BIOQUMICA II 2017 II

PRCTICA N 4
HIDRLISIS ENZIMTICA DE PROTENAS
I.-Objetivos:
Determinar el efecto de las condiciones de reaccin (pH del medio de
reaccin, concentracin se sustrato y enzima) sobre la actividad
proteoltica de la pepsina, utilizando como sustrato la albmina de huevo.
II.-Resultados:
2.1. Experimento N1: Efecto de la concentracin del sustrato sobre la
actividad enzimtica de la pepsina
Tabla N1: Densidades pticas (absorbancias) del efecto de la concentracin
del sustrato sobre la actividad enzimtica de la pepsina.
TUBOS D.O1.t=0min D.O2.t=20min D.O2.Netat=20min Actividad
enzimtica
Tubo 1 0.379 0.381 0.349 0.030
Tubo 2 0.394 0.384 0.352 0.042
Tubo 3 0.586 0.567 0.535 0.051
Tubo 4 0.632 0.607 0.575 0.057
Observacin:
Absorbancia: Densidad ptica
D.O2.Netat=20min :Diferencia entre D.O2.t=20min y el factor de correccin de la celda
antigua (F.C=0.032), cabe resaltar que la D.O2.t=20min se midi con una celda antigua
el cual presentaba el factor de correccin. A diferencia de la D.O1.t=0min, esta se
cuantifico en una celda nueva el cual NO presentaba el factor de correccin.
Actividad enzimtica: D.O1.t=0min - D.O2.Netat=20min

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a b c
c c
c con la
Fig.1. (a) Mezcla de los reactivos con la solucin albmina en los 4 tubos (b) Tubos
solucin de pepsina1%, luego de la incubacin de 37C, listo para medir su densidad ptica.
(c) Medicin de la densidad ptica de los 4 tubos presentes en la tabla N1.

2.2. Experimento N2: Efecto de la concentracin de la enzima sobre la

actividad enzimtica de la pepsina
Tabla N2: Densidades pticas (absorbancias) del efecto de la enzima sobre
la actividad enzimtica de la pepsina
TUBOS D.O1.t=0min D.O2.t=20min D.O2.Netat=20min Actividad
enzimtica
Tubo 1 0.387 0.386 0.354 0.033
Tubo 2 0.419 0.411 0.379 0.040
Tubo 3 0.568 0.416 0.384 0.184
Tubo 4 0.645 0.461 0.429 0.216
Observacin:
Absorbancia: Densidad ptica
D.O2.Netat=20min :Diferencia entre D.O2.t=20min y el factor de correccin de la celda
antigua (F.C=0.032), cabe resaltar que la D.O2.t=20min se midi con una celda antigua
el cual presentaba el factor de correccin. A diferencia de la D.O1.t=0min, esta se
cuantifico en una celda nueva el cual NO presentaba el factor de correccin.
Actividad enzimtica: D.O1.t=0min - D.O2.Netat=20min

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2.3. Experimento N3: Efecto del pH sobre la actividad enzimtica de la

pepsina.
Tabla N2: Densidades pticas (absorbancias) del pH sobre la actividad
enzimtica de la pepsina.
TUBOS D.O1.t=0min D.O2.t=20min Actividad
enzimtica
Tubo 1 0.417 0.411 0.060
Tubo 2 0.490 0.373 0.117
Tubo 3 0.434 0.390 0.044
Observacin:
Absorbancia: Densidad ptica
Actividad enzimtica: D.O1.t=0min - D.O2.t=20min

a) Clculos matemticos para determinar la pH del HCl

Tubo1
[Cinicio-HCl].V=[Cfinal-HCl].Vf pH=-log[HCl) .
0.5N.2ml=[Ctubo1-HCl].5ml pH=-log[0.5)
[Cfinal-HCl]=0.2N pH= 0.69

Tubo2
[Cinicio-HCl].V=[Cfinal-HCl].Vf pH=-log[HCl) .
0.5N.1ml=[Ctubo1-HCl].5ml pH=-log[0.1)
[Cfinal-HCl]=0.1N pH= 1

Tubo2
[Cinicio-HCl].V=[Cfinal-HCl].Vf pH=-log[HCl) .
0.5Nx0.5ml=[Ctubo1-HCl].5ml pH=-log[0.05)
[Cfinal-HCl]=0.1N pH= 1.3

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III.-Discusin
Las protenas aportadas por la dieta no se pueden absorber directamente
en el proceso de la digestin por su gran tamao molecular, por lo que deben
transformarse sus aminocidos, tarea que realizan las enzimas proteolticas que
se produce en el estmago, pncreas e intestino delgado. La digestin de
protenas se inicia en el estmago gracias a la accin conjunta del cido
clorhdrico y la pepsina. El cido clorhdrico se sintetiza en las clulas parietales
del estmago y tienen como funciones inactivar algunas bacterias, desnaturalizar
a las protenas y activar el pepsingeno para convertirlo en pepsina y as se inia
la hidrlisis enzimtica.
La pepsina es una enzima digestiva que se secreta en el estmago y que
hidroliza las protenas en el estmago (ver Fig.N2). La funcin principal de la
pepsina es descomponer las protenas que se encuentran en los alimentos,
como por ejemplo la carne y los huevos, en pedazos ms pequeos
(polipptidos) La pepsina requiere un nivel bajo de pH para poder funcionar. Sin
embargo, los anticidos, elevan el nivel de pH de los jugos gstricos a un nivel
que no es ptimo para que la pepsina pueda trabajar. El precursor de la pepsina
es el pepsingeno, una proforma cuya estructura primaria tiene 44 aminocidos
adicionales. Este pepsingeno se activa por el cido hidroclorhdrico (HCl), que
es liberado por las clulas parietales de la mucosa gstrica. El HCl crea un
ambiente cido que permite al pepsingeno desplegarse y romperse a s mismo
de una forma autocataltica, generando pepsina (la forma activa). La pepsina es
ms activa con un pH de entre 2 y 4. Se desactiva permanentemente con un pH
superior a 6
La albmina es la protena transportadora ms abundante a nivel del torrente
sanguneo, se encuentra ubicada en el plasma y cumple numerosas funciones
en el cuerpo humano; la albmina es sintetizada en la regin heptica siendo
este su origen endgeno, sin embargo, puede ser adquirida sumida de forma
exgena a travs del consumo de los alimentos, especficamente huevos y leche

a b
c
Fig.2. (a) Hidrlisis enzimtica de lac pepsina (b) Estructura qumica de la albmina

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IV.-Conclusin
La actividad proteoltica de la pepsina, es influenciado por la concentracin
del sustrato, concentracin de enzima y pH, bajo ciertas condiciones de
temperatura y acidez sobre la albumina de huevo.
V.-Referencias bibliogrficas