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BIOSENSORES Y BIOELECTRONICA

Deteccin de enfermedades fngicas en plantas: Ensayos tradicionales, nuevos diagnsticos


Tcnicas y biosensores
Un Centro de Biotecnologa, Siksha O Anusandhan Universidad, Kalinga Nagar, Ghatikia,
Bhubaneswar, Odisha, India
B Imgenex India Pvt. Ltd, E-5 Infocity, Bhubaneswar, Odisha, India

INFORMACIN DEL ARTCULO


Palabras clave:
Enfermedades de las plantas
Patgenos fngicos
Deteccin rpida
Biosensores

ABSTRACTO
Las enfermedades fngicas en plantas comercialmente importantes da como resultado una
reduccin significativa tanto en calidad como en rendimiento,
A menudo conduciendo a la prdida de una planta entera. Con el fin de minimizar las
prdidas, es esencial detectar e identificar
Los patgenos en una etapa temprana. La deteccin temprana y la identificacin exacta de
patgenos pueden controlar la propagacin
De la infeccin. El presente artculo ofrece una visin general de los mtodos
convencionales, las tendencias actuales
Y avances en la deteccin de patgenos fngicos con un nfasis en biosensores. Las
tcnicas tradicionales son el "oro
Estndar "en la deteccin de hongos que se basa en los sntomas, la cultura, la observacin
morfolgica y
Identificaciones bioqumicas. En los ltimos tiempos, con el avance de la biotecnologa,
molecular e inmunolgico
Han revolucionado la deteccin de enfermedades fngicas. Pero el inconveniente radica en
el hecho de que estos
Los mtodos requieren equipos especficos y costosos. Por lo tanto, existe una necesidad
urgente de un tratamiento rpido, fiable,
Rentables y fciles de usar para la deteccin de patgenos fngicos. Los biosensores se
convertiran en
Prometedora y atractiva, pero todava tienen que someterse a algunas modificaciones,
mejoras
Y la validacin adecuada para el uso en el campo.
INTRODUCCION:
Los hongos son el grupo ms diverso de patgenos de las plantas que
70-80% de las enfermedades de las plantas (Persley, 1993). Ms de 20.000 especies de
hongos
Son de naturaleza parasitaria y pueden causar enfermedades en cultivos y plantas
(USEPA, 2005). Los hongos pueden sobrevivir en estado latente en vida o muertos
Tejidos vegetales hasta que las condiciones sean favorables para su proliferacin.
Pueden penetrar en el tejido vegetal o crecer en la superficie. El hongo
Enfermedad en las plantas se destaca en la Fig. 1. Esporas fngicas fcilmente
Por el viento, el agua, el suelo y los animales, alcanzando
Campos vecinos y daar toda la cosecha. Mientras muchos
Los hongos juegan un papel til en el crecimiento de las plantas, especialmente mediante la
formacin de micorrizas
Asociaciones con las races de la planta husped, otras causan
Enfermedades de las plantas como la antracnosis, ronchas, manchas de las hojas,
marchitez, rizos,
Sarna, holln, agallas, chancros, pudricin de las races, amortiguacin,
Moho
Las enfermedades fngicas pueden, a veces, comprometer gravemente la alimentacin
Seguridad. Por ejemplo, el tizn tardo de la papa, causado por Phytophthora
Los infestans en el mid-1840s llegaron a ser histricamente significativo en Europa.
En Irlanda, casi un milln de personas murieron de hambre y ms de un milln
Intentaron migrar a otros lugares (Fry y Goodwin, 1997). All tienen
Otras cuentas de desastres como la gran hambruna de Bengala (1943)
En la India (Padmanabhan, 1973) y la destruccin de la hoja de maz del sur
Epidemia (1970-1971) en USA (Ullstrup, 1972). En la India, alrededor de 2
Millones de personas murieron debido a la alta dependencia de la
Poblacin en un solo cultivo, arroz que fue atacado por el hongo
Cochliobolus miyabeanus. En Estados Unidos, la cosecha de maz
Destruido por otro hongo del mismo gnero, Cochliobolus
Heterostrophus, afectando as gravemente en la economa agrcola.
Los ejemplos anteriores demuestran que en algunas partes del mundo
Gran parte de la poblacin depende de un solo cultivo o de una
Pocos cultivos, entonces estn en riesgo, ya que una cosecha fracasada debido a
Enfermedad puede llevarlos a la inanicin.
Varios estudios han demostrado el efecto devastador de estos
Los hongos tienen en el rendimiento de los cultivos. El arroz, un alimento bsico de la mitad
del mundo
Poblacin es atacada por Pyricularia oryzae causando explosin de arroz y
Llevando a una prdida del 10-30% de la cosecha cada ao (Talbot, 2003). En
Bhutn (1995), ms de 700 ha de arroz de diferentes genotipos fueron
Afectado, resultando en prdidas de 1090 t (Thinlay et al., 2000). Putrefaccin
Enfermedad causada por Phytophora palmivora en el ao 1956 destruido
Alrededor del 50% de los jardines de pimienta en Kuching, Malasia,
Prdida de 7000 t de pimienta (Purseglove et al., 1981).

Por otra parte, una vez que un hongo se introduce en la planta que persiste por un
Largo tiempo. El control de enfermedades se convierte en una tarea difcil debido al fungicida
Resistencia. El tizn de la castaa fue introducido accidentalmente en Nueva York
Ciudad en el ao 1904, marcando el inicio de un desastre ecolgico en
Los bosques del este de Norteamrica (Milgroom y Cortesi, 2004).
Esta devastadora epidemia fue causada por Cryphonectria parasitica en
Castaos que fue introducido en Amrica de China. los
Los rboles chinos eran resistentes al tizn, pero los castaos americanos
No eran. En menos de 40 aos, 30 millones de acres de castaos tuvieron
Muri. El tizn de la castaa sigue siendo un problema en el
Estados miembros. Del mismo modo, Plasmopara viticola, un hongo nativo del Norte
Amrica se introdujo accidentalmente en Europa al final de la
Siglo XIX, donde caus el mildiu y el hongo y
Devast la industria del vino hasta que se encontr la mezcla de Burdeos
(Gessler et al., 2011).
La atencin reciente a los problemas de seguridad alimentaria
Intensa motivacin en el rea de deteccin de patgenos fngicos de plantas.
Por lo tanto, se ha realizado un extenso estudio bibliogrfico
Con el objetivo de presentar una visin general de la deteccin de patgenos fngicos en las
plantas
En los ltimos 15 aos (Fig. 2). Deteccin de patgenos utilizando mtodos convencionales
Las tcnicas son mucho tiempo, costosas y con frecuencia requieren
Capacitadores capacitados para las etapas de pretratamiento de la muestra. Los biosensores
ofrecen
Ventajas sobre los mtodos analticos actuales ofreciendo
Caractersticas como sensibilidad, capacidad de deteccin rpida, rentabilidad y
Portabilidad.
En esta revisin, hemos discutido las principales enfermedades
Plantas, brotes causados por patgenos fngicos en plantas y
Tcnicas de deteccin de hongos. Este estudio describe dos enfoques para
Detectar enfermedades fngicas de las plantas. El primer enfoque consiste en
Mtodos, la aplicacin de tcnicas espectroscpicas y de imgenes y
La aplicacin de metabolitos orgnicos voltiles como posibles biomarcadores para
Deteccin de enfermedades, incluyendo sus fortalezas y debilidades. Los
El segundo enfoque describe el progreso actual en los biosensores
El campo de la deteccin de patgenos fngicos. Este documento revisa
Recientes avances tecnolgicos en deteccin, identificacin y cuantificacin
De patgenos fngicos, con nfasis en biosensores.

Higo. 2. Nmero de trabajos publicados durante el perodo 2000-2014. Estos datos fueron
Obtenido mediante la bsqueda de documentos utilizando palabras clave "deteccin de
patgenos fngicos en las plantas" en
Base de datos Scopus, Elsevier.
2. Diagnstico de enfermedades fngicas en plantas
La capacidad de detectar, identificar y cuantificar con precisin los patgenos de las
plantas
Es el hito de la patologa de las plantas. La identificacin fiable de
Los organismos responsables de una enfermedad vegetal es un prerrequisito esencial
A la implementacin de estrategias de manejo de enfermedades.
Por lo tanto, en el diagnstico de las infecciones fngicas de plantas, es
Llevar a cabo un correcto proceso de deteccin de la enfermedad. Debido a que muchos
hongos
Patgenos producen sntomas similares y por lo tanto es importante
Ser capaz de distinguir entre diferentes especies.
2.1. Mtodos convencionales para la deteccin de patgenos fngicos en las plantas
Mtodos convencionales para la deteccin e identificacin de hongos
Patgeno causante de enfermedades en las plantas, se basan principalmente en la
morfologa,
Microbiolgicas y bioqumicas. Mtodos convencionales
Utilizados para la deteccin de patgenos fngicos estn representados
Higo. 3, que incluye la identificacin de patgenos fngicos mediante la interpretacin
Los sntomas visuales, los mtodos de cultivo y plaqueado y la isoenzima

anlisis.
2.1.1. Mtodo de examen visual
El mtodo tradicional para patgenos fngicos de plantas implica la interpretacin
Los sntomas visuales de la enfermedad (por ejemplo, manchas, niebla, agallas, tumores,
Wilts, putrefaccin o amortiguacin), seguido por el aislamiento de patgenos y
Tcnicas de microscopa. El examen visual se ha vuelto ms preciso,
Fiable y ha sido objeto de intensas investigaciones e investigaciones
Debido a la disponibilidad de pautas y estndares detallados
Necesarios para la evaluacin (Nutter y Guan, 2001). Sin embargo,
Examen est siempre sujeto a la experiencia de un individuo y, por
Los resultados no siempre son concluyentes, es decir, pueden verse afectados por
Temporal. Esta variacin provoca una variabilidad
Cambios en la receptibilidad (Nutter y Guan, 2001, Nutter et al., 1993).
Adems, el procedimiento de identificacin visual necesita experiencia microbilogo,
Lo que hace que esta tcnica sea poco prctica para el diagnstico in situ de
Patgenos fngicos de las plantas.
2.1.2. Mtodos de cultivo y de recubrimiento
El mtodo de cultivo implica el aislamiento de hongos
Medios artificiales creados sobre diversos medios artificiales bajo una
Condiciones seguidas por tcnicas de microscopa. Observacin microscpica
Implica el diagnstico de patgeno basado en su morfologa
Caractersticas tales como la morfologa de esporas, patrones de esporulacin,
Y caractersticas de las estructuras esporuladas que producen
Y esporas sexuales, que se utilizan para la clasificacin taxonmica de
Hongos (Narayanasamy, 2011). Se han utilizado mtodos de cultivo para
Deteccin de una amplia gama de patgenos fngicos. Ejemplos incluyen
Coniophora putana (Olfat, 2011), Fusarium spp. (Lievens et al.,
2007), Rhizoctonia solani (Bohlooli et al., 2004), Phytophthora capsici
(Larkin et al., 1995), Phialocephala dimorphospora (Richard y
Fortin, 1973).
Aunque este mtodo es ms barato y sencillo, la precisin y
La fiabilidad del mtodo depende de la experiencia y habilidad del
Persona que hace el diagnstico (McCartney et al., 2003). Adems, este
Mtodo es lento, ya que suele tardar pocos das o semanas en
Confirmacin y por lo tanto no es adecuado para el diagnstico rpido de patgenos. En
A pesar de las desventajas, los mtodos de cultivo se siguen utilizando en combinacin
Con otros mtodos de deteccin de patgenos como un anticuerpo o
Bioqumico para obtener mejores resultados.
2.1.3. Anlisis de isoenzimas
El anlisis de isozimas se utiliza para detectar, diferenciar e identificar
Morfolgicamente similares o especies estrechamente relacionadas. Adems, la isoenzima
Anlisis constituye una herramienta bien establecida y eficaz para revelar
Variabilidad gentica en poblaciones de hongos (Micales et al., 1986). los
El polimorfismo de la protena refleja el fondo gentico de los microorganismos
(Shaw, 1965). La expresin de alelos que codifican diferentes
Isoenzimas ofrece un medio relativamente neutro de determinar la
Variacin. Se considera que el anlisis de isozimas es relativamente preciso,
Econmica y rpida para la deteccin de grandes poblaciones y
Identificando especies (Guarro et al., 1999).
A pesar de estas ventajas, la aplicacin de tcnicas de isoenzimas
En estudios de hongos fitopatgenos ha sido limitada hasta ahora. Los
Principal razn del uso limitado de isoenzimas podra ser el bajo nivel de
Polimorfismo encontrado en diversos taxones de hongos examinados (Burdon, 1993).
Este enfoque se aplic con xito en la identificacin de Fusarium
Spp. (Laday y Szecsi, 2002), Pythium spp. (Takenaka y Kawasaki,
1994), Phytophthora spp. (Oudemans y Coffey, 1991), Rhizoctonia
Solani (Liu et al., 1990), Fusarium solani (Skovgaard y Rosendahl,
1988), Fusarium oxysporum (Bosland y Williams, 1987),
Phytophthora infestans (Tooley et al., 1985).
2.2. Mtodos actuales utilizados para la deteccin de patgenos fngicos en las plantas
Los mtodos tradicionales no eran lo suficientemente sensibles y
Se desarrollaron mtodos para detectar e identificar patgenos de las plantas
durante la ultima decada. Mtodos actuales para la deteccin de hongos
Las enfermedades se clasificaron ampliamente en mtodos directos e indirectos,
Que se resumen en la Fig. 4.
2.2.1. Mtodos directos de deteccin
Las tcnicas de deteccin directa se clasifican en dos subgrupos principales
Es decir, mtodos basados en inmunologa, usando anticuerpos o anticuerpos
Alternativas y mtodos basados en PCR utilizando sondas de cido nucleico.
Adems, las tcnicas serolgicas y basadas en PCR superaron
Deficiencias de los ensayos convencionales. Estos mtodos
Caracterizacin precisa y diferenciacin de hongos fitopatgenos
Y son mucho ms rpidos que las tcnicas convencionales (Sankaran et al.,
2010; Schena et al., 2004). Adems, estas tcnicas tambin pueden ser
Aplicado sobre microorganismos no cultivables, ya que el organismo no
Necesitan aislarse para su identificacin (Lievens et al., 2005).
2.2.1.1. Mtodos basados en inmunologa. Mtodos basados en anticuerpos antignicos
Los enlaces son ampliamente utilizados para la deteccin de hongos de plantas
patgeno. El requisito bsico para llevar a cabo
Pruebas inmunolgicas para la identificacin de patgenos fngicos
Disponibilidad de antisueros adecuados. Antisueros incluyendo
Anticuerpos de cadena pesada, anticuerpos policlonales (PAbs), anticuerpos monoclonales
Anticuerpos (MAbs) y anticuerpos recombinantes mostrados en fagos
Los niveles de sensibilidad requeridos y los niveles de
Especificidad de las reacciones inmunolgicas. El sistema inmunolgico
Mtodos de deteccin no son muy especficos y sensibles en comparacin
A los mtodos de deteccin basados en cidos nucleicos, pero estos son ms rpidos, ms
Robusto, simple de realizar y rentable.
Ejemplos de tcnicas inmunolgicas incluyen inmunodifusin
(Charudattan y DeVay, 1981, Adams y Butler, 1979, Remad
Y Meyer, 1969), ensayo de inmunoabsorcin enzimtica (ELISA)
(Meyer y Spotts, 2000, Thornton et al., 1999, Olsson y Heiberg,
1997; Beckman et al., 1994; Brill et al., 1994; Holtz et al., 1994;
Times et al., 1993; Lyons y White, 1992; Sudarn et al., 1991;
Harrison et al., 1990; Musgrave, 1984), ensayo radioinmunosorbente
(RISA) (Sharon et al., 1993, Savage y Sall, 1981), inmunoensayo de tira reactiva
(Pettitt et al., 2002, Cahill y Hardham, 1994, Dewey et al.,
1990, 1989), ensayo de inmunodelacin de puntos (DIBA) (Kandan et al., 2010;
Hiremath y Naik, 2004; Hahn y Werres, 1997; Sanders et al,
1992), inmunoensayo de transferencia de tejido (TBIA) (Gabler et al., 2004, Gwinn
Et al., 1991), anlisis de transferencia Western (Ray et al., 2016, Olal et al., 2015;
Biazon et al., 2006; Ferraris et al., 2004; Avila et al., 1995), serolgicamente
Microscopa electrnica especfica (SSEM) / inmunoabsorbente Electrn
Microscopa (Green et al., 1992, Lange et al., 1989, Day et al., 1986;
Hardham et al., 1986; Svircev et al., 1986) y citometra de flujo (Andolfi

.
Higo. 4. Mtodos actuales de deteccin de patgenos fngicos

Et al., 2009; Hardham y Suzaki, 1990).


A pesar de su tiempo de ensayo mucho menos comparado con la cultura tradicional
Tcnicas, pocos problemas que surgen con los mtodos basados en inmunoensayos
Son la baja sensibilidad de los ensayos, la baja afinidad del anticuerpo
Patgeno que se est midiendo y posible interferencia de contaminantes
(Meng y Doyle, 2002). Mtodos basados en inmunologa encontrados
Junto con mtodos basados en PCR como PCR-ELISA (Cullen et al., 2005;
Bailey et al., 2002; Somai et al., 2002; Grimm y Geisen, 1998) para
Confirmacin de patgenos fngicos.
2.2.1.2. Mtodos de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Cadena de polimerasa
Reaccin (PCR) se ha utilizado durante mucho tiempo en los patgenos fngicos de plantas
y
Diagnstico debido a su alta precisin y sensibilidad. La PCR es relativamente
Rpido que permite detectar cidos nucleicos diana especficos, ofreciendo
Una alternativa a los mtodos convencionales microbiolgicos y serolgicos
En diagnstico fngico. Sin embargo, los sistemas convencionales de PCR de bancada
No son adecuados para operaciones porttiles debido al requisito de gel
Electroforesis en un laboratorio para cuantificar y detectar la
Amplificado. Adems, la necesidad de preparacin de muestras,
Normalizacin y suministro de energa hace que estas pruebas sean inadecuadas para
operacin. Adems, estas pruebas son costosas de realizar,
Maquinaria sofisticada, reactivos costosos y personal calificado

Se han desarrollado varias variantes de PCR para mejorar la


Especificidad y sensibilidad de deteccin, as como para cuantificar
Patgenos en las plantas. Estos incluyen la transcripcin inversa
Reaccin en cadena de la polimerasa (RT-PCR) (Kozlakidis et al., 2007; Guo
Et al., 2005; McMaugh y Lyon, 2003), anidados PCR (Qi et al., 2009;
Edwards et al., 2007; Ma et al., 2003; Grote et al., 2002), multiplex
PCR en tiempo real (Atallah et al., 2007, Guglielmo et al., 2007, Schena
Et al., 2006; Ct et al., 2004; Bluhm et al., 2004), cuantitativos en tiempo real
PCR (Justesen et al., 2008, Chilvers et al., 2007, Gayoso et al.,
2007; Hogg et al., 2007; Dyer et al., 2006; Leisova et al., 2006; Sarlin
Et al., 2006; Ward et al., 2004; Cullen et al., 2002), PCR co-operativa
(Co-PCR) (Martos et al., 2009), Bio-PCR (Mbofung y Pryor, 2010;
Lees et al., 2002; Phan et al., 2002; Pryor y Gilbertson, 2001),
Hibridacin por captura magntica (MCH) -PCR (Langrell y Barbara,
2001), hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) (Akamatsu et al.,
1999; Li et al., 1996), amplificacin isotrmica mediada por bucle (LAMP)
(Su et al., 2016, Ghosh et al., 2015, Lu et al., 2015, Duan et al., 2014;
Dai et al., 2012; Abd-Elsalam et al., 2011; Tomlinson et al., 2010),
Hibridacin de matriz de ADN / hibridacin de hibridacin de punto inversa (RDBH) (Chen
Et al., 2009; Robideau et al., 2008; Zhang et al., 2008, 2007; Le Floch
Et al., 2007; Tambong et al., 2006; Lvesque et al., 1998) y nucleicos
Amplificacin basada en la secuencia cida (NASBA) (Widjojoatmodjo et al.,
1999).
Higo. 4. Mtodos actuales de deteccin de patgenos fngicos.
M. Ray et al. Biosensores y bioelectrnica 87 (2017) 708-723
711
Adquisicin de imgen
Las imgenes de hojas se capturan
utilizando una cmara digital
Pre-procesamiento de imgenes
Las imgenes son pre-procesadas para
suprimir distorsiones indeseadas,
Mejora algunas caractersticas de la
imagen y clip de la regin de la imagen
interesados
Segmentacin de imagen
Particin de la imagen en grupos con
caractersticas similares para
Representacin significativa y anlisis
ms fcil
Extraccin de caractersticas
Caractersticas de imagen como color,
forma y textura
Clasificacin de las enfermedades de las
plantas
Las imgenes se clasifican mediante
redes neuronales
Diagnstico de la enfermedad

Higo. 5. Pasos para la deteccin de enfermedades de las plantas mediante una tcnica de
obtencin de imgenes.
2.2.2. Mtodos de deteccin indirecta
Adems de los mtodos directos discutidos anteriormente, los mtodos indirectos
Basados en el perfilamiento del estrs de la planta, el perfilado de metabolitos gaseosos y
Se han utilizado perfiles de metabolitos para la identificacin de
Enfermedades en las plantas. En estos enfoques, las enfermedades de las
Mediante la identificacin directa del patgeno, sino mediante la
Impacto del patgeno en la respuesta fisiolgica de la planta. Indirecto
Las tcnicas de deteccin se clasifican en espectroscpicas y de imgenes
(Tcnicas de deteccin de enfermedades basadas en el estrs) y voltiles
Tcnicas de deteccin de compuestos orgnicos (VOC)
Tcnicas de deteccin).
2.2.2.1. Tcnicas espectroscpicas y de imgenes. Spectroscopic y
Las tcnicas de imagenologa evalan la salud de las plantas al
Longitudes de onda sobre los tejidos de la planta y luego medir la
Las longitudes de onda de la luz reflejada hacia atrs. Estas longitudes de onda de luz
pueden ser
Usado para estudiar diferentes enfermedades fngicas en plantas. Los pasos bsicos
utilizados
Para la deteccin de enfermedades de las plantas mediante tcnicas de imagen
en la Fig. 5. Varias tcnicas espectroscpicas y de imgenes han sido
Estudiado para la deteccin de enfermedades en plantas. Algunos de los mtodos son
Espectroscopia de fluorescencia (Lins et al., 2009; Belasque et al., 2008;
Marcassa et al., 2006), espectroscopia visible (Chen et al., 2008, Yang
Et al., 2007), espectroscopia infrarroja (Purcell et al., 2009, Spinelli et al.,
2004; Delwiche y Graybosch, 2002), resonancia magntica nuclear
(RMN) (Choi et al., 2004), formacin de imgenes RBG (Neumann et al.,
2014), imgenes de fluorescencia (Chaerle et al., 2007, Moshou et al., 2005),
Multiespectral o hiperespectral (Qin et al., 2009, ElMasry et al.,
2008; Huang y Apan, 2006; Xing y Baerdemaeker, 2005; Xing
Et al., 2005), imagenologa de rayos X (Narvankar et al., 2009, Karunakaran et al.,
2004), resonancia magntica nuclear (RMN) de imgenes (Goodman et al.,
1992), termografa o termografa (Oerke et al., 2005;
Lindenthal et al., 2005). La Tabla 1 resume las tcnicas de imagen
Utilizado para enfermedades fngicas de las plantas. Aunque estas tcnicas
Deteccin sensible de anomalas, la aplicacin prctica en un campo
El ajuste es limitado.
2.2.2.2. La deteccin de compuestos orgnicos voltiles (VOC) utilizando GC-
SRA. Las plantas emiten muchos compuestos orgnicos voltiles (COV) en su
Sus alrededores y estos voltiles vegetales influyen a su vez
Relacin entre las plantas y los patgenos (Vuorinen et al.,
2007). Los COV liberados por las plantas enfermas varan de los COV
Liberado bajo condiciones normales de salud de la planta. Estas tcnicas
Proporcionar informacin diagnstica con respecto a la salud fisiolgica del husped
Estado en respuesta a la infeccin (Goff y Klee, 2006) y
Cribado de alto rendimiento y posterior deteccin de patgenos
Infeccin en plantas econmicamente importantes. El mtodo comn
Utilizado para evaluar el perfil de los metabolitos voltiles
Plantas es la tcnica de cromatografa de gases (GC). El gas
Cromatografa combinada con espectroscopia de masas (GC-MS)
Tcnica comnmente utilizada para un anlisis cualitativo y
Anlisis de los metabolitos voltiles liberados por las plantas
Ambientales y fisiolgicas. Los estudios GC-MS
Han sido realizados por pocos investigadores para evaluar el
Voltiles causados por infecciones fngicas en varias plantas (Vikram et al.,
2006; Lui et al., 2005; Jones et al., 2004; Prithiviraj et al., 2004). los
Principales desafos son la identificacin de marcadores especficos voltiles
Para una planta y una enfermedad en particular que sera diferente de los COV
Producido debido a un estrs ambiental o de nutrientes. Seleccin de
Rango de longitud de onda que es sensible a una enfermedad vegetal especfica y
Menos afectada por los cambios en la condicin ambiental es otra
gran reto. Adems, GC-MS requiere el muestreo de muestras precollectadas
VOC antes del anlisis de datos, lo que limita su aplicacin en campo.

Sin embargo, puesto que todos los mtodos anteriores tienen un nmero de
Inconvenientes, lo que ha motivado la bsqueda de
Tcnicas que sean rpidas, sencillas, especficas, sensibles y fiables.
Traductor de Google para empresas:Google Translator ToolkitTraductor de sitios webGlobal
Market Finder
Informacin del Traductor de GoogleComunidadMvilAcerca de GooglePrivacidad y condici

3. Biosensores en la deteccin / deteccin de patgenos fngicos en las plantas


De patgenos fngicos que causan enfermedades de las plantas usando biosensores
Los anlisis convencionales "fuera de sitio" son costosos, requieren mucho tiempo y
Requieren el uso de personal altamente capacitado. Por lo tanto, existe una
Necesidades cada vez ms asequibles, sensibles, especficas, fciles de
Tecnologas robustas en las que el anlisis de las muestras pueda
Sitios de muestreo "in situ". En los ltimos aos, los biosensores estn
Inters por sus resultados bien demostrados en la deteccin, categorizacin,
Diagnosticar y cuantificar las enfermedades de las plantas. Adems, estos
Deteccin rpida y precisa de patgenos fngicos causales, esenciales para
Reducir la propagacin de la enfermedad y facilitar prcticas eficaces de
Agudos. Este artculo de revisin se centrar en la
Diferentes tcnicas que condujeron al desarrollo de biosensores. Una lista de
Sensores para detectar patgenos fngicos se aborda en la Tabla 2.
3.1. Biosensores pticos
En el biosensor ptico, el proceso de transduccin induce cambios en la
Fase, amplitud, polarizacin o frecuencia de la luz de entrada en
Respuesta al cambio fsico o qumico producido por la biorecono-
proceso. Los componentes principales de un biosensor ptico son
Fuente de luz, medio de transmisin ptica, biolgico inmovilizado
Elemento de reconocimiento (enzimas, anticuerpos, microbios) y ptico
Sistema de deteccin. Algunas de las ventajas que ofrece una
Biosensor son la selectividad, la especificidad, la teledeteccin, las mediciones en tiempo
real
Y diseo compacto. Los biosensores pticos pueden
Clasificados en base a fluorescencia basada en biosensores, quimioluminiscencia-
Biosensores y resonancia de plasmn de superficie (SPR)
Biosensores
Adquisicin de imagen
Las imgenes de hojas se capturan utilizando una cmara digital
Pre-procesamiento de imgenes
Las imgenes son pre-procesadas para suprimir distorsiones indeseadas,
Mejora algunas caractersticas de la imagen y clip de la regin de la imagen interesados
Segmentacin de imagen
Particin de la imagen en grupos con caractersticas
Representacin significativa y anlisis ms fcil
Extraccin de caractersticas
Caractersticas de imagen como color, forma y textura
Clasificacin de las enfermedades de las plantas
Las imgenes se clasifican mediante redes neuronales
Diagnstico de la enfermedad
Higo. 5. Pasos para la deteccin de enfermedades de las plantas mediante una tcnica de
obtencin de imgenes.
M. Ray et al. Biosensores y bioelectrnica 87 (2017) 708-723
712
tabla 1
Ejemplos de estudios sobre enfermedades fngicas de las plantas evaluadas mediante
tcnicas de imagen (fuente adaptada: Mahlein, 2016).

TECNICAS PLANTA ENFERMEDAD/ PATOGENO REFERENCIA


RGB Algodn Ascochyta blight (Ascochyta Camargo and Smith (2009)
gossypii)
Remolacha Mancha foliar de Cercospora Neumann et al. (2014)
azucarera (Cercospora beticola)
Moho de remolacha azucarera
(Uromyces betae)
Ramularia mancha foliar
(Ramularia beticola)
Mancha foliar de Phoma
(Phoma betae)
manzana Sarna de manzana (Venturia Wijekoon et al. (2008)
inaequalis)
Tabaco Antracnosis (Colletotrichum Wijekoon et al. (2008)
destructivum)
Spectral Trigo Gripe de la cabeza (Fusarium Bauriegel et al. (2011);
graminearum) Moho amarillo Bravo et al. (2003)
(Puccinia striiformis f. Sp. Huang et al. (2007);
Tritici) Moshou et al. (2004)
Tomate El tizn tardo (Phytophthora Wang et al. (2008)
infestans)
Remolacha -Mancha de la hoja de -Bergstrsser et al. (2015);
azucarera Cercospora (Cercospora Mahlein et al. (2012,
beticola) 2010); Steddom et al.
- Moho de remolacha azucarera (2005, 2003)
(Uromyces betae) -Mahlein et al. (2012,
-Odio(Erysiphe)betae 2010)
Podredumbre - Mahlein et al. (2012,
-de la raz (Rhizoctonia solani) 2010)
- Hillnhtter et al. (2011);
Laudien et al. (2003)