APOPTOSIS

Apoptosis
vs
Muerte celular programada
La apoptosis es una descripcin morfolgica de
clulas que mueren.

La muerte celular programada es un trmino usado

originalmente para describir a las clulas que mueren
en un tiempo predecible y tiene lugar durante el
desarrollo o remodelado tisular.

Dado que en la mayora de los casos la muerte

celular programada es por apoptosis, ambos trminos
son a veces, intercambiables.
 Ciclo Celular
M (mitosis)- G1 (fase de control)-S (sntesis de ADN)-G2 (fase de control)

Apoptosis
para impedir que una
clula daada ingrese a la
fase de sntesis y las
mutaciones no se
reproduzcan durante la
replicacin del ADN
Apoptosis
para impedir que las
clulas que no hayan
llegado a su madurez
entren en mitosis

Balance entre mitosis y apoptosis regulando la poblacin celular

 FUNCIONES DE LA APOPTOSIS

-1) Eliminacin. muerte celular vs. muerte

del organismo.(La muerte de una clula preserva
el buen funcionamiento del organismo)
-2) Desarrollo. Esculpir partes del cuerpo.
(En el desarrollo de los individuos son
fundamentales las reorganizaciones morfolgicas)
-3) Regulacin del sistema inmune.
Supervivencia de la mejor clula
-4) Homeostasis (nmero constante de
clulas)
1) ELIMINACION de tejidos daados o infectados
El inicio de la apoptosis puede estar generado por la misma clula, por
el tejido circundante o por una reaccin del sistema inmune.
Cuando una clula no puede realizar apoptosis (por mutacin o por
inicio de la apoptosis bloqueado) la clula daada se divide sin
restriccin y comienza la formacin de un TUMOR

No hay sobrevida (malformaciones)

KO en genes apoptticos / aumenta frecuencia de tumores/
no se detiene el crecimiento

Ejemplo: HPV virus papiloma humano (expresin del gen E6,

degradacin de P53 que es fundamental para la ruta apopttica)
 2) La apoptosis controlada por factores
extracelulares permite remodelar tejidos y rganos
durante el DESARROLLO
Pato. apoptosis inhibida el miembro derecho fue infectado con un
en el tejido interdigital. virus que expresa un receptor dominante
negativo de BMP, que inhibe la sealizacin
de BMP y la apoptosis entre los dgitos

expresin del mRNA

apoptotic para BMP4 (en azul)
zone

Pollo. apoptosis inducida interdigital

apoptotic
en el tejido interdigital zone

anterior posterior
apoptotic apoptotic
zone zone

apoptotic embriones de pollo

zone

Las protenas BMPs (Bone Morphogenetic Proteins) inducen apoptosis en el tejido interdigital de los
miembros de vertebrados. En patos, la apoptosis del tejido interdigital de los miembros es inhibida por
noggin, una protena secretada por clulas del mesnquima y que inhibe a BMP.

Gilbert, Dev. Biol. 6ta Ed.

 3) Regulacin del sistema inmune

La mayora de los linfocitos mueren durante el rearreglo

gentico (formacin del receptor antignico), durante la
seleccin negativa o en la periferia.

La apoptosis controla que los linfocitos sean altamente

eficientes y funcionales, pero NO reactivos contra lo propio.
Por medio de este control mantiene constante el nmero de
linfocitos.
 4) Homeostasis

Nmero constante de clulas: la relacin

entre mitosis y muerte celular se
encuentra en equilibrio.
Ruptura del equilibrio

Mayor divisin Divisin celular

que muerte enlentecida
celular

TUMORES PERDIDA
CELULAR

Ambos estados pueden ser fatales o dainos.

 -CANCER (resistencia a la terapia,
acumulacin celular)
DEFECTOS EN -ENFERMEDADES AUTOINMUNES
APOPTOSIS falla en eliminar linfocitos autoreactivos
(disminucin/ (lupus eritematoso, glomerulonefritis)
inhibicin)
- INFECCIONES VIRALES
PERSISTENTES (Herpesvirus,
Poxvirus)
 -DESORDENES
NEURODEGENERATIVOS
APOPTOSIS (Alzheimer, Parkinson)
DESREGULADA
(aumento) -SIDA (eliminacin de linfocitos T)

-ISQUEMIA (infarto de miocardio,

dao heptico)
 seales extracelulares o
intracelulares desencadenan
APOPTOSIS
(stress, falta de nutrientes, dao del DNA )

esto permite que el

organismo sobreviva
 Para que una clula entre en
apoptosis

Contexto molecular: seales intracelulares y

extracelulares determinadas. (seales
pro/antiapoptticas)

Las seales dependen del tipo celular

Muerte limpia: NO inflamatoria (ordenada,

prolija)
Existen dos formas de muerte celular que
son habituales en el organismo

NECROSIS y APOPTOSIS

Las caractersticas morfolgicas de ambas

permiten establecer diferencias
Necrosis: muerte celular que resulta de un proceso pasivo /
accidental (muerte por dao, injuria, traumatismos mecnicos,
temperaturas extremas)
Ruptura nuclear
Ruptura celular y liberacin de contenido intracelular.
Repuesta inflamatoria

Apoptosis: (muerte por suicidio)

Reduccin del volumen celular
Compactacin de las organelas
Condensacin de la cromatina
Formacin de cuerpos apoptticos
No se destruye la membrana celular, proceso silencioso.
No hay inflamacin
 Fenotipo Apopttico
1) Prdida de volumen celular

2) Condensacin nuclear

3) Fragmentacin del ADN

4) Flip-flop de fosfatidil serina.(evidencia con anexina)

5) Blebbing de membrana (desorganizacin del

citoesqueleto)

Alta regulacin (irreversible)

Rapidez en la ejecucin
 La apoptosis se reconoce por cambios morfolgicos y
moleculares caractersticos
Las clulas que entran en apoptosis se contraen y
fragmentan en vesculas o cuerpos apoptticos. Los clula normal
ncleos se condensan y el DNA se fragmenta
generando un patrn en escalera o ladder. Cambios
en la distribucin de fosfolpidos (ej. fosfatidil serina)
pueden detectarse con anexina fluorescente.
is
tos
ol

op
ntr

ap
co

clula en apoptosis

apoptosis

clula deprivada de factores clula en presencia de

de crecimiento. insulina.
Caractersticas morfolgicas de las clulas apoptticas
 La aparicin de
fosfatidil serina (PS)
en la clula
apopttica requiere
del Flip-Flop no
especfico mediado
por Ca ++
 Pelcula APOPTOSIS

Primer evento: liberacion de citocromo C de las mitocondrias

(verde).

Condensacin del volumen celular

Exposicin de fosfatidil serina en la membrana (rojo).

Formacion de burbujas membranosas con material celular:

Blebbing
(muerte celular programada)
 CASPASAS
Es el mecanismo molecular mas importante y mas
estudiado que controla la apoptosis

Complejo de cisteinil-aspartato proteasas

(caspasas) cistena en el sitio activo/
asprtico en sitio de clivaje

Provocan degradacin proteica hasta la formacin de cuerpos

apoptticos.
 CASPASAS

INICIADORAS EFECTORAS
o regulatorias

Actan sobre
endonucleasas.
Responsables de la
fragmentacin de DNA

La activacin de las caspasas (procaspasas

inactivas) se produce por diferentes vas. Parte
de ellas se autoprocesan.
 La apoptosis involucra la activacin en cascada de
proteasas intracelulares denominadas caspasas
Las caspasas son sintetizadas como precursores inactivos (procaspasas) que deben ser clivadas
para su activacin. Estmulos que disparan apoptosis usualmente producen la agregacin y
autoprocesamiento de caspasas inciadoras. Las caspasas iniciadoras activas posteriormente
clivan y activan una o varias caspasas efectoras.

activacin de procaspasa iniciadora

Substratos de caspasas son las laminas de la malla nuclear, protenas del citoesqueleto, etc.
 Ejecucin - Caspasas
Proteasas
Substrato: Cistenas en el sitio activo +
Asprtico en el sitio de clivaje

Especificidad similar a la propia secuencia:

autoregulacin
Funciones:

Activacin de DNAsas (CAD + ICAS) + inhibicin de maquinaria

de sntesis y reparacin de DNA

Degradacin de protenas de la envoltura nuclear y citoesqueleto

nuclear

Degradacin de Actina: prdida de puntos de contacto celular.

Regulacin de apoptosis: clivaje de BID, BCL-2, BCL-XL (pro-
apoptticas)

Procaspasas constitutivas

Determinan morfologa de apoptosis

 Ejecucin - Caspasas
ELIMINACION DE CASPASA (KO):

-/- -1, -2, -11: sin efecto sobre apoptosis

-/- 8: inhibe apoptosis por TNF, Fas
-/- 9: inhibe apoptosis por radiacin Gama y drogas citotxicas.

Efectoras
Caspasa 3: cliva ICAD (DNAsas)
Caspasa 6: cliva laminina
nuclear

Activacin:
Por autoclivaje o clivaje por
otras caspasas.
Apoptosis - Vas
Vas principales de apoptosis en mamferos

Hengarten, MO. Nature 2000

 PRINCIPALES VIAS DE APOPTOSIS

- VIA INTRINSECA o MITOCONDRIAL (deprivacin

de factores de crecimiento)

-VIA EXTRINSECA o RECEPTORES DE MUERTE

- p53 (dao del DNA activa p53, activacin de

apoptosis)

y en menor proporcin

-Via sin intervencin de caspasas: APOPTOSIS INDUCING

FACTOR (AIF)
AIF es una protena de membrana de mitocondria, al recibir
una seal se libera y migra al ncleo, se une al DNA y lo
destruye MUERTE CELULAR
Eventos mitocondriales - Va Intrnseca

(Caspasa9)
Activacin por receptores de muerte -
Va extrnseca
 Eventos mitocondriales - Va
Intrnseca

Las protenas de la familia BCL-2

regulan la apoptosis ejerciendo su
accin sobre la mitocondria.

La activacin de protenas pro-apoptticas de la familia Bcl-2

produce poros en la membrana externa de las mitocondrias
permitiendo la liberacin de protenas del espacio
intermembrana; entre ellas el CITOCROMO C
Liberacin de citocromo C: Rpido, coordinado,
irreversible, completo y cinticamente constante
(en 5 minutos se produce la liberacin completa)
Activacin
caspasas
efectoras
 Familia Bcl-2
Son ms de 20 miembros
Funcionan como dmeros

Se agrupan en 3 Familias

- Familia de protenas anti-apoptticas

- Familia de protenas pro-apoptticas de tipo

multidominio

- Familia de protenas pro-apoptticas de tipo BH3-only

Las protenas tipo multidominio pueden producir poros por si

solas, mientras que las de dominio BH3-only activan a estas
protenas. Las anti-apoptticas inhiben la formacin del poro.
Clula sana BCL-2 en la membrana de la
mitocondria, inhibe apoptosis.

Migracin de protenas
relacionadas(Bad/Bax) a
Dao interno en la clula la superficie de la
mitocondria en donde se
unen a BCL-2 bloqueando
su efecto protectivo.
 Regulacin de la apoptosis
Familia Bcl-2
Bcl-2 protege de apoptosis en muchos tipos celulares
(timocitos, neuronas, clulas hematopoyticas)
Bcl-xl: protege apoptosis en clulas precursoras de
neuronas.
Bcl-w: protege apoptosis en clulas precursoras de
esperma
A1: protege apoptosis en neutrfilos
Mcl-1: implantacin eficiente del cigoto.

Medida de accin: homo o El dominio BH3 sirve

heterodmeros (BH3) para la unin a otras
Formacin de canales inicos protenas
 Protenas que poseen slo dominio BH3

- Son miembros pro-apoptticos

-Interactan tanto con Bcl-2 y Bcl-XL (anti) como con Bax y Bak
(pro)

Ejemplos:
-Dao de DNA p53 induce expresin de Noxa y Puma (pro-
apoptticas, BH3 only), reprime expresin de Bcl-2, Bcl-XL (anti)

-Deprivacin de factores de crecimiento activa Bim y Bad (pro-

apoptticas BH3 only)

-Activacin de caspasa-8 proteolisis de Bid (pro-apoptticas)

El dao del DNA y otras alteraciones activan mecanismos que arrestan
el ciclo celular o promueven la apoptosis

radiacin
ionizante

dao
del DNA
sensors:
ATM y ATR
kinasas

degradacin en
activacin P proteosoma
de kinasas P
Chk1 y Chk2 Cdc25 Cdk1 G2/M

P
p53 p21CIP Cdk2 G1/S
estabilizacin
de p53
Cdk4/6 Rb E2F

protenas proapoptticas:
Bax, receptores de Fas, etc
 Regulacin de la apoptosis- Familia de Bcl-2
Control de la liberacin de citocromo c en mitocondria

Canales de Bcl-2 y Bcl-xl: pequeos, catinicos y cerrados

Canales de Bax: grandes, aninicos y abiertos

Regulacin:
Modificaciones post-traduccionales que determinan
conformaciones activas o inactivas.

-Dimerizacin y oligomerizacin (Bax, Bak)

-Translocacin (Bax, Bak, Bim)

- Fosforilacin (Bad, Bcl-2 y Bcl-XL)

Eventos mitocondriales - Va Intrnseca
Dao interno en la clula (ej. Oxidacin por radicales libres). Migracin de Bak/Bax,
bloquean el efecto protectivo de Bcl2 generando poros en la membrana. Deprivacin
de factores de crecimiento (IL-3)

Apaf1
dATP

(Caspasa9)
Activacin por receptores de muerte -
Va extrnseca

Receptores de muerte:
establecen contacto con el
espacio extracelular (reciben
seales pro/anti apoptticas)
Existen dos familias de receptores

Receptor tipo I: tiene un dominio

intracelular que gatilla la seal
de apoptosis (receptor Fas o TNF
receptor)

Receptor tipo II: no activa

caspasas. Seal de sobrevida
 Sealizacin del receptor Fas (tipoI)

FAAD: factor
asociado al dominio
de muerte

Cuando el receptor se une a su cofactor FasL, el dominio de muerte del

receptor se une a la protena adaptadora FADD recluta caspasa 8, que
inicia la activacin de caspasas generando fagocitosis de la clula.
 La activacin de procaspasas tambin puede ocurrir por
estimulacin de receptores de superficie proapoptticos

Receptores proapoptticos (TNFR1, FAS-CD95, TRAIL, etc) pertenecen a la familia del

factor necrtico de tumores o tumor necrosis factor (TNF). Al unirse se homodimeriza el
receptor y recluta caspasa 8.
Los factores de crecimiento y la matriz extracelular inhiben la
apoptosis
mediada por citocromo C de mitocondrias

receptor integrinas Factor trfico ECM NGF

(nerve growth factor )
membrana

PI-3K 14-3-3
Akt Bax
Bad P PI-3K
Bcl-2 mitocondria Bcl-2 Cito c

P Akt
Bax
P Bad
Cito c APAF-1 14-3-3
caspasas
caspasas

Receptor tipo II: no activa caspasas sino gatilla seal de sobrevida

La va mitocondrial (intrnseca) puede conectarse con
la va de receptores de muerte (extrnseca)

Una vez que se activa la caspasa-8 por los

receptores de muerte, esta caspasa activa a
la protena Bid (tBID) provocando la
apertura de poros mitocondriales y de esta
manera la liberacin de citocromo C y
posterior activacin de la caspasa-9
CRUCE DE VIAS
 La deficiencia de sealizacin inducida por factores de crecimiento
provoca la apoptosis en varios tipos celulares
En ratones knockout para el gen del NGF o su receptor TrkA, se observa la ausencia
de las neuronas sensoriales que transmiten sensaciones de dolor.

Seal de
supervivencia
CONTROL O "CHECKPOINTS"
EN EL CICLO CELULAR

sensor mediador efector

 Mecanismos de control o "checkpoints" aseguran la correcta duplicacin
del DNA, su integridad y distribucin a las clulas hijas

ATM: Ataxia Telangiectasia Mutated

ATR: ATM-Rad3-Related
AT
Chk1/2: Chekpoint 1/2

(fosfatasa)

ATM y ATR son kinasas relacionadas a

PI3K; ATM sensa rupturas de la doble
hlice, ATR sensa alteraciones que
generan cadenas simples (ej. horquillas
de replicacin detenidas). Chk1 y 2 son
kinasas de Ser/Trh substratos de
ATM/ATR.
 La protena p53 es un efector clave de la respuesta al
dao del DNA (damage checkpoint)

ubiquitinacin

degradacin de
p53 en proteosoma

En condiciones normales, p53 es ubiquitinado

por la ubiquitina ligasa Mdm2 y degradado en
el proteosoma. El dao del DNA activa kinasas
que fosforilan a p53 y provocan su disociacin
de Mdm2. De esta manera, p53 se acumula y
ejerce su rol activando la transcripcin de CKIs.
 El DNA no replicado activa un mecanismo de control
(DNA replication checkpoint) que inactiva Cdc25

ATR acta como sensor del DNA no replicado, y se activa al asociarse al DNA simple cadena de horquillas de replicacin
arrestadas. ATR fosforila y activa la kinasa Chk1, la cual a su vez fosforila e inactiva la fosfatasa de Cdks Cdc25. La cafena
inhibe este mecanismo de control. La incubacin de clulas con hidroxiurea, un inhibidor de la sntesis de deoxinucletidos,
activa el mecanismo de control y provoca la detencin del ciclo en la fase S. Clulas incubadas con hidroxiurea + cafena no
se detienen en la fase S y experimentan errores fatales en la distribucin de los cromosomas.

ATR Chk1 Cdc25 CDK1-ciclA/B

En metafase, cinetocoros libres activan inhibidores del cofactor
de APC, Cdc20 (metaphase checkpoint)

microtbulos

polo polo

En los cinetocoros libres se asocian y activan

sensors protenas como Mad y Bub, que bloquean
Bub, Mad cinetocoro al cofactor Cdc20. De este modo, Cdc20 no
libre esta disponible para activar APC. La
ocupacin del ltimo cinetocoro libera
Cdc20 que se une y activa APC. APC-Cdc20
mediador Cdc20 ubiquitina el inhibidor de la anafase securina.

efector APC

MAD: Mitotic Arrest Defficient

BUB: Budding Uninhibited by Benzimidazole
 La disponibilidad de Cdc20 permite la activacin de APC
y la degradacin de las cohesinas

todos los
cinetocoro cinetocoros
libre unidos a Mts

Mad2
libre

degradacion
de cohesinas