Introduccin

Las molculas constituyen un rol importante en la bioqumica actual, debido a que estas
conforman gran parte de las sustancias orgnicas e inorgnicas que nos rodean, es por
esto que es pertinente identificar la composicin a nivel molecular de muestras tanto
biolgicas como inorgnicas [1].

Una de las tcnicas utilizadas con regularidad para la deteccin de diferentes tipos de
molculas que componen las muestras, es la utilizacin de un reactivo especfico, el cual
permite observar cualitativamente o determinar de manera cuantitativa la presencia de una
molcula en particular [2].

A pesar de que a grandes rasgos se suelen clasificar muestras como orgnicas e

inorgnicas, existen subdivisiones en la clasificaron de biomoleculas que exponen an ms
las diferencias en la composicin molecular de cada tipo de muestra, por lo que tanto
protenas, como glcidos y sales deben ser identificados con reactivos diferentes debido a
sus propiedades qumicas [3].

As, por ejemplo, los glcidos estn compuestos por monmeros, los cuales poseen la
capacidad de ser reductores (gracias al grupo carbonilo que estos poseen) por lo que una
forma de determinar monosacridos es hacerlos reaccionar con agentes oxidantes. Uno de
los reactivos ms utilizados para llevar a cabo la reaccin es el Cu+2, dado que es fcil
observar un cambio de color en la solucin cuando este ion es reducido (torna a color rojizo)
[4].

Sin embargo, este mtodo no tiene mucha efectividad en glcidos que no son
monosacridos, dado que los disacridos presentan una unin glucosdica que impide su
conformacin de manera lineal (ejemplo de esto se evidencia en la sacarosa), esto inhibe
las caractersticas reductoras del monosacrido, por lo que para identificar un disacrido es
necesario aplicar un mtodo que permita hidrolizar o separar el enlace glucosdico (esto se
puede realizar mediante un cido y/o ebullicin de la solucin) [5].

Por otro lado, las protenas, al estar compuestas por aminocidos cuyos radicales les
pueden conferir distintas propiedades fsico-qumicas, presentan variados mtodos para ser
identificadas, algunos de ellos son la electroforesis (que permite su separacin y
caracterizacin por los puntos isoelctricos de cada protena), la espectrometra de masas

1
(que permite secuenciar una protena desconocida) [6], la cuantificacin de protenas por
mtodo Bradford (que utiliza un colorante hidrfobo que al unirse a la protena le confiere a
esta un coeficiente de extincin mayor que el color que adquiere el resto de la solucin),
entre otros [7].

En el caso de molculas presentes en muestras inorgnicas, un ejemplo muy comn es el

cloruro de sodio, el cual puede ser identificado en una solucin mediante cristalizacin o
por precipitado, este ltimo caso resulta ser el ms fcil y rpido, dado que basta con
adicionar un compuesto capaz de reaccionar con uno de los elementos de la sal que no
precipite, por ejemplo, la reaccin de cloruro de sodio con nitrato de plata en un medio
acuoso [2].

Para la correcta realizacin de procedimientos de determinacin de molculas, es necesario

efectuar controles experimentales, y controles de tiempo si es necesario, dado que esto
permite descartar posibles variables que puedan afectar el resultado final de la reaccin [2].

2
 Objetivos

En este trabajo se identificarn molculas y sales utilizando reactivos que interaccionaran

de forma especfica con cada una de ellas, evaluando adems los controles positivos y
negativos correspondientes.

Durante la experiencia se analizaran la presencia de molculas orgnicas como glcidos

(monosacridos y macromolculas compuestas por polisacridos) y protenas
(seroalbumina y albumen), y molculas inorgnicas como sales (cloruro de sodio y sal de
mar), mediante la realizacin de controles experimentales (control positivo, muestra y
control negativo) para reacciones con reactivos especficos para cada molcula a analizar.

3
 Metodologa

Se procedido a preparar en total 12 tubos de ensayo de 1,5 ml cada uno, siendo 3 tubos
por cada reaccin a analizar (cada uno correspondiente a un control experimental).

En cada procedimiento en donde se adicionaran volmenes entre 490-950 L se utiliz una

pipeta p1000, para volmenes entre 10-100 L se utiliz una pipeta p100, procurando
utilizar la misma pipeta en las soluciones correspondientes a cada reaccin.

Para la reaccin de la muestra inorgnica (sal comn), se procedi a preparar tres tubos de
ensayos con 50 L de nitrato de plata de concentracin 1M cada uno, incorporando al primer
tubo, correspondiente al control positivo, 950 L de agua destilada y 100 L de cloruro de
sodio de concentracin 5M. Para el segundo tubo, correspondiente al control negativo, se
procedi a incorporar 950 L de agua destilada. Finalmente, para el tercer tubo
correspondiente a la muestra, se aadieron 100 L de agua de mar y 850 L de agua
destilada.

En segundo lugar, para la primera reaccin de carbohidratos, se procedi a preparar tres

tubos con 500 L de reactivo de Benedict, al primer tubo de ensayo se le incorporaron 100
L de glucosa al 50% p/v y 400 L de agua destilada. Para el segundo tubo se aadieron
500 L de agua destilada. Finalmente se prepar un tercer tubo con 100 L de sacarosa
50% p/v y 400 L de agua destilada. Estos tres tubos fueron llevados a bao termorregulado
a una temperatura de 90, y una vez transcurridos 5 minutos fueron retirados
cuidadosamente para su observacin.

Para la segunda reaccin de carbohidratos, se prepararon 3 tubos con 50 L de lugol, al

primer tubo se le aadieron 50 L de almidn 0,5% p/v y 900 L de agua destilada. Luego,
se aadi al segundo tubo 950 L de agua destilada. Finalmente, se aadieron 50 L de
jugo de papa y 900 L de agua destilada al tercer tubo de ensayo.

Por ltimo, se prepararon 3 tubos con 500 L de reactivo de Bradford para la deteccin de
protenas, en el primer tubo se vertieron 10 L de seroalbumina y 490 L de agua destilada.
Para el control negativo, se incorporaron 500 L de agua destilada en el segundo tubo. En
ltimo lugar, para la muestra, se aadieron 10 L de huevo y 490 L al tercer tubo.

Al finalizar cada control experimental para las diferentes muestras, se procedi a observar
y anotar cambios de color, turbidez, formacin de precipitado y en un cuaderno de trabajos
prcticos.

4
 Resultados

En la tabla N1 se pueden identificar las anotaciones pertinentes a las caractersticas

cualitativas observadas en la muestra de nitrato de sodio respecto a un control positivo y
negativo con nitrato de plata, junto al resultado obtenido (en este caso positivo).

Tabla N1: resultados obtenidos con el reactivo de nitrato de plata en la determinacin de

sales.

Control Color Turbidez Formacin de Resultado

experimental precipitado
Se observa un Se observa un Se observa una Positivo.
cambio de color alto grado de cantidad
a blanco en la turbidez en la moderada de
Control positivo solucin acuosa solucin. precipitado en la
de NaCl al parte superior e
adicionar el inferior de la
reactivo. solucin.
Muestra Se observa un Se observa un Se observa una Positivo.
mayor cambio de grado similar de mayor cantidad
color a blanco en turbidez en la de precipitado en
la muestra muestra la superficie de la
respecto al respecto al solucin.
control positivo. control positivo.
Control negativo No se observa No se observa No se observa Negativo.
un mayor cambio turbidez en la precipitado en la
en el color del solucin. solucin.
contenido al
adicionar el
reactivo,
quedando
transparente.

5
En las tablas N2 y N3 se pueden observar las caractersticas cualitativas observadas en
las soluciones con reactivo de Benedict antes y despus del calentado, determinndose el
resultado concluyente despus de aplicar el bao termorregulado.

Tabla N2: caractersticas de las soluciones con reactivo de Benedict, en la determinacin

de monosacridos sin sometimiento al calor.

Control Formacin de
experimental Color Turbidez precipitado
Control positivo Se observa un No se observa No se observa
color turquesa, un alto grado de precipitado.
levemente azul. turbidez.
Muestra Se observa un No se observa No se observa
color turquesa, turbidez. precipitado.
levemente azul.
Control negativo Se observa un No se observa No se observa
color azul que un alto grado de precipitado.
tiende a turbidez.
turquesa.

6
Tabla N3: resultados obtenidos con el reactivo de Benedict en la determinacin de
monosacridos aplicando calor.

Control Formacin de
experimental Color Turbidez precipitado Resultado
Control positivo Se observa un Se observa un Se observa un Positivo.
cambio de color alto grado de precipitado
a caf oscuro en turbidez en la marrn oscuro
solucin. solucin. que tiende a
negro (ms
oscuro que el
color de la
solucin) en el
fondo del tuvo.
Muestra Se observa un Se observa un Se observa un Positivo.
color marrn mayor grado de precipitado
levemente ms turbidez marrn oscuro
oscuro que en la respecto al que tiende a rojo
solucin del control positivo. en el fondo del
control positivo. tuvo.
Control negativo Se observa el No se observa No se observa Negativo.
mismo color que turbidez. precipitado.
tena la solucin
antes de
someterla a calor
(azul/turquesa).

En la tabla N4 se pueden ver los datos cualitativos observados en la muestra de jugo de

papa y sus respectivos controles experimentales, al aplicar lugol de reactivo, con los
resultados correspondientes.

7
Tabla N4: resultados obtenidos con el reactivo lugol en la determinacin de glcidos.

Control Formacin de
experimental Color Turbidez precipitado Resultado
Control positivo Se observa un Se observa una No se observa Positivo.
color caf leve turbiedad en precipitado.
tendiente a rojo. la solucin.
Muestra Se observa un No se observa No se observa Negativo.
color que tiende turbidez en la precipitado.
a mbar, ms muestra.
claro que el color
de la solucin
correspondiente
al control
positivo.
Control negativo Se observa un No se observa No se observa Negativo.
color mbar, turbidez. precipitado.
correspondiente
al color del
reactivo lugol.

En la tabla N5 se puede observar los datos cualitativos anotados para cada control y su
respectiva muestra con protenas, utilizando reactivo de Bradford.

8
Tabla N5: resultados obtenidos con el reactivo de Bradford en la deteccin de protenas.

Control Formacin de
experimental Color Turbidez precipitado Resultado
Control positivo Se observa un No se observa No se observa Positivo.
color verde en la un alto grado de precipitado.
parte inferior del turbidez.
tubo, y un color
azul en la parte
superior del tubo,
la solucin
presenta
degrade en sus
tonalidades.
Muestra Se observa un No se observa No se observa Positivo.
color azul, ms un alto grado de precipitado.
homogneo que turbidez.
el observado en
la solucin del
control positivo.
Control negativo Se observa un No se observa No se observa Negativo.
color verde turbidez. precipitado.
azulado
homogneo, sin
degrade.

9
 Discusin

En el primer apartado, en donde se identifica la presencia de sales en el agua de mar, la

reaccin entre la plata y un anin fue positiva, al formar cloruro de plata. Esto se puede
comprobar dado que el nitrato de plata al entrar en contacto con agua pura no presenta
precipitacin, en el caso de que se aadiera AgNO3 a un medio con menor cantidad de
cloro, como es el agua potable (contiene hipoclorito de sodio para su potabilizacin) sera
ms difcil observar un precipitado a simple vista.

La deteccin de glcidos en la reaccin de sacarosa y reactivo Benedict fue posible gracias

a la aplicacin de calor, ya que de otra manera, no es posible observar un cambio de color
en un disacrido sin la capacidad de reducir (en este caso sacarosa).

Se evidencia que es la capacidad reductora del glcido lo que determina la reaccin, ya

que por ejemplo, la maltosa es un disacrido mantiene su capacidad reductora dado que
mantiene un carbono anomrico libre (hemiacetal reductor), por lo que al estar en contacto
con el reactivo de Benedict, su reaccin ser positiva e inmediatamente visible (sin la
necesidad de fraccionar el disacrido en monosacridos) [5].

Dado que el almidn no corresponde a un azcar reductor, al incorporar reactivo de

Benedict a la muestra de jugo de papa no se evidenciara un cambio de color claro debido
a la ausencia de oxidacin. La principal limitacin de esta reaccin, es el hecho de que el
almidn no solo no es un monosacrido, sino que adems est compuesto por uniones
polisacridos, por lo que para llevar a cabo la reaccin de manera correcta, es necesario el
uso de una enzima que logre degradar la macromolcula en cuestin.

El jugo de papa est compuesto por altas cantidades de almidn, el cual a la vez contiene
amilosa y amilopectina, al reaccionar el yodo del lugol y la amilosa se genera una unin que
se observa de color azul que tiende a negro, mientras que la amilopectina al formar hlices
de menor tamao, no se une por completo al yodo y se genera una interaccin que se
observa de color anaranjado, por lo tanto, la amilosa da el color caracterstico a la reaccin
[8].

Sin embargo, en este experimento no fue posible detectar mediante la reaccin del lugol y
del jugo de papa la presencia efectiva de almidn, se sugiere aumentar las cantidades de

10
reactivo y la utilizacin de una enzima o mtodo que facilite la degradacin parcial de la
macromolcula en polisacridos (amilosa y amilopectina).

En el apartado de protenas, fue posible observar claramente un cambio en el color de la

solucin de la muestra debido a la absorbancia de la protena, incluso ms que en el control
positivo, donde se evidenciaban tanto coeficiente de extincin como el colorante libre. Dado
que el reactivo de Bradford permite cuantificar protenas, la cantidad de protena que se
encuentre en la muestra ser determinante a la hora del color del que se torne la solucin,
puesto que las protenas poseen una absorbancia especfica, si se aadieran solo pptidos
a la muestra, el coeficiente de extincin no superara al colorante libre, por lo que no se
generara esta degradacin o suspensin de colores [7].

11
 Conclusiones

Gracias a la sesin experimental realizada, se logr comprender de manera emprica como

es la correcta aplicacin de un control experimental bsico, y como este puede ayudar en
gran medida a la determinacin de un resultado claro. Adems, fue posible aplicar de
manera eficaz conocimientos vistos en clases acerca de biomoleculas y sus caractersticas,
al observar como reaccionaban.

En cuanto al cumplimiento de los objetivos experimentales, en su mayora fue posible

determinar molculas presentes en las muestras de distinta clasificacin, y a pesar de que
una de las reacciones del apartado de los glcidos no arroj un resultado positivo, esto
sirvi para investigar e indagar en mayor medida las causas y las soluciones que se le
podran dar.

12
 Referencias

[1] Nelson, David L. Cox, Michael M.; Lehninger, Albert L. (2009). Principios de la
bioqumica. 5ta Ed. Ediciones Omega S.A. (Barcelona, ES). pp: 1-2

[2] At the Bench, a laboratory navigator. Update edition. Kathy Barkwer. (2005). pp: 73-75

[3] Nelson, David L. Cox, Michael M.; Lehninger, Albert L. (2009). Principios de la
bioqumica. 5ta Ed. Ediciones Omega S.A. (Barcelona, ES). pp: 11-13

[4] Nelson, David L. Cox, Michael M.; Lehninger, Albert L. (2009). Principios de la
bioqumica. 5ta Ed. Ediciones Omega S.A. (Barcelona, ES). pp: 235-242

[5] Nelson, David L. Cox, Michael M.; Lehninger, Albert L. (2009). Principios de la
bioqumica. 5ta Ed. Ediciones Omega S.A. (Barcelona, ES). pp: 242-243

[6] Nelson, David L. Cox, Michael M.; Lehninger, Albert L. (2009). Principios de la
bioqumica. 5ta Ed. Ediciones Omega S.A. (Barcelona, ES). pp: 88-101

[7] Fernndez R., Galvn C. (2013). Mtodos para la cuantificacin de protenas.

Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular (Campus Universitario de Rabanales).
pp: 1

[8] Morrison T. Boyd N. (1998). Qumica Orgnica. 5ta Ed. Addison Wesley Longman de
Mxico S.A. (Mxico). pp: 1332-1335

13
14