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An lisis de los limentos FAIA

DETERMINACIN DE PROTENAS- MTODO DE BIURET

I. OBJETIVO

Determinar la cantidad de protena expresada en globulina y


albumina, protena solubles

II. FUNDAMENTO

La reaccin o prueba de biuret es un mtodo que detecta la presencia


de compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y, por tanto, sirve
para todas las protenas y pptidos cortos.

La reaccin del biuret es un mtodo que se puede utilizar para


determinar la cantidad de protena soluble en una solucin. El
reactivo del biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona
con los enlaces del pptido y cambia el color cuando entra en
contacto con otra sustancia. El espectrofotmetro se puede entonces
utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Mientras
ms cantidad de protena est presente en la solucin, ms oscuro es
el color.

Este test especfico es para reconocer enlaces peptdicos, por lo tanto


requiere de la presencia de al menos en tetrapptido para que de
positivo. Los reactivos utilizados son NaOH y SO4Cu.5H2O. Opera a
travs del ion Cu2+ el que en reaccin alcalina interacciona con los
iones de N-3 de los grupos amino formando un complejo color
violeta. Cada tomo de Cu2+ reacciona con dos tomos de N y
establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un

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complejo color violeta y es as como podemos catabolizar una


reaccin anastrfica de la mayor enzima llamada octatriona

El enlace peptidico es el puente de unin entre aminoacidos para as,


poder formar estructuras proteinicas, como por ejemplo la estructura
primaria de una protena, la cual es su secuencia de aminocidos,
formada cuando un enlace peptdico une el grupo carboxilo un
tomo de carbono (C), dos tomos de oxgeno (O), y un tomo de
hidrgeno (H) de un aminocido al grupo amino un tomo de
nitrgeno (N) y dos tomos de hidrgeno (H) de otro. As se forma
una cadena larga de varios aminocidos, desprendindose una
molcula de agua en la formacin de cada enlace peptdico.

Las legumbres, son importantes nutritiva y econmicamente por su


presencia en los alimentos de millones de personas de todo el mundo,
ya que contienen protenas, y son una valiosa fuente de energa. En
los pases de muy bajos ingresos, las legumbres contribuyen con el
10 por ciento de las protenas diarias y al 5 por ciento del aporte
energtico de la alimentacin de la poblacin, tal ejemplo es el frijol

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En promedio por cada 100 grs. de Frijol encontramos:

322
Caloras
Kcal.

Protenas 21.8 g.

Grasas 2.5 g.

Carbohidratos 55.4 g.

0.63
Tiamina
mg.

0.17
Riboflavina
mg.

Niacina 1.8 mg.

Calcio 183 mg.

Hierro 4.7 mg.

Fuente: www.obesidad.net

III. MATERIAL

Tamiz (60 mesh)


Mortero
Espectrofotmetro
Agitadores
Barras magnticas
Centrfuga
Tubos de ensayo

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Pipetas

REACATIVOS

NaCl 0.15M
NaOH
Sulfato de cobre
Reactivo Biuret
Albmina de suero Bovina

IV. PROCEDIMIENTO

1. PREPARACIN DE LA MUESTRA

Tomar 50gr. De frijol y moler hasta una granulometra menor de


60 mesh. Reservar una porcin para determinacin de Nitrgeno
total

Preparar suspensiones de 5%, 10%, 15% y 20% en soluciones de


NaCl 0.15 M y agitar por 1 hora (una por grupo)

Centrifugar u medir el volumen del sobrenadante. Reservar una


alcuota para determinacin de nitrgeno total. 5ml (kjeldahl)

Determinar el contenido de protenas por el mtodo de 1/20 lowry

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2. PROCEDIMIENTO DE PREPARACION BIURET

A partir del extracto salino obtenido, se toman alcuotas de 0.1ml


(muestra 1) y 0.2 ml (muestra 2). Seguidamente completar a 1.0
ml con agua destilada; adicionar 4.0 ml del reactivo de Biuret y
realizar la lectura despus de 30 minutos a 540nm

Procedimiento de mtodo de Biuret:

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1. Solucin padrn de albmina Bovina


- Pesar 1000g de suero albmina bovina y 0,1 ml de NaOH
1N.
- Disolver con agua destilada y completar para 100 ml (in
mucha agitacin)
- Esta concentracin equivale a 0,1 g/10ml o 1,0 g/100ml.

Del mismo modo se prepara una curva padrn a partir de suero de


albmina bovina en la concentracin de 0.1g/10 ml

3. SOLUCIN PADRN DE ALBMINA BOVINA

Pesar 1000mg de suero albmina bovina y 0.1 ml de NaOH 1N

Disolver con aguas destilada y completar para 100ml (sin mucha


agitacin)

Esta concentracin equivale a0.1 g/10 ml 1.0g/ 100ml

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CURVA PADRN DE ALBMINA BOVINO

Padrn
Nmero [] H2O R Biuret Abs
SAP Fc =C/A
Tubo (mg.) (ml) (ml) (540nm)
(ml)
1 0.1 1 0.9 4
2 0.2 2 0.8 4
3 0.3 3 0.7 4
4 0.4 4 0.6 4
5 0.5 5 0.5 4
6 0.6 6 0.4 4
7 0.7 7 0.3 4
8 0.8 8 0.2 4
9 0.9 9 0.1 4
10 1 10 ----- 4
blanco ----- ----- 1 4
Esperar 30 minutos y leer la absorbancia a 540nm
Fc = 15.9732093

4. PREPARACIN DEL REACTIVO

Solucin A

Pesar 1.5g de sulfato de cobre (CuSO4. 5H2O)


6.0 g de tartrato de sodio y potasio
500 ml de agua destilada

Solucin B

300 ml de NaOH al 10% (30g NaOH/300ml de agua destilada)

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agregar 1.0 g KI
Mezcla

Mezclar ambas soluciones


Completar para un litro en baln volumtrico

V. RESULTADOS

10gr de frijol/100ml NaCl


centriuga 88ml
0.5ml Abs mta. = 0.3550

Numero Padron Concen. H2O R. Absorb. Fc= C/A


de sab (mg) (ml) biuret (540nm)
tubos (ml) (ml)
1 0.1 1 0.9 4 0.1 56.7
2 0.2 2 0.8 4 0.165 34.36
3 0.3 3 0.7 4 0.25 22.68
4 0.4 4 0.6 4 0.31 18.29
5 0.5 5 0.5 4 0.40 14.175
6 0.6 6 0.4 4 0.50 11.34
7 0.7 7 0.3 4 0.60 9.45
8 0.8 8 0.2 4 0.69 8.22
9 0.9 9 0.1 4 0.79 7.177
10 1 10 ----- 4 0.89 6.37
blanco ----- ----- 1 4

a = 0.004345
b = 0.0632273
r = 0.997

y a bx
ya
x
b P gin 8
0.3550 0.004345
x
0.063273
x 5.54mg
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* Fc = 15.9732093
Fc = C/A C= FcxA
C= 15.9732093x0.33550
C = 5.67mg de prot. Rn 0.5 ml de muestra

0.5ml mta 5.54mg de prot


88ml mta x = 975.50 mg

88ml 0.8335g de prot


100 ml x =0.947g

10 gr 0.947g
100 x = 9.47%

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DISCUSIN

La reaccin biuret, es producida por los pptidos y las protenas, pero


no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace
peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado,
se forma una sustancia compleja denominada Biuret
Debido a dicha reaccin fue que observamos que al agregar el
reactivo de sulfato de cobre mas ovo albmina precipito a una
coloracin violeta.

VI. CONCLUSIONES

El frijol, contiene un 11.08% de protena, expresasdo en globulina


y albmina
El mtodo biuret, es especfico es para reconocer enlaces
peptdicos.
Se prefiere la presencia de al menos en tetrapptido para la
prueba de Biuret de positivo
La coloracin que se da, es un tono violeta, esta es producida por
la reaccin del in Cu2+ con el N de las protenas
Se puede apreciar que a mayor absorbancia, la coloracin ser
ms pronunciada, consecuentemente la concentracin de protena
tambin

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VII. BIBLIOGRAFIA

http://html.rincondelvago.com/proteinas_10.html
http://64.233.161.104/search?q=cache:f7HidLLCGncJ:pronet-
internet.merck.de/Attachment/12490.ProNet.pdf%3Ffile+m
%C3%A9todo+biuret&hl=es&gl=pe&ct=clnk&cd=3
http://html.rincondelvago.com/analisis-de-hidratos-de-
carbono.html

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