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MANUAL PRCTICAS
BIOQUMICA
PRESTACIN DE SERVICIOS
UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
2 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
UNIVERSIDAD DE CRDOBA
LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 1
PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DE LOS AMINOCIDOS
OBJETIVOS
Observar algunas propiedades fsicas de los aminocidos.
Reconocer la presencia de aminocidos por la reaccin de estos con la
Ninhidrina
Identificar algunos grupos funcionales presentes en aminocidos especficos
mediante la formacin de productos coloreados.
TEORA RELACIONADA
Las clulas vivas producen macromolculas que son biopolmeros constituidos por
unidades monomricas o bases estructurales. Para las protenas, estas unidades son
los L aminocidos. Las propiedades biolgicas de estas macromolculas estn
determinadas en gran parte por las clases de aminocidos presentes, el orden en el que
estn dispuestos en una cadena de polipptidos y por lo tanto la relacin espacial de un
aminocido con otro. Los aminocidos contienen grupos funcionales amino y carboxilo.
En un aminocido, ambos estn unidos al mismo tomo () de carbono. De los
aminocidos presentes en la naturaleza, slo 20 de ellos aparecen en las protenas de
todas las formas de vida, vegetal, animal o microbiana. Los aminocidos intervienen en
la transmisin de impulsos en el sistema nervioso (Glicina y acido glutmico). Los
aminocidos esenciales deben ser suministrados en la alimentacin, ya que nuestros
cuerpos no pueden sintetizarlos en cantidades adecuadas para respaldar el crecimiento
(nios) o para conservar la salud (adultos).
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3 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
Reaccin del cido Glioxlico para Triptfano: Grupo indlico del triptfano reacciona con
cido glioxlico en presencia del cido sulfrico concentrado dando un color prpura.
MATERIALES Y REACTIVOS
10 Tubos de ensayo 1 Gotero.
1 Gradilla 1 Estufa
1 Pinza para tubos de ensayo. 1 Beaker de 500mls
3 Pipetas de 1, 5 y 10 mL Papel indicador
PROCEDIMIENTO
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4 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1- Escriba la reaccin para cada prueba realizada.
2- De acuerdo con las pruebas realizadas en esta prctica proponga una clasificacin
para los aminocidos.
3- Identifique los grupos qumicos que caracterizan a los aminocidos.
4- Explique cmo se encuentran estructuralmente los aminocidos en el plasma
sanguneo o lquido intracelular cuyo pH es de 7.4 y 7.1 respectivamente.
5- Cules son las explicaciones prcticas de las pruebas realizadas.
BIBLIOGRAFA
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5 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 2
ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTENAS
OBJETIVOS
TEORA RELACIONADA
MATERIALES Y REACTIVOS
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6 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO:
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7 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Consultar en forma clara y breve en que consiste la desnaturalizacin de las
protenas.
Una protena adopta una estructura en el espacio especfica que es esencial para el
desarrollo de su funcin biolgica. Esta estructura tridimensional es conocida con el
nombre de conformacin espacial y se caracteriza por un plegamiento determinado de su
estructura. La desnaturalizacin de las protenas ocurre cundo se pierde esta
conformacin espacial especfica. https://curiosoando.com/que-es-la-desnaturalizacion-
de-proteinas
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden
superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a
un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
3. Explique por qu las pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las plumas no
se disuelven con el agua.
No se disuelven en agua por que posee una protena llamada queratina la cual, tiene una
estructura fibrosa asiendo que sea inerte e insoluble en agua, y por consiguiente las
pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las plumas que son fanera conformadas por
esta protena sean insolubles en agua dado a que la queratina constituye el componente
principal que forman las capas ms externas de la epidermis de estas
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8 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
Explique por qu las pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las plumas no se
disuelven con el agua. http://www.buenastareas.com/ensayos/Desnaturalizacion-De-Una-
Proteina/31543669.html
Lowry
Urbidimtrico
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9 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
Kjeldahl
Determina nitrgeno total tanto orgnico (nitrgeno amino y amido) como nitrgeno no
proteico (urea, aminocidos, etc.). El mtodo consiste en la digestin de la muestra con
H2SO4, y la formacin de NH2OH que es recibido en cido para finalmente titularlo con
lcali de una concentracin conocida.
Dumas
http://www.edukativos.com/apuntes/archives/1937
BIBLIOGRAFA:
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10 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 3
CATLISIS ENZIMTICA E INORGNICA
OBJETIVOS
TEORA RELACIONADA
Las enzimas son catalizadores biolgicos de estructura proteica y producidos por los
mismos organismos que las utilizan para realizar sus propios procesos metablicos. La
accin cataltica de una enzima est sometida a la influencia de factores fsicos como son,
el calor, las radiaciones o de factores qumicos como cambios en el pH y en la
concentracin de la enzima, sustrato y la presencia de inhibidores. En cambio los
catalizadores inorgnicos, en algunos casos, no son afectados por factores fsicos como
el calor, por tanto, pueden catalizar una determinada reaccin pese a cambios en la
temperatura.
Catalasa
H2O2 H2O + O2
MnO2
H2O2 H2O + O2
MATERIALES Y REACTIVOS
6 tubos de ensayo Pinza para tubos de ensayo
2 pipetas de 5 y 10 ml Gotero
Beaker de 400ml Agua destilada
Calentador Probeta de 100ml
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11 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
Esptula Gradilla
Mortero con mano
PARTE EXPERIMENTAL
1. Rotular tres tubos de ensayo y agregar a cada uno las siguientes sustancias:
Tubo N1 1ml de sangre al 10%
Tubo N2: 1 ml de extracto de papa.
Tubo N3: Una pequea porcin de MnO2
2. Agregar a cada uno de los tubos 2ml de H2O2 al 3%. Observar la intensidad de la
reaccin por el burbujeo del oxgeno y la liberacin de calor. Compare el nivel alcanzado
por las burbujas en cada uno de los tubos y registre en orden creciente la actividad
cataltica con base en este parmetro.
3. Prepare 3 tubos de acuerdo al numeral 1 y Colquelos en un bao con agua a
ebullicin durante diez minutos, retirarlos y dejar en reposo dentro de un bao de agua a
temperatura ambiente durante 10 min. Adicionar a cada tubo 2ml de H2O2 al 3%.
Compare el nivel alcanzado por las burbujas en cada uno de los tubos y registre en orden
creciente la actividad cataltica con base a este parmetro.
4. Prepare nuevamente 3 tubos de acuerdo al numeral 1 y colquelos en un bao de
hielo durante 10 min. Adicionar a cada tubo 2 ml de H2O2 al 3%. Compare el nivel
alcanzado por las burbujas en cada uno de los tubos y registre en orden creciente la
actividad cataltica con base en este parmetro.
5. Prepare nuevamente 3 tubos de acuerdo al numeral 1, adicione a cada tubo uno 6
gotas de NaCN y dejar en reposo durante 5 min, luego adicione 2ml de H 2O2 al 3% a
cada tubo. Compare el nivel alcanzado por las burbujas en cada uno de los tubos y
registre en orden creciente la actividad cataltica con base en este parmetro.
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12 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Explique por qu el captopril y el enalopril son ejemplos de inhibidores competitivos
de la enzima conversora de la angiotensina.
2. Las granadas son fabricadas por la industria militar con un dispositivo especial de
seguridad para que no exploten en el sitio donde son fabricadas, si no durante el
combate, Qu tipo de enzimas son fabricadas por ciertos rganos que tienen un
comportamiento similar al de las granadas? De ejemplos.
3. Por qu carece de importancia la lipasa gstrica en los procesos digestivos del
estmago de los adultos y en cambio es importante en el estmago infantil?
4. Cul es la importancia mdica de las enzimas? De por lo menos un ejemplo concreto.
5. Defina que son: Zimgenos, Isozimas, Inhibidores acompetitivos.
6. Qu diferencias hay entre inhibidores orgnicos e inorgnicos?
7. Qu funcin cumplen las vitaminas hidrosolubles en las reacciones catalizadas por
enzimas?.
8. Explique como se da el proceso de regulacin de la actividad enzimtica en el
organismo?.
BIBLIOGRAFA:
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de ciencias.
Universidad Nacional de Colombia sede Bogota.
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 4
PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS
OBJETIVOS.
Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la
prueba de molish.
Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento
frente al reactivo de Benedict.
Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos especficos.
TEORA RELACIONADA
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14 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
MATERIALES Y REACTIVOS
Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa, sacarosa, lactosa, fructosa, almidn,
leche (traer de la casa)
PROCEDIMIENTO
Prueba de Molish: Agregue 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una muestra que
contenga carbohidratos (Leche). Aada cuidadosamente por las paredes del tubo 1ml de
cido sulfrico concentrado, hasta que se formen dos capas. Observe cualquier cambio
de color en la interfase de los dos lquidos.
Prueba de Benedict: Tome 3 tubos de ensayo; agregue al primero 0.5 ml de solucin de
lactosa, al segundo 0.5 ml de solucin de glucosa y al tercero 0.5 ml de solucin de
sacarosa. Adicione 0.5 ml del reactivo de Benedict a cada tubo y colquelos en un bao
de agua hirviendo por 3 min. La formacin de un precipitado de color rojo ladrillo indica la
presencia de azcar reductor.
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15 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.
2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?
3. Explique estructuralmente, porque la maltosa es un azcar reductor y por que el
almidn no
4. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los
carbohidratos.
5. Por qu la celulosa a pesar de estar formada por molculas de glucosa es
insoluble en agua.
6. porque la sacarosa es un azcar no reductor
7. Consulte el fundamento de otras tcnicas usadas para la determinacin de la
glucosa en el laboratorio.
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16 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
BIBLIOGRAFA:
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PRACTICA N 5
ALGUNAS PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DE LOS LPIDOS
OBJETIVOS:
Determinar la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos.
Realizar la reaccin de saponificacin y determinar algunas propiedades de los
jabones.
Comparar el grado de instauracin de algunos lpidos.
TEORA RELACIONADA
Los lpidos, cuyo nombre deriva del griego lipos: (grasa). Son molculas de estructura
variada cuya propiedad fundamental que ha permitido su aislamiento y caracterizacin es
la de ser insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos tales como el benceno,
cloroformo, ter, etc. Constituyen una excepcin a esta regla las esfingomielinas que no
son solubles en ter y los fosfolpidos que no son solubles en acetona. Todos los mtodos
de obtencin de lpidos utilizan en gran medida estos criterios de solubilidad. Los lpidos
ms comunes y abundantes en los alimentos de origen vegetal y animal son los aceites y
las grasas, los cuales consumidos en la dieta y conjuntamente con los sintetizados
endgenamente tienen mltiples funciones en el organismo:
Funcin energtica o de reserva: Las grasas neutras (Triacilgliceroles) se
almacenan en los adipositos y suministran caloras fcilmente utilizables en
perodos de escasez. El panculo adiposo subcutneo es as mismo un eficaz
protector contra el fro externo.
Funciones Estructurales: Todas las membranas biolgicas estn formadas por
fosfolpidos, glicolpidos y algunas veces esteroides estructurados en bicapas.
Funciones catalticas: Algunos lpidos actan en pequeas cantidades como
activadores o reguladores del metabolismo; por ejemplo, las vitaminas
liposolubles, las hormonas esteroideas o las prostaglandinas.
MATERIALES Y REACTIVOS
10 tubos de ensayo Calentador
2 gradillas Capsula de porcelana
Pipetas de 5 y 10 ml 1 vaso de 250 ml
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18 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO
1. Solubilidad
Numere 7 tubos de ensayo y coloque en cada uno 2 ml de aceite vegetal, luego agregue a
cada tubo de manera diferente, 1 ml de cada una de las siguientes sustancias:
Agua destilada, etanol, etanol caliente, benceno, cloroformo, ter etlico y acetona. Agite
cada tubo. Deje en la gradilla por 2 min y observe los resultados.
a. Cuales son los mejores disolventes para las grasas?
b. Cuales no disuelven las grasas?
c. Como explican ustedes los resultados?
2. Emulsificacin
En dos tubos de ensayo coloque 2 ml de aceite vegetal. Aada a cada uno 2 ml de agua
destilada. A una de los tubos agregue algunas escamas de jabn. Agite bien ambos
tubos. Observe lo que ocurre.
a. Cmo se denomina la mezcla formada?
b. Cmo esta constituida dicha mezcla? Deje los tubos en reposo en la gradilla y
obsrvelos varias veces durante quince minutos.
c. Cmo es la estabilidad de las mezclas en los dos tubos?
d. Explique los resultados?
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19 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
3. Saponificacin
En una capsula de porcelana coloque unos 20 ml de agua y somtalos a ebullicin
(mantenga el volumen constante). Cuando estn hirviendo aada 1 ml de cido
oleico. Agregue ahora cuidadosamente y gota a agota una solucin de NaOH al 10%,
hasta que el medio sea claro. Tenga cuidado de no aadir un exceso de lcali.
a. En que consiste la solucin formada?
b. Escriba la reaccin qumica que ocurre?
Numere ahora cinco tubos de ensayo y coloque en cada uno dos ml de la solucin
anterior realizando las siguientes pruebas:
Tubo#1. sature la solucin con NaCl.
Tubo#2. Agregue cinco gotas de cido sulfrico concentrado.
Tubo#3. Agregue cinco gotas de solucin de cloruro de calcio.
Tubo#4. Agregue cinco gotas de solucin de cloruro de magnesio.
Tubo#5: Agregue cinco gotas de solucin de acetato de plomo.
Observe y anote los resultados. Explique lo que ocurre en cada caso. Explique las
reacciones qumicas correspondientes.
4. Insaturacin.
Tome 3 tubos de ensayo y agregue; 1ml de aceite vegetal al primero, 1ml de acido oleico al
segundo y una pequea cantidad de acido esterico al tercero. Adicione a cada tubo 2 ml de
cloroformo y agite bien, deje 2 ml de cloroformo en otro tubo como control. Agregue solucin
de yodo gota agota a cada uno de los 4 tubos, agitando despus de cada adicin. La solucin
de yodo decolora si hay cidos grasos insaturados. Continu agregando (mximo 15 gotas),
hasta que el color del yodo sea estable.
a. Cuantas gotas de solucin de yodo se necesitaron en cada tubo para que el color
permaneciera estable?
b. Explique los resultados obtenidos?
c. Escriba la reaccin qumica general de lo ocurrido.
d. Consultar teora relacionada de lpidos.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Qu tipo de compuesto qumico es el jabn?
2. Qu diferencia hay entre jabones y detergentes sintticos?
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20 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
BIBLIOGRAFA
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de ciencias.
Universidad Nacional de Colombia sede Bogota
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21 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
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LABORATORIO BIOQUMICA
PRACTICA N 6
VITAMINAS Y MINERALES
OBJETIVOS:
Separar algunos constituyentes de la leche
Identificar la presencia de vitaminas y minerales en la leche
Reconocer la vitamina A presente en la mantequilla.
TEORA RELACIONADA
MATERIALES Y REACTIVOS
Vaso de precipitados de 400ml Gradilla
Probeta de 50ml Embudo de vidrio
Erlenmeyer de 100ml Esptula
Pipetas de 5 y 10ml Vitamina A (traer)
Agitador de vidrio Leche (traer)
Tubos de ensayo (5)
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22 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO
1. PRECIPITACIN DE LA CASENA
En un vaso de precipitado de 400ml; agregar 50ml de leche y 50ml de agua destilada,
aadir con una pipeta gota a gota y con agitacin constante acido actico al 10% hasta la
formacin de un precipitado floclenlo de casena. Dejar decantar y filtrar sobre gasa;
descartar la casena que no es de inters en la presente practicay conservar el filtrado
para las posteriores pruebas cualitativas de vitamina B1( tiamina) y minerales.
2. VITAMINA B1.
Vierta 2.5ml de filtrado en un tubo de centrifuga; aada una pequea cantidad de KCl, y
0.5ml de ferrocianuro de potasio al 1% y 1ml de NaOH al 10%, mezcle y disuelva
totalmente el KCl. Agregar 2.5ml de alcohol isobutilico, agitar cuidadosamente por 2 min y
centrifugar por 5 min a 2000 rpm. La formacin de precipitado indica la presencia de
vitamina B1
3. CALCIO
A 0.5 ml de filtrado adicionar unas gotas de solucin de oxalato de amonio al 4%.
Observar el precipitado que se forma.( dejar reposar 10min)
4. FOSFATOS
A 0.5 ml de filtrado adicionar 0.5ml de acido molibdico y 0.5ml de acido 1, 2, 4,
aminonaftolsulfonico. Observe la coloracin obtenida.
5. VITAMINA A
En un tubo de ensayo; disolver una capsula de vitamina A de 100U, luego se disuelve en
1ml de cloroformo y adicionar 5 gotas del reactivo de Carr-Price. En presencia de vitamina
A, se produce un intenso color azul que desaparece al poco tiempo.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Cual es el fundamento qumico de los procedimientos desarrollados en la
prctica?
2. Que importancia presenta la vitamina a, la tiamina, el calcio y los fosfatos en
mamferos?
BIBLIOGRAFA:
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de ciencias.
Universidad Nacional de Colombia sede Bogot
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PRACTICA N 7
IDENTIFICACIN DE CUERPOS CETNICOS EN ORINA
OBJETIVOS
Determinar la presencia de cuerpos cetnicos en orina, mediante pruebas
cualitativas para cada uno de ellos.
Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clnicos para el
reconocimiento de cuerpos cetnicos
TEORA RELACIONADA
Los cuerpos cetnicos son los cidos acetoactico, la acetona y el cido - hidrxibutirico.
En la cetsis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo
buenas condiciones de salud, los cuerpos cetnicos se forman en el hgado y son
completamente metabolizados, de tal manera que solo cantidades insignificantes
aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanicin, vmitos con
deshidratacin y despus de la exposicin al fro y/o ejercicio vigoroso, los cuerpos
cetnicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su
determinacin cualitativa.
La determinacin de acetona (Mtodo de Imbert), se fundamenta en la formacin de un
ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinacin de acido
acetoactico (Mtodo de Gerhrdt), se basa en la aparicin de una coloracin rojo-vinosa
con el cloruro frrico y en el Mtodo de Hart, el acido - hidrxibutirico es transformado en
acetona, la cual se identifica mediante el reactivo de Imbert.
MATERIALES Y REACTIVOS
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24 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO
DETERMINACIN DE ACETONA:
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Qu otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo
anormal de lpidos.
2. Qu es la cetsis y la Cetonuria.
BIBLIOGRAFA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
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PRACTICA N 8
PRODUCCIN DE PIRUVATO DURANTE LA FERMENTACIN
OBJETIVOS.
TEORA RELACIONADA
La produccin de piruvato durante la fermentacin se realiza por una serie de reacciones
enzimticas que involucran algunos intermediarios. Este proceso se conoce como
fermentacin o gluclisis.
La reaccin total podra considerarse como la transferencia de dos pares de tomos de
hidrgeno de la glucosa al nad+. Los metabolitos de piruvato y acetaldehdo se
encuentran normalmente en bajas concentraciones, por lo tanto para comprobar su
existencia es necesario impedir su transformacin.
La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera
que el piruvato se acumula y su presencia se demuestra con la 2,4- dinitrofenilhidracina.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo (4) Calentador
Tubos de centrfuga (2) Pinzas para tubo de ensayo (2)
Beaker de 400mL Termmetro
Pipetas de 5mL (3) Esptula
Balanza
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26 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO
En dos tubos de ensayo A y B aada respectivamente 2.5 ml de solucin de glucosa al
10%. Al tubo A agregue 2.5ml de suspensin de levadura al 10% P/V en solucin de
fosfato de sodio dibsico 0,5 M; al tubo B agregue 2.5ml de suspensin de levadura al
10% P/V en solucin de fosfato de potasio monobsico 0,5M.
Coloque en bao de mara a 37C durante 1 hora, luego agregue a cada tubo 2 ml de
A.T.A al 10%P/V, mezcle vigorosamente y centrifugue durante 10 minutos a 2500 rpm.
A 1 ml del sobrenadante agregue 0.5ml de solucin saturada de 2,4- dinitrofenilhidracina
en HCl 2M. Mezcle fuertemente, tome 0,5 ml de esta mezcla y agregue 1 ml de NaOH al
10% y 0,5 ml de agua.
La formacin de un color rojo indica la presencia de piruvato. Repita esta prueba usando
una solucin de glucosa en vez del sobrenadante.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Cul es la funcin del cido tricloroactico?.
2. Qu conclusiones se podran sacar de los resultados de las muestras A yB?
3. Cul es la reaccin de la 2,4- dinitrofenilhidracina con el pirivato?.
4. Qu funcin cumple el NAD+ en la produccin del piruvato.
5. Consulte la va de la gluclisis y determine los pasos irreversibles de esta va.
BIBLIOGRAFA
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de ciencias.
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PRACTICA N 9
OBJETIVOS
Obtener un extracto de succinato deshidrogenada a partir de tejido heptico.
Identificar cualitativamente la actividad del succinato deshidrogenada mediante el
uso de un aceptor electrnico.
Observar el efecto inhibitorio del malonato sobre la actividad de la enzima
succinato deshidrogenada.
TEORA RELACIONADA.
Las clulas de la gran mayoras de los organismos vivos llevan a cabo un conjunto de
reacciones de oxido reduccin mediante la cual la gran cantidad de energa liberada a
travs de la degradacin de molculas orgnicas es almacenada en molculas de alto
nivel energtico (ATP). La succinato deshidrogenada una enzima clasificada dentro del
grupo de las oxidorreductasas cataliza una reaccin muy importante en el metabolismo
oxidativo de la clula: la conversin del succinato en fumarato.
La succinato deshidrogenada remueve 2H+ y 2 electrones del succinato para formar
fumarato y la coenzima reducida (FADH2). La enzima esta sujeta a una poderosa
inhibicin competitiva por parte de reactivos como el malonato lo cual constituye una
manera de inhibir la actividad de la enzima a nivel de laboratorio. Para estudiar el
transporte de cargas en la reaccin se empleara un aceptor artificial de electrones (azul
de metileno), cuya decoloracin permite diferenciar la actividad enzimatica en los ensayos
a realizar en la presente prctica.
MATERIALES Y REACTIVOS.
Vasos de precipitado de 25y 400 ml Pipetas de 5 ml (2)
Tubos de centrifuga Pipeta de 1 ml (1)
Mortero con maso Gradilla para tubos de ensayo
Termmetro Tubos de ensayo (3)
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28 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PROCEDIMIENTO
1. OBTENCIN DEL EXTRACTO ENZIMTICO
Tomar una muestra de aproximadamente 5g de hgado heptico libre de sangre y
colocarlos en un mortero con arena lavada, macere cuidadosamente hasta formar una
mezcla suave adicionando poco a poco tres porciones (cada una de 5ml) de buffer
fosfato0.1M Y pH 7.4. Transfiera la mezcla a un vaso de 25ml y mantngalo en un bao
con hielo durante 15min, mezclando ocasionalme. Pase la mezcla a tubos de centrifuga y
centrifugue a 1600rpm durante 10min. Transfiera el sobranadante a un vaso de 25ml y
marquelo como extracto enzimtico, mantngalo en bao de hielo hasta su posterior uso.
2. SEGUIMIENTO DE LA REACCIN
Preparar una serie de 3 tubos de ensayo debidamente rotulados, adicionar a cada tubo
(1,2 y 3) 0.5ml de azul de metileno al 0.1%, luego a los tubos 2 y 3 agregar 1 ml de
succinato de sodio 0.1M y solo al tubo 3 agrguele 1ml de malonato de sodio 0.1M. Dejar
los tubos en incubacin a 37C durante 10 min. (Manteniendo la temperatura constante).
Sin retirarlos del bao, agregar 1.5ml de extracto enzimtico a cada uno de los tubos (1,2y
3), agite bien adicione 2ml de aceite vegetal a cada uno de los tubos.
Al cabo de 40 min observe el color de cada tubo, tenga en cuenta que el tubo 1 es el
control.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
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29 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
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PRACTICA N 10
FORMACIN DE CIDO LCTICO EN LA GLUCLISIS
OBJETIVOS
Producir cido lctico a partir del msculo de rata.
Comprobar la formacin de dicho cido mediante pruebas caractersticas.
PROCEDIMIENTO
Sacrifique una rata o curiel y extraiga los msculos de las patas. Desmenuce rpidamente
con ayuda de una tijera y macere en un mortero limpio y seco manteniendo a baja
temperatura. Pese dos porciones de 1 g del macerado y virtalas en dos tubos de ensayo.
Uno de los tubos de ensayo se utilizar como control, agrguele inmediatamente 1 ml de
A.T.A al 20%. En ambos tubos de ensayo agregue (5 ml de solucin de glucosa al 0,5 %
en bicarbonato de sodio 0,5 M ).agregue 5 gotas de vaselina o aceite vegetal.
Seguidamente coloque los tubos en un bao de Mara a 37 C durante 2 horas.
Despus de la incubacin en el tubo de ensayo experimental se vierte 0.5 ml de la
solucin de A.T.A al 20%, se agita, y los contenidos de ambos tubos se filtran aparte.
Para precipitar los carbohidratos se toman de cada uno de los tubos 2.5 ml del filtrado, se
les agrega 2 ml de solucin de sulfato de cobre al 20 % y 0.5g de hidrxido de calcio. Las
muestras se agitan cuidadosamente y despus durante un periodo de 15 minutos, se
repite la operacin alternndola con intervalos de reposo. Seguidamente se filtran.
Con cuidado se toman 1 ml del filtrado y se vierten al otro tubo de ensayo, el cual se
coloca en un bao de hielo y se le agrega 15 gotas de cido sulfrico. Las muestras se
colocan seguidamente en un bao de agua hirviendo por 4 minutos. E inmediatamente se
colocan en un bao de hielo. Una vez que se ha enfriado se agrega a cada tubo 8 gotas
de una solucin alcohlica de hidroquinona al 0,2 % y se agitan. Observar ambos tubos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Bistur Bao Serolgico
Mortero con mano Pipetas de 5 y 10 mL
4 tubos de ensayo Balanza
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30 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA.
BIBLIOGRAFA
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de Ciencias.
Universidad Nacional sede Bogot.
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 11
OBJETIVOS
Obtener preparados de amilasa salival y - d- fructofuranosidasa.
Comprobar la actividad de estas dos enzimas en diferentes muestras.
PROCEDIMIENTO
1. obtencin del preparado de amilasa salival y comprobacin de su actividad.
Se enjuaga la boca dos o tres veces con agua para eliminar los restos de comida.
Se mide en una probeta 30 ml de agua destilada y con ella se enjuaga la boca por
espacio de 3 a 5 min . el lquido recogido se filtra a travs de un algodn y el filtrado se
utiliza para los siguientes ensayos.
En dos tubos de ensayo se vierten 3 ml de solucin de almidn al 1%, en uno de ellos se
agrega 3ml de agua y en el otro 3ml del preparado enzimtico y se introducen en un bao
de mara a 40C por 5min. Tomando una gota de cada tubo y combinndola con una gota
de lugol en una cpsula de porcelana. Repita esta operacin a los 10, 15, 20,25 y 30 min.
Al tubo que contiene la enzima se le agregan 0.5ml de fehling A y 0.5ml de fehling B o en
su defecto 1ml de reactivo de benedict. Coloque a calentar hasta que ebulla. Observe.
2. obtencin del preparado de - d- fructofuranosidasa y comprobacin de su
actividad.
Se trituran 50 g de levadura de cerveza con 3 g de carbonato de calcio hasta formar una
pasta homognea que se coloca en un beaker de 200ml. Se aaden 13 ml de cloroformo
y se deja por 4 das a temperatura ambiente, alejado de los roedores, despus de los 4
das se filtra y al filtrado se le agrega un volumen igual de etanol, el precipitado se lava
con mnimas cantidades de alcohol y ter y se seca al vacio, una solucin al 1% de esta
sustancia se utiliza para el experimento.
Prepare una solucin de sacarosa al 1%.
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32 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
MATERIALES Y REACTIVOS
Beacker de 200 y 500 mL Frasco lavador
Esptula Probeta de 50 mL
Pipetas de 5 y 10 mL Embudo
Mortero Bomba de vacio
Capsula de porcelana (2) Papel filtro
Sacarosa Etanol
Lugol Cloroformo
Hidroquinona al 0,5% Fehling A y B
Perxido de hidrgeno al 3% Levadura (debe traerla cada grupo de
prctica 4 das antes).
PREGUNTAS.
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BIBLIOGRAFA
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
LPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de Ciencias.
Universidad Nacional sede Bogot.
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 12
OBJETIVOS
PROCEDIMIENTO
Pese 20 g de hgado o corazn y triture suavemente, pselo a un vaso de precipitado y
agrguele KOH al 10% hasta cubrir y caliente en un bao de agua hirviendo durante 20
minutos, agite de vez en cuando durante el calentamiento; enfre en un bao de hielo,
retire los cuerpos slidos y agregue 2 ml de sulfato de sodio saturado y mezcle
fuertemente, aada 4 ml de etanol y deje en bao de hielo por 10 minutos. Observe y
centrifugue por 3 minutos, descarte el sobrenadante, seque y pese.
Una pequea cantidad agregue agua y caliente suavemente hasta disolver, agrguele 1
ml de HCl (1,2M), caliente durante 20 minutos y realice la prueba de Felhing.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de centrfuga (2) Pipetas de 5 y 10mL
Balanza Agitador
Beaker de 400 y 200 mL Beaker de 300 y 100Ml
Vidrio de reloj Cuchillo
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35 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA
1. Cul es el porcentaje de glucgeno en Hgado y corazn terico, comprelo con el
calculado experimentalmente.
2. Cul es la funcin del Hidrxido de Potasio, etanol y cido Clorhdrico en la
determinacin de glucgeno.
3. Cul es el porcentaje de error de la cantidad de glucgeno obtenida.
BIBLIOGRAFA:
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
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LABORATORIO DE BIOQUMICA
PRACTICA N 13
CUANTIFICACIN DE LA RESPIRACIN POR EL MTODO
COLORIMTRICO.
OBJETIVOS
Determinar la cantidad de CO2 producido por las semillas mediante la cantidad de
NaOH consumida.
Observar el fenmeno respiratorio de las semillas
TEORA RELACIONADA
La fase de hidratacin de las semillas viene acompaada por la dispersin de los coloides
celulares e iniciacin de procesos enzimticos a velocidades crecientes, siendo una de las
primeras consecuencias observables el incremento de los fenmenos respiratorios. El
ATP necesario para llevar a cavo la activacin deriva, de manera preferente, del
transporte electrnico respiratorio, provocado por la combustin mitocondrial de sustratos
oxidables. Tales sustratos existen en el endospermo bajo forma exclusiva de
polisacridos de alto peso molecular (almidn) y lpidos complejos (triglicridos).
MATERIALES Y REACTIVOS
2 frascos boca ancha con tapa 2 pipetas de 5 y 10 ml
2 beaker de 50ml Algodn
1 probeta de 50 ml Semillas (50g)
PROCEDIMIENTO
Cada grupo coloca 25 ml de NaOH 0,2 N, en dos frascos de mayonesa de 250 ml y tapa
inmediatamente, pese 5g de semilla, la cual ha estado sumergida durante una hora o ms
y las coloca en saco de gasa, el cual est unido a la tapa por un cordel, de modo que la
semilla no est en contacto con el NaOH, un frasco debe quedar sin semilla.
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37 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
A las 36 horas extraiga las semillas y tape rpido, tome de cada frasco 5 ml y le agrega
2.5 ml de BaCl2 1 M, adicione tres gotas de fenolftaleina y titule con HCL 0,2 N, hasta que
desaparezca el color y anote los volmenes gastados. A los ml de titulacin del blanco
reste los ml gastados en la titulacin de las semillas y multiplique por 5; obtendr as la
cantidad de HCl equivalentes al CO2 desprendido por las semillas
BIBLIOGRAFA:
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill
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PRACTICA N 14
OBJETIVOS
Extraer colesterol de la yema del huevo, utilizando acetona como disolvente.
Determinar cualitativamente la presencia de colesterol en la yema de huevo
mediante un mtodo calorimtrico.
TEORA RELACIONADA
Los lpidos presentes en la yema son de naturaleza variada, destacando los
triacilglicridos, el colesterol y los fosfolpidos. Mediante una extraccin fraccionada se
pueden separar los menos polares, solubles en acetona (triacilglicridos y colesterol) de
los ms polares (fosfolpidos), que seran solubles en disolventes como la mezcla
cloroformo/metanol.
Los mtodos analticos para la determinacin del colesterol se dividen en colorimtricos y
enzimticos. De los primeros, el ms popular es el de Liebermann-Burchard, en el que la
reaccin tiene lugar en un medio cido fuerte (cido sulfrico). La etapa inicial del proceso
consiste en la protonacin del grupo hidroxilo del colesterol, seguido de su deshidratacin
para formar un in carbonio 3,5-colestadieno. La oxidacin secuencial de este in
carbonio allico por el sulfrico produce un compuesto cromforo, el colestahexano-c.
sulfnico, que absorbe energa en la zona de la luz visible, a 410 nm.
MATERIALES Y MATERIALES
Vaso de precipitado 100 mL Agitador de vidrio
Vaso de precipitado 50 mL Tubos de ensayo (2)
Pipeta de 5 mL
PROCEDIMIENTO
1. Extraccin de colesterol de la yema de huevo.
Cascar un huevo de gallina con precaucin y separar la clara de la yema, teniendo
cuidado de no romper sta. Decantar la clara y tomar 1 g de la yema, en un vaso de 50
ml. Aadir sobre la yema 5 ml de acetona fra y agitar con la varilla de vidrio, hasta
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39 MANUAL PRCTICAS BIOQUMICA
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Dnde ha encontrado usted ms colesterol, en la fraccin A1 o en la A2? Por qu?
2. Consultar sobre los mtodos enzimticos para la determinacin de colesterol.
3. Cules son los valores de referencia para el contenido de colesterol en sangre
humana.
4. Qu relacin existe entre el contenido de colesterol y el riesgo de contraer
enfermedad vascular arteriosclertica.
Enfermedad Vascular Arteriosclertica
BIBLIOGRAFA
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill
Latinoamericana, S.A.
CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioqumica F.
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