Tema 11.1 Tema 11.

Tema 11.1

HEMOSTASIA PRIMARIA,
COAGULACIÓN
SANGUÍNEA Y
FIBRINÓLISIS

Bioquí
Bioquímica Clí
Clínica i Hematologia

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Capacidad hemostática del organismo está formada por la

cooperación de tres mecanismos ampliamente relacionados El proceso trombótico-hemostático actúan tres
sistemas en paralelo que son
Coagulación la agregación plaquetar
sanguínia la coagulación
la fibrinolisis
y que presentan numerosas interconexiones entre si

Actividad
Hemostasia
fibrinolítica Alrededor de desequilibrios entre estos sistemas se
primaria
configuran dos grandes síndromes:
el síndrome hemorrágico
el síndrome tromboembólico

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

1
 Tema 11.1 Tema 11.1
HEMOSTASIA PRIMARIA
Origen, morfología y estructura de las plaquetas
Fisiología de la hemostasia primaria HEMOSTASIA PRIMARIA

COAGULACIÓN SANGUÍNEA
Fisiología de la coagulación. Definición
Factores de la coagulación
Origen, morfología y estructura
Esquema clásico de la coagulación de las plaquetas
Definición vía intrínseca y vía extrínseca
Iniciación de coagulación
Sistema de contacto
Fisiología de la hemostasia
Factor tisular primaria
Progresión del estímulo coagulativo: generación de trombina
Fibrinoformación : generación de fibrina
Inhibidores de la coagulación

FIBRINOLISIS
Fisiología de la fibrinolisis Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Origen, morfologia y estructura de las plaquetas Origen de las plaquetas

Origen
Precursor diploide (2 N) agranulado
(ya contiene: GP IIb, VWF, FP4)

Poliploidización por endomitosis:

megacarioblasto hasta 8 N, megacariocito hasta 64 N

Desarrollo de granulación:
Gránulos α (azurófilos)
Gránulos densos (microscopía electrónica)

Demarcación de membranas

Liberación de 1.000 a 5.000 plaquetas

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

2
 Tema 11.1 Tema 11.1

SERIE MEGACARIOCÍTICA

megacarioblasto

Megacariocito granular

Morfología de las plaquetas

promegacarioblasto
Diámetro: 2-4 μm
Megacariocito
Megacariociito maduro maduro
liberador de plaquetas
liberador de plaquetas
Forma discoidal
Megacariociito maduro
Color rojizo
Número variable de gránulos
20-25 cada campo en objetivo inmersión (x1000)

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Estructura de las plaquetas - 1

MEMBRANA
Bicapa fosfolipídica: Soporte para los factores de
la coagulación
Glicoproteínas de membrana: Funciones de
adhesión y agregación (Ib, IIbIIIa, IaIIa, etc,)

CITOESQUELETO
Microtúbulos
Proteínas contráctiles: Cambio de forma, reacción
de liberación

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

3
 Tema 11.1 Tema 11.1

GPIa-IIa GPIb
Gp Ib
GPIIIb-IIIa

Fox 2001
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Glicoproteínas de la membrana Estructura de las plaquetas - 2

GRÁNULOS
GLICOPROTEÍNAS RECEPTORES FUNCIÓN Gránulos densos: Nucleótidos (ADP), Ca++
Gránulos α: Proteínas (factor plaquetario 4,
factor von Willebrand)
GP Ib FvW
sialoglicoproteína
Trombina Adhesión
SISTEMAS MEMBRANOSOS
Sistema canalicular abierto
Gp Ia-IIa Colágeno Adhesión
integrina
Sistema tubular denso: depósito de Ca++
necesario para la activación plaquetaria
GP IIb-IIIa Fibrinógeno Agregación
integrina
FvW
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

4
 Tema 11.1 Tema 11.1
Sistema tubular denso Gránulo denso Mitocóndria

IIIa IIbIV P Selectina Fisiología de la hemostasia primaria

VI
IIb
IIIa

IIIa
IIb
II Adhesión plaquetaria al subendotelio
c
Activación de las vías metabólicas:
liberación del contenido de los gránulos α y
densos (ADP)
IIa Microtúbulos
Ia
IX Agregación plaquetaria

V IbαIbβ
Receptor de siete dominios Gránulo α Formación del tapón hemostático
transmembrana
Sistema canalicular abierto
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Dibujo esquemático de la plaqueta y sus principales componentes

Tema 11.1 Tema 11.1

Fisiología de la hemostasia primaria

Adhesión plaquetaria

GP Ib

lesió
lesión endotelial.
FvW subendotelial que se
VWF expone

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

5
 Tema 11.1 Tema 11.1
Activación plaquetaria
Activación plaquetaria: formación de
pseudópodos

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Esquema de los procesos de adhesión, activacíón y agregación plaquetar

Tema 11.1 Tema 11.1
Adhesión al monocito
Adhesión
Agregación plaquetaria Actividad Fibrina
GP IIbIIIa procoagulante
P Selectina inactiva Monocito
Fibrinógeno

D α IIa
Complejo
Protrombinasa
GP Ib
IX/V GP IaIIa PSGL-1

F vW FP4
ADP GP IIbIIIa
Matriz subendotelial activa
Serotonina

Activación
Secreción
Agregación
Colágeno
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Matriz subendotelial Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

6
 Tema 11.1 Tema 11.1

h oh o oh o
h o ho h h COAGULACIÓN SANGUÍNEA
- - - - Fisiología de la coagulación. Definición
A + + + + Factores de la coagulación
Esquema clásico de la coagulación
- Fibrinógeno + F.von Willebrand
Definición vía intrínseca y vía extrínseca
Iniciación de coagulación
Sistema de contacto
- -

Factor tisular
-

Progresión del estímulo coagulativo:

-

generación de trombina
-

+ + + +
B + + Fibrinoformación : generación de fibrina
Inhibidores de la coagulación
A: Endotelio conservado B: Tapón hemostático
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Fisiología de la coagulación. Definición Factores de la coagulación - 1

SERINPROTEASAS
Del sistema de contacto
Definición Precalicreina* (PK)
La coagulación es el proceso enzimático en Factor XII*
cadena que finaliza en la transformación de las Factor XI*
moléculas de fibrinógeno, solubles en plasma, Vitamina K dependientes
en una malla de fibrina insoluble. Factor IX*
Factor X*
Factor VII*
Factor II (protrombina)*
* Factores sintetizados por los hepatocitos
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

7
 Tema 11.1 Tema 11.1
Esquema clásico de la coagulacion
Factores de la coagulación - 2
IX
XII•K XIIa
COFACTORES NO ENZIMÁTICOS QAPM TF
XI
XIa VII
Del sistema de contacto VIIa
IXa
Quininógeno de alto peso molecular* (QAPM)
VIIIa Ca2+
De la coagulación fisiológica Ca2+

Xa PL
Factor VIII* X
Factor V* **
Xa
SUSTRATO FINAL Va
Ca2+
Fibrinógeno* IIa
II PL

ESTABILIZACIÓN DE LA FIBRINA Fibrinógeno fibrina

Factor XIII*
* Factores sintetizados por los hepatocitos, **factor sintetizado por los megacariocitos coágulo

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 ESQUEMA CLÁSICO DE LA COAGULACIONTema 11.1

Definiciones clásicas de vía intrínseca y extrínseca
Vía intrínseca
PK.XII Vía extrínseca
Vía extrínseca HMWK
ƒDefinición
FT
Capacidad de generar trombina que poseía la adición de extracto XI XIa VIIa VII
de cerebro animal (tromboplastina tisular) sobre una muestra de
plasma IX IXa
VIII
Vía intrínseca
X Xa
ƒDefinición Vía común
Sangre que era capaz de coagularse en un tubo de cristal sin V
necesidad de aditivos exógenos, por el simple contacto de la II IIa
sangre con el cristal del tubo de ensayo y daba como
resultado la formación de trombina
Fibrinógeno Fibrina
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

8
 Mecanismo de activación de Precalicreina (PK) y factor XII sobre la célula endotelial
Tema 11.1 Tema 11.1

Iniciación de la coagulación -I Iniciación de la coagulación -II

Sistema de contacto BK
BK Factor tisular
K
QAPMa XIIa
A nivel fisiológico la iniciación de la coagulación se debe
PK XII
QAPM fundamentalmen a la aparición sobre diversas superficies
celulares de una glicoproteína transmembrana llamada
factor tisular ( FT)
En situación basal no se expresa
PK XII
K
XII
K XIIa
Tejidos ricos: capa adventicia de los vasos sanguíneos o las
QAPM QAPMa QAPMa meninges
Lesión en pared vascular: se exponen células a la sangre que
expresan factor tisular constitucionalmente.
Cuando el FT contacta con el factor VIIa circulante (1-2%
BK
del FVII esta en su forma activa a nivel basal) se inicia la
BK
transformación de los factores IX y X circulantes en IXa y
es el responsable del inicio de la coagulación cuando introducimos plasma en Xa
un tubo de cristal
ESCASO PAPEL IN VIVO Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Progresión del estímulo coagulativo Tema 11.1

Iniciación de la coagulación -II Generación de trombina

Factor tisular
1. una serie de reacciones enzimáticas en cadena propagan el proceso
coagulativo hasta la formación de trombina, molécula clave en el proceso
trombótico por sus múltiples acciones
2. las diversas reacciones que propagan el estímulo trombótico desde su
iniciación hasta la generación de trombina comparten una serie de
características comunes
un zimógeno, glicoproteína circulante, es transformado en enzima
mediante un mecanismo proteolítico y gracias a la acción de otro enzima
la reacción es posible por el ensamblaje del enzima y el zimógeno sobre
una superficie fosfolipídica con cargas negativas a la que se unen a través
de puentes de Ca++
la presencia de un cofactor (factores VIIIa y Va o factor tisular)
incrementa enormemente la actividad catalítica del enzima sobre el
sustrato (x 105- 106 veces)
la superficie de anclaje para los factores vitamino-K dependientes
(VII,IX,X,II (protombina)) es aportada mayoritariamente por las
plaquetas activadas y su unión depende de la integridad del dominio Gla
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 de estos factores Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

9
 Factores vitamina k dependientes Tema 11.1 ESQUEMA CLÁSICO DE LA COAGULACION Tema 11.1
ƒ se sintetizan por el hepatocito
ƒ sufren modificación post-traslacional antes de ser Vía intrínseca
liberados: γ - carboxilación del ácido glutámico PK.XII
ƒ se forman residuos γ - carboxiglutámicos de las Vía extrínseca
regiones Gla: para ello precisa de la donación de
HMWK
radicales CO2 por parte del ciclo de oxidación-
reducción de la vitamina K FT
XI XIa VIIa VII

IX IXa
FT
FT VIIa IX X VIII

YYYYYY YYY X Xa
Vía común
V
II IIa

Puentes de calcio entre factores vitamina K Fibrinógeno Fibrina

dependientes y la membrana celular
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Progresión del estímulo coagulativo Tema 11.1 Tema 11.1

Cascada de la coagulación y principales mecanismos de amplificación
Generación de trombina (IIa)
IX
FT VIIa XII•K XIIa
VIIIa QAPM TF
Xa
X IXa IXa X XI
XIa
IX VIIa VII
IXa

VIIIa Ca2+
Ca2+

Xa PL
X
Xa Xa
Xa
Va Va
Xa II
Ca2+
IIa
II PL

protrombinasa
Fibrinógeno fibrina

coágulo

IIa
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Complejos enzimáticos involucrados en la generación de trombina

10
 Tema 11.1 Tema 11.1
Fibrinoformación
Acciones de la trombina Generación de fibrina
Complejo Xasa Activación y reclutamiento La trombina actúa sobre el fibrinógeno plasmático para
VIIIa VIII plaquetar transformarlo en fibrina
Son liberados los fibrinopéptidos A y B por la acción proteolítica
Complejo PTasa Inhibición fibrinolisis de la trombina
Va V TAFI TAFI Se forma monómeros de fibrina que tras redistribución de cargas
TM a eléctricas se forman polímeros poco estables
IIa
Inhibición coagulación Una transglutaminasa, el factor XIII, tras ser activado por la
Amplificación
XIa XI PC PCa trombina cataliza, en presencia de calcio, la formación de enlaces
TM covalentes entre cadenas α y γ, consiguiendo una fibrina
Liberación de tPA estabilizada
Polimerización fibrina
Esta fibrina estabilizada es más resistente a la acción lítica de la
XIIIa XIII
plasmina
Fbgno FP AiB
Fbna
Recordar que el fibrinógeno también interviene en el proceso de
tPA
agregación plaquetaria a través de la formación de puentes entre
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 receptores glicoproteicos IIbIIIa de dos plaquetas. Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

I
Vía intrínseca S
I
Va
S
I factor Xa Activación de la
PK.XII Vía extrínseca trombina
HMWK
FT F1+2 PT
XI XIa VIIa VII I I
S S
I I
IX IXa S
I
protrombina S
I
trombina

VIII
Acción de la
X Xa trombina
Fp A i B
sobre el
Vía común fibrinógeno
V
II IIa

Fibrinógeno Fibrina
monómero de fibrina fibrinógeno
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

11
 Tema 11.1 Tema 11.1

Estabilización de la fibrina por el F. XIII

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Inhibidores de la coagulación
Antitrombina
Inhibe serinproteasas (IIa, Xa, IXa)
Su acción es potenciada por la heparina
Proteína C
Serinproteasa vitamina K dependiente
Inhibe a los factores V y VIII
Proteína S
Vitamina K dependiente (no es un enzima)
Cofactor de la proteína C
Trombomodulina
Receptor endotelial
Haemostasis: generation of thrombin and clot formation Activador de la proteína C

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

12
 Tema 11.1 Inhibidores de la coagulación: sistema PC/ PS/TM Tema 11.1
Inhibidores de la coagulación
PC
XII•K IX
XIIa T Vi
HMWK
TF
Va
XI
XIa VII
VIIa
IXa
PS
T PC
VIIIa Ca2+
TM
PC PCa Ca2+
TM REPC
Xa PL
X

Xa Va
Va TFPI PCa
ATIII
Ca2+ PS
IIa
II PL

Fibrinógeno Fibrina

coágulo

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

IIa AT IIa AT

FIBRINOLISIS
IIa AT

¾ Fisiología de la fibrinolisis
Heparán sulfato

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

13
 Tema 11.1 Fisiología de la fibrinolisis Tema 11.1

Componentes del sistema fibrinolítico Plasminógeno

(PgnO) scu-PA /Ru-PA
PAI PAI
Contacto
Activadores t-PA u-PA/Ru-PA
Activador tisular del plasminógeno (t-PA)
Uroquinasa (u-PA) Plasmina
(Pna)
Sustrato
Plasminógeno TAFI IP
Inhibidores
PAI-1 y PAI-2 Fibrina PDFna Pro-MPMs MPMs
(inhibidores del activador del plasminógeno)
α2- Antiplasmina (IP) ITMP
TAFI ( inhibidor de la fibrinolisis activable por la
trombina) Degradación
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
MEC
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Fibrinólisis fisiológica

La capacidad del t-Pa de activar el plasminógeno (PgnO) está muy

favorecida (x102 veces) por el ensamblaje de ambos a la fibrina

Km=65μM
Pgno Pna
t-PA t-PA

Km=0.16μM
Pgno Pna
t-PA t-PA
Fibrina Fibrina

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

14
 Tema 11.1 Tema 11.1

Fibrinólisis sistémica V Fgno

FASE PLASMÁTICA VIII
Degradación
inespecífica

Pgno Pna IP
0,1 segundos

PA PAI

Muy enlentecido
Pgno IP
Pna

PDFna
SUPERFICIE FIBRINA PDFna
Fibrina
PDFna
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Proteólisis del fibrinógeno y de la fibrina Tema 11.1 Tema 11.1

Proteólisis del fibrinógeno

D E D D E D

D E D D E D

Frag.E Bβ 15-42
E D
Frag.Y Frag.D D D E D
D E D
E D D
Frag.X Bβ 1-42
D E D Aα carboxiterm. Oligómeros X

D E D D
D Dímero D
E D D

Fibrinógeno Degradación Fibrina

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

15
 Tema 11.1 Tema 11.1

Proteólisis de la fibrina estabilizada Coagulación Fibrinolisis

II Pgno

IIa Pna

Fbgno Fbna PDFs

PCa TM TAFIa

IIa

PC TAFI
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 11.1 Tema 11.1

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

16