracin de hierro srico, para evaluar posibles estados deficitarios de hierro o estados en
el que el hierro se acumula en exceso. La TIBC y el hierro srico se utilizan para calcular la
saturacin de transferrina, que es un indicador ms til del estado del hierro en el organismo,
mejor que cada una de las dos pruebas anteriores aisladamente. En condiciones normales,
entre un 20% y un 40% de los sitios de unin de la transferrina se destinan al transporte de
hierro.
En el dficit de hierro, la concentracin de hierro srico est disminuida pero la TIBC se
encuentra aumentada, y por ello la saturacin de transferrina es muy baja. En caso de
sobrecarga de hierro, como en la hemocromatosis, la concentracin sangunea de hierro est
aumentada y la TIBC es baja o normal, de manera que la saturacin de transferrina aumenta.
Es habitual solicitar la medida de la transferrina (en lugar de la TIBC) cuando se pretende

evaluar el estado nutricional de una persona o su funcin heptica. Como la transferrina se
sintetiza en el hgado, si existe enfermedad heptica sus niveles estarn disminuidos. La
concentracin de transferrina disminuye de forma bastante rpida cuando el aporte diettico
de esta protena es insuficiente, por lo que tambin puede ser til en la monitorizacin del
estado nutricional.
12.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Definir e interpretar los niveles de Ferremia, TIBC y Porcentaje de saturacin de la
transferrina. Interpretar el fundamento de la prueba.
- Procedimentales:
Determina el de hierro srico y la capacidad de unin del hierro (TIBC), Saturacin de
transferrina. Analiza la frmula para su determinacin Resuelve problemas de
concentraciones.
- Actitudinales:

REACTIVOS CANT
MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT
Reactivo Ferremia - Tibc Valtek 50 mL
Piceta 500ml. 5
Estandar Ferremia - Tibc Valtek 10 mL
Cronometros 4 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Gradillas de metal 8 Tubos vacuteiner con edta k3 10
Espectrofotometro 1 Capuchn 5
Bao maria 1 Algodn 20 g
Puntas amarillas 30
Puntas azules 30

12.4 PROCEDIMIENTO
12.5 RESULTADO
Reporte de los valores de Ferremia, TIBC y Porcentaje de saturacin.

Resolucin de ejercicios de Concentraciones en bioqumica,
12.6 CUESTIONARIO
En casos de anemia hipocrmica como se encontraran los valores de Ferremia y TIBC

En que patologa se encontraran un descenso del porcentaje de saturacin.
En qu patologas se encontraran disminuido las reservas de hierro en nuestro cuerpo?
Qu otras pruebas son tiles para observar los depsitos de hierro en nuestro cuerpo?
Foorrellat M, Gautier H, Fernandez N. Metabolismo del hierro. Rev Cubana de Hemat

Inmunol Hemoter Cuba 2000: 16 (3): 149-60
Muoz I, Reinoso F, Lpez A y Hernndez F. Trastornos del metabolismo del hierro. Rev.
Medicine. Madrid 2008;10(20):1318-25
Roque M, Gatti C, Aggio M. Estudios para evaluar el hierro corporal. Ars Pharm
Argentina2005; 46 (2): 181-191.

PRACTICA N 13:
Cuantificacin de la concentracin de Calcio en suero y orina.

Determinacin de la actividad de la Fosfatasa alcalina. Resolucin de problemas de
concentraciones II. Resuelve problemas de Buffer y pH I.
13.1 MARCO TERICO
El CALCIO es el mineral ms abundante en el cuerpo humano. Un adulto por trmino medio

tiene alrededor de 1 kg, 99% de l en el esqueleto en forma de cristales de hidroxiapatita. El
fluido extracelular contiene alrededor de 22,5 mmol, de los cuales alrededor de 9 mmol estn
en el suero. Aproximadamente 500 mmol de calcio son intercambiados entre el hueso y el
lquido extracelular en un da.
El metabolismo del calcio u homestasis del calcio es el mecanismo por el cual el organismo
mantiene adecuados niveles de calcio. Alteraciones en este metabolismo conducen a
hipercalcemia o hipocalcemia, que pueden tener importantes consecuencias para la salud
El calcio est regulado principalmente por las acciones de la vitamina D, la hormona

paratiroidea y la calcitonina. El nico verdadero rgano regulador es la glndula paratiroidea.
Las glndulas paratiroides estn ubicadas detrs del tiroides, y producen la hormona
paratiroidea en respuesta a los bajos niveles de calcio.
Las clulas parafoliculares de la tiroides producen calcitonina en respuesta a los elevados
niveles de calcio, pero su importancia es mucho menor que el de PTH.
La FOSFATASA ALCALINA (EC 3.1.3.1) (50-60 KDa) es una enzima hidrolasa responsable de
eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y
alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosftico se denomina desfosforilacin. Como
sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son ms efectivas en un entorno alcalino.
La fosfatasa alcalina recibe el nombre de orto-fosfrico-monoster hidrolasa. Estas enzimas

proceden de la ruptura normal de las clulas sanguneas y de otros tejidos, muchas de ellas no
tienen un papel metablico en el plasma excepto las enzimas relacionadas con la coagulacin y
con el sistema del complemento. La fosfatasa es una enzima clasificada dentro de las
hidrolasas. Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los
tejidos del organismo, siendo particularmente alta en huesos, hgado, placenta, intestinos y
rin.
Causas de alteracin de la Fosfatada alcalina que no implican enfermedad
Edad. En mayores de 60 aos se pueden obtener elevaciones de la fosfatasa alcalina debido al

proceso de involucin sea. En los nios y adolescentes con crecimiento seo esta enzima est
normalmente elevada ya que una de las mayores fuentes de fosfatasa alcalina es el hueso.
Embarazo. Principalmente durante el tercer trimestre, la placenta produce fosfatasa alcalina,
que est por encima del nivel normal, alrededor de 125 a 250 UI/L. Esta elevacin no es un
motivo de preocupacin, ya que esta enzima es necesaria para la sntesis de protenas en las
clulas y tiene una parte vital en la calcificacin de los huesos y cartlagos.

Hiperfosfatasemia benigna familiar. Se produce cuando hay un aumento
persistente de la fosfatasa alcalina en miembros de una misma familia en ausencia de
enfermedad o causa clara de hiperfosfatasemia. Es poco frecuente y de naturaleza hereditaria.
13.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Definir la accin del calcio en el metabolismo humano y la importancia de la actividad de la
Fosfatasa alcalina en la formacin sea y como marcador de dao heptico.
- Procedimentales:
Cuantifica la concentracin de calcio en suero y orina. Determina la actividad de la
fosfatasa alcalina. Resuelve problemas de concentraciones.
- Actitudinales:

Beaker 100ml. 4 Reactivo Calcio Valtek 50 mL
Beaker 500ml. 4 Estandar Calcio Valtek 2 mL
Probeta 1 litro 3 Reactivo Fosfatasa Alcalina - Ls Valtek 30 mL
Piceta 500ml. 5
Micropipeta (10 - 100) 4 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Cronmetros 4 Tubos vacuteiner con EDTA K3 10
Gradillas de metal 8 Agujas para toma de muestra 10
Tubos de ensayo 13x100 45 Capuchn 5
Espectrofotmetro 1 Algodn 20 g
Bao mara 1 Alcohol 70 5 ml
Centrifuga 1 Puntas amarillas 30
Puntas azules 30
13.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto para la

determinacin de Calcio y la actividad de la Fosfatasa Alcalina en sangre.
13.5 RESULTADO
Reporte de la concentracin de Calcio en sangre.

Reporte de la Actividad de Fosfatasa Alcalina en sangre
Resolucin de problemas de concentracin.
13.6 CUESTIONARIO
a) Cules son las dificultades que se presentan en la determinacin del calcio en sangre?
b) En qu casos existe un nivel elevado de Calcio en orina?
c) Qu otros mtodos existen para determinar Calcio srico?
d) Qu necesita nuestro organismo para poder absorber el calcio de los alimentos?
e) Qu enfermedades produce la falta de calcio en nuestro organismo?
f) Cules son los isoenzimas de Fosfatasas que hay en nuestro organismo y como se
diferencian?

g) En qu casos existe una Fosfatasa alcalina elevada sin ser un caso
patolgico?
h) En qu patologas existe la elevacin de la Fosfatasa alcalina?
Carrascosa Y. PATOLOGA DEL METABOLISMO DEL CALCIO. Asociacin Espaola de Pediatra

Protocolos actualizados al ao 2011;1:177-92
Lpez C, Suero C, Benavente J, Ramrez S. Alteraciones del metabolismo del calcio.
Complejo Hospitalario Carlos Haya. Seccin de Urgencias.[en lnea] http://www. medynet.
com/usuarios/jraguilar/Manual%20de%20urgencias%20y%20Emergencias/trastca.pdf
Snchez R, Fernndez E, Blanco S, Samaniego C. Isoenzimas de fosfatasa alcalina en el suero
de pacientes con insuficiencia renal. An Med Interna Madrid 2002. 19 (9): 449-452.

PRACTICA N 14:
Determinacin de la concentracin de Fsforo en suero y orina. Diagnstico de casos

de acidosis o alcalosis y gases sanguneos. Resuelve problemas de Buffer y pH II.
14.1 MARCO TERICO
Un hombre normal de 70 Kg. contiene aproximadamente 712 gramos o 23.000 mmol de fsforo. El
80% de ste se encuentra en el hueso y el 9% en el msculo esqueltico. La mayor parte del fsforo
en el msculo esqueltico y en las vsceras es intracelular, y su concentracin promedio en el agua
celular es de 100 mmol/l. Mientras el potasio es el principal catin intracelular, el fsforo es el
anin ms importante. El fsforo intracelular se encuentra predominantemente en forma orgnica,
como compuesto intermedio de carbohidratos, lpidos y protenas. Una pequea fraccin es
inorgnica, pero tiene trascendencia biolgica por cuanto es la fuente de resntesis del ATP.
El fosfato se encuentra en el plasma en dos formas, como compuesto ultrafiltrable y unido
a las protenas (Fig. 1). Aproximadamente el 20% del total est ligado a las protenas. El resto, o
fsforo inorgnico (Pi) se encuentra como ortofosfatos, compuestos derivados de la ionizacin
secuencial del cido fosfrico
En los fluidos biolgicos, el Pi se halla en dos formas inicas: el fosfato bivalente y el fosfato
monovalente, y el pK de este par buffer es de 6,8. Al pH normal del plasma, el 80% se encuentra en
la forma bivalente.
DISTRIBUCION DEL FOSFORO EN EL PLASMA
EQUILIBRIO ACIDO BASE
Las clulas del organismo funcionan de manera adecuada cuando se mantienen dentro de ciertos
parmetros como son la temperatura, la adecuada produccin de energa, los niveles de sales, agua
y nutrientes, as como el pH de los fluidos corporales. Sin embargo, como los fluidos corporales
estn formados por agua y substancias disueltas, son susceptibles a tener variaciones en su pH
dependiendo de los alimentos que se ingieran o de reacciones metablicas normales del organismo.
Si estos cambios en el pH son bruscos, pueden llegar a afectar al organismo
Los sistemas amortiguadores ms importantes en la sangre son protenas como la hemoglobina

(HHb), la oxihemoglobina (HHbO2), y los sistemas de bicarbonato (HCO3-1 /H2CO3) y fosfato (H2PO4-1
/HPO4-2). El sistema HCO3-1/H2CO3 predomina en el plasma y fluido intersticial, mientras que el
fosfato (H2PO4-1/HPO4-2) y protenas (Hb/HHbO2) predominan en los espacios intracelulares

14.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Describe la importancia del fosforo en nuestro organismo y la del equilibrio cido-base.
- Procedimentales:
Emite diagnstico de casos de acidosis o alcalosis y gases sanguneos. Determina la
concentracin de fsforo en suero y orina. Tema de discusin: Pruebas bioqumicas en el
LCR.
- Actitudinales:

Beaker 100ml. 4 Reactivo Fosforo - UV Valtek 40 mL
Beaker 500ml. 4 Estandar Fosforo - UV Valtak 2 mL
Probeta 1 litro 3
Piceta 500ml. 5 PERECIBLES CANT
Micropipeta (100 - 1000) 4 Tubos vacuteiner sin aditivo 10
Cronmetros 4 Capuchn 5
Gradillas de metal 8 Algodn 20 g
Tubos de ensayo 13x100 45 Alcohol 70 5 ml
Espectrofotmetro 1 Puntas amarillas 30
Bao mara 1 Puntas azules 30
Centrifuga 1
14.4 PROCEDIMIENTO
Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto para la
determinacin de Fsforo en sangre.
Resuelve problemas de sistemas buffer.
14.5 RESULTADO
Presenta la concentracin de Fsforo de muestras de sangre.
Presenta resultados de los problemas de sistemas buffer.
14.6 CUESTIONARIO
a) Por qu es importante el fsforo en nuestro organismo?
b) Cmo interviene el fsforo en el equilibrio acido-base?
c) Dnde se almacena el fsforo en nuestro organismo?
d) Cules son los sistemas buffer ms importantes de nuestro organismo?
e) Cul es el sistema buffer intracelular y extracelular ms importante?
f) Cmo funciona un sistema buffer?
g) Qu sucedera si no existieran los sistemas buffer?

Cifuentes M. Fisiologa metabolismo del de calcio y fsforo. Indualimentos 2011. [En lnea]
http://www.dinta.cl/wp-dintacl/wp-content/uploads/Metabolismo-Calcio.pdf.
Lobesio C. Metabolismo del fosforo. Libro virtual IntraMed. [En lnea]
https://enfermeriaintensiva.files.wordpress.com/2011/04/metabolismo-del-fosforo-
lovesio.pdf.
Padilla J. Interpretacin Rpida de los Gases Arteriales. Revista de la Facultad de Medicina ,
Universidad de Iberoamrica,UNIBE. 2003 1(3).
Vega E, Konigsberg M. La importancia biolgica de los sistemas amortiguadores. ContactoS
2011. 42 23-27.

PRACTICA N 15:
Examen completo de orina y la lectura de la bioqumica y estudio del sedimento

urinario. Tema de discusin: Pruebas bioqumicas en lquidos serosos.
15.1 MARCO TERICO
Aunque a veces no parezca, el anlisis de la orina es probablemente uno de las mejores

exmenes no invasivos de las que se dispone actualmente. Este anlisis puede dar informacin
acerca de problemas renales, trastornos del sistema urinario e incluso sobre el funcionamiento
general del organismo. Mdicos de la antiguedad como Hipcrates ya saban hace 2500 aos
como diagnosticar la diabetes a partir de la orina.
El uroanlisis es en realidad un conjunto de pruebas que dan una idea general acerca de la
orina desde el punto de vista fsico, qumico y microscpico y de este modo permite obtener
una idea general del estado de salud del organismo. Tanto as que algunos mdicos han llamado
al uroanlisis una biopsia lquida y siempre es uno de las pruebas ms solicitadas al laboratorio
clnico.
15.2 COMPETENCIAS
- Conceptuales:
Describe el anlisis de orina o uroanlisis y su importancia. Analiza sus procesos y evala los
resultados.
- Procedimentales:
Realiza el examen completo de orina y la lectura de la bioqumica y estudio del sedimento
urinario. Tema de discusin: Pruebas del lquido seminal. Espermatograma.
- Actitudinales:

Beaker 100ml. 4 Tiras reactivas para orina 20 u
PERECIBLES CANT
Laminas porta objeto 30
Microscopio 15
Laminar cubre objeto 30
15.4 PROCEDIMIENTO
Recolectar una muestra de orina en un Beaker de 100mL

Vaciar la muestra en un tubo 13x100
Anotar el color y aspecto (fase macroscpica)
Sumergir una tira reactiva por un segundo (fase bioqumica) y luego anotar el pH, densidad
y toda la batera de reacciones que posee.
Centrifugar el tubo con la muestra a una velocidad de 2,700rpm por 5 min
Decantar el sobrenadante y luego depositar una gota del sedimento en una lmina
portaobjetos u colocar un cubreobjetos.
En un microscopio a 400x observar el sedimento (fase microscpica) y anotar por campo:
Leucocitos, hemates clulas epiteliales y las bacterias reportar por cruces.
Si se observan otros cuerpos como cristales o cilindros, reportar segn corresponda.

15.5 RESULTADO
Reporte del examen completo de orina o uroanlisis de la muestra analizada por cada
alumno
Identificacin de cada fase del examen completo de orina.
15.6 CUESTIONARIO
a) Cules son las limitaciones del examen completo de orina?

b) Cules son los pasos necesarios para estandarizar el examen completo de orina?
c) Cmo proceder con una muestra hematrica?
d) Cmo se clasifican los cristales en orina?
e) Qu es el sistema KOVA?
f) Nombre un equipo automatizado para uroanlisis y sus principios
Campusano G, Arbelaez M. Uroanalisis: ms que un examen de rutina. Medicina y

Laboratorio 2006. 12 (11-12)
Campuzano M, Arbelez M. El uroanlisis: un gran aliado mdico. Urologa colombiana 2007.
67-92 [En lnea] http://www.urologiacolombiana.com/revistas/abril-2007/005.pdf.
Gmez R, Pellegrini P. Recomendaciones para el anlisis del sedimento urinario. Instituto de
Salud Pblica de Chile. 2013.
Morales J, Barrn H. Uroanlisis en pacientes peditricos de tres hospitales de Lima, 2011.
An Fac med. 2012; 73(3):227-31.
Qualitat. Cristales y calculos en orina. [En Lnea] http://www.qualitat.cc/
sitebuildercontent/sitebuilderfiles/CRISTALES_CALCULOS_ORINA.pdf
Ruiz Gmez B, Snchez J. Investigacin de nuevos criterios de un anlisis de orina. [En
lnea] http://maquetas.ciiet.cl/elgg/file/download/5683
Vicente de Mria, Campos Otegui. Gua prctica para la estandarizacin del procesamiento
y examen de las muestras de orina. Bio-Rad Laboratorios [En Lnea]
http://www.comerdelbajio.com.mx/wp-content/uploads/2013/05/guiapractica.pdf

PAUTAS PARA EL INFORME DE LABORATORIO
Cada estudiante debe presentar el informe de la prctica, a la semana siguiente del

mismo, teniendo en cuenta los siguientes puntos:
1. Ttulo de la prctica.
2. Breve marco terico.
3. Objetivo general.
4. Reacciones qumicas que ocurren.
5. Diagrama de flujo del procedimiento.
6. Tabla de datos, resultados y observaciones.
7. Clculos.
8. Grficas, (si la prctica lo requiere)
9. Anlisis de resultados y de grficas
10. Aplicaciones en la profesin.
11. Conclusiones
12. Recomendaciones (posibles errores ocurridos).
13. Bibliografa.

Guia de Practicas Bioquimica Aplicada Al LC 335 0

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3B-2

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Lic. TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA

F-CV3-3B-2 1 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 2 Rev. Junio 2007

La Gua de Prcticas de Bioqumica Aplicada al

Con los principios aplicados en esta gua, los estudiantes

Al iniciar cada prctica el alumno tendr una pequea

En cada prctica tambin se indicar la lista de reactivos y materiales de laboratorio a

Lic. TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA

F-CV3-3B-2 3 Rev. Junio 2007

Uso y reconocimiento de los instrumentos y unidades de medicin volumtrica.

1.1 MARCO TERICO

La Creatinfosfokinasa (CPK) o Creatinkinasa (CK) es una enzima clave en el sistema de los

La mayor parte de la creatina del organismo, as como de Fosfocreatina (PC), se encuentra en

Creatina quinasa I: Constituida por dos mon6meros B. Predomina en musculo liso

Los incrementos CK BB aparecen en determinados tipos de cncer (prstata, pulmn), ciruga

F-CV3-3B-2 4 Rev. Junio 2007

1.3 MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS CANT

Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto

a) Cul es la metodologa aplicada para el desarrollo de la prctica para CK total y CK-MB?

F-CV3-3B-2 5 Rev. Junio 2007

1.7 FUENTES DE INFORMACION

F-CV3-3B-2 6 Rev. Junio 2007

Determinacin de la actividad Lactato Deshidrogenasa y Gamma-

2.1 MARCO TERICO

LDH1: M M M M (abundante en el corazn, el cerebro y

La gamma glutamil transferasa (EC. 2.2.3.2.) tambin llamada: GGT, gamma

F-CV3-3B-2 7 Rev. Junio 2007

La GGT tambin se eleva posterior al consumo excesivo de alcohol. Elevaciones aisladas o

F-CV3-3B-2 8 Rev. Junio 2007

MATERIALES Y/ EQUIPOS CANT REACTIVOS CANT

Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto

2.7 FUENTES DE INFORMACION

F-CV3-3B-2 9 Rev. Junio 2007

Cuantificacin de la glucemia. Diseos y desarrollo de la prueba de tolerancia a la

3.1 MARCO TERICO

La Diabetes Mellitus (DM), es una enfermedad crnicodegenerativa, no infectocontagiosa,

3.3 MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT PERECIBLES CANT

F-CV3-3B-2 10 Rev. Junio 2007

Tomar muestra de suero o plasma al paciente en estado de ayunas (min 8 horas).

3.7 FUENTES DE INFORMACION

Aguilar M. Criterios diagnsticos de la diabetes mellitus: Un debate permanente. Av Diabetol

F-CV3-3B-2 11 Rev. Junio 2007

Determinacin cuantitativa de Hemoglobina y Hemoglobina glicada. Precisin y

4.1 MARCO TERICO

LA HEMOGLOBINA es una heteroprotena de la sangre, de masa molecular de 64.000 g/mol (64

Si una prueba de hemoglobina revela que el nivel de hemoglobina es menor de lo normal,

LA HEMOGLOBINA GLICOSILADA (o glucosilada) es una heteroprotena de la sangre que resulta

F-CV3-3B-2 12 Rev. Junio 2007

MATERIALES Y/O EQUIPOS CANT REACTIVOS CANT

4.7 FUENTES DE INFORMACION

F-CV3-3B-2 13 Rev. Junio 2007

Determinacin de Triglicridos en suero. Resuelve problemas de Espectrofotometra y

5.1 MARCO TERICO

La medicin es ms precisa si no se ha comido en las 12 horas previas al examen. El valor

Qu causa los altos niveles de triglicridos?

Puede tener varias causas:

F-CV3-3B-2 14 Rev. Junio 2007

Segn procedimiento descrito en el protocolo de trabajo del reactivo provisto.

Reporte de la concentracin de triglicridos en sangre.