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Resultados y discusin:

Tabla 1.1 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo de Molisch

Muestra: Observacin:
Glucosa Anillo de coloracin violeta.
Fructosa Anillo de coloracin violeta.
Sacarosa Anillo de coloracin violeta.
Ribosa Anillo de coloracin violeta.
Lactosa Anillo de coloracin violeta.
Muestra Problema N4 Anillo de coloracin violeta.
Blanco No hay reaccin.

En la prueba de Molisch para el reconocimiento de las soluciones con hidratos de carbono


presentes en ella, se observ que todas reaccionaron de manera positiva (incluyendo la muestra
problema N 4), pudindose observa el anillo interface de color violeta caracterstico para este
reconocimiento. No as el caso del blanco, puesto que al no contener hidratos de carbono en
solucin no reacciono frente al reactivo. (Herrera, C., Bolaos, N., & Lutz, G. (2003). Qumica de los
alimentos: manual de laboratorio. En Carbohidratos (pg. 10). San Jos: Editorial de la Universidad
de Costa Rica.)

Tabla 1.2 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo de Barfoed.

Muestra: Observacin:
Glucosa Precipitado de coloracin roja.
Sacarosa No hay reaccin.
Galactosa Precipitado de coloracin roja.
Lactosa No hay reaccin.
Muestra Problema N4 Precipitado de coloracin roja.
Blanco No hay reaccin.

La prueba o ensayo de Barfoed permite diferenciar entre azucares monosacridos y disacridos


(Nigam, A., & Ayyagari, A. (2007). Lab Manual in Biochemistry, Inmunology and Biotechnology. En
Qualitatives and Quantitatives Methods for the Study of Biomolecules (pgs. 25-27). Nueva Delhi:
Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited.), de esta forma, al observar los resultados
obtenidos y tabulados en la tabla 1.1 se observa que la glucosa, galactosa y la muestra problema
dispuesta (N4) corresponden a monosacridos, mientras que la sacarosa y lactosa corresponden a
disacridos ya que (junto con el blanco) no presentan reaccin frente a la prueba de Barfoed.
Tabla 1.3 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo de Fehling.

Muestra: Observacin:
Xilosa Precipitado de coloracin roja.
Maltosa Precipitado de coloracin roja.
Sacarosa No hay reaccin.
Muestra Problema N4 Precipitado de coloracin roja.
Blanco No hay reaccin.

La prueba de Fehling permite identificar los azucares reductores mediante la reaccin del carbono
anomerico de estos frente a la sal de cobre de la cual est hecha el reactivo. Al reaccionar ambas
especies, el azcar reduce el cobre formando el xido de color rojo observado con la Xilosa,
maltosa y la muestra problema n4.

(a) (b)

(d)
(c)

Figura 1.1 Estructura de los azcares utilizados en el ensayo de Fehling. (a) Xilosa. (b) Maltosa. (c)
Sacarosa. (d) Fructosa. Los crculos rojos marcan el lugar donde se encuentra el o los carbono(s)
anomrico(s)

Al observar la Figura 1.1, la xilosa presenta el carbono anomrico libre, por lo que es un
azcar reductor. La maltosa corresponde a un disacrido, formado por dos subunidades de glucosa
unidas entre s, en la cual el primer residuo a la izquierda se encuentra unido por un enlace
glicosdico al siguiente residuo por medio del carbono anomerico, el segundo residuo posee el
carbono anomrico libre y por tanto se comporta como un azcar reductor.

Por el contrario la sacarosa, un disacrido formado por un residuo de glucosa y uno de fructosa, en
el cual ambos residuos estn unidos por enlace glicosdico por medio de los carbonos anmericos.
Este azucar no presenta reaccin frente al reactivo de Fehling, debido a que sus carbonos se
encuentran formando el enlace y no estn disponibles para participar de la reaccin de oxidacin.
En general, los azcares que tienen presencia de un grupo aldehdo en su estructura, son
azcares reductores, como la xilosa y la maltosa ocupados en el experimento. Sin embargo, como
se puede observar en la tabla 1.3, la fructosa tambin reaccion con el reactivo siendo que no posee
un grupo aldehdo, sino un grupo cetona.

Este falso positivo en la prueba de Fehling se debe a que la fructosa, en medio bsico, se isomeriza
fcilmente a una aldosa, por desplazamientos tautomricos ceto-enlicos (6. McMurry, J. (2008).
Qumica Orgnica. En Biomolculas: carbohidratos (pgs. 992-993). Mxico D.F.: Cengage Learning
Editores, S.A.), por lo que da un ensayo positivo frente al reactivo de Fehling, aunque el tiempo de
reaccin es un poco ms lento.

Figura 1.2 Tautomerizacin de la fructosa.


Tabla 1.4 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo de Bial.

Muestra: Observacin:
Fructosa Coloracin gris.
Glucosa Coloracin gris.
Ribosa Coloracin verde.
Galactosa Coloracin gris.
Muestra Problema N4 Coloracin gris.
Blanco No hay reaccin.

El reactivo de Bial permite la diferenciacin entre las hexosas y pentosas, permitiendo observar as
una coloracin verde para las pentosas, mientras que las hexosas presentan una coloracin gris.
Para las muestras utilizadas, se determin que la fructosa, glucosa, galactosa y la muestra
problema n4 corresponden a hexosas, mientras que la ribosa corresponde a una pentosa. No se
observ reaccin en el blanco debido a la ausencia de la muestra de hidrocarburo.
Tabla 1.5 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo de Seliwanoff.

Muestra: Observacin:
Glucosa Coloracin levemente rosa.
Ribosa Coloracin levemente rosa.
Fructosa Coloracin roja.
Muestra problema N4 Coloracin levemente rosa.
Blanco No hay reaccin.

El ensayo de Seliwanoff permite el reconocimiento de cetosas frente a las aldosas, presentando


una coloracin roja en la solucin. Esto debido a que las cetosas se deshidratan a mayor velocidad
que las aldosas (Nigam, A., & Ayyagari, A. (2007). Lab Manual in Biochemistry, Inmunology and
Biotechnology. En Qualitatives and Quantitatives Methods for the Study of Biomolecules (pgs. 25-
27). Nueva Delhi: Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited.). De esta forma, se tiene que la
fructosa es la nica cetosa entre las muestras, mientras que la glucosa, ribosa y la muestra
problema n4 corresponden a aldosas. Cabe destacar que las muestras que se han clasificado
como aldosas presentan una leve coloracin rosa como se puede observar en la tabla 1.5, esta
coloracin indica que hay reaccin con el ensayo pero en mucha menor medida. Esto es debido al
ya mencionado equilibrio de tautomerizacion visible en el ejemplo de la figura 1.2 para la fructosa.
Tabla 1.6 Reacciones de las distintas soluciones frente al ensayo del Yodo.

Muestra: Observacin
Glucosa No hay reaccin.
Lactosa No hay reaccin.
Almidn Coloracin azul oscura.
Muestra Problema N4 No hay reaccin.
Blanco No hay reaccin.

El ensayo del yodo permite reconocer almidn en una muestra, l almidn presenta en su estructura
amilosa y amilopectina. La amilosa es un polmero de cadena lineal de -D-glucosa las cuales estn
unidas por puentes 1,4--D-glucosdicos. Mientras que la amilopectina corresponde a una molcula
ms grande que la amilosa, la cual est compuesta por ramificaciones de -D-glucosas. Ambos
polisacridos interaccionan con el yodo, sin embargo es la amilosa la que produce este azul oscuro
intenso al interactuar con el yodo. Esto se debe a que el yodo se encuentra atrapado dentro de la
estructura helicoidal de la amilosa, proporcionando este color. (MacFaddin, J. (2003). Pruebas
Bioqumicas para la Identificacin de Bacterias de Importancia Clnica. En Prueba de hidrlisis de
almidn (pgs. 389, 392). Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A.). Debido a esto es
que como se observa en la tabla 1.6, el almidn es el nico que reacciona con el yodo, no as la
glucosa y lactosa. Por otra parte, permite tambin descartar que la muestra problema n4 sea
almidn inmediatamente al no presentar reaccin frente al yodo.
Tabla 1.7 Reacciones de confirmacin despus de la Hidrolisis.

Muestra: Ensayo de confirmacin: Observacin:


Sacarosa Fehling Precipitado rojo.
Almidn Yodo No hay reaccin.

La realizacin de las pruebas de yodo y/o Fehling permiten analizar tanto las caractersticas de los
monosacridos constituyentes en la solucin, como tambin as si se realiz correctamente la
hidrolisis del hidrocarburo a analizar. De esta forma se obtiene que al analizar la sacarosa
hidrolizada con el ensayo de Fehling se puede observar el precipitado rojo de xido de cobre, lo
que nos indica que ahora los carbonos anomericos de la Sacarosa, los cuales antes se encontraban
formando el enlace glicosidico como se observa en la figura 1.1, ahora se encuentran libres y
reaccionan con el cobre presente en el reactivo de Fehling. Mientras que en el Almidn ya no se
observa la coloracin azul caracterstica de la reaccin de este frente al yodo, lo que nos indica
que en ambas reacciones las hidrolisis se realizaron exitosamente.
Por ltimo se presenta una muestra con todas las caractersticas obtenidas de la muestra
problema N4:

Ensayo: Resultado obtenido:


Barfoed Monosacrido
Fehling Azcar reductor
Bial Hexosa
Seliwanoff Aldosa
Yodo Negativo (se rechaza la posibilidad del
almidn)
Molisch Positivo para hidrocarburos

Analizando los resultados se determin que el azcar es una aldosa, gracias al ensayo de Seliwanoff
y una hexosa, gracias el ensayo de Bial (Guarnizo, A., & Martinez, P. (2009). Experimentos de
Qumica Orgnica con enfoque en ciencias de la vida. En Caracterizacin qumica de carbohidratos
(pgs. 136-142). Armenia: ELIZCOM S.A.S.). Mientras que por otro lado el azcar se considera al
azucar un monosacrido reductor, gracias al ensayo de Barfoed y Fehling respectivamente (Malhotra,
V. (2003). Practical Biochemistry for Students . En Carbohydrates (pgs. 11-12). Nueva Delhi:
Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd.). Considerando que el azcar dispuesto para la muestra
problema se encontraba dentro de los azucares trabajados se estima que la muestra problema puede
corresponder al hidrocarburo de Maltosa.

Conclusin:

Se logr una correcta caracterizacin de los azcares por medio de los mtodos y ensayos
propuestos, permitiendo de esta manera clasificar a las muestras segn distintos criterios
cualitativos para los azcares, dentro de los cuales se encuentran aldosas y cetosas, hexosas o
pentosas, entre otras.