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DICIEMBRE 2009

SEBBM DIVULGACIN
LA CIENCIA AL ALCANCE DE LA MANO

Ratones transgnicos en investigacin biomdica


Sagrario Ortega
Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas (CNIO)

SUMMARY Resumen cromosomas artificiales de bacteria


(BACs) o de levadura (YACs)
Genetically engineered mice (GEMs) Los ratones modificados normalmente incluyen todas las
are an important tool for genticamente (RMGs) son secuencias reguladoras de la
understanding gene function and the herramientas clave para el estudio expresin del gen de inters y en
genetic basis of disease as well as de la funcin gnica y de las general son menos sensibles a
for the generation of animal models bases genticas de las efectos posicionales reproduciendo
of many genetic disorders. Here we enfermedades, as como para la ms fielmente el patrn de expresin
summarize the different types of generacin de modelos animales deseado. Los sistemas de expresin
transgenic mice and their de mltiples patologas. A condicional permiten, adems,
applications. continuacin se resumen los controlar la expresin del transgn
diferentes tipos de ratones en el tiempo. El sistema ms
modificados genticamente que se utilizado en el ratn es el regulado
pueden obtener mediante por tetraciclina que tiene dos
transgnesis y sus aplicaciones. modalidades: tet-ON (la expresin
del transgn slo ocurre cuando se
En el ratn podemos diferenciar administra doxiciclina al ratn en el
claramente dos tipos de modelos agua de bebida) o tet-OFF (la
transgnicos: los ratones doxiciclina impide la expresin del
http://www.sebbm.es/ transgnicos convencionales y los transgn).
modelos de gene targeting o de Tecnologa.- La tcnica ms utilizada
HEMEROTECA: mutagnesis dirigida del genoma.
http://www.sebbm.es/ES/divulgacion- para la generacin de ratones
Ratones transgnicos transgnicos es la microinyeccin del
ciencia-para-todos_10/la-ciencia-al-
alcance-de-la-mano-articulos-de- Descripcin.- Son RMGs portadores ADN transgnico directamente en
divulgacion_29 de un transgn (material gentico uno de los dos proncleos del
externo) integrado al azar en su embrin de una clula (cigoto)
genoma. Son generalmente modelos (Figura 1). Normalmente el ADN se
de ganancia de funcin: conducen a integra en el genoma del 5-30% de
la expresin de un nuevo gen o a la los cigotos inyectados.
sobre-expresin de un gen ya Aplicaciones.- Los modelos
existente. En este tipo de modelos transgnicos han sido ampliamente
se puede controlar con total utilizados para la identificacin y el
precisin la estructura del transgn estudio de secuencias reguladoras
pero no la posicin del genoma en de la expresin gnica en
ste que se integra. Generalmente construcciones transgnicas en que
se utilizan construcciones estas secuencias se fusionan a una
transgnicas compuestas por un molcula fcil de detectar (lacZo
promotor eucaritico y la secuencia EGFP) dirigiendo su expresin. La
codificante del gen de inters para sobre-expresin de un gen o la
expresar dicho gen, o expresin de mutaciones dominantes
sobreexpresarlo, en todas las clulas mediante transgnesis es tambin
del ratn (expresin ubicua) o en un una herramienta muy til para el
tejido concreto (expresin tejido- estudio de la funcin gnica en el
especfica) (Figura 1). Transgenes contexto del animal completo y para
de mayor tamao clonados en la generacin de modelos de

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enfermedades genticas causadas vector contiene dos fragmentos de pequeas deleciones o inserciones
por dichas mutaciones. ADN genmico llamados brazos de que se encuentran en patologas
Mutagnesis dirigida del genoma homologa (5y 3respectivamente) humanas o que son relevantes para
(gene targeting) que pertenecen al gen que interesa el estudio de la funcin gnica. Por
Descripcin.- Estos modelos se modificar y que dirigen la integracin ejemplo, mutaciones oncognicas
diferencian de los anteriores en que de dicho vector en el gen de inters identificadas en tumores humanos.
la integracin del ADN que se mediante recombinacin homloga. La posibilidad de generar ratones
introduce en el genoma se dirige a Las clulas ES, una vez modificadas knockout o knockin condicionales
una posicin concreta del mismo, por recombinacin homloga se permite controlar el tipo celular y el
con el objetivo de generar una incorporan a un embrin husped momento del desarrollo en que se
mutacin intencionada y previamente donde compiten con las clulas ES expresan estas mutaciones. Todos
diseada en dicha posicin. En del propio embrin para generar estos modelos son de gran utilidad
general se puede hablar de dos tipos todos los linajes celulares en el desarrollo de nuevas y mejores
de modelos generados mediante embrionarios, incluida la lnea terapias.
gene targeting: germinal. Los animales que nacen se
Ratones knockout: Son ratones en denominan quimeras porque derivan
los que se inactiva un gen del embrin husped y de las clulas Referencias
determinado en el genoma, ES introducidas (ver Figura). La
generalmente por delecin de toda o recombinacin homloga permite 1. http://jaxmice.jax.org
parte de su secuencia codificante. tambin dirigir la integracin de sitios 2. http://sanger.ac.uk
Tambin se puede interrumpir la de reconocimiento de enzimas 3. http://mshri.on.ca
secuencia codificante por la llamadas recombinasas (Cre y Flp) a 4. http://www.cnb.uam.es
integracin de otro gen. cualquier posicin en el genoma del 5. http://roslin.ac.uk
Ratones knockin: Son ratones en ratn. Estas enzimas catalizan la 6. Nagy A. Gertsenstein M.
los que se introducen mutaciones recombinacin entre dos de sus Vintersten K. and Behringer R.
dirigidas en la secuencia de un sitios diana (loxP y frt (2002) Manipulating the Mouse
determinado gen; por ejemplo la respectivamente). La combinacin Embryo: a Laboratory Manual. 3rd
modificacin de un codn concreto de tcnicas de recombinacin edition. Cold Spring Harbor
en la secuencia codificante para homloga y de los sistemas Cre/loxP Laboratory Press, Cold Spring
generar una cambio de aminocido y Flp/frt permiten introducir cualquier Harbor, New York.
en la protena correspondiente o la tipo de mutacin en el genoma y 7. Voncken J.W. and Hofker M.
sustitucin de la secuencia adems controlar el momento y el (2005). Transgenic mice in
codificante de un gen, o de uno de lugar dnde sta se expresa biomedical research.
sus dominios, por la de otro. (modelos knockout y knockin Encyclopedia of Molecular Cell
Tecnologa.- Se basa en la condicionales y tejido especficos). Biology and Molecular Medicine
utilizacin de las clulas madre Aplicaciones.- Un ratn knockout es 2nd Edition. Vol 14. Ed. Robert A.
embrionarias (clulas ES) como el mejor modelo para estudiar la Meyers. Wiley-Verlag-Weinheim.
vehculo para introducir funcin de un gen en el contexto 8. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Geno
modificaciones genticas en la lnea fisiolgico, analizando el fenotipo mes/
germinal del ratn (Figura 1). A que resulta de la prdida de su 9. European Bioinformatics Institute:
diferencia de los modelos funcin. Los modelos knockin se http://www.ebi.ac.uk/Databases/g
transgnicos, el ADN exgeno o utilizan sobre todo para reproducir en enomes.html
vector de targeting se introduce en el ratn alteraciones genticas tales 10. J. Craig Venter Institute:
las clulas ES, no en el cigoto. El como mutaciones puntuales o http://www.jcvi.org/cms/home/

A) B) PGK-neo Vector de targeting

Promotor Gen X
Transgn Identificacin de
clones en los que
el vector se integra
por recombinacin
homloga

Clulas ES
en las que se introduce
Clones neoR
Esquema de la generacin de ratones transgnicos
el vector de targeting
clsicos A) y de modelos de gene targeting:
Microinyeccin del transgn en
el proncleo de cigotos de ratn
knockout o knockin B).
Microinyeccin de las
Gen X clulas ES recombinantes
en blastocistos

Ratn transgnico en el que


el gen X se expresa bajo el control
del promotor elegido Quimeras con diferente grado de Agregacin de las
contribucin de las clulas ES. clulas ES recombinantes
La pigmentacin oscura indica el con mrulas
grado de contribucin de las clulas ES
inyectadas o agregadas.

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