ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DEL LITORAL

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA

FICHA DE LA PRCTICA PARA LABORATORIO BIOG1001

LABORATORIO: (Nombre del laboratorio donde se realiza la prctica)

FECHA
PRCTICA N 12
25/08/2017
NOMBRES Danny Bladimir Medina Aldas
COMPLETOS:
PARALELO: 123
TEMA DE LA ELECTROFORESIS Y SUS APLICACIONES
PRCTICA:
VALOR DE LA
CALIFICACIN
PRCTICA:
Realizar una visita tcnica a un laboratorio de ESPOL, para
conocer y comprender las aplicaciones de la tcnica de
electroforesis en el campo de la biotecnologa y biologa
molecular.
Apreciar los proyectos de investigacin cientfica y
transferencia tecnolgica que se desarrollan en dichos
laboratorios.
Fomentar el inters de los/las estudiantes en el campo de la
OBJETIVOS biotecnologa y biologa molecular.
GENERALES: Para ello cada grupo de prcticas de Biologa, est asignado a
visitar uno de los siguientes laboratorios de ESPOL:
1. CIBE (Lab. de Biologa Celular y Molecular y de
Fitopatologa).
2. Lab. de Biomedicina, FCV
3. Centro de Servicios de la Acuacultura (CSA)
Consultar con su profesor, qu laboratorio visitar su paralelo.
 Ensayo: realizar un ensayo (individual) sobre el uso y beneficios
de la tcnica de electroforesis en el campo de la Biologa aplicada
(ej. agricultura, medicina, nutricin, ambiente), describiendo el
procedimiento de cmo se realiza y mencionando los materiales y
reactivos que se utilizan.
La estructura del ensayo debe ser la siguiente:

Prrafo de introduccin en donde se incluya la tesis (o

idea principal) de su ensayo.
Al menos un prrafo de desarrollo, en donde se
describan las aplicaciones y materiales y procedimiento
PROCEDIMIENTO: de la electroforesis.
Prrafo de conclusin, en donde se describa la
importancia de la electroforesis, en el desarrollo de las
ciencias biolgicas aplicadas.

Importante recordar:
Mximo 1000 palabras (2 carillas).
Bibliografa: en formato APA, y en orden de lista.
Anexos: fotografas de la visita tcnica y de los pasos de la
electroforesis (en la medida posible), incluyendo una
descripcin en cada fotografa
Electroforesis y PCR

La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de

estas en un campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa
por tamaos moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use. La
tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un
electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos independientes que contienen
ambos al electrolito y estn unidos a los electrodos del generador de corriente. La
muestra se deposita en forma de un pequeo trazo transversal en la tira. La distancia de
migracin se mide en relacin un marcador interno. Las placas son reveladas con sales
de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.

Tcnicas Electroforticas

Electroforesis capilar en zona o en disolucin libre (CZE)

Es el procedimiento de electroforesis ms habitual, en el cual el capilar es recorrido por
el electrolito a travs de un medio buffer que puede ser cido (fosfato o citrato), bsico
(borato), o anftero (carcter cido y bsico). El flujo electroosmtico crece con el pH del
medio electrofortico.
Electroforesis capilar electrocintica micelar (MEKC)
En esta variante del procedimiento anterior se aade a la fase mvil un compuesto
catinico o aninico para formar micelas cargadas. Estas pequesimas gotitas
inmiscibles con la disolucin retienen a los compuestos neutros de un modo ms o menos
eficaz, por afinidad hidrfilahidrfoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis para
molculas que tienen tendencia a migrar sin separacin, como es el caso de algunos
enantiomeros.
Electroforesis capilar en gel (CGE)
Esta es la transposicin de la electroforesis en egel de poliacrilamida o de agarosa. El
capilar est relleno con un electrolito que contiene al gel. Se produce un efecto de
filtracin que ralentiza a las grandes molculas y que minimiza los fenmenos de
conveccin o de difusin. Los oligonucletidos, poco frgiles, se pueden separar de este
modo.
Isoelectroenfoque capilar (CIEF)
Esta tcnica, tambin conocida como electroforesis en soporte, consiste en crear un
gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que contiene un anftero. Cada
compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su punto isoelctrico (al pI
su carga neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de una presin hidrosttica y
manteniendo el campo elctrico, se desplazan las especies separadas hacia el detector.
Las altas eficiencias obtenidas con este procedimiento permiten separar pptidos con pI
que apenas difieren entre s 0.02 unidades de pH.
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)

La tcnica de amplificacin de ADN mediante la reaccin en cadena de la polimerasa

(PCR) es una tcnica que consiste en la amplificacin in vitro de un fragmento de ADN
especfico. Para llevar a cabo el experimento de amplificacin es necesario conocer, al
menos parcialmente, la secuencia del fragmento a amplificar (un gen, una parte de un
gen, una regin no codificadora). Bsicamente, se trata de replicar una y otra vez un
mismo fragmento de ADN y, para ello, debemos realizar in vitro lo que hacen las clulas
in vivo para replicar su ADN. As, se trata de disponer en un tubo de ensayo el ADN de
la especie objeto de estudio. Adems, debemos aadir en dicho tubo un par de
oligonucletidos que acten como cebadores para los ADN polimerasa. La eleccin de
estos oligonucletidos (cebadores o primers) es crucial dado que han de delimitar la
regin a amplificar. En concreto, deben ser complementarios a cada uno de los extremos
3 de la regin a amplificar.
En biologa molecular, una gran cantidad de tcnicas que se realizan comnmente
requiere el uso de la electroforesis, lo que supone una parte importante del procedimiento
sistemtico del anlisis (separacin, purificacin, preparacin) de los cidos nucleicos y
las protenas. La mayora de las biomolculas poseen una carga elctrica cuya magnitud
depende del pH del medio en el que se encuentran; como consecuencia, pueden
desplazarse cuando se someten a un campo elctrico hacia el polo de carga opuesta al
de la molcula. A diferencia de las protenas, que pueden tener una carga positiva o
negativa, los cidos nucleicos slo poseen carga negativa, debido a su esqueleto de
fosfatos. Por lo tanto, en una electroforesis, los cidos nucleicos migrarn hacia el polo
positivo, es decir, el nodo. En el caso de las protenas, que suelen ser de carga neutra,
se realiza pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de sodio (SDS), que
les confiere carga negativa; con ello se homogeneizan las protenas de la muestra y
todas migrarn hacia el polo positivo; slo se separarn por tamao.

BIBLIOGRAFA

Castellan, G. (1998) Fisicoqumica, 2 ed. Mxico, Pearson-Adisson Wesley. Pgs. 461-

462 Rouessac, F. (2003) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales
Modernas. Espaa, McGraw Hill. Pgs. 121-133 Nelson, D. (2001) Lehninger
Principios de Bioqumica, 3 ed. Espaa, Omega. Pgs. 123- 125
Anexos