Manual de Microbiologia UST

Direccin Nacional rea Salud
Carrera Tcnico en Laboratorio Clnico, Banco de Sangre e Imagenologa

Asignatura: Microbiologa Aplicada al Laboratorio TLC 119 Plan 3
PORTAFOLIO EVIDENCIAS
2016
PORTAFOLIO EVIDENCIAS
MANUAL
MICROBIOLOGA APLICADA AL
LABORATORIO
TM Carolina Seplveda B.
TM Valeska Troncoso O.
Revisado por TM Benjamn Riveros C.
Coordinador Nacional TNS LABI
1
Indice
Pgina
Introduccin 5
Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa 6
Mtodos de Desinfeccin y Esterilizacin 16
Niveles de Accin de los Desinfectantes 21
Esterilizacin 30
Trabajo Personal del Estudiante
Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa 35
Microbiologa 48
Microbiologa: Morfologa Bacteriana 55
Medios de Cultivo 65
Mantencin y Preparacin de los Medios de Cultivo 68
Esterilizacin de los Medios de Cultivo 70
Medios Usados en la Identificacin Bioqumica de Enterobacterias 76
Pruebas Especiales para la Identificacin Bacteriana 79
Clasificacin de las Bacterias 81
Microbiologa: Medios de Cultivo 84
Conceptos Generales de Salud 92
Muestras Microbiolgicas 96
Siembras de Muestras 97
Siembra Muestras de Orina Asptica 98
Siembra Muestra de Herida 99
Siembra Muestras Respiratorias 99
Muestra para Estudio de Koch 101
2
Pgina
Muestra Deposicin 103

Muestra Secreciones 104
Muestra Sangre 104
Muestra Secrecin Uretral 105
Muestra Lquidos 105
Estudio de Anaerobios 106
Etapas de Realizacin de un Frotis para Tincin 107
Realizacin y Estudio de Antibiogramas 109
Microbiologa: Muestras Microbiolgicas y su Diagnstico
Procedimental 111
Parasitologa 120
Clasificacin de los Parsitos 125
Protozoos 125
Helmintos 127
Artrpodos 129
Parasitosis por Protozoos 133
Amebiasis 133
Balantidiosis 134
Giardiasis 135
Isosporiasis 136
Criptosporidiasis 137
Tricomoniasis 138
Blastocistosis 139
Enfermedad de Chagas 140
Toxoplasmosis 141
Parasitosis por Helmintos 142
Ascariasis 142
Tricocefalosis 143
3
Pgina
Oxiuriasis 144
Teniasis 145
Cisticercosis 147
Difilobotriasis 148
Himenolepiasis 149
Dipilidiasis 151
Hidatidosis 152
Triquinosis 153
Fasciolasis 154
Microbiologa: Diagnstico Parasitolgico Procedimental 155
Bibliografa 172
4
INTRODUCCIN
El presente Manual de Apoyo Microbiolgico, tiene por finalidad establecer

las directrices de bioseguridad que norman el trabajo en un Laboratorio de
Microbiologa, junto con aprender a realizar las diferentes tcnicas de competencia
del Tcnico en Laboratorio Clnico, promoviendo un trabajo fcil, seguro y
tcnicamente correcto.
Se mostrarn las diferentes tcnicas y sus fundamentos, para poder as

relacionar lo que estamos haciendo con la importancia que radica el trabajo que
realizamos con la salud del paciente.
No debemos olvidar el cuidado que hay que tener al manejar las muestras
clnicas, ya que un mal manejo de stas puede generar un resultado errneo para
el paciente y ver afectada nuestra salud.
En este sentido, aparece el concepto de Bioseguridad, que se define como

el conjunto de medidas preventivas destinadas a disminuir o eliminar el riesgo de
exposicin a agentes biolgicos, fsicos y qumicos potencialmente peligrosos.
5
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
Los riesgos a los cuales se puede estar expuesto en el Laboratorio de

Microbiologa, ya sea por las infecciones adquiridas en ste o por la liberacin al
medio ambiente, deben ser reducidos con la capacitacin de todo el personal de
salud, desde su formacin emprica como desde la formacin curricular
acadmica.
Las competencias que se adquieren al capacitar al personal pueden ser medibles

y stas, a su vez, se pueden relacionar con las habilidades de las personas que
trabajen ah. Es importante evaluar el nivel de riesgo del laboratorio, clasificndolo
segn las actividades tcnicas que se realizan (tipos de microorganismos a
trabajar) y el nivel de seguridad que se requiere segn el tipo de laboratorio que
es.
Gran parte de los accidentes estn relacionados con:
el carcter potencialmente peligroso de las muestras,

el poco compromiso con el uso de elementos de proteccin (pecheras,
guantes de procedimientos, antiparras),
el mal manejo de las muestras,
errores humanos,
malos hbitos del personal y
el compromiso de los funcionarios con el seguimiento de las normas de
bioseguridad.
6
Para prevenir algn tipo de accidente relacionado con las enfermedades

infecciosas dentro del laboratorio, es muy importante implementar medidas de
buenas prcticas de bioseguridad, tales como:
No comer ni beber absolutamente nada,

No maquillarse,
Usar guantes de procedimientos cada vez que manipule una muestra,
Usar antiparras en el caso de existir riesgo de salpicaduras,
Usar mascarillas de alta eficiencia si hay generacin de aerosoles (Ej:
muestras respiratorias, lquido cefalorraqudeo).
Usar pecheras desechables por un eventual derrame y proteger nuestros
uniformes,
Lavado de manos antes y despus de manipular muestras y en forma
recurrente.
Cada laboratorio se clasifica segn los riesgos a los cuales est expuesto, de
acuerdo al tipo de microorganismos que ah se trabaje. Segn la OMS1, la
clasificacin es la siguiente:
7
Tabla 1. Clasificacin de Microorganismos Infecciosos (MO) por

Grupo de Riesgo
Grupo Riesgo Tipo de Microorganismos Aislados
Riesgo individual y Microorganismos con poca probabilidad de producir dao en el ser

1
poblacional escaso o nulo humano o animales.
Riesgo individual Microorganismo que pueden producir infecciones en el ser humano

2 moderado y poblacional pero con baja probabilidad en el personal debido a medidas
bajo preventivas y teraputicas existentes.
Microorganismo que producen infecciones graves pero no

Riesgo individual elevado
3 propagables de un ser humano a otro.
y poblacional bajo
Existen medidas preventivas y teraputicas.
Microorganismos que producen infecciones graves y se propagan de

Riesgo individual y
4 un ser humano a otro.
poblacional alto
No existen medidas preventivas y teraputicas.
1
Organizacin Mundial de la Salud.
8
Tabla 2. Relacin de los Grupos de Riesgo con los Niveles de

Bioseguridad, Prcticas de Laboratorio y Equipo de Seguridad
Nivel de Tipo de
Grupo Practica de Laboratorio Equipo de Seguridad
Bioseguridad Laboratorio
Enseanza Bsica, Ninguno, trabajo en mesa de

1 Bsico TMA*
Investigacin laboratorio al descubierto
Nivel 1
Servicios de Trabajo en mesa de
Bsico Atencin Primaria, TMA y ropa protectora, seal laboratorio al descubierto y
2
Nivel 2 Diagnstico, de riesgo biolgico CBS** para posibles
Investigacin aerosoles.
Diagnstico Prcticas de Nivel 2 ms ropa CBS adems de otros medios
Contencin
3 Especial, especial, acceso controlado y de contencin primaria para
Nivel 3
Investigacin flujo direccional todas las actividades
Prcticas de Nivel 3, ms CBS Clase III o trajes
Contencin Unidad de cmara de entrada con cierre presurizados junto con CBS
4 Mxima Patgenos hermtico, salida con ducha y de Clase II, autoclave de
Nivel 4 Peligrosos eliminacin de residuos doble puerta (a travs de la
especiales pared), aire filtrado.
* TMA: Tcnicas Microbiolgicas Aplicadas

** CBS: Cabina de Bioseguridad
9
Cabe destacar que existen conceptos que se deben manejar al momento de hablar de
bioseguridad y stos son los siguientes:
Accidente Laboral: Aqul que sucede al trabajador durante su jornada laboral

pudiendo ser de origen biolgico, fsico y/o qumico que puede revestir algn riesgo
para su salud. La exposicin laboral a fluidos corporales de riesgo biolgico es
considerada accidente laboral por lo que se encuentra amparada por el Seguro Social
contra Riegos de Accidente Laboral y Enfermedades Profesionales2.
Accidente Cortopunzante: Aqul derivado de la manipulacin de elementos o

material cortopunzante, contaminado o no, que concurre en heridas que pudieran
constituir puerta de entrada de diversos agentes infecciosos deletreos para la salud
del funcionario. Se considera como el principal agente de riesgo de transmisin el
Virus de la Hepatitis B (10 a 40%), Virus de la Hepatitis C (3 a 10%) y Virus de la
Inmunodeficiencia Humana (0,2-0,5%).
rea de Trabajo: Lugar delimitado fsicamente (pared, panel, mesn) en el cual se

manipulen y procesen muestras clnicas.
rea Limpia: Espacio fsico libre de muestras clnicas y material relacionado con ellas
(implementos para el procesamiento de ellas, desechos biolgicos, etc.).
rea Sucia: rea de trabajo del laboratorio donde se depositen muestras clnicas.
Riesgo Biolgico: Posibilidad de sufrir algn dao (infeccin) debido a agentes

infecciosos como bacterias, virus, hongos y parsitos.
Riesgo Fsico: Posibilidad de sufrir algn dao debido a fuego, radiaciones, ruidos,
vibraciones, etc.
2
Ley 16.744
10
Riesgo Qumico: Posibilidad de sufrir algn dao debido a agentes qumicos como
cidos, lcalis, etc.
Fluidos Corporales: Se clasifican segn el riesgo de transmitir enfermedades de

importancia epidemiolgica con bajo riesgo de transmisin (saliva, sudor,
deposiciones, orina).
Respecto a la planta fsica de un laboratorio, es muy importante tener en consideracin

ciertos requisitos para evitar accidentes y as trabajar de forma segura.
Es por este motivo que se debe tener puertas de acceso y escape del laboratorio con
apertura interna y debidamente sealizadas como acceso restringido a personal
autorizado.
Las reas de trabajo deben estar separadas por murallas o paneles con las puertas
sealizadas con el tipo de estudio que se realiza ah. Las superficies deben ser lavables,
iluminacin adecuada, sala para descontaminar material y para lavado de material. Baos
y duchas de emergencia
Sistema de Precauciones Universales:
Se entiende como un conjunto de tcnicas y procedimientos destinados a proteger al

personal que conforma el equipo de salud de la posible infeccin con ciertos agentes,
principalmente Virus de la Inmunodeficiencia Humana, Virus de la Hepatitis B, Virus de la
Hepatitis C, entre otros, durante las actividades de atencin a pacientes o durante el
trabajo con sus fluidos o tejidos corporales.
Toda muestra debe considerarse como potencialmente infecciosa por lo que se deben
utilizar las precauciones estndar mnimas al manejar cualquier tipo de estas.
11
Lavado de Manos:
Debe realizarse siempre antes y despus de colacin y eliminacin de guantes. Examinar
o realizar procedimiento en un paciente. Ej.: punciones, manipular fluidos corporales.
Tipos de Lavado de Manos:

o Lavado de alta frecuencia
o Lavado clnico
o Lavado en seco.
Lavado de Alta Frecuencia usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos no invasivos: Expectoracin,
deposicin, orina en paciente incontinente, etc.
o Manejo de muestras clnicas en general.
Instrucciones:
- Subir las mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar posicin cmoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua y djela corriendo.
- Mojar las manos y muecas antes de aplicar jabn de glicerina
- Depositar gotas de jabn en la palma de la mano
- Jabonar las manos y muecas friccionando 15 segundos las manos para
obtener espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
las muecas.
- Secar con toalla de papel desechable.
- Cerrar la llave con la toalla de papel y elimnela.
12
Lavado Clnico usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos medianamente invasivos y/o de
corta duracin
o Toma de muestras microbiolgicas (urocultivos, hemocultivos, puncin venosa o
arterial, etc.)
o Atencin de pacientes con precauciones de transmisin
o Manipulacin de muestras microbiolgicas durante su anlisis
Instrucciones:
- Subir mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar una posicin cmoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua.
- Mojar las manos y muecas antes de aplicar jabn antisptico
- Dispensar jabn desde el dispensador
- Jabonar sus manos y muecas, friccionando 30 segundos para obtener
espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
la mueca.
- Secar las manos con 1 a 2 hojas de toalla de papel desechable.
- Cerrar llave de agua con la toalla de papel y elimnela.
Lavado en Seco con Alcohol Gel:

o Se usa hasta 3 veces seguidas con manos visiblemente limpias y secas entre
lavado de manos.
o Usado para:
- Realizacin de procedimientos no invasivos o invasivos de corta duracin
- Atencin de pacientes con precauciones de transmisin
- Manejo de muestras biolgicas en general.
Este se debe friccionar durante 15 minutos.
13
Uso de Guantes de Procedimientos:

Se debe tener en cuenta que los guantes de procedimientos nunca deben sustituir el
lavado de manos. Tampoco estos deben ser lavados, ya que el ltex no esta fabricado
para ser lavado y reutilizado, ya que puede formar microporos cuando es expuesto a este
estrs.
Siempre utilizar al manipular cualquier tipo de muestra.
Manejo de Derrames de Muestras en Superficies:

o Cubrir con toalla de papel zona derramada.
o Verter solucin de cloro al 0,5% sobre el papel absorbente.
o Dejar actuar por 20 minutos.
o Recoger con mano enguantada papeles embebidos con solucin de cloro y
desechos biolgicos (basureros amarillos).
o Retirar con pala y esptula o cepillo si hay material corto punzante.
o Rociar 2 a 3 veces ms con solucin de cloro al 0,5%, secar con papel y eliminar
en desechos biolgicos (contenedores de color amarillos).
Manejo de Derrames Relacionados a Centrfugas:

o Esperar detencin total de la centrfuga. Si el derrame se produce por quiebre de
tubos con material potencialmente infeccioso se debe detener la marcha de la
centrfuga y mantener sta cerrada por lo menos 30 minutos, antes de su
apertura.
o Antes de destapar la centrfuga, colocarse lentes, mascarilla, guantes y pechera.
o Abrir y cubrir base con toalla de papel.
o Rociar abundantemente solucin de alcohol 70 en paredes y base.
o Dejar actuar 10 minutos.
o Retirar con mano enguantada (doble guante si hay presencia de material
cortopunzante) papeles embebidos con solucin de alcohol 70.
o Eliminar restos segn corresponda a material cortopunzante (cajas amarillas) o
desechos biolgicos (contenedores de color amarillos).
14
o Rociar 2 a 3 veces ms con alcohol 70, secar con papel y eliminar en basura
comn.
Manejo de Derrame de Muestras con Sospecha de Agentes de Transmisin Area

(muestras respiratorias, sangre, LCR)
o Cubrir zona de boca y nariz con delantal y contener respiracin.
o Evacuar lugar de derrame y cerrar seccin.
o Avisar a Jefatura o Supervisin.
o Esperar 60 minutos antes de entrar (para decantacin de partculas en
suspensin).
o Cubrir derrame con toalla de papel.
o Rociar abundante Cloro al 2% y dejar actuar 10 a 15 minutos.
Precauciones Generales Durante las Actividades Prcticas:

Uso de guantes de procedimientos, y todo tipo de barrera de proteccin, segn la
actividad a realizar.
Pipeteo: Est prohibido pipetear con la boca, debido a los riesgos que involucra el uso
de pipetas porque existe la posibilidad de succin bucal. Solo se deben ocupar con
propipetas.
Extensiones y Frotis para el Examen al Microscopio: Estas fijaciones se deben utilizar

con guantes de procedimientos y deben ser eliminadas en contenedores amarillos de
material cortopunzante.
Mecheros: Se deben encender en el momento en que comienza el trabajo en el

laboratorio, es decir cuando realicemos siembra de muestras, tinciones, antibiogramas.
Las asas metlicas se deben incinerar siempre al utilizarlas.
15
MTODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN
En los ambientes hospitalarios podemos encontrar gran variedad de microorganismos. La

presencia de stos por si solos no constituye un riesgo para los pacientes al menos que,
mediante una dosis infectante, puedan afectar a un husped susceptible. La mayora de
los objetos inanimados destinados a la atencin de pacientes requieren de algn tipo de
procedimiento que elimine o disminuya los microorganismos con el fin de interrumpir la
cadena de transmisin y ofrecer una prctica segura para el paciente.
Los objetos inanimados destinados a la atencin de pacientes requieren de

procedimientos que ayuden a disminuir o eliminar los microorganismos con el fin de
interrumpir la cadena de transmisin y ofrecer una prctica segura para el paciente.
Los distintos procedimientos que se utilizan para la eliminacin o disminucin de la carga

de microorganismos deben ser seleccionados adecuadamente para los distintos artculos
dependiendo de la naturaleza del material y a la vez los procedimientos a realizar. Dentro
de los principales procedimientos podemos encontrar la descontaminacin, desinfeccin y
esterilizacin.
Semmelweis3 fue un mdico hngaro, de origen alemn, que consigui disminuir

drsticamente la tasa de mortalidad (en un 70 %) por sepsis puerperal entre las mujeres
que daban a luz en su hospital mediante la recomendacin a los obstetras que se lavaran
las manos con una solucin de cal clorurada antes de atender los partos.
En 1862, Luis Pasteur publicara la hiptesis microbiana, planteando que las infeccin
estn producidas por agentes causales. Y Joseph Lister en 1865, extendera la
prctica quirrgica higinica al resto de especialidades mdicas destacando la
importancia de las medidas aspticas. Introdujo los trminos de asepsia y antisepsia,
utilizando el fenol como primer antisptico.
3
Ignc Semmelweis 1918-1865.
16
En la actualidad cada recinto de salud se debe regir bajo las normas establecidas por la
Norma General Tcnica Sobre Esterilizacin y Desinfeccin de Elementos
Clnicos del Ministerio de Salud4. Estas normas tienen por objetivo uniformar los
procesos de esterilizacin y desinfeccin en el pas, asegurar la calidad del material de
uso clnico y recomendar sistemas para una mayor eficiencia de estas actividades.
En la atencin directa se utilizan numerosos artculos y equipos que tienen contacto con el
paciente por distintas vas. El mtodo de eliminacin de microorganismos requerido por
cada artculo, est directamente relacionado con el riesgo potencial que tiene ese artculo
en particular de producir infeccin en el paciente. En 1968, Spaulding clasific los
artculos en tres categoras de acuerdo al riesgo antes mencionado:
Artculos Crticos: Corresponden a artculos que se ponen en contacto con cavidades

normalmente estriles del organismo o el tejido vascular. stos deben ser siempre
estriles.
Artculos Semicrticos: Corresponden a artculos que entran en contacto con piel no

intacta o con mucosas. Estos artculos, deben estar libres de los microorganismos antes
mencionados y de preferencia deben ser estriles. En caso que la esterilizacin no sea
posible deben ser sometidos al menos a desinfeccin de alto nivel. Ejemplos de artculos
en esta categora son circuitos de las mquinas de anestesia, y endoscopios.
Artculos No Crticos: Estos artculos toman slo contacto con piel sana o no se ponen
en contacto con pacientes por lo que el riesgo de producir infecciones es mnimo o
inexistente. En general slo requieren limpieza y secado.
Para entender los aspectos relacionados con la higiene del medio sanitario es importante
que se tengan claro el significado de diversos trminos:
4
http://juridico1.minsal.cl/RESOLUCION_1665_01.doc
17
Infeccin
Se denomina infeccin a la penetracin en un husped de un microorganismo o agente
infeccioso. Los agentes infecciosos son los microorganismos y pueden encontrarse en
cualquier parte del medio ambiente pudiendo ser bacterias, hongos, virus y protozoos.
La infeccin no siempre produce una enfermedad ya que el organismo dispone de
mecanismos de defensa producidos por el sistema inmunolgico capaces de actuar sobre
el agente agresor. Cuando el sistema inmunolgico es sobrepasado por los agentes
infecciosos aparecen los diversos signos y sntomas de las distintas enfermedades.
Asepsia
La asepsia es un conjunto de medidas y tcnicas que tiene como finalidad impedir la
proliferacin de microorganismos, as impidiendo la contaminacin del material, personas
y ambiente hospitalario. Se logra una ausencia total de microorganismos patgenos que
causan enfermedades.
Antisepsia
Utilizacin de agentes qumicos sobre la piel o sobre tejidos vivos para inhibir o eliminar
los microorganismos (no implica una accin esporicida).
Limpieza
Procedimiento fsico por arrastre del material orgnico contenido en los utensilios.
Antispticos y Desinfectantes:
Los antispticos y los desinfectantes son usados ampliamente en los hospitales y otros
centros del cuidado de la salud. Son parte esencial de las prcticas de control de la
infeccin y ayudan en la prevencin de las infecciones nosocomiales. Los agentes
antispticos rpidamente desinfectan superficies por disminucin de la cantidad de
bacterias sobre la piel intacta.
Cuando se usan pre-quirrgicamente, los antispticos sirven como profilcticos para la
prevencin de la infeccin.
18
Se denomina desinfeccin a la tcnica de saneamiento que tiene como objetivo la

destruccin de formas vegetativas de microorganismos en objetos inanimados y no
necesariamente esporas. Esta destruccin se realiza por mtodos qumicos o fsico
siendo muy til para la mayora de los microorganismos.
Existen agentes desinfectantes que se clasifican dependiendo del tipo de destruccin
frente a los microorganismos vegetativos. De acuerdo al tipo de agentes que es capaz de
destruir, se han definido tres niveles de desinfeccin:
Desinfeccin de Bajo Nivel:

La desinfeccin de nivel bajo elimina bacterias patgenas en su forma vegetativa y
algunos hongos, no elimina el Mycobacterium tuberculosis ni los virus de tamao pequeo
no lipdico. Existen desinfectantes de nivel bajo que no destruyen las formas vegetativas
de todas las bacterias.
Desinfeccin de Nivel Intermedio:

La desinfeccin de nivel intermedio elimina formas vegetativas de bacterias, hongos y
virus pero no de tamao pequeo no lipdico. En circunstancias especiales puede eliminar
Mycobacterium tuberculosis.
Desinfeccin de Alto Nivel:

La Desinfeccin de alto nivel elimina todos los microorganismos incluyendo los virus
resistentes y Mycobacterium tuberculosis. No elimina esporas bacterianas.
Entre los principales mtodos de desinfeccin podemos encontrar Desinfeccin Trmica

por Medio de Vapor a Baja Temperatura y la Desinfeccin por Mtodos Qumicos.
Desinfeccin Trmica por Medio de Vapor a Baja Temperatura:

Esta consiste en procesar el material en autoclave de vapor a temperatura de 73C. El
equipamiento usado para este proceso es una autoclave a vapor comn con
modificaciones para efectuar ciclos a menor temperatura.
19
Este mtodo puede utilizarse para la desinfeccin de artculos que resistan la temperatura
requerida y al poder utilizar material empaquetado permite su posterior almacenaje. Para
obtener una desinfeccin de alto nivel se debe procesar en la autoclave por un tiempo de
12 a 15 minutos.
Desinfeccin por Mtodos Qumicos:

Consiste en poner en contacto el material o superficies con agentes qumicos. Para la
desinfeccin de alto nivel, el material debe permanecer en inmersin por un tiempo
determinado de acuerdo al producto.
La institucin de salud debe tener definido el listado de desinfectantes en uso y a su vez

los desinfectantes de alto nivel deben estar aprobados por el Ministerio de Salud, estando
sujetos a una seria de normas (Normas Tcnicas Sobre Esterilizacin y Desinfeccin de
Elementos Qumicos del MINSAL)
Las propiedades que podemos encontrar en un desinfectante ideal son:
Amplio espectro
Rpida accin
No se afecta por factores del medio ambiente
Sin toxicidad
Compatibles con las superficies
Dentro de los desinfectantes usados con mayor frecuencia en los recintos
hospitalarios podemos encontrar cido Peractico, alcoholes, amonios
cuaternarios, cloro y compuestos clorados, fenoles, formaldehdo, Glutaraldehido,
orthophtalaldehido y perxido de hidrgeno estabilizado
20
Niveles de Accin de los Desinfectantes
Alto Nivel
El procedimiento de desinfeccin de alto nivel es complejo porque se aplica en numerosas
oportunidades a equipos que son difciles de manipular como son los endoscopios. En
general dado que el proceso de desinfeccin de alto nivel es engorroso, difcil de evaluar
y sujeto a falla humana, dentro de lo posible deben preferirse los mtodos vigentes de
esterilizacin para los artculos de uso mdico. Los artculos no crticos y las superficies
inanimadas (Ej. muebles, suelo y muros) en general no han sido involucradas en la
transmisin de infecciones y se pueden tratar con limpieza y en situaciones excepcionales
con desinfectantes de nivel bajo o intermedio.
Los agentes desinfectantes apropiados para desinfeccin de alto nivel deben cumplir
varias caractersticas:
Amplio espectro
Estabilidad frente a materia orgnica
Compatibilidad con el material de los equipos
Posibilidad de medir su actividad o concentracin por medio de indicadores
qumicos
Idealmente estos desinfectantes deben tener rapidez en su accin, baja toxicidad, vida
media prolongada, degradabilidad en el medio ambiente y ausencia de olor.
El personal a cargo del procesamiento de estos equipos, debe estar capacitado y ser
evaluado en forma constante. Para obtener buenos resultados, se deben lavar todas las
superficies (internas y externas) usando detergentes enzimticos o neutros que aseguren
la eliminacin de materia orgnica sin daar los equipos
Si se procesan por inmersin, se debe asegurar que tanto superficies internas como
externas se pongan en contacto con el agente desinfectante. Para el enjuague se debe
21
utilizar agua estril y en el caso de no contar con este suministro, se debe usar agua
potable y posteriormente aspirar alcohol por los canales.
El secado debe ser realizado con aire filtrado para evitar su re contaminacin, se
recomienda procesar los equipos inmediatamente antes de su uso para evitar
contaminacin de los mismos. No obstante si no se utilizan inmediatamente de
procesados, el almacenamiento debe ser en un sitio libre de polvo y las superficies
externas protegidas con cubiertas estriles
Mtodos de Desinfeccin de Alto Nivel
Glutaraldehido
Corresponde a un di aldehdo saturado que se utiliza como desinfectante de alto nivel.
Las formulaciones convencionales de Glutaraldehido tienen una duracin aproximada de
14 das. Existen formulaciones nuevas en las que se han agregado agentes estabilizantes
para prolongar la vida til a alrededor de 28 das. El mecanismo de accin de
Glutaraldehido se debe a la alquilacin de los grupos amino, sulfidrilo, hidroxilo y
carboxilo, los cuales alteran el ARN, el ADN y la sntesis proteica en los microorganismos.
Cloro y Compuestos Derivados del Cloro

Los agentes clorados tienen amplio espectro microbicida. Su uso est limitado porque se
inactivan en presencia de materia orgnica, son inestables y corroen el material metlico.
Por otra parte, son txicos en contacto con piel y mucosas.
Los hipocloritos son los desinfectantes clorados ms utilizados. Su presentacin lquida

como hipoclorito de sodio es la ms conocida, y existe una forma slida como hipoclorito
de calcio. Las soluciones de cloro no deben conservarse en envases destapados por ms
de 12 horas debido a la evaporacin del producto activo, haciendo que las
concentraciones de cloro disponible disminuyan.
cido Peractico/Perxido de Hidrgeno
22
Mezcla de cido Peractico al 0.08% y Perxido de Hidrgeno al 1%. No requiere
activacin, su duracin es de 14 das. Buena compatibilidad con el material. Experiencia
limitada en endoscopios.
Formaldehdo
Este agente inactiva los microorganismos por alquilacin de los grupos aminos y sulfidrilo
de las protenas y el anillo del tomo de nitrgeno de las bases purnicas. El formaldehdo
con alcohol es un desinfectante de alto nivel y fue usado en el pasado para la
desinfeccin de equipos. En la actualidad su uso est discontinuado debido a su alta
toxicidad y el olor penetrante que aparece an a muy bajas concentraciones.
Caractersticas y tiempo de inmersin de productos vigentes disponibles en Chile

para Desinfeccin de Alto Nivel.
23
Para efectuar los procedimientos de Desinfeccin de Alto Nivel siempre deben

cumplirse los siguientes aspectos
El material debe estar totalmente libre de materia orgnica, porque sta interfiere
en el proceso de desinfeccin.
Se recomienda la utilizacin de detergentes de tipo enzimtico y sumergir el
endoscopio inmediatamente despus de ser utilizado.
Enjuagar y secar prolijamente para evitar dilucin del desinfectante y alterar su
concentracin.
El tiempo de desinfeccin de alto nivel debe ser establecido de acuerdo a las
caractersticas propias de cada desinfectante.
No es recomendable enjuagar los artculos desinfectado con agua corriente debido
a la posibilidad de contacto con superficies contaminadas.
En caso de no contar con agua estril para este fin debe usarse alcohol etlico o
isoproplico para el ltimo enjuague.
Nivel Intermedio:
Se utiliza para la limpieza de superficies o de instrumentos en los que es poco probable la
contaminacin por esporas bacterianas o por microorganismos con alto grado de
resistencia.
Mtodos de desinfeccin de Nivel Intermedio
Alcoholes
Destruyen rpidamente formas vegetativas de bacterias, hongos, virus y M. tuberculosis.
24
El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfeccin
de superficies y artculos no crticos. Se utiliza en la desinfeccin de termmetros orales y
rectales, laringoscopios y pequeas superficies como las tapas de goma de algunos
frascos de medicamentos y para el enjuague de canales de endoscopios.
Fenoles
Estos productos fueron de los primeros usados en desinfeccin hospitalaria. En
concentraciones altas, el fenol acta como un gran txico del protoplasma penetrando y
destruyendo la pared celular y precipitando las protenas celulares. Se usa para limpieza
de superficies hospitalarias y elementos no crticos.
Compuestos Yodados
Similares a los alcoholes, pero ligeramente ms txicos, Tambin se desactivan con las
sustancias orgnicas.
Bajo Nivel
Se utilizan para tratar instrumentos no crticos, no traspasan las mucosas ni los tejidos
estriles de los pacientes.
Mtodo de Desinfeccin de Bajo Nivel:
Amonios Cuaternarios (AC)

Estos productos han sido utilizados ampliamente como desinfectantes y hasta hace
algunos aos como antispticos. No deben usarse como antisptico ni como
desinfectante de alto nivel, debido a que existe evidencia que las soluciones pueden
contaminarse con bacilos gram negativos ya que el agente activo es absorbido por textiles
como los gneros y gasas. La accin microbicida de los amonios cuaternarios es en
general muy limitada. La mayora de las formulaciones son como
detergentes/desinfectantes y su uso se limita al saneamiento ambiental comn de
superficies.
Antispticos
25
Los antispticos son biosidas o sustancias qumicas que se aplican sobre los tejidos
vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el crecimiento de microorganismos patgenos.
No tienen actividad selectiva ya que eliminan todo tipo de grmenes.
Un antisptico ideal debera cumplir con los siguientes atributos para su eleccin:
Amplio espectro
Bajo costo
Inocuo para tejidos vivos
No debe ser toxico
Rapidez y eficacia en materia orgnica
Efecto acumulativo y residual
Baja capacidad de generar resistencia
No irritante, ni sensibilizante
Los antispticos y desinfectantes se clasifican ms en la actualidad segn el grupo

qumico a las que pertenecen:
Jabn Corriente
Por remocin mecnica (arrastre) tiene la capacidad de eliminar a los microorganismos
presentes en la microbiota transitoria.
Jabn Antisptico
A diferencia del jabn corriente, el jabn antisptico tiene la capacidad de eliminar los
microorganismos presentes en la microbiota residente. Este debe ser utilizado en los
siguientes momentos:
Antes de hacer un procedimiento con cualquier paciente

Antes de procedimientos invasivos
Antes de atender pacientes en unidades crticas
Antes y despus de atender pacientes en aislamiento
Despus de un procedimiento
26
Alcoholes
El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de las protenas de los
microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es posible en presencia de agua; por
este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin bacteriosttica al inhibir la
produccin de metabolitos esenciales para la divisin celular rpida. Tiene accin
bactericida pero poco efecto residual. Los alcoholes tienen excelente actividad frente a
todos los microorganismos, exceptuando las esporas, se inactiva por sustancias
orgnicas por lo que se debe limpiar la piel antes de ser usados y no son txicos. Dentro
de los efectos adversos que se pueden destacar por el uso de alcoholes podemos
destacar que al ser aplicado brevemente a la piel no causa dao, pero irrita si se deja
mucho tiempo. En superficies lesionadas empeora el dao y causa un cogulo bajo el
cual pueden crecer bacterias, por lo que no se utiliza como antisptico para heridas
abiertas. Su utilizacin puede provocar irritacin y sequedad de la piel. Al volatilizarse
puede causar irritacin de la mucosa nasal y lagrimal.
Alcohol 70%- 90%

Se utiliza principalmente para el lavado de manos en preparacin preoperatorio y
preparacin de piel en procedimientos invasivos de corta duracin. Dentro de sus ventajas
podemos destacar su accin rpida y amplio espectro y sus limitantes es la rpida
evaporacin, inflamable, produce sequedad de piel y no tiene efecto residual
Alcohol Gel
Reemplaza lavado de manos clnico (solo 3 veces el lavado clnico) tiene gran aceptacin
por los usuarios y mejora la adherencia.
Compuestos Yodados
27
El yodo y sus compuestos han sido usados ampliamente para la prevencin de las
infecciones y el tratamiento de heridas. Los compuestos yodados son agentes oxidantes,
precipitan las protenas bacterianas y cidos nucleicos.
El yodo tiene una poderosa actividad germicida, ataca bacterias gram positivas y gram
negativas, Micobacterias, esporas, hongos, virus, quistes y protozoos. Hay varios tipos de
preparaciones de yodo, segn la zona que haya que desinfectar. La actividad antisptica
de todas las preparaciones depende del yodo en forma libre. Se emplea en: la
desinfeccin de la piel sana, el tratamiento de afecciones de la piel causadas por
bacterias y hongos, la limpieza de las heridas en solucin acuosa, etc.
Alcohol Yodado (Alcohol 70% + Yodo 0,5%)

Se utiliza en el lavado de manos preparacin preoperatoria y preparacin de piel. Tiene
como ventaja su amplio espectro, accin rpida, Delimitacin de zonas por coloracin;
puede producir sequedad de piel, Irritacin, alergia y se puede evaporar.
Clorhexidina
Constituye uno de los tres antispticos quirrgicos ms importantes y es el
antisptico bucal que ms se usa actualmente. La clorhexidina posee amplio espectro
de accin. Es bactericida sobre bacterias gram positivas y gram negativas.
Las ventajas que justifican el empleo de la clorhexidina son la accin germicida rpida y
su duracin prolongada, gracias a que sta sustancia tiene gran adhesividad a la piel y
buen ndice teraputico.
Clorhexidina (2% / 4%)

Se utiliza en lavado quirrgico de manos, preparacin de piel preoperatoria y
procedimientos invasivos. Dentro de los beneficios podemos encontrar: accin bactericida
rpida, actividad residual duradera entre 6 y 8 horas, reduccin rpida del nmero de
bacterias de la piel, efecto antisptico prolongado, amplio espectro de actividad.
28
Dentro de las limitaciones se encuentran su poco efecto frente a Micobacterias, efecto
lento (3 minutos en adherirse al estrato corneo), produce ototoxicidad e irritacin de
crnea.
Triclosn
Es un derivado fenlico, poco soluble en agua su mecanismo de accin es disrupcin de
la membrana bacteriana a travs del bloqueo de la sntesis de lpidos. El Triclosn ha
demostrado actividad contra bacterias gram positivas y gram negativas, bacterias
multiresistentes donde se destaca su accin frente al Staphylococcus aureus
meticilinorresistente.
Entre sus propiedades, el Triclosn tiene rpida accin y son tiles frente a la microbiota
residente y transitoria. Su eficacia es inhibida mnimamente por la presencia de materia
orgnica, y tiene gran afinidad con la piel, no produciendo irritacin ni efectos txicos.
El Triclosn est disponible en un amplio rango de productos, incluyendo jabones para la
preparacin pre quirrgica de la piel, lavado de manos y antispticos se utiliza adems
como desinfectantes de superficies y lavado de manos en la industria de la alimentacin.
Triclosn (0,5% al 1%)

Se utiliza en el lavado clnico de manos. Tiene como ventajas su buen efecto residual,
buena aceptacin de usuarios y amplio espectro. Dentro de sus limitantes podemos
encontrar su nulo efecto frente a Pseudomonas spp.
Consideraciones en el uso de un antisptico y desinfectantes

Su almacenaje (Fecha de Vencimiento y Condiciones )
Contaminacin intrnseca (al momento de utilizar )
Inactivacin : Materia orgnica, agua, jabones, Resistencias
Los desinfectantes deben usarse solo en objetos inanimados o superficies.
Los antispticos deben usarse solo para piel indemne
29
No rellenar ni trasvasijar antispticos ni desinfectantes
No deben hacerse mezclas (altera su accin, inactivndolos)
Deben usarse respetando las instrucciones del fabricante respecto a la duracin
del producto, conservacin, dilucin y tiempo de contacto
Previo a su uso, limpiar la superficie
Esterilizacin
La esterilizacin del material de uso mdico es un componente clave en la prevencin y
control de infecciones. Histricamente han sido utilizados mtodos fsicos para la
destruccin de microorganismos que actan por medio de altas temperaturas como son la
autoclave a vapor y las estufas por calor seco (Pupinel).
En los ltimos aos ha habido un aumento progresivo de artculos crticos que no pueden
ser sometidos a calor. Por lo anterior, se han desarrollado nuevas tecnologas de
esterilizacin a bajas temperaturas.
Los mtodos validados que se utilizan en la actualidad en los hospitales para la

esterilizacin del material pueden clasificarse en mtodos de esterilizacin a altas
temperaturas: calor seco (Pupinel) y calor hmedo (Autoclave a Vapor), y mtodos de
esterilizacin a bajas temperaturas: Inmersin en cido Peractico, xido de Etileno,
vapor de Formaldehido, Plasma de Perxido de Hidrgeno y Plasma combinado
(Perxido de Hidrgeno y cido Peractico).
Mtodos de Esterilizacin a Altas Temperaturas
Esterilizacin por Calor Hmedo:

Este mtodo de esterilizacin elimina microorganismos por desnaturalizacin de las
protenas, proceso que es acelerado por la presencia de agua, requiriendo temperaturas y
tiempos menores de exposicin que el calor seco. Este mtodo de esterilizacin se
considera el mtodo ms efectivo, econmico y rpido disponible en la actualidad, por lo
30
que debe ser la primera opcin en la seleccin de mtodos de esterilizacin; el equipo
ms utilizado es el autoclave a vapor.
Existe una gran variedad de modelos de autoclaves. Estos tienen diferencias en cuanto a
operacin, tiempos de esterilizacin y forma de accin.
Clasificacin de los Autoclaves:

1. Segn Sistema de Operacin:
Manuales
Semiautomticos
Automticos
2. De acuerdo a la Produccin de Vapor:

Vapor centralizado
Generador elctrico incorporado
Vapor centralizado y generador elctrico incorporado
Generador a gas
3. En relacin al Funcionamiento:
Desplazamiento por gravedad
Con vaco previo
De sistema pulsante
Esterilizacin por Calor Seco:

Para la esterilizacin con calor seco se utilizan estufas que comnmente reciben el
nombre de Pupinel.
Este sistema elimina microorganismos por coagulacin de las protenas. La accin

microbicida del calor seco est condicionada por la presencia de materia orgnica o
31
suciedad en el artculo. El calor seco penetra lentamente en los materiales por lo que se
requieren largos perodos de exposicin. El uso del calor seco debe limitarse a materiales
que no pueden ser esterilizados en autoclave.
Los materiales que pueden esterilizarse en Pupinel y no pueden esterilizarse en autoclave
son slo aceites, vaselina, petrolatos y polvos.
Existen dos tipos de equipos que obtienen el calor a travs de la energa elctrica:
Conveccin gravitatoria
Conveccin mecnica
Esterilizacin a Baja Temperatura
Esterilizacin por xido de Etileno (ETO)

El xido de etileno es un agente qumico con alto poder microbicida que puede ser
utilizado para esterilizar artculos sensibles al calor y a la humedad. Su accin microbicida
se produce por alquilacin de la pared celular del microorganismo que inhabilita a la clula
para tener un metabolismo normal o reproducirse.
La esterilizacin por xido de etileno debe ser realizada en equipos que renen los
parmetros para lograr la esterilizacin. Los equipos existentes son automticos con
dispositivos de seguridad que impiden abrir el equipo mientras no se haya completado el
ciclo. Estn dotados de un sistema de vaco para facilitar la introduccin del gas en la
cmara y la evacuacin despus del perodo de exposicin. Existen unidades de distintos
tamaos y cada establecimiento deber seleccionar el adecuado de acuerdo a sus
necesidades.
Esterilizacin por Perxido de Hidrgeno en estado de Plasma:

El Perxido de Hidrgeno (H2O2) es un agente qumico que se ha utilizado por muchos
aos como desinfectante de alto nivel. Elimina los microorganismos por oxidacin.
32
La esterilizacin por perxido de hidrgeno se realiza en equipos automticos.

Es compatible con la mayora de los materiales de uso mdico. No son compatibles con el
mtodo los derivados de la celulosa como el papel, gnero, lino, ni tampoco lquidos y
polvos.
Esterilizacin Por Acido Peractico

El cido Peractico es un agente qumico oxidante soluble en agua, efectivo en forma
rpida contra un amplio espectro de microorganismos a bajas concentraciones. Tiene
poder bactericida, fungicida y esporicida. No deja residuos txicos. Se ha utilizado desde
hace aos como desinfectante de alto nivel.
Esterilizacin con Formaldehdo

El formaldehdo esteriliza a temperaturas entre 60 y 80C. Elimina los microorganismos
por alquilacin, requiere equipos especiales.
Esterilizacin por Radiaciones Ionizantes

La esterilizacin se obtiene sometiendo los materiales a dosis predeterminadas de
radiaciones. Hasta la fecha se han utilizado tecnologas con rayos gamma. Este tipo de
proceso es de alta complejidad y slo puede ser realizado bajo estrictas condiciones de
seguridad. Requiere infraestructura especializada que en general no es posible ni se
justifica en centros de salud.
33
Ventajas y Limitaciones de los distintos Mtodos de Esterilizacin
Mtodo Ventajas Limitaciones

Autoclave a vapor Ciclos ms cortos. Menor costo de Mtodo no compatible con material
operacin. Efectivo frente a la eliminacin Termosensible.
de priones. No elimina pirgenos.
No presenta toxicidad para el personal ni No esteriliza sustancias oleosas ni polvos.
para el ambiente. Certificable.
Calor seco Equipamiento de menor costo que el Dao del material por exposicin a
autoclave Temperaturas elevadas.
Facilidad de operacin de los equipos Tiempos de exposicin prolongados en
Comparacin con la esterilizacin a vapor.
Dificultad en la certificacin del mtodo.
Costos de operacin elevados.
No hay informacin respecto a su
efectividad contra priones
xido de etileno Permite la esterilizacin de material Requieren perodos prolongados de
Termosensible Proceso y aireacin.
Certificable No es un mtodo efectivo contra priones.
Penetracin Txico para el personal, pacientes y ambiente
Plasma Baja temperatura. Incompatibilidad con algunos materiales.
Ciclos de corta duracin. Controversia respecto a su utilizacin en
No txico para las personas ni para el artculos con lmenes largos entre 1
Ambiente. y 2mt. y angostos (entre 1 y 3mm).
No requiere instalaciones especiales No elimina priones
cido Peractico Rpido. Efectivo en la esterilizacin Slo puede ser utilizado para material
lquido de endoscopios y laparoscopios sumergible
34
Equipo automtico estandarizado Esteriliza un solo contenedor por ciclo por lo
No contamina al medio ambiente que no puede ser utilizado para cantidades
Mayores de material.
No elimina priones
Debe ser utilizado en forma inmediata
Formaldehdo Baja temperatura. Incompatibilidad con algunos materiales.
Ciclos de corta duracin. Mtodo no aprobado para su utilizacin en
Certificable USA
No elimina priones
35
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE

Bioseguridad en el Laboratorio de
Microbiologa
Desarrolle los siguientes Talleres o Actividades de acuerdo a

instrucciones dadas para cada uno de ellos.
El desarrollo de estos talleres le ayudar a estudiar y a
comprender lo relevante que sern en su quehacer tcnico y
cuidado personal.
La base del conocimiento est en esta etapa del proceso,
despus solo quedar el aplicar y agregar su proactividad,
dndole el sello que lo debe caracterizar en su Prctica
Curricular y Laboral.
36
Taller Formativo N 1 Asepsia y Antisepsia I Parte
I tem: Respuesta Breve
1.- Qu representa una Norma?
2.- A quin le corresponde la responsabilidad en un Centro Asistencial de entregar

los elementos estriles y desinfectados, sin que ellos involucren un riesgo para el
paciente?
3.- Defina los siguientes conceptos:
Esterilizacin:
Desinfeccin:
Asepsia:
37
Antisepsia:
Limpieza:
Descontaminacin:
Empaque:
4.- Qu importancia le atribuye Ud. a la presencia de materia orgnica en los

elementos que van a ser sometidos al proceso de esterilizacin?
5.- Realice un listado de microorganismos considerando su capacidad de resistencia

a los procesos de esterilizacin (de mayor a menor resistencia)
6.- Qu mtodos de esterilizacin son recomendables para esterilizar los siguientes

materiales?:
Lquidos :
Plsticos :
Vidrios :
Goma :
38
7.- Identifique en orden las etapas del proceso de esterilizacin:
8.- Cmo se realiza la recepcin y distribucin del material en una Central de

Esterilizacin?:
9.- Cules son las etapas del proceso de lavado?:
10.- Mencione los dos elementos ms importantes para el lavado de material y

describa sus caractersticas ms relevantes:
11.- Cmo se clasifican los tipos de empaques a preparar en una Central de

Esterilizacin? Mencione 3 ejemplos de cada uno de ellos.
39
Taller Formativo N 2 Esterilizacin y Desinfeccin
I tem: Respuesta Breve
1.- Cules son los mtodos de Esterilizacin a Alta Temperatura?
40
2.- Cules son los mtodos de Esterilizacin de Baja Temperatura?
3.- Describa las caractersticas del Mtodo de Esterilizacin por Calor Hmedo:
4.- Identifique la Clasificacin de los Autoclaves:
41
5.- Qu variables o parmetros participan en el proceso?:
6.- En qu consisten los Esterilizadores Flash y cuando se utilizan?:
7.- Desarrolle un comentario referido a los esterilizadores por Calor Seco:
42
II tem: Completacin de Oraciones
Tiempo de esterilizacin es aquella que comienza

cuando.
La relacin de tiempo / temperatura para el Pupinel esC por.... min.
El xido de Etileno se caracteriza por..
La exposicin al ETO puede ocurrir por y
La aireacin es fundamental en.
La tecnologa ms barata y efectiva para esterilizar es.
La esterilizacin por radiaciones ionizantes es en base a rayos.
Los controles mecnicos de un autoclave son -
Las etapas del proceso de lavado son: - - .
El uso de agua dura en los materiales se detecta por la presencia
de
43
Taller Formativo Individual N 3 Mapa Conceptual

Indicador Biolgico
Realice la lectura del siguiente artculo El uso de Indicadores Biolgicos en la

Esterilizacin con xido de Etileno, y desarrolle con posterioridad un Mapa
Conceptual una vez finalizada su revisin y comprensin lectora..
El uso de indicadores biolgicos en la Esterilizacin con xido

de Etileno
Introduccin
El xido de etileno desde los aos 50 ha sido el agente esterilizante por excelencia y desde que
comenz a utilizarse ha demostrado ser uno de los mtodos ms sencillos, seguros y
econmicos para esterilizar a baja temperatura toda una gama de dispositivos mdicos, en
fbricas como as tambin e todas las instituciones hospitalarias tanto privadas como estatales.
Este mtodo de esterilizacin an no ha podido ser superado por otras tecnologas, lo que lo
hace imprescindible para la esterilizacin de elementos termo sensibles.
El desarrollo de nuevos materiales y por lo tanto de nuevos productos, para uso mdico
principalmente, ha hecho que esta tcnica de esterilizacin se adapte y actualice
permanentemente para poder satisfacer las necesidades que demanda el mercado.
44
Mecanismo de Accin
Es por muchas conocidas su actividad sobre bacterias, hongos, levaduras, virus.
En la clula bacteriana existen tres sitios principales susceptibles de ser atacados por los agentes
qumicos: las capas superficiales, las enzimas, y el material nuclear. El funcionamiento correcto
de cada uno de estos sectores es esencial para la vida del microorganismo. Las protenas
enzimticas contienen cierto nmero de grupos reactivos esenciales para su actividad. Entre
stos estn los grupos cidos y bsicos de las nucleoprotenas, grupos carboxilos, hidroxilos y
aminos, sulfidrilo, amino y otros.
El xido de etileno acta qumicamente como un agente alquilante reemplazando tomos lbiles,
de hidrgeno de los grupos antes mencionados, por radicales hidroxietilos.
Debido a sus caractersticas qumicas es uno de los ms efectivos mtodos de esterilizacin

gaseosa.
Las caractersticas fisicoqumicas del gas lo hacen muy activo principalmente por su alta
capacidad de penetracin que permite la mortalidad de los microorganismos en lugares de muy
difcil acceso.
Adems podemos decir que penetra en sustancias porosas como as tambin permitiendo la
esterilizacin de superficies que no se puede lograr por otros mtodos.
Monitoreo del proceso de esterilizacin
Existen bsicamente tres tipos de controles o indicadores de un proceso de esterilizacin:
Fsicos
Qumicos
Biolgicos
Los fsicos, son los instrumentos con que el fabricante disea el esterilizador, que monitorizan y
adems deben registrar, es decir, imprimir y/o graficar curvas del proceso de esterilizacin donde
provee informacin sobre las condiciones internas de la cmara de esterilizacin.
El instrumental debe ser validado y fundamentalmente sensible.
Los indicadores qumicos para xido de etileno deben definir los parmetros crticos siguientes:
Concentracin del gas

Tiempo de exposicin
Temperatura
Humedad relativa
El cambio que se debe observar en el indicador despus de la exposicin al proceso debe ser
perfectamente definido para poder realizar una lectura segura.
Los indicadores biolgicos para monitorear un proceso de esterilizacin, consisten en obtener

una poblacin estandarizada de microorganismos viable, usualmente esporos microbianos, de
conocida resistencia al proceso de esterilizacin que se destina.
45
Con los indicadores biolgicos se intenta demostrar si las condiciones del proceso fueron las
adecuadas para alcanzar la esterilizacin.
Un indicador biolgico negativo no prueba que todos los items del ciclo son estriles, solo que
ellos fueron expuestos a condiciones adecuadas de esterilizacin.
Utilizacin
La esterilidad absoluta de un lote de esterilizacin no puede demostrarse sin realizar prueba de

esterilidad de cada elemento que componen dicho lote, lo que es un imposible.
En consecuencia, la esterilidad de un lote se define en trminos probabilsticos, donde la

probabilidad que un elemento est no estril es prcticamente remota.
Por lo tanto para establecer condiciones ptimas de garanta de la esterilizacin, pueden

implementarse mediante el uso de procesos adecuados, es decir validados, y buenas prcticas
donde se debe establecer:
Equipamiento adecuado
Demostrar que se opera dentro de los parmetros establecidos
Demostrar que la probabilidad de supervivencia microbiana no es mayor que los limites
establecidos
Controlar diariamente y protocolizar los resultados
Es por lo anteriormente expuesto, que los indicadores biolgicos cumplen como un nico sistema
integrador de todas las variables que concurren en un ciclo de esterilizacin, y sin dudarlo es el
indicador ms vlido para un proceso con xido de etileno.
Desarrollo de los indicadores biolgicos
Diferentes pruebas se realizaron antes de aceptar internacionalmente al Bacillus subtilis o

Globigii, como comnmente tambin se lo conoce, antes de su uso como indicador biolgico para
la esterilizacin gaseosa con xido de etileno.
Generalmente el soporte utilizado para transportar las esporas microbianas son tiras de papel de
filtro que despus de inoculadas son colocadas en sobres, y una vez terminada la esterilizacin
son llevadas al laboratorio y preferiblemente en cabina de flujo laminar son transferidas a un
medio de cultivo lquido.
Posteriormente son incubadas a 37 C durante 5 o 7 das para recin ser ledos, observando la
turbidez producida por el crecimiento de microorganismos.
La desventaja de ste mtodo es el largo perodo de incubacin, puesto que se necesita observar
turbidez, es decir que el desarrollo microbiano deba ser abundante, por lo tanto su perodo de
incubacin, largo.
En una segunda etapa se introdujeron mejoras a ste mtodo, evitando la transferencia de la tira
de papel porque se envasa en una unidad plstica la tira y el medio de cultivo lquido contenido
46
en una ampolla de vidrio, que despus del ciclo se rompe logrando as impregnar la tira y luego
incubar.
Con este mtodo tambin se ve facilitada la lectura, porque al medio de cultivo lquido se le
adiciona o incluye un indicador de pH, prpura de bromocresol que cambia de color cuando
existe desarrollo microbiano, puesto que el medio de cultivo se acidifica.
Existen algunas ventajas con este mtodo porque el cambio permite una mejor y segura lectura
del resultado, la reduccin del tiempo de incubacin de 24 a 48 hs, la no transferencia de la tira
de papel inoculada del sobre al medio de cultivo, lo que podra ser motivo de introducir
contaminacin, teniendo por resultado posibles falsos positivos.
Finalmente en los ltimos aos se ha introducido en el mercado indicadores biolgicos de lectura

rpida para el monitoreo de la esterilizacin con xido de etileno.
Estos indicadores detectan la presencia de una enzima: a D-glucosidasa contenida en las

esporas, lo que permite una lectura fluorescente al cabo de 4 hr de incubacin.
Esta lectura se realiza en la misma incubadora mediante un sistema de luces que de acuerdo a
color indica si la esterilizacin ha sido satisfactoria, es decir, si existen indicios de desarrollo
microbiano o no. Este mtodo todava no ha sido suficientemente aceptado.
Existen diferentes tipos de indicadores biolgicos y su eleccin depende para el uso que se lo
destine:
Desarrollo de ciclo
Validacin de ciclo
Monitoreo de rutina
La carga microbiana utilizada por indicador biolgico es de no menos de 10 (4) y no ms de 10

(9) d esporas de Bacillus subtilis-variedad niger.
En la fabricacin y validacin de los indicadores biolgicos se emplean equipos altamente

especializados de esterilizacin, por lo tanto las caractersticas de resistencia del indicador
utilizado por el usuario pueden no coincidir con las especificadas en la etiqueta del mismo debido
a diferencias entre las condiciones del usuario y las condiciones de esterilizacin empleadas por
el fabricante.
Por lo tanto la eleccin de un indicador biolgico es crtica y requiere que se le de debida

importancia, conociendo la resistencia de la poblacin microbiana del indicador biolgico en
relacin al proceso de esterilizacin especfico, para que cuando se lo emplee dentro de sus
caractersticas de desempeo constituya un desafo para el proceso de esterilizacin, mayor que
el desafo representado por la carga microbiana contenida en el producto a procesar.
La determinacin de diferentes niveles de carga microbiana est basada en recuperar

microorganismos y esporos del producto a ser esterilizado, teniendo en cuenta la eficiencia del
mtodo utilizado en la toma de la muestra en orden que los resultados obtenidos reflejen con
exactitud la carga existente.
47
Generalmente el indicador biolgico seleccionado para monitorear rutinariamente ciclos de
esterilizacin debera ser el mismo que se utiliz en el programa de desarrollo del ciclo,
establecindose as una ntima relacin y conocimiento de la resistencia del indicador.
Destacamos adems que no es probable que microorganismos aislados de la carga microbiana

sean ms resistentes al empleado en la fabricacin de indicadores biolgicos.
Por ltimo este escrito informativo de indicadores biolgicos para la esterilizacin con xido de
etileno, intenta proporcionar una descripcin general de conceptos y principios a tener en cuenta
en el momento de elegir un indicador para la rutina en la esterilizacin y su importancia en la
informacin que nos proporciona.
Luis Barlassina
VISION. Vol.4 N 14 - Octubre 99
Referencias
USP 23 - Esterilizacin y garanta de esterilidad

USP 23 - Indicadores Biolgicos
American Nacional Standard - ANSI / AAMI ST 34
Barlassina, Luis - III Congreso Nacional de Microbiologa de Barcelona
Barlassina, Luis - Esterilizacin Gaseosa con xido de Etileno, 1ra Edicin
MICROBIOLOGA
Es la ciencia de la biologa dedicada al estudio y anlisis de los MICROORGANISMOS en

su naturaleza, vida y accin.
Estos seres no se pueden visualizar a ojo desnudo, por tanto van a ser visibles solo a
travs del Microscopio.
En 1674 el bilogo holands Antn van Leeuwenhoek examin una gota de agua y
descubri un mundo formado por millones de diminutos animculos
(microorganismos).
Cien aos despus el bilogo dans Otto Mller ampli los estudios de van
Leeuwenhoek y, siguiendo los mtodos de clasificacin de Carlos Linneo, organiz
a las bacterias en gneros y especies.
48
En 1840, el alemn Friedrich Henle propuso unos criterios y demostr que los
microorganismos eran responsables de la aparicin de enfermedades en el ser
humano.
En los aos setenta y ochenta del mismo siglo, Robert Koch y Louis Pasteur
confirmaron esta teora demostrando que los microorganismos eran responsables
de la aparicin del carbunco, la rabia, la peste, el clera y la tuberculosis.
La era de la quimioterapia comenz en 1910, cuando el qumico alemn Paul

Ehrlich descubri el primer compuesto antibacteriano, un compuesto que result
efectivo contra la espiroqueta causante de la sfilis.
Alexander Fleming en 1928 descubri de la Penicilina.
As, en la actualidad se sabe que existen miles de diferentes tipos de

microorganismos que viven en el interior, en la superficie o alrededor del ser
humano y, asimismo, pueden contarse por centenares los que son capaces de
provocar en l enfermedades graves.
Qu es un Microorganismo?
Un microorganismo, tambin llamado microbio, es un ser vivo que solo puede

visualizarse con el microscopio.
El concepto de microorganismo carece de cualquier implicacin taxonmica dado

que engloba organismos:
Unicelulares: compuesto por una sola clula.
Procariotas: (clulas sin ncleo definido) como las bacterias.
49
Eucariotas: (clulas con ncleo) como los protozoos, una parte de las algas y los
hongos. Entidades biolgicas de tamao ultramicroscpico, como los virus.
Los microorganismos se hallan capacitados para cometer una extensa gama de

reacciones metablicas y adaptarse a muchos ambientes diferentes y
temperaturas extremas
Por su poco peso pueden ser transportados por las corrientes de aire y estar en
todas partes
Estos pueden subdividirse en cuatro grupos:

Virus
Bacterias
Hongos
50
Parsitos
Virus
Los virus son las partculas infecciosas de menor tamao, con un dimetro que oscila
entre los 18 a 300 nm5 (el tamao de la mayor parte de los virus es inferior a 200 nm y
no pueden visualizarse mediante el microscopio ptico).
Se han descrito ms de 25 familias vricas que contienen ms de 1.550 especies de
virus, muchas de las cuales se asocian a enfermedad en el ser humano.
Los virus estn formados por cido desoxirribonucleico (ADN) o cido ribonucleico
(ARN) (no por ambos a la vez) as como por las protenas, necesarias para su
replicacin y patogenia.
Estos microorganismos son verdaderos parsitos cuya replicacin exige la existencia
de unas clulas anfitrionas.
Bacterias
Son microorganismos procariotas, es decir unos microorganismos unicelulares
sencillos, sin membrana nuclear, mitocondrias, aparato de Golgi ni retculo
endoplsmico
Se reproducen por divisin asexual.
Poseen una pared celular que las rodea, la cual es compleja.
Los microorganismos procariticos poseen una cubierta celular muy diferente de la de
los eucariotas.
Las paredes celulares de muchos de los procariotas poseen un componente qumico
comn, el peptidoglucano (murena), que es el responsable de la forma y
consistencia de la pared.
El peptidoglucano es un extenso polmero que se halla integrado por subunidades
alternas de N-acetil glucosamina (que es tambin el constituyente de la quitina en los
eucariotas) y el cido N-acetilmurmico.
Existen 2 formas bsicas:
5
Nanmetros.
51
Pared celular Gram positiva con una gruesa capa de peptidoglucano
Pared celular Gram negativo con una delgada capa de peptidoglucano, la cual posee
una membrana externa.
Tinciones
Tinciones utilizadas en microbiologa para observar bacterias y hongos en el microscopio
ptico.
Lo primero que debemos tener en cuenta es el nivel de toxicidad de los colorantes a
utilizar, en este caso los que se ocupan para realizar Tincin de Gram y de Ziehl-Neelsen
son reactivos txicos que deben ser eliminados en recipientes adecuados para esto
(contenedores de color rojo), nunca al desage.
Se deben utilizar con guantes de procedimientos y pechera desechable, durante su
manipulacin.
El proceso de tincin se debe a reacciones qumicas entre el colorante y la clula o de

alguna estructura celular. Para realizar una tincin de un microorganismo se debe realizar
siempre la siguiente secuencia de pasos:
1. Preparacin del frotis (Extensin de la Muestra)

2. Secado de la preparacin
3. Fijacin de la muestra
4. Tincin propiamente tal
1.- Preparacin del Frotis (Extensin de la Muestra):

Sobre un portaobjeto limpio, se debe colocar una gota de la muestra directa (en el caso
que sea de un cultivo, debo agregar previamente una gota de agua o suero fisiolgico
estril y luego una colonia bacteriana directa del cultivo).
2.- Secado del Frotis:
52
Esta se seca con calor de la llama del mechero, a una distancia en la cual no nos
quememos las manos, y el vidrio resista, ya que si lo exponemos a mucho calor directo
podemos destruir la pared bacteriana, lo que impedira la lectura correcta de la Tincin de
Gram.
Otro modo es dejarlo secar al ambiente al lado del mechero Bunsen. Es muy importante
que no quede muy grueso, ya que al haber muchas bacterias, estas estaran mal
distribuidas y sera dificultoso observar sus caractersticas morfolgicas y no quedara bien
teido.
3.- Fijacin del Extendido al Portaobjetos:

Ya realizado el frotis y seco, se procede a la etapa de fijacin, la cual se hace en la llama
del mechero, flamendolo 2 a 3 veces. Este se toma con una pinza de madera para evitar
algn accidente.
4.- Tincin:
Esto tiene por objetivo demostrar microscpicamente la morfologa, agrupacin y afinidad
tintorial de las bacterias a travs de la fijacin de los colorantes a las bacterias y as de
esta forma, resistan cuando se realiza el lavado durante la tincin.
Una de las principales tinciones que utilizamos en microbiologa es la Tincin de Gram.
Tincin de Gram
Una caracterstica taxonmica importante de las bacterias es su respuesta a la Tincin de

Gram.
Esta caracterstica parece ser fundamental, ya que la reaccin a la tincin se correlaciona
con muchas otras propiedades morfolgicas en maneras relacionadas filogenticamente.
Un microorganismo potencialmente gram positivo puede verse como tal solo cuando
concurren un conjunto particular de condiciones ambientales en un cultivo joven.
53
El procedimiento para la Tincin de Gram se inicia con la aplicacin de un colorante
bsico, el Cristal Violeta.
Luego se aplica una Solucin de Iodo; en este momento todas las bacterias se tien de
azul. A continuacin se agrega Alcohol Acetona, se lava y finalmente se agrega un contra
colorante, como es la Safranina (colorante rojo).
Esta tincin se basa en la capacidad que presenta la pared bacteriana de las bacterias
para retener el colorante al cual se expone, ya sean gram positivas o gram negativas.
En el caso de las bacterias gram positivas, la pared contiene una gruesa capa de
peptidoglicano que ayuda a retener el colorante Cristal Violeta, lo que a su vez impide la
decoloracin, cuando agregamos Alcohol Acetona durante la realizacin de la tincin. Es
por esto que al ser observadas al microscopios las bacterias se ven de color morado
(Gram +).
Las bacterias Gram Negativas a diferencia de las Gram Positivas, tienen una delgada
capa de peptidoglicano, que no retiene el colorante Cristal Violeta y al ser decoloradas
con el Alcohol Acetona, se destie y se vuelva a teir cuando se agrega el contra
colorante Safranina, tindose de color rojo. (Gram -).
Tincin de Gram
Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algn otro
modo
Se tien con Cristal violeta para teir morado. (aplicar por 1minuto)
LAVAR
Se aade una solucin yodada que acta como mordiente. (1 minuto)
LAVAR
Agregar decolorante (alcohol/acetona) con el fin de eliminar el colorante
no fijado. (10 segundos)
LAVAR
54
Posteriormente se cubre con un colorante de contraste, Safranina, para
teir de rojo las clulas que no hayan retenido el Cristal Violeta. (30
segundos)
Algunos ejemplos de bacterias Gram Positivas:
Todas las formas Cocaceas como:

Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, excepto las de la familia Neisseriaceae y
Moraxellaceae que son formas cocaceas Gram Negativas.
Todos los bacilos esporulados, tales como:
Clostridium, Bacillus
Otros bacilos como Corynebacterium, Listeria, Lactobacillus.
Importante destacar que a pesar de no ser bacterias se tien Gram Positivos las
Levaduras.
55

Microbiologa: Morfologa Bacteriana
56

El desarrollo de estos talleres le ayudar a relacionar la teora
con la realidad procedimental del diario vivir en su quehacer
tcnico.
Recuerde que es Ud. el nico forjador de su aprendizaje,
aplique su proceso activo con apego absoluto a lo indicado en la
tcnica y obtendr un resultado absoluto y confiable, como
espejo de la condicin de la muestra en estudio.
Taller Terico Prctico Formativo N 1
57
Flujograma Procedimental Tincin de Gram
I tem: Flujograma de Proceso Preparacin de la Muestra a Teir
Desarrolle un Flujograma de proceso de la preparacin de la muestra, de acuerdo a

las caractersticas de esta, segn lo indicado:
a) Preparacin del Extendido desde una Muestra Lquida:
58
b) Preparacin del Extendido de una Muestra obtenida de una

colonia:
Taller Prctico Formativo N 2
59
Preparacin del Extendido y Tincin de Gram
1 Actividad Terica Prctica:

I tem: Preparacin de la Muestra a Teir
Realice la preparacin de la muestra indicada por el docente, para efectuar con

posterioridad la Tincin de Gram.
Recuerde aplicar todas las medidas de bioseguridad que se han mencionado
reiteradamente para su seguridad y de sus compaeros de trabajo.
Aplique los elementos de proteccin personal en la seccin de procesamiento, tenga
especial cuidado al momento de hacer abandono del Laboratorio.
a) Extendido de una Muestra Lquida (agua, caldo, orina, etc.)
Describa brevemente como realizar el procedimiento:
b) Extendido de una Muestra obtenida de una colonia:
60
c) Extendido de una Muestra de Secrecin de Herida (recolectada en

trula):
II tem: Secado de la Preparacin:
61
Realice un comentario de anlisis conforme a lo realizado para esta etapa de secado

segn los tipos de muestras extendidos:
III tem: Fijado de la Preparacin:
Identifique los riesgos asociados a esta etapa del proceso y mencione las medidas de
prevencin que deber tener presente en todo momento:
IV tem: Tincin:
62
1.- Identifique con claridad cules son los componentes de la Tincin de Gram,
diferenciando sus colorantes, fijador y decolorante respectivamente.
2.- Desarrolle un comentario en referencia a un cambio del orden en su aplicacin.

Fundamente su observacin.
63
3.- Observe con detencin el siguiente esquema y fundamente las diferencias que se
observan y como se manifiestan estas en la actividad prctica procedimental que Ud.
realiza y en la observacin microscpica:
2 Actividad Terica Prctica: Observacin Microscpica
64
Observe la preparacin dispuesta en el Microscopio y esquematice en el recuadro
lo observado, destacando su afinidad tintorial coloreando segn lo observado.
Asocie a especie de importancia mdica lo observado
Describa morfologa, agrupacin y afinidad tintorial.
Cocaceas gram (-) cocaceas gram + Bacilos gram (-) bacilos gram +
Morfologa Morfologa
Bacteriana Bacteriana
Agrupacin Agrupacin
Afinidad Afinidad
Tintorial Tintorial
Especies Especies
Asociadas Asociadas
MEDIOS DE CULTIVOS
65
Para el aislamiento estudio y clasificacin de los microorganismos es necesario
mantenerlos en un medio en el que dispongan de las sustancias orgnicas e inorgnicas
necesarias e indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos
medios adems de su desarrollo, los microorganismos pueden manifestar sus
caractersticas de crecimiento y sus propiedades bioqumicas, aspectos bien importantes
para su clasificacin.
Los medios de cultivos son soluciones en estado de gel, que poseen todas las sustancias
que se requieren para el desarrollo de los microorganismos.
Estos medios son imprescindibles paran el laboratorio de microbiologa, por lo que su
buena preparacin, mantencin y control nos entregan confiabilidad en los resultados.
Para que las bacterias se puedan desarrollar de forma adecuada en los medios, estos
deben cumplir ciertas condiciones, es decir temperatura adecuada, Ph y deben ser
estriles (libres de cualquier microorganismo).
Estos segn sus componentes se dividen en:

o Agar nutritivos, agar selectivos, agar diferencial, agar enriquecidos.
o Existen medios de cultivos sintticos o artificiales de composicin qumica definida
y medios naturales que se preparan en base a sustancias naturales. (Por Ej: agua
Peptonada, caldo comn, leche, etc.)
Segn el estado fsico se clasifican en:

o Medios lquidos,
o Medios slidos,
o Medios semislidos
Los medios de cultivos, segn sus componentes pueden clasificarse en cuatro tipos:
medios de enriquecimiento,
66
medios nutrientes o de soporte,
medios selectivos y
medios diferenciales
Medios de Enriquecimiento
Favorecen el sobrecreciendo de un determinado microrganismo a partir de una muestra
que lo tiene en escasa cantidad, con predominio de la microbiota habitual.
Medios Nutrientes o de Soporte

Contienen nutrientes que permiten que la mayora de los microorganismos no fastidiosos
crezcan en la misma proporcin en que se encuentran en la muestra, sin permitir que otro
microorganismo crezca exageradamente (agar nutriente, agar cerebro corazn).
Medios Selectivos
Contiene uno o ms agentes inhibitorios (antibitico-colorantes) que inhiben a los
microorganismos excepto al que se desea recuperar (Fenil-Etil-Alcohol).
67
Medios Diferenciales
Emplean metabolitos que permiten a los microorganismos expresar caractersticas
metablicas o de cultivo que hacen posible distinguirlos de otros con caractersticas
diferentes (Ej: el agar sangre cordero permite el crecimiento y diferenciacin segn tipo de
hemlisis y/o produccin de pigmento)
68
Mantencin de los Medios de Cultivos
Los medios de cultivos deshidratados deben mantenerse en un lugar seco y oscuro, a una
temperatura aproximadamente de 15C a 25C, en frascos bien cerrados para evitar la
entrada de humedad, ya que la absorcin de agua lleva a una alteracin del Ph y
eventualmente a formacin de precipitados.
Bajo condiciones ideales, los medios de cultivos deshidratados, en sus frascos originales
sellados, pueden ser mantenidos al menos hasta 5 aos sin deteriorarse.
Preparacin del medio de cultivo deshidratado:

Se debe usar agua destilada con pH lo ms cercano posible a 7,0. Los receptculos
destinados para usar deben ser absolutamente limpios y lo suficientemente grande para
poder mezclar el medio de cultivo con facilidad. En lo posible, no se debe prepara ms de
1-2 litros por recipiente.
69
El medio de cultivo se debe pesar segn los ml a preparar y segn indicacin del
fabricante. A este ya pesado se le aade aproximadamente la mitad del agua necesaria
para su reconstitucin y se mezcla hasta conseguir una suspensin homognea.
Despus se incorpora la cantidad restante del agua.
Luego de esto se llevan al autoclave para su posterior esterilizacin (se debe tener en
cuenta que hay medios de cultivos que no se esterilizan)
Los medios de cultivos que no contienen ni agar ni gelatina, se pueden disolver en

general en agua fra o con un ligero calentamiento.
Los medios nutritivos que contiene agar o gelatina, deben ser calentados al bao Mara
hasta conseguir su disolucin. Debe evitarse el calor excesivo. En los medios de cultivos
que no necesitan ser sometidos a ulterior esterilizacin en autoclave, es imprescindible
lograr su completa disolucin.
Ajuste del pH:

El valor del pH depende mucho de la composicin del medio de cultivo, de su temperatura
y del tratamiento al que ha sido sometido (disolucin, esterilizacin)
Debido a que los microorganismos encontrados en muestras clnicas crecen mejor a un
pH cercano al pH neutro, es esencial controlarlo en forma regular despus de autoclavar.
En los medios de cultivos slidos, la medicin del pH se realiza a 45-50C (medios liquido
aun) y en los medios nutritivos lquidos se hace a temperatura ambiente.
70
Esterilizacin de los Medios de Cultivos:
Esta puede realizarse en un autoclave o por filtracin. Volmenes de hasta 500ml de la
mayora de los medios son autoclavados a 121C por 15 minutos. Volmenes ms
grandes pueden necesitar de 20-30 minutos o ms. Deberan usarse temperaturas de
116-118 C para medios conteniendo carbohidratos termoestables. Los carbohidratos
termolbiles, deberan ser esterilizados por filtracin y agregarse al medio ya autoclavado
y enfriado, en forma asptica.
Si las normas de preparacin no indican otra cosa, la esterilizacin se hace en autoclave

a 121c durante 15 minutos.
Los medios de cultivo deben sacarse de inmediato del autoclave y enfriarlos rpidamente.
Vertido del Medio de Cultivo en Placas:

Para evitar la formacin de gotitas de agua de condensacin en la tapa de las placas, se
debe verter en ella el medio de cultivo a una temperatura de 45-55 C. Previamente hay
que mezclar bien el medio de cultivo. La reparticin debe ser hecha cuidadosamente para
evitar la formacin de burbujas. Si estas se producen, se puede pasar la llama del
mechero sobre la superficie del agar antes de que este se solidifique.
Cuando el agar haya solidificado, dar vuelta las placas.
71
Tubos de Agar Inclinado:
Los tubos llenos con medio de cultivo esterilizado, todava lquido, se colocan en una
posicin inclinada, de tal manera que quede una parte cilndrica de aproximadamente 3
cm y otra parte en pico de flauta de igual dimensin.
Control de Calidad de los Medios de Cultivo:

Cada vez que se preparan medios de cultivo de un nuevo lote o de un nuevo frasco,
deben efectuarse cultivos de control que aseguren su esterilidad, un pH adecuado y
reacciones bioqumicas correspondientes a los controles de calidad establecidos.
En aquellos medios en que se agregan materiales despus de la esterilizacin (por
ejemplo agar Thayer Martin, Agar Chocolate, Agar Campylobacter) en cada preparacin
deber realizarse control de calidad, sembrando los microorganismos sugeridos para el
control de cada medio.
Para controlar las esterilidad de las placas preparadas, incubar el 1% de las placas a 36
C durante la noche (luego de esto, estas se deben eliminar). El control de calidad debera
ser visual y por subcultivo. Si se observa consistentemente que no hay contaminacin,
este control de esterilidad puede discontinuarse. Deber reiniciarse el control cada vez
que se vuelva a observar contaminacin y hasta que el problema se haya resuelto.
Cada tubo, placa o reactivo preparado, debe tener una etiqueta que indique la fecha de
preparacin.
72
Conservacin de Medios de Cultivos Preparados, listos para su uso
Los medios de cultivos preparados tienen un tiempo limitado de conservacin; cuando no
se indica otra cosa y bajo condiciones adecuadas, ste es de varios meses.
Los medios que no contienen suplementos ni enriquecimientos son estables hasta por un
ao si se conservan en tubos con tapa rosca. Estos mismos medios en placa pueden
mantenerse hasta por 6 meses. Los medios como Agar Sangre, Agar Chocolate y Thayer
Martin se consideran estables hasta por 3 meses. Se recomienda su almacenamiento a 4-
12C, cuando van a mantenerse por periodos de tiempos prolongados. No deben
guardarse a temperatura por debajo a 0C.
Es posible su conservacin durante 1 semana a temperatura ambiente y siempre que
estn protegidos de la luz.
Las placas pueden ser refrigeradas durante una semana sin deteriorarse, pero deberan
envolverse en bolsas de plsticos o papel para minimizar la perdida de agua.
Por otro lado, luego de utilizar estos medios con cultivos bacterianos, se deber efectuar
la esterilizacin en autoclave (73 C por 12-15 minutos), antes de ser eliminados.
Agar Sangre
El agar sangre de cordero al 5% es el medio de cultivo ms comnmente usado para el
aislamiento primario de la mayora de las bacterias aerbicas no fastidiosas.
Por su contenido en nutrientes, permite el buen desarrollo de las bacterias. Por otra parte,
es posible realizar una identificacin primaria de las bacterias por las caractersticas
morfolgicas de las colonias en el agar sangre.
73
Agar Chocolate
Es un medio de cultivo usado para el aislamiento primario de la mayora de las bacterias
aerbicas incluyendo adems a algunos fastidiosos (Haemophilus, Gardnerella,
Neisseria).
El agar chocolate es preparado agregando sangre de cordero a un medio de agar base
enriquecido, el que est a una alta temperatura (aprox. 80 C) para lisar los glbulos rojos
y liberar los factores X y V, lo que lleva a mejorar el desarrollo de las bacterias y permite
adems el aislamiento de Haemophilus.
Agar Mac Conkey

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial ms usado para inhibir microorganismos
gram positivos. Permite la seleccin y recuperacin de las Enterobacterias y bacilos gram
negativos entricos relacionados.
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de las bacterias gram positivas y
de algunas bacterias gram negativas fastidiosas. El indicador de pH, rojo neutro, da las
caractersticas diferenciales. La lactosa es el nico carbohidrato presente en el medio.
74
Agar Salmonella-Shigella (SS)
Es uh medio selectivo usado para el aislamiento de Salmonella y Shigella, inhibiendo el
desarrollo de bacterias coliformes.
Agar TCBS
Medio selectivo para recuperar cepas de Vibrio a partir de muestras clnicas.
Las altas concentraciones de tiosulfato y citrato frrico, junto con la fuerte alcalinidad del
medio inhiben el crecimiento de las Enterobacterias, haciendo de este un medio selectivo
para el desarrollo de Vibrio.
75
Caldo Selenito
Es recomendable para el aislamiento de Salmonella, de muestras tales como:
deposiciones, orina o aguas sucias que tiene altas concentraciones de bacterias mixtas.
Agar Thayer Martin

Este medio es recomendado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae de todos
aquellos sitios que podran tener microbiota mixta, y de Neisseria meningitidis de
muestras nasales y bucofarngeas.
Es un medio enriquecido que contiene 3 antibiticos y un antifngico, los que actan
como agentes selectivos para la inhibicin de la microbiota.
76
Medios Usados en la Identificacin Bioqumica de Enterobacterias (bacilos
gram negativos). Bateras bioqumicas.
TSI (Triple Sugar Iron)
Medio usado para determinar la fermentacin de carbohidratos y produccin de H2S

como primer paso en la identificacin de bacilos gram negativos.
Preparacin del Medio:
Suspender los componentes en un litro de agua destilada.
Calentar hasta disolver.
Distribuir en tubos y esterilizar a 121C por 15 min.
Disponer en posicin inclinada y enfriar a temperatura ambiente hasta que solidifique,

para obtener un extremo inferior profundo y un tendido superior corto.
77
LIA (Lysine Iron Agar)
Medio diferencial usado para ver la habilidad de las Enterobacterias para producir H2S,
descarboxilar y deaminar la lisina.
Preparacin del medio:
Disolver el medio en agua destilada, repartir en tubos, esterilizar, poner los tubos
semitendidos.
MIO (Motilidad Indol Ornitina)

Permite determinar tres importantes caractersticas en la identificacin de las
Enterobacterias: movilidad, Indol, descarboxilacin de la Ornitina.
Preparacin del Medio:

Suspender los componentes en un litro de agua destilada y calentar hasta disolver
completamente. Repartir en tubos y esterilizar por 15 min a 121C (estos se mantienen en
90, no inclinados como los anteriores).
78
Urea (Urea de Stuart (Caldo) y Urea de Christensen (Agar)
Medio utilizado para ver que microorganismos poseen la enzima ureasa y actan
hidrolizando la urea presente en el medio, liberando amoniaco
Citrato de Simmons
Medio utilizado para ver la capacidad de ciertas bacterias de utilizar el citrato como nica
fuente de carbono.
Preparacin del Medio de Cultivo:

Disolver los componentes en un litro de agua destilada. Repartir en tubos, esterilizar a 15
minutos a 121C y dejar enfriar los tubos en agar tendido. El medio listo para usar es de
color verde claro.
79
PRUEBAS ESPECIALES QUE PODEMOS REALIZAR PARA LA
IDENTIFICACIN BACTERIANA
Prueba Coagulasa:
Permite separar S. aureus que es capaz de producir la enzima coagulasa, de las otras
especies de Staphylococcus.
El S. aureus posee dos tipos de coagulasa, la que realizamos es la exo coagulasa o
coagulasa libre que acta mediante la activacin de un factor, formndose un complejo
coagulasa, el cual reacciona con el fibringeno producindose un coagulo de fibrina (esta
prueba se realiza en tubo con plasma de conejo idealmente).
Test en Tubo
Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0.5 ml de plama citratado de conejo.
Se incuba a 35 C y se examina la formacin del coagulo a las 4 horas.
Si es negativo se re incuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18-24 horas. La
lectura a las 4 horas es fundamental porque en alguna oportunidad puede suceder que las
fibrinolisinas de S. aureus lisen el coagulo luego de 18 horas de incubacin y de esta
maneras se produzcan un test falso negativo.
80
Prueba de la Catalasa
Se agrega una gota de agua oxigenada y una colonia de la bacteria a estudiar, todo esto
una lmina limpia de vidrio.
Se utiliza para comprobar la presencia de la enzima citocromo oxidasa que se encuentra

en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen
citocromo. La principal excepcin es Streptococcus.
Una reaccin positiva se evidencia por la formacin de burbujas por el desprendimiento

de oxigeno molecular libre.
81
Clasificacin de las Bacterias
Para realizar una clasificacin preliminar de las bacterias se utiliza la tincin de gram:
Tamao
Forma (esferas, bastoncillos, espirales)
Disposicin espacial (clulas aisladas, en cadenas y formando acmulos)
Afinidad tintorial (gram positiva o negativa)
Su clasificacin definitiva se refiere a sus propiedades fenotpicas y genotpicas.
Bacilos Gram Positivos:

Formadores de Esporas: Bacillus y Clostridium
No formadores de Esporas: Corynebacterium, Listeria, Propionibacterium
Bacilos Gram Negativos:

Enterobacterias, Vibrio cholerae, Pasteurella.
Bacilo No Fermentador de Azcares: como Pseudomona, Acinetobacter, Burkolderia,
Helicobacter, Stenotrophomonas, Campylobacter, Haemophilus, Bordetella, Brucella etc.
Cocaceas Gram Positivas:

Catalasa Positivas: Staphylococcus (aureus o coagulasa negativa), Micrococcus.
Catalasa Negativa: Enterococcus, Streptococcus.
Cocaceas Gram Negativas:

Neisserias spp (gonorrhoeae o meningitidis), Moraxella spp.
Anaerobios:
Se desarrollan en ausencia de oxgeno.
Bacilos Gram Negativos: Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica,
Fusobacterium
Bacilos Gram Positivos: Actinomyces, Lactobacillus, Propionibacterium, Clostridium.
Cocaceas Gram Negativas: Veillonella
Cocaceas Gram Positivas: Peptostreptococcus
82
Necesidades Metablicas de las Bacterias
El crecimiento bacteriano requiere una fuente de energa y la materia prima necesaria
para fabricar las protenas, las estructuras y las membranas que conforman la maquinaria
estructural y bioqumica de la clula.
Las bacterias deben obtener o sintetizar:
Aminocidos
Hidratos de carbono
Lpidos utilizados
Las necesidades mnimas para el crecimiento son una fuente de carbono y nitrgeno, otra
fuente de energa son el agua y diversos iones.
El oxgeno es esencial para el ser humano. Constituye una sustancia txica para muchas
bacterias.
Algunos microorganismos (p. ej., Clostridium perfringens, causante de gangrena gaseosa)
no pueden crecer en presencia de oxgeno.
Este tipo de bacterias son conocidas como Anaerobias Estrictas
Hay otras que requieren la presencia de oxgeno molecular para su crecimiento y en
consecuencia, se denominan Aerobias Estrictas.
Sin embargo, la mayor parte de las bacterias puede crecer tanto en presencia como en
ausencia de oxgeno, en cuyo caso reciben el nombre de Anaerobias Facultativas.
Hongos
La estructura celular de los hongos es ms compleja.
Son microorganismos eucariotas que poseen un ncleo bien definido, mitocondrias,
aparato de Golgi y retculo endoplsmico.
Los hongos pueden existir en una forma unicelular (levadura) capaz de replicarse de
manera asexual, o en una forma filamentosa (moho). (Reproduccin tanto sexual como
asexual).
83
HONGOS FILAMENTOSOS
HONGOS LEVADURIFORMES
84
Microbiologa: Medios de Cultivo
85

El desarrollo de estos talleres le permitir comprender lo
relevante que son estos elementos de diagnstico
microbiolgico en el quehacer de su competencia.
tcnica y obtendr un resultado absoluto y confiable, como
espejo de la condicin de la muestra en estudio.
86
Taller Terico Prctico N 1
Reconocimiento y Uso Procedimental de Medios de Cultivo
I tem: Recuadro Temtico I
Ud. encontrar una serie de medios de cultivo en el mesn de trabajo en el Laboratorio

Clnico Experimental, identifquelos uno por uno y desarrolle el siguiente recuadro, de
acuerdo a instrucciones.
Disposicin Nombre del Clasificacin

(Placa / Tubo) Medio de Estado Composicin Objetivo de su Uso
(Dibuje y Coloree) Cultivo Fsico
87
Disposicin Nombre del Clasificacin
(Placa / Tubo) Medio de Estado Composicin Objetivo de su Uso
(Dibuje y Coloree) Cultivo Fsico
88
II tem: Recuadro Temtico II

Ud. ya ha identificado los medios de cultivo, por lo tanto; es momento de aplicar sus
conocimientos prcticos referidos al uso que les dar en el proceso de las muestras para
cultivar, aislar e identificar los microorganismos.
MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDOS Y SELECTIVOS
Nombre del Medio Tcnica de Siembre Diagrame y coloree el Desarrollo

de Cultivo (Dibuje el medio de cultivo y Microbiano
esquematice la Tcnica de En el medio de cultivo
Siembra)
89
MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES Y CROMOGNICOS
Nombre del Medio Tcnica de Siembre Diagrame y coloree el Desarrollo

de Cultivo (Dibuje el medio de cultivo y Microbiano
esquematice la Tcnica de En el medio de cultivo
Siembra)
90
III tem: RECUADRO TEMTICO
Realice la lectura del siguiente recuadro con detencin y luego responda lo solicitado.
Posibles Defectos en la Preparacin y Manipulacin de los Medios de Cultivo
Defecto Causal
Apelmazamiento del medio de cultivo Conservacin en atmsfera
excesivamente hmeda
Envase ha permanecido abierto
demasiado tiempo
El envase no qued suficientemente
cerrado despus de su uso
El medio de cultivo deshidratado est
muy pasado de la fecha de vencimiento
Desviacin del pH Agua no neutra
Envase insuficientemente bien cerrado
Medio de cultivo deshidratado muy
pasado de la fecha de vencimiento
Turbidez, Precipitacin Defecto de preparacin
Agua insuficientemente desionizada
Sobrecalentamiento del medio durante su
preparacin
Envases de preparacin
insuficientemente limpios
pH incorrecto o desajustado
Punto de Solidificacin Demasiado Excesiva proporcin de medio de cultivo
Elevado deshidratado
Agar-agar no adecuado
Escasa estabilidad del Gel Proporcin demasiado pequea de
medio de cultivo deshidratado
Medio de cultivo deshidratado no disuelto
completamente
Medio de cultivo deshidratado
sobrecalentado durante su preparacin
El medio de cultivo no se mezcl o fue
insuficiente cuando fue vertido a las
placa de Petri
En el caso que el medio de cultivo es
preparado por el usuario, muy poca
cantidad de Agar-agar
Medios de cultivo cidos
Desviacin del Color Error en la medicin o ajuste de pH
Sobrecalentamiento del medio de cultivo
o envase de preparacin sucio
91
Posibles Defectos en la Preparacin y Manipulacin de los Medios de Cultivo
Defecto Causal
Medios de Cultivo Contaminados Esterilizacin insuficiente
Contaminacin accidental posterior a la
esterilizacin. Por ej.: en el vertido de
placa, placas de Petri no estril
Crecimiento Demasiado Pobre en Residuos de sustancias inhibidoras del
Bacterias crecimiento (Ej.: detergentes)
pH incorrecto
medio de cultivo sobrecalentado durante
su preparacin
Crecimiento Demasiado Intenso de Medio de cultivo sobrecalentado durante
Bacterias su preparacin
Medio de cultivo sembrado con excesiva
cantidad de muestra
Desarrolle un MAPA CONCEPTUAL del recuadro considerando las diversas variables y

sus causas, que se consideran con respecto a la preparacin y uso de los medios de
cultivo
92
CONCEPTOS GENERALES DE SALUD
La salud es un estado de completo bienestar fsico, mental y social, y no solamente la

ausencia de afecciones o enfermedades (1946).
En 1992 un investigador agreg a la definicin de la OMS: "y en armona con el medio
ambiente.
Enfermedad
Alteracin o desviacin del estado fisiolgico en una o varias partes del cuerpo, por
causas en general conocidas, manifestada por sntomas y signos caractersticos, y cuya
evolucin es ms o menos previsible.
Agente Infeccioso
Microorganismo causante de la infeccin: Bacterias, virus, hongos, parsitos.
Reservorio
Hbitat natural del agente infeccioso. El lugar donde pueden sobrevivir (crece y se
reproduce).
Puerta de salida del agente.
Desde el reservorio (lquido, gotas) hacia el exterior por va area, digestiva y piel.
Mecanismos de Transmisin
Va de Transmisin Contacto Directo.
Va de Transmisin Indirecta.
A travs del aire.
Va de Transmisin Contacto Directo: el Reservorio es la Fuente de Infeccin. No

existen intermediarios en la transmisin.
Personas Enfermas (Reservorio Humano) Varicela, Rubola. (De una persona a
otra).
Animales Enfermos (Reservorio Animal) la Rabia.
93
Va de Transmisin Indirecta
El Reservorio no es la Fuente de Infeccin. Los agentes llegan a travs de elementos
contaminados o vectores.
Animales Enfermos: contaminan con sus heces alimentos y agua que se convierten
en la fuente de infeccin o elemento directamente infectante Ej: Hidatidosis,
Triquinosis, salmonelosis.
Vehculos de Transmisin: objetos o materiales contaminados como juguetes, ropa
de cama, agua, tierra, utensilios: bacterias
Vectores Vivos: Este tipo de transmisin incluye un husped intermediario. Ej: un
insecto, un animal o planta.
A travs del Aire: diseminacin de aerosoles microbianos, son suspensiones areas
de partculas constituidas total o parcialmente por microorganismos: gotillas o polvo (>
de 5 micras) Ej: Tuberculosis.
Pueden difundirse por:
Tos
Estornudo
Conversacin
Mecanismo de Infeccin
INFECCION DIRECTA
Contacto de piel a piel, desde un paciente a otro o de un trabajador de salud. (Ej.: el
saludo con las manos, el bao de pacientes, control de signos vitales).
INFECCION INDIRECTA (VECTORIAL)
Tocar objetos o artculos que estuvieron en contacto directo con el paciente contaminado
(Ej: termmetro, chatas, patos, esfigmomanmetro, utensilios de alimentacin).
INFECCION CRUZADA
Trasmisin de agentes infecciosos entre pacientes y el personal que les proporcionan
atencin en un entorno clnico.
Ello puede ser resultado del contacto directo, persona a persona, o indirecto, mediante
objetos contaminados llamados fmites.
94
Otros mecanismos de infeccin:
TRANSFUSIONAL
LACTANCIA
TRANSPLACENTARIO O VERTICAL
Los agentes infecciosos presentan cuatro caractersticas que los identifican:

Patogenicidad
Contagiosidad
Virulencia
Poder de invasin
Los agentes infecciosos presentan cuatro caractersticas que los identifican:
Patogenicidad: capacidad de un agente infeccioso de producir la enfermedad en

un husped susceptible.
Caractersticas:
- Transmisibilidad.
- Capacidad para adherirse a las clulas husped.
- Invasin de clulas o tejidos.
- Toxigenicidad (exotoxinas).
- Capacidad de evadir el sistema inmunitario del husped.
Virulencia: Es el grado de patogenicidad de un agente infeccioso, indicado por las

tasas de letalidad y por su capacidad de invadir y lesionar los tejidos del husped.
- Adherencia.
- Produccin de toxinas.
- Produccin de enzimas.
95
MUESTRAS MICROBIOLGICAS
Para trabajar las muestras microbiolgicas deben haber portaobjetos para realizar la
tincin de gram y para poder realizar los exmenes al directo (es decir cuando se carga
la muestra de forma directa en el portaobjeto y se cubre con una laminilla).
Para poder trabajar las muestras se deben utilizar medios de transporte estriles. Esto
es porque el medio debe estar libre de cualquier tipo de microorganismo, es decir;
asegurarnos de que si encontramos algn microorganismo en las muestras, este s est
causando infeccin y no es algo que ha estado en el recolector en el cual se obtuvo.
Las muestras de orina, tejido, lquidos, catter, muestras respiratorias se deben tomar
en:
Contenedor de tapa rosca, estril (para evitar derrame).
Las muestras de secrecin de heridas, se deben tomar en:
Trula estril con medio de transporte (Stuart).
96
Las muestras de raspado de piel:
Placas de Petri estril o contenedor estril.
Las muestra de deposicin para Coprocultivo:

Trula estril con medio de transporte (Cary-Blair).
Los medios de transporte evitan la muerte de los microorganismos de inters, pues

mantienen el pH y la humedad, por su composicin permiten la viabilidad de los
microorganismos pero no su multiplicacin, ejemplos: Stuart, Cary y Blair, Amies, etc.
Medio de Transporte Stuart: medio usado para el transporte de secreciones,

permitiendo preservar la viabilidad de los agentes patgenos (el medio es esencialmente
una solucin de buffers con carbohidratos, peptona y otros nutrientes).
97
Medio de Transporte Cary-Blair: medio usado para mantener muestras de deposicin.
Es un medio no nutritivo, semislido que impide el sobre crecimiento de los
microorganismos, permitiendo a su vez recuperar cepas de: Salmonella, Shigella, Yersinia
y Vibrio.
Siembra de Muestras
Para sembrar las muestras, se requiere de material estril tambin y de un mechero para
poder sembrar alrededor de l.
Asa estriles de 1ul y 10 ul.
Asas de metal, que se puedan incinerar en la llama del mechero.
Medios de cultivos estriles.
Tubos con suero fisiolgico estril.
Estufas de cultivo.
98
Siembra: Muestras de Orina Asptica (Urocultivo)
Sembrar en:
Agar sangre de cordero
Agar MacConkey y/o agar Cromognico
Esta debe ser sembrada con asas estriles de 1 ul, ya que el estudio que se hace es
cuantitativo.
Factores a considerar:
la orina si no es sembrada de forma inmediata se puede guardar hasta por 4 horas

en el refrigerador.
El urocultivo es una muestra de orina, la cual se solicita para ver si existe infeccin
urinaria o no.
La muestra debe ser de 2 chorro, (es decir se elimina el primer chorro y el

segundo se recoge en un frasco estril tapa rosca). Previo a la toma de muestra,
el paciente debe hacerse aseo genital con agua y jabn de la zona genital).
Puede ser por puncin vesical o sondeo, y ese procedimiento lo realiza la

enfermera con tcnica asptica.
99
Siembra: Muestras de Herida
Sembrar en:
Agar Sangre de Cordero
Agar MacConkey
Caldo Thioglicolato
Realizar Tincin de Gram
la muestra debe mantenerse a temperatura ambiente en el medio de transporte

hasta su siembra.
esta muestra es obtenida cuando se sospecha de heridas infectadas.
esta muestra se siembra de forma directa del medio de transporte Stuart.
Siembra: Muestras Respiratorias
Utilizar mascarilla N 95 (de alta eficiencia)
Sembrar en:
Agar MacConkey
Agar Chocolate
debe venir en frasco o tubo estril y en un volumen no inferior a 1-2 ml.
debe sembrarse lo antes posible y si no, debe mantenerse en refrigeracin.
Estas muestras pueden ser: expectoracin, lavado bronquial, lavado broncoalveolar,

aspirado traqueal cuantitativo y farngeo.
100
- Con una pipeta estril agregar 10 l de muestra en cada uno de los siguientes
medios: Placa Agar Sangre (Ambiente CO2), Placa chocolate (Ambiente CO2), Placa
Agar Mac Conkey y realizar siembra.
Realizar tincin de gram de las diferentes muestras:
- Se realiza tomando un asa de 10 ul, se introduce en la muestra y se pone en un
portaobjeto.
- Se deja secar para luego teir.
- Incubar a 35 C en estufa de cultivo.
En caso que la muestra sea un Aspirado Traqueal Cuantitativo (ATC)

Realizar Tincin de Gram de las diferentes muestras.
- Se realiza tomando un asa de 10 ul.
- Se introduce en la muestra y se pone en un portaobjeto.
- Se deja secar para luego teir.
Sacar del refrigerador:
- Dos placas de Agar Sangre de Cordero,
- Dos placas de Agar Mc Conkey, y un tubo que contenga 9.9 ml de Suero
Fisiolgico.
- Dejar que logren temperatura ambiente.
Diluir la muestra en igual volumen de suero fisiolgico (Dilucin 1:2).
- Homogeneizar con perlas de vidrio.
- Agitar en Vortex durante 2 minutos.
- Extraer 0.1 ml de la muestra diluida y agregar a un tubo con 9.9 ml de suero
fisiolgico.
- Agitar en Vortex por 2 minutos.
- Rotular una placa de Agar Sangre de Cordero y otra de Agar Mac Conkey con la
letra A.
- Rotular una placa de Agar Sangre de Cordero, Agar Chocolate y otra de Agar
Mac Conkey con la letra B.
- En las placas A sembrar 0.1 ml de la muestra homogeneizada.
- Diseminar con asa de 10 ul y dejar secar. (Dilucin final de las placas: 1: 2000)
101
- En las placas B sembrar 0.01 ml de la muestra. Asa de color Azul calibrada para
10 ml (Dilucin final de las placas: 1: 20000)
- Incubar las placas de Agar Sangre de Cordero en CO2 y las placas de Agar Mac
Conkey en atmsfera aerbica a 35 C.
- Incubar por un mximo de 72 horas.
Muestras para Estudio de Koch

Baciloscopa:
Si la muestra es para bsqueda de Bacilo de Koch, esta muestra debe ser tomada en
un frasco oscuro, ya que el bacilo es lbil a la luz.
Se debe tomar a primera hora en la maana, en das consecutivos y se toman 2
muestras.
Se realiza el procedimiento en GBS (Gabinete de Bioseguridad A II), utilizando este de
acuerdo a protocolo.
Se abre la muestra numerada dentro del GBS y se coloca la porcin ms purulenta y
mucosa de la muestra sobre un portaobjeto previamente identificado con el nmero
correspondiente a la muestra.
Con un segundo portaobjeto presione la muestra, con el fin de extender la muestra
uniformemente en los portaobjetos.
Friccione suavemente entre ambas caras de las lminas que contiene la muestra.
Repetir este proceso hasta obtener una capa gruesa y homognea de la muestra en 2/3
del portaobjeto.
Depositar la lmina sobre el agitador trmico para que se seque.
Realizar la tincin de Ziehl Neelsen bajo la campana extractora.
Cultivo de Koch:
Descontaminacin de la Muestra
Poner las muestras a estudiar y los respectivos tubos cnicos de plstico de 50 ml
previamente identificados con el nmero de la muestra al GBS, en dos gradillas
independientes.
102
Etapas en comn para las muestras naturalmente contaminadas:
Agregar al tubo cnico previamente enumerado con el nmero de la muestra
un volumen de solucin de Hidrxido de Sodio 3,5% con Rojo Fenol como
indicador, igual al volumen de muestra recolectada.
Tapar el tubo cnico con su respectiva tapa.
Trasladar los tubos cnicos que contienen la muestra con la solucin de lcalis
a la cmara de incubacin de la seccin.
Agitar los tubos cnicos en el agitador mecnico durante 20 minutos a 37C.
Trasladar los tubos cnicos de regreso al GBS.
Neutralizar el pH de la muestra de inmediato. Para ello deber agregar gota a
gota una solucin de cido Sulfrico 7%, hasta observar una leve tonalidad
amarilla en la mezcla de la muestra.
Ajustar el pH de la solucin con Hidrxido de Sodio 2%, gota a gota hasta
cuando esta obtenga un leve tono rosado que corresponde a un pH 6.6 a 7.2.
Comprobar el pH con papel indicador.
Esperar 5 a 10 minutos y tomar pH al azar a 2 3 muestras de la serie para
ver si se estabilizo el pH, si no es as se vuelve a neutralizar.
Siembra de la Muestra
Se realiza la siembra de las muestras a continuacin de la neutralizacin y
descontaminacin de la muestra segn se requiera, dentro del GBS.
Identificar los tubos de Medio de Lowenstein-Jensen a utilizar durante la siembra de
las muestras respectivas.
Trasvasijar 0,3 a 0,5 ml de la muestra en tubo cnico, en cada tubo de medio de
cultivo Lowenstein-Jensen
Sembrar la muestra en cuatro tubos (a excepcin de las muestras de expectoracin
que se siembran en tres tubos y las muestras de orina que se siembran en 6 tubos).
Incubar los tubos de medio de cultivo Lowenstein-Jensen en posicin horizontal
inclinada, (cajas con inclinacin de 10) de manera que la muestra bae la superficie
del medio.
Muestras de Deposicin
103
Coprocultivo
Deber ser sembrado en:
Agar MacConkey
Agar TCBS
Agar Salmonella-Shigella
Caldo selenito
Este examen se solicita cuando hay sospecha de infecciones por las siguientes
bacterias:
Salmonella, Shigella, Yersinia y Campylobacter.
Escherichia coli O157H7 en menores de 2 aos
Se toma la muestra con medio de transporte Cary-Blair, se pasa la trula por la regin
perianal y se guarda en el medio hasta ser sembrada en el Laboratorio Clnico lo antes
posible.
Leucocitos Fecales:
Este se carga directamente en un portaobjeto en donde se ponen 2 gotas de la deposicin

y encima se pone una laminilla para poder ser observada al microscopio por el Tecnlogo
Mdico.
La muestra se toma en un recipiente con tapa rosca, y se deposita la muestra de forma

directa.
Muestra Secreciones
104
Muestra: Secrecin tica-Ocular
Sembrar en:
Agar MacConkey
Agar Chocolate
Agar Thayer Martin (solo las oculares)
Caldo Tioglicolato
La muestra debe mantenerse a temperatura ambiente hasta su siembra.
Estas muestras se toman en medio de transporte Stuart.
Muestras de Sangre (Hemocultivo)
Sembrar en:
Agar MacConkey
Agar Chocolate
Estas muestras se solicitan cuando hay sospecha de infeccin en la sangre, y se toman

de forma directa del paciente y pueden ser Hemocultivos Perifricos o de Catter.
Se utiliza tcnica asptica. Se utilizan medios comerciales que tienen anticoagulantes

para depositar la muestra obtenida.
La cantidad en adultos debe ser de 5-10 ml y en recin nacidos de 0.5-2 ml de sangre.
Secrecin Uretral
105
Se debe sembrar en:
Agar Chocolate
Si solicitan cultivo de Neisseria, se debe sembrar adems en Agar Thayer Martin.

Estas muestras se toman en medio de transporte Stuart.
Se realiza Tincin de Gram de la muestra.
Muestras de Lquidos
Centrifugar muestra en centrifuga de siembra (3000 rpm por 10 minuto).

Eliminar sobrenandante y el sedimento sembrar.
Se debe sembrar en:
Agar Chocolate
Agar MacConkey
Agar Thioglicolato
Tincin de Gram (si es de LCR se debe informar de forma inmediata)
Todo se debe realizar alrededor de la llama del mechero.

Incubar placas sembradas a 35 C (las placas de Agar Sangre y Chocolate se incuban
en CO2), el resto de las placas solo en estufa de cultivo.
Lectura e informe de Tincin de Gram de forma inmediata en sistema informtico.
Luego de haber transcurrido 24 horas se pueden sacar las placas de la estufa de cultivo
e identificar el agente aislado, realizar estudio de susceptibilidad. En caso de muestras
negativas, estudiar por 72 horas.
Estudio de Anaerobios
106
La muestra debe venir en jeringa tapada sin aire y ser procesada de forma rpida.
Utilizar guantes de procedimientos para su realizacin.
Etiquetar muestra a trabajar y todo el material seleccionado para siembra y
microscopa.
Realizar siembra de anaerobios en:
Tioglicolato-hemina,
PAS-anaerobio,
PAS-Kanamicina (+hemina).
Incubar por 5 das a 35C en estufa de cultivo para secreciones en anaerobiosis en
Jarra GAS-PACK
Realizar Tincin de Gram.
Adems sembrar en:
Agar sangre y Agar Mc Conkey que queda en aerobiosis.
Incubar 72 horas a 35C en estufa de cultivo para secreciones.
Realizar todo esto antes de 30 minutos, una vez llegada la muestra.
Leer Tincin de Gram
Luego de 5 das de incubacin, se deben retirar las placas de la estufa de cultivo
para la lectura de las placas.
Identificar agente aislado
ETAPAS DE REALIZACIN DE UN FROTIS PARA TINCIN
107
Lo primero que debo hacer es:
Prender mechero regulando llama azul.
Flamear portaobjeto.
Dejar enfriar portaobjeto.
Enumerar la lmina con lpiz dermatogrfico.
[Esterilizar asa metlica (si se decide utilizar sta) hasta rojo vivo, dejar enfriar].
Usar asa plstica estril utilizada en siembra de la misma muestra.
Expandir muestra sobre la superficie del portaobjetos (esta puede ser directa o del
cultivo).
Fijar muestra al calor, flameando repetidas veces portaobjeto por la llama. Tambin se
puede secar a temperatura ambiente.
Proceder a hacer tincin (ver paso de tinciones)
Los materiales a utilizar son: portaobjetos de 76 x 26 mm, asa estril o asa metlica,
agua destilada, lpiz dermatogrfico o marcador de vidrio, mechero Bunsen.
centrfuga, agua destilada.
Tipos de Frotis
Frotis de Muestra Primaria

Enumerar lmina con nmero de la muestra trazando una lnea de separacin para
evitar que el nmero se borre durante la tincin.
Tomar desde la muestra una gota (con asa estril) o un Torulado y distribuir en forma
circular al centro de la lmina.
Fijar la lmina con calor en la llama del mechero.
Teir para Tincin de Gram.
Si la muestra es para Coprocultivo, teir con tincin para Campylobacter spp. (AX2).
Frotis de Colonias
Enumerar lmina con nmero de la muestra.
108
Colocar una gota de agua destilada estril por cada colonia a la que se le realice frotis
Flamear un asa o utilizar un asa estril y tomar la colonia en estudio.
Emulsionar la colonia.
Fijar lmina al calor de la llama (mechero).
Teir con Tincin de Gram,
Frotis de Lquido Cefalorraqudeo

Centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. por 15 minutos.
Traspasar el sobrenadante a un tubo Kahn
Marcar una lmina con el nmero de la muestra y hacer dos crculos que servirn
para delimitar la muestra.
Tomar una muestra desde el sedimento y extenderla dentro de las marcas.
Fijar al calor de la llama del mechero.
Teir mediante Tincin de Gram.
Extendido de Hemocultivo
Numerar una lmina de 76 x 26 mm con el nmero de peticin en estudio.
Homogeneizar el contenido de la botella, limpiar tapa con torunda con alcohol al
70%.
Extraer una muestra de sangre desde la botella, pinchando con una jeringa
desechable.
Eliminar la primera gota de sangre en solucin de Hipoclorito de Sodio 0,5% para
evitar que la muestra salpique en la lmina.
Depositar una gota de la muestra en la lmina enumerada.
Eliminar el exceso de sangre en Hipoclorito de Sodio 0,5%.
Eliminar la jeringa completa con aguja en caja para cortopunzantes.
Con un cubreobjeto en ngulo de 45 extender una capa de sangre sobre la
lmina.
Fijar al calor de la llama del mechero.

Teir para Tincin de Gram.
109
REALIZACION Y ESTUDIO DE ANTIBIOGRAMAS
Los estudios de susceptibilidad estn indicados para apoyar la terapia antimicrobiana de

tratamiento en procesos infecciosos por bacterias en las que la identidad del
microorganismo no es suficiente para predecir en forma confiable su susceptibilidad.
Mtodo de Difusin en Agar

Reactivos para Mtodo de Difusin en Agar o Kirby Bauer
Medio Agar Mller Hinton
Sensidiscos dependiendo del agente.
Caldo Triptosa fosfato (Tripticase) o,
Solucin salina 0,9% estril
Etaln 0.5 Mcfarland de BaSO4
Tcnica a realizar:
Utilizar guantes desechables para realizar el procedimiento.
Enumerar todo el material seleccionado para el procedimiento.
Crear un campo de trabajo estril encendiendo el mechero.
El Tcnico debe tomar 2-4 colonias de la cepa aislada para realizar el inculo en un
tubo con Tripticase, el cual se debe ajustar a 0.5 Mcfarland (medir con turbidmetro)
Con una trula estril, tomar inculo y pasarlo a una placa de agar Mller Hinton
(sembrando toda la placa).
Agregar los sensidiscos segn el microorganismo a estudiar con pinzas estriles o
con el dispensador (los sensidiscos se guardan refrigerados a 4C).
Incubar placas sembradas por 18-24 horas a 35 C en estufa para Antibiograma.
El Tecnlogo Mdico es el encargado de leer e interpretar los antibiogramas, pasada
24 horas.
Mtodos Automatizados
110
En este momento existen varios sistemas que ofrecen diferentes niveles de
automatizacin para el estudio de susceptibilidad.
Utilizan una medicin turbidimtrica o fluoromtrica para detectar crecimiento bacteriano
en un medio lquido.
La mayora de ellos emplea el mtodo de micro dilucin y perodos de incubacin
menores que los habituales.
Estos mtodos son bastante confiables para el estudio de Enterobacterias y otros
grmenes de crecimiento rpido.
111
Microbiologa: Muestras Microbiolgicas y

su Diagnstico Procedimental
112

relevante que es su quehacer en el proceso analtico de las
diversas muestras para el diagnstico clnico y tratamiento
antimicrobiano de las diversas patologas infecciosas.

tcnica y obtendr un resultado exacto y confiable, como espejo
de la condicin de la muestra en estudio.
113

Tcnica del Asa Calibrada
I tem: Actividad Procedimental
Realice la siguiente actividad prctica de acuerdo a las instrucciones:
1 Actividad Prctica: Urocultivo
Obtenga una muestra de Orina Asptica y simbrela segn protocolo.

Al da siguiente, observe su desarrollo microbiano y determine si
corresponde realizar el Antibiograma.
Complemente su actividad con un anlisis conceptual de la tcnica
realizada y el resultado de su siembra bacteriolgica.
114
2 Actividad Prctica: Coprocultivo
Obtenga una muestra de Deposicin y simbrela segn protocolo.

Observe su desarrollo microbiano al da siguiente y determine si
corresponde realizar estudio bacteriano al desarrollo obtenido.
Identifique las variables que determinan esta decisin.
Desarrolle un Flujograma de la Tcnica realizada e identifique potenciales
patgenos relacionados.
115
3 Actividad Prctica: Hemocultivo
Confeccione un Mapa Conceptual del Examen de Hemocultivo en relacin

al rol que le corresponde realizar en su proceso analtico cuando es (+) .
Cul es el rol que el compete a Ud. como Tcnico en el proceso

automatizado?
116
4 Actividad Prctica: Observacin Temtica 1
1 2
3 4
Observe con detencin los esquemas, identifique la actividad, ordnelos segn secuencia
procedimental e identifique posibles errores y/o etapas faltantes
117
5 Actividad Prctica: Observacin Temtica 2
Observe con detencin e identifique la actividad, destacando las etapas y pasos faltantes
para una correcta tcnica asptica.
118
6 Actividad Prctica: Pruebas de Identificacin Bioqumica Bacteriana
Observe el recuadro y complete de acuerdo a lo solicitado referente a Medios de Cultivo

Diferenciales.
Medios de Cultivo Diferenciales
Dibujo
Nombre Disposicin
Medio Original Medio con Medio con
Del Medio (Tubo / Placa)
Tcnica de Desarrollo
Siembra Microbiano
Desarrolle un breve comentario de la actividad realizada:
119
7 Actividad Prctica: Pruebas de Susceptibilidad Microbiana (Antibiograma)
Observe con detencin ambos esquemas e indique las diferencias de ambas tcnicas:
120
PARASITOLOGA
El hombre puede enfermar tanto por causas internas y externas. Dentro de las causas
externas estn los agentes biolgicos que reciben el nombre de Parsitos y el ser vivo
que los alberga se denomina Husped.
Cuando un organismo parsito produce manifestaciones clnicas sobre el organismo

hospedador, decimos que se est produciendo un fenmeno de parasitosis. Hay que
tener muy en cuenta que todos los tipos de parasitosis son parasitismos, pero no todos
los tipos de parasitismos son necesariamente parasitosis.
Un parsito se puede definir como una de las partes de dos especies que interaccionan
teniendo integrados sus genomas hasta tal punto que el parsito depende, como mnimo,
de uno de los genes de la otra especie para sobrevivir.
Hay varios tipos de interacciones biolgicas en las cuales dos organismos se asocian
para vivir. Las ms importantes son:
Parasitismo:
Este tipo de asociacin sucede cuando un ser vivo (parsito) se aloja en otro de diferente
especie (husped u hospedero) del cual se alimenta. El parasitismo abarca desde los
virus hasta los artrpodos, pero por costumbre se ha restringido el trmino parsito para
aquellos organismos que pertenecen al reino animal.
Comensalismo:
Se presenta cuando dos especies diferentes se asocian en tal forma que solamente una
de las dos obtiene beneficio, pero ninguna sufre dao.
Inquilinismo:
Ocurre cuando un ser se aloja en otro sin producirle dao y sin derivar alimento de l.
121
Simbiosis:
Sucede cuando dos especies diferentes se asocian para obtener beneficio mutuo, sin el
cual no pueden subsistir.
Terminologa
A continuacin se presentaran las terminologas principales para entender el estudio de

parasitologa:
Husped u Hospedero: Se conoce como el animal que recibe el parsito.

Husped Definitivo: Hospedero en el cual el parasito alcanza su madurez sexual.
Husped Intermediario: Hospedero en el cual el parasito desarrolla parte de su
ciclo evolutivo, sin alcanzar su madurez sexual.
Reservorio: Se considera reservorio al hombre, animales, plantas o materia
inanimada, que contengan parsitos u otros microorganismos que puedan vivir y
multiplicarse en ellos y ser fuente de infeccin para un husped susceptible.
Vector: Se considera en parasitologa que el vector es un artrpodo u otro animal
invertebrado que transmite el parsito al husped, bien sea por inoculacin al
picar, por depositar el material infectante en la piel o mucosas o por contaminar
alimentos u otros objetos.
Los vectores pueden ser slo portadores mecnicos de los parsitos como en el
caso de moscas o cucarachas, o ser verdaderos portadores biolgicos cuando
los parsitos se multiplican en ellos o las larvas se transforman para ser
infectantes.
Infeccin Parasitaria: Sucede cuando el husped tiene parsitos que no le
causan lesin o enfermedad, lo cual constituye el estado de portador sano.
Enfermedad Parasitaria: Se presenta cuando el husped sufre alteraciones
patolgicas y sintomatologa producidas por parsitos.
Zoonosis: Infeccin que se trasmite en forma natural entre el hombre y los dems
vertebrados.
Ciclo Evolutivo: etapas secuenciales del desarrollo de un parasito.
122
Ciclo de Transmisin: Etapas por las cuales pasa un parasito desde la fuente de
infeccin hasta el susceptible.
Forma Infectante: Fase del parasito capaz de infectar al husped.
Clasificacin
Los parsitos se pueden clasificar de distintas maneras:
Dependiendo del tiempo de permanencia del parsito en su husped se dividen en:
Permanentes (aquellos que indispensablemente deben permanecer toda su vida

en el husped)
Temporales (los habitan transitoriamente en el husped)
Segn la capacidad de producir lesin o enfermedad en el hombre, los parsitos pueden

dividir:
Patgenos
No patgenos
Segn su ubicacin topogrfica:

Ectoparsitos: infestaciones
Endoparsitos: infecciones
Segn su ubicacin en rganos y sistemas:

Enteroparsitos (ej: tubo digestivo)
Histoparsitos (ej: en tejidos)
Hemoparsitos (ej: en sangre)
Ciclo de Vida
Es el proceso que desarrolla el parasito para llegar al husped, desarrollarse en l y
producir formas infectantes que perpetan la especie.
123
Los protozoos intestinales desarrollan el ciclo de vida ms simple, es aqul que permite a
los parsitos dividirse en el interior del husped, para aumentar su nmero y a su vez
producir formas que salen al exterior para infectar nuevos huspedes.
En los helmintos, se presentan otros tipos de ciclo que requieren la salida al exterior de
huevos o larvas, que en circunstancias propicias de temperatura y humedad, llegan a ser
infectantes.
En ciclos ms complicados existen Huspedes Intermediarios, en los cuales las formas

larvarias crecen o se multiplican antes de pasar a los nuevos huspedes definitivos. En
algunos casos existen reservorios animales o ms de un husped intermediario y en
otros, es indispensable la presencia de vectores. Los pasos, a veces muy complicados, a
travs de huspedes o del organismo humano, estn regidos por tropismos que llevan a
los parsitos por determinadas vas o los hacen permanecer en ciertos lugares.
Ciclo de Trasmisin
Son etapas que deben trascurrir en un parasito para pasar del husped infectado (fuente
de infeccin) al husped susceptible. Adems pueden ser congnitos, connatales y
adquiridos.
Mecanismos Adquiridos:
a) Directo:
Cutneo
Ciclo ano-mano-boca
b) Indirecto
Vehculo: Alimento-agua; Tierra-cosas; Fmites-ropa; Utensilios
Aire: Gotitas de flugge; polvo
c) Vectores
Mecnico
Biolgico
124
Mecanismo de Accin
Los parsitos afectan al organismo humano de maneras muy diversas, dependiendo del
tamao, nmero, localizacin, etc.; los principales mecanismos por los cuales los
parsitos causan dao a sus huspedes son:
Mecnicos:
Los efectos mecnicos son producidos por obstruccin, ocupacin de espacio y
compresin; el primero sucede con parsitos que se alojan en conductos del
organismo, y el segundo ocurre con aquellos que ocupan espacio en vsceras.
Traumticos:
Los parsitos pueden causar traumatismo en los rganos donde se localizan.
Bioqumicos.:
Algunos parsitos producen sustancias txicas o metablicas que tienen la
capacidad de destruir tejidos.
Inmunolgicos:
Los parsitos y sus productos de excrecin derivados del metabolismo, producen
reaccin de hipersensibilidad inmediata o tarda.
Expoliativos:
Es el mecanismo por el cual el parasito consume elementos propios del husped
125
Clasificacin de los Parsitos
Protozoos
El reino Protista y el subreino Protozoa, agrupan los organismos unicelulares que se
denominan Protozoos o Protozoarios. Se pueden encontrar de diferentes formas, de vida
libre y otros siendo parsitos de animales y plantas. Son microscpicos y se localizan en
diferentes tejidos. Los protozoos constituyen uno de los reinos animales ms primitivos de
la historia de la Tierra. En los protozoos se distinguen los Trofozoitos (forma vegetativa) y
Quistes (forma de resistencia).
Morfologa
Los Trofozoitos constan de membrana, citoplasma y ncleo. La membrana vara de
espesor segn las especies y sus principales funciones son: limitar el parsito, servir
como elemento protector y permitir el intercambio de sustancias alimenticias y de
excrecin.
El citoplasma es una masa coloidal y representa el cuerpo del organismo, en algunas

especies se puede diferenciar claramente una parte interna, granulosa y vacuolada
llamada endoplasma y otra externa, hialina, refringente que es el ectoplasma.
En algunos protozoos existen vacuolas en el citoplasma, unas son alimenticias

encargadas del metabolismo de los nutrientes y otras excretoras que facilitan la
eliminacin de sustancias. El ncleo es esfrico u ovoide, se encuentra localizado en
cualquier parte del citoplasma.
Reproduccin
Los protozoarios se multiplican por reproduccin asexual y slo algunos tienen
reproduccin sexual. La asexual tiene dos modalidades divisin binaria y divisin mltiple.
126
Locomocin
Los protozoos presentan mecanismos diversos de locomocin, funcin que se tiene en
cuenta como uno de los parmetros para su clasificacin. Segn el modo que tienen para
desplazarse se habla de:
Rizpodos o Amebianos: se desplazan emitiendo pseudpodos.

Flagelados: Se desplazan mediante flagelos
Ciliados: Se desplazan mediante cilios
Esporozoos: al no tener organelos visibles de movilizacin, lo hacen mediante
deslizamiento.
127
Helmintos
Los helmintos, comnmente llamados gusanos, son seres multicelulares o metazoarios,

ampliamente distribuidos en la naturaleza. Muchos de ellos viven libremente y otros se
han adaptado a llevar vida parasitaria en vegetales, animales o en el hombre.
Segn su aspecto se dividen en: Nematodos y Platelmintos.
Morfologa y Fisiologa
Los Nematelmintos o Nemtodos y los Platelmintos difieren morfolgicamente, los
primeros son gusanos cilndricos, habitualmente de sexos separados y con dimorfismo
sexual. Al corte transversal presenta una envoltura externa, la cutcula, que impide que el
gusano sea destruido por las enzimas del husped, a su vez la capa muscular es la que
proporciona movilidad al parasito.
128
A su vez los Platelmintos son gusanos acintados generalmente hermafroditas y sin

cavidad visceral. En este grupo podemos encontrar los Cestodos que son de cuerpo
plano, dividido en esclex o cabeza, cuello y estrbilo, formado por progltidas
(inmaduras, maduras y grvidas) y los Trematodos que son de cuerpos planos no
segmentados.
129
Artrpodos
Son en su mayora animales invertebrados, caracterizados por poseer patas articuladas,
pueden ser parsitos de forma permanente o temporales del hombre; actan como
husped intermediario.
Se pueden distinguir segn la cantidad de patas que poseen:
Insectos hexpodos con 6 patas,
Arcnidos u octgodos con 8 patas y
Crustceos o decpodos con 10 patas
Insectos Hexpodos:
Los insectos adultos tienen el cuerpo dividido en tres regiones: a) cabeza que posee un
aparato bucal y un par de antenas; b) trax, dividido en tres segmentos: protrax,
mesotrax y metatrax, de cada uno de los cuales sale un par de patas; en los insectos
que tienen alas se encuentran un par en el mesotrax y otro en el metatrax; c) abdomen;
dividido en segmentos.
130
Arcnidos u Octgodos:
Comprende las araas, garrapatas, caros y escorpiones. El cuerpo de los adultos est
dividido en dos regiones, cefalotrax y abdomen.
Crustceos o Decpodos:
Hay pocos crustceos de importancia mdica. Sirven como husped intermediario de
algunos parsitos humanos.
131
Los artrpodos producen lesiones o enfermedades de intensidad muy variable y por

diferentes mecanismos que agrupamos en prurito, alergias cutneas, alergias
respiratorias, intoxicaciones y lesiones destructivas e invasivas.
Adems, podemos diferenciar en aquellos que realizan segn su ciclo evolutivo,
Metamorfosis Incompleta y Metamorfosis Completa.
La Metamorfosis Incompleta es aquella donde se produce un desarrollo gradual de un

insecto en etapa adulta. Se caracteriza por la ausencia de la fase de pupa. Consta de tres
etapas: huevo, larva o ninfa y adulto. Dentro de los artrpodos que desarrollan
metamorfosis incompleta podemos encontrar: Cucarachas, piojos, chinches, acaro de la
sarna, garrapatas y araas.
Ciclo Evolutivo de Metamorfosis Incompleta
132
Por su parte la Metamorfosis Completa consta de cuatro etapas: huevo, larva o ninfa,
pupa y adulto. Dentro de los artrpodos que desarrollan metamorfosis completa podemos
encontrar: Moscas, mosquitos y pulgas
Ciclo Evolutivo de Metamorfosis Completa
133
Parasitosis por Protozoos
Amebiasis
Es la infeccin del intestino grueso del hombre por el protozoo Entamoeba histolytica.
Forma infectante Quiste tetrgeno

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Fecalismo humano
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces humanas,
Manipuladores de alimentos
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Entamoeba histolytica
134
Balantidiosis
Zoonosis producida por Balantidium coli, protozoo ciliado, comensal del intestino grueso
del cerdo (hombres infectados), que afecta al hombre originando a veces un sndrome
disentrico o diarreico.
Forma infectante Quiste

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Fecalismo de cerdo (humano)
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces de cerdos
(humanos)
Reservorio cerdo
Ciclo Zoonosis directa (Monoxnico)
Ciclo Evolutivo Balantidium coli
135
Giardiasis
Infeccin del intestino delgado del hombre, producida por el protozoo Giardia lamblia
Forma infectante Quiste

Va de infeccin Oral
Reservorio hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Giardia lamblia
136
Isosporiasis
Infeccin del intestino delgado del hombre, por Isospora belli, protozoo, coccidio que
produce un cuadro clnico caracterizado por fiebre, diarrea subaguda y Eosinofilia.
Forma infectante Ooquiste maduro

Va de infeccin Oral
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces humanas
Reservorio hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Isospora belli
137
Criptosporidiasis
Infeccin del aparato digestivo por protozoos del gnero Cryptosporidium sp., de los
cuales Cryptococcus muris y Cryptococcus parvum afectan a mamferos, siendo
Cryptococcus parvum el que parasita al hombre.
Forma infectante Ooquiste maduro

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Fecalismo humano o animal
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces humanas o
animales, Manipuladores de alimentos
Reservorio Animales
Ciclo Zoonosis directa (Monoxnico)
Ciclo Evolutivo Crytosporidium sp.
138
Tricomoniasis
Infeccin del hombre provocada por protozoos flagelados del gnero Trichomonas,
localizadas en la cavidad bucal, digestiva y urogenital. En el ser humano se han
demostrado 3 especies: Trichomonas tenax (comensal de la boca), Trichomonas hominis
(comensal del intestino grueso) y Trichomonas vaginalis, parasito de la vagina en la mujer
y uretra, vesculas seminales y prstata en el hombre.
Forma infectante Trofozoito

Va de infeccin Genital
Mecanismo de trasmisin Sexual
Fuente de infeccin Individuos infectados
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Trichomonas vaginalis.
139
Blastocistosis
Infeccin del intestino del hombre producida por el protozoo Blastocystis hominis, no
presenta forma qustica. Es causante de diarrea y su patogenicidad depende del nmero
de parsitos.
Forma infectante Trofozoito (vacuolar, granular, ameboide)

Va de infeccin Oral
manipuladores de alimentos.
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Blastocystis hominis
140
Enfermedad de Chagas
Es la infeccin del hombre, de mamferos y triatominos (vinchuca) producida por un
protozoo flagelado, Tripanosoma cruzi. En el hombre la infeccin puede ser congnita o
adquirida. En Chile se han identificado solo dos vectores capaces de trasmitir este
protozoo, el Triatoma infestans (hbitat domiciliario nocturno) y Triatoma spinolai (rural y
silvestre), artrpodos hematofogos conocidos popularmente como vinchuca.
Clasificacin Protozoo, flagelado con kinetoplasto

Estadio evolutivo Tripomastigoto, epimastigoto y amastigoto
Mecanismo de trasmisin Vectorial, transfusional, transplacentario, trasplante de
rganos.
Ciclo Metazoonosis
Ciclo Evolutivo Tripanosoma cruzi
141
Toxoplasmosis
Infeccin parasitaria del hombre y de diversas especies de mamferos y de aves,
producida por un protozoo coccidio llamado Toxoplasma gondii.
Clasificacin Protozoo, Apicomplexo, coccidio

Estadio evolutivo Zoito, pseudoquiste, quiste y ooquiste
Mecanismo de trasmisin Fecalismo felino, carnivorismo, transplacentario,
transfusional y trasplante de rganos.
Ciclo Ciclozoonosis
Ciclo Evolutivo Toxoplasma gondii
142
Parasitosis por Helmintos
Ascariasis
Helminto- Nematodo que afecta el intestino delgado del hombre, por Ascaris lumbricoides,
Es un geo helminto ya que sus huevos maduran en la tierra, es por esto que parasita
preferentemente a los nios.
Forma infectante Huevo larvado

Va de infeccin Oral
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces humanas.
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Ascaris lumbricoides
143
Tricocefalosis
Helminto -Nematodo que afecta el intestino grueso del hombre por Trichuris trichiura, a
diferencia de Ascaris lumbricoides, no efecta migraciones (sin Ciclo de Loos)

Va de infeccin Oral
Fuente de infeccin Alimentos y agua contaminada con heces humanas.
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Trichuris trichiura
144
Oxiuriasis
Infeccin del tipo familiar producida por el Helminto- Nematodo Enterobius vermicularis
conocido popularmente como pidulle. Habita en el ciego del hombre y las hembras
migran a la regin perianal para depositar sus huevos.

Va de infeccin Oral, Respiratoria
Mecanismo de trasmisin Ciclo ano-mano- boca
Fuente de infeccin Ambiente oxiuritico
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Enterobius vermicularis
145
Teniasis
Infeccin humana producida por los Helmintos- Cestodos por los ejemplares adultos de
Taenia solium y Taenia saginata.
Taenia solium
El husped intermediario de este parasito es el cerdo, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus cellulosae. El hombre al comer carne de cerdo crudo y/o
mal cocida adquiere la Taenia (husped definitivo), infectando el intestino delgado del
hombre.
Forma infectante Cisticerco de Taenia solium (Cisticercus cellulosae)

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Carnivorismo porcino
Fuente de infeccin Carne de porcino infectada con cisticercos
Hospedero definitivo Hombre
Hospedero intermediario Cerdo
Reservorio Hombre
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Taenia solium
146
Taenia saginata
El husped intermediario de este parasito es el Vacuno, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus bovis. El hombre al comer carne de vacuno crudo y/o mal
cocida adquiere la Taenia (husped definitivo), infectando el intestino delgado del hombre.
Forma infectante Cisticerco de Taenia saginata (Cisticercus bovis)

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Carnivorismo porcino
Fuente de infeccin Carne de vacuno infectada con cisticercos
Hospedero intermediario Vacuno
Reservorio Hombre
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Taenia saginata
147
Cisticercosis
Es la localizacin en los tejido del hombre del Cysticercus cellulosae, forma larval de
Taenia solium que habitualmente infecta al cerdo
Forma infectante Huevo hembrionado de Taenia solium (Cisticercus

cellulosae)
Va de infeccin Oral
Localizacin Tejido subcutneo, musculo, Sistema nervioso central y ojo
Ciclo Evolutivo Cysticercus cellulosae
148
Difilobotriasis
Infeccin del intestino delgado que afecta a hombres y animales ictifagos del Helminto-
Cestodo Dyphyllobothrium latum.
Forma infectante Plerocercoide

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Carnivorismo de peces
Fuente de infeccin Carnes de peces infectada con plerocercoides
Hospedero definitivo Hombre y animal ictifago
Hospedero intermediario Coppodo y peces
Reservorio Animales ictifagos
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Dyphyllobothrium latum
149
Himenolepiasis por Hymenolepis nana

Infeccin del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Hymenolepis nana, siendo este la infeccin por cestodos ms frecuente del hombre.
Forma infectante Huevo hembrionado (Cisticercoide)

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Fecalismo humano (consumo de artrpodos)
Manipuladores de alimentos, artrpodos infectados con
cisticercoides
Hospedero intermediario Hombres , Artrpodos
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Hymenolepis nana
150
Himenolepiasis por Hymenolepis diminuta
Infeccin accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Hymenolepis diminuta propia de ratas y ratones
Forma infectante Cisticercoide

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Consumo de artrpodos
Fuente de infeccin Artrpodos infectados con cisticercoides
Hospedero definitivo Ratas (accidentalmente el hombre)
Hospedero intermediario Artrpodos
Reservorio Rata
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Hymenolepis diminuta
151
Dipilidiasis
Infeccin accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Dipylidium caninum, propia perros, gatos, otros caninos y felinos silvestres.

Va de infeccin Oral
Hospedero definitivo Caninos y felinos (accidentalmente el hombre)
Reservorio Caninos y felinos
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Dipylidium caninum
152
Hidatidosis
Es la presencia en los rganos de animales y hombre de la taenia Echinococcus

granulosus que vive en el intestino delgado del perro.

Va de infeccin Oral
Hospedero definitivo Caninos y felinos (accidentalmente el hombre)
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Echinococcus granulosus
153
Triquinosis
Es la presencia en la carne de cerdo de quistes tisulares del Helminto nematodo
Trichinella spiralis que vive en el intestino delgado de animales infectados.
Forma infectante Quiste tisular

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Carnivorismo
Fuente de infeccin Carne de cerdo infectada con quiste larvados
Hospedero definitivo Animales infectados
Hospedero intermediario Animales infectados
Reservorio Rata
Ciclo Monoxnico
Ciclo Evolutivo Trichinella spiralis
154
Fasciolasis
Es la presencia en los canalculos biliares del hombre y animales herbvoros del helminto
trematodo Fasciola heptica.
Forma infectante Metacercaria

Va de infeccin Oral
Mecanismo de trasmisin Consumo de berros
Fuente de infeccin Berros contaminados con metacercarias
Hospedero definitivo Hombres y animales herbvoros
Hospedero intermediario Caracol de agua dulce
Ciclo Heteroxnico
Ciclo Evolutivo Fasciola heptica
155
Microbiologa: Diagnstico Parasitolgico

Procedimental
156

relevante que es su quehacer en el proceso analtico de las
diversas muestras para el diagnstico parasitolgico, como de
las medidas de prevencin y de saneamiento bsico.

tcnica y obtendr un resultado exacto y confiable, como espejo
de la condicin de la muestra en estudio.
157

Tcnica Examen Parasitolgico Seriado de Deposiciones
El EPSD es el procedimiento de diagnstico de laboratorio de mayor demanda en el rea

de la Parasitologa en los laboratorios clnicos del pas. Para realizarlo, se describen
mtodos basados principalmente en la concentracin de los elementos parasitarios
mediante sedimentacin por fuerza de gravedad, centrifugacin o flotacin, entre los ms
empleados, que permiten concentrar los distintos estadios microscpicos o elementos de
desarrollo de protozoos y helmintos parsitos presentes en una muestra de deposiciones.
El procesamiento debe ser de un nmero de tres muestras recogidas en das alternados
(el periodo de recoleccin total comprende 5 das).
Materiales para la Obtencin de la Muestra

3 frascos plsticos limpios, no necesariamente estriles, con cierre hermtico, de
tapa rosca, boca ancha, con etiquetas y que contengan 15 mL de solucin fijadora
c/u para frascos de 30 ml. Se recomienda el uso de frascos con cucharilla
incorporada o 3 paletas de madera auxiliares.
Hoja impresa con las instrucciones para la recoleccin de las muestras. La hoja
debe basarse en los aspectos generales detallados en los requisitos de la
muestra, en lenguaje sencillo y comprensible. Las etiquetas deben tener suficiente
espacio para los siguientes datos: - Nombre y apellido del paciente. - Fecha de
obtencin de la muestra
Mtodo de Burrows Modificado

Este mtodo fue descrito por Burrows en 1967 con el nombre de Mtodo de PAFS (Fenol
Alcohol Formalina) y modificado posteriormente por Torres y Navarrete en 1972. En Chile,
se le conoce mayoritariamente como Mtodo de Burrows Modificado.
158
ste es un mtodo de concentracin por sedimentacin mediante centrifugacin que se

caracteriza por su buen rendimiento en el diagnstico de huevos de helmintos, quistes y
Trofozoitos de protozoos, especialmente en el diagnstico de elementos del gnero
Entamoeba.
La ventaja radica en la calidad de la solucin empleada como fijador, que penetra
rpidamente en el elemento parasitario permitiendo que las caractersticas morfolgicas
no se alteren e inactiva las formas infectantes que pudieran estar presentes en la
muestra.
Procedimiento
1. Durante el procesamiento de las muestras, al igual que para los otros mtodos
aplicados a fluidos corporales, se deben guardar las precauciones contenidas en
los manuales de bioseguridad.
2. Numerar los tres frascos del paciente con el mismo nmero.
3. Numerar 2 portaobjetos diferenciando la Fase T (Trofozoitica) de la Fase Q
(qustica), 2 vasos y 1 tubo de centrfuga con el mismo nmero de los frascos.
4. Homogenizar el contenido de los frascos mediante ayuda de una paleta de
madera.
5. Vaciar todo el contenido de cada frasco en un vaso y agregar suero fisiolgico
0,85% con la precaucin de efectuar una buena dilucin y homogenizacin.
6. Tamizar la emulsin a travs de la malla colocada en un vaso limpio.
7. Observar el material retenido en la malla en busca de parsitos macroscpicos.
8. Colocar aproximadamente 12 ml de tamizado en el tubo de centrfuga.
9. Centrifugar por 3 minutos a 1.800 r.p.m.
10. Eliminar el sobrenadante invirtiendo el tubo. Si el sedimento es menor de 0,5 ml
agregar del tamizado hasta lograr un sedimento de 0,5 a 0,6 ml.
11. Resuspender con suero fisiolgico 0,85 % y centrifugar nuevamente.
12. Resuspender el sedimento hasta 2 ml con suero fisiolgico 0,85 % y agitar para
soltar el sedimento.
13. Completar a 12 ml con suero fisiolgico 0,85% y centrifugar por 3 minutos a 1.800
r.p.m. aprox.
159
14. Repetir los pasos 11 y 12 entre dos y cuatro veces hasta obtener un sobrenadante
limpio o transparente.
15. Colocar una gota de tincin, en el portaobjeto marcado con la letra T (fase
trofosoitica).
16. Colocar una gota del sedimento, una junto a cada gota de tincin.
17. Con un ngulo del cubreobjetos mezclar el sedimento y la tincin; luego cubrir.
18. Guardar en cmara hmeda.
19. Resuspender el contenido del tubo de sedimento con suero fisiolgico 0,85% hasta
10 ml.
20. Agregar 2 ml de acetato de etilo.
21. Tapar el tubo y agitar enrgicamente por 30 segundos. Destapar lentamente.
22. Centrifugar por 3 minutos a 2.000 r.p.m.
23. Vaciar todo el sobrenadante de una sola vez, en forma rpida, invirtiendo el tubo.
24. Resuspender el sedimento en 1 ml de suero fisiolgico 0,85 % y homogenizar.
25. Proceder como en el punto 14 y marcar el portaobjetos con una letra Q (fase
qustica).
26. Proceder igual que en el punto 15 y 16.
27. Colocar en cmara hmeda hasta su lectura.
Estas preparaciones se pueden conservar hasta 24 horas en la cmara hmeda
en un lugar fresco o refrigerar entre 2 y 8C.
Desarrolle un anlisis conceptual del procedimiento realizado:
160

Test de Graham
Los mtodos diagnsticos dirigidos a la bsqueda de formas evolutivas de Enterobius

vermicularis son de uso rutinario en los laboratorios clnicos del pas y son de gran utilidad
debido al bajo porcentaje de rendimiento que posee el examen parasitolgico seriado de
deposiciones en el diagnstico de este parsito y adems porque su fundamento guarda
estrecha relacin con el ciclo biolgico de este nematodo.
Para su realizacin, se describen mtodos basados principalmente en la observacin

microscpica de la muestra obtenida mediante tcnicas estandarizadas de recoleccin
diaria. El test de Graham es un mtodo descrito en 1941 por Graham que permite adherir
huevos y /o adultos de Enterobius vermicularis los que pueden ser identificados mediante
observacin microscpica. Se recomienda su uso para el diagnstico en lactantes y nios
menores de 12 aos.
Materiales para la obtencin de la muestra Test de Graham:

5 portaobjetos de 75 mm x 25 mm limpios, no necesariamente estriles.
Cinta adhesiva transparente de 12,7 mm de ancho x 9 cm de longitud.
Contenedor plstico o de cartn prensado para proteger los portaobjetos con las
muestras. l o los contenedores deben tener etiquetas para registrar los datos del
paciente.
Hoja impresa con las instrucciones para la recoleccin de las muestras.
161
Procedimiento
Se deben recolectar 5 muestras por las maanas en das sucesivos sin que el paciente
lave o limpie el margen anal y perianal, de la siguiente manera, a partir del primer da:
1. Despegar la cinta adhesiva transparente del portaobjeto tomndola desde su
pestaa y sin despegar el borde de fijacin quedando la superficie engomada
hacia afuera.
2. Indicar al paciente que debe colocarse en decbito ventral, se deben separar los
glteos
3. Se debe aplicar repetidamente la superficie engomada en la regin anal y
perianal.
4. Pegar la cinta adhesiva transparente sobre el portaobjetos, procurando dejarla lo
ms estirada posible en toda su extensin.
5. Colocar el portaobjeto ya utilizado en el contenedor para las muestras.
6. El paciente y/o la persona que haya colaborado en la toma de muestra debe
lavarse muy bien las manos despus del procedimiento.
7. Repetir los pasos anteriores los das restantes hasta completar las 5 muestras.
Describa las precauciones que debe tener presente al manipular estas muestras
recepcionadas en el Laboratorio de Parasitologa:
162

Tincin de Cryptosporidium
Desarrolle las actividades que se indican en el Laboratorio Clnico, conforme a

instrucciones de su docente.
Tcnica a desarrollar:
Debe realizar los pasos previos indicados para un EPSD y extender un frotis del
centrifugado:
Teir frotis con tincin de Ziehl Neelsen.

Cubrir el extendido con Fucsina cida y calentar flameando hasta la aparicin
de vapor (No hervir).
Dejar la tincin por 10 minutos.
Lavar la lmina con agua corriente dejando escurrir.
Decolorar con alcohol-cido durante un minuto aproximadamente.
Cubrir el extendido con Azul de metileno durante 7 minutos.
Secar a temperatura ambiente.
163

Anlisis de Casos
II tem: Anlisis de Casos Procedimentales
Una Atencin de Urgencia de Cuidado
La Sra. Anglica, de 62 aos de edad, de contextura delgada, jubilada del Servicio de

Salud, ex funcionaria del Laboratorio Clnico del Hospital Regional sufre una cada en el
bao de su casa, la cual le deja un hematoma importante en su cara, llegando a perder el
conocimiento por algunos momentos. Con posterioridad a ello, logra recuperarse y llama
al Servicio de Urgencias, momentos ms tarde concurre la ambulancia y la traslada al
Servicio de Emergencia ms cercano a su domicilio.
Durante el traslado en ambulancia la Enfermera de manera amable y cordial se presenta y
le realiza preguntas para saber su condicin, la Sra. Anglica menciona que vive sola, y
que en das anteriores se haba sentido muy dbil, desvanecindose en el silln mientras
miraba su teleserie favorita, que ha tenido cuadros febriles en las tardes y que adems le
duele el pecho, relacionndolo con su hbito crnico de fumar, no dndole mayor
importancia. Al llegar al Box de Atencin, la Enfermera de turno sin preguntarle el nombre,
realiza la toma de muestras de sangre venosa y arterial, y sin dar explicaciones del
procedimiento le entrega un contenedor de boca ancha para recolectar la muestra de
expectoracin, el que una vez obtenido deber enviar al Laboratorio de Urgencia.
Conjuntamente con ello, el mdico indic un examen radiolgico de trax. Transcurridas 3
horas desde su ingreso al Servicio de Urgencias, la Enfermera de turno le indica que el
Laboratorio solicit una nueva muestra para Pruebas Hematolgicas y de Coagulacin, y
que junto con ello, obtendr a continuacin muestra para Hemocultivo. Realizado el
procedimiento en el orden que se menciona, le seala a la Sra. Anglica que debe orinar
en la chata para realizar el Examen de Urocultivo, solicitado por el Mdico.
Recolectadas las muestras en sus contenedores especficos, se verifican los rtulos de
los envases, son envueltas con la Solicitud de Examen y enviadas por Correo Neumtico
al Laboratorio de Urgencia inmediatamente una vez obtenidas. Son recepcionadas y
derivadas una vez ingresadas al Sistema Informtico del Laboratorio (SIL). Las muestras
para estudio bacteriolgico son numeradas con nmeros distintos a los exmenes
urgentes, segn protocolo. El examen de Urocultivo es recibido por la Tcnico Carolina,
en la seccin de Bacteriologa y dejada en bandeja sobre el mesn, mientras termina de
recepcionar todas las muestras procedentes de pacientes hospitalizados.
Las muestras para Hemocultivo, son ingresadas al SIL e incubadas de inmediato al
Incubador Automatizado de la seccin. Este da alarma acstica y visual a las 2 horas de
incubada, debiendo realizar la Tcnico Carolina procedimiento segn protocolo de su
competencia. Durante el proceso de Tincin de Gram, aplica ambos colorantes y
decolorante respectivamente, lo cual determin que el Tecnlogo Mdico solicitara repetir
el procedimiento.
164
Al da siguiente, el Tecnlogo Mdico de la seccin al realizar la lectura de Urocultivo,

observa que hay dos placas de medios sembrados sin enumerar, no logrando establecer
con claridad a que pacientes corresponden estos cultivos. Las colonias que se observan
en ambas placas son de caractersticas distintas y con desarrollo abundante. Al dirigirse a
la Tcnico Carolina, que se encuentra en Sala de Siembras; observa que est hablando
por celular y con todos sus elementos de proteccin personal para el proceso de siembra.
De acuerdo a la informacin contenida en el relato, responda utilizando lenguaje

tcnico adecuado en las siguientes preguntas:
1. Mencione 3 (tres) tipos de contenedores, sus caractersticas y examen

relacionado de acuerdo al relato.
Tipo de Contenedor Caractersticas del Examen Relacionado

Contenedor
2.- De acuerdo al relato: Por qu las muestras para estudio bacteriolgico son
enumeradas en forma separada con respecto a las otras muestras recepcionadas
de la Sra. Anglica?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
165
3.- En relacin al Examen de Urocultivo, de acuerdo al relato, mencione:
3.1.- Qu errores procedimentales pre analticos, de competencia del Tcnico se

observan?
Mencione 2 (dos)
A.-
B.-
3.2.- Qu consecuencias o situaciones se desprenden del error detectado por el

Tecnlogo Mdico en las placas sembradas sin enumerar? Mencione 3 (tres)
A.-
B.-
C.-
3.3.- Qu informacin tcnica entrega un Informe de un Examen de Urocultivo,

que es relevante para el Mdico al confirmar el diagnstico de Infeccin Urinaria?
A.-
B.-
C.-
166
4.- En relacin al Examen de Hemocultivo, responda de acuerdo al caso:
4.1.- Qu procedimiento de su competencia debe realizar la Tcnico Carolina de

acuerdo a protocolo, al detectar positividad de Hemocultivo en el Incubador
Automatizado?
A.-
B.-
4.2.- Qu situacin procedimental en la realizacin de la Tincin de Gram,

determina que el Tecnlogo Mdico solicite la repeticin del proceso, conforme al
relato del caso?
5.- Con respecto a Bioseguridad, responda de acuerdo al caso:

5.1.- Mencione 2 (dos) normas de bioseguridad que no se cumplen:
A.-
B.-
5.2.- Mencione los EPP mnimos que debe tener la Tcnico Carolina para el
procedimiento que debe realizar en la seccin de bacteriologa al procesar el
Hemocultivo.
A.-
B.-
C.-
5.3.- Qu elemento del proceso tcnico de su competencia, le da la esterilidad a

su rea de trabajo?
167
Atencin de Urgencia Integral
Don Roberto Gmez es un adulto de 38 aos, que se encuentra retenido en el Centro

Penitenciario Colina 2 por vender pelculas piratas. Por diferencias de opinin con su
compaero de celda se origina una ria, quien toma una estaca artesanal que guarda
entre sus pertenencias y se la entierra en el muslo.
Don Roberto es llevado rpidamente al Servicio de Urgencias del Complejo Hospitalario
San Jos, con la estaca enterrada en la extremidad inferior. Al llegar al hospital, es
ingresado inmediatamente al box de atencin. Su condicin general es de cuidado,
presenta innumerables cortes y contusiones con sangrado.
La Tcnico realiza las primeras atenciones de enfermera en forma inmediata aplicando
solucin antisptica, rellenando el contenedor al observar que queda muy poco y no
alcanza para realizar el proceso. Asla la herida con apsitos estriles vencidos.
Durante el procedimiento quirrgico, se le indica a la Enfermera tomar muestras para
estudio microbiolgico de la lesin, recolectando la muestra de secrecin en un tubo
estril con medio de transporte Cary y Blair.
La muestra es recepcionada en el Laboratorio Clnico con la Solicitud de Examen, que se
adjunta directamente con el recolector con muestra. El Auxiliar del Laboratorio traslada
rpidamente la muestra por mano a la Unidad de Microbiologa, la que es sembrada
inmediatamente.
La muestra es sembrada en medios selectivos y enriquecidos determinadas para este tipo
de muestra, obteniendo un desarrollo abundante en estras. Al da siguiente, el Tecnlogo
Mdico indica resembrar la muestra y al leer la Tincin de Gram realizada, solicita revisar
el procedimiento: se observan Cocaceas Gram Negativas agrupadas en racimo.
168
PREGUNTA 1: De acuerdo a la informacin contenida en el relato del caso y

en relacin a la atencin de enfermera realizada en el Servicio de Urgencia como en
Pabelln Quirrgico, responda:
Pregunta Respuestas
1.1 Mencione una solucin

-
antisptica que pueda utilizarse
en el procedimiento realizado
por la Tcnico de Enfermera
1.2 Mencione 3 errores

-
procedimentales que se deducen de
las actividades realizadas por la ...............................................
Tcnico de Enfermera y Enfermera
-
respectivamente

-

1.3 Mencione 1 barrera protectora

-
que debi utilizar la Tcnico para
efectuar la atencin directa del
paciente en el caso descrito
1.4 Qu accin debi realizar antes

-
de utilizar las barreras protectoras?

1.5 Mencione 2 medidas efectivas

-
que permita evitar los errores
cometidos en la atencin de ...............................................
enfermera en el Servicio de Urgencia
-
con Don Roberto Gmez
..
169
PREGUNTA 2: En relacin al material utilizado en la curacin, indique:
Pregunta Respuestas
2.1 De acuerdo a la Clasificacin de

- .
Spaulding Cmo se clasifica el tipo
de material utilizado en el proceso de .
curacin?
PREGUNTA 3: En relacin a los procesos realizados en el transporte y recepcin de

la muestra, responda:
Pregunta Respuestas
3.1 Identifique 1 error asociado al

transporte de la muestra, observado - .
en el caso de anlisis. .
PREGUNTA 4: En relacin a los procesos realizados en el Laboratorio Clnico,

responda:
4.1.- Identifique el error que detect el

Tecnlogo Mdico en el proceso de - .
siembra
...
4.2.- Mencione una consecuencia del

error tcnico en el proceso de - .
siembra

4.3.- Identifique 4 probables causas

- .
que generaron el error en la Tincin
de Gram realizada por la Tcnico .
- .
.
170
- .
.
- .
.
4.4.- Qu debi haber observado al

microscopio el Tecnlogo Mdico, si - .
la tincin hubiera estado
correctamente realizada?
4.5.- Mencione 2 medios slidos

- .
requeridos para la siembra de la
muestra definida en el caso .
- .
.
Colorante Base:
4.6.- Identifique el colorante base y de
contraste utilizados por la Tcnico en ..
el caso descrito
Colorante de Contraste:
...
4.7.- Mencione el mordiente utilizado

en el procedimiento de tincin
- ..
4.8.- Mencione una medida de control

analtico que debi utilizar la Tcnico
en el procedimiento de Tincin de
- ..
Gram para validar su correcta
ejecucin
171
BIBLIOGRAFA
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part2/232.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v15_n2/pdf/a02.pdf
Norma General Tcnica sobre Esterilizacin y Desinfeccin de Elementos

Clnicos.
Montiel Fernando, Manual de Microbiologa Clnica, 2001
Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologia Mdica, 2001
ISP, Gua de Bioseguridad Para Laboratorios Clnicos, 2013
172

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